JP3212560B2 - 皮膚角質細胞の染色方法 - Google Patents
皮膚角質細胞の染色方法Info
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- JP3212560B2 JP3212560B2 JP31834798A JP31834798A JP3212560B2 JP 3212560 B2 JP3212560 B2 JP 3212560B2 JP 31834798 A JP31834798 A JP 31834798A JP 31834798 A JP31834798 A JP 31834798A JP 3212560 B2 JP3212560 B2 JP 3212560B2
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、皮膚角質細胞の染
色方法に関し、詳しくは媒染剤としてタンニン酸、クロ
ム塩類、アルミニウム塩類、グルタールアルデヒド、ホ
ルマリンの群から選ばれる一種または二種以上を染色剤
と同時に、又は媒染剤を作用させた後に染色剤を作用さ
せることを特徴とする皮膚角質細胞の染色方法に関する
ものであり、更には、このような方法で染色された皮膚
角質細胞を皮膚状態の評価に用いる皮膚状態の評価方法
に関するものである。
色方法に関し、詳しくは媒染剤としてタンニン酸、クロ
ム塩類、アルミニウム塩類、グルタールアルデヒド、ホ
ルマリンの群から選ばれる一種または二種以上を染色剤
と同時に、又は媒染剤を作用させた後に染色剤を作用さ
せることを特徴とする皮膚角質細胞の染色方法に関する
ものであり、更には、このような方法で染色された皮膚
角質細胞を皮膚状態の評価に用いる皮膚状態の評価方法
に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】従来より、顕微観察を容易に行うため
に、生体材料を染色した後、顕微観察の試料として提供
することが行われている。このような染色方法のうち、
皮膚角質細胞の染色を目的とする場合には、古くはヘマ
トキシリン・エオジン染色が行われ、その他、メチレン
ブルー、ローダミンＢ、ゲンチアナバイオレット、ブリ
リアントグリーンなどもよく用いられている。これらの
方法では、染色原理が未解明なものも多く、良好な染色
を行うにはたぶんに経験的な要素を必要とする。そのた
め、これら従来から用いられている染色方法ではいずれ
も染色が薄くなりがちで、背景とのコントラスト比が十
分得られないことが多い。
に、生体材料を染色した後、顕微観察の試料として提供
することが行われている。このような染色方法のうち、
皮膚角質細胞の染色を目的とする場合には、古くはヘマ
トキシリン・エオジン染色が行われ、その他、メチレン
ブルー、ローダミンＢ、ゲンチアナバイオレット、ブリ
リアントグリーンなどもよく用いられている。これらの
方法では、染色原理が未解明なものも多く、良好な染色
を行うにはたぶんに経験的な要素を必要とする。そのた
め、これら従来から用いられている染色方法ではいずれ
も染色が薄くなりがちで、背景とのコントラスト比が十
分得られないことが多い。
【０００３】しかし、肉眼で直接細胞の形状等を官能的
に評価する場合には、低コントラストの染色方法でも長
年の観察経験で補いがつくこともあるが、一般的には顕
微標本が見づらいことは好ましいことではない。特に、
例えばコンピュータを利用した画像解析システムを利用
して細胞面積を算出する等の評価方法に応用する場合に
は、低コントラストの染色では、機械的な判別精度が低
下し、正確な評価データが得にくくなると言う問題があ
った。
に評価する場合には、低コントラストの染色方法でも長
年の観察経験で補いがつくこともあるが、一般的には顕
微標本が見づらいことは好ましいことではない。特に、
例えばコンピュータを利用した画像解析システムを利用
して細胞面積を算出する等の評価方法に応用する場合に
は、低コントラストの染色では、機械的な判別精度が低
下し、正確な評価データが得にくくなると言う問題があ
った。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、以上のよう
な状況に鑑みてなされたものであって、その目的は皮膚
角質細胞をコントラストよく染色することによって、肉
眼観察、特には画像解析に適した皮膚角質細胞の染色方
法を提供することである。
な状況に鑑みてなされたものであって、その目的は皮膚
角質細胞をコントラストよく染色することによって、肉
