CN103694732A - 一种苏木素染色液及其含苏木素染色液的he染色液 - Google Patents

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CN103694732A CN201310750204.2A CN201310750204A CN103694732A CN 103694732 A CN103694732 A CN 103694732A CN 201310750204 A CN201310750204 A CN 201310750204A CN 103694732 A CN103694732 A CN 103694732A
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邹霈
吴军
吴昊
谢敏浩
王洪勇
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Abstract

本发明提供一种苏木素染色液，包括如下组分：苏木素、铝盐、氧化剂、苯扎氯铵、醇、弱酸、水。本发明还提供了所述苏木素染色液的制备方法、含苏木素染色液的HE染色液及其染色方法。本发明的苏木素染色液对切片进行染色时，背景清晰、层次分明、染色效果好、易于读片，且不易褪色，便于长期存放。

Description

一种苏木素染色液及其含苏木素染色液的HE染色液
技术领域
本发明涉及一种体外诊断试剂，具体涉及一种苏木素染色液及其制备方法，以及含苏木素染色液的HE染色液以及其染色方法。
背景技术
苏木素伊红染色方法，简称HE染色法，是组织学、胚胎学、病理学中使用最为广泛的技术方法。HE染色是将组织切片或细胞涂片等分别浸入苏木素染色液和伊红染色液中，经过适当的时间和处理，使组织、细胞及其他成分染上不同深浅的颜色，产生不同的折射率，从而便于光学显微镜下进行观察和研究。
苏木素是一种碱性染料，由洋苏木中提取，被氧化后生成苏木因，同媒染剂共同使用，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色。苏木素的分子式为C16H14O6，结构式如下：
Figure BDA0000450767210000011
常用的苏木素染色液主要有Ehrlich苏木素染色液、Harris苏木素染色液、Cole苏木素染色液、Mayer苏木素染色液、Carazzi苏木素染色液、改良Lillie-Mayer苏木素染色液以及Gill改良苏木素染色液等。
伊红，为酸性染料，分为水溶性和醇溶性两种，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。
水溶性伊红的结构式为：
醇溶性伊红的结构式为：
Figure BDA0000450767210000022
伊红染色液在水中可离解成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷结合，从而使细胞质染成深浅不一的红色。目前，采用的伊红染色液主要为：水溶性伊红的水溶液、醇溶性伊红的95%乙醇溶液以及水溶性伊红和焰红的80%乙醇溶液。
经过长期的使用，人们发现，现有的苏木素染色液也具有以下缺陷：1）易产生金属膜和染料沉淀，从而污染切片，且在制片过程中，切片上的上述污渍很难去除，导致染色不均，甚至出现无法读片，需要重新制片；2）在染色阶段易出现假性蓝色染色，将部分细胞质也染为蓝色，对后续观测结果的准确性产生影响。
现有的HE染色液，即苏木素伊红染色液，由于苏木素染色液产生的金属膜和染料沉淀会导致染色不均且易出现假性蓝色染色，进而造成经苏木素伊红染色后得到的组织切片或细胞涂片等的背景模糊，读片困难。
发明内容
为此，本发明所要解决的第一个技术问题在于现有技术中的苏木素染色液易产生金属膜和染料沉淀而使染色不均且易出现假性蓝色染色，进而提供一种染色均匀、假性蓝色染色少的染色效果的苏木素染色液。
