JPWO2007029437A1 - 角層細胞の染色液及びそれを用いた角層細胞の染色方法 - Google Patents
角層細胞の染色液及びそれを用いた角層細胞の染色方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JPWO2007029437A1 JPWO2007029437A1 JP2007534288A JP2007534288A JPWO2007029437A1 JP WO2007029437 A1 JPWO2007029437 A1 JP WO2007029437A1 JP 2007534288 A JP2007534288 A JP 2007534288A JP 2007534288 A JP2007534288 A JP 2007534288A JP WO2007029437 A1 JPWO2007029437 A1 JP WO2007029437A1
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- stratum corneum
- staining
- cells
- acid
- staining solution
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 210000000434 stratum corneum Anatomy 0.000 title claims abstract description 116
- 238000010186 staining Methods 0.000 title claims abstract description 86
- 239000012192 staining solution Substances 0.000 title claims abstract description 67
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 29
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 60
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 33
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 14
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims abstract description 10
- 238000002386 leaching Methods 0.000 claims description 28
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 25
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Chemical compound OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- -1 Purple No. 401 Chemical compound 0.000 claims description 15
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 claims description 14
- SGHZXLIDFTYFHQ-UHFFFAOYSA-L Brilliant Blue Chemical compound [Na+].[Na+].C=1C=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C(=CC=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=CC=1N(CC)CC1=CC=CC(S([O-])(=O)=O)=C1 SGHZXLIDFTYFHQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 10
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N phenyl(114C)methanol Chemical compound O[14CH2]C1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N 0.000 claims description 9
- WRMNZCZEMHIOCP-UHFFFAOYSA-N 2-phenylethanol Chemical compound OCCC1=CC=CC=C1 WRMNZCZEMHIOCP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 claims description 8
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 claims description 8
- 238000007447 staining method Methods 0.000 claims description 8
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Malonic acid Chemical compound OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 claims description 6
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 4
- TUSDEZXZIZRFGC-UHFFFAOYSA-N 1-O-galloyl-3,6-(R)-HHDP-beta-D-glucose Natural products OC1C(O2)COC(=O)C3=CC(O)=C(O)C(O)=C3C3=C(O)C(O)=C(O)C=C3C(=O)OC1C(O)C2OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 TUSDEZXZIZRFGC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 claims description 4
- 239000001263 FEMA 3042 Substances 0.000 claims description 4
- LRBQNJMCXXYXIU-PPKXGCFTSA-N Penta-digallate-beta-D-glucose Natural products OC1=C(O)C(O)=CC(C(=O)OC=2C(=C(O)C=C(C=2)C(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)[C@@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)[C@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)O2)OC(=O)C=2C=C(OC(=O)C=3C=C(O)C(O)=C(O)C=3)C(O)=C(O)C=2)O)=C1 LRBQNJMCXXYXIU-PPKXGCFTSA-N 0.000 claims description 4
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 claims description 4
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 claims description 4
- 229940067107 phenylethyl alcohol Drugs 0.000 claims description 4
- LRBQNJMCXXYXIU-NRMVVENXSA-N tannic acid Chemical compound OC1=C(O)C(O)=CC(C(=O)OC=2C(=C(O)C=C(C=2)C(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)[C@@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)[C@@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)O2)OC(=O)C=2C=C(OC(=O)C=3C=C(O)C(O)=C(O)C=3)C(O)=C(O)C=2)O)=C1 LRBQNJMCXXYXIU-NRMVVENXSA-N 0.000 claims description 4
- 229940033123 tannic acid Drugs 0.000 claims description 4
- 235000015523 tannic acid Nutrition 0.000 claims description 4
- 229920002258 tannic acid Polymers 0.000 claims description 4
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 claims description 4
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 claims description 4
- VAJVDSVGBWFCLW-UHFFFAOYSA-N 3-Phenyl-1-propanol Chemical compound OCCCC1=CC=CC=C1 VAJVDSVGBWFCLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- DYUQAZSOFZSPHD-UHFFFAOYSA-N Phenylpropyl alcohol Natural products CCC(O)C1=CC=CC=C1 DYUQAZSOFZSPHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N Succinic acid Natural products OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- CQPFMGBJSMSXLP-UHFFFAOYSA-M acid orange 7 Chemical compound [Na+].OC1=CC=C2C=CC=CC2=C1N=NC1=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C1 CQPFMGBJSMSXLP-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N butanedioic acid Chemical compound O[14C](=O)CC[14C](O)=O KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N 0.000 claims description 3
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 claims description 3
- FPAYXBWMYIMERV-UHFFFAOYSA-L disodium;5-methyl-2-[[4-(4-methyl-2-sulfonatoanilino)-9,10-dioxoanthracen-1-yl]amino]benzenesulfonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S(=O)(=O)C1=CC(C)=CC=C1NC(C=1C(=O)C2=CC=CC=C2C(=O)C=11)=CC=C1NC1=CC=C(C)C=C1S([O-])(=O)=O FPAYXBWMYIMERV-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 239000001530 fumaric acid Substances 0.000 claims description 3
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 claims description 3
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 claims description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 3
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 claims description 3
- UJMBCXLDXJUMFB-UHFFFAOYSA-K trisodium;5-oxo-1-(4-sulfonatophenyl)-4-[(4-sulfonatophenyl)diazenyl]-4h-pyrazole-3-carboxylate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)C1=NN(C=2C=CC(=CC=2)S([O-])(=O)=O)C(=O)C1N=NC1=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C1 UJMBCXLDXJUMFB-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 3
- 229960004543 anhydrous citric acid Drugs 0.000 claims description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 125
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 38
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 36
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 32
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 26
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 24
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 7
- 229960004106 citric acid Drugs 0.000 description 7
- 235000015165 citric acid Nutrition 0.000 description 7
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 6
- 229960001506 brilliant green Drugs 0.000 description 6
- HXCILVUBKWANLN-UHFFFAOYSA-N brilliant green cation Chemical compound C1=CC(N(CC)CC)=CC=C1C(C=1C=CC=CC=1)=C1C=CC(=[N+](CC)CC)C=C1 HXCILVUBKWANLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 6
- 239000002390 adhesive tape Substances 0.000 description 5
- ZXJXZNDDNMQXFV-UHFFFAOYSA-M crystal violet Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC=C1[C+](C=1C=CC(=CC=1)N(C)C)C1=CC=C(N(C)C)C=C1 ZXJXZNDDNMQXFV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 229960001235 gentian violet Drugs 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 3
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 3
