CN104360051A - 一种电化学发光免疫分析的底物及其应用 - Google Patents

一种电化学发光免疫分析的底物及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN104360051A
CN104360051A CN201410709517.8A CN201410709517A CN104360051A CN 104360051 A CN104360051 A CN 104360051A CN 201410709517 A CN201410709517 A CN 201410709517A CN 104360051 A CN104360051 A CN 104360051A
Authority
CN
China
Prior art keywords
substrate
cleaning fluid
roche
chemiluminescent immunoassay
electrochemiluminescence immunoassay
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201410709517.8A
Other languages
English (en)
Inventor
刘军
田恩江
张静
李小永
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
TIANJIN HUAXIN KANGDA TECHNOLOGY Co Ltd
Original Assignee
TIANJIN HUAXIN KANGDA TECHNOLOGY Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by TIANJIN HUAXIN KANGDA TECHNOLOGY Co Ltd filed Critical TIANJIN HUAXIN KANGDA TECHNOLOGY Co Ltd
Priority to CN201410709517.8A priority Critical patent/CN104360051A/zh
Publication of CN104360051A publication Critical patent/CN104360051A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/531—Production of immunochemical test materials
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
    • G01N21/76—Chemiluminescence; Bioluminescence

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Plasma & Fusion (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)

Abstract

本发明一种电化学发光免疫分析仪分析的底物及其应用，涉及一种借助于测定材料的化学或物理性质来分析材料的方法，其目的是为了提供一种制备方法简单、使用方便，样品检测准确性和精密度高，保存时间长的电化学发光免疫分析仪分析的底物及其应用。本发明的电化学发光免疫分析底物包括两部分：发光缓冲液和清洗液，本发明电化学发光免疫分析底物的应用包括以下步骤：电化学发光免疫底物的制备；将待测样本、诊断试剂、电化学发光免疫底物置于罗氏电化学发光免疫分析仪中进行检测。本发明的电化学发光免疫分析底物制备简单、使用方便；本发明制得的发光底物不仅检测数据的准确性、精密度和重复性高，且成本低。本发明应用于电化学发光免疫分析领域。