眼観察、特には画像解析に適した皮膚角質細胞の染色方
法を提供することである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】こうした現状に鑑み、鋭
意研究を行った結果、本発明者らは、タンニン酸、クロ
ム塩類、アルミニウム塩類、グルタールアルデヒド、ホ
ルマリンの群から選ばれる一種または二種以上を媒染剤
として使用する事により、細胞組織、特に皮膚角質細胞
の染色性が格段に向上し、良好なコントラストで染色で
きることを見いだし、本発明を完成させるに至ったもの
である。
意研究を行った結果、本発明者らは、タンニン酸、クロ
ム塩類、アルミニウム塩類、グルタールアルデヒド、ホ
ルマリンの群から選ばれる一種または二種以上を媒染剤
として使用する事により、細胞組織、特に皮膚角質細胞
の染色性が格段に向上し、良好なコントラストで染色で
きることを見いだし、本発明を完成させるに至ったもの
である。
【０００６】
【発明の実施の形態】以下、本発明について詳細に説明
する。本発明を適用する皮膚角質細胞は、例えば頬や上
腕内側部からテープストリッピング等の公知の手法によ
り採取した皮膚角質細胞を用いるが、もちろん採取部位
はこれに限定されるものではない。
する。本発明を適用する皮膚角質細胞は、例えば頬や上
腕内側部からテープストリッピング等の公知の手法によ
り採取した皮膚角質細胞を用いるが、もちろん採取部位
はこれに限定されるものではない。
【０００７】このようにして皮膚から採取された角質細
胞は適当な方法でスライドグラス等の観察用基盤に転写
され、タンニン酸、クロム塩類、アルミニウム塩類、グ
ルタールアルデヒド、ホルマリンの群から選ばれる一種
または二種以上を媒染剤として、角質細胞の染色に使用
可能な染色剤で染色される。
胞は適当な方法でスライドグラス等の観察用基盤に転写
され、タンニン酸、クロム塩類、アルミニウム塩類、グ
ルタールアルデヒド、ホルマリンの群から選ばれる一種
または二種以上を媒染剤として、角質細胞の染色に使用
可能な染色剤で染色される。
【０００８】媒染剤は染色剤と同時に作用させてもよい
し、あるいは媒染剤を作用させた後に染色剤で染色を行
ってもよいが、媒染剤を作用させた後に染色剤を作用さ
せた方が染色のコントラストが高くなり、より好まし
い。
し、あるいは媒染剤を作用させた後に染色剤で染色を行
ってもよいが、媒染剤を作用させた後に染色剤を作用さ
せた方が染色のコントラストが高くなり、より好まし
い。
【０００９】このような媒染剤としては、タンニン酸、
重クロム酸カリ等のクロム塩類、硫酸アンモニウムアル
ミニウム等のアルミニウム塩類、グルタールアルデヒ
ド、ホルマリンを使用することができるが、これら媒染
剤の中でも、タンニン酸がもっとも染色性が向上するの
で好ましい。安全性の点からも、クロム塩類、アルミニ
ウム塩類、グルタールアルデヒド、ホルマリンは環境汚
染の面や、作業者の安全衛生面から見てあまり好ましく
ない。
重クロム酸カリ等のクロム塩類、硫酸アンモニウムアル
ミニウム等のアルミニウム塩類、グルタールアルデヒ
ド、ホルマリンを使用することができるが、これら媒染
剤の中でも、タンニン酸がもっとも染色性が向上するの
で好ましい。安全性の点からも、クロム塩類、アルミニ
ウム塩類、グルタールアルデヒド、ホルマリンは環境汚
染の面や、作業者の安全衛生面から見てあまり好ましく
ない。
【００１０】以下、実施例により、本発明を詳細に説明
する。
する。
【００１１】皮膚角質細胞の標本は特開平６−８２４４
３号に記載の方法に従って作成した。すなわち、皮膚表
面の角質細胞をセロファンテープに写し取り（テープス
トリッピング）、テープの細胞が付着している側をスラ
イドグラスに延展したビニール用接着剤に貼付し、スラ
イドグラスをエタノール、キシレンに浸漬して接着剤を
溶解させ、スライドグラスからテープを剥離し、ベース
となる染色用の皮膚角質層をスライドグラスに貼付した
ものを作製した。
３号に記載の方法に従って作成した。すなわち、皮膚表
面の角質細胞をセロファンテープに写し取り（テープス
トリッピング）、テープの細胞が付着している側をスラ
イドグラスに延展したビニール用接着剤に貼付し、スラ
イドグラスをエタノール、キシレンに浸漬して接着剤を
溶解させ、スライドグラスからテープを剥離し、ベース
となる染色用の皮膚角質層をスライドグラスに貼付した
ものを作製した。
【００１２】
【媒染剤処理後染色の実施例】皮膚角質細胞をスライド
グラスに貼付したものに、表１に示す媒染剤を作用させ
