CN110823666A - 苏木素在制备减少病理常规切片染色后褪色的染色剂中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了苏木素在制备减少病理常规切片染色后褪色的染色剂中的应用。本发明的有益效果为：本发明提供的苏木素在制备减少病理常规切片染色后褪色的染色剂中的应用，使用两次苏木素，可称为二次染色法，此技术稳固了细胞核内各种物质对苏木素的着色能力，使得苏木素染色更持久，方便日后患者借阅病理切片，大大减少过后对疾病发展的诊断的影响。
Description
技术领域
本发明涉及病理检测技术领域，具体涉及苏木素在制备减少病理常规切片染色后褪色的染色剂中的应用。
背景技术
病理工作中，常规石蜡切片技术为日常主要技术之一，其他技术也是在常规HE切片技术基础上发展衍生，所以常规石蜡切片相当于病理科的基石。病人的病情是发展的，当发展到后面的阶段有时候需要借阅早期的病理切片来支持疾病的诊断和确定，故而能完整保存病理切片对病人往后的疾病诊断有很大的意义。目前，常规病理石蜡染色是使用苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosinstaining)，所以简称HE染色法，是石蜡切片技术里常用的染色法之一。HE染色原理如下：细胞核内的染色质主要成分是脱氧核糖核酸(DNA)，在DNA双螺旋结构中，两条链上的磷酸基向外，带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键或氢键结合从而被染色，苏木精在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。细胞质内的主要成分是蛋白质，为两性化合物，细胞质的染色与PH值有关，当PH值在5.0-6.7时，细胞质呈正电荷，可被带负电荷的酸性染料染色，伊红Y是一种化学合成的酸性染料，在水中解离成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷结合从而使细胞质染色，细胞质、红细胞、肌肉、结缔组织、嗜伊红颗粒等被染成不同程度的红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明对比，如图1所示。
在三级甲等医院评审中要求，病理切片需要保存年限为十五年，而且日常病理工作中常常需要借阅之前在切片，所以对切片的长期保存有较高要求。但是由于时间关系，平时保存的常规HE切片常常出现褪色情况。申请人在日常病理工作中，发现年代越久远，HE切片褪色情况越严重，以不同时间段的HE片在显微镜下观察，发现伊红染的组织还可见淡红的轮廓，但是苏木素染色褪色较严重，有些切片甚至完全褪尽，细胞核模糊不清，显微镜下根本无法阅片，即无法判断病变部位和病变程度和性质。
发明内容
本发明的目的就是针对上述现有技术中的缺陷，提供了苏木素在制备减少病理常规切片染色后褪色的染色剂中的应用。
为了实现上述目的，本发明提供的技术方案为：苏木素在制备减少病理常规切片染色后褪色的染色剂中的应用，是采用二次苏木素染色法进行染色剂的制备。
进一步的，上述的苏木素在制备减少病理常规切片染色后褪色的染色剂中的应用，所述染色方法包括以下步骤：
1)烤片：常规切片后进行烤片，一般在60℃温度的温箱内烤片0.5-1小时，使组织牢固吸附在玻片上。
2)脱去组织切片内的石蜡：二甲苯4缸脱蜡，每缸5分钟，每缸500ml左右液体，二甲苯可以洗去组织内的蜡，这样后面的苏木素和伊红才能进入组织进行染色。
3)洗去二甲苯：脱蜡后将组织切片放入无水乙醇洗脱二甲苯，二甲苯设6缸，每缸1-2分钟，从旧的二甲苯往新的二甲苯移。
