WO2010023898A1 - 包埋カセット - Google Patents

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WO2010023898A1
WO2010023898A1 PCT/JP2009/004128 JP2009004128W WO2010023898A1 WO 2010023898 A1 WO2010023898 A1 WO 2010023898A1 JP 2009004128 W JP2009004128 W JP 2009004128W WO 2010023898 A1 WO2010023898 A1 WO 2010023898A1
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WO
WIPO (PCT)
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embedding
film layer
thin film
cassette
resin
Prior art date
Application number
PCT/JP2009/004128
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
藤本幸司
川路利樹
Original Assignee
セイコーインスツル株式会社
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Filing date
Publication date
Application filed by セイコーインスツル株式会社 filed Critical セイコーインスツル株式会社
Priority to EP09809554A priority Critical patent/EP2330401A4/en
Priority to JP2010526543A priority patent/JPWO2010023898A1/ja
Priority to CN2009801349178A priority patent/CN102138065A/zh
Publication of WO2010023898A1 publication Critical patent/WO2010023898A1/ja
Priority to US13/035,591 priority patent/US20110150723A1/en

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    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/28Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
    • G01N1/36Embedding or analogous mounting of samples
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N35/00Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor
    • G01N35/00009Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor provided with a sample supporting tape, e.g. with absorbent zones
    • G01N2035/00019Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor provided with a sample supporting tape, e.g. with absorbent zones cassette structures