本发明所要解决的第二个技术问题在于提供一种背景清晰、层次分明、染色效果好、易于读片的HE染色液。
本发明提供了所述苏木素染色液的制备方法。
本发明还提供了所述苏木素伊红染色液的染色方法
为解决上述技术问题，本发明的苏木素染色液，每100ml所述苏木素染色液中包括如下组分：苏木素0.3-1g；铝盐0.5-10g；氧化剂0.025-2.26；苯扎氯铵0.05-1g；醇5-60ml；弱酸0.03-6.3g；余量为水。
所述氧化剂与所述苏木素的质量比小于或等于2.3；
所述醇占所述苏木素染色液的20%-60%（V/V）时，所述铝盐的重量应小于或等于10×（1.2-v）g；所述v为所述醇占所述苏木素染色液的体积百分比。
其中，所述氧化剂为红色氧化汞、碘酸钠、高锰酸钾、高碘酸钾、次氯酸钠、次氯酸钙、过氧化氢中的一种或多种的混合物。进一步的，每100ml所述苏木素染色液中，所述红色氧化汞优选为0.03-0.5g，最优选为0.25g；所述碘酸钠优选为0.03-0.2g，最优选为0.1g；所述高锰酸钾优选为0.02-0.18g，最优选为0.09g；所述高碘酸钾优选为0.01-0.05g，最优选为0.025g；所述次氯酸钙优选为0.3-2g，最优选为1g；所述次氯酸钠优选为0.3-2g，最优选为1g；所述过氧化氢优选为0.34-2.26g，最优选为1.13g。
所述红色氧化汞与所述苏木素的质量比小于或等于0.5；所述碘酸钠与所述苏木素的质量比小于或等于0.2;所述高锰酸钾与所述苏木素的质量比小于或等于0.18;所述高碘酸钾与所述苏木素的质量比小于或等于0.05;所述次氯酸钠与所述苏木素的质量比小于或等于2；所述次氯酸钙与所述苏木素的质量比小于或等于2；所述过氧化氢与所述苏木素的质量比小于或等于2.26。
所述弱酸为柠檬酸、水杨酸、冰乙酸中的一种或多种的混合物。进一步的，每100ml所述苏木素染色液中，所述柠檬酸优选为0.1-0.6g，最优选为0.2g；所述水杨酸优选为0.03-0.18g，最优选为0.06g；所述冰乙酸优选为1.05-6.3g，最优选为2.1g。
所述醇为乙醇、甲醇、乙二醇、异丙醇、丙三醇中的一种或多种混合物。
所述铝盐为硫酸铝钾、硫酸铝铵、硫酸铝、硝酸铝、氯化铝中的一种或多种的混合物。进一步的，每100ml所述苏木素染色液中，所述硫酸铝铵优选为5.5g、所述硫酸铝钾优选为5.5g、所述硫酸铝优选为3.6g、所述硝酸铝优选为4.5g、所述氯化铝优选为2.8g。
所述水为去离子水或蒸馏水中的一种。
优选的，所述苏木素染色液，每100ml所述苏木素染色液中包括如下组分：苏木素1g；硫酸铝3.6；碘酸钠0.1g；苯扎氯铵0.1g；乙醇10ml；冰乙酸2.1g；余量为水。
本发明的苏木素染色液的制备方法，包括以下步骤，
a.按选定的比例取醇、苏木素，将所述苏木素加入醇中，加热溶解，得到苏木素醇溶液，备用；
b.按选定的比例取水、铝盐，使所述铝盐完全溶解于水中，加入步骤a中得到的所述苏木素醇溶液，得到混合液；
c.按选定的比例取氧化剂、苯扎氯铵、弱酸，将所述氧化剂搅拌加入步骤b中得到的所述混合液中，加热溶液变深紫色后，冷却，加入所述苯扎氯铵、弱酸，混合均匀，过滤，即得苏木素染色液。
需要说明的是，在所述苏木素染色液的制备过程中，选用多种所述氧化剂时，各所述氧化剂应分批加入所述混合液。
本发明还提供了一种HE染色液，包括所述苏木素染色液。所述HE染色液还包括伊红染色液。
所述伊红染色液，按照重量百分比计算，至少包括如下组分：伊红0.1-2%；余量为水、乙醇中的一种或两者的混合溶液。
本领域技术人员可根据现有技术向所述伊红溶液中引入其它常规试剂，如：所述伊红溶液还可包括促染剂冰醋酸、焰红染料B中的一种或两种等。
其中，所述伊红可以是水溶性伊红、醇溶性伊红中的一种。
本发明的HE染色液的染色方法，包括以下步骤：
1）切片预处理：取待染色石蜡切片按常规方式脱蜡、水化；