た後、ヘマトキシリン・エオジン染色を行い、その後ス
ライドグラス上の試料をバルサムで封入した。
グラスに貼付したものに、表１に示す媒染剤を作用させ
た後、ヘマトキシリン・エオジン染色を行い、その後ス
ライドグラス上の試料をバルサムで封入した。
【００１３】
【表１】
【００１４】
【媒染剤と同時染色の実施例】皮膚角質細胞をスライド
グラスに貼付したものに、表２に示す媒染剤を作用させ
ながら同時にヘマトキシリン・エオジン染色を行い、そ
の後スライドグラス上の試料をバルサムで封入した。
グラスに貼付したものに、表２に示す媒染剤を作用させ
ながら同時にヘマトキシリン・エオジン染色を行い、そ
の後スライドグラス上の試料をバルサムで封入した。
【００１５】
【表２】
【００１６】
【比較例】皮膚角質細胞をスライドグラスに貼付したも
のに、媒染剤を使用せずにヘマトキシリン・エオジン染
色を行い、その後スライドグラス上の試料をバルサムで
封入した。
のに、媒染剤を使用せずにヘマトキシリン・エオジン染
色を行い、その後スライドグラス上の試料をバルサムで
封入した。
【００１７】このようにして染色された、実施例及び比
較例の皮膚角質細胞のスライド標本から、顕微鏡を通し
て画像解析システムに角質細胞の画像を取り込み、背景
と角質細胞を区別するために明度差５０％を閾値として
２値化を実施した。視野中１００個当たりの角質細胞に
ついての認識率を表３に示す。
較例の皮膚角質細胞のスライド標本から、顕微鏡を通し
て画像解析システムに角質細胞の画像を取り込み、背景
と角質細胞を区別するために明度差５０％を閾値として
２値化を実施した。視野中１００個当たりの角質細胞に
ついての認識率を表３に示す。
【００１８】
【表３】
【００１９】表３の結果に見られるように、媒染剤を使
用せずに染色した比較例に比べ、本発明の媒染剤を使用
する染色方法では、画像解析による細胞認識率が格段に
向上することが証明された。かかる効果は媒染剤と染色
剤を同時に使用するよりも、媒染剤を作用させた後に染
色剤を作用させた方がより効果的であった。また、タン
ニン酸の濃度を１００〜１，０００ｐｐｍまでは１００
ｐｐｍごと、１，０００〜１０，０００ｐｐｍでは１，
０００ｐｐｍごとに濃度を振って、同様の試験を実施し
たところ、１００ｐｐｍ〜１，０００ｐｐｍの範囲では
ほぼ同等の細胞認識率を示し、染色性の向上は特に認め
られず、１，０００ｐｐｍ以上の濃度では、逆に細胞認
識率がわずかながら低下する傾向を示した。このよう
に、本発明の染色方法では、使用する媒染剤の濃度が、
１〜１，０００ｐｐｍ、特に１０ｐｐｍ〜１００ｐｐｍ
で良好な染色性の向上効果を発揮するものであり、経済
的にも負担の少ないものである。
用せずに染色した比較例に比べ、本発明の媒染剤を使用
する染色方法では、画像解析による細胞認識率が格段に
向上することが証明された。かかる効果は媒染剤と染色
剤を同時に使用するよりも、媒染剤を作用させた後に染
色剤を作用させた方がより効果的であった。また、タン
ニン酸の濃度を１００〜１，０００ｐｐｍまでは１００
ｐｐｍごと、１，０００〜１０，０００ｐｐｍでは１，
０００ｐｐｍごとに濃度を振って、同様の試験を実施し
たところ、１００ｐｐｍ〜１，０００ｐｐｍの範囲では
ほぼ同等の細胞認識率を示し、染色性の向上は特に認め
られず、１，０００ｐｐｍ以上の濃度では、逆に細胞認
識率がわずかながら低下する傾向を示した。このよう
に、本発明の染色方法では、使用する媒染剤の濃度が、
１〜１，０００ｐｐｍ、特に１０ｐｐｍ〜１００ｐｐｍ
で良好な染色性の向上効果を発揮するものであり、経済
的にも負担の少ないものである。
【００２０】
【発明の効果】本発明の皮膚角質細胞の染色方法によれ
ば、画像解析装置による細胞認識率を大きく向上させる
ことができ、被験者が使用するのに適した化粧料等を選
定するために必要な肌質評価等を精度良く実施すること
が可能となる。また、肉眼による観察評価も非常に容易
となる。
ば、画像解析装置による細胞認識率を大きく向上させる
ことができ、被験者が使用するのに適した化粧料等を選
定するために必要な肌質評価等を精度良く実施すること
が可能となる。また、肉眼による観察評価も非常に容易
となる。
フロントページの続き (72)発明者 平井 義和 神奈川県横浜市神奈川区高島台27番地１ ポーラ化成工業株式会社 横浜研究所 内 (72)発明者 宮澤 雅一 神奈川県横浜市神奈川区高島台27番地１ ポーラ化成工業株式会社 横浜研究所 内 (56)参考文献 特開 平２−205773（ＪＰ，Ａ) 特開 昭61−43997（ＪＰ，Ａ) 特開 平６−82443（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) G01N 33/48 A61B 5/107 C12N 5/06 ＪＩＣＳＴファイル（ＪＯＩＳ)
