JPS6047960A - 細胞診に於ける細胞の染色方法 - Google Patents
細胞診に於ける細胞の染色方法Info
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- JPS6047960A JPS6047960A JP15593583A JP15593583A JPS6047960A JP S6047960 A JPS6047960 A JP S6047960A JP 15593583 A JP15593583 A JP 15593583A JP 15593583 A JP15593583 A JP 15593583A JP S6047960 A JPS6047960 A JP S6047960A
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- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、細胞の染色方法及び染色試液に関する。すな
わち臨床検査で細胞の異常を検出し、疾病の診断を行な
うだめの細胞診において、多色素−重染色を特徴とする
細胞の染色方法及び染色試液に関するものである。
わち臨床検査で細胞の異常を検出し、疾病の診断を行な
うだめの細胞診において、多色素−重染色を特徴とする
細胞の染色方法及び染色試液に関するものである。
細胞診は、細胞の異常を知る上で極めて重要なもので、
古くは、患者の各臓器からの滲出物、滲出液あるいは擦
過物などの中に含まれる細胞を、顕微鏡下で観察し、正
常細胞に混入している異型細胞を選別し、さらに、この
異型細胞が悪性なものかどうかを判別していた。その後
、この際の細胞の構造を見分けやすくするために種々の
色素で細胞を染めることにより、正常細胞と異型細胞の
形態を比較しやすくし、さらに染色性の差により構成成
分の相違を検出しやすくして、正常細胞と異型細胞を容
易に識別する方法が広く普及するようになった。この染
色に用いられる色素は、酸性染料、塩基性染料’ｔｕし
め、油溶染料、媒染染料など多種多様でオシ、目的対象
物によってそれぞれ使い分けられている。
古くは、患者の各臓器からの滲出物、滲出液あるいは擦
過物などの中に含まれる細胞を、顕微鏡下で観察し、正
常細胞に混入している異型細胞を選別し、さらに、この
異型細胞が悪性なものかどうかを判別していた。その後
、この際の細胞の構造を見分けやすくするために種々の
色素で細胞を染めることにより、正常細胞と異型細胞の
形態を比較しやすくし、さらに染色性の差により構成成
分の相違を検出しやすくして、正常細胞と異型細胞を容
易に識別する方法が広く普及するようになった。この染
色に用いられる色素は、酸性染料、塩基性染料’ｔｕし
め、油溶染料、媒染染料など多種多様でオシ、目的対象
物によってそれぞれ使い分けられている。
例えば、婦人科の膣脂膏、膣頚部及び膣内膜や喀痰、尿
、胃洗浄液の沈渣などの染色に用いられているパバニコ
ロ染色法は、ヘマトキシリン染色液で細胞核を染色し、
次に０Ｇ−６染色液（オレンジＧ含有）で角化上皮を、
ＥＡ染色液（エオシ／ＹとライトグリーンＳＦＹ含有）
でその他の部分全集め分ける方法で６Ｄ、多色素−重染
色法の代表的な方法として、ガン検診に広く普及してい
るものである。
、胃洗浄液の沈渣などの染色に用いられているパバニコ
ロ染色法は、ヘマトキシリン染色液で細胞核を染色し、
次に０Ｇ−６染色液（オレンジＧ含有）で角化上皮を、
ＥＡ染色液（エオシ／ＹとライトグリーンＳＦＹ含有）
でその他の部分全集め分ける方法で６Ｄ、多色素−重染
色法の代表的な方法として、ガン検診に広く普及してい
るものである。
ハハニコロ染色法は、これまで種々の組成の染色液とそ
の染色操作法が発表され、使用されており、例えば「細
胞診教本−その基礎と実際−」（宇宙堂八木書店）によ
れば、パパニコロ染色法として扁２６８１Ａ２６７、Ａ
２６７変法、パパニコロ１９６３年版Ａｔ１ａｓ中のメ
モ、 Ｗａｌｔｅｒ ＲｅｅｄＡｒｍｙ Ｈｏ５ｐｉｔ
ａｌ （１９６８年）変法、以前のＷａｉｔｅｒ Ｒｅ
ａｄ Ａｒｍｙ Ｈｏ５ｐｉｔａｌ （１９６０年）変
法の６種の方法が記載されている。
の染色操作法が発表され、使用されており、例えば「細
胞診教本−その基礎と実際−」（宇宙堂八木書店）によ
れば、パパニコロ染色法として扁２６８１Ａ２６７、Ａ
２６７変法、パパニコロ１９６３年版Ａｔ１ａｓ中のメ
モ、 Ｗａｌｔｅｒ ＲｅｅｄＡｒｍｙ Ｈｏ５ｐｉｔ
ａｌ （１９６８年）変法、以前のＷａｉｔｅｒ Ｒｅ
ａｄ Ａｒｍｙ Ｈｏ５ｐｉｔａｌ （１９６０年）変
法の６種の方法が記載されている。
ババニコロ染色法は、カラフルでバランスのとれた染色
法であるが、以下のような欠点があるため新規改良が要
望されるようになった。すなわち、Ｅ Ａ 染色液は、
エオシンＹとライトグリーンＳＦＹの二種の色素を含有
し、且つ塩基性色素のビスマルクブラウンを添加してエ
オシンＹとライトグリーンＳＦＹの染色性を調整させ、
３種の色素の競合染色となっているため、染色液の液性
や、３柿の色素の濃度及び比率が染色に大きく影響を及
ぼしておシ、再現性の良い結果を得るには染色液の調製
及び染色操作に高度の技術を必要とした。しかも、エオ
ン／Ｙ、ライトグリーンＳＦＹは光によシ分解されやす
いため、染色後の標本の褪色が早く、その保存安定性が
非常に悪いとｂう問題点があった。従って、最近のガン
検診制度の進歩に伴い、パパニコロ染色法による細胞診
の自動化がなされるにつれ、以上述べてきたような問題
点や欠点を解決又は軽減した新たな染色液及び染色操作
法が切望されるようになった。
法であるが、以下のような欠点があるため新規改良が要
望されるようになった。すなわち、Ｅ Ａ 染色液は、
エオシンＹとライトグリーンＳＦＹの二種の色素を含有
し、且つ塩基性色素のビスマルクブラウンを添加してエ
オシンＹとライトグリーンＳＦＹの染色性を調整させ、
３種の色素の競合染色となっているため、染色液の液性
や、３柿の色素の濃度及び比率が染色に大きく影響を及
ぼしておシ、再現性の良い結果を得るには染色液の調製
及び染色操作に高度の技術を必要とした。しかも、エオ
ン／Ｙ、ライトグリーンＳＦＹは光によシ分解されやす
いため、染色後の標本の褪色が早く、その保存安定性が
非常に悪いとｂう問題点があった。従って、最近のガン
検診制度の進歩に伴い、パパニコロ染色法による細胞診
の自動化がなされるにつれ、以上述べてきたような問題
点や欠点を解決又は軽減した新たな染色液及び染色操作
法が切望されるようになった。
本発明者らは、かかる問題点を解決すべく鋭意研究の結
果、パパニコロ染色液の０Ｇ−６染色液及びＥＡ染色液
による細胞染色の際、細胞組織をよシ効果的に染め分け
るには染色液のｐＨが影響をもつのではないかとの着想
から、その゛見掛は上の最適ｐＨ”が３．５〜６．５に
あることを見出し、且つそのｐＨ調整のために有機酸又
は／及びその塩類の添加が非常に有効であることを見出
し、更に、０Ｇ−６染色液にオレンジＧとタートラジン
の二種の色素を使用することにより角化上皮の染色が鮮
明に行われ、ＥＡ染色液として、エオシンＹ、ライトグ
リーンＳＦＹの二種の色素に加えて、アシッドレッド、
ファーストグリーンＦＣＦの二種の色素の内のいずれか
一方又は両方を使用することによって、染色性の向上と
染色標本の保存安定性の向上が達成できることを見出し
、本発明を完成するに到った。
果、パパニコロ染色液の０Ｇ−６染色液及びＥＡ染色液
による細胞染色の際、細胞組織をよシ効果的に染め分け
るには染色液のｐＨが影響をもつのではないかとの着想
から、その゛見掛は上の最適ｐＨ”が３．５〜６．５に
あることを見出し、且つそのｐＨ調整のために有機酸又
は／及びその塩類の添加が非常に有効であることを見出
し、更に、０Ｇ−６染色液にオレンジＧとタートラジン
の二種の色素を使用することにより角化上皮の染色が鮮
明に行われ、ＥＡ染色液として、エオシンＹ、ライトグ
リーンＳＦＹの二種の色素に加えて、アシッドレッド、
ファーストグリーンＦＣＦの二種の色素の内のいずれか
一方又は両方を使用することによって、染色性の向上と
染色標本の保存安定性の向上が達成できることを見出し
、本発明を完成するに到った。
本発明に使用される有機酸は、好ましくは脂肪酸ゆ、例
えば、酢酸、クエン酸、コノ・り酸、マレイン酸、ソル
ビン酸、酒石酸、乳酸、カグリル醒ラウリン酸などが単
独で又は二種以上の混合物として用いられるが、又芳香
族酸類も問題なく使用でキ、ヘンゼン項又はナフタレン
環にスルホン酸基又はカルボン酸基が直結した化合物、
例えば、ｐ−トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸
、ｐ−フェノールスルホン酸、１−ジメチルアミツナ７
タレンー７−スルホン酸、安息香ｌ眩、１−ナフトエ酸
、サリチル酸、スルホサリチル酸などが単独で又は二種
以上の混合物として用いられ、捷だ、脂肪酸類と芳香族
酸類の任意の混合物としても使用できる。又、これら有
機酸の塩類として汀、アルカリ金属塩類、アンモニウム
塩類、アミン塩類などが使用でき、酸類と塩類の任意の
組合せによる混合物も差支えなく使用できる。なお、こ
れら有機酸又は有機酸の塩類は例示した化合物に限定さ
れるものではないことげいつまでもない。
えば、酢酸、クエン酸、コノ・り酸、マレイン酸、ソル
ビン酸、酒石酸、乳酸、カグリル醒ラウリン酸などが単
独で又は二種以上の混合物として用いられるが、又芳香
族酸類も問題なく使用でキ、ヘンゼン項又はナフタレン
環にスルホン酸基又はカルボン酸基が直結した化合物、
例えば、ｐ−トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸
、ｐ−フェノールスルホン酸、１−ジメチルアミツナ７
タレンー７−スルホン酸、安息香ｌ眩、１−ナフトエ酸
、サリチル酸、スルホサリチル酸などが単独で又は二種
以上の混合物として用いられ、捷だ、脂肪酸類と芳香族
酸類の任意の混合物としても使用できる。又、これら有
機酸の塩類として汀、アルカリ金属塩類、アンモニウム
塩類、アミン塩類などが使用でき、酸類と塩類の任意の
組合せによる混合物も差支えなく使用できる。なお、こ
れら有機酸又は有機酸の塩類は例示した化合物に限定さ
れるものではないことげいつまでもない。
以上述べたような有機酸又は／及び有機酸の塩類を用い
ることにより、染色液の液性を、ｐＨ，＝３．５〜６５
に調整することが、本発明の染色法の重要なポイントと
なっている。ここでいう液性とに、通常のガラス電極ｐ
Ｈメーターによって測定された゛′見掛けのｐＨ”ｅ意
味し、この染色液のように溶媒として６０〜９０ ｖ／
ｖ％エタノールを用いた場合、１ｉ極自体のアルコール
誤差が太きいため、正確なｐＨ測定は困難であり、真の
ｐＨ値とは区別されたパ見掛けのｐＨ”として、その液
性を示しである。本発明者らに、０Ｇ−６染色液及びＥ
Ａ染色液による細胞染色の際、細胞組織を最もよく染め
分けられるための″見掛は上の最適ｐＨ”が３５〜６５
にあることを見出し、且つそのｐＨ調髭）チのために有
機厳父ｉ／及びその塩の混合物を添゛加することが非常
に有効であることも見出したのである。
ることにより、染色液の液性を、ｐＨ，＝３．５〜６５
に調整することが、本発明の染色法の重要なポイントと
なっている。ここでいう液性とに、通常のガラス電極ｐ
Ｈメーターによって測定された゛′見掛けのｐＨ”ｅ意
味し、この染色液のように溶媒として６０〜９０ ｖ／
ｖ％エタノールを用いた場合、１ｉ極自体のアルコール
誤差が太きいため、正確なｐＨ測定は困難であり、真の
ｐＨ値とは区別されたパ見掛けのｐＨ”として、その液
性を示しである。本発明者らに、０Ｇ−６染色液及びＥ
Ａ染色液による細胞染色の際、細胞組織を最もよく染め
分けられるための″見掛は上の最適ｐＨ”が３５〜６５
にあることを見出し、且つそのｐＨ調髭）チのために有
機厳父ｉ／及びその塩の混合物を添゛加することが非常
に有効であることも見出したのである。
用いる有機酸又は有機酸の塩類の濃度に、″見掛けのｐ
Ｈ” ３．５〜６５が得られる濃度であれば特に制限ば
ないが、通常用いられる濃度は００５〜１ｗ／ ％であ
る。しかし、この濃度範囲をはずれ■ た溶液でも伺ら差支えはない。
Ｈ” ３．５〜６５が得られる濃度であれば特に制限ば
ないが、通常用いられる濃度は００５〜１ｗ／ ％であ
る。しかし、この濃度範囲をはずれ■ た溶液でも伺ら差支えはない。
例えば、脂肪酸類及び芳香族酸類を添加したときのＥＡ
染色液（色素としてニオノンＹ０．４５％、アノノドレ
ッド ０．００５％、ライトグリーン５ＦＹ０．０２％
、ファーストグリーンＦＣＦ０．０２チを含む）の″見
掛けのｐＨ” ｋ第１表、第２表に例示する。酸濃度は
、０２Ｗ／／ｖ％、溶媒は、８０ｖ／％エタノールを用
いた。
染色液（色素としてニオノンＹ０．４５％、アノノドレ
ッド ０．００５％、ライトグリーン５ＦＹ０．０２％
、ファーストグリーンＦＣＦ０．０２チを含む）の″見
掛けのｐＨ” ｋ第１表、第２表に例示する。酸濃度は
、０２Ｗ／／ｖ％、溶媒は、８０ｖ／％エタノールを用
いた。
第１表
第２表
また、有機酸と有機酸塩の混合物を添加したときのＥＡ
染色液（色素としてニオノンＹ０．４５％、アシンドレ
ッド ０．００５％、ライトグリーンｓｒ；”ｙＯ００
２％、ファーストグリーンＦＣＦ０．０２チ を含む）
の″見掛けのｐＨ”を第３表に例示する。酊゛及び塩の
濃度は０２゛シ′ チ、溶媒は、７０ｖ／ｖ係、■ エタノールを用いた。
染色液（色素としてニオノンＹ０．４５％、アシンドレ
ッド ０．００５％、ライトグリーンｓｒ；”ｙＯ００
２％、ファーストグリーンＦＣＦ０．０２チ を含む）
の″見掛けのｐＨ”を第３表に例示する。酊゛及び塩の
濃度は０２゛シ′ チ、溶媒は、７０ｖ／ｖ係、■ エタノールを用いた。
第３表
また、従来法に比べ、本発明は、染色の際の色の鮮明さ
及び染色後の標本の保存安定性が著しく改善されている
。すなわち、０Ｇ−６染色液にオレンジＧとクードラジ
ンの２種の色素を用いることにより、角化上皮の染色が
、従来のＯＧ−６染色に比べより鮮明に行なえるようＫ
なｐ、また、ＥＡ染色液として、ニオノンＹ１ ライト
グリーンＳＦＹの二種の色素に加えて、アシンドレッド
、ファーストグリーンＦＣＦの二種の色素の内のいずれ
か一方又は両方を用いることによシ、この保存安定性が
より一層改善され、従って、従来の・ぐガニコロ法にお
けるＥＡ染色液に含まれていた塩基性色素のビスマルク
ブラウンは全く用いる必要がなくなった。
及び染色後の標本の保存安定性が著しく改善されている
。すなわち、０Ｇ−６染色液にオレンジＧとクードラジ
ンの２種の色素を用いることにより、角化上皮の染色が
、従来のＯＧ−６染色に比べより鮮明に行なえるようＫ
なｐ、また、ＥＡ染色液として、ニオノンＹ１ ライト
グリーンＳＦＹの二種の色素に加えて、アシンドレッド
、ファーストグリーンＦＣＦの二種の色素の内のいずれ
か一方又は両方を用いることによシ、この保存安定性が
より一層改善され、従って、従来の・ぐガニコロ法にお
けるＥＡ染色液に含まれていた塩基性色素のビスマルク
ブラウンは全く用いる必要がなくなった。
本発明の細胞診染色方法をより詳細に下記に述べる。０
Ｇ−６染色液として、８０ｖ／ｖ％エタノール中に、オ
レンジＧ ０１４７ｗ／ｖ％、タートランン００１ｗ／
／ｖ係、コノ・り酸 ０２ｗ／ｖチを含有するもの、Ｅ
Ａ染色液として８０ ｖ／ｖ％エタノール中にニオノン
Ｙ Ｏ３５ｗ／／ｖチ、アシンドレッド０００５ｗ／／
ｖ％、ライトグリーンＳＦＹ Ｏ，０２３Ｗ／／％、７
７−スト！ ’） −７ＦＣＦ Ｏ，０１２ｗ／％、コ
ハク酸０．２”／、％’を含有するもの全調製する。
Ｇ−６染色液として、８０ｖ／ｖ％エタノール中に、オ
レンジＧ ０１４７ｗ／ｖ％、タートランン００１ｗ／
／ｖ係、コノ・り酸 ０２ｗ／ｖチを含有するもの、Ｅ
Ａ染色液として８０ ｖ／ｖ％エタノール中にニオノン
Ｙ Ｏ３５ｗ／／ｖチ、アシンドレッド０００５ｗ／／
ｖ％、ライトグリーンＳＦＹ Ｏ，０２３Ｗ／／％、７
７−スト！ ’） −７ＦＣＦ Ｏ，０１２ｗ／％、コ
ハク酸０．２”／、％’を含有するもの全調製する。
ヘマトキシリン液に、通常パバニコロ染色法で用いられ
ている、ヘマトキジリン染色液を用いる。
ている、ヘマトキジリン染色液を用いる。
試料としては、例えば婦人科の膣頚部から擦過法により
サンプリングし、スライドグラスに塗抹し固定液で固定
化した物を用いた。この固定化した試料を、ヘマトキジ
リン染色液で６分間核染色し、蒸留水で洗浄し、０．２
５％塩酸中に６回前後出入させてから流水で水洗する。
サンプリングし、スライドグラスに塗抹し固定液で固定
化した物を用いた。この固定化した試料を、ヘマトキジ
リン染色液で６分間核染色し、蒸留水で洗浄し、０．２
５％塩酸中に６回前後出入させてから流水で水洗する。
次に、蒸留水→５０ｖ／／ｖチェタノール→７０ｖ／ｖ
ｑＩ）エタノール→８０′ｖ／ ％エタノールの順に濯
いでからＯＧ −６染色■ 液で３分間染色する。８０ｖ／ｖチエタノール洗浄後、
１％リンタングステン酸を含む８０ｖ／ｖチエタノール
に１分間浸漬し、次いで８０ｖ／ｖチエタノールで洗浄
後、ＥＡ染色液で３分間染色する。
ｑＩ）エタノール→８０′ｖ／ ％エタノールの順に濯
いでからＯＧ −６染色■ 液で３分間染色する。８０ｖ／ｖチエタノール洗浄後、
１％リンタングステン酸を含む８０ｖ／ｖチエタノール
に１分間浸漬し、次いで８０ｖ／ｖチエタノールで洗浄
後、ＥＡ染色液で３分間染色する。
次に、８０ｖ／ ％エタノール→エタノ〜ルの川口で濯
いでから、キシレンに浸漬、透徹後、適当な側入剤、例
えば、エンテランニーー〇（メルク社登録商標）、バー
マウント■（フイノ／ヤー・サイエンティフインクカン
パニー登録闇標）、ビオライｌ−（広研商事（株）商品
名）などの封入剤で封入する。この際、初めからＥＡ染
色色［０，２〜１チのリンタングステン酸ヲ加えたもの
を使１［」すれば、上記のリンタングステン酸エタノー
ル溶液に浸漬する操作は省略しても差支えない。このＥ
Ａ染色液は、従来のＥＡ染色液に含まれているビスマル
クブラウン、炭酸リチウムは含んでおらず、染色色素と
して従来のＥＡ染色液に含まれているニオ／／Ｙ１ ラ
イトグリーン５□ＦＹの他に、アシッドレッド、ファー
ストグリーンＦＣＦのいずれか一方又は両方が含まれて
いるので、好酸性細胞質や好酸性細胞質が従来のＥＡ染
色色比べて更に多彩な色調に染色される。また、０Ｇ−
６染色液に、従来のＯＧ−，６染色液に含まれているオ
レンジＧの他、タートラジンも含有させた場合、角化表
層細胞が従来のものに比べて鮮黄色に染色される。
いでから、キシレンに浸漬、透徹後、適当な側入剤、例
えば、エンテランニーー〇（メルク社登録商標）、バー
マウント■（フイノ／ヤー・サイエンティフインクカン
パニー登録闇標）、ビオライｌ−（広研商事（株）商品
名）などの封入剤で封入する。この際、初めからＥＡ染
色色［０，２〜１チのリンタングステン酸ヲ加えたもの
を使１［」すれば、上記のリンタングステン酸エタノー
ル溶液に浸漬する操作は省略しても差支えない。このＥ
Ａ染色液は、従来のＥＡ染色液に含まれているビスマル
クブラウン、炭酸リチウムは含んでおらず、染色色素と
して従来のＥＡ染色液に含まれているニオ／／Ｙ１ ラ
イトグリーン５□ＦＹの他に、アシッドレッド、ファー
ストグリーンＦＣＦのいずれか一方又は両方が含まれて
いるので、好酸性細胞質や好酸性細胞質が従来のＥＡ染
色色比べて更に多彩な色調に染色される。また、０Ｇ−
６染色液に、従来のＯＧ−，６染色液に含まれているオ
レンジＧの他、タートラジンも含有させた場合、角化表
層細胞が従来のものに比べて鮮黄色に染色される。
その結果、悪性細胞の検出が容易になった。
上記例示した方法で、アシッドレッド、）７−ストグリ
ーンＦＣＦ、タートラジンを含有（、ない染色液を用い
て染色を行なった場合は、従来のババニコロ染色液を用
いた場合と同様のやや不解明な色；ｉ＋ｒ、＋に染色さ
れた。
ーンＦＣＦ、タートラジンを含有（、ない染色液を用い
て染色を行なった場合は、従来のババニコロ染色液を用
いた場合と同様のやや不解明な色；ｉ＋ｒ、＋に染色さ
れた。
捷だ、これ寸で従来のパパニコロ染色法で問題となって
いた染色柳本の光照射による褪色、変色問題も、本発明
により改善され保存安定性に体・れた染色標本を得るこ
とが可能となっ／こ。
いた染色柳本の光照射による褪色、変色問題も、本発明
により改善され保存安定性に体・れた染色標本を得るこ
とが可能となっ／こ。
以下に実施例を述べる。
実施例１゜
染色試液
（１）ヘマトキシリン染色液
（２） ＯＧ −６染色液
オレンジＧ０５７及びコハクｉｏ、２ｆを８０ｖ／、チ
ェタノールに溶仰１し全量１−００ ｍｅとする。
ェタノールに溶仰１し全量１−００ ｍｅとする。
（３）ＥＡ染色液
ｊ−オンンＹ０．３！Ｍ、アシッドレッド０．０１ｆ、
ライトグリーン５ＦＹＯ，ｏ６ｙ、ファーストグリーン
ＦＣＦ０．０２９及びコハク酸０２５７を８０Ｖ／Ｖ係
エタノールにｔＶｔし全量１００ ｍｅとする。
ライトグリーン５ＦＹＯ，ｏ６ｙ、ファーストグリーン
ＦＣＦ０．０２９及びコハク酸０２５７を８０Ｖ／Ｖ係
エタノールにｔＶｔし全量１００ ｍｅとする。
染色方法
採取した喀痰を常法によりスライドグラスに塗抹し、直
ちにエーテル・アルコール固定液につけて固定する。固
定した試料をへマトキ／リノ染色液で６分間核染色全行
ない、その後蒸留水で洗浄し、０２５％塩酸中に６回位
出入させてから流水で水洗する。次に、蒸留水→５０ｖ
／ ％エタノール→７０ｖ／ｖチェタノール→８０ｖ／