2）苏木素伊红染色：将步骤1）中得到的经预处理后切片置于所述苏木素染色液中染色3-10min；取出后水洗，分化，水洗，返蓝后，再水洗；取所述伊红染色液对切片染色；
3）切片脱水、透明、封片：将步骤2）得到的染色后的切片采用常规方式脱水，透明处理，封片，即可。
进一步地，所述的HE染色液的染色方法，所述步骤1）为：取石蜡切片置于二甲苯中脱蜡2-3次，每次5-10min；将上述石蜡切片依次置于无水乙醇中2-3次、每次3-5min，体积分数为90%-95%的乙醇中1-2次、每次1-3min，体积分数为60%-80%的乙醇中1-3min，再水洗1-5min。
优选的，所述步骤1）为：取石蜡切片置于二甲苯中脱蜡3次，每次5min；将上述石蜡切片依次置于无水乙醇中2次、每次3min，体积分数为95%的乙醇中2次、每次3min，体积分数为70%的乙醇中3min，再用蒸馏水水洗5min。
所述步骤2）为：将步骤1）中得到的经预处理后切片置于所述苏木素染色液中染色3-10min；取出后水洗1-20min，用0.1%-1%盐酸乙醇分化1-60s后，水洗1-5min，用0.2%氨水或饱和碳酸锂水溶液返蓝30s-60s后，水洗1-5min；取所述伊红染色液对切片染色。
优选的，所述步骤2）为：将步骤1）中得到的经预处理后切片置于所述苏木素染色液中染色5min；取出后水洗5min，用0.25%盐酸乙醇分化30s后，水洗5min，用1.36%的碳酸锂水溶液中返蓝30s后，水洗5min；取所述伊红染色液对切片染色。
所述步骤3）为：将步骤2）得到的染色后的切片分别用体积分数为60-80%的乙醇脱水10-30s，体积分数为95%的乙醇脱水2-3次、每次1-5min，无水乙醇脱水2-3次，每次1-5min；再置于二甲苯中透明2-3次，每次2-5min；封片，即可。
优选的，所述步骤3）为：将步骤2）得到的染色后的切片分别用体积分数为80%的乙醇脱水30s，体积分数为95%的乙醇脱水2次、每次3min，无水乙醇脱水2次，每次3min；再置于二甲苯中透明2次，每次5min；封片，即可。
其中，所述的二甲苯可以是邻二甲苯、间二甲苯、对二甲苯中的一种或多种的混合物。不同的二甲苯在对所述石蜡切片进行染色过程中，效果并无差异。
需要说明的是，采用所述苏木素染色液及所述伊红染色液进行染色时，本领域技术人员可根据染色情况及染色要求对染色、分化、返蓝时间做适当调整。
本发明的苏木素伊红染色液可按照上述步骤对石蜡切片进行染色，但是，需要说明的是，本发明的苏木素伊红染色液的染色对象包括但不限于石蜡切片，本领域技术人员也可使用本发明的苏木素染色液或本发明的HE染色液采用常规手段对冰冻切片、培养基细胞等进行染色操作。
本发明的上述技术方案相比现有技术具有以下优点：
（1）本发明的苏木素染色液，包括：苏木素、硫酸铝盐、氧化剂、苯扎氯铵、醇、弱酸、水。其中加入了苯扎氯铵，苯扎氯铵是一种阳离子表面活性剂，具有良好的粘泥剥离作用与分散、渗透的作用，能很好的去除对切片进行苏木素染色时产生的金属膜和染料沉淀、残渣，解决了切片的除渍问题，避免了因金属膜、染料沉淀造成的读片困难问题，使苏木素染色更为均匀并加强了染料液的着色效果。同时，经过多次验证表明，加入苯扎氯铵后，能保持较短染色时间的同时实现更好的染色效果，在苏木素染色阶段对细胞质的假性蓝色染色也显著减少，使切片的背景更加清晰。另外，苯扎氯铵属于非氧化性杀菌剂，具有高效的广谱杀菌能力，可抑制霉菌等多种细菌的产生，使染色液的有效期大大延长，使用时也可防止污染切片，达到良好的染色效果。
（2）本发明的HE染色液，包括所述苏木素染色液。由于所述苏木素染色液不易产生金属膜、染料沉淀，染色均匀，且假性蓝色染色少，因此，采用本发明的HE染色液染色得到的组织切片或细胞涂片等背景清晰、易于读片，染色效果良好。
附图说明
为了使本发明的内容更容易被清楚的理解，下面根据本发明的具体实施例并结合附图，对本发明作进一步详细的说明。
图1是采用本发明实施例1得到的所述苏木素伊红染色液对甲状腺乳头状癌亚型进行染色的病理切片图；