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 3
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N Melanin Chemical compound O=C1C(=O)C(C2=CNC3=C(C(C(=O)C4=C32)=O)C)=C2C4=CNC2=C1C XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000980 acid dye Substances 0.000 description 2
- 229940061720 alpha hydroxy acid Drugs 0.000 description 2
- 150000001280 alpha hydroxy acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 238000012850 discrimination method Methods 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 2
- SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N silver(1+) nitrate Chemical compound [Ag+].[O-]N(=O)=O SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920003002 synthetic resin Polymers 0.000 description 2
- 239000000057 synthetic resin Substances 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 3,7-bis(dimethylamino)phenothiazin-5-ium Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000007173 Abies balsamea Nutrition 0.000 description 1
- 239000004857 Balsam Substances 0.000 description 1
- 244000018716 Impatiens biflora Species 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 210000000736 corneocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000009223 counseling Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 1
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 229960000907 methylthioninium chloride Drugs 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940043267 rhodamine b Drugs 0.000 description 1
- 229910001961 silver nitrate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/52—Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Sampling And Sample Adjustment (AREA)
Abstract
本発明は、角層細胞を瞬時かつ明瞭に染色し、かつ染色のムラを防ぐ技術を提供することを課題とする。すなわち、良好な染色性を維持したまま、アルコールの揮散速度を減らすために、1)染料、2)炭素数1〜4のアルコール10〜50質量%、3)芳香族アルコール及び4)有機酸を含有する染色液を作製し、染色に用いる。本発明の染色液を用いることにより、角層細胞を簡易に、明瞭且つ均一に染色することができる。
Description
本発明は、角層細胞の染色液、角層細胞染色用具、角層細胞の染色方法及びそれを用いる皮膚状態の鑑別方法に関する。
従来より、生体材料の顕微鏡観察を容易に行うために、生体材料を染色することが行われている。例えば、皮膚角層細胞を染色する場合には、古くからヘマトキシリン・エオジンが用いられ、その他メチレンブルー、ローダミンB、ゲンチアナバイオレット、ブリリアントグリーンなどもよく用いられている。一方、これらの方法は、染色原理が未解明なものも多く、肉眼観察、顕微鏡観察及び観察した角層細胞の画像解析を行う上で重要なコントラストを得ることが難しい。また、観察可能な染色効果を得るために、数10分〜数日間要するという点も問題であった。更に、染色液による衣服や身体の汚染の問題や染色を行う器材や場所の確保の必要性もある。このような背景において、良好な染色効果を得ることができ、且つ簡易な染色技術の開発が望まれていた。
このような問題を解決するための技術として、特許文献1は塩基性硝酸銀溶液とゲンチアナバイオレットで染色することによって細胞のメラニン色素を染色する技術を開示している。また、特許文献2は媒染剤としてタンニン酸等を使用して皮膚角層細胞を染色し、皮膚角層細胞の面積や形態を精度良く判定する技術を、特許文献3は水と混和可能な有機溶剤を含有する染色剤溶液を使用して角質細胞を染色する方法を開示している。これらの技術は、従来の染色方法に比べて染色に要する時間を短縮したが、それでも十分な染色を行うためには30分以上の時間が必要であるという問題があった。また、必要な装置、設備も簡易なものとは言い難かった。即ち、どこででも瞬時に明瞭に角層細胞を染色するような方法は、未だ得られていないのが現状である。一方、液体成分を充填したリザーバーとこの液体成分を浸出させるための芯部とこれらを覆う蓋部とを備えた容器については、例えば筆記具用のものが知られている(例えば、特許文献4、特許文献5、特許文献6を参照)。
この様な状況下、本発明者らは染料を有機酸とともに炭素数1〜4のアルコールに溶解させた染色液を用いることにより、角層細胞を瞬時かつ明瞭に染色できることを知見した。さらに、本発明者らは、このような染色液を用いて簡易に染色を行うために、染色用具についても研究した結果、上記染色液を充填したリザーバー、リザーバーに充填した染色液を浸出させるべき芯部、及び芯部より揮発成分が揮散するのを防ぐべき蓋部とを備えた染色用具を完成させた。これらの発明については、本出願人が既に特許出願を行っている(特願2004−266335)。その後、本発明者らはこの染色方法を用いた場合には、時に部分的なムラが生じることを発見した。そして、このような問題を解決すべく詳細に検討を加えた結果、かかるムラはアルコールの揮散速度が染料の組織内浸透速度よりも速すぎるために起こるものであることを見出した。
そこで、本発明は角層細胞を瞬時かつ明瞭に染色し、かつ染色のムラを防いで均一に染色を行う技術を提供することを課題とする。具体的には、前記先願に係る染色液の染色特性は変えずに、アルコールの揮散速度を減らす手段を提供することを課題とする。具体的には、アルコール含有量を減じた染色液において、良好な染色特性を得るための手段を提供することを課題とする。
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究努力を重ねた結果、染料及び有機酸を、炭素数1〜4のアルコール10〜50質量%と芳香族アルコールに溶解させて得た染色液を角層細胞に接触させることにより、瞬時に、明瞭且つムラなく均一に角層細胞の染色ができることを見出した。さらに、これらの染色液を充填する容器、及び該容器に設けられ、前記染色液を浸出させる浸出部を備える角層細胞染色用具を用いれば、どこででも、簡易に角層細胞の染色を行うことができることを見出し、発明を完成させるに至った。即ち、本発明は以下に示すとおりである。
(1)1)染料、2)炭素数1〜4のアルコール10〜50質量%、3)芳香族アルコール及び4)有機酸を含有することを特徴とする、角層細胞用の染色液。
(2)前記染料が、青色1号、紫色401号、緑色201号、黄色4号、黄色5号、黄色407号、赤色102号、橙色205号、ブリリアントグリーン、ヘマトキシリンからなる群から選ばれる一種又は二種以上であることを特徴とする、(1)に記載の角層細胞の染色液。
(3)前記芳香族アルコールが、ベンジルアルコール、フェニルエチルアルコール及びフェニルプロピルアルコールからなる群から選ばれる一種又は二種以上であることを特徴とする、(1)又は(2)に記載の角層細胞の染色液。
(4)前記有機酸が、クエン酸、無水クエン酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、シュウ酸、グリコール酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、タンニン酸からなる群から選ばれる一種又は二種以上であることを特徴とする、(1)〜(3)の何れか一に記載の角層細胞の染色液。
(5)前記芳香族アルコールを3〜30質量%含有することを特徴とする、(1)〜(4)の何れか一に記載の角層細胞の染色液。
(6)前記有機酸を5〜40質量%含有することを特徴とする、(1)〜(5)の何れか一に記載の角層細胞の染色液。
(7)角層細胞の染色所要時間が1〜60秒であることを特徴とする、(1)〜(6)の何れか一に記載の角層細胞の染色液。
(8)角層細胞面積、有核細胞の存在の有無、トラベキュラーの有無、有核細胞の出現頻度、角層細胞の配列の規則性、角層細胞の形、角層細胞の剥離状況から選択される一種又は二種以上の測定及び/又は判別を行うための、(1)〜(7)の何れか一に記載の角層細胞の染色液。
(2)前記染料が、青色1号、紫色401号、緑色201号、黄色4号、黄色5号、黄色407号、赤色102号、橙色205号、ブリリアントグリーン、ヘマトキシリンからなる群から選ばれる一種又は二種以上であることを特徴とする、(1)に記載の角層細胞の染色液。
(3)前記芳香族アルコールが、ベンジルアルコール、フェニルエチルアルコール及びフェニルプロピルアルコールからなる群から選ばれる一種又は二種以上であることを特徴とする、(1)又は(2)に記載の角層細胞の染色液。
(4)前記有機酸が、クエン酸、無水クエン酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、シュウ酸、グリコール酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、タンニン酸からなる群から選ばれる一種又は二種以上であることを特徴とする、(1)〜(3)の何れか一に記載の角層細胞の染色液。
(5)前記芳香族アルコールを3〜30質量%含有することを特徴とする、(1)〜(4)の何れか一に記載の角層細胞の染色液。
(6)前記有機酸を5〜40質量%含有することを特徴とする、(1)〜(5)の何れか一に記載の角層細胞の染色液。
(7)角層細胞の染色所要時間が1〜60秒であることを特徴とする、(1)〜(6)の何れか一に記載の角層細胞の染色液。
(8)角層細胞面積、有核細胞の存在の有無、トラベキュラーの有無、有核細胞の出現頻度、角層細胞の配列の規則性、角層細胞の形、角層細胞の剥離状況から選択される一種又は二種以上の測定及び/又は判別を行うための、(1)〜(7)の何れか一に記載の角層細胞の染色液。
(9)(1)〜(8)の何れか一に記載の染色液を充填する容器、及び該容器に設けられ、前記染色液を浸出させる浸出部を備えることを特徴とする、角層細胞染色用具。
(10)さらに、前記浸出部を覆う蓋部を備えることを特徴とする、(8)に記載の角層細胞染色用具。
(10)さらに、前記浸出部を覆う蓋部を備えることを特徴とする、(8)に記載の角層細胞染色用具。
(11)角層細胞を、(1)〜(8)の何れか一に記載の染色液に接触させることを特徴とする、角層細胞の染色方法。
(12)染色所要時間が1〜60秒であることを特徴とする、(11)に記載の角層細胞の染色方法。
(13)角層細胞を、(9)又は(10)に記載の角層細胞染色用具の前記浸出部に接触させることを特徴とする、(11)又は(12)に記載の角層細胞の染色方法。
(14)(11)〜(13)の何れか一に記載の角層細胞の染色方法により染色した角層細胞の皮膚角層細胞面積、有核細胞の存在の有無、有核細胞の出現頻度、角層細胞の配列の規則性、角層細胞の形、角層細胞の剥離状況から選択される一種又は二種以上を測定及び/又は判別し、該測定及び/又は判別結果を用いて皮膚状態を鑑別することを特徴とする、皮膚状態の鑑別方法。
(15)化粧料の選択のためのものであることを特徴とする、(14)に記載の皮膚状態の鑑別方法。
(12)染色所要時間が1〜60秒であることを特徴とする、(11)に記載の角層細胞の染色方法。
(13)角層細胞を、(9)又は(10)に記載の角層細胞染色用具の前記浸出部に接触させることを特徴とする、(11)又は(12)に記載の角層細胞の染色方法。
(14)(11)〜(13)の何れか一に記載の角層細胞の染色方法により染色した角層細胞の皮膚角層細胞面積、有核細胞の存在の有無、有核細胞の出現頻度、角層細胞の配列の規則性、角層細胞の形、角層細胞の剥離状況から選択される一種又は二種以上を測定及び/又は判別し、該測定及び/又は判別結果を用いて皮膚状態を鑑別することを特徴とする、皮膚状態の鑑別方法。
(15)化粧料の選択のためのものであることを特徴とする、(14)に記載の皮膚状態の鑑別方法。
本発明の染色液は、1)染料、2)炭素数1〜4のアルコール10〜50質量%、3)芳香族アルコール及び4)有機酸を含有することを特徴とする。
染料は、観察対象などにより適宜選択することができるが、酸性染料を用いることが、酸により強く固着できるので好ましい。酸性染料としては、例えば、青色1号、紫色401号、緑色201号、黄色4号、黄色5号、黄色407号、赤色102号、橙色205号、ブリリアントグリーン、ヘマトキシリンが好ましく挙げられる。かかる染料は、ゲンチアナバイオレットなどの従来用いられていた角層細胞染色用の染色剤に比して、染色速度が著しく速い。本発明の染色液において、染料は唯一種含有させることもできるし、二種以上を組み合わせて含有させることもできる。特に好ましい形態は、少なくとも青色1号と、ブリリアントグリーン又はヘマトキシリンを含有する形態である。これは、青色1号と、ブリリアントグリーン又はヘマトキシリンとを併用することで、核も染色できるためである。本発明の染色液に於ける、染料の好ましい含有量は、染色液全量に対して、総量で0.01〜5質量%であり、より好ましくは0.05〜3質量%である。これは少なすぎると角層細胞を染色することができない場合が存し、多すぎると角層細胞の微細構造を観察できなくなる場合が存するからである。
炭素数1〜4のアルコールとしては、溶剤特性を有するものであれば特段の限定無く使用することができ、例えば、メタノール、エタノール、2−プロパノール、1−プロパノール及びブタノール等を好ましく例示できる。本発明の染色液に於いて、かかるアルコール類は、前記染料を溶解し、角層細胞へ速やに浸透し、角層細胞の組織を染色した後、速やかに揮散し染料を定着せしめる働きを有する。これらのうち、特に好ましいものは、エタノール及び2−プロパノールである。これは、毒性、臭気の問題がなく、且つ、揮散特性、染料を溶かす溶剤特性、水との相溶性、染色液の系を安定化する作用、及び角層細胞への浸透性に優れるためである。本発明の染色液において、炭素数1〜4のアルコールは唯一種を含有させることもできるし、二種以上を組み合わせて含有させることもできる。本発明の染色液に於ける、炭素数1〜4のアルコールの含有量は、染色液全量に対して、総量で10〜50質量%であり、好ましくは30〜40質量%である。これは前記アルコールが少なすぎると、角層細胞への染料の浸透及び定着が得られない場合が存し、前記アルコールが多すぎると、アルコールの揮散が組織内浸透よりも早すぎるために染色のムラが生じる場合が存するからである。
芳香族アルコールとしては、例えば、ベンジルアルコール、フェニルエチルアルコール及びフェニルプロピルアルコール等を好ましく例示できる。本発明の染色液に於いて、かかる芳香族アルコール類は、前記染料を溶解し、角層細胞へ速やに浸透し、角層細胞をムラなく均一に染色する作用を有する。これらのうち、特に好ましいものは、ベンジルアルコールである。これは、毒性、臭気の問題がなく、且つ、染料を溶かす溶剤特性も良好であり、角層細胞への浸透性及び炭素数1〜4のアルコールの揮発保留効果にも優れるためである。本発明の染色液における芳香族アルコールの好ましい含有量は、染色液全量に対して、総量で3〜30質量%であり、より好ましくは5〜15質量%である。これは芳香族アルコールが少なすぎると、角層細胞をムラなく均一に染色する効果を奏さない場合が存し、多すぎると処方系の安定性を阻害する場合が存するからである。
有機酸としては、通常染色剤或いは緩衝剤として使用されているものであれば、特段の限定無く適用することができ、例えば、クエン酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、シュウ酸、グリコール酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、タンニン酸等が好ましく例示できる。より好ましいものは、アルファヒドロキシ酸である、乳酸、グリコール酸、クエン酸、リンゴ酸及び酒石酸である。これは、アルファヒドロキシ酸は、PHコントロール剤としての染色液の系の安定性や染色剤の安定性に加え、角層柔軟化作用に優れていることから、染料の角層細胞への浸透性を増加させる作用を有し、また、染料の組織への固定を促進する作用も有するためである。本発明の染色液に於いて、有機酸は唯一種を含有することもできるし、二種以上を組み合わせて含有させることもできる。本発明の染色液に於ける、有機酸の好ましい含有量は、染色液全量に対して、総量で5〜40質量%であり、より好ましくは10〜30質量%である。これは多すぎると、結晶が析出したりして系が不安定になる場合が存し、少なすぎると前記の効果を奏さない場合が存するからである。
本発明の染色液において、水の量は、有機酸などを溶解させ、且つ結晶の析出が起こらない範囲とすることができる。通常は25〜50質量%、好ましくは30〜45質量%とするのがよい。
また、本発明の染色液の長期安定性を保つために、トリエタノールアミンなどのアルカリを添加して、pHを2.5〜4.5の弱酸領域に保つことも好ましい。
また、本発明の染色液の長期安定性を保つために、トリエタノールアミンなどのアルカリを添加して、pHを2.5〜4.5の弱酸領域に保つことも好ましい。
本発明の染色液は、通常の細胞の染色に用いられる方法で、角層細胞に接触させて用いることができる。本発明の染色液を用いて角層細胞を染色する場合の染色所要時間は1〜60秒、好ましくは10〜30秒程度である。「染色所要時間」とは、角層細胞を染色液に接触させてから、角層細胞の組織が、目的とする情報が得られる程度にまで染色されるのに必要な時間を指す。
本発明の染色液を用いて角層細胞の染色を行うことにより、角層細胞面積、有核細胞の出現頻度を測定したり、有核細胞の有無、トラベキュラーの有無、角層細胞の配列の規則性、角層細胞の形、角層細胞の剥離状況を判別したりすることができる。
本発明の染色液は、角層細胞への浸透性に優れ、染色所要時間が1〜60秒と短いことから、このような特性を生かした形態の角層細胞染色用具とすれば、簡易に染色を行うことが可能となる。
本発明の角層細胞染色用具は、本発明の染色液を充填する容器、及び該容器に設けられ、前記染色液を浸出させる浸出部を備えることを特徴とする。
本発明の角層細胞染色用具は、本発明の染色液を充填する容器、及び該容器に設けられ、前記染色液を浸出させる浸出部を備えることを特徴とする。
本発明の角層細胞染色用具を構成する容器は、本発明の染色液を収容できるものであればよく、特に制限されない。中でも、簡易に使用できる大きさ及び形状を有するものであることが好ましい。また容器の材質も特に制限されず、例えば、ポリエチレン、ポリプロピレンなどのプラスチック容器を用いることができる。
また、浸出部は容器に設けられ、かつ容器に充填された染色液を浸出させる作用を有する形態であればよい。すなわち、浸出部の少なくとも一部が染色液に接触し得るように、他の又は同一の一部は、角層細胞と接触させることが可能なように配置されていればよい。
本発明の角層細胞染色用具の形態としては、容器に充填した染色液を、浸出部の一端から、容器外部側に存在する他端に移動させるような形態が挙げられる。この場合、浸出部の形状は、例えば、管状体や多孔質体とすることができ、具体的には、合成樹脂で形成されたブラシや微細管、フェルトなどの繊維状の芯等を用いることができる。このような形態においては、毛細管現象(大気圧)又は重力を利用して、若しくは加圧することにより、容器に充填された染色液を、浸出部の一端から他端に移動させて、染色液を容器外部に浸出させることができる。
また、他の形態としては、容器に充填した染色液を浸出部の一部に付着させ、使用時に染色液が付着した部分を、外部に浸出させるような形態が挙げられる。この場合、浸出部の形状は、例えば、ボール状やローラー状とすることができ、具体的には、合成樹脂で形成されたボールなどを用いることができる。このような形態においては、浸出部の一部が容器内部に収納され、残りの部分が容器外部に露出するような構造とすればよい。そして、容器内の染色液を浸出部の一部に接触させ、染色液が付着した浸出部を回転させることにより、染色液を容器外部に浸出させることができる。
本発明の角層細胞染色用具の形態としては、容器に充填した染色液を、浸出部の一端から、容器外部側に存在する他端に移動させるような形態が挙げられる。この場合、浸出部の形状は、例えば、管状体や多孔質体とすることができ、具体的には、合成樹脂で形成されたブラシや微細管、フェルトなどの繊維状の芯等を用いることができる。このような形態においては、毛細管現象(大気圧)又は重力を利用して、若しくは加圧することにより、容器に充填された染色液を、浸出部の一端から他端に移動させて、染色液を容器外部に浸出させることができる。
また、他の形態としては、容器に充填した染色液を浸出部の一部に付着させ、使用時に染色液が付着した部分を、外部に浸出させるような形態が挙げられる。この場合、浸出部の形状は、例えば、ボール状やローラー状とすることができ、具体的には、合成樹脂で形成されたボールなどを用いることができる。このような形態においては、浸出部の一部が容器内部に収納され、残りの部分が容器外部に露出するような構造とすればよい。そして、容器内の染色液を浸出部の一部に接触させ、染色液が付着した浸出部を回転させることにより、染色液を容器外部に浸出させることができる。
また、本発明の角層細胞染色用具は、さらに、前記浸出部を覆う蓋部を備えていることが好ましい。このような形態とすることにより、染色液中の揮発成分の揮散を防ぐことができる。
本発明の染色液は、通常の細胞の染色に用いられる方法で角層細胞と接触させて使用することができる。例えば、染色液を適当な容器に充填し、角層細胞を粘着テープなどの粘着剤を用いて皮膚表面から剥離し、これを染色液に浸漬するなどの方法が挙げられる。本発明の染色液は、角層細胞との接触後、放置、洗浄、乾燥などの工程を経ずに即時に染色が完了し、観察が可能な状態となる。
また、本発明の角層細胞染色用具を用いて角層細胞の染色を行う場合には、角層細胞染色用具の浸出部に角層細胞を接触させて使用することができる。この場合は、直接皮膚に接触させて角層細胞を染色することもできるし、上記のように角層細胞を皮膚から剥離して染色することもできる。本発明の角層細胞染色用具を用いた染色方法は、従来使用されている染色液の入った容器に角層細胞を浸漬する染色方法に比較して、瞬時に染色を行える、染色場所を選ばない、染色する際に染色液を充填する容器を用意する必要がない、周辺汚染の心配がない、操作が容易である等の非常に多くの点で優れている。
また、本発明の角層細胞の染色方法は、角層細胞面積、有核細胞の存在の有無、トラベキュラーの有無、有核細胞の出現頻度、角層細胞の配列の規則性、角層細胞の形、角層細胞の剥離状況の測定又は判別のために用いるのに適している。
そして、本発明の染色液を用いた上記角層細胞の染色方法を用いて、角層細胞を染色し、角層細胞面積、有核細胞の存在の有無、トラベキュラーの有無、有核細胞の出現頻度、角層細胞の配列の規則性、角層細胞の形、角層細胞の剥離状況の測定又は判別を行い、この結果を用いて、皮膚状態を鑑別することができる。
以下に、実施例を挙げて、本発明について更に詳細に説明を加えるが、本発明が、これら実施例にのみ限定されないことは言うまでもない。
<実施例1>
以下に示す処方に従って、本発明の染色液を作製し、実施例1とした。即ち、室温にて、染料はエタノールとベンジルアルコールのアルコール溶液中に添加し、グリコール酸は水に溶解し、それぞれ撹拌溶解後、アルコール溶液と水溶液を混合して本発明の染色液を得た。
以下に示す処方に従って、本発明の染色液を作製し、実施例1とした。即ち、室温にて、染料はエタノールとベンジルアルコールのアルコール溶液中に添加し、グリコール酸は水に溶解し、それぞれ撹拌溶解後、アルコール溶液と水溶液を混合して本発明の染色液を得た。
(染色液の処方1)
青色1号 3.0質量%
エタノール 35.0質量%
ベンジルアルコール 10.0質量%
グリコール酸 19.0質量%
水 32.0質量%
トリエタノールアミン 1.0質量%
青色1号 3.0質量%
エタノール 35.0質量%
ベンジルアルコール 10.0質量%
グリコール酸 19.0質量%
水 32.0質量%
トリエタノールアミン 1.0質量%
<実施例2>
実施例1と同様に、以下に示す処方に従って、本発明の染色液を作製し、実施例2とした。即ち、室温にて、染料はエタノール、2−プロパノール及びベンジルアルコールのアルコール溶液中に添加し、クエン酸は水に添加し、それぞれ撹拌溶解後、アルコール溶液と水溶液とを混合して本発明の染色液を得た。
実施例1と同様に、以下に示す処方に従って、本発明の染色液を作製し、実施例2とした。即ち、室温にて、染料はエタノール、2−プロパノール及びベンジルアルコールのアルコール溶液中に添加し、クエン酸は水に添加し、それぞれ撹拌溶解後、アルコール溶液と水溶液とを混合して本発明の染色液を得た。
(染色液の処方2)
青色1号 1.0質量%
ブリリアントグリーン 1.0質量%
エタノール 10.0質量%
2−プロパノール 23.0質量%
ベンジルアルコール 8.0質量%
クエン酸 25.0質量%
水 32.0質量%
青色1号 1.0質量%
ブリリアントグリーン 1.0質量%
エタノール 10.0質量%
2−プロパノール 23.0質量%
ベンジルアルコール 8.0質量%
クエン酸 25.0質量%
水 32.0質量%
<実施例3>
実施例1と同様に、以下に示す処方に従って、本発明の染色液を作製し、実施例3とした。即ち、室温にて、染料はエタノール、2−プロパノール及びベンジルアルコールのアルコール溶液中に添加し、乳酸及びグリコール酸は水に添加し、それぞれ撹拌溶解後、アルコール溶液と水溶液とを混合し、本発明の染色液を得た。
実施例1と同様に、以下に示す処方に従って、本発明の染色液を作製し、実施例3とした。即ち、室温にて、染料はエタノール、2−プロパノール及びベンジルアルコールのアルコール溶液中に添加し、乳酸及びグリコール酸は水に添加し、それぞれ撹拌溶解後、アルコール溶液と水溶液とを混合し、本発明の染色液を得た。
(染色液の処方3)
青色1号 0.5質量%
緑201号 1.0質量%
ブリリアントグリーン 1.0質量%
エタノール 20.0質量%
2−プロパノール 10.0質量%
ベンジルアルコール 5.0質量%
乳酸 5.0質量%
グリコール酸 14.0質量%
水 42.5質量%
トリエタノールアミン 1.0質量%
青色1号 0.5質量%
緑201号 1.0質量%
ブリリアントグリーン 1.0質量%
エタノール 20.0質量%
2−プロパノール 10.0質量%
ベンジルアルコール 5.0質量%
乳酸 5.0質量%
グリコール酸 14.0質量%
水 42.5質量%
トリエタノールアミン 1.0質量%
<実施例4>
実施例1と同様に、以下に示す処方に従って、本発明の染色液を作製し、実施例4とした。即ち、室温にて、染料は2−プロパノール及びベンジルアルコールのアルコール溶液中に添加し、グリコール酸は水に添加し、それぞれ撹拌溶解後、アルコール溶液と水溶液とを混合して本発明の染色液を得た。
実施例1と同様に、以下に示す処方に従って、本発明の染色液を作製し、実施例4とした。即ち、室温にて、染料は2−プロパノール及びベンジルアルコールのアルコール溶液中に添加し、グリコール酸は水に添加し、それぞれ撹拌溶解後、アルコール溶液と水溶液とを混合して本発明の染色液を得た。
(染色液の処方4)
ブリリアントグリーン 3.0質量%
2−プロパノール 35.0質量%
ベンジルアルコール 10.0質量%
グリコール酸 20.0質量%
水 32.0質量%
ブリリアントグリーン 3.0質量%
2−プロパノール 35.0質量%
ベンジルアルコール 10.0質量%
グリコール酸 20.0質量%
水 32.0質量%
<実施例5>
実施例1と同様に、以下に示す処方に従って、本発明の染色液を作製し、実施例5とした。即ち、室温にて、染料はエタノール、2−プロパノール及びベンジルアルコールのアルコール溶液中に添加し、クエン酸は水に添加し、それぞれ撹拌溶解後、アルコール溶液と水溶液とを混合して本発明の染色液を得た。
実施例1と同様に、以下に示す処方に従って、本発明の染色液を作製し、実施例5とした。即ち、室温にて、染料はエタノール、2−プロパノール及びベンジルアルコールのアルコール溶液中に添加し、クエン酸は水に添加し、それぞれ撹拌溶解後、アルコール溶液と水溶液とを混合して本発明の染色液を得た。
(染色液の処方5)
青色1号 0.5質量%
ヘマトキシリン 1.5質量%
エタノール 23.0質量%
2−プロパノール 10.0質量%
ベンジルアルコール 8.0質量%
クエン酸 25.0質量%
水 32.0質量%
青色1号 0.5質量%
ヘマトキシリン 1.5質量%
エタノール 23.0質量%
2−プロパノール 10.0質量%
ベンジルアルコール 8.0質量%
クエン酸 25.0質量%
水 32.0質量%
<実施例6>
実施例1と同様に、以下に示す処方に従って、本発明の染色液を作製し、実施例6とした。即ち、室温にて、染料はエタノール、2−プロパノール及びベンジルアルコールのアルコール溶液中に添加し、乳酸及びグリコール酸は水に添加し、それぞれ撹拌溶解後、アルコール溶液と水溶液とを混合して本発明の染色液を得た。
実施例1と同様に、以下に示す処方に従って、本発明の染色液を作製し、実施例6とした。即ち、室温にて、染料はエタノール、2−プロパノール及びベンジルアルコールのアルコール溶液中に添加し、乳酸及びグリコール酸は水に添加し、それぞれ撹拌溶解後、アルコール溶液と水溶液とを混合して本発明の染色液を得た。
(染色液の処方6)
緑201号 1.0質量%
ヘマトキシリン 1.5質量%
エタノール 15.0質量%
2−プロパノール 15.0質量%
ベンジルアルコール 5.0質量%
フェニルエチルアルコール 1.0質量%
乳酸 3.0質量%
グリコール酸 15.0質量%
水 41.5質量%
トリエタノールアミン 2.0質量%
緑201号 1.0質量%
ヘマトキシリン 1.5質量%
エタノール 15.0質量%
2−プロパノール 15.0質量%
ベンジルアルコール 5.0質量%
フェニルエチルアルコール 1.0質量%
乳酸 3.0質量%
グリコール酸 15.0質量%
水 41.5質量%
トリエタノールアミン 2.0質量%
<実施例7>
本発明の角層細胞染色用具の一形態を図1に示す。図1には、染色液を充填した容器(符号1)、該染色液を浸出させる浸出部(符号2)、及び浸出部より揮発成分が揮散するのを防ぐ蓋部(符号3)が記載してある。本発明の角層細胞染色用具の浸出部を角層細胞が付着した粘着テープに、数秒程度押し当てることで、角層細胞を染色することができる。即ち、場所を取らず、容易に且つ瞬時に、染色できる構造であることが分かる。
本発明の角層細胞染色用具の一形態を図1に示す。図1には、染色液を充填した容器(符号1)、該染色液を浸出させる浸出部(符号2)、及び浸出部より揮発成分が揮散するのを防ぐ蓋部(符号3)が記載してある。本発明の角層細胞染色用具の浸出部を角層細胞が付着した粘着テープに、数秒程度押し当てることで、角層細胞を染色することができる。即ち、場所を取らず、容易に且つ瞬時に、染色できる構造であることが分かる。
<実施例8>
粘着テープを使用してテープストリップにより、洗顔後の女性被験者の頬部から角層細胞を採取した。角層細胞の付着した粘着テープに、実施例1の染色液を充填した実施例7の角層細胞染色用具の浸出部を直接1秒間程度押し当て、30秒程度放置した。続いて、水の入った紙コップの中で粘着テープを2〜3秒動かしてこれを水洗し、風乾後バルサムに封入することで角層細胞標本を作成した。
粘着テープを使用してテープストリップにより、洗顔後の女性被験者の頬部から角層細胞を採取した。角層細胞の付着した粘着テープに、実施例1の染色液を充填した実施例7の角層細胞染色用具の浸出部を直接1秒間程度押し当て、30秒程度放置した。続いて、水の入った紙コップの中で粘着テープを2〜3秒動かしてこれを水洗し、風乾後バルサムに封入することで角層細胞標本を作成した。