Description

一种电化学发光免疫分析的底物及其应用
技术领域
本发明涉及一种借助于测定材料的化学或物理性质来分析材料的方法，特别是涉及一种用电化学发光免疫分析仪分析样品的方法。
背景技术
电化学发光分析技术(ECL)是采用三联吡啶钌[Ru(bpy)3]2+直接标记在抗原或抗体上作为标记物，在电极表面由电化学引发特异性化学发光反应。其化学发光主要是标记物中的[Ru(bpy)3]2+和电子供体三丙胺(TPA·)在阳电极表面同时各失去一个电子发生氧化反应。二价的[Ru(bpy)3]2+被氧化成三价，TPA被氧化成阳离子自由基TPA+，并迅速自发地脱去一个质子(H+)，形成自由基TPA：由于[Ru(bpy)3]3+是强氧化剂，自由基TPA·是强还原剂，两个高反应基团在电极表面迅速反应，[Ru(bpy)3]3+被还原形成激发态的二价[Ru(bpy)3]2+，TPA·自身被氧化成二丙胺和丙醛。激发态的[Ru(bpy)3]2+衰减成基态的[Ru(bpy)3]2+时发射一个波长620nm的光子。这一过程在电极表面周而复始地进行，产生许多光子，光强度与[Ru(bpy)3]2+的浓度呈线性关系，据此测出待配体的含量。但在发光启动过程中，其关键必须加入发光增强剂，如Triton X-100，CTAC，Tween-20等乳化剂(表面活性剂)增加百倍级的发光的强度，方可进行仪器计数，才能实用化。
德国罗氏(Roche)电化学发光免疫分析法具有快速、敏感性高和稳定强等特点，已被广泛应用于我国临床上的日常医学检验中，罗氏电化学发光免疫分析仪和其配套的诊断试剂、发光缓冲液(ProCell)和清洗液(CleanCell)在全国各地医院消耗量巨大，特别是Roche的ProCell和CleanCell不仅是专利保密，其试剂价格也较贵，一套约需1800元左右。为此，研制电化学发光免疫分析系统中的ProCell和CleanCell液，替代进口的罗氏的ProCell和CleanCell液，不仅可替代国外产品，亦可提高我国诊断试剂制备水平；应用于我国临床上医学检验中，使之国产化，降低成本，具有一定的现实临床意义和经济效益。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种成本低、使用方便的电化学发光免疫分析的底物及其应用。
本发明一种电化学发光免疫分析的底物，包括两部分：发光缓冲液和清洗液；其中，发光缓冲液包括：质量浓度为4.826％的无水Na2HPO4，体积浓度为2.6％的三丙胺，体积浓度为0.1％的NP-40；清洗液包括：质量浓度为0.953％的KOH，体积浓度为0.75％的NP-40。
本发明一种电化学发光免疫分析的底物的应用，其作为电化学发光免疫分析仪中的底物。
进一步，本发明一种电化学发光免疫分析的底物的应用，按以下步骤进行：
一、发光缓冲液的制备：将所述的发光缓冲液中的各成分混匀，即制得发光缓冲液；
二、清洗液的制备：将所述的清洗液中的各成分混匀，即制得清洗液；
三、在室温条件下，将步骤一制得的发光缓冲液(ProCell)和步骤二制得的清洗液(CleanCell)，分别放置在罗氏电化学发光免疫分析仪的ProCell和CleanCell指定位置上；
四、将待测样本和诊断试剂放在罗氏电化学发光免疫分析仪的指定位置上，启动罗氏电化学发光免疫分析仪的自动检测程序，即可进行检测；
五、检测完毕，读取结果。
本发明一种用电化学发光免疫分析仪分析样品的方法中，所述的发光缓冲液和清洗液为电化学发光免疫分析的底物，所述清洗液中所述的NP-40为乳化剂。
本发明一种用电化学发光免疫分析仪分析样品的方法具有如下有益效果：
1、本发明中发光缓冲液(ProCell)和清洗液(CleanCell)是电化学发光免疫分析系统中的底物，其合成成本低，制备简便。本发明是一种应用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。采用本发明的方法进行检测分析，与采用罗氏原装ProCell与CleanCell液进行测定所得结果无显著差异，同时降低了成本，从而具有一定的现实临床意义和经济效益。
2、本发明中制备的发光缓冲液的三丙胺作为电子供体，清洗液中采用乙基苯基聚乙二醇(Nonidet P-40，简称NP-40)作为发光启动过程中的发光增强剂，NP-40与三丙胺协同作用于三联吡啶钌，得以保证电化学发光反应的高效和稳定，而且避免了本底噪声干扰。
3、本发明的用电化学发光免疫分析仪分析样品的方法中的发光缓冲液与清洗液，保存时间长，可达到12个月以上。
具体实施方式
下面结合实施例和验证试验对本发明的一种电化学发光免疫分析的底物及其应用作进一步的说明。
实施例
本实施例一种电化学发光免疫分析的底物的应用，包括以下步骤：
一、发光缓冲液(ProCell)的制备：
二、清洗液(CleanCell)的制备：
KOH       9.53g
NP-40     7.5ml
加水至    1000ml；
三、在室温条件下，将步骤一制得的发光缓冲液(ProCell)和步骤二制得的清洗液(CleanCell)，分别放置在罗氏电化学发光免疫分析仪分析仪的ProCell和CleanCell指定位置上；
四、将待测样本和诊断试剂放在罗氏电化学发光免疫分析仪的指定位置上，启动罗氏电化学发光免疫分析仪分析仪的自动检测程序，进行检测；
五、检测完毕，读取结果。
验证试验
1、测定2点定标液的比较
德国罗氏化学发光免疫分析方法中，只需进行2点定标，合格后即可检测样本。因此，在罗氏化学发光免疫分析仪(型号E601)上，分别采用罗氏和实施例中的ProCell与CleanCell液测定罗氏T3的2点定标液(重复3次)，并进行数学统计，以资比较，结果见表1。
表1罗氏和实施例中的ProCell与CleanCell液测定T3 2点定标液的比较
罗氏和本发明的ProCell与CleanCell液分别测定罗氏T31.34mmol/L和8.71mmol/L定标液，对其相对发光值，分别进行数学统计，比较罗氏的ProCell与CleanCell液和本发明的ProCell与CleanCell液的差异。结果显示，低值T3定标液(1.34mmol/L)和高值T3定标液(8.71mmol/L)在两组间差异无统计学意义，P值均＞0.05。表明采用本发明的一种用电化学发光免疫分析仪分析样品的方法测定罗氏T3 1.34mmol/L和8.71mmol/L定标液，与采用罗氏原装ProCell与CleanCell液进行测定所得结果无显著差异。
2、样品测定的准确性对比试验：
在德国罗氏化学发光免疫分析仪(型号E601)上，分别采用罗氏和实施例的ProCell与CleanCell液，各测定同1组样本(30例)，为使测定项目有代表性，每个样本测定项目选择免疫反应为夹心法的促甲状腺素(TSH)和甲胎蛋白(AFP)，免疫反应为竞争法的三碘甲状腺原氨酸(T3)和雌二醇(E2)。结果如表2所示。
表2德国罗氏和本发明的ProCell与CleanCell液检验样本比较
由表2可知，4项指标的测定值均较接近，2组样本进行t检验，差异无统计学意义(P>0.05)，相关系数(r)均>0.98，呈高度正相关性。
3、精密度试验：
取10份血清混合的样本，在德国罗氏电化学发光免疫分析仪(型号E601)上，将罗氏ProCell(发光缓冲液)和CleanCell(清洗液)与实施例中的发光缓冲液(ProCell)与清洗液(CleanCell)，各重复测定20次。同时在30天内对上述样本，再各重复测定20次，测定项目相同，作批内和批间变异系数(CV)的观察。结果表明罗氏和本发明的ProCell与CleanCell液二者所做的各检测项目均值和标准差，在同一项目间，差异均无统计学意义(P>0.05)。且本发明的ProCell与CleanCell液所做的各项目批内变异系数(C V)均<4.2％，批间变异系数(CV)均<7.3％，符合一般诊断试剂的批内变异系数(C V)<5％，批间变异系数(CV)<10％的要求。
4、底物的保存和稳定性观察
将实施例中的ProCell与CleanCell液，放置室温条件下12个月后，其pH值及各成分含量无明显变化，外观仍保持无色透明、无沉淀、无霉变。表明本发明电化学发光免疫分析系统的ProCell与CleanCell液的稳定性可达12个月以上。
虽然以上描述了本发明的具体实施方式，但是本领域的技术人员应当理解，这些仅是举例说明，本发明的保护范围是由所附权利要求书限定的。本领域的技术人员在不背离本发明的原理和实质的前提下，可以对这些实施方式作出多种变更或修改，但这些变更和修改均落入本发明的保护范围。