Claims (5)
- 【請求項１】皮膚角質細胞に、染色剤と、タンニン酸、
クロム塩類、アルミニウム塩類、グルタールアルデヒ
ド、ホルマリンからなる群から選ばれる一種又は二種以
上の媒染剤とを作用させる皮膚角質細胞の染色方法であ
って、該媒染剤溶液の濃度を１〜１，０００ｐｐｍと
し、皮膚角質細胞に、該媒染剤と染色剤とを同時に作用
させるか、又は媒染剤を作用させた後に染色剤を作用さ
せることを特徴とする皮膚角質細胞の染色方法。 - 【請求項２】媒染剤がタンニン酸であることを特徴とす
る請求項１に記載の皮膚角質細胞の染色方法。 - 【請求項３】請求項１または２に記載の染色方法を用い
て染色された皮膚角質細胞を用いて評価することを特徴
とする皮膚状態の評価方法。 - 【請求項４】請求項１または２に記載の染色方法を用い
て染色された皮膚角質細胞の顕微観察画像を計測工学的
に測定し、測定部位の測定値に基づいて皮膚状態を評価
する皮膚状態の評価方法。 - 【請求項５】測定項目が皮膚角質細胞面積である請求項
３又は４の何れかに記載の皮膚状態の評価方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP31834798A JP3212560B2 (ja) | 1998-10-21 | 1998-10-21 | 皮膚角質細胞の染色方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP31834798A JP3212560B2 (ja) | 1998-10-21 | 1998-10-21 | 皮膚角質細胞の染色方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000125854A JP2000125854A (ja) | 2000-05-09 |
| JP3212560B2 true JP3212560B2 (ja) | 2001-09-25 |
Family
ID=18098154
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP31834798A Expired - Fee Related JP3212560B2 (ja) | 1998-10-21 | 1998-10-21 | 皮膚角質細胞の染色方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3212560B2 (ja) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100458148B1 (ko) | 2001-10-29 | 2004-11-26 | 포라 가세이 고교 가부시키가이샤 | 피부 분석 시스템 |
| KR20060005380A (ko) * | 2003-04-21 | 2006-01-17 | 가부시키가이샤 시세이도 | 각질층에 있어서의 산화 단백질의 평가 방법 |
| JP2006053117A (ja) * | 2004-07-12 | 2006-02-23 | Pola Chem Ind Inc | 角層細胞の染色液及びそれを用いた角層細胞の染色方法 |
| JP2007114076A (ja) * | 2005-10-21 | 2007-05-10 | Pola Chem Ind Inc | 角層細胞の画像の調整方法 |
| WO2008099480A1 (ja) | 2007-02-14 | 2008-08-21 | Pola Chemical Industries Inc. | 角層細胞の鑑別支援方法 |
| JP2012039927A (ja) * | 2010-08-18 | 2012-03-01 | Univ Of Fukui | 細胞画像解析装置及び方法 |
-
1998
- 1998-10-21 JP JP31834798A patent/JP3212560B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2000125854A (ja) | 2000-05-09 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |