CN111438087A - 一种全自动免疫组化仪盖片的洗涤方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种全自动免疫组化仪盖片的洗涤方法，包括以下步骤：全自动免疫组化仪做完免疫组化检测后的盖片用自来水冲洗表面干净后，依次用浓度为0.5～5％的高锰酸钾溶液、浓度为0.5～2％偏重亚硫酸钠溶液、用浓度为1～10％Tween_20溶液冲洗，获得清洗干净的全自动免疫组化仪盖片。本发明公开的全自动免疫组化仪盖片的洗涤方法具有褪色彻底、去污能力强、延长盖片使用寿命、节约成本等优点。
Description
技术领域
本发明属于盖片清洗技术领域，具体地说，涉及一种全自动免疫组化仪盖片的洗涤方法。
背景技术
盖片是全自动免疫组化仪染色时所需的耗材，能很好的解决试剂滴加时发生的不均匀情况(丁伟,王德田.简明病理学技术[M].杭州:浙江科学技术出版社,2014:33,158-163)，特别适合组织切片过大或散在分布引起试剂滴加后不能完全覆盖情况。但在使用中发现盖片会被DAB显色剂染色成棕色结合牢固(郑俊，张谷，何晓燕，骆利康.显色液中3，3’-二氨基联苯胺和H2O2含量对免疫组化抗原检测的影响[J].现代实用医学,2009,21(12)1315-1316)及染色过程中污垢增多增厚的现象，按照全自动免疫组化仪说明推荐的洗涤方案难以完全去除，并要求盖片出现严重变色或受损需要跟换，下次使用时影响试剂液面的流通和扩散，使试剂不能在载有被检测组织切片玻片上均匀铺开，发生局部或区域性显色失败的假阴性，直接导致诊断困难或诊断错误，如丢弃价格比较贵。
发明内容
本发明的目的是提供一种全自动免疫组化仪盖片的洗涤方法。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
本发明的第一方面提供了一种全自动免疫组化仪盖片的洗涤方法，包括以下步骤：
全自动免疫组化仪做完免疫组化检测后的盖片用自来水冲洗表面干净后，依次用浓度为0.5～5％的高锰酸钾溶液、浓度为0.5～2％偏重亚硫酸钠溶液、用浓度为1～10％Tween_20溶液冲洗，获得清洗干净的全自动免疫组化仪盖片。
所述全自动免疫组化仪盖片的洗涤方法包括以下步骤：
全自动免疫组化仪做完免疫组化检测后的盖片用自来水冲洗表面干净后，然后放入蒸馏水中浸泡，沥干至不滴水，加入浓度为0.5～5％的高锰酸钾溶液静置，自来水冲洗至无高锰酸钾溶液颜色后再用水冲洗，放入蒸馏水中浸泡，沥干至不滴水后放入浓度为0.5～2％偏重亚硫酸钠溶液静置，自来水冲洗，放入盛有浓度为1～10％Tween_20溶液的超声波清洗机中清洗，然后用浓度为1～10％Tween_20溶液冲洗，用牙刷蘸浓度为1～10％Tween_20溶液轻轻刷洗盖片表面及边角，来回刷，然后用浓度为1～10％Tween_20溶液冲洗，并浸泡在浓度为1～10％Tween_20溶液中静置，蒸馏水冲洗，沥干至不滴水，擦干后悬挂，在温度为40～60℃的条件下烘烤5～20min，获得清洗干净的全自动免疫组化仪盖片。
所述全自动免疫组化仪盖片的洗涤方法包括以下步骤：