ｖｆＯエタノールの順で濯いでから、０Ｇ−６染色液で
３分間染色する。８０ｖ／ｖ係エタノール洗浄後、１％
リンタングステン酸を含む８０ｖ／％エタノールに１分
間浸漬し、次いで８０ｖ／／ｖ％エタノールで洗浄後、
ＥＡ染色液で３分間染色する。次に、８０ｖ／ｖ係エタ
ノール→エタノールの順で濯いでからキンレンに浸漬、
透徹後、封入剤ビオライト（広研商事Ｃ株）商品名）で
封入する。
ちにエーテル・アルコール固定液につけて固定する。固
定した試料をへマトキ／リノ染色液で６分間核染色全行
ない、その後蒸留水で洗浄し、０２５％塩酸中に６回位
出入させてから流水で水洗する。次に、蒸留水→５０ｖ
／ ％エタノール→７０ｖ／ｖチェタノール→８０ｖ／
ｖｆＯエタノールの順で濯いでから、０Ｇ−６染色液で
３分間染色する。８０ｖ／ｖ係エタノール洗浄後、１％
リンタングステン酸を含む８０ｖ／％エタノールに１分
間浸漬し、次いで８０ｖ／／ｖ％エタノールで洗浄後、
ＥＡ染色液で３分間染色する。次に、８０ｖ／ｖ係エタ
ノール→エタノールの順で濯いでからキンレンに浸漬、
透徹後、封入剤ビオライト（広研商事Ｃ株）商品名）で
封入する。
不法で染色した標本は、黄、赤、緑の染色が保存中に褪
色し難く、且つ従来法による染色標本に比べて色調が鮮
明であった。
色し難く、且つ従来法による染色標本に比べて色調が鮮
明であった。
また、実施例１のコハク酸の代わシに安息香酸２り又は
イソフタル酸０．３９を用いても、あるいは、安息香酸
１２及びイソフタル酸０１２を用いても、実施例１と同
様の効果が得られた。
イソフタル酸０．３９を用いても、あるいは、安息香酸
１２及びイソフタル酸０１２を用いても、実施例１と同
様の効果が得られた。
実施例２
染色液
（１）ヘマトキシリン染色液
（２） ＯＧ −６染色液
オＬ／７ジＧ０４７２、ター １− ラジン０．０１ｆ
及び安息％ｒｐ Ｏ，５ｙ、コハク酸２１ｉ′ヲ８ｏｖ
ＺＶ係エタノールに溶解し全量１００ ｍｅとする。
及び安息％ｒｐ Ｏ，５ｙ、コハク酸２１ｉ′ヲ８ｏｖ
ＺＶ係エタノールに溶解し全量１００ ｍｅとする。
（３）ＥＡ染色沿
エオシンＹ０．３５ｆ、アシッドレッド０００５２、ラ
イトグリーンＳ Ｆ Ｙ Ｏ，０２：３ ｙ、ファース
トグリーンＦＣＦ０．０１２ｆかび安息香酸０５７、コ
ハク酸２７を８０ｖ／／ｖｑｌ）エタノールにｍｍ′し
全量１００ｍ１とする。
イトグリーンＳ Ｆ Ｙ Ｏ，０２：３ ｙ、ファース
トグリーンＦＣＦ０．０１２ｆかび安息香酸０５７、コ
ハク酸２７を８０ｖ／／ｖｑｌ）エタノールにｍｍ′し
全量１００ｍ１とする。
染色方法
実施例１に同じ。
不法で染色した標本は、角化表層細胞が、ｒｒ光来法び
実施例１に比べ鮮黄色に染色された。その他は実施例１
．に同じ。
実施例１に比べ鮮黄色に染色された。その他は実施例１
．に同じ。
また、実施例２．の安息香酸０．５９及びコノ・り酸２
ｖの代りに、安息香酸１ｆを単独で用いても、あるいは
、コノ・り酸１７を単独で用いても、実施例２と同様の
効果が得られた。
ｖの代りに、安息香酸１ｆを単独で用いても、あるいは
、コノ・り酸１７を単独で用いても、実施例２と同様の
効果が得られた。
実施例３
染色液
（１）ヘマトキシリン染色液
（２） ＯＧ −６染色液
オレンジＧ０４４グ、タートラジン０．００９２、コハ
ク酸０．２８ｆを８２ｖ／ｖ係エタノールに浴解し全景
１００ｒｎ！、とする。
ク酸０．２８ｆを８２ｖ／ｖ係エタノールに浴解し全景
１００ｒｎ！、とする。
（３） ｗ Ａ伶色液
エオシンＹ０．４０９、アンノドレッド０．００５２、
ライトグリーンＳＦ’Ｙ０．０２８ｆ、ファーストグリ
ーンＦＣＦＯ，ｏ２ｓｒ、コノ・り酸０２５２、リンタ
ングステンｌｌＯ，５ｒを８２ｖ／ｖチエタノールに溶
解し全量１００ ｍｔとする。
ライトグリーンＳＦ’Ｙ０．０２８ｆ、ファーストグリ
ーンＦＣＦＯ，ｏ２ｓｒ、コノ・り酸０２５２、リンタ
ングステンｌｌＯ，５ｒを８２ｖ／ｖチエタノールに溶
解し全量１００ ｍｔとする。
染色方法
実施例１に同じ。但し、０Ｇ−６染色液による染色後の
「１チリンタングステン酸を含む８゜ｖ／ｖ係エタノー
ルによる浸漬」は省略する。寸だ、０Ｇ−６染色液浸漬
前後及びＥＡ染色液浸漬前後＋７） 浸ｆ＆工程に用い
るエタノールｕ、８２ｖ／１７）ものを用いる。
「１チリンタングステン酸を含む８゜ｖ／ｖ係エタノー
ルによる浸漬」は省略する。寸だ、０Ｇ−６染色液浸漬
前後及びＥＡ染色液浸漬前後＋７） 浸ｆ＆工程に用い
るエタノールｕ、８２ｖ／１７）ものを用いる。
末法で染色した標本は、角化表層細胞、が、従来法及び
実施例１．に比べ鮮黄色に染色される。その他は実施例
１．に同じ。
実施例１．に比べ鮮黄色に染色される。その他は実施例
１．に同じ。
実施例４゜
染色液
（１）ヘマトキシリン染色液
（２１０Ｇ−６染色液
オレンジＧＯ，４４ｆ、クートラジ：１０．００４５２
、コハクｌ！１１２０．２８ｒ、リンタングステン酸０
−０１５ｆを８０７ｖ％エタノールに溶ｊｌｌ’ｆ Ｌ
、全開１００ ｍｔとする。
、コハクｌ！１１２０．２８ｒ、リンタングステン酸０
−０１５ｆを８０７ｖ％エタノールに溶ｊｌｌ’ｆ Ｌ
、全開１００ ｍｔとする。
（３） Ｅ Ａ染色液
実施例３に同じ。
染色方法
採取したり袂をステンドグラスに塗抹１−７．９５ｖ／
ｖチエタノールで固定した後、７０ｖ／ｖ係エタノール
に１０回浸漬、次に５０ｖ／ｖチエタノールに１０回浸
漬、次に流水で軽く洗い、更に蒸留水に１０回浸漬した
後、ヘマトキシリン染色液で３分間染色後、流水で軒く
洗う。次に、０．５係塩酸に６回浸漬、次に流水で５分
洗った後、５０ｖ／／ｖチエタノールで１０回、７０ｖ
／ｖ％エタノールで１０回、８０７ｖ係エタノールで１
０回、９５ゝ４゜チェタノールで１０回浸漬後、０Ｇ−
６染色液で１分間染色する。次いで、９５ｖ／ｖ％エタ
ノールで２０回浸漬し、ＥＡ染色液で１分間染色後、９
５ｖ／％エタノールで２０回、エタノールで２０回■ 浸漬、次いでキシレンに３０回浸漬、透徹後、封入剤ビ
オライト（広イリ１商事■商品名）で封入する。
ｖチエタノールで固定した後、７０ｖ／ｖ係エタノール
に１０回浸漬、次に５０ｖ／ｖチエタノールに１０回浸
漬、次に流水で軽く洗い、更に蒸留水に１０回浸漬した
後、ヘマトキシリン染色液で３分間染色後、流水で軒く
洗う。次に、０．５係塩酸に６回浸漬、次に流水で５分
洗った後、５０ｖ／／ｖチエタノールで１０回、７０ｖ
／ｖ％エタノールで１０回、８０７ｖ係エタノールで１
０回、９５ゝ４゜チェタノールで１０回浸漬後、０Ｇ−
６染色液で１分間染色する。次いで、９５ｖ／ｖ％エタ
ノールで２０回浸漬し、ＥＡ染色液で１分間染色後、９
５ｖ／％エタノールで２０回、エタノールで２０回■ 浸漬、次いでキシレンに３０回浸漬、透徹後、封入剤ビ
オライト（広イリ１商事■商品名）で封入する。
比較例１
染色液
（１）ヘマトキンリン染色液
（２）ＯＧ−６染色液
オレンジＧＯ，５ｇ、リンタングステン酸０．０１５９
を９０ｖ／ｖチェタノールに溶解し、全量１００−とす
る。
を９０ｖ／ｖチェタノールに溶解し、全量１００−とす
る。
（３１１’、 Ａ染色液
エオシンＹ０．２３ｆ、ライトグリーン５ＦＹＯ，Ｏ４
５２、ビスマルクブラウン０．０５ｆ、リンタングステ
ン酸０．６ｆを９０ｖ／／ｖ％エタノールに溶解し、全
景１０ ｏ ｍｅとする。
５２、ビスマルクブラウン０．０５ｆ、リンタングステ
ン酸０．６ｆを９０ｖ／／ｖ％エタノールに溶解し、全
景１０ ｏ ｍｅとする。
染色方法
採月ｙした喀痰をスライドグラスに塗抹し、９５ｖ／
％エタノールで固定した後、実施例４．と同様■ に操作してヘマトキシリン液で染色後、０Ｇ−６染色液
、次いでＥＡ染色液で染色を行なう。１１−１． ｌ、
、ＯＧ染色及びＥＡ？色の染色時間は、それぞれ１分３
０秒とする。
％エタノールで固定した後、実施例４．と同様■ に操作してヘマトキシリン液で染色後、０Ｇ−６染色液
、次いでＥＡ染色液で染色を行なう。１１−１． ｌ、
、ＯＧ染色及びＥＡ？色の染色時間は、それぞれ１分３
０秒とする。
実施例４．と比較例１．によりイ↓）られた標本を的射
日光下に保存した時の、各色１ｙ＋の変化をｇ；： ４
表に示した。
日光下に保存した時の、各色１ｙ＋の変化をｇ；： ４
表に示した。
比較例１．では３０日以後の赤及び緑の褪色が著し７く
、６０日経溝後では赤は全く消失し、染色４ｇＦ＝本と
しての価値を失うが、≠施例４゜の枦木でい、６０日経
過後も僅かな褪色しか認められず、染色樗木として使用
可能である。
、６０日経溝後では赤は全く消失し、染色４ｇＦ＝本と
しての価値を失うが、≠施例４゜の枦木でい、６０日経
過後も僅かな褪色しか認められず、染色樗木として使用
可能である。
第 ４ 表
判定方法：暗所に保存した同一染色標本の色調を１００
と（−で顕微鏡下、肉眼で評価。
と（−で顕微鏡下、肉眼で評価。
評価点Ｏは、全く脱色。
手続補正書
昭和ｉ２年／／月２グ日
１ 事件の表示
旦ａオロ５８ｊしオ井峠玖会ち１ ぢぎ９３５ぞ２ 発
明の名称 ３ 補正をする者 事件との関係 特許出願人 連絡先 特許課（東京） 置 ０３−２７０−８５７１
４ 補正命令の日付 自 沼 ！５ ネＡ′氏の升象 ・ メ脚わ溝弔詳糾ｆＪ”め本欄。
明の名称 ３ 補正をする者 事件との関係 特許出願人 連絡先 特許課（東京） 置 ０３−２７０−８５７１
４ 補正命令の日付 自 沼 ！５ ネＡ′氏の升象 ・ メ脚わ溝弔詳糾ｆＪ”め本欄。
６、補正の的２格−
（鍵ル佃側げ１行目１て省６起ρ１ター）ラジン１苔澹
しなν１」ぜター）ラジ′ン東・ずれ４０分布しん゛い
」 と補正する。
しなν１」ぜター）ラジ′ン東・ずれ４０分布しん゛い
」 と補正する。
（Ｚ＞−／ ’ｌ １． ’；４−５” Ｅ Ｉ 、ｎ
２４ａ ’ム２匁刊ＷＪ色」玄ｒ７Ｊギ欅榮飢に補正す
る。
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る。
（３か男系用＊ｒ ’ｒｉ’ｒイ行）」力＼ら７’１％
Ｉ（７行目１；力゛１す１戯ｊ匁の゛引分ア轟靴色する
。」ｔ′１別団八咬へＪるリヒ卆ボテする。
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り麿１ ｒｌ Ｚ Ｉ 列寸目（４乙櫨の″３２分間誇
邑１ろ、」’ｔ ’ Ｚ／崩嘩１ろりす、％工する。
邑１ろ、」’ｔ ’ Ｚ／崩嘩１ろりす、％工する。
〕メ上
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 （１）細胞診染色を行なう際、まずヘマトキシリン染色
液で細胞核を染色し、次いで、オレンジＧ（ＣＩ １６
２３０）及びクードラジン（ＣＩ １９１４０）の二種
の色素又はこれにリンタングステン酸を加えたもの、に
有機酸又は／及び有機酸の塩類を加えた染色１＝ｚＯＧ
−６染色液として用いて角化上皮を染色し、更に、ニオ
ノンＹ （ＣＩ ４５３８０）、ライトグリーン５ＦＹ
（ＣＩ ４２０９５）の二種の色素に加えて、アブノド
レッド（ＣＩ ４５１００）、ファーストグリーンＦＣ
Ｆ（ＣＩ ４２０５３）の二種の色素のいずれか一方又
は両方を加えたもの又はこれにリンタングステン酸を加
えたもの、に有機酸又は／及び有機酸の塩類を加えた染
色液をＥＡ染色液として用いて、その他の部分を染め分
けることを特徴とする、細胞の染色方法。 （２）ＯＧ−５染色液及びＦＡ染色液の夫々に含まれる
有機酸又は／及び有機酸の塩類が脂肪酸又は／及び脂肪
酸の塩類である、特許請求の範囲第１項記載の染色方法
。 （３）細胞診染色を行なう際、寸ずヘマトキンリン染色
液で細胞核を染色し、次いで、オレンジＧ（ＣＩ １６
２３０）及びタートラジン（ＣＩ １９１４０）の二種
の色素又はこれにリンタングステン酸を加えた染色液ｔ
ｏ（、−６染色液として用いて角化上皮全染色し、更に
、エオンンＹ（ＣＩ ４５３８０）、ライトグリーン５
ＦＹ（ＣＩ ４２０９５）の二棹の色素に加えて、アン
ノドレッド（ＣＩ ４５１．００）、ファーストグリー
ンＦＣＦ（ＣＩ ４２０５３）の二種の色素のいずれか
一方又に両方を加えたもの又はこれにリンタングステン
酸を加えた染色液ｋＥＡ染色液として用いて、その他の
部分を染め分けることを特徴とする、細胞の染色方法。 （４）へマトキシリ／染色液で細胞核を染色し、次いで
ＯＧ−６染色液を用いて角化上皮を染色し、更に、ＥＡ
染色液を用いてその他の部分を染め分ける細胞診染色法
に於て、０Ｇ−６染色液とじぞオレンジＧ （ＣＩ １
６２３０）及びタートラジン（ＣＩ １９１４０）の二
種の色素又はこれにリンタングステン酸を加えたもの、
に有機酸又は／及び有機酸の塩類を加えた染色液を用い
ることを％徴とする、細胞の染色方法。 （５）ＱＣ−６染色液に含まれる有機酸又は／及び有機
酸の塩類が脂肪酸又は／及び脂肪龍の塩類である、特許
請求の範囲第４項記載の染色方法。 （６）へマドキシリン染色液で細胞核全染色し、次いで
０Ｇ−６染色液を用いて角化上皮を染色し、更に、ＥＡ
染色液を用いてその他の部分を染め分ける細胞診染色法
に於て、０Ｇ−６染色液としてオレンジＧ（ＣＩ １６
２３０）及びタートラジン（ＣＩ １９１４０）の二種
の色素又はこれにリンタングステン酸を加えたものを用
いることを特徴とする、細胞の染色方法。 （７）へマドキシリン染色液で細胞核全染色し、次いで
０Ｇ−６染色液を胴込て角化上皮を染色し、更に、ＥＡ
染色液を用いてその他の部分を染め分ける細胞診染色法
に於て、ＥＡ染色液として円オシンＹ （ＣＩ ４５３
８０）、ライトグリーン５ＦＹ（ＣＩ ４２０９５）の
二種の色素に加えて、アノノドレッド（ＣＩ ４５１０
０）、ファーストグリーンＦＣＦＣＣＩ ４２０５３）
の二種の色素のいずれか一方又は両方を加えたもの又は
これにリンタングステン酸を加えたもの、に有機酸又は
／及び有機酸の塩類を加えたものを用いることを特徴と
する、細胞の染色方法。 、（８）ＥＡ染色液に含まれる有機酸又は／及び有機酸
の塩類が脂肪酸又は／及び脂肪酸の塩類である、特許請
求の範囲第７項記載の染色方法。 （９）へマドキシリン染色液で細胞核を染色し、次いで
０Ｇ−６染色液を用いて角化上皮を染色し、更に、ＦＡ
染色液を用いてその他の部分を染め分ける細胞診染色法
に於て、ＦＡ染色液としてエオンンＹ（ＣＩ ４５３８
０）、ライトグリーン５ＦＹ（ＣＩ ４２０９５）の二
種の色ＸＩ加えて、アノノドレッド（ＣＩ ４５１００
）、ファーストグリーンＦＣＦ（ＣＩ ４２０５３）の
二種の色素のいずれか一方又は両方を加えたもの又はこ
れにリンタングステン酸を加えたものを用いることを％
徴とすム細胞の染色方法。 （１０）ａｌ胞診染色を行なう際、まずヘマトキンリン
染色液で細胞核全染色し、次いで、オレンジＧ（ＣＩ
１６２３０）及びタートラジン（ＣＩ １９１４０）の
二種の色素又はこれにリンタングステンｌＷ’に加えた
もの、に有機酸又は／及び有機酸の塩類を加えた染色液
＝ｅＯＧ−６染色液として用いて角化上皮全染色し、更
に、ニオメンＹ（’ＣＩ ４５３８０）、ライトグリー
ンＳ ＦＹ （ＣＩ ４２０９５）の二種の色素に加え
て、アシッドレッド（ＣＩ ４５１００）、ファースト
グリーンＦＣＦ （ＣＩ ４２０５３）の二種の色素の
いずれか一方又は両方を加えたもの又はこれにリンタン
グステン酸を加えたもの、に有機酸又は／及び有機酸の
塩類を加えた染色液ヲＥＡ染色液として用いて、その他
の部分を染め分ける細胞の染色方法に用いる染色試液。 （１，１） Ｏａ −６染色液及びＥＡ染色液の夫々に
含まれる有機酸又は／及び有機酸の塩類が脂肪酸又は／
及び脂肪酸の塩類である、特許請求の範囲第１０項記載
の染色試液。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15593583A JPS6047960A (ja) | 1983-08-26 | 1983-08-26 | 細胞診に於ける細胞の染色方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15593583A JPS6047960A (ja) | 1983-08-26 | 1983-08-26 | 細胞診に於ける細胞の染色方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6047960A true JPS6047960A (ja) | 1985-03-15 |
| JPH0331388B2 JPH0331388B2 (ja) | 1991-05-02 |
Family
ID=15616725
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP15593583A Granted JPS6047960A (ja) | 1983-08-26 | 1983-08-26 | 細胞診に於ける細胞の染色方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6047960A (ja) |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6381267A (ja) * | 1986-09-25 | 1988-04-12 | Koji Nanba | 細胞の染色法 |
| JPH04118557A (ja) * | 1990-04-04 | 1992-04-20 | Kyoto Ikagaku Kenkyusho:Kk | 尿中の細胞保存方法 |
| KR20020006883A (ko) * | 2000-07-14 | 2002-01-26 | 이수빈 | 세포질 염색 조성물 |
| GB2372811A (en) * | 2001-02-14 | 2002-09-04 | Hector Cairns | Staining physiological samples |
| WO2007029437A1 (ja) * | 2005-09-06 | 2007-03-15 | Pola Chemical Industries Inc. | 角層細胞の染色液及びそれを用いた角層細胞の染色方法 |
| JP2007114076A (ja) * | 2005-10-21 | 2007-05-10 | Pola Chem Ind Inc | 角層細胞の画像の調整方法 |
| US7425427B2 (en) | 2001-10-29 | 2008-09-16 | Pola Chemical Industries Inc. | Method for staining corneocytes, method for preparing corneocytes specimen and skin analysis system |
| JP2011169655A (ja) * | 2010-02-16 | 2011-09-01 | Mikimoto Pharmaceut Co Ltd | 染色液および染色方法 |
-
1983
- 1983-08-26 JP JP15593583A patent/JPS6047960A/ja active Granted
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6381267A (ja) * | 1986-09-25 | 1988-04-12 | Koji Nanba | 細胞の染色法 |
| JPH04118557A (ja) * | 1990-04-04 | 1992-04-20 | Kyoto Ikagaku Kenkyusho:Kk | 尿中の細胞保存方法 |
| KR20020006883A (ko) * | 2000-07-14 | 2002-01-26 | 이수빈 | 세포질 염색 조성물 |
| GB2372811A (en) * | 2001-02-14 | 2002-09-04 | Hector Cairns | Staining physiological samples |
| GB2372811B (en) * | 2001-02-14 | 2005-01-26 | Hector Cairns | Stain |
| US7425427B2 (en) | 2001-10-29 | 2008-09-16 | Pola Chemical Industries Inc. | Method for staining corneocytes, method for preparing corneocytes specimen and skin analysis system |
| WO2007029437A1 (ja) * | 2005-09-06 | 2007-03-15 | Pola Chemical Industries Inc. | 角層細胞の染色液及びそれを用いた角層細胞の染色方法 |
| JPWO2007029437A1 (ja) * | 2005-09-06 | 2009-03-12 | ポーラ化成工業株式会社 | 角層細胞の染色液及びそれを用いた角層細胞の染色方法 |
| JP2007114076A (ja) * | 2005-10-21 | 2007-05-10 | Pola Chem Ind Inc | 角層細胞の画像の調整方法 |
| JP2011169655A (ja) * | 2010-02-16 | 2011-09-01 | Mikimoto Pharmaceut Co Ltd | 染色液および染色方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0331388B2 (ja) | 1991-05-02 |
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