图2是采用本发明实施例2得到的所述苏木素伊红染色液对甲状腺乳头状癌细胞涂片进行染色的病理切片图；
图3是采用本发明实施例3得到的所述苏木素伊红染色液对甲状腺乳头状癌细胞涂片（核内包含体）进行染色的病理切片图；
图4是采用本发明实施例4得到的所述苏木素伊红染色液对甲状腺滤泡癌瘤栓转移进行染色的病理切片图；
具体实施方式
本发明下述各实施例中，所述的苏木素、无水乙醇、铝盐、氧化剂、弱酸、苯扎氯铵、醇溶性伊红、水溶性伊红可以选用现有技术中常规采用的产品进行苏木素染色液以及HE染色液的制备，以下仅给出其中一种型号的产品予以阐述本发明的效果，市售各型号的产品之间效果并无差异。其中：
苏木素，阿拉丁试剂（上海）有限公司，高级纯，99%
苯扎氯铵，上海阿达玛斯试剂有限公司，GR，纯度98%
水溶性伊红Y，上海沪试化工有限公司，BS，纯度90%
实施例1
本实施例的苏木素染色液，每100ml所述苏木素染色液中包括如下组分：苏木素1g；铝盐：硫酸铝铵10g；氧化剂：红色氧化汞0.25g；苯扎氯铵0.1g；醇：乙醇10ml；弱酸：冰乙酸2.1g；余量为去离子水。
其制备方法如下：
1）苏木素染色液的配制：
a.按选定的比例取醇、苏木素，将所述苏木素加入醇中，溶解，得到苏木素醇溶液，备用；
b.按选定的比例取水、铝盐，使所述铝盐完全溶解于水中，加入步骤a中得到的所述苏木素醇溶液，得到混合液；
c.按选定的比例取氧化剂、苯扎氯铵、弱酸，将所述氧化剂搅拌加入步骤b中得到的所述混合液中，加热溶液变深紫色后，冷却，加入所述苯扎氯铵、弱酸，混合均匀，过滤，即得苏木素染色液；
本实施例的HE染色液，包括上述制得的苏木素染色液，还包括伊红染色液。
所述伊红染色液，每100ml所述伊红染色液中包括如下组分：水溶性伊红Y0.5g；比布列西猩红0.04g；焰红B0.21g；苯扎氯铵0.1g；醇：乙醇20ml；其余为去离子水。
其配制方法为：
按选定的比例取水溶性伊红Y、比布列西猩红、焰红B、苯扎氯铵、水、乙醇，向所述水中加入所述水溶性伊红Y、所述比布列西猩红、所述焰红B、苯扎氯铵，混合均匀，再加入所述乙醇，过滤，即得伊红染色液。
取经上述步骤制得的所述HE染色液，对石蜡切片进行染色操作，具体包括以下步骤：
1）切片预处理：取石蜡切片置于二甲苯中脱蜡3次，每次5min；将上述石蜡切片依次置于无水乙醇中2次、每次3min，体积分数为95%的乙醇中2次、每次3min，体积分数为70%的乙醇中3min，再用蒸馏水水洗5min；
2）苏木素伊红染色：将步骤1）中得到的经预处理后切片置于所述苏木素染色液中染色5min；取出后水洗5min，用0.25%盐酸乙醇分化30s后，水洗5min，用1.36%的碳酸锂水溶液中返蓝30s后，水洗5min；取所述伊红染色液对切片染色15s；
3）切片脱水、透明、封片：将步骤2）得到的染色后的切片分别用体积分数为80%的乙醇脱水30s，体积分数为95%的乙醇脱水2次、每次3min，无水乙醇脱水2次，每次3min；再置于二甲苯中透明2次，每次5min；封片，即可。
实施例2
本实施例的苏木素染色液，每100ml所述苏木素染色液中包括如下组分：苏木素0.3g；铝盐：硫酸铝钾10g；氧化剂：碘酸钠0.03g；苯扎氯铵0.525g；醇：乙二醇5ml；弱酸：水杨酸0.03g；余量为蒸馏水。
其制备方法如下：
a.按选定的比例取醇、苏木素，将所述苏木素加入醇中，溶解，得到苏木素醇溶液，备用；
b.按选定的比例取水、铝盐，使所述铝盐完全溶解于水中，加入步骤a中得到的所述苏木素醇溶液，得到混合液；
c.按选定的比例取氧化剂、苯扎氯铵、弱酸，将所述氧化剂搅拌加入步骤b中得到的所述混合液中，加热溶液变深紫色后，冷却，加入所述苯扎氯铵、弱酸，混合均匀，过滤，即得苏木素染色液；
本实施例的HE染色液，包括上述制得的苏木素染色液，还包括伊红染色液。
所述伊红染色液，每100ml所述伊红染色液中包括如下组分：水溶性伊红Y0.4g；比布列西猩红0.03g；焰红0.25g；苯扎氯铵1g；乙醇5ml；余量为蒸馏水。
其配制方法为：
按选定的比例取各组分，混合均匀，即得伊红染色液。
取经上述步骤制得的所述HE染色液，对石蜡切片进行染色操作，具体包括以下步骤：
1）切片预处理：取石蜡切片置于二甲苯中脱蜡2次，每次10min；将上述石蜡切片依次置于无水乙醇中3次、每次4min，体积分数为90%的乙醇中1次、每次2min，体积分数为60%的乙醇中2min，再用蒸馏水水洗1min；
2）苏木素伊红染色：将步骤1）中得到的经预处理后切片置于所述苏木素染色液中染色10min；取出后水洗1min，用1%盐酸乙醇分化1s后，水洗3min，用0.2%氨水溶液返蓝30s后，水洗3min；取所述伊红染色液对切片染色10s；
3）切片脱水、透明、封片：将步骤2）得到的染色后的切片分别用体积分数为60%的乙醇脱水10s，体积分数为95%的乙醇脱水3次、每次1min，无水乙醇脱水3次，每次1min；再置于二甲苯中透明2次，每次2min；封片，即可。
实施例3
本实施例的苏木素染色液，每100ml所述苏木素染色液中包括如下组分：苏木素0.65g；铝盐：硫酸铝6.25g；氧化剂：高锰酸钾0.11g；苯扎氯铵0.05g；醇：丙三醇32.5ml；弱酸：柠檬酸0.2g；余量为去离子水。
其制备方法同实施例2中的制备方法。
本实施例的HE染色液，包括上述制得的苏木素染色液，还包括伊红染色液。
所述伊红染色液，每100ml所述伊红染色液中包括如下组分：水溶性伊红Y0.3g；比布列西猩红0.05g；焰红B0.15g；苯扎氯铵0.525g；乙醇60ml；余量为蒸馏水。
其制备方法同实施例2中的制备方法。
取经上述步骤制得的所述HE染色液，对石蜡切片进行染色操作，具体包括以下步骤：
1）切片预处理：取石蜡切片置于二甲苯中脱蜡3次，每次7.5min；将上述石蜡切片依次置于无水乙醇中2次、每次5min，体积分数为93%的乙醇中2次、每次1min，体积分数为80%的乙醇中1min，再用蒸馏水水洗3min；
2）苏木素伊红染色：将步骤1）中得到的经预处理后切片置于所述苏木素染色液中染色10min；取出后水洗20min，用0.1%盐酸乙醇分化16s后，水洗1min，用饱和碳酸锂水溶液返蓝30s后，水洗1min；取所述伊红染色液对切片染色60s；
3）切片脱水、透明、封片：将步骤2）得到的染色后的切片分别用体积分数为70%的乙醇脱水20s，体积分数为95%的乙醇脱水2次、每次5min，无水乙醇脱水2次，每次5min；再置于二甲苯中透明3次，每次3min；封片，即可。
实施例4
本实施例的苏木素染色液，每100ml所述苏木素染色液中包括如下组分：苏木素1g；铝盐：氯化铝0.5g；氧化剂：过氧化氢2.3g；苯扎氯铵1g；醇：甲醇60ml；弱酸：冰乙酸2.1g、柠檬酸0.2g；余量为水。
其制备方法同实施例2中的制备方法。
本实施例的HE染色液，包括上述制得的苏木素染色液，还包括伊红染色液。
所述伊红染色液，每100ml所述伊红染色液中包括如下组分：水溶性伊红Y0.5g；比布列西猩红0.04g；焰红B0.2g；苯扎氯铵0.05g；乙醇32.5ml；余量为水。
其配制方法为同实施例2中的制备方法。
取经上述步骤制得的所述HE染色液，对石蜡切片进行染色操作，具体包括以下步骤：
1）切片预处理：取石蜡切片置于二甲苯中脱蜡3次，每次5min；将上述石蜡切片依次置于无水乙醇中2次、每次3min，体积分数为95%的乙醇中2次、每次3min，体积分数为70%的乙醇中3min，再水洗5min；
2）苏木素伊红染色：将步骤1）中得到的经预处理后切片置于所述苏木素染色液中染色6.5min；取出后水洗11min，用0.5%盐酸乙醇分化30s后，水洗5min，用0.2%稀氨水返蓝30s后，水洗5min；取所述伊红染色液对切片染色15s；
3）切片脱水、透明、封片：将步骤2）得到的染色后的切片分别用体积分数为80%的乙醇脱水30s，体积分数为95%的乙醇脱水2次、每次3min，无水乙醇脱水2次，每次3min；再置于二甲苯中透明2次，每次5min；封片，即可。
实施例5
本实施例的苏木素染色液，每100ml所述苏木素染色液中包括如下组分：苏木素1g；铝盐：硝酸铝10g；氧化剂：次氯酸钠1g；苯扎氯铵1g；醇：异丙醇10ml；弱酸：柠檬酸0.03g；余量为水。
其制备方法同实施例2中的制备方法。
本实施例的HE染色液，包括上述制得的苏木素染色液，还包括伊红染色液。所述伊红染色液为水溶性伊红Y1g；乙醇5ml；其余为蒸馏水。
取经上述步骤制得的所述HE染色液，对石蜡切片进行染色操作，具体包括以下步骤：
1）切片预处理：取待染色石蜡切片按常规方式脱蜡、水化；
2）苏木素伊红染色：将步骤1）中得到的经预处理后切片置于所述苏木素染色液中染色3min；取出后水洗，分化，返蓝后，再水洗；取所述伊红染色液对切片染色20s；
3）切片脱水、透明、封片：将步骤2）得到的染色后的切片采用常规方式脱水，透明处理，封片，即可。
实施例6
本实施例的苏木素染色液，每100ml所述苏木素染色液中包括如下组分：苏木素1g；硫酸铝3.6g；碘酸钠0.1g；苯扎氯铵0.1g；乙醇10ml；冰乙酸2.1g；余量为水。
其制备方法同实施例2中的制备方法。
本实施例的HE染色液，包括上述制得的苏木素染色液，还包括伊红染色液。所述伊红染色液为水溶性伊红Y1.01g；焰红B0.15g；乙醇60ml；余量为水。
取经上述步骤制得的所述HE染色液，对石蜡切片进行染色操作，具体包括以下步骤：
1）切片预处理：取待染色石蜡切片按常规方式脱蜡、水化；
2）苏木素伊红染色：将步骤1）中得到的经预处理后切片置于所述苏木素染色液中染色10min；取出后水洗，用返蓝剂返蓝后，再水洗；取所述伊红染色液对切片染色10s；
3）切片脱水、透明、封片：将步骤2）得到的染色后的切片采用常规方式脱水，透明处理，封片，即可。
实施例7
本实施例的苏木素染色液，每100ml所述苏木素染色液中包括如下组分：苏木素1g；铝盐：按1:2的重量比混合的氯化铝、硝酸铝10g；氧化剂：高碘酸钾0.05g；苯扎氯铵1g；醇：按1:1的体积比混合的甲醇与异丙醇10ml；弱酸：按2:3的重量比混合的柠檬酸、水杨酸0.05g；余量为水。
其制备方法同实施例2的制备方法。
本实施例的HE染色液，包括上述制得的苏木素染色液，还包括伊红染色液。所述伊红染色液为伊红Y2g；促染剂：冰乙酸0.5g；乙醇32.5ml；余量为水。
取经上述步骤制得的所述HE染色液，对石蜡切片进行染色操作，具体包括以下步骤：
1）切片预处理：取待染色石蜡切片按常规方式脱蜡、水化；
2）苏木素伊红染色：将步骤1）中得到的经预处理后切片置于所述苏木素染色液中染色6.5min；取出后水洗，分化，返蓝后，再水洗；取所述伊红染色液对切片染色10s；
3）切片脱水、透明、封片：将步骤2）得到的染色后的切片采用常规方式脱水，透明处理，封片，即可。
实施例8
本实施例的苏木素染色液，每100ml所述苏木素染色液中包括如下组分：苏木素1g；铝盐：按1:3的重量比混合的硫酸铝、氯化铝10g；氧化剂：红色氧化汞0.03g、碘酸钠0.03g、高锰酸钾0.02g、高碘酸钾0.02g、次氯酸钠0.3g、次氯酸钙0.3g、过氧化氢0.34g；苯扎氯铵1g；醇：按1:1的体积比混合的甲醇与异丙醇10ml；弱酸：水杨酸0.03g、柠檬酸0.1g、冰醋酸1g；余量为水。
其制备方法同实施例2的制备方法。
本实施例的HE染色液，包括上述制得的苏木素染色液，还包括伊红染色液。所述伊红染色液为水溶性伊红Y和焰红B的80%乙醇溶液，其中，所述伊红占所述伊红染色液总重量的0.1%，所述焰红占所述伊红染色液总重量的0.01%。
取经上述步骤制得的所述HE染色液，采用常规方式对冰冻切片进行染色操作。
实施例9
本实施例的苏木素染色液，每100ml所述苏木素染色液中包括如下组分：苏木素1g；铝盐：按1：2：5的质量比混合的硫酸铝钾、硫酸铝铵、硫酸铝10g；氧化剂：按1：3的重量比混合的高锰酸钾、高碘酸钾0.05g；苯扎氯铵0.1g；醇：按1：3的体积比混合的乙醇与丙三醇10ml；弱酸：柠檬酸0.03g；余量为水。
其制备方法同实施例2的制备方法。
本实施例的HE染色液，包括上述制得的苏木素染色液，还包括伊红染色液。所述伊红染色液为水溶性伊红的水溶液，其中，所述伊红占所述伊红染色液总重量的1%。
取经本实施例制得的所述HE染色液，采用常规方式对培养基细胞进行染色操作。
实施例10
本实施例的苏木素染色液，每100ml所述苏木素染色液中包括如下组分：苏木素1g；铝盐：按1：3：2的质量比混合的硫酸铝、氯化铝、硝酸铝10g；氧化剂：按5：1的重量比混合的次氯酸钙、过氧化氢2g；苯扎氯铵0.1g；醇：按1：3：4：1的体积比混合的甲醇、乙二醇、乙醇与丙三醇10ml；弱酸：柠檬酸0.1g；余量为水。
其制备方法同实施例2的制备方法。
本实施例的HE染色液，包括上述制得的苏木素染色液，还包括伊红染色液。所述伊红染色液为水溶性伊红的醇溶液。
取经本实施例制得的所述HE染色液，采用常规方式对培养基细胞进行染色操作。
实施例11
本实施例的苏木素染色液，每100ml所述苏木素染色液中包括如下组分：苏木素1g；铝盐：按1：3：2：4：1的质量比混合的硫酸铝钾、硫酸铝铵、硫酸铝、硝酸铝、氯化铝10g；氧化剂：按1：3：1的重量比混合的碘酸钠、高锰酸钾、高碘酸钾0.1g；苯扎氯铵0.1g；醇：丙三醇10ml；弱酸：水杨酸0.03g；余量为水。
其制备方法同实施例2的制备方法。
本实施例的HE染色液，包括上述制得的苏木素染色液，还包括伊红染色液。所述伊红染色液为醇溶性伊红的95%醇溶液。
取经本实施例制得的所述HE染色液，采用常规方式对培养基细胞进行染色操作。
对比例1
本对比例中的苏木素，所述苏木素染色液不包括苯扎氯铵，其余组分以及所述伊红染色液均与实施例1相同，并按照实施例1的制备方法制备。
取本对比例制得的所述HE染色液，按照实施例1的染色方法染色。
效果对比例
为说明本发明的效果，将实施例1-11及对比例1中得到的所述苏木素染色液，在25℃下放置2h，观察染色液情况。
取实施例1-11及对比例1中得到的所述HE染色液，分别按照实施例1-11及对比例1中所述的染色方法进行染色，观察得到的切片或培养基细胞。
观察结果如下：
Figure BDA0000450767210000171
Figure BDA0000450767210000181
结论：
本发明所述的苏木素染色液，对切片等进行染色时，背景清晰、层次分明、染色效果好、易于读片，且不易褪色，便于长期存放。包含本发明所述的苏木素染色液的所述HE染色液，可实现良好的染色效果。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (15)

1.一种苏木素染色液，其特征在于，每100ml所述苏木素染色液中包括如下组分： 
苏木素0.3-1g；铝盐0.5-10g；氧化剂0.025-2.26；苯扎氯铵0.05-1g；醇5-60ml；弱酸0.03-6.3g；余量为水。 
2.根据权利要求1所述的苏木素染色液，其特征在于， 
所述氧化剂与所述苏木素的质量比小于或等于2.3； 
所述醇占所述苏木素染色液的20%-60%（V/V）时，所述铝盐的重量应小于或等于10×（1.2-v）g；所述v为所述醇占所述苏木素染色液的体积百分比。 
3.根据权利要求1或2所述的苏木素染色液，其特征在于， 
所述氧化剂为红色氧化汞、碘酸钠、高锰酸钾、高碘酸钾、次氯酸钠、次氯酸钙、过氧化氢中的一种或多种的混合物； 
所述弱酸为柠檬酸、水杨酸、冰乙酸中的一种或多种的混合物； 
所述醇为乙醇、甲醇、乙二醇、异丙醇、丙二醇、丙三醇中的一种或多种混合物； 
所述铝盐为硫酸铝钾、硫酸铝铵、硫酸铝、硝酸铝、氯化铝中的一种或多种的混合物； 
所述水为去离子水或蒸馏水中的一种。 
4.根据权利要求1-3任一所述的苏木素染色液，其特征在于， 