全自动免疫组化仪做完免疫组化检测后的盖片用自来水冲洗表面干净后，然后放入500mL蒸馏水中浸泡1min，沥干至不滴水，加入浓度为0.5～5％的高锰酸钾溶液500mL静置1h，自来水冲洗至无高锰酸钾溶液颜色后再用水冲洗30s，放入蒸馏水500mL中浸泡1min，沥干至不滴水后放入浓度为0.5～2％偏重亚硫酸钠溶液500mL静置1～30min，自来水冲洗30s，放入盛有浓度为1～10％Tween_20溶液500mL的超声波清洗机中，清洗30min，清洗结束后用浓度为1～10％Tween_20溶液冲洗1min，用牙刷蘸浓度为1～10％Tween_20溶液轻轻刷洗盖片表面及边角，来回刷10次左右，然后用浓度为1～10％Tween_20溶液冲洗30s，并浸泡在浓度为1～10％Tween_20溶液500mL内10min，蒸馏水冲洗1min，沥干至不滴水，擦干后悬挂，在温度为40～60℃的条件下烘烤5～20min，获得清洗干净的全自动免疫组化仪盖片。
所述高锰酸钾溶液是用高锰酸钾和蒸馏水混合制备而成。
所述高锰酸钾溶液的浓度为0.5％、1％、3％、5％。
所述偏重亚硫酸钠溶液是用偏重亚硫酸钠和蒸馏水混合制备而成。
所述偏重亚硫酸钠溶液的浓度为0.5％、1％、1.5％、2％。
所述Tween_20溶液是用Tween_20和蒸馏水混合制备而成。
所述Tween_20溶液的浓度为1％、1.5％、5％、10％。
由于采用上述技术方案，本发明具有以下优点和有益效果：
本发明的方法存在以下几个优点：优点1：褪色彻底，通过高锰酸钾溶液的氧化和偏重亚硫酸钠溶液的还原后，盖片恢复本来颜色，表面光亮平整。优点2：去污能力强，通过褪色后，污垢用无尘吸水布比较容易去除，但在凹槽处的污垢还是不能完全去除，通过利用Tween_20有亲水和去污效果，加上超声波清洗机的清洗作用，有效的清洗掉凹槽处的污垢。优点3：延长盖片使用寿命，厂家推荐使用寿命10-25次，经8个月实验，现每片盖片做到120次仍然保持表面平整不开裂，制片效果好，还在继续使用中。优点4：节约成本，1)盖片成本，盖片一盒30片，售价为453元人民币，按一天做两批次，一批30片，现每片盖片做到360次算，盖片一年节约约1.3-3.2万元人民币。2)试剂成本，免疫组化试剂昂贵，如果染色失败或是染色质量问题导致诊断困难，会要求重新染色，其经济损失巨大。按照此盖片清洗步骤清洗，盖片干净，使免疫组化染色质量提高，直接挽回经济损失。
附图说明
图1为实施例1～4采用本发明的方法洗涤后盖片的示意图。
图2为实施例1采用本发明的方法洗涤后盖片显微镜下观察示意图，显示无棕色、无污垢、无裂纹、无擦痕，表面光滑。
图3为实施例2采用本发明的方法洗涤后盖片显微镜下观察示意图，显示无棕色、无污垢、无裂纹、无擦痕，表面光滑。
图4为实施例3采用本发明的方法洗涤后盖片显微镜下观察示意图，显示无棕色、无污垢、无裂纹、无擦痕，表面光滑。
图5为实施例4采用本发明的方法洗涤后盖片显微镜下观察示意图，显示无棕色、无污垢、无裂纹、无擦痕，表面光滑。
图6是使用实施例1方案洗涤盖片后用于全自动免疫组化染色仪染色效果示意图，组织全部染色，染色均匀，定位准确。
图7是采用实施例1的方法洗涤后盖片和采用对比例1的方法洗涤后盖片的肉眼观察对比示意图。
图8是采用对比例1的方法洗涤后盖片显微镜下观察一种示意图，盖片表面有棕色、有污垢、有裂纹。
图9是采用对比例1的方法洗涤后盖片显微镜下观察另一种示意图，盖片试剂滴加端有棕色、有污垢、有裂纹。
图10是采用对比例1的方法洗涤后盖片用于全自动免疫组化仪染色后效果示意图，组织部分区域不染色的假阴性。
图11是采用对比例2的方法洗涤后盖片肉眼观察的示意图，表面棕色和污垢大面积存在。