Definitions

  • the present invention is used as a container for receiving and replacing a sample taken from a human body, a laboratory animal, or the like, and an embedding used also as a fixing table for an embedding block in which the replaced sample is embedded.
  • cassettes This application claims priority based on Japanese Patent Application No. 2008-221179 filed in Japan on Aug. 29, 2008, the contents of which are incorporated herein by reference.
  • a microtome is generally known as an apparatus for producing a thin-section specimen used for physicochemical experiments and microscopic observation.
  • This thin slice specimen is obtained by fixing a thin slice having a thickness of several ⁇ m (for example, 3 ⁇ m to 5 ⁇ m) on a substrate such as a slide glass.
  • the thin slice is prepared by slicing an embedding block in which a biological sample is embedded with an embedding agent into the above-described thickness.
  • the embedding block is prepared by replacing a biological sample taken out of a human body, a laboratory animal, or the like and fixed in formalin with paraffin, and further solidifying the periphery with paraffin to produce a block.
  • an embedding cassette which is a dedicated container, is generally used for producing an embedding block.
  • the embedding cassette is formed of a chemical-resistant material, and is configured in a box shape with a cassette body and a lid portion that can be detachably fixed to the cassette body.
  • a biological sample such as an organ of a laboratory animal is fixed in formalin, then cut into an appropriate size and stored in an embedding cassette. That is, after being accommodated in the cassette body, the lid is attached to the cassette body and the biological sample is confined inside.
  • the embedding cassette is then immersed in a pallet filled with alcohol. Thereby, the biological sample accommodated in the embedding cassette is immersed in alcohol, and the water and lipid in the biological sample are replaced with alcohol, that is, dehydrated and degreased.
  • the alcohol in the pallet is replaced with xylene, and the alcohol previously replaced is replaced with xylene.
  • the xylene in the pallet is replaced with liquid paraffin, and the xylene previously replaced is replaced with paraffin.
  • a biological sample in which moisture or lipid is substituted with paraffin can be prepared.
  • the paraffin-substituted biological sample is taken out from the embedding cassette and transferred to another container filled with liquid paraffin. Then, the container is covered with the empty cassette body. In this state, the paraffin in the container is cooled and solidified. Thereby, an embedding block in which a biological sample is embedded in paraffin can be produced. At this time, the embedding block is attached to and connected to the bottom surface of the cassette body. Finally, the cassette body with the embedded block connected to the bottom is removed from the container and turned upside down. As a result, an embedding block fixed on the bottom surface of the cassette body can be obtained.
  • the embedding cassette is used as a container for subjecting a biological sample to dehydration, degreasing and replacement processing, and also as a fixing base for the embedding block.
  • the reason why the embedding cassette is used in two scenes is to prevent confusion between biological samples when processing a large number of biological samples at a time.
  • quality control of embedded blocks is important, and special attention is paid to mixed equivalence.
  • the embedding cassette described in Patent Document 1 has a problem that the resin is easily peeled off.
  • conventional embedding cassettes are made from polyoxymethylene, commonly known as polyacetal (POM), to meet the requirements of chemical resistance, dimensional stability, and mechanical strength stability. Has been.
  • POM polyoxymethylene
  • this POM has a characteristic that the affinity with the resin is extremely poor, and the applied resin is easily scratched, and the resin is often peeled off due to the scratch. Therefore, there is a possibility that it may lead to a fatal problem that quality control of the embedded block cannot be performed accurately.
  • the depth of cutting with the laser beam must be increased.
  • the resin is melted and dripped, and characters and the like are crushed and difficult to read. This leads to a new problem that it becomes difficult to distinguish the printed identification code.
  • the present invention has been made in view of such circumstances, and an object of the present invention is to provide an embedding cassette having an identification code that has a very low possibility of peeling off and is clear and easy to see.
  • the present invention provides the following means in order to solve the problems and achieve the object.
  • the embedding cassette according to the present invention is used as a container for performing paraffin substitution processing of a biological sample, and mounting an embedding block in which the biological sample subjected to paraffin substitution processing is embedded in an embedding agent.
  • An embedding cassette used also as a mounting table which is formed of a polyester-based resin and has a housing recess for housing the biological sample and a flat printing surface; for formic acid, formalin, ethanol and xylene
  • the embedding cassette according to the present invention is used as a container when a biological sample is paraffin-substituted, and is mounted when an embedded block is produced by embedding the paraffin-substituted biological sample with an embedding agent. Used as a stand.
  • the thin film layer formed on the printing surface of the embedding cassette has an identification code (manufacturing number and necessary information on the biological sample (type of experimental animal, type of organ, etc.)) by cutting by laser light irradiation. Is displayed. Therefore, the quality control of the embedded block can be performed by grasping this identification code.
  • the cassette body is made of polyester resin, it has excellent compatibility with resin in addition to chemical resistance, dimensional stability and mechanical strength. That is, it satisfies the requirements as an embedding cassette and has good compatibility with the resin. Therefore, unlike the conventional one, the thin film layer formed on the printing surface is firmly in close contact with the cassette body and is not easily peeled off.
  • the thin film layer is made of a resin having chemical resistance against formic acid, formalin, ethanol and xylene, which are chemicals usually used for producing the embedding block, these chemicals are used during the production of the embedding block. Even if it is immersed in the printing surface, it does not peel off from the printing surface. As a result, it is possible to prevent the thin film layer from being peeled off in the middle. Therefore, quality control of the embedding block can be performed accurately and a high quality embedding cassette can be obtained. Moreover, when paraffin adheres to the thin film layer during the fabrication of the embedding block, even if the paraffin is scraped off with a resin or wooden knife, the thin film layer may be peeled off together with it. Low. Therefore, even in such a case, the identification code can be accurately recognized.
  • the color of the thin film layer is at least a lightness different from the color of the cassette body. Therefore, the identification code can be displayed with a lightness different from that of the thin film layer which is also the background color. Therefore, the brightness of the identification code and the background color can be changed, and the identification code can be displayed using the brightness difference. Therefore, contrast can be given and clear visibility can be secured.
  • the thin film layer may be formed of any one of a urethane resin, an acrylic resin, and an epoxy resin.
  • the thin film layer since the thin film layer is made of any one of a urethane resin, an acrylic resin, and an epoxy resin, it has excellent affinity with a cassette body made of a polyester resin.
  • the film thickness of the thin film layer may be 1 ⁇ m to 500 ⁇ m.
  • the printed surface is not transparent. Therefore, the visibility of the identification code can be ensured.
  • the thickness of the thin film layer is 500 ⁇ m or less, it can be cut by irradiation with a laser beam for a short time, and an identification code can be displayed. Therefore, since the thin film layer is not melted by the laser beam, the character code is not crushed and the identification code with a clear outline can be obtained. Also in this respect, the visibility of the identification code can be ensured.
  • the film thickness of the thin film layer may be 5 ⁇ m to 20 ⁇ m.
  • the thickness of the printing surface is further 5 ⁇ m to 20 ⁇ m, the above-described effects can be further enhanced, there is almost no character collapse, and the visibility can be further improved.
  • the printing surface may be subjected to corona discharge surface treatment before the formation of the thin film layer.
  • the surface of the printing surface is subjected to corona discharge surface treatment, the surface is modified and wettability is improved. Therefore, the thin film layer can be more firmly adhered, and the difficulty of peeling can be further increased.
  • the cassette body is made of polybutylene terephthalate (PBT); the thin film layer may be made of a urethane-based resin.
  • the cassette body and the thin film layer are composed of a combination having a very excellent affinity, that is, a combination of polybutylene terephthalate (PBT) and urethane resin. For this reason, the thin film layer can be more firmly adhered to the printing surface, and is more difficult to peel off.
  • the color of the thin film layer may be lighter than the color of the cassette body.
  • the color of the thin film layer is lighter than the color of the cassette body, that is, a dark color close to black. Therefore, the identification code can be displayed in a darker background color than the background color. Therefore, the brightness difference between the background color and the identification code can be clarified, and the visibility can be further improved. Further, since the color of the thin film layer can be made darker than the color of the cassette body, even if white paraffin is attached on the identification code, the identification code becomes a lighter light color and is easily contrasted. Therefore, it is difficult to affect visibility.
  • the possibility that the thin film layer is peeled off is very low, and a clear and easy-to-see identification code can be displayed. Therefore, the quality control of the embedded block can be performed accurately.
  • FIG. 5 is a cross-sectional view of the cassette body shown in FIG. 4 along AA.
  • FIG. 7 is a BB cross-sectional view of the lid portion shown in FIG. 6.
  • FIG. 3 is a process diagram when an embedding block is produced using the embedding cassette shown in FIG. 2, and after storing a biological sample in the embedding cassette, the embedding cassette is placed in a pallet filled with a medicine. It is in a state of being accommodated in.
  • FIG. 10 is a view showing a state in which a paraffin-substituted biological sample is taken out from the cassette body after the state shown in FIG. 9 and is transferred to an embedding dish filled with liquid paraffin. It is a figure which shows the state which mounted the cassette main body which became empty after the state shown in FIG.
  • An embedding cassette according to the present invention in which a thin film layer is formed of urethane resin on a printing surface of a cassette body made of polyester resin, and a urethane resin on a printing surface of a cassette body made of polyacetal (POM) which has been conventionally used. It is the result regarding the storage elastic modulus at the time of actually carrying out a comparative experiment with the embedding cassette which formed the thin film layer in (3).
  • the embedding block B shown in FIG. 1 in which the biological sample S is embedded with paraffin P, which is an embedding agent, is very thin with a thickness of 3 to 5 ⁇ m.
  • a method is known in which a thin section is prepared by thinly cutting the thin section and using a thin section specimen in which the thin section is fixed on a substrate such as a slide glass.
  • the embedding cassette 1 is used as a container for performing paraffin substitution processing of the biological sample S and also as a mounting table on which the embedding block B is placed in producing the embedding block B. It is what is done.
  • the biological sample S is, for example, a tissue such as an organ extracted from a laboratory animal such as a sputum. Moreover, after dehydration and degreasing treatment, those subjected to paraffin substitution treatment are used.
  • the embedding cassette 1 of the present embodiment includes a cassette body 10 having a housing recess 11 for housing a biological sample S, and a lid that is detachably fixed to the cassette body 10.
  • the main part is composed of the unit 20.
  • the embedding cassette 1 is formed of polybutylene terephthalate (PBT) which is a polyester resin.
  • the cassette body 10 is formed in a rectangular shape when viewed from above, and the upper surface portion is an opening of the housing recess 11.
  • a plurality of through holes 12 are formed in an array on the bottom surface 10 a, and the inside and the outside of the housing recess 11 communicate with each other through the through holes 12.
  • a printing surface 13 having a flat surface is formed on one end side of the cassette body 10 according to the present embodiment with a predetermined angle ⁇ with respect to the bottom surface 10a of the cassette body 10.
  • This printing surface 13 is a surface on which a thin film layer 16 described later is formed. Note that the printing surface 13 of the present embodiment is subjected to a corona discharge surface treatment before the thin film layer 16 is formed.
  • an insertion hole 14 into which an engagement piece 22 of the lid 20 described later is inserted is formed in a portion adjacent to the printing surface 13 in the side wall portion 10b surrounding the housing recess 11. Further, on the side of the side wall 10b facing the insertion hole 14 with the accommodating recess 11 in between, a projection 15 is formed that engages an engagement claw 23 of the lid 20 described later.
  • a thin film layer 16 formed by applying a urethane resin dissolved in an ester solvent is provided over the entire surface.
  • the film thickness of the thin film layer 16 is adjusted so as to be within a range of 1 ⁇ m or more and 500 ⁇ m or less.
  • the thin film layer 16 has a color that is at least lighter than the color of the cassette body 10.
  • the color of the thin film layer 16 is lighter than the color of the cassette body 10.
  • the thin film layer 16 is black whose lightness (V) specified by the Munsell color system (JIS-Z8102) is 1.5
  • the embedding cassette 1 is the Munsell color system ( The lightness (V) specified by JIS-Z8102 is white of 9.5.
  • An identification code C is displayed on the thin film layer 16 by cutting with laser light L emitted from a laser marker device or the like (not shown).
  • This identification code C is composed of character data D1 for displaying various information such as test number, group number, animal number, male and female, block number, etc., and a data matrix D2 in which these various types of information are two-dimensionally displayed as barcodes. Has been.
  • the lid portion 20 is a plate-like member formed in a rectangular shape when viewed from above, and is formed to a size that completely covers the side wall portion 10 b of the housing recess 11 of the cassette body 10. ing. Further, a step portion 20 a surrounded by a rectangular shape is formed on the lower surface of the lid portion 20. The step portion 20 a is formed in a size that enters the receiving recess 11 while abutting against the side wall portion 10 b of the cassette body 10. Thereby, when the cover part 20 is piled up on the cassette body 10, the step part 20a enters the housing recess 11, so that the cover part 20 is not displaced in the horizontal direction.
  • a plurality of through holes 21 are formed in an array like the cassette body 10.
  • an engagement piece 22 to be inserted into the insertion hole 14 of the cassette body 10 and an engagement claw 23 to be engaged with the protruding portion 15 of the cassette body 10 are formed.
  • the engagement piece 22 is formed so as to protrude from one end side at an angle substantially the same as the angle ⁇ formed between the bottom surface 10a of the cassette body 10 and the print surface 13, and after being inserted into the insertion hole 14, the print surface
  • the lid portion 20 is positioned in surface contact with the back surface side of 13.
  • the engaging claw 23 is formed so as to protrude in a direction substantially orthogonal to the lower surface of the lid portion 20, and its tip is hooked to be engaged with the protruding portion 15 to be engaged.
  • the lid 20 is overlapped at a predetermined position with respect to the cassette body 10 by the stepped portion 20a and the engaging piece 22, and the engaging claw 23 is engaged with the protruding portion 15, thereby the cassette body 10 It comes to be attached to.
  • the operator prepares the formalin-fixed biological sample S and prepares the embedding cassette 1 shown in FIGS. 2 and 3 for housing the biological sample S.
  • the process of preparing the embedding cassette 1 will be described.
  • the printing surface 13 is subjected to corona discharge surface treatment. Thereby, the surface of the printing surface 13 is modified and wettability is improved.
  • a urethane resin dissolved in an ester solvent is applied to the printing surface 13 by silk printing, and a thin film layer 16 is formed on the printing surface 13.
  • the film thickness is adjusted so that the thickness of the thin film layer 16 falls within the range of 1 ⁇ m to 500 ⁇ m.
  • the thin film layer 16 is cut by irradiation with laser light L, and an identification code C composed of character data D1 and data matrix D2 is obtained. indicate.
  • the embedding cassette 1 shown in FIG.2 and FIG.3 can be prepared.
  • the biological sample S corresponding to the displayed identification code C is cut into an appropriate size and then accommodated in the accommodating recess 11 of the cassette body 10.
  • the lid 20 is attached to the cassette body 10 and the biological sample S is confined inside. That is, the lid 20 is gradually overlapped with the cassette body 10 in a state where the engaging piece 22 of the lid 20 is inserted into the insertion hole 14 of the cassette body 10. Then, the stepped portion 20a of the lid portion 20 gradually starts to enter the accommodating recess 11 of the cassette body 10 from the engagement piece 22 side. Thereby, since the cover part 20 is positioned, the cover part 20 can be correctly superimposed on the cassette body 10. Finally, the engaging claw 23 of the lid 20 is fitted into the projection 15 of the cassette body 10 so that the lid 20 can be securely attached to the cassette body 10 and the opening of the housing recess 11 can be opened. Can be occluded.
  • the biological sample S is subjected to paraffin substitution.
  • the embedding cassette 1 is immersed in a pallet 30 filled with alcohol w1 as a medicine W.
  • the alcohol w ⁇ b> 1 flows into the housing recess 11. Therefore, the biological sample S is subjected to substitution of water or lipid in the interior with the alcohol w1, that is, dehydration and degreasing.
  • the medicine W in the pallet 30 is replaced with xylene w2.
  • the alcohol w1 substituted previously is replaced with xylene w2.
  • the medicine W in the pallet 30 is replaced with liquid paraffin P, and the xylene w2 replaced earlier is replaced with paraffin P.
  • the biological sample S in which moisture or lipid has been subjected to paraffin substitution treatment can be produced.
  • the lid 20 is removed from the cassette body 10 as shown in FIG.
  • An embedding dish 31 having a step portion 31a filled with liquid paraffin P is prepared. And while taking out the biological sample S from the accommodation recessed part 11 of the cassette main body 10, the taken-out biological sample S is accommodated in the embedding dish 31, and is immersed in the paraffin P.
  • FIG. At the same time, as shown in FIG. 11, the empty cassette body 10 is placed on the step 31 a of the embedding dish 31 and the embedding dish 31 is covered. At this time, the amount of paraffin P is adjusted so that the paraffin P also enters the accommodating recess 11 of the cassette body 10. In this state, the embedding dish 31 is cooled to cool and solidify the paraffin P.
  • the embedding block B in which the biological sample S is embedded can be produced.
  • the embedding block B is in a state of being attached to and connected to the bottom surface 10 a of the cassette body 10.
  • the cassette main body 10 with the embedding block B connected to the bottom surface 10a is removed from the embedding dish 31 and turned upside down.
  • the embedding block B solidified on the bottom surface 10a of the cassette body 10 can be obtained.
  • the embedding cassette 1 is used as a container for performing paraffin substitution processing of the biological sample S and is used as a mounting table for the embedding block B.
  • the embedding cassette 1 is used in two scenes, even if many biological samples S are processed at once, the biological samples S can be prevented from being confused.
  • the identification code C is displayed on the thin film layer 16 formed on the printing surface 13 on the cassette body 10, quality control can be performed accurately.
  • the cassette body 10 is formed of PBT, which is one of polyester resins, it has chemical resistance resistant to formic acid, formalin, ethanol, xylene, and the like, as well as stable dimensional stability and mechanical strength. Excellent compatibility with resin. That is, the embedding cassette 1 satisfies the requirements and has good compatibility with the resin. Therefore, unlike the conventional one, the thin film layer 16 formed on the printing surface 13 is firmly in close contact with the cassette body 10 and is not easily peeled off. Moreover, since the thin film layer 16 is made of a urethane-based resin that dissolves in an ester solvent that does not dissolve the cassette body 10, there is no possibility of dissolving the cassette body 10.
  • the thin film layer 16 As a result, it is possible to prevent the thin film layer 16 from peeling off in the middle. Therefore, quality control of the embedding block B can be performed accurately, and a high-quality embedding cassette 1 can be obtained.
  • the paraffin P adheres to the thin film layer 16 during the production of the embedding block B, even if the paraffin P is scraped off with a resin or a wooden knife, the thin film layer 16 is also brought together. The possibility of peeling off is low. Therefore, even in such a case, the identification code C can be accurately recognized.
  • the cassette body 10 and the thin film layer 16 are composed of a combination having a very excellent affinity, that is, a combination of PBT and urethane resin. Therefore, the thin film layer 16 is particularly difficult to peel off.
  • the color of the thin film layer 16 is a color whose brightness is different from that of the cassette body 10 at least. Therefore, the identification code C can be displayed with a lightness different from that of the thin film layer 16 which is also the background color. Therefore, the brightness of the identification code C and the background color can be changed, and the identification code C can be displayed using the brightness difference. Therefore, contrast can be given and clear visibility can be secured.
  • the cassette body 10 is white and the thin film layer 16 is black, the brightness difference between the background color and the identification code C becomes clearer and the visibility is very good.
  • the thickness of the thin film layer 16 is 1 ⁇ m or more, the printing surface 13 is not transparent. Therefore, also in this respect, the visibility of the identification code C can be ensured. Further, since the thickness of the thin film layer 16 is 500 ⁇ m or less, the thin film layer 16 can be cut by irradiation with the laser light L for a short time, and the identification code C can be displayed. Therefore, since the thin film layer 16 is not melted by the laser beam L, it is possible to eliminate the character collapse or the like and to obtain the identification code C in which the outline is clearly displayed. Also in this respect, the visibility of the identification code C can be ensured.
  • the printing surface 13 is an inclined surface.
  • the printing surface 13 is not limited to this case, and may be not an inclined surface as long as it is formed on the surface of the cassette body 10. I do not care.
  • it is preferably a slope.
  • the thin film layer 16 was formed by silk-printing the urethane type resin melt
  • the urethane resin is dissolved in the ester solvent, it may be dissolved in another solvent such as a xylene solvent, a glycol ether solvent, an aromatic hydrocarbon solvent or the like. Even if these solvents are used, the cassette body 10 is not dissolved in the same manner.
  • the thin film layer 16 was formed using urethane type resin, it is not limited to urethane type resin, Formic acid which is a chemical
  • the thin film layer 16 may be formed using an acrylic resin or an epoxy resin. Even in this case, even if immersed in these chemicals during the production of the embedding block B, the thin film layer 16 does not peel off from the printing surface 13, so that the same effect can be obtained.
  • PBT polytrimethylene terephthalate
  • PEN polyethylene naphthalate
  • PBN polybutylene naphthalate
  • the thickness of the thin film layer 16 is in the range of 1 ⁇ m to 500 ⁇ m. However, in consideration of the power of the laser light L and the irradiation time, it is more preferably in the range of 5 ⁇ m to 20 ⁇ m. Further, by adjusting the film thickness within this range, it is possible to more effectively exhibit the prevention of see-through of the printing surface 13 and the dripping of the thin film layer 16 due to the irradiation of the laser beam L. It can lead to improvement. Furthermore, when the thin film layer 16 is formed using an epoxy resin, the adhesiveness is excellent, so it is sufficient to adjust the thickness within the range of 1 ⁇ m to 10 ⁇ m.
  • the thin film layer 16 after giving the corona discharge surface treatment to the printing surface 13, the thin film layer 16 was formed,
  • Corona discharge surface treatment is not essential, The thin film layer 16 is formed without performing this process. It doesn't matter. However, since it is possible to bond more firmly, it is preferable to perform a corona discharge surface treatment. In addition, when not performing corona discharge surface treatment, it is preferable to form the thin film layer 16 using the epoxy resin excellent in adhesiveness.
  • the thin film layer 16 is black and the embedding cassette 1 is white.
  • the present invention is not limited to this color combination. Any color may be selected as long as it has at least different brightness.
  • the thin film layer 16 may be dark green or black, and the embedding cassette 1 may be light green, light orange, light yellow, or light purple. Other color combinations may be used. However, it is preferable that the color of the thin film layer 16 is lighter than the color of the cassette body 10.
  • an embedding cassette 1 according to the present invention in which a thin film layer is formed of urethane resin on a printing surface of a cassette body made of polyester resin, and a printing surface of a cassette body made of polyacetal (POM) that is conventionally used
  • POM polyacetal
  • each embedding cassette tested is briefly described.
  • PBT which is one of polyester resins
  • PBT having a trade name: VALOX 310 (manufactured by SABIC Polymer Land Japan Co., Ltd.), an average molecular weight of 32500, and a filler of 0% was used.
  • the urethane resin is trade name: SG 740 (N) 710 Black (manufactured by Seiko Advance Co., Ltd.), and the components are vinyl urethane resin (22-35%), cyclohexane (17-27%), isophorone (15 To 25%), ester solvents (5 to 11%), and carbon black (less than 5%) were used.
  • a urethane resin film was formed by the following procedure.
  • the corona discharge surface treatment was performed on the printing surface before forming the urethane resin film.
  • the voltage was set to 0.57 kW
  • the distance between the electrode and the workpiece 2 mm
  • the discharge time about 10 seconds.
  • the solvent for dissolving the urethane resin was prepared by mixing the base material and the curing agent at a weight ratio of 10: 1, and then adding and diluting with isophorone.
  • a thin film layer was formed by silk printing on the printed surface on which the corona discharge surface treatment was performed.
  • the film thickness of the thin film layer was 10 ⁇ m, which is in the range of 1 ⁇ m to 500 ⁇ m. And after forming into a film, after confirming visually that there was no chipping, a bleeding, and a wrinkle, it dried for 40 minutes in the 80 degreeC temperature atmosphere in a dryer.
  • medical agent was performed as follows. First, it was immersed in 20% formalin for 3 days. Subsequently, it was immersed in 10% formic acid-formalin for 15 days. Subsequently, it was immersed in 80% ethanol for 2 days. Subsequently, it was immersed in 100% ethanol for 1 day. Finally, it was immersed in xylene for 10 hours.
  • the embedding cassette 1 according to the present invention had a smaller change in weight before and after the treatment immersed in the chemical.
  • the storage elastic modulus (E ′), which is one of viscoelasticity is substantially the same, but as shown in FIG. 15, the loss elastic modulus (E ′), which is one of viscoelasticity.
  • the embedding cassette 1 according to the present invention was smaller. That is, when a dynamic force was applied to the embedding cassette, it was confirmed that the embedding cassette 1 of the present invention has a smaller amount of displacement than the conventional embedding cassette and is superior.
  • the present invention in which the embedding cassette is made of PBT can obtain higher evaluation even when viewed as a single cassette than the conventional case of making it by POM. Furthermore, assuming the operation of scraping off the paraffin P adhering to the surface of the embedding cassette with a plastic knife, the chemicals such as formalin, formic acid-holimarin, ethanol, xylene set to a higher concentration than actually used are used. After exposure for a longer period of time than actually used, the corners of the acrylic resin were applied to the thin film layer and rubbed to confirm how the thin film layer was changed.
  • the time for exposure to each chemical was as follows. First, it was immersed in 20% formalin for 3 days. Subsequently, it was immersed in 80% ethanol for 3 days. Subsequently, it was immersed in 10% formic acid-formalin for 14 days. Subsequently, it was immersed in 100% ethanol for 12 hours. Finally, it was immersed in xylene for 3 days.
  • an epoxy resin dissolved in a solvent was silk-printed on the printing surface as it was to form a thin film layer.
  • the thickness of the thin film layer was 10 ⁇ m. Then, after film formation, it was visually confirmed that there was no chipping, bleeding or wrinkling, followed by baking and drying in a dryer at a temperature of 150 ° C. for 30 minutes.
  • the embedding cassette produced in this way was tested by the same method as in the first example.
  • the thin film layer was formed with an epoxy resin on the cassette body made of PBT, the thin film layer was not peeled off. Therefore, it has been proved that the adhesion strength between the cassette body made of PBT and the thin film layer made of epoxy resin is still very high as in the case of using urethane resin.

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Abstract

 この包埋カセットは、生体試料のパラフィン置換処理を行うための容器として使用されると共に、パラフィン置換処理された生体試料が包埋剤に包埋された包埋ブロックの載置台としても使用される包埋カセットであって、ポリエステル系の樹脂により形成され、前記生体試料を収容する収容凹部と、平坦な印字面とを有するカセット本体と;蟻酸、ホルマリン、エタノール及びキシレンに対して耐薬品性を有する樹脂で、且つ、前記カセット本体の色に対して少なくとも明度が異なる色の樹脂により前記印字面に成膜された薄膜層と;レーザ光の照射による切削によって前記薄膜層に表示された識別コードと;を備えている。

Description

包埋カセット
 本発明は、人体や実験動物等から取り出した試料を収容して置換処理する容器として使用されると共に、置換処理された試料が包埋された包埋ブロックの固定台としても使用される包埋カセットに関する。
 本出願は、2008年8月29日に、日本に出願された特願2008-221179号に基づき優先権を主張し、その内容をここに援用する。
 従来から、理化学実験や顕微鏡観察に用いられる薄切片標本を作製する装置として、ミクロトームが一般的に知られている。この薄切片標本は、厚さが数μm(例えば、3μm~5μm)の薄切片をスライドガラス等の基板上に固定させたものである。薄切片は、包埋剤によって生体試料を包埋した包埋ブロックを上述した厚さで極薄に薄切して作製されたものである。包埋ブロックは、人体や実験動物等から取り出されてホルマリン固定された生体試料をパラフィン置換した後、さらに周囲をパラフィンで固めてブロック状に作製されたものである。
 ところで、包埋ブロックの作製には、一般的に専用の容器である包埋カセットが使用されている。この包埋カセットは、耐薬品性を有する材料により形成されており、カセット本体とこのカセット本体に着脱自在に固定可能な蓋部とで箱状に構成されている。
 ここで、包埋カセットを利用した包埋ブロックの作製方法について、簡単に説明する。
 まず、実験動物の臓器等の生体試料をホルマリン固定した後、適当なサイズに切断して包埋カセット内に収容する。つまり、カセット本体内に収容した後、蓋部をカセット本体に装着して生体試料を内部に閉じ込める。次いで、アルコールが満たされたパレット内に包埋カセットを浸漬する。これにより、包埋カセット内に収容されている生体試料は、アルコールに浸漬され、生体試料内の水分や脂質がアルコールで置換、即ち、脱水、脱脂処理される。次いで、パレット内のアルコールをキシレンに入れ換えて、先ほど置換したアルコールをキシレンに置換する。次いで、パレット内のキシレンを液状のパラフィンに入れ換えて、先ほど置換したキシレンをパラフィンに置換する。これにより、水分や脂質がパラフィン置換された生体試料を作製することができる。
 次いで、パラフィン置換された生体試料を包埋カセットから取り出し、液状のパラフィンが満たされた別の容器内に移す。そして、空になったカセット本体でこの容器に蓋をする。この状態で、容器内のパラフィンを冷却固化させる。これにより、パラフィン内に生体試料が包埋された包埋ブロックを作製することができる。この際、包埋ブロックは、カセット本体の底面に付着して繋がった状態となっている。そして最後に、底面に包埋ブロックが繋がったカセット本体を容器から取り外して裏返しにする。その結果、カセット本体の底面上に固定された包埋ブロックを得ることができる。
 上述したように、包埋ブロックを作製するにあたり、包埋カセットを、生体試料に脱水、脱脂処理及び置換処理を施す際の容器として使用すると共に、包埋ブロックの固定台としても使用している。このように、包埋カセットを2つの場面で使用するのは、多数の生体試料を一度に処理する際に、生体試料同士の混同を防止するためである。特に、正確な実験や観察を行うためには、包埋ブロックの品質管理が重要であり、混同等に関しては特に注意が払われている。
 このような品質管理を正確に行うために、包埋ブロック内に包埋されている生体試料の種類等を認識するための識別コードを包埋カセットに記録する必要がある。この方法としては各種の方法があるが、簡単な方法として、包埋カセットにCOレーザ等のレーザ光で印字する方法がある。しかしながらこの方法は、包埋カセットに単に文字等が刻印されるだけであるので、発色せず読み難いものであった。
 そこで、包埋カセットの印字面に、包埋カセットの色に対してコントラストの付く色素を加えた樹脂(例えば、アクリルマレイン樹脂)を薄く塗布した後、この樹脂をレーザ光で削って印字する方法が考えられている(特許文献1参照)。
 この方法によれば、識別コードが発色した形になるので、明瞭に認識することができ、包埋ブロックの品質管理を確実に行うことができる。
米国特許第6518542号明細書
 しかしながら、特許文献1に記載されている包埋カセットは、樹脂が剥がれ易いという問題があった。詳細に説明すると、従来の包埋カセットは、耐薬品性、寸法安定性、機械的強度の安定性といった要件を満足するために、ポリオキシメチレン(polyoxymethylene)、通称ポリアセタール(POM;polyacetal)から作製されている。
 しかしながら、このPOMは、樹脂との親和性が極めて悪いという特徴があり、塗布した樹脂が傷付き易く、その傷をきっかけに樹脂が剥がれてしまうことが多々あった。そのため、包埋ブロックの品質管理を正確に行うことができないという致命的な問題に繋がる可能性があった。
 仮に、包埋カセットとの密着強度をあげるために樹脂の厚みを厚くしてしまうと、レーザ光で削る深さを深くしなければならない。ところがこの場合には、レーザ光を長く照射することになるので、樹脂が溶けてだれてしまい、文字等が潰れて読み難くなってしまう。そのため、印字した識別コードを判別し難くなるという新たな問題を招いてしまうものであった。
 本発明は、このような事情に考慮してなされたもので、その目的は、剥がれ落ちる可能性が非常に低いうえ、鮮明で見易い識別コードを有する包埋カセットを提供することである。
  本発明は、前記課題を解決して係る目的を達成するために以下の手段を提供する。
(1)本発明に係る包埋カセットは、生体試料のパラフィン置換処理を行うための容器として使用されると共に、パラフィン置換処理された生体試料が包埋剤に包埋された包埋ブロックの載置台としても使用される包埋カセットであって、ポリエステル系の樹脂により形成され、前記生体試料を収容する収容凹部と平坦な印字面とを有するカセット本体と;蟻酸、ホルマリン、エタノール及びキシレンに対して耐薬品性を有する樹脂で、且つ、前記カセット本体の色に対して少なくとも明度が異なる色の樹脂により前記印字面に成膜された薄膜層と;レーザ光の照射による切削によって前記薄膜層に表示された識別コードと;を備える。
 この発明に係る包埋カセットは、生体試料をパラフィン置換処理する際の容器として使用されると共に、パラフィン置換処理された生体試料を包埋剤で包埋して包埋ブロックを作製する際の載置台として使用される。この際、包埋カセットの印字面に成膜された薄膜層には、レーザ光の照射による切削によって識別コード(製造番号や生体試料に関する必要な情報(実験動物の種類、臓器の種類等))が表示されている。そのため、この識別コードを把握することで、包埋ブロックの品質管理を行うことができる。
 特に、カセット本体は、ポリエステル系の樹脂により形成されているので、耐薬品性、寸法安定性、機械的強度の安定性に加え、樹脂との親和性に非常に優れている。つまり、包埋カセットとしての要件を満足するうえ、樹脂との相性が良い。従って、従来のものとは異なり、印字面に成膜された薄膜層は強固にカセット本体に密着した状態となっており、容易に剥がれることがない。
 しかも、薄膜層は、包埋ブロックを作製する際に通常用いられる薬品である蟻酸、ホルマリン、エタノール及びキシレンに対して耐薬品性を有する樹脂からなるので、包埋ブロックの作製中にこれらの薬品に浸漬されたとしても印字面から剥がれ落ちることがない。
 その結果、薄膜層が途中で剥がれ落ちてしまうことを防止することができる。よって、包埋ブロックの品質管理を正確に行うことができると共に、高品質な包埋カセットとすることができる。しかも、包埋ブロックを作製中にパラフィンが薄膜層上に付着した場合に、樹脂製や木製のナイフ等でパラフィンを削り落としたとしても、これにつられて薄膜層も一緒に剥がれ落ちる可能性が低い。従って、このような場合であっても、識別コードを正確に認識することができる。
 加えて、薄膜層の色は、カセット本体の色に対して少なくとも明度が異なる色となっている。そのため、識別コードを背景色でもある薄膜層とは異なる明度で表示することができる。よって、識別コードと背景色との明るさを変えることができ、明度差を利用して識別コードを表示することができる。従って、コントラストをつけることができ、明瞭な視認性を確保することができる。
(2)前記薄膜層は、ウレタン系樹脂、アクリル系樹脂又はエポキシ系樹脂のいずれかの樹脂で形成されても良い。
 この場合、薄膜層が、ウレタン系樹脂、アクリル系樹脂又はエポキシ系樹脂のいずれかの樹脂からなるので、ポリエステル系の樹脂からなるカセット本体との親和性に優れている。
(3)前記薄膜層の膜厚が、1μm~500μmであっても良い。
 この場合、薄膜層の厚みが1μm以上あるので、印字面が透けることはない。よって、識別コードの視認性を確実なものにすることができる。また、薄膜層の厚みが500μm以下であるので、短時間のレーザ光の照射で切削でき、識別コードを表示することが可能である。そのため、薄膜層がレーザ光で溶けてだれてしまうことがないので、文字潰れ等が少なく、輪郭がはっきり表示された識別コードとすることができる。この点においても、識別コードの視認性を確実なものにすることができる。
(4)前記薄膜層の膜厚が、さらに5μm~20μmであっても良い。
 この場合、印字面の厚みがさらに5μm~20μmであるので、上記作用効果をさらに高めることができ、文字潰れが殆ど無く、視認性をより向上することができる。
(5)前記印字面は、前記薄膜層の成膜前にコロナ放電表面処理されていても良い。
 この場合、印字面の表面がコロナ放電表面処理されているので、表面が改質されて濡れ性が向上した状態となっている。そのため、薄膜層をより強固に密着させることができ、剥がれ難さをさらに高めることができる。
(6)前記カセット本体は、ポリブチレンテレフタレート(PBT)で形成され;前記薄膜層は、ウレタン系樹脂から形成されていても良い。
 この場合、カセット本体と薄膜層とが、親和性に非常に優れた組み合わせ、即ち、ポリブチレンテレフタレート(PBT)とウレタン系樹脂との組み合わせから構成されている。そのため、薄膜層を印字面にさらに強固に密着させることができ、より剥がれ難くなる。
(7)前記薄膜層の色は、前記カセット本体の色よりも低い明度であっても良い。
 この場合、薄膜層の色がカセット本体の色よりも低い明度、即ち、黒に近い暗色となっている。そのため、暗色とされた背景色の中に、この背景色よりも明るい色で識別コードを表示することができる。よって、背景色と識別コードとの明度差を明確にすることができ、視認性をより向上することができる。
 また、薄膜層の色をカセット本体の色よりも暗色にできるので、識別コード上に仮に白色のパラフィンが付着してしまったとしても、識別コードがより明るい淡色となりコントラストがつき易い。よって、視認性に影響を与え難い。
 本発明に係る包埋カセットによれば、薄膜層が剥がれ落ちてしまう可能性が非常に低いうえ、鮮明で見易い識別コードの表示を可能とすることができる。従って、包埋ブロックの品質管理を正確に行うことができる。
本発明に係る包埋カセットを利用して作製する包埋ブロックの斜視図である。 本発明に係る包埋カセットの一実施形態を示す上面図である。 図2に示す包埋カセットの断面図である。 図2に示す包埋カセットを構成するカセット本体の上面図である。 図4に示すカセット本体のA-A断面図である。 図2に示す包埋カセットを構成する蓋部の下面図である。 図6に示す蓋部のB-B断面図である。 包埋カセットの薄膜層にレーザ光を照射して削り、識別コードを刻印している状態を示す図である。 図2に示す包埋カセットを利用して包埋ブロックを作製する際の一工程図であって、包埋カセット内に生体試料を収容した後、この包埋カセットを薬剤が満たされたパレット内に収容した状態である。 図9に示す状態の後、パラフィン置換処理された生体試料をカセット本体から取り出して、液状のパラフィンが満たされた包埋皿の中に移し変えている状態を示す図である。 図10に示す状態の後、空になったカセット本体を包埋皿の段部上に載置した状態を示す図である。 図11に示す状態の後、パラフィンを固化させて包埋ブロックを作製し、その後、カセット本体を包埋皿から取り出した状態を示す図である。 ポリエステル系の樹脂からなるカセット本体の印字面にウレタン系樹脂で薄膜層を形成した本発明に係る包埋カセットと、従来用いられているポリアセタール(POM)からなるカセット本体の印字面にウレタン系樹脂で薄膜層を形成した包埋カセットと、を実際に比較実験した際の質量に関する結果である。 ポリエステル系の樹脂からなるカセット本体の印字面にウレタン系樹脂で薄膜層を形成した本発明に係る包埋カセットと、従来用いられているポリアセタール(POM)からなるカセット本体の印字面にウレタン系樹脂で薄膜層を形成した包埋カセットと、を実際に比較実験した際の貯蔵弾性率に関する結果である。 ポリエステル系の樹脂からなるカセット本体の印字面にウレタン系樹脂で薄膜層を形成した本発明に係る包埋カセットと、従来用いられているポリアセタール(POM)からなるカセット本体の印字面にウレタン系樹脂で薄膜層を形成した包埋カセットと、を実際に比較実験した際の損失弾性率に関する結果である。
 以下、本発明に係る包埋カセットの一実施形態を図1から図15を参照して説明する。
 初めに、生体試料Sを検査、観察する方法の1つとして、包埋剤であるパラフィンPによって生体試料Sを包埋した図1に示す包埋ブロックBを、厚さ3μmから5μmの極薄に薄切して薄切片を作製し、該薄切片をスライドガラス等の基板上に固定した薄切片標本を利用する方法が知られている。
 本発明に係る包埋カセット1は、この包埋ブロックBを作製するにあたり、生体試料Sのパラフィン置換処理を行うための容器として使用されると共に、包埋ブロックBを載置する載置台として使用されるものである。以下、包埋カセット1の詳細と、この包埋カセット1を使用した包埋ブロックBの作製手順とについて説明する。
 なお、生体試料Sとしては、例えば、鼠等の実験動物から取り出した臓器等の組織である。また、脱水及び脱脂処理した後、パラフィン置換処理されたものが使用される。
 本実施形態の包埋カセット1は、図2及び図3に示すように、生体試料Sを収容する収容凹部11を有するカセット本体10と、該カセット本体10に対して着脱自在に固定される蓋部20と、で主に構成されている。
 包埋カセット1は、ポリエステル系の樹脂であるポリブチレンテレフタレート(PBT:Polybutylene terephtalate)により形成されている。
 カセット本体10は、図4及び図5に示すように、上面視矩形状に形成されており、上面部分が収容凹部11の開口となっている。底面10aには、複数の貫通孔12がアレイ状に形成されており、該貫通孔12を介して収容凹部11の内部と外部とが連通するようになっている。また、本実施形態のカセット本体10の一端側には、表面が平坦な印字面13がカセット本体10の底面10aに対して所定の角度θが付いた状態で形成されている。この印字面13は、後述する薄膜層16が成膜される面である。
 なお、本実施形態の印字面13は、薄膜層16が成膜される前の段階でコロナ放電表面処理が施されている。
 また、収容凹部11を囲む側壁部10bのうち、印字面13に隣接する部分には後述する蓋部20の係合片22が挿入される挿入孔14が形成されている。また、側壁部10bのうち、収容凹部11を間に挟んで挿入孔14に対向する側には、後述する蓋部20の係合爪23が係合する突起部15が形成されている。
 印字面13上には、エステル系溶剤で溶かしたウレタン系樹脂の塗布により成膜された薄膜層16が全面に亘って設けられている。この際、薄膜層16は、膜厚が1μm以上、500μm以下の範囲内に収まるように膜厚調整されている。
 薄膜層16は、カセット本体10の色に対して少なくとも明度が異なる色とされている。本実施形態では、薄膜層16の色の方が、カセット本体10の色よりも低い明度になっている。具体的には、薄膜層16が、マンセル表色系(JIS-Z8102)で規定される明度(V)が1.5の色である黒であり、包埋カセット1が、マンセル表色系(JIS-Z8102)で規定される明度(V)が9.5の白色となっている。
 そして、薄膜層16には、図示しないレーザマーカ装置等から照射されたレーザ光Lによる切削によって識別コードCが表示されている。
 この識別コードCは、試験番号、群番号、動物番号、雌雄、ブロック番号等の各種情報を表示する文字データD1と、これらの各種情報を2次元的にバーコード表示したデータマトリックスD2とから構成されている。
 上記蓋部20は、図6及び図7に示すように、上面視矩形状に形成された板状の部材であり、カセット本体10の収容凹部11の側壁部10bを完全に覆うサイズに形成されている。また、蓋部20の下面には、矩形状に囲まれた段部20aが形成されている。この段部20aは、カセット本体10の側壁部10bに当接しながら収容凹部11内に入り込むサイズに形成されたものである。これにより、蓋部20をカセット本体10に重ねたときに、段部20aが収容凹部11内に入り込むので、蓋部20が水平方向に位置ずれしないようになっている。
 また、この段部20aに囲まれた領域内には、カセット本体10と同様に複数の貫通孔21がアレイ状に形成されている。これにより、蓋部20をカセット本体10に重ねたときに、蓋部20側の貫通孔21を介して収容凹部11の内部と外部とが連通するようになっている。