每100ml所述苏木素染色液中包括如下组分： 
苏木素1g；硫酸铝3.6g；碘酸钠0.1g；苯扎氯铵0.1g；乙醇10ml；冰乙酸2.1g；余量为水。 
5.根据权利要求1-4任一所述的苏木素染色液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤， 
a.按选定的比例取醇、苏木素，将所述苏木素加入醇中，加热溶解，得到苏木素醇溶液，备用； 
b.按选定的比例取水、铝盐，使所述铝盐完全溶解于水中，加入步骤a中得到的所述苏木素醇溶液，得到混合液； 
c.按选定的比例取氧化剂、苯扎氯铵、弱酸，将所述氧化剂搅拌加入步骤b中得到的所述混合液中，加热溶液变深紫色后，冷却，加入所述苯扎氯铵、弱酸，混合均匀，过滤，即得苏木素染色液。 
6.一种HE染色液，包含权利要求1-4任一项所述的苏木素染色液。 
7.权利要求6所述的HE染色液，其特征在于，还包括伊红染色液。 
8.权利要求7所述的HE染色液，其特征在于，所述伊红染色液，按重量比计算，至少包括以下组分： 
伊红0.1-2%，余量为水、乙醇中的一种或两者的混合溶液。 
9.根据权利要求6-8任意一项所述的HE染色液的染色方法，其特征在于，包括以下步骤： 
1）切片预处理：取待染色石蜡切片按常规方式脱蜡、水化； 
2）苏木素伊红染色：将步骤1）中得到的经预处理后切片置于所述苏木素染色液中染色3-10min；取出后水洗，分化，水洗，返蓝后，再水洗；取所述伊红染色液对切片染色； 
3）切片脱水、透明、封片：将步骤2）得到的染色后的切片采用常规 方式脱水，透明处理，封片，即可。 
10.根据权利要求9所述的HE染色液的染色方法，其特征在于，所述步骤1）为：取石蜡切片置于二甲苯中脱蜡2-3次，每次5-10min；将上述石蜡切片依次置于无水乙醇中2-3次、每次3-5min，体积分数为90%-95%的乙醇中1-2次、每次1-3min，体积分数为60%-80%的乙醇中1-3min，再水洗1-5min。 
11.根据权利要求10所述的HE染色液的染色方法，其特征在于，所述步骤1）为：取石蜡切片置于二甲苯中脱蜡3次，每次5min；将上述石蜡切片依次置于无水乙醇中2次、每次3min，体积分数为95%的乙醇中2次、每次3min，体积分数为70%的乙醇中3min，再用蒸馏水水洗5min。 
12.根据权利要求9-11任一所述的HE染色液的染色方法，其特征在于，所述步骤2）为：将步骤1）中得到的经预处理后切片置于所述苏木素染色液中染色3-10min；取出后水洗1-20min，用0.1%-1%盐酸乙醇分化1-60s后，水洗1-5min，用0.2%氨水或饱和碳酸锂水溶液返蓝30s-60s后，水洗1-5min；取所述伊红染色液对切片染色。 
13.根据权利要求12所述的HE染色液的染色方法，其特征在于，所述步骤2）为：将步骤1）中得到的经预处理后切片置于所述苏木素染色液中染色5min；取出后水洗5min，用0.25%盐酸乙醇分化30s后，水洗5min，用1.36%的碳酸锂水溶液中返蓝30s后，水洗5min；取所述伊红染色液对切片染色。 
14.根据权利要求9-13任一所述的HE染色液的染色方法，其特征在于，所述步骤3）为：将步骤2）得到的染色后的切片分别用体积分数为60-80%的乙醇脱水10-30s，体积分数为95%的乙醇脱水2-3次、每次1-5min，无水乙醇脱水2-3次，每次1-5min；再置于二甲苯中透明2-3次，每次2-5min；封片，即可。 
15.根据权利要求14所述的HE染色液的染色方法，其特征在于， 所述步骤3）为：将步骤2）得到的染色后的切片分别用体积分数为80%的乙醇脱水30s，体积分数为95%的乙醇脱水2次、每次3min，无水乙醇脱水2次，每次3min；再置于二甲苯中透明2次，每次5min；封片，即可。 
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