CN110361244A - 用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液与染色方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于线性染色仪快速冷冻切片的染液及染色方法，染液是由以下组分制成：苏木素2.4～3.5g，无水乙醇200～300mL，硫酸铝20～38g，蒸馏水700～800mL，碘酸钠0.2～0.3g，冰醋酸13～20mL。染色方法是去除盐酸乙醇步骤，并增加一个二甲苯缸。本发明采用所述用于线性染色仪快速冷冻切片的染液及染色方法在线性染色仪上对快速冷冻切片染色后，能增加核着色力，消除苏木素共染现象和伊红共染现象，保证细胞核、细胞质的结构清晰、对比明显、染色时间减少、不易褪色大大延长冷冻切片的保存时间、消除镜下模糊现象，规范快速冷冻切片过程中的染色时间，提高了染色质量。
Description
技术领域
本发明属于生物医学技术领域，具体地说，涉及一种用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液与染色方法。
背景技术
快速冷冻切片为术中快速活检病理诊断提供有力帮助，可判别病变的性质(良性、交界性、恶性)，或是切缘肿瘤侵犯情况，淋巴结是否肿瘤转移等，为外科医师采取适当的手术方案提供依据。由于术中快速冷冻制片和诊断受很多因素的制约，延迟性诊断时有发生。特别在快速冷冻集中送检多例或是多部位时，有限的技术人员分身乏术。线性染色仪的引进逐渐代替了手工染色，解决了人员缺乏问题，提高快速冷冻切片的速度。但由于线性染色仪的设计局限，直接使用常规配制的染色液和染色方法染色后，细胞核淡染，细胞核细胞质共染现象明显，冷冻切片常有模糊现象，使诊断困难，染色后的切片容易褪色、保存时间短。
发明内容
本发明的第一个目的是提供一种只适合用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液。
本发明的第二个目的是提供一种所述用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液的制备方法。
本发明的第三个目的是提供一种采用所述用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液的染色方法。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
本发明的第一个方面提供了一种用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液，是由以下组分制成：
苏木素2.4～3.5g，无水乙醇200～300mL，硫酸铝20～38g，蒸馏水700～800mL，碘酸钠0.2～0.3g，冰醋酸13～20mL。
优选的，所述无水乙醇为200～245mL或255～300mL。
优选的，所述蒸馏水为700～745mL或755～800mL。
优选的，所述碘酸钠为0.21～0.3g。
优选的，所述冰醋酸为13～14mL或16～19mL。
优选的，所述用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液是由以下组分制成：苏木素2.4g，无水乙醇200mL，硫酸铝20g，蒸馏水800mL，碘酸钠0.2g，冰醋酸15mL。
优选的，所述用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液是由以下组分制成：苏木素2.8g，无水乙醇250mL，硫酸铝24.6g，蒸馏水750mL，碘酸钠0.2g，冰醋酸15mL。
优选的，所述用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液是由以下组分制成：苏木素3.5g，无水乙醇300mL，硫酸铝38g，蒸馏水700mL，碘酸钠0.3g，冰醋酸15mL。
优选的，所述用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液是由以下组分制成：苏木素2.6g，无水乙醇245mL，硫酸铝23g，蒸馏水745mL，碘酸钠0.21g，冰醋酸14mL。
优选的，所述用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液是由以下组分制成：苏木素2.9g，无水乙醇255mL，硫酸铝25.4g，蒸馏水755mL，碘酸钠0.22g，冰醋酸16mL。
优选的，所述用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液是由以下组分制成：苏木素2.7g，无水乙醇230mL，硫酸铝23.8g，蒸馏水730mL，碘酸钠0.23g，冰醋酸13mL。
优选的，所述用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液是由以下组分制成：苏木素3.2g，无水乙醇280mL，硫酸铝34g，蒸馏水780mL，碘酸钠0.25g，冰醋酸19mL。
本发明的第二个方面提供了一种所述用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液的制备方法，包括以下步骤：
按照所述配比，将苏木素溶解于无水乙醇中，将硫酸铝溶解于蒸馏水中，充分溶解后将上述两液混合，加入碘酸钠溶解，加入冰醋酸，搅拌获得所述用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液。
本发明的第三个方面提供了一种染色方法，包括以下步骤：
将刚切出的快速冷冻切片放入95％乙醇固定，放入线性染色仪配套的染色架上，按线性染色仪预先设置好的程序运行，每缸均设置为25s，共14个染色缸位，染色程序1～14缸先后顺序为：苏木素染色液即所述用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液→苏木素染色液即所述用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液→苏木素染色液即所述用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液→苏木素染色液即所述用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液→流动水→流动水→流动水→95％乙醇→伊红染色液→75％乙醇→95％乙醇→无水乙醇→二甲苯→二甲苯，染色程序结束，线性染色仪的机械臂自动放入存放缸，在切片上滴加中性树胶，用盖玻片封固、切片贴标签，送诊断。
所述伊红染色液是由以下组分制成：醇溶性伊红Y染色液与95％乙醇的体积比为(4～6):35。醇溶性伊红Y染色液少于4mL，出现细胞质淡染的问题，醇溶性伊红Y染色液大于6mL，出现细胞核细胞质共染的问题。
所述伊红染色液的制备方法包括以下步骤：
醇溶性伊红Y染色液的制备方法：将醇溶性伊红Y加入到95％的乙醇中使其浓度为2.5‰，搅拌至充分溶解，加入冰醋酸溶解，冰醋酸与95％的乙醇的体积比为0.5‰，获得所述醇溶性伊红Y染色液；
取上述醇溶性伊红Y染色液溶于95％的乙醇中，醇溶性伊红Y染色液与95％乙醇的体积比为(4～6):35，获得所述伊红染色液。
由于采用上述技术方案，本发明具有以下优点和有益效果：
本发明采用所述用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液在线性染色仪上对快速冷冻切片染色后，能增加细胞核着色力，消除苏木素共染现象和伊红共染现象，保证细胞核、细胞质的结构清晰、对比明显、染色时间减少、不易褪色大大延长冷冻切片的保存时间、消除镜下模糊现象，规范快速冷冻切片过程中的染色时间，提高了染色质量。
本发明提供的用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液，通过此苏木素染色液染色后，缩短染色时间的同时也能增加核着色力，明显减少细胞质被异常染成蓝色，保证细胞核、细胞质的结构清晰、对比明显、染色时间减少。
本发明采用所述用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液在线性染色仪上对快速冷冻切片染色，淘汰盐酸乙醇步骤，经过对苏木素染液配制的改良，明显减少细胞质被异常染成蓝色，多出一个染色缸位给二甲苯；盐酸乙醇的作用把细胞质不该染成蓝色的颜色褪色，但如果盐酸乙醇后面的流动水蓝化和清洗时间少，组织细胞经过盐酸乙醇的分化时带入了盐酸乙醇内的酸，如果清洗不够彻底，在冷冻切片保存几个月后发生组织细胞内的颜色被褪色，包括细胞核和细胞质，会影响后期复看诊断和追溯。
本发明采用所述用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液在线性染色仪上对快速冷冻切片染色，提升流动水的作用，原先染色方法步骤的第一个流动水缸作用是清洗掉冷冻切片上多余的苏木素液，让其在下一染色缸的盐酸乙醇不被污染苏木素染液，由于本发明的染色方法淘汰了盐酸乙醇，所以第一道的流动水既起到清洗掉冷冻切片上多余的苏木素液的同时，又提早参与了蓝化的作用。第二个流动水缸原来的作用是清洗掉盐酸乙醇的作用和蓝化的作用，现在淘汰了盐酸乙醇后，第二个流动水缸等于是只蓝化作用，加长了蓝化时间，直至第三个流动水，增加细胞核蓝化时间的好处是使细胞核的核仁更清晰，保存时间长。
本发明采用所述用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液在线性染色仪上对快速冷冻切片染色，增加二甲苯透明效果，由于乙醇中水分子进入唯一一道二甲苯内，导致冷冻切片最后的透明不彻底而引起冷冻切片在显微镜下模糊的现象。本发明的染色方法中淘汰了盐酸乙醇，节省出一个染色缸位，所以最后可以增加一道二甲苯，使得透明更彻底，显微镜下显示更清晰。
本发明采用所述用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液在线性染色仪上对快速冷冻切片染色，通过改良伊红染色液的制备，明显减少细胞核被异常染成粉红色，而细胞质被染成粉红色，细胞核、细胞质结构清晰，对比明显。
附图说明
图1是采用现有常规染液染色后的快速冷冻切片在显微镜下观察的示意图。
图2是采用用于线性染色仪快速冷冻切片的染液染色后的快速冷冻切片在显微镜下观察的示意图。
图3是对比例3制备的染液染色后的快速冷冻切片在显微镜下观察的示意图。
图4是伊红染色液用量过多染色后的快速冷冻切片在显微镜下观察的示意图。
图5是实施例2制备的染液染色后的快速冷冻切片在显微镜下观察的示意图。
图6是实施例3制备的染液染色后的快速冷冻切片在显微镜下观察的示意图。
图7是实施例4制备的染液染色后的快速冷冻切片在显微镜下观察的示意图。
图8是实施例5制备的染液染色后的快速冷冻切片在显微镜下观察的示意图。
图9是实施例6制备的染液染色后的快速冷冻切片在显微镜下观察的示意图。
图10是实施例7制备的染液染色后的快速冷冻切片在显微镜下观察的示意图。
图11是对比例2制备的染液染色后的快速冷冻切片在显微镜下观察的示意图。
图12是伊红染色液用量过少染色后的快速冷冻切片在显微镜下观察的示意图。
具体实施方式
为了更清楚地说明本发明，下面结合优选实施例对本发明做进一步的说明。本领域技术人员应当理解，下面所具体描述的内容是说明性的而非限制性的，不应以此限制本发明的保护范围。
实施例1
材料与方法
1.1标本来源组织来源于上海市宝山区仁和医院病理科日常送检术中快速病理检查新鲜组织。
1.2设备和试剂Leica ST4020线性染色仪(德国Leica公司)、玻璃棒、苏木素、硫酸铝、碘酸钠、醇溶性伊红Y、75％乙醇、95％乙醇、无水乙醇、二甲苯、盐酸、蒸馏水。
1.3方法：改进染液配制即用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液的配制：苏木素2.8g，无水乙醇250mL，硫酸铝24.6g，蒸馏水750mL，碘酸钠0.2g，冰醋酸15mL。将苏木素溶解于无水乙醇中，将硫酸铝溶解于蒸馏水中，充分溶解后将两液混合，并及时加入碘酸钠，溶解后加入冰醋酸，备用，在使用中随冷冻切片的染色情况加减。
线性染色仪染色流程：(1)将刚切出的快速冷冻切片放入95％乙醇固定。(2)再放入线性染色仪配套的染色架上，按线性染色仪预先设置好的程序运行，每缸均设置为25s，共14个染色缸位，染色程序1～14缸先后顺序为：苏木素染色液即用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液→苏木素染色液即用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液→苏木素染色液即用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液→苏木素染色液即用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液→流动水→流动水→流动水→95％乙醇→伊红染色液→75％乙醇→95％乙醇→无水乙醇→二甲苯→二甲苯。(3)染色程序结束，线性染色仪的机械臂自动放入存放缸。(4)在切片上滴加中性树胶，用盖玻片封固、切片贴标签，送诊断。
(2)伊红染色液的配制：醇溶性伊红Y染色液4～6mL，95％乙醇35mL。
醇溶性伊红Y染色液的制备方法：将醇溶性伊红Y加入到95％的乙醇中使其浓度为2.5‰，搅拌至充分溶解，加入冰醋酸溶解，冰醋酸与95％的乙醇的体积比为0.5‰，获得所述醇溶性伊红Y染色液；
本实施例取上述配制好的醇溶性伊红Y染色液5mL加入到35mL的95％乙醇内进行稀释。醇溶性伊红Y染色液少于4mL，出现细胞质淡染的问题，如图12所示，图12是伊红染色液用量过少染色后的快速冷冻切片在显微镜下观察的示意图。醇溶性伊红Y染色液大于6mL，出现细胞核细胞质共染的问题，对比不明显；如图4所示，图4是伊红染色液用量过多染色后的快速冷冻切片在显微镜下观察的示意图。
对比例1
常规染液配制：(1)Gill改良苏木素染色液：苏木素2g，无水乙醇250mL，硫酸铝17.6g，蒸馏水750mL，碘酸钠0.2g，冰醋酸15～20mL。将苏木素溶解于无水乙醇，将硫酸铝溶解于蒸馏水中，充分溶解后将两液混合，并及时加入碘酸钠，溶解后加入冰醋酸，备用，冰醋酸的量根据使用时的效果调节。(2)伊红染色液：醇溶性伊红Y 2.5g，95％乙醇1000mL，冰醋酸0.5mL。将醇溶性伊红Y加入到1000mL的95％乙醇，玻璃棒搅拌至充分溶解，后加入冰醋酸0.5mL，备用。(3)盐酸乙醇分化液：盐酸2.5mL，75％乙醇500mL。将盐酸延玻璃棒缓慢加入75％乙醇中备用。
常规染色方法及步骤：(1)将刚切出的冷冻切片放入95％乙醇固定。(2)再放入线性染色仪配套的染色架上，按线性染色仪预先设置好的程序运行，每缸均设置为25s，共14个染色缸位，染色程序1～14缸先后顺序为：苏木素染色液→苏木素染色液→苏木素染色液→苏木素染色液→流动水→盐酸乙醇分化液→流动水→流动水→95％乙醇→伊红染色液→75％乙醇→95％乙醇→无水乙醇→二甲苯。(3)染色程序结束，线性染色仪的机械臂自动放入存放缸。(4)在切片上滴加中性树胶，用盖玻片封固、切片贴标签，送诊断。
实施例1和对比例1的快速冷冻切片染色后在显微镜下观察，如图1和图2所示，图1是采用现有常规染液染色后的快速冷冻切片在显微镜下观察的示意图，从图中可以看出，细胞核淡染，伊红深染，细胞核和细胞质共染为红色没有层次感，诊断困难；图2是采用用于线性染色仪快速冷冻切片的染液染色后的快速冷冻切片在显微镜下观察的示意图；细胞核蓝色、细胞质粉红色、结构清晰、对比明显，符合快速冷冻病理诊断质控要求。
讨论：临床医师在术中遇到肿瘤性质不明、乳腺癌前哨淋巴结清扫、肿瘤切缘切除范围大小等，均需要快速冷冻切片来指导下一步的手术方案，所以快速冷冻切片制作的速度和质量尤为重要。线性染色仪的引进后，加快了染色时间和节省人力，但线性染色仪的设计局限性，在使用常规染色液进行染色后使冷冻切片染色细胞质和细胞浆共染，细胞核淡染，诊断困难。通过改进染液配制和染色方法，规范快速冷冻制片，提高了染色质量，冷冻切片不容易褪色保存时间。
线性染色仪：线性染色仪开始位置到结束位置共14个染色缸位，及设置1个存放位，染色结束后机械臂自动将染色架放入存放位等待封片，并发出提醒声及时封片。染色总时间短(5.8m)。等一个染色架按照设定的时间从第一个染色缸挪到第二个染色缸后，就可以放入第二个染色架，如此连续添加待染色切片，不用停机，也不用等前面切片染完。因为线性染色仪的独特染色机械臂染色方式，不间断循环的添加待染色切片，所有每个染色缸的时间设定只能一致，不能单独设置时间。
常规染色液配制及染色方法的缺点：常规配制的Gill改良苏木素染色液，如运用在常规病理切片染色中，不用担心时间问题，通常需要5～15min染色，效果好。但运用在线性染色仪进行术中快速冷冻切片染色的时候，由于术中快速冷冻切片染色到诊断的总时间只有30min，给染色总时间其实只有5～15分钟，其余15min给诊断医师诊断。所以给苏木素染色时间很短，基本控制在2分钟内，如果将苏木素染液简单按照常规快速冷冻切片染色液配制，运用到线性染色仪上，四个染色缸，每个染色缸25s，时间不够，会引起细胞核淡染，在加上常规运用盐酸乙醇分化液，使得细胞核染色更淡(盐酸乙醇分化液的作用是把细胞不该被苏木素染液染色的部位褪色，同时也会将细胞核的苏木素染液有一定的褪色)，如果不用盐酸乙醇，会使得细胞核和细胞质都染成蓝色，在镜下细胞核和细胞质结构对比不清。后面常规配制的伊红染液因线性染色仪不能独立设定时间，使得染色非常深，并使得细胞核也一起染成红色的共染现象，导致诊断困难。
伊红染液共染：伊红染液常规染色只需要5s以内，因线性染色仪不能独立设定时间，只能和其他染液一样染色25s，使得染色非常深，并使得细胞核也一起染成红色的共染现象，导致诊断困难。
冷冻切片保存时间少：盐酸乙醇的作用是染色后把多染色的颜色褪色，即把细胞质不该染成蓝色的颜色褪色，但如果盐酸乙醇后面的流动水蓝化和清洗时间少，组织细胞经过盐酸的分化时带入了酸，如果清洗不够彻底，在冷冻切片保存几个月后发生组织细胞内的颜色被褪色，包括细胞核和细胞质，会影响后期复看诊断和追溯。
细胞核蓝化不彻底：在盐酸乙醇后面由于染色缸位的限制，只能设置两个流动水缸位，造成细胞核蓝化不彻底，细胞核内的核仁变化情况不清，导致诊断困难。
冷冻切片模糊现象：不同浓度乙醇作用是替换冷冻切片内多余的水分，二甲苯是替换冷冻切片内的乙醇，当二甲苯经过几次的染色流程就会带入大量的乙醇，而乙醇里含有大量的水分子，最后的二甲苯因线性染色仪染色缸位的限制，只能用一个二甲苯染色缸，使二甲苯不够纯净，这样容易导致冷冻切片透明不够彻底，在显微镜下显示模糊，需要天天更换，如果冷冻切片量多的话必需一天几次的更换，带来浪费和工作繁琐。
对于缺点的应对：针对细胞核和细胞质共染明显的现象和细胞核淡染现象，经过实验摸索出一套染色步骤，统一设置时间为25s。选用环保的Gill改良染色液，设置4个苏木素缸，并在原配制Gill改良染色液的基础上增加苏木素的量，增加硫酸铝用量。通过再次改良染色后，缩短染色时间的同时也能增加核着色力，保证细胞核、细胞质的结构清晰、对比明显、染色时间减少，明显减少细胞质被异常染成蓝色，可以淘汰盐酸乙醇分化这个常规步骤，效果明显，细胞核深染。但如果配制时增加苏木素、硫酸铝、碘酸钠的量，不用盐酸乙醇分化会使得细胞核以外的细胞质共染为蓝色，使诊断困难。
伊红共染问题应对：伊红染色时按照常规配制浓度染25s，导致细胞核、细胞质共染，没有层次感。经过摸索，改良伊红染液配制：取原先常规配制方法配制伊红染色液4-6mL加入到35mL的95％乙醇内进行稀释。染色时间为25s，大大减少了共染现象，伊红后面的第一道脱水液设为75％乙醇，既能把多余的伊红轻微在脱色，又能给切片组织脱水。结果细胞核还是蓝色，细胞质粉红色，结构清晰，对比明显。
冷冻切片保存时间少应对：由于苏木素染液的改进配制，减少了盐酸乙醇的使用，等同减少了组织细胞内酸的来源和间接增加了流动水清洗时间，使冷冻切片保存时间长。
细胞核蓝化不彻底应对：原先染色方法步骤的第一个流动水缸作用是清洗掉冷冻切片上多余的苏木素液，让其在下一染色缸的盐酸乙醇不被污染苏木素染液，由于此方法淘汰了盐酸乙醇，所以第一道的流动水既起到清洗掉冷冻切片上多余的苏木素液的同时，有提早参与了蓝化的作用。第二个流动水缸原来的作用是清洗掉盐酸乙醇和组织细胞内带入的盐酸乙醇的酸，同时起到蓝化的作用，现在淘汰了盐酸乙醇后，第二个流动水缸等于是延长了清洗和蓝化作用，直至第三个流动水。增加了细胞核蓝化的总时间，使细胞核的核仁更清晰。
冷冻切片模糊现象：由于乙醇中水分子进入唯一一道二甲苯内，导致冷冻切片最后的透明不彻底而引起冷冻切片显微镜下模糊。本申请的染色方法中淘汰了盐酸乙醇，节省出一个染色缸位，最后可以增加一道二甲苯，使得透明更彻底，显微镜下显示清晰。
实施例2
用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液是由以下组分制成：苏木素2.4g，无水乙醇200mL，硫酸铝20g，蒸馏水800mL，碘酸钠0.2g，冰醋酸15mL。
采用上述用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液的染色方法同实施例1，结果如图5所示，图5是实施例2制备的染液染色后的快速冷冻切片在显微镜下观察的示意图。
实施例3
用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液是由以下组分制成：苏木素3.5g，无水乙醇300mL，硫酸铝38g，蒸馏水700mL，碘酸钠0.3g，冰醋酸15mL。
采用上述用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液的染色方法同实施例1，结果如图6所示，图6是实施例3制备的染液染色后的快速冷冻切片在显微镜下观察的示意图。
实施例4
所述用于线性染色仪快速冷冻切片的染液是由以下组分制成：苏木素2.6g，无水乙醇245mL，硫酸铝23g，蒸馏水745mL，碘酸钠0.21g，冰醋酸14mL。
采用上述用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液的染色方法同实施例1，结果如图7所示，图7是实施例4制备的染液染色后的快速冷冻切片在显微镜下观察的示意图。
实施例5
所述用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液是由以下组分制成：苏木素2.9g，无水乙醇255mL，硫酸铝25.4g，蒸馏水755mL，碘酸钠0.22g，冰醋酸16mL。
采用上述用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液的染色方法同实施例1，结果如图8所示，图8是实施例5制备的染液染色后的快速冷冻切片在显微镜下观察的示意图。
实施例6
所述用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液是由以下组分制成：苏木素2.7g，无水乙醇230mL，硫酸铝23.8g，蒸馏水730mL，碘酸钠0.23g，冰醋酸13mL。
采用上述用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液的染色方法同实施例1，结果如图9所示，图9是实施例6制备的染液染色后的快速冷冻切片在显微镜下观察的示意图。
实施例7
所述用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液是由以下组分制成：苏木素3.2g，无水乙醇280mL，硫酸铝34g，蒸馏水780mL，碘酸钠0.25g，冰醋酸19mL。
采用上述用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液的染色方法同实施例1，结果如图10所示，图10是实施例7制备的染液染色后的快速冷冻切片在显微镜下观察的示意图。
对比例2
苏木素染液是由以下组分制成：苏木素2.2g，无水乙醇195mL，硫酸铝19g，蒸馏水690mL，碘酸钠0.19g，冰醋酸12mL。
采用上述用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液的染色方法同实施例1，结果如图11所示，图11是对比例2制备的染液染色后的快速冷冻切片在显微镜下观察的示意图。
对比例3
苏木素染液是由以下组分制成：苏木素3.6g，无水乙醇310mL，硫酸铝39g，蒸馏水810mL，碘酸钠0.31g，冰醋酸21mL。
图3是对比例3制备的染液染色后的快速冷冻切片在显微镜下观察的示意图。苏木素、硫酸铝的用量少会导致细胞核淡染，苏木素、硫酸铝的用量多会导致细胞核和细胞质过染，影响诊断，必需要用盐酸乙醇分化。
以上所述仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，虽然本发明已以较佳实施例揭露如上，然而并非用以限定本发明，任何熟悉本专利的技术人员在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用上述提示的技术内容作出些许更动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明方案的范围内。
Claims (10)
1.一种用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液，其特征在于，是由以下组分制成：
苏木素2.4～3.5g，无水乙醇200～300mL，硫酸铝20～38g，蒸馏水700～800mL，碘酸钠0.2～0.3g，冰醋酸13～20mL。
2.根据权利要求1所述的用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液，其特征在于，所述用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液是由以下组分制成：苏木素2.4g，无水乙醇200mL，硫酸铝20g，蒸馏水800mL，碘酸钠0.2g，冰醋酸15mL。
3.根据权利要求1所述的用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液，其特征在于，所述用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液是由以下组分制成：苏木素2.8g，无水乙醇250mL，硫酸铝24.6g，蒸馏水750mL，碘酸钠0.2g，冰醋酸15mL。
4.根据权利要求1所述的用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液，其特征在于，所述用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液是由以下组分制成：苏木素3.5g，无水乙醇300mL，硫酸铝38g，蒸馏水700mL，碘酸钠0.3g，冰醋酸15mL。
5.根据权利要求1所述的用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液，其特征在于，所述用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液是由以下组分制成：苏木素2.6g，无水乙醇245mL，硫酸铝23g，蒸馏水745mL，碘酸钠0.21g，冰醋酸14mL。
6.根据权利要求1所述的用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液，其特征在于，所述用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液是由以下组分制成：苏木素2.9g，无水乙醇255mL，硫酸铝25.4g，蒸馏水755mL，碘酸钠0.22g，冰醋酸16mL。
7.根据权利要求1所述的用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液，其特征在于，所述用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液是由以下组分制成：苏木素2.7g，无水乙醇230mL，硫酸铝23.8g，蒸馏水730mL，碘酸钠0.23g，冰醋酸13mL；
所述用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液是由以下组分制成：苏木素3.2g，无水乙醇280mL，硫酸铝34g，蒸馏水780mL，碘酸钠0.25g，冰醋酸19mL。
8.一种所述用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
按照所述配比，将苏木素溶解于无水乙醇中，将硫酸铝溶解于蒸馏水中，充分溶解后将上述两液混合，加入碘酸钠溶解，加入冰醋酸，搅拌获得所述用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液。
9.一种染色方法，其特征在于，包括以下步骤：
将刚切出的快速冷冻切片放入95％乙醇固定，放入线性染色仪配套的染色架上，按线性染色仪预先设置好的程序运行，每缸均设置为25s，共14个染色缸位，染色程序1～14缸先后顺序为：苏木素染色液即权利要求1至8任一项所述的用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液→苏木素染色液即即权利要求1至8任一项所述的用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液→苏木素染色液即权利要求1至8任一项所述的用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液→苏木素染色液即权利要求1至8任一项所述的用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液→流动水→流动水→流动水→95％乙醇→伊红染色液→75％乙醇→95％乙醇→无水乙醇→二甲苯→二甲苯，染色程序结束，线性染色仪的机械臂自动放入存放缸，在切片上滴加中性树胶，用盖玻片封固、切片贴标签，送诊断。
10.根据权利要求9所述的染色方法，其特征在于，所述伊红染色液是由以下组分制成：醇溶性伊红Y染色液与95％乙醇的体积比为(4～6):35；
优选的，所述伊红染色液的制备方法包括以下步骤：
醇溶性伊红Y染色液的制备方法：将醇溶性伊红Y加入到95％的乙醇中使其浓度为2.5‰，搅拌至充分溶解，加入冰醋酸溶解，冰醋酸与95％的乙醇的体积比为0.5‰，获得所述醇溶性伊红Y染色液；
取上述醇溶性伊红Y染色液溶于95％的乙醇中，醇溶性伊红Y染色液与95％乙醇的体积比为(4～6):35，获得所述伊红染色液。
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Legal Events
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|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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