图12是采用对比例2的方法洗涤后盖片表面显微镜下观察的示意图，棕色和污垢大面积存在、大量擦痕。
图13是采用对比例2的方法洗涤后盖片试剂滴加端显微镜下观察的示意图，棕色和污垢大面积存在。
图14是采用对比例3的方法洗涤后盖片显微镜下观察盖片表面的示意图，表面存在少量棕色及污垢的碎屑。
图15是采用对比例3的方法洗涤后盖片试剂滴加端显微镜下观察盖片表面的示意图，试剂滴加端存在少量棕色及污垢的碎屑。
图16是采用对比例4的方法洗涤后盖片显微镜下观察盖片表面的一种示意图，显微镜下未见棕色、污垢，但表面出现细微裂纹，表面粗糙。
图17是采用对比例4的方法洗涤后盖片显微镜下观察盖片表面的另一种示意图，显微镜下未见棕色、污垢，但试剂滴加端出现细微裂纹，表面粗糙。
具体实施方式
为了更清楚地说明本发明，下面结合优选实施例对本发明做进一步的说明。本领域技术人员应当理解，下面所具体描述的内容是说明性的而非限制性的，不应以此限制本发明的保护范围。
本发明实施例所选用的材料：高锰酸钾，偏重亚硫酸钠，Tween_20，蒸馏水，84消毒液，70％乙醇，超声波清洗机，牙刷，无尘吸水布，密闭存放盒，盖片，玻片清洗挂架(仪器自带)。
本发明实施例所选用的主要设备：全自动免疫组化仪(GAS95)，医用烤箱，超声波清洗机。
实施例1
试剂配制1：高锰酸钾5g，蒸馏水500mL，配成1％高锰酸钾溶液500mL。
试剂配制2：偏重亚硫酸钠5g，蒸馏水500mL，配成1％偏重亚硫酸钠溶液500mL。
试剂配制3，Tween_20 15mL，蒸馏水985mL，配成1.5％Tween_20溶液1000mL。
方法：全自动免疫组化仪做完免疫组化检测后，用过的盖片用自来水冲洗容易冲掉的颜色和脏物，放入500mL蒸馏水中浸泡1min，沥干至不滴水后放入1％高锰酸钾溶液500mL静置1h，自来水冲洗至无高锰酸钾溶液颜色后在用水冲洗30s，放入蒸馏水500mL中浸泡1min，沥干至不滴水后放入1％偏重亚硫酸钠溶液500mL静置20min，自来水冲洗30s，放入盛有1.5％Tween_20溶液500mL的超声波清洗机中，清洗30min，清洗结束后用浓度为1.5％Tween_20溶液冲洗1min，用牙刷蘸1％Tween_20溶液轻轻刷洗盖片表面及边角，来回刷10次左右，然后用1.5％Tween_20溶液冲洗30s，并浸泡在1.5％Tween_20溶液500mL内10min，蒸馏水冲洗1min，沥干至不滴水，用无尘吸水布擦干后悬空挂于玻片清洗挂架上，放入医用烤箱，烤箱温度45℃烤10min，烤完及时放入密闭存放盒，保持环境干燥防尘。
实施例2
试剂配制1，高锰酸钾2.5g，蒸馏水500mL，配成0.5％高锰酸钾溶液500mL。
试剂配制2，偏重亚硫酸钠2.5g，蒸馏水500mL，配成0.5％偏重亚硫酸钠溶液500mL。
试剂配制3，Tween_20 10mL，蒸馏水990mL，配成1％Tween_20溶液1000mL。
方法：全自动免疫组化仪做完免疫组化检测后，用过的盖片用自来水冲洗容易冲掉的颜色和脏物，放入500mL蒸馏水中浸泡1min，沥干至不滴水后放入0.5％高锰酸钾溶液500mL静置1h，自来水冲洗至无高锰酸钾溶液颜色后在用水冲洗30s，放入蒸馏水500mL中浸泡1min，沥干至不滴水后放入0.5％偏重亚硫酸钠溶液500mL静置5min，自来水冲洗30s，放入盛有1％Tween_20溶液500mL的超声波清洗机中，清洗30min，清洗结束后用浓度为1％Tween_20溶液冲洗1min，用牙刷蘸1％Tween_20溶液轻轻刷洗盖片表面及边角，来回刷10次左右，然后用1％Tween_20溶液冲洗30s，并浸泡在1％Tween_20溶液500mL内静置10min，蒸馏水冲洗1min，沥干至不滴水，用无尘吸水布擦干后悬空挂于玻片清洗挂架上，放入医用烤箱，烤箱温度40℃烤20min，烤完及时放入密闭存放盒，保持环境干燥防尘。
实施例3
试剂配制1，高锰酸钾25g，蒸馏水500mL，配成5％高锰酸钾溶液500mL。
试剂配制2，偏重亚硫酸钠10g，蒸馏水500mL，配成2％偏重亚硫酸钠溶液500mL。
试剂配制3，Tween_20 100mL，蒸馏水900mL，配成10％Tween_20溶液1000mL。
方法：全自动免疫组化仪做完免疫组化检测后，用过的盖片用自来水冲洗容易冲掉的颜色和脏物，放入500mL蒸馏水中浸泡1min，沥干至不滴水后放入5％高锰酸钾溶液500mL静置1h，自来水冲洗至无高锰酸钾溶液颜色后在用水冲洗30s，放入蒸馏水500mL中浸泡1min，沥干至不滴水后放入2％偏重亚硫酸钠溶液500mL静置30min，自来水冲洗30s，放入盛有10％Tween_20溶液500mL的超声波清洗机中，清洗30min，清洗结束后用浓度为10％Tween_20溶液冲洗1min，用牙刷蘸1％Tween_20溶液轻轻刷洗盖片表面及边角，来回刷10次左右，然后用10％Tween_20溶液冲洗30s，并浸泡在10％Tween_20溶液500mL内静置10min，蒸馏水冲洗1min，沥干至不滴水，用无尘吸水布擦干后悬空挂于玻片清洗挂架上，放入医用烤箱，烤箱温度60℃烤5min，烤完及时放入密闭存放盒，保持环境干燥防尘。
实施例4
试剂配制1，高锰酸钾15g，蒸馏水500mL，配成3％高锰酸钾溶液500mL。
试剂配制2，偏重亚硫酸钠7.5g，蒸馏水500mL，配成1.5％偏重亚硫酸钠溶液500mL。
试剂配制3，Tween_20 50mL，蒸馏水950mL，配成5％Tween_20溶液1000mL。
方法：全自动免疫组化仪做完免疫组化检测后，用过的盖片用自来水冲洗容易冲掉的颜色和脏物，放入500mL蒸馏水中浸泡1min，沥干至不滴水后放入3％高锰酸钾溶液500mL静置1h，自来水冲洗至无高锰酸钾溶液颜色后在用水冲洗30s，放入蒸馏水500mL中浸泡1min，沥干至不滴水后放入1.5％偏重亚硫酸钠溶液500mL静置30min，自来水冲洗30s，放入盛有5％Tween_20溶液500mL的超声波清洗机中，清洗30min，清洗结束后用浓度为5％Tween_20溶液冲洗1min，用牙刷蘸1％Tween_20溶液轻轻刷洗盖片表面及边角，来回刷10次左右，然后用5％Tween_20溶液冲洗30s，并浸泡在5％Tween_20溶液500mL内10min，蒸馏水冲洗1min，沥干至不滴水，用无尘吸水布擦干后悬空挂于玻片清洗挂架上，放入医用烤箱，烤箱温度50℃烤10min，烤完及时放入密闭存放盒，保持环境干燥防尘。
对比例1
全自动免疫组化仪说明书盖片标准清洁方法：全自动免疫组化仪做完免疫组化检测后的盖片用84消毒液500mL浸泡10min，流水浸洗10min，将盖片浸入70％乙醇溶液500mL中1h，每6min搅拌一次。用无尘吸水布擦干，自然环境风干，在放入医用烤箱60℃干燥10min。
