CN111537706B

CN111537706B - 一种电化学发光免疫分析仪用免疫洗液

Info

Publication number: CN111537706B
Application number: CN202010452090.3A
Authority: CN
Inventors: 王旭; 朱积宝; 苗远晴
Original assignee: Changchun Chenyu Biomedical Technology Co ltd
Current assignee: Changchun Chenyu Biomedical Technology Co ltd
Priority date: 2020-05-26
Filing date: 2020-05-26
Publication date: 2021-05-28
Anticipated expiration: 2040-05-26
Also published as: CN111537706A

Abstract

本发明属于医疗器械体外诊断试剂领域，公开了一种电化学发光免疫分析仪用免疫洗液，包括缓冲液和清洗液；其中缓冲液包括：磷酸二氢钾、三丙胺、N，N‑二丁基乙醇胺、氯化钾、聚多卡醇、聚氧乙烯烷醇酰胺、羟丙基甲基纤维素，pH值6.5‑7.3；其中清洗液包括：氢氧化钾、烷基酚聚氧乙烯醚、十二烷基葡糖酣、Pluronic L81。本发明提供的缓冲液降低了三丙胺的浓度，并保证检测结果的一致性，稳定性和准确性；清洗液有更加优异的清洗效果。

Description

一种电化学发光免疫分析仪用免疫洗液

技术领域

本发明涉及医疗器械体外诊断试剂技术领域，更具体的说是涉及罗氏全自动免疫分析仪的化学发光缓冲液及清洗液。

背景技术

化学发光免疫分析(CLIA)是将化学发光或生物发光体系与免疫反应相结合，用于检测微量抗原或抗体的一种新型标记免疫测定技术。其具有快速、敏感性高和稳定性好等特点，易于标准化操作，已广泛应用于生物学、医学研究和临床实验诊断工作中。

瑞士Roche公司Cobas e411/e601电化学发光免疫分析系统，是应用先进的电化学发光技术的全自动台式分析仪。已应用于甲状腺激素、心肌损伤和肿瘤标志、传染病、贫血、骨代谢等广泛的测定项目。其电化学发光体系即为三联吡啶钌-三丙胺体系，其配套使用的缓冲液和清洗液用量较大，配套原装试剂特别是缓冲液价格昂贵且毒性较大。

目前我国各大医院普遍使用的是原装清洗液，且消耗量巨大。其价格昂贵，大大提高了检测的成本。虽然，现有技术中公开了许多技术，例如专利201710877908.4，虽然降低了成本，但是三丙胺为有毒物质，用量过大；专利201610538476.X虽然减少了三丙胺的用量，但是采用的MES也有毒，所以，理论上，其制备的清洗液的毒性并没有降低。

因此，如何降低清洗液中有毒物质含量，并保证检测结果的一致性，稳定性和准确性的缓冲液，以及具有更加优异的清洗效果的清洗液，是本领域技术人员亟需解决的技术问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种电化学发光免疫分析仪用免疫洗液，包括缓冲液和清洗液，缓冲液降低了三丙胺的浓度，并保证检测结果的一致性，稳定性和准确性；清洗液有更加优异的清洗效果。

为了达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种电化学发光免疫分析仪用免疫洗液，包括缓冲液和清洗液；其中缓冲液的组分和含量为：磷酸二氢钾200-300mmol/L，三丙胺3-8mmol/L，N，N-二丁基乙醇胺1-3mmol/L，氯化钾5-8mmol/L，聚多卡醇5-8mmol/L，聚氧乙烯烷醇酰胺3-5mmol/L，羟丙基甲基纤维素0.5-0.8mmol/L，pH值6.5-7.3；其中清洗液的组分和含量为：氢氧化钾160-190mmol/L，烷基酚聚氧乙烯醚0.1-1％(w％)，十二烷基葡糖酣0.5-1％(w％)，Pluronic L81 1.5-5％(w％)。

优选的，其中缓冲液的组分和含量为：磷酸二氢钾250-280mmol/L，三丙胺4-6mmol/L，N，N-二丁基乙醇胺2-3mmol/L，氯化钾6-8mmol/L，聚多卡醇6-8mmol/L，聚氧乙烯烷醇酰胺4-5mmol/L，羟丙基甲基纤维素0.6-0.8mmol/L，pH值6.5-7.3；其中清洗液的组分和含量为：氢氧化钾170-180mmol/L，烷基酚聚氧乙烯醚0.2-0.8％(w％)，十二烷基葡糖酣0.6-0.8％(w％)，Pluronic L81 1.5-5％(w％)。

优选的，其中缓冲液的组分和含量为：磷酸二氢钾250mmol/L，三丙胺5mmol/L，N，N-二丁基乙醇胺2mmol/L，氯化钾7mmol/L，聚多卡醇7mmol/L，聚氧乙烯烷醇酰胺4mmol/L，羟丙基甲基纤维素0.6mmol/L，pH值7.2；其中清洗液的组分和含量为：氢氧化钾175mmol/L，烷基酚聚氧乙烯醚0.5％(w％)，十二烷基葡糖酣0.7％(w％)，Pluronic L81 2.1％(w％)。

优选的，所述十二烷基葡糖酣与Pluronic L81的添加比例为1:3-5。

优选的，所述清洗液和缓冲液中还分别包括Proclin 300 0.1-0.5％(w％)。

进一步地，本发明采用的Pluronic L81由BASF公司生产，通过硬脂醇与聚氧乙烯、聚氧丙烯加成制备而成。

进一步地，上述缓冲液的配制：将除三丙胺之外的成分分别称量加入少量的水中搅拌使溶解，加入三丙胺搅拌静置待全溶后转移至容量瓶中，定容，摇匀，调节pH，即得。

清洗液的配制：按照上述配方中的成分称取各原料，加水溶解混匀，放冷，转移至容量瓶，定容，摇匀，即得。

上述缓冲液和清洗液应用过程：在室温条件下，将制备的缓冲液和制备的清洗液分别放置在罗氏电化学发光免疫分析仪的ProCell和CleanCell指定位置上；再讲待测样本和诊断试剂放在罗氏电化学发光免疫分析仪的指定位置上，启动罗氏电化学发光免疫分析仪的自动检测程序，即可进行检测。

经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明有益效果如下：

1、因三丙胺和Ru(bpy)3²⁺的相互作用产生的光较弱，本发明对缓冲液的配方进行改进，大大降低三丙胺的用量，同时在组方中加入N，N-二丁基乙醇胺、氯化钾、聚多卡醇、聚氧乙烯烷醇酰胺、羟丙基甲基纤维素等物质，增强化学发光，减少因三丙胺浓度降低导致的化学发光削弱，同时，保证与原装试剂的一致性和稳定性。

2、本发明在清洗液中加入烷基酚聚氧乙烯醚、十二烷基葡糖酣、Pluronic L81等成分，增加了对凝结快和纤维蛋白的清洗效果，进一步保护电极，减少成本，达到了原装清洗液的技术效果，同时还为加入MES等有毒物质。

3、本发明清洗液采用十二烷基葡糖酣与Pluronic L81组合，通过设定特定的配比，使二者混合后的溶液清洗效果更佳。

具体实施方式

下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

1)缓冲液的组分和含量为：磷酸二氢钾200mmol/L，三丙胺3mmol/L，N，N-二丁基乙醇胺1mmol/L，氯化钾5mmol/L，聚多卡醇5mmol/L，聚氧乙烯烷醇酰胺3mmol/L，羟丙基甲基纤维素0.5mmol/L，Proclin 300 0.1％(w％)；

缓冲液的配制：将除三丙胺之外的成分分别称量加入少量的水中搅拌使溶解，加入三丙胺搅拌静置待全溶后转移至容量瓶中，定容，摇匀，加入氢氧化钠调节pH，pH值6.5，即得。

2)清洗液的组分和含量为：氢氧化钾160mmol/L，烷基酚聚氧乙烯醚0.1％(w％)，十二烷基葡糖酣0.5％(w％)，Pluronic L81 1.5％(w％)，Proclin300 0.1％(w％)。

实施例2

1)缓冲液的组分和含量为：磷酸二氢钾300mmol/L，三丙胺8mmol/L，N，N-二丁基乙醇胺3mmol/L，氯化钾8mmol/L，聚多卡醇8mmol/L，聚氧乙烯烷醇酰胺5mmol/L，羟丙基甲基纤维素0.8mmol/L，Proclin 300 0.5％(w％)；

缓冲液的配制：将除三丙胺之外的成分分别称量加入少量的水中搅拌使溶解，加入三丙胺搅拌静置待全溶后转移至容量瓶中，定容，摇匀，加入氢氧化钠调节pH，pH值7.3，即得。

2)清洗液的组分和含量为：氢氧化钾190mmol/L，烷基酚聚氧乙烯醚1％(w％)，十二烷基葡糖酣1％(w％)，Pluronic L81 5％(w％)，Proclin 3000.5％(w％)。

实施例3

1)缓冲液的组分和含量为：磷酸二氢钾250mmol/L，三丙胺4mmol/L，N，N-二丁基乙醇胺2mmol/L，氯化钾5mmol/L，聚多卡醇8mmol/L，聚氧乙烯烷醇酰胺4mmol/L，羟丙基甲基纤维素0.6mmol/L，Proclin 300 0.2％(w％)；

缓冲液的配制：将除三丙胺之外的成分分别称量加入少量的水中搅拌使溶解，加入三丙胺搅拌静置待全溶后转移至容量瓶中，定容，摇匀，加入氢氧化钠调节pH，pH值6.8，即得。

2)清洗液的组分和含量为：氢氧化钾180mmol/L，烷基酚聚氧乙烯醚0.5％(w％)，十二烷基葡糖酣0.7％(w％)，Pluronic L81 3％(w％)，Proclin300 0.3％(w％)。

实施例4

1)缓冲液的组分和含量为：磷酸二氢钾250mmol/L，三丙胺5mmol/L，N，N-二丁基乙醇胺2mmol/L，氯化钾7mmol/L，聚多卡醇7mmol/L，聚氧乙烯烷醇酰胺4mmol/L，羟丙基甲基纤维素0.6mmol/L，Proclin 300 0.4％(w％)；

缓冲液的配制：将除三丙胺之外的成分分别称量加入少量的水中搅拌使溶解，加入三丙胺搅拌静置待全溶后转移至容量瓶中，定容，摇匀，加入氢氧化钠调节pH，pH值7.2，即得。

2)清洗液的组分和含量为：氢氧化钾175mmol/L，烷基酚聚氧乙烯醚0.5％(w％)，十二烷基葡糖酣0.7％(w％)，Pluronic L81 2.1(w％)，Proclin 3000.4％(w％)。

实施例5

将实施例4制备的缓冲液和清洗液与原装清洗液和缓冲液进行性能比对。选用罗氏E601电化学发光全自动免疫分析仪，由罗氏诊断产品(上海)有限公司提供，SX5150实验室酸碱浓度计由上海三信仪表厂提供；性能测试洗液包括实际空白液、促甲状腺激素定标液低值、促甲状腺激素定标液高值均由罗氏诊断产品(上海)有限公司提供。

按照罗氏E601电化学发光全自动免疫分析仪说明书进行免疫洗液的准确性、测量范围和免疫样本检测的结果比较。

ˉ

统计学处理：采用SPSS18.0软件进行统计分析，计量资料以x±s表示，均数比较采用t检验，p＜0.05为差异有统计学意义。

1、准确性比较

表1

2、测量范围比较

表2

从表1和表2中得出，本发明制备的缓冲液和清洗液与原装免疫洗液的性能测试结果比较，差异无统计学意义(p＞0.05)，因此在实际应用中无需重新定标，可直接替代原装洗液在罗氏免疫测试中使用，这位医院降低使用成本，减轻病患的经济负担，也复合国家提倡以自配产品替代进口产品的号召。

本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。对于实施例公开的装置而言，由于其与实施例公开的方法相对应，所以描述的比较简单，相关之处参见方法部分说明即可。

对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims

1.一种电化学发光免疫分析仪用免疫洗液，其特征在于，包括缓冲液和清洗液；其中缓冲液的组分和含量为：磷酸二氢钾200-300mmol/L，三丙胺3-8mmol/L，N，N-二丁基乙醇胺1-3mmol/L，氯化钾5-8mmol/L，聚多卡醇5-8mmol/L，聚氧乙烯烷醇酰胺3-5mmol/L，羟丙基甲基纤维素0.5-0.8mmol/L，Proclin 300 0.1-0.5％(w％)，pH值6.5-7.3；其中清洗液的组分和含量为：氢氧化钾160-190mmol/L，烷基酚聚氧乙烯醚0.1-1％(w％)，十二烷基葡糖酣0.5-1％(w％)，Pluronic L81 1.5-5％(w％)，Proclin 300 0.1-0.5％(w％)。

2.根据权利要求1所述的一种电化学发光免疫分析仪用免疫洗液，其特征在于，包括缓冲液和清洗液；其中缓冲液的组分和含量为：磷酸二氢钾250-280mmol/L，三丙胺4-6mmol/L，N，N-二丁基乙醇胺2-3mmol/L，氯化钾6-8mmol/L，聚多卡醇6-8mmol/L，聚氧乙烯烷醇酰胺4-5mmol/L，羟丙基甲基纤维素0.6-0.8mmol/L，pH值6.5-7.3；其中清洗液的组分和含量为：氢氧化钾170-180mmol/L，烷基酚聚氧乙烯醚0.2-0.8％(w％)，十二烷基葡糖酣0.6-0.8％(w％)，Pluronic L81 1.5-5％(w％)。

3.根据权利要求1所述的一种电化学发光免疫分析仪用免疫洗液，其特征在于，包括缓冲液和清洗液；其中缓冲液的组分和含量为：磷酸二氢钾250mmol/L，三丙胺5mmol/L，N，N-二丁基乙醇胺2mmol/L，氯化钾7mmol/L，聚多卡醇7mmol/L，聚氧乙烯烷醇酰胺4mmol/L，羟丙基甲基纤维素0.6mmol/L，pH值7.2；其中清洗液的组分和含量为：氢氧化钾175mmol/L，烷基酚聚氧乙烯醚0.5％(w％)，十二烷基葡糖酣0.7％(w％)，Pluronic L81 2.1％(w％)。

4.根据权利要求1-3任一项所述的一种电化学发光免疫分析仪用免疫洗液，其特征在于，所述十二烷基葡糖酣与Pluronic L81的添加比例为1:3-5。