 蓋部20の下面には、上述したカセット本体10の挿入孔14内に挿入される係合片22と、カセット本体10の突起部15に係合する係合爪23とが形成されている。係合片22は、カセット本体10の底面10aと印字面13とのなす角度θと略同じ角度で一端側から突出するように形成されており、挿入孔14内に挿入された後、印字面13の裏面側に面接触して蓋部20を位置決めするようになっている。また、係合爪23は、蓋部20の下面に対して略直交する方向に突出するように形成され、先端が鉤状になって突起部15に引っ掛かって係合するようになっている。
 このように蓋部20は、段部20a及び係合片22によってカセット本体10に対して所定の位置に重ね合わされると共に、係合爪23を突起部15に係合することによって、カセット本体10に対して装着されるようになっている。
 次に、上述した包埋カセット1を利用して包埋ブロックBを作製する場合について、説明する。まず作業者は、ホルマリン固定された生体試料Sを準備すると共に、該生体試料Sを収容するための図2及び図3に示す包埋カセット1を準備する。
 ここで、包埋カセット1を準備する工程について説明する。まず、薄膜層16が成膜されていないカセット本体10を用意した後、印字面13にコロナ放電表面処理を施す。これにより、印字面13の表面が改質され、濡れ性が向上する。そして、エステル系溶剤で溶かしたウレタン樹脂を印字面13にシルク印刷で塗布し、印字面13に薄膜層16を成膜する。この際、薄膜層16の厚みが、1μm~500μmの範囲内に収まるように膜厚調整する。そして、所定の温度雰囲気の中で一定時間乾燥させた後、図8に示すように、レーザ光Lの照射により薄膜層16を切削して、文字データD1及びデータマトリックスD2からなる識別コードCを表示する。これにより、図2及び図3に示す包埋カセット1を準備することができる。
 次いで、表示した識別コードCに該当する生体試料Sを適当な大きさに切断した後、カセット本体10の収容凹部11内に収容する。収容した後、蓋部20をカセット本体10に装着して生体試料Sを内部に閉じ込める。つまり、蓋部20の係合片22をカセット本体10の挿入孔14に入れた状態で、蓋部20をカセット本体10に徐々に重ね合わせる。すると、係合片22側から徐々に蓋部20の段部20aがカセット本体10の収容凹部11内に入り込み始める。これにより、蓋部20が位置決めされるので、カセット本体10に対して蓋部20を正確に重ね合わせることができる。そして、最後に蓋部20の係合爪23をカセット本体10の突起部15に嵌め込むことで、蓋部20をカセット本体10に対して確実に装着することができ、収容凹部11の開口を閉塞することができる。
 生体試料Sを閉じ込めた後、生体試料Sのパラフィン置換処理を行う。まず、図9に示すように、薬剤Wとしてアルコールw1が満たされたパレット30内に、包埋カセット1を浸漬する。この際、収容凹部11の内部は、カセット本体10及び蓋部20にそれぞれ形成されている貫通孔12、21を介して外部に連通しているので、アルコールw1が収容凹部11内に流入する。そのため、生体試料Sは、内部の水分や脂質がアルコールw1で置換、即ち、脱水処理、脱脂処理される。
 次いで、パレット30内の薬剤Wをキシレンw2に入れ替える。これにより、先ほど置換したアルコールw1を、キシレンw2に置換する。そして、最後にパレット30内の薬剤Wを液状のパラフィンPに入れ換えて、先ほど置換したキシレンw2を、パラフィンPに置換する。これにより、水分や脂質がパラフィン置換処理された生体試料Sを作製することができる。
 このパラフィン置換処理作業が終了した後、図10に示すように、カセット本体10から蓋部20を取り外しておく。また、液状のパラフィンPが満たされた段部31aを有する包埋皿31を用意しておく。そして、カセット本体10の収容凹部11内から生体試料Sを取り出すと共に、取り出した生体試料Sを包埋皿31内に収容してパラフィンPに浸漬させる。また、これと同時に図11に示すように、空になったカセット本体10を包埋皿31の段部31aに載置して包埋皿31に蓋をする。この際、カセット本体10の収容凹部11内にもパラフィンPが入り込むように、パラフィンPの量が調整されている。この状態で、包埋皿31を冷却してパラフィンPを冷却固化させる。
 これにより、生体試料Sが包埋された包埋ブロックBを作製することができる。この際、包埋ブロックBは、カセット本体10の底面10aに付着して繋がった状態となっている。そして、最後に図12に示すように、底面10aに包埋ブロックBが繋がったカセット本体10を包埋皿31から取り外して裏返しにする。その結果、カセット本体10の底面10a上に固体された包埋ブロックBを得ることができる。
 上述したように、包埋ブロックBを作製するにあたり、包埋カセット1を、生体試料Sのパラフィン置換処理を行うための容器として使用すると共に、包埋ブロックBの載置台として使用している。このように包埋カセット1を2つの場面で使用しているので、多数の生体試料Sを一度に処理したとしても、生体試料S同士の混同を防止することができる。しかも、図2に示すように、カセット本体10には、印字面13に成膜された薄膜層16に識別コードCが表示されているので、品質管理を正確に行うことができる。
 特に、カセット本体10は、ポリエステル系の樹脂の1つであるPBTにより形成されているので、蟻酸、ホルマリン、エタノールやキシレン等に耐性がある耐薬品性や、寸法安定性及び機械的強度の安定性に優れているうえ、樹脂との親和性に優れている。つまり、包埋カセット1として要件を満足するうえ、樹脂との相性が良い。従って、従来のものとは異なり、印字面13に成膜された薄膜層16は強固にカセット本体10に密着した状態となっており、容易に剥がれることがない。しかも、薄膜層16は、カセット本体10を溶解させることのないエステル溶剤に溶けるウレタン系樹脂からなるので、カセット本体10を溶解させる恐れもない。
 その結果、薄膜層16が途中で剥がれ落ちてしまうことを防止することができる。よって、包埋ブロックBの品質管理を正確に行うことができると共に、高品質な包埋カセット1とすることができる。しかも、包埋ブロックBを作製中にパラフィンPが薄膜層16上に付着した場合に、樹脂製や木製のナイフ等でパラフィンPを削り落としたとしても、これにつられて薄膜層16も一緒に剥がれ落ちる可能性が低い。従って、このような場合であっても、識別コードCを正確に認識することができる。
 しかも、本実施形態では、薄膜層16の成膜前に印字面13の表面がコロナ放電表面処理されているので、表面が改質されて濡れ性が向上した状態となっている。そのため、薄膜層16をより強固に密着させることができ、剥がれ難さを高めることができる。さらにこれに加え、カセット本体10と薄膜層16とが、親和性に非常に優れた組み合わせ、即ち、PBTとウレタン系樹脂との組み合わせから構成されている。そのため、薄膜層16が特に剥がれ難い。
 また、薄膜層16の色は、カセット本体10の色に対して少なくとも明度が異なる色となっている。そのため、識別コードCを背景色でもある薄膜層16とは異なる明度で表示することができる。よって、識別コードCと背景色との明るさを変えることができ、明度差を利用して識別コードCを表示することができる。従って、コントラストをつけることができ、明瞭な視認性を確保することができる。特に、本実施形態では、カセット本体10が白色、薄膜層16が黒色であるので、背景色と識別コードCとの明度差がより明確になり、視認性が非常に優れている。
 更に、本実施形態では、薄膜層16の厚みが1μm以上あるので、印字面13が透けることがない。よって、この点においても、識別コードCの視認性を確実なものにすることができる。また、薄膜層16の厚みが500μm以下であるので、短時間のレーザ光Lの照射で切削でき、識別コードCを表示することが可能である。そのため、薄膜層16がレーザ光Lで溶けてだれてしまうことがないので、文字潰れ等をなくし、輪郭がはっきり表示された識別コードCとすることができる。この点においても、識別コードCの視認性を確実なものにすることができる。
 なお、本発明の技術範囲は上記実施の形態に限定されるものではなく、本発明の趣旨を逸脱しない範囲において種々の変更を加えることが可能である。
 例えば、上記実施形態では、印字面13が斜面となっていたが、この場合に限られず、カセット本体10の表面上に形成されていれば斜面でなくても構わないし、どの位置であっても構わない。但し、包埋カセット1を平面上に載置した際の見易さの点を考慮すると、斜面であることが好ましい。
 また、上記実施形態では、エステル溶剤で溶かしたウレタン系樹脂をシルク印刷することで薄膜層16を形成したが、シルク印刷に限定されるものではなく、その他の方法(例えばパッド印刷)で塗布して、薄膜層16を形成しても構わない。この場合でも、同様の作用効果を奏することができる。
 但し、シルク印刷することで、厚みがより均一な薄膜層16を形成できるので、文字データD1は当然のこと、微細な印字品質が要求されるデータマトリックスD2に関しても高精度に仕上げることができるので、好ましい。
 また、ウレタン系樹脂をエステル溶剤で溶かしたが、その他の溶剤、例えば、キシレン溶剤、グリコールエーテル溶剤、芳香族炭化水素溶剤等で溶かしても構わない。これらの溶剤を用いたとしても、同様にカセット本体10を溶かすことがない。
 また、上記実施形態では、ウレタン系樹脂を利用して薄膜層16を形成したが、ウレタン系樹脂に限定されるものではなく、包埋ブロックBを作製する際に通常用いられる薬品である蟻酸、ホルマリン、エタノール及びキシレンに対して耐薬品性を有する樹脂で形成されていれば良い。例えば、アクリル系樹脂やエポキシ系樹脂を利用して薄膜層16を形成しても構わない。この場合であっても、包埋ブロックBの作製中にこれらの薬品に浸漬されたとしても、印字面13から薄膜層16が剥がれ落ちることがないので、同様の作用効果を奏することができる。
 なお、エポキシ系樹脂を利用して薄膜層16を形成する場合には、溶剤として、例えば、キシレン溶剤、エチルベンゼン溶剤、グリコールエーテル溶剤や芳香族炭化水素溶剤等を用いれば良い。
 また、上記実施形態では、包埋カセット1の材料としてPBTを用いた場合を例に挙げて説明したが、ポリエステル系の樹脂であればこれ以外のものを用いても構わない。例えば、ポリトリメチレンテレフタレート(PTT:Polytrimethylene terrphtalate)、ポリエチレンナフタレート(PEN:Polyethylene naphthalate)、ポリブチレンナフタレート(PBN:Polybutylene naphthalate)を用いても構わない。この場合であっても、同様の作用効果を奏することができる。
 また、上記実施形態では、薄膜層16の厚みを1μm~500μmに範囲内としたが、レーザ光Lのパワーや照射時間を考慮すると、5μm~20μmの範囲内にすることがより好ましい。また、この範囲内に膜厚調整することで、印字面13の透けの防止と、レーザ光Lの照射による薄膜層16のだれの防止とを、より効果的に発揮させることができ、視認性の向上化に繋げることができる。
 更に、エポキシ系樹脂を利用して薄膜層16を形成した場合には、接着性に優れているので、厚みを1μm~10μmの範囲内に調整すれば十分である。
 また、上記実施形態では、印字面13にコロナ放電表面処理を施した後、薄膜層16を形成したが、コロナ放電表面処理は必須ではなく、この処理を施さずに薄膜層16を形成しても構わない。但し、より強固に接着することが可能であるので、コロナ放電表面処理を施すことが好ましい。なお、コロナ放電表面処理を施さない場合には、接着性に優れたエポキシ系樹脂を利用して薄膜層16を形成することが好ましい。
 また、上記実施形態では、薄膜層16を黒色とし、包埋カセット1を白色としたが、この色の組み合わせに限定されるものではない。少なくとも明度が異なる色であれば、自由に選択して構わない。例えば、薄膜層16を深緑や黒色とし、包埋カセット1を淡緑色、淡橙色、淡黄色や淡紫色としても構わない。その他の色の組み合わせでも構わない。但し、カセット本体10の色よりも薄膜層16の色を低い明度とするのが好ましい。
(第1の実施例)
 次に、ポリエステル系の樹脂からなるカセット本体の印字面にウレタン系樹脂で薄膜層を形成した本発明に係る包埋カセット1と、従来用いられているポリアセタール(POM)からなるカセット本体の印字面にウレタン系樹脂で薄膜層を形成した包埋カセットと、を実際に用いて各種の試験を行い、その試験結果を比較した場合について説明する。
 まず、試験を行ったそれぞれの包埋カセットについて簡単に説明する。
 本発明に係る包埋カセット1として、上述した実施形態のように、ポリエステル系の樹脂の1つであるPBTを包埋カセットの材料に選択した。より詳細には、商品名:VALOX 310(SABICポリマーランドジャパン株式会社製)で、平均分子量が32500、フィラーが0%のPBTを用いた。
 また、ウレタン系樹脂は、商品名:SG 740 (N) 710ブラック(株式会社セイコーアドバンス製)で、成分が、ビニルウレタン樹脂(22~35%)、シクロヘキサン(17~27%)、イソホロン(15~25%)、エステル系溶剤(5~11%)、カーボンブラック(5%未満)のものを用いた。
 一方、比較する包埋カセットとしては、POMを包埋カセットの材料に選択した。そして、ウレタン系樹脂は、上記と同じものを用いた。
 そして、いずれの場合も以下の手順でウレタン樹脂を成膜した。
 まず、ウレタン樹脂を成膜する前に、印字面にコロナ放電表面処理を施した。この際、電圧:0.57KW、電極とワークとの距離:2mm、放電時間:約10秒に設定した。
 次に、ウレタン樹脂を溶かす溶剤は、基材と硬化剤とを10:1の重量比で混合した後、イソホロンを加えて希釈することで作製した。
 続いて、作製した溶剤でウレタン樹脂を溶かした後、コロナ放電表面処理が施された印字面にシルク印刷して薄膜層を成膜した。この際、ナイロンスクリーン(番手270番)にて印刷した。また、薄膜層の膜厚は、1μm~500μmの範囲内である10μmとした。そして、成膜した後、欠け、滲みや掠れがないことを目視で確認した後、乾燥機内にて80℃の温度雰囲気中で40分の乾燥を行った。
 続いて、このように作製された2種類の包埋カセットを、実際に使用されるより高い濃度に設定されたホルマリン、蟻酸-ホリマリン、エタノール、キシレンといった薬品に、実際に使用されるより長い時間曝して、重量変化、貯蔵弾性率の変化、損失弾性率の変化をそれぞれ計測して比較した。その比較結果を、図13から図15に示す。
 なお、各薬品に曝す時間は、以下のように行った。
 まず、20%ホルマリンに3日間浸漬した。続いて、10%蟻酸-ホルマリンに15日間浸漬した。続いて、80%エタノールに2日間浸漬した。続いて、100%エタノールに1日間浸漬した。最後に、キシレンに10時間浸漬した。
 図13に示すように、薬品に浸す処理前と浸した後の処理後の重量変化が、本発明に係る包埋カセット1の方が少ないことが確認できた。また、図14に示すように、粘弾性の1つである貯蔵弾性率(E’)はほぼ同一であるが、図15に示すように、粘弾性の1つである損失弾性率(E’’)に関しては、本発明に係る包埋カセット1の方が少ないことが確認できた。つまり、包埋カセットに動的な力が加わった際に、本発明の包埋カセット1の方が従来の包埋カセットに比べて変位量が少なく、優れていることが確認できた。
 これらの比較結果から、PBTで包埋カセットを作製する本発明の方が、POMで作製する従来の場合よりも、カセット単体としてみても高い評価が得られることが確認できた。
 更に、包埋カセットの表面に付着したパラフィンPをプラスティック製のナイフで削り落とす作業を想定して、実際に使用されるより高い濃度に設定されたホルマリン、蟻酸-ホリマリン、エタノール、キシレンといった薬品に、実際に使用されるより長い時間曝した後、薄膜層にアクリル樹脂の角部を当てて擦り、薄膜層がどのように変化したのかを実施に確認して比較した。
 なお、この場合、各薬品に曝す時間は、以下のように行った。
 まず、20%ホルマリンに3日間浸漬した。続いて、80%エタノールに3日間浸漬した。続いて、10%蟻酸-ホルマリンに14日間浸漬した。続いて、100%エタノールに12時間浸漬した。最後に、キシレンに3日間浸漬した。
 その結果、PBTからなるカセット本体10にウレタン系樹脂の薄膜層16が成膜された本発明に係る包埋カセット1の場合には、薄膜層16が剥がれることがなかった。これに対して、POMからなるカセット本体にウレタン系樹脂の薄膜層が成膜された従来の包埋カセットの場合には、薄膜層がほとんど剥がれ落ちてしまった。
 これらの結果から、PBTで作製されたカセット本体10は、樹脂との親和性に優れており、ウレタン樹脂からなる薄膜層16との密着強度が非常に高いことが実際に証明された。
(第2の実施例)
 続いて、本発明に係るカセット本体としてウレタン系樹脂ではなくエポキシ系樹脂で薄膜層を形成し、第1の実施例と同様の試験を行った結果について説明する。
 エポキシ系樹脂としては、商品名:1300 HC870(株式会社セイコーアドバンス製)で、顔料としてカーボンブラック(5%~10%)を含むものを用いた。そして、以下の手順でエポキシ系樹脂を成膜した。
 このエポキシ樹脂を使用する場合、他の材料と比較して、カセット本体の樹脂との親和性に優れているために、特に印字面へのコロナ放電表面処理を施す必要はない。そこで、溶剤で溶かしたエポキシ系樹脂をそのまま印字面にシルク印刷して薄膜層を成膜した。この際、薄膜層の膜厚は10μmとした。そして、成膜した後、欠け、滲みや掠れがないことを目視で確認した後、乾燥機内にて150℃の温度雰囲気中で30分の焼付け乾燥を行った。
 続いて、このように作製された包埋カセットを第1の実施例と同様の方法により試験を行った。その結果、PBTからなるカセット本体にエポキシ系樹脂で薄膜層を成膜した場合であっても、薄膜層が剥がれることがなかった。従って、PBTで作製されたカセット本体とエポキシ系樹脂からなる薄膜層との密着強度が、ウレタン系樹脂を用いた場合と同様に依然として非常に高いことが実際に証明された。
 B 包埋ブロック
 C 識別コード
 P パラフィン(包埋剤)
 S 生体試料
 1 包埋カセット
 10 カセット本体
 11 収容凹部
 13 印字面
 16 薄膜層

Claims (7)

  1.  生体試料のパラフィン置換処理を行うための容器として使用されると共に、パラフィン置換処理された生体試料が包埋剤に包埋された包埋ブロックの載置台としても使用される包埋カセットであって、
     ポリエステル系の樹脂により形成され、前記生体試料を収容する収容凹部と、平坦な印字面とを有するカセット本体と;
     蟻酸、ホルマリン、エタノール及びキシレンに対して耐薬品性を有する樹脂で、且つ、前記カセット本体の色に対して少なくとも明度が異なる色の樹脂により前記印字面に成膜された薄膜層と;
     レーザ光の照射による切削によって前記薄膜層に表示された識別コードと;を備えている;
    ことを特徴とする包埋カセット。
  2.  請求項1に記載の包埋カセットであって、
     前記薄膜層は、ウレタン系樹脂、アクリル系樹脂又はエポキシ系樹脂のいずれかの樹脂から形成される。
  3.  請求項1に記載の包埋カセットであって、
     前記薄膜層の膜厚が、1μm~500μmである。
  4.  請求項3に記載の包埋カセットであって、
     前記薄膜層の膜厚が、膜厚が5μm~20μmである。
  5.  請求項1に記載の包埋カセットであって、
     前記印字面は、前記薄膜層の成膜前にコロナ放電表面処理されている。
  6.  請求項1に記載の包埋カセットであって、
     前記カセット本体は、ポリブチレンテレフタレート(PBT)から形成され;
     前記薄膜層は、ウレタン系樹脂から形成されている。
  7.  請求項1に記載の包埋カセットであって、
     前記薄膜層の色は、前記カセット本体の色よりも低い明度を有する。
     
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013031421A1 (ja) * 2011-08-30 2013-03-07 サクラファインテックジャパン株式会社 包埋トレイ
JP2013542447A (ja) * 2010-11-08 2013-11-21 サーモ シャンドン リミテッド 廃ワックス容器
KR101755444B1 (ko) 2017-01-26 2017-07-10 이정민 포매 카세트의 보관이 용이한 케이스

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP6850625B2 (ja) * 2017-02-15 2021-03-31 サクラ精機株式会社 包埋装置
CN109781494B (zh) * 2019-01-15 2024-09-10 中南大学湘雅医院 用于组织定位包埋的石蜡包埋装置及其包埋方法
EP3953677B1 (en) * 2019-04-12 2024-08-14 Ambartsoumian, Gourgen Tissue embedding cassette with retaining fingers or retaining frame

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6518542B1 (en) 2001-10-11 2003-02-11 Infosight Corporation Colored patch laser marking
JP2006289897A (ja) * 2005-04-14 2006-10-26 Dainippon Printing Co Ltd レリーフ形成体の製造方法
JP2007046988A (ja) * 2005-08-09 2007-02-22 Matsunami Glass Kogyo Kk 生物組織標本用包埋ブロックの製造方法および包埋ブロック用情報表示ラベル
JP2008026054A (ja) * 2006-07-19 2008-02-07 Seiko Instruments Inc 識別コード表示用テープ
JP2008026112A (ja) * 2006-07-20 2008-02-07 Seiko Instruments Inc 包埋カセット
JP2008221179A (ja) 2007-03-15 2008-09-25 Matsushita Environment Airconditioning Eng Co Ltd 排水処理方法

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4220252A (en) * 1979-08-27 1980-09-02 Miles Laboratories, Inc. Biological specimen process apparatus
JPH0540449Y2 (ja) * 1987-10-14 1993-10-14
KR100334315B1 (ko) * 1992-06-15 2002-10-11 헤르만밀러인코퍼레이티드 사무용의자의경사제어장치
US20080194016A1 (en) * 2005-10-10 2008-08-14 Kusters Ronald Johannes Wilhel Tissue Container, and Devicer and Method For Providing Such a Tissue Container With Data

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6518542B1 (en) 2001-10-11 2003-02-11 Infosight Corporation Colored patch laser marking
JP2006289897A (ja) * 2005-04-14 2006-10-26 Dainippon Printing Co Ltd レリーフ形成体の製造方法
JP2007046988A (ja) * 2005-08-09 2007-02-22 Matsunami Glass Kogyo Kk 生物組織標本用包埋ブロックの製造方法および包埋ブロック用情報表示ラベル
JP2008026054A (ja) * 2006-07-19 2008-02-07 Seiko Instruments Inc 識別コード表示用テープ
JP2008026112A (ja) * 2006-07-20 2008-02-07 Seiko Instruments Inc 包埋カセット
JP2008221179A (ja) 2007-03-15 2008-09-25 Matsushita Environment Airconditioning Eng Co Ltd 排水処理方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
See also references of EP2330401A4 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2013542447A (ja) * 2010-11-08 2013-11-21 サーモ シャンドン リミテッド 廃ワックス容器
WO2013031421A1 (ja) * 2011-08-30 2013-03-07 サクラファインテックジャパン株式会社 包埋トレイ
KR101755444B1 (ko) 2017-01-26 2017-07-10 이정민 포매 카세트의 보관이 용이한 케이스

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