上記方法で得られた角層細胞標本の顕微鏡観察画像を図2に示す。図2より、一般的に行われているゲンチアナバイオレット染色による角層細胞標本と同様に、角層細胞の形、角層細胞の剥離状況、角層細胞面積、角層細胞の配列の規則性等の測定又は判別が可能であることが分かる。
<実施例9>
実施例8において、実施例2の染色液を用い、別の女性を対象に同様の検討を行った。結果を図3に示す。実施例8と同様に角層細胞評価が可能であることが分かる。
実施例8において、実施例2の染色液を用い、別の女性を対象に同様の検討を行った。結果を図3に示す。実施例8と同様に角層細胞評価が可能であることが分かる。
<比較例1>
実施例1と同様に、以下に示す処方に従って、染色液を作製し、比較例1とした。なお、下記処方は、特願2004−266335の明細書に開示されている処方である。続いて、実施例8において、比較例1の染色液を用い、同様に角層細胞標本を作製し顕微鏡観察を行った。画像を図4に示す。図4より、比較例1の染色液を用いた場合には、本発明に比べて染色に部分的なムラがあることが分かる。
実施例1と同様に、以下に示す処方に従って、染色液を作製し、比較例1とした。なお、下記処方は、特願2004−266335の明細書に開示されている処方である。続いて、実施例8において、比較例1の染色液を用い、同様に角層細胞標本を作製し顕微鏡観察を行った。画像を図4に示す。図4より、比較例1の染色液を用いた場合には、本発明に比べて染色に部分的なムラがあることが分かる。
(染色液の処方7)
青色1号 1.0質量%
エタノール 85.0質量%
クエン酸 0.5質量%
水 13.5質量%
青色1号 1.0質量%
エタノール 85.0質量%
クエン酸 0.5質量%
水 13.5質量%
<実施例10>
実施例8、比較例1に記載された方法、及び既存の方法であるゲンチアナバイオレット染色法の使用性、染色時間、染色の均一性を評価し、表1まとめた。表1から分かるように、本発明の染色方法は、既存の方法に比べて、非常に狭い場所で、周辺への汚染の心配もなく、瞬時に角層細胞を染色できる。また前発明に比べて細胞の染色におけるムラが全くないという大きな利点を有していることが分かる。
実施例8、比較例1に記載された方法、及び既存の方法であるゲンチアナバイオレット染色法の使用性、染色時間、染色の均一性を評価し、表1まとめた。表1から分かるように、本発明の染色方法は、既存の方法に比べて、非常に狭い場所で、周辺への汚染の心配もなく、瞬時に角層細胞を染色できる。また前発明に比べて細胞の染色におけるムラが全くないという大きな利点を有していることが分かる。
本発明の染色液を用いることによって、瞬時に、明瞭且つ均一に角層細胞を染色することができる。また、本発明の角層細胞染色用具を用いることによってどこででも容易に、染色を行うことができる。本発明によれば、簡易に皮膚角層細胞の状態を鑑別することが可能となり、顧客と直接接する場所、例えば、デパートや店頭、更には顧客の家においても、肌状態のカウンセリングや化粧品選択に有用な情報を提供できる。
Claims (15)
- 1)染料、2)炭素数1〜4のアルコール10〜50質量%、3)芳香族アルコール及び4)有機酸を含有することを特徴とする、角層細胞用の染色液。
- 前記染料が、青色1号、紫色401号、緑色201号、黄色4号、黄色5号、黄色407号、赤色102号、橙色205号、ブリリアントグリーン、ヘマトキシリンからなる群から選ばれる一種又は二種以上であることを特徴とする、請求項1に記載の角層細胞の染色液。
- 前記芳香族アルコールが、ベンジルアルコール、フェニルエチルアルコール及びフェニルプロピルアルコールからなる群から選ばれる一種又は二種以上であることを特徴とする、請求項1又は2に記載の角層細胞の染色液。
- 前記有機酸が、クエン酸、無水クエン酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、シュウ酸、グリコール酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、タンニン酸からなる群から選ばれる一種又は二種以上であることを特徴とする、請求項1〜3の何れか一項に記載の角層細胞の染色液。
- 前記芳香族アルコールを3〜30質量%含有することを特徴とする、請求項1〜4の何れか一項に記載の角層細胞の染色液。
- 前記有機酸を5〜40質量%含有することを特徴とする、請求項1〜5の何れか一項に記載の角層細胞の染色液。
- 角層細胞の染色所要時間が1〜60秒であることを特徴とする、請求項1〜6の何れか一項に記載の角層細胞の染色液。
- 角層細胞面積、有核細胞の存在の有無、トラベキュラーの有無、有核細胞の出現頻度、角層細胞の配列の規則性、角層細胞の形、角層細胞の剥離状況から選択される一種又は二種以上の測定及び/又は判別を行うための、請求項1〜7の何れか一項に記載の角層細胞の染色液。
- 請求項1〜8の何れか一項に記載の染色液を充填する容器、及び該容器に設けられ、前記染色液を浸出させる浸出部を備えることを特徴とする、角層細胞染色用具。
- さらに、前記浸出部を覆う蓋部を備えることを特徴とする、請求項8に記載の角層細胞染色用具。
- 角層細胞を、請求項1〜8の何れか一項に記載の染色液に接触させることを特徴とする、角層細胞の染色方法。
- 染色所要時間が1〜60秒であることを特徴とする、請求項11に記載の角層細胞の染色方法。
- 角層細胞を、請求項9又は10に記載の角層細胞染色用具の前記浸出部に接触させることを特徴とする、請求項11又は12に記載の角層細胞の染色方法。
- 請求項11〜13の何れか一項に記載の角層細胞の染色方法により染色した角層細胞の皮膚角層細胞面積、有核細胞の存在の有無、有核細胞の出現頻度、角層細胞の配列の規則性、角層細胞の形、角層細胞の剥離状況から選択される一種又は二種以上を測定及び/又は判別し、該測定及び/又は判別結果を用いて皮膚状態を鑑別することを特徴とする、皮膚状態の鑑別方法。
- 化粧料の選択のためのものであることを特徴とする、請求項14に記載の皮膚状態の鑑別方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2005257451 | 2005-09-06 | ||
JP2005257451 | 2005-09-06 | ||
PCT/JP2006/315571 WO2007029437A1 (ja) | 2005-09-06 | 2006-08-07 | 角層細胞の染色液及びそれを用いた角層細胞の染色方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2007029437A1 true JPWO2007029437A1 (ja) | 2009-03-12 |
Family
ID=37835562
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2007534288A Pending JPWO2007029437A1 (ja) | 2005-09-06 | 2006-08-07 | 角層細胞の染色液及びそれを用いた角層細胞の染色方法 |
Country Status (3)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPWO2007029437A1 (ja) |
TW (1) | TW200718933A (ja) |
WO (1) | WO2007029437A1 (ja) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP5162738B2 (ja) * | 2008-06-18 | 2013-03-13 | 学校法人東京医科大学 | 生細胞、生細胞内の構造物等の単離及び採取方法 |
JP5491228B2 (ja) * | 2010-02-16 | 2014-05-14 | 御木本製薬株式会社 | 染色液および染色方法 |
CN104471405B (zh) * | 2012-01-26 | 2017-03-29 | 莱卡生物系统里士满股份有限公司 | 用于苏木精‑伊红染色的方法和成分 |
CN115372109A (zh) * | 2022-10-24 | 2022-11-22 | 北京汉氏联合生物技术股份有限公司 | 一种循环肿瘤细胞染色试剂盒 |
Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS5095036A (ja) * | 1973-12-19 | 1975-07-29 | ||
JPS6047960A (ja) * | 1983-08-26 | 1985-03-15 | Wako Pure Chem Ind Ltd | 細胞診に於ける細胞の染色方法 |
JPH08101193A (ja) * | 1994-09-15 | 1996-04-16 | Kao Corp | 毛髪状態測定法 |
JP2003202336A (ja) * | 2001-10-29 | 2003-07-18 | Pola Chem Ind Inc | 角質細胞の染色方法及び角質細胞標本の作成方法 |
JP2003533210A (ja) * | 2000-05-18 | 2003-11-11 | メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフトング | フェノールを含有しない染色溶液 |
JP2005106795A (ja) * | 2003-10-01 | 2005-04-21 | L'oreal Sa | 評価又は診断キット |
JP2006053117A (ja) * | 2004-07-12 | 2006-02-23 | Pola Chem Ind Inc | 角層細胞の染色液及びそれを用いた角層細胞の染色方法 |
-
2006
- 2006-08-07 JP JP2007534288A patent/JPWO2007029437A1/ja active Pending
- 2006-08-07 WO PCT/JP2006/315571 patent/WO2007029437A1/ja active Application Filing
- 2006-09-05 TW TW095132645A patent/TW200718933A/zh unknown
Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS5095036A (ja) * | 1973-12-19 | 1975-07-29 | ||
JPS6047960A (ja) * | 1983-08-26 | 1985-03-15 | Wako Pure Chem Ind Ltd | 細胞診に於ける細胞の染色方法 |
JPH08101193A (ja) * | 1994-09-15 | 1996-04-16 | Kao Corp | 毛髪状態測定法 |
JP2003533210A (ja) * | 2000-05-18 | 2003-11-11 | メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフトング | フェノールを含有しない染色溶液 |
JP2003202336A (ja) * | 2001-10-29 | 2003-07-18 | Pola Chem Ind Inc | 角質細胞の染色方法及び角質細胞標本の作成方法 |
JP2005106795A (ja) * | 2003-10-01 | 2005-04-21 | L'oreal Sa | 評価又は診断キット |
JP2006053117A (ja) * | 2004-07-12 | 2006-02-23 | Pola Chem Ind Inc | 角層細胞の染色液及びそれを用いた角層細胞の染色方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2007029437A1 (ja) | 2007-03-15 |
TW200718933A (en) | 2007-05-16 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Yamashita et al. | Latent print development | |
Gridley | Manual of histologic and special staining technics | |
Chamberlain | Methods in plant histology | |
Slaoui et al. | Tissue sampling and processing for histopathology evaluation | |
US20230366792A1 (en) | Contact-type patch, staining method using the same, and manufacturing method thereof | |
Laidlaw et al. | Melanoma studies: II. A simple technique for the dopa reaction | |
Bell et al. | Staining for microvascular alkaline phosphatase in thick celloidin sections of nervous tissue: morphometric and pathological applications | |
DE60208443T2 (de) | Indikatoren für wasserstoffperoxid und peressigsäure und verfahren zu ihrer verwendung | |
JPWO2007029437A1 (ja) | 角層細胞の染色液及びそれを用いた角層細胞の染色方法 | |
CN108375599A (zh) | 一种微小型昆虫复眼的透射电镜样品制片方法 | |
MX2014002844A (es) | Sistema y kit para preparar una muestra citologica para examen. | |
Serafini et al. | Nanotechnologies and nanomaterials: An overview for cultural heritage | |
CN106802292B (zh) | 一种显现渗透性客体生物物证痕迹的方法 | |
WO2010023898A1 (ja) | 包埋カセット | |
Keynan et al. | Testing the waters: new technical applications for the cleaning of acrylic paint films and paper supports | |
JPS60500511A (ja) | 乱用薬物試験指示装置及びその製造方法 | |
JP2006053117A (ja) | 角層細胞の染色液及びそれを用いた角層細胞の染色方法 | |
CN106323723A (zh) | 双蓝染色法 | |
JP3618093B2 (ja) | 角質細胞の染色方法及び角質細胞標本の作成方法 | |
JP3212560B2 (ja) | 皮膚角質細胞の染色方法 | |
Meinke et al. | Migration and penetration of a fluorescent textile dye into the skin–in vivo versus in vitro methods | |
Anchana et al. | Cytomorphologic analysis of wet fixed and air dried oral buccal smears rehydrated with normal saline: A comparative study | |
AU2005100636A4 (en) | Device for the detection of chlorate and peroxide residues | |
JP2011169655A (ja) | 染色液および染色方法 | |
JP2003315331A (ja) | 角質細胞の鑑別方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20090709 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20090709 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20120110 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20120918 |