4)洗去无水酒精：组织切片用自来水洗，冲洗30秒-2分钟，洗去脱二甲苯用的乙醇；
5)细胞核染色：水洗后将组织切片放入苏木素染色5-15分钟(新苏木素)；在显微镜下观察染色是否深浅合适。细胞核内的染色质主要是去氧核糖核酸(DNA)，去氧核糖核酸的双螺旋结构中，两条链上的磷酸基向外，带负电荷，呈酸性，容易何带正电荷的苏木精碱性染料结合而被染色，苏木精在碱性染料中呈蓝色，所以细胞核呈蓝色。
6)放入旧苏木素染色5分钟；
7)分化作用：苏木素染色合适后将组织切片拿出用自来水水洗(显微镜下观察细胞核着色深浅，推测分化时间)，然后用0.5％盐酸酒精分化2-10秒，以脱去细胞核中结合过多的染料何细胞浆中吸附发染料。
8)蓝化作用：分化后用水洗除去分化的盐酸二中止分化，再用温水或弱碱性水浸泡组织5-10分钟，使苏木精的细胞核变蓝色。
9)再次细胞核染色：将组织切片放入第2缸苏木素(旧苏木素)，在显微镜下观察染色是否深浅合适。再次依次水洗、分化、蓝化。
10)细胞质染色：将组织切片放入伊红染料中10秒到2分钟不等。胞细胞浆的主要化学成分是蛋白质，为两性化合物，当PH值调至小于4.7以下，细胞质带正电荷，伊红Y是一种化学合成的酸性染料，在水中解离成带负电荷的阴离子，与阳离子的细胞质结合而是细胞浆染色，细胞浆、红细胞、肌细胞、结缔组织、嗜伊红颗粒等被染色成不同程度的红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明的对比。
11)洗去伊红：将组织切片从伊红染料中拿出自来水冲洗，浸泡30秒到2分钟。
12)组织脱水：切片用伊红染色液着色后，依次将组织切片从低浓度到高浓度酒精进行脱水浓度依次为75％-85％-95％-95％-100％-100％，每缸1-2分钟。
13)组织透明：组织切片脱水后依次放入二甲苯3缸透明，每缸1-2分钟。
14)中性树胶封片。
本发明的有益效果为：本发明提供的苏木素在制备减少病理常规切片染色后褪色的染色剂中的应用，使用两次苏木素，可称为二次染色法，此技术稳固了细胞核内各种物质对苏木素的着色能力，使得苏木素染色更持久，方便日后患者借阅病理切片，大大减少过后对疾病发展的诊断的影响。
附图说明
图1显示为常规病理石蜡染色方法结果图。
其中，常规石蜡切片显微镜下细胞核、细胞质染色均匀，色彩鲜艳，红蓝对比鲜明，细胞核呈蓝色，细胞质、肌肉结缔组织及其他呈不同程度的红色。
图2显示为使用旧方法后，低倍镜下细胞核细胞质红蓝对比模糊。
图3显示为使用旧方法后，高倍镜下细胞核褪色严重。
图4显示为使用新方法后，低倍镜下细胞核细胞质红蓝对比鲜明。
图5显示为使用新方法后，高倍镜下细胞核着色鲜明。
具体实施方式
实施例1：
苏木素在制备减少病理常规切片染色后褪色的染色剂中的应用，是采用二次苏木素染色法进行染色剂的制备；所述染色方法包括以下步骤：
1)烤片：常规切片后进行烤片，一般在60℃温度的温箱内烤片0.5-1小时，使组织牢固吸附在玻片上。
2)脱去组织切片内的石蜡：二甲苯4缸脱蜡，每缸5分钟，每缸500ml左右液体，二甲苯可以洗去组织内的蜡，这样后面的苏木素和伊红才能进入组织进行染色。
3)洗去二甲苯：脱蜡后将组织切片放入无水乙醇洗脱二甲苯，二甲苯设6缸，每缸1-2分钟，从旧的二甲苯往新的二甲苯移。
4)洗去无水酒精：组织切片用自来水洗，冲洗30秒-2分钟，洗去脱二甲苯用的乙醇；
5)细胞核染色：水洗后将组织切片放入苏木素染色5-15分钟(新苏木素)；在显微镜下观察染色是否深浅合适。细胞核内的染色质主要是去氧核糖核酸(DNA)，去氧核糖核酸的双螺旋结构中，两条链上的磷酸基向外，带负电荷，呈酸性，容易何带正电荷的苏木精碱性染料结合而被染色，苏木精在碱性染料中呈蓝色，所以细胞核呈蓝色。
6)放入旧苏木素染色5分钟；
7)分化作用：苏木素染色合适后将组织切片拿出用自来水水洗(显微镜下观察细胞核着色深浅，推测分化时间)，然后用0.5％盐酸酒精分化2-10秒，以脱去细胞核中结合过多的染料何细胞浆中吸附发染料。
8)蓝化作用：分化后用水洗除去分化的盐酸二中止分化，再用温水或弱碱性水浸泡组织5-10分钟，使苏木精的细胞核变蓝色。
9)再次细胞核染色：将组织切片放入第2缸苏木素(旧苏木素)，在显微镜下观察染色是否深浅合适。再次依次水洗、分化、蓝化。
10)细胞质染色：将组织切片放入伊红染料中10秒到2分钟不等。胞细胞浆的主要化学成分是蛋白质，为两性化合物，当PH值调至小于4.7以下，细胞质带正电荷，伊红Y是一种化学合成的酸性染料，在水中解离成带负电荷的阴离子，与阳离子的细胞质结合而是细胞浆染色，细胞浆、红细胞、肌细胞、结缔组织、嗜伊红颗粒等被染色成不同程度的红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明的对比。
11)洗去伊红：将组织切片从伊红染料中拿出自来水冲洗，浸泡30秒到2分钟。
12)组织脱水：切片用伊红染色液着色后，依次将组织切片从低浓度到高浓度酒精进行脱水浓度依次为75％-85％-95％-95％-100％-100％，每缸1-2分钟。
13)组织透明：组织切片脱水后依次放入二甲苯3缸透明，每缸1-2分钟。
14)中性树胶封片。
标准的常规染色如图1，旧方法用苏木素染色后保存情况如图2、图3。
新方法用苏木素染色后保存情况如图4、图5。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (2)
1.苏木素在制备减少病理常规切片染色后褪色的染色剂中的应用，其特征在于，是采用二次苏木素染色法进行染色剂的制备。
2.根据权利要求1所述的苏木素在制备减少病理常规切片染色后褪色的染色剂中的应用，其特征在于，所述染色方法包括以下步骤：
1)烤片：
常规切片后进行烤片，于60℃温度的温箱内烤片0.5-1小时，使组织牢固吸附在玻片上；
2)脱去组织切片内的石蜡：
二甲苯4缸脱蜡，每缸5分钟，每缸500ml液体，二甲苯用于洗去组织内的蜡；
3)洗去二甲苯：
脱蜡后将组织切片放入无水乙醇洗脱二甲苯，二甲苯设6缸，每缸1-2分钟，从旧的二甲苯往新的二甲苯移；
4)洗去无水酒精：
组织切片用自来水洗，冲洗30秒-2分钟，洗去脱二甲苯用的乙醇；
5)细胞核染色：
水洗后将组织切片放入新的苏木素找那个染色5-15分钟；在显微镜下观察染色深浅；
6)放入旧苏木素染色5分钟；
7)分化：
苏木素染色合适后将组织切片拿出用自来水水洗，然后用0.5％盐酸酒精分化2-10秒，以脱去细胞核中结合过多的染料何细胞浆中吸附发染料；
8)蓝化作用：
分化后用水洗除去分化的盐酸，中止分化，再用温水或弱碱性水浸泡组织5-10分钟，使苏木精的细胞核变蓝色；
9)再次细胞核染色：
将组织切片放入第2缸旧的苏木素，在显微镜下观察染色深浅；再次依次水洗、分化、蓝化；
10)细胞质染色：
将组织切片放入伊红染料中10秒到2分钟；
11)洗去伊红：
将组织切片从伊红染料中拿出自来水冲洗，浸泡30秒到2分钟；
12)组织脱水：
切片用伊红染色液着色后，依次将组织切片从低浓度到高浓度酒精进行脱水，浓度依次为75％，85％，95％，95％，100％，100％，每缸1-2分钟；
13)组织透明：
组织切片脱水后依次放入二甲苯3缸透明，每缸1-2分钟；
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