Claims (3)

1.一种电化学发光免疫分析的底物，其特征在于包括两部分：发光缓冲液和清洗液；其中，发光缓冲液包括：质量浓度为4.826％的无水Na2HPO4，体积浓度为2.6％的三丙胺，体积浓度为0.1％的NP-40；清洗液包括：质量浓度为0.953％的KOH，体积浓度为0.75％的NP-40。
2.一种权利要求1所述的一种电化学发光免疫分析的底物的应用，其特征在于：作为电化学发光免疫分析仪中的底物。
3.一种权利要求2所述的一种电化学发光免疫分析的底物的应用，其特征在于：按以下步骤进行：
一、发光缓冲液的制备：将所述的发光缓冲液中的各成分混匀，即制得发光缓冲液；
二、清洗液的制备：将所述的清洗液中的各成分混匀，即制得清洗液；
三、在室温条件下，将步骤一制得的发光缓冲液和步骤二制得的清洗液，分别放置在罗氏电化学发光免疫分析仪的发光缓冲液和清洗液的指定位置上；
四、将待测样本和诊断试剂放在罗氏电化学发光免疫分析仪的指定位置上，启动罗氏电化学发光免疫分析仪的自动检测程序，即可进行检测；
五、检测完毕，读取结果。
CN201410709517.8A 2014-11-28 2014-11-28 一种电化学发光免疫分析的底物及其应用 Pending CN104360051A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410709517.8A CN104360051A (zh) 2014-11-28 2014-11-28 一种电化学发光免疫分析的底物及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410709517.8A CN104360051A (zh) 2014-11-28 2014-11-28 一种电化学发光免疫分析的底物及其应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN104360051A true CN104360051A (zh) 2015-02-18

Family

ID=52527332

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410709517.8A Pending CN104360051A (zh) 2014-11-28 2014-11-28 一种电化学发光免疫分析的底物及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104360051A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106124753A (zh) * 2016-07-08 2016-11-16 广州东林生物科技有限公司 电化学发光缓冲液及清洗液
CN109517672A (zh) * 2017-09-20 2019-03-26 刘宏飞 一种罗氏电化学发光免疫分析仪用清洗液及其制备方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102680456A (zh) * 2011-03-16 2012-09-19 北京联众泰克科技有限公司 一种电化学发光免疫测定方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102680456A (zh) * 2011-03-16 2012-09-19 北京联众泰克科技有限公司 一种电化学发光免疫测定方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
WORKMAN S. ET.AL.: "The Effects of Nonionic Surfactants on the Tris(2,2′-bipyridyl)ruthenium(II)-Tripropylamine Electrochemiluminescence System", 《ANALYTICAL CHEMISTRY》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106124753A (zh) * 2016-07-08 2016-11-16 广州东林生物科技有限公司 电化学发光缓冲液及清洗液
CN106124753B (zh) * 2016-07-08 2018-03-06 广州东林生物科技有限公司 电化学发光缓冲液及清洗液
CN109517672A (zh) * 2017-09-20 2019-03-26 刘宏飞 一种罗氏电化学发光免疫分析仪用清洗液及其制备方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106198527B (zh) 一种抗坏血酸干扰多项尿液分析试纸及其制备方法
CN105754733A (zh) 一种化学发光免疫分析仪清洗液
CN102520196B (zh) 一种新生儿促甲状腺素/游离甲状腺素双标记检测试剂盒及相应的检测方法
CN102507473A (zh) 一种氨氮水质在线监测仪上污水中原物质干扰消除的方法
CN104034891A (zh) 酶标仪定量检测多样本中β-葡萄糖醛酸苷酶的方法和试剂盒
CN111537706B (zh) 一种电化学发光免疫分析仪用免疫洗液
CN109470856A (zh) 免疫测定方法、用于鉴定免疫测定的系统和试剂盒
CN104360051A (zh) 一种电化学发光免疫分析的底物及其应用
WO2022099972A1 (zh) 一种检测液体生物样本葡萄糖含量的弛豫核磁共振方法
CN108303528A (zh) 一种电化学发光分析仪所用底物及其制备方法和应用
CN1912622A (zh) 体液中葡萄糖的化学发光测定方法
CN109946355A (zh) 一种检测肿瘤标志物的电化学发光方法
CN103226146B (zh) 克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇三合一酶联免疫法及专用试剂盒与试剂盒的检测法
CN102169118B (zh) 血清或尿液中8-氧代脱氧鸟苷的定量检测方法
CN108004038A (zh) 一种碱性清洗液及其制备方法
CN1912589A (zh) 血清中尿素的化学发光测定方法
CN112394056A (zh) 用于过氧化氢检测的一体化速测管
CN108593905A (zh) 一种地高辛免疫检测试剂及其制备和检测方法
CN104237501B (zh) 一种抗体修饰的纳米银及其试剂盒与应用
CN105277537B (zh) 一种检测酶活性及化学发光反应底物性能的方法
CN109632780A (zh) 一种检测atp的比色方法及试剂盒
CN109239357A (zh) Ⅳ型胶原化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法和检测方法
CN112694887B (zh) 一种发光型传感器及其构筑方法与在检测植物水杨酸含量中的应用
CN1912591A (zh) 体液中α－L－岩藻糖苷酶的化学发光测定方法
CN113337348B (zh) 一种吖啶脂化学发光清洗液

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20150218