对比例2
全自动免疫组化仪做完免疫组化检测后的盖片直接自来水冲洗10min，无尘吸水布擦干，室内环境晾干。
对比例3
试剂配制1，高锰酸钾2g，蒸馏水500mL，配成0.4％高锰酸钾溶液500mL。
试剂配制2，偏重亚硫酸钠2g，蒸馏水500mL，配成0.4％偏重亚硫酸钠溶液500mL。
试剂配制3，Tween_20 9mL，蒸馏水991mL，配成0.9％Tween_20溶液1000mL。
方法：全自动免疫组化仪做完免疫组化检测后，用过的盖片用自来水冲洗容易冲掉的颜色和脏物，放入500mL蒸馏水中浸泡1min，沥干至不滴水后放入0.4％高锰酸钾溶液500mL静置1h，自来水冲洗至无高锰酸钾溶液颜色后在冲洗30s，放入蒸馏水500mL中浸泡1min，沥干至不滴水后放入0.4％偏重亚硫酸钠溶液500mL中静置4min，自来水冲洗30s，放入盛有0.9％Tween_20溶液500mL的超声波清洗机中，清洗30min，清洗结束后用浓度为0.9％Tween_20溶液冲洗1min，用牙刷蘸0.9％Tween_20溶液轻轻刷洗盖片表面及边角，来回刷10次左右，然后用0.9％Tween_20溶液冲洗30s，并浸泡在0.9％Tween_20溶液500mL内静置10min，蒸馏水冲洗1min，沥干至不滴水，用无尘吸水布擦干后悬空挂于玻片清洗挂架上，放入医用烤箱，烤箱温度39℃，烤5min，烤完及时放入密闭存放盒，保持环境干燥防尘。
对比例4
试剂配制1，高锰酸钾26g，蒸馏水500mL，配成5.2％高锰酸钾溶液500mL。
试剂配制2，偏重亚硫酸钠11g，蒸馏水500mL，配成2.2％偏重亚硫酸钠溶液500mL。
试剂配制3，Tween_20 101mL，蒸馏水899mL，配成10.1％Tween_20溶液1000mL。
方法：全自动免疫组化仪做完免疫组化检测后，用过的盖片用自来水冲洗容易冲掉的颜色和脏物，放入500mL蒸馏水中浸泡1min，沥干至不滴水后放入5.2％高锰酸钾溶液500mL静置1h，自来水冲洗至无高锰酸钾溶液颜色后在冲洗30s，放入蒸馏水500mL中浸泡1min，沥干至不滴水后放入2.2％偏重亚硫酸钠溶液500mL静置31min，自来水冲洗30s，放入盛有10.1％Tween_20溶液500mL的超声波清洗机中，清洗30min，清洗结束后用浓度为10.1％Tween_20溶液冲洗1min，用牙刷蘸10.1％Tween_20溶液轻轻刷洗盖片表面及边角，来回刷10次左右，然后用10.1％Tween_20溶液冲洗30s，并浸泡在10.1％Tween_20溶液500mL内静置10min，蒸馏水冲洗1min，沥干至不滴水，用无尘吸水布擦干后悬空挂于玻片清洗挂架上，放入医用烤箱，烤箱温度61℃烤21min，烤完及时放入密闭存放盒，保持环境干燥防尘。
以上实施例1～4和对比例1～4的洗涤方法的结果如下：
实施例1-4结果：洗涤后肉眼观察盖片恢复新购买时的颜色，无棕色、无污垢、无裂纹、无擦痕，表面光滑，如图1所示，图1为实施例1～4采用本发明的方法洗涤后盖片的示意图，从左至右依次为实施例1、实施例2、实施例3、实施例4的盖片。显微镜下观察盖片表面和试剂滴加端无异常棕色颜色、无污垢、无裂纹、无擦痕，表面平滑，如图2至图5所示，图2为实施例1采用本发明的方法洗涤后盖片显微镜下观察示意图，显示无棕色、无污垢、无裂纹、无擦痕，表面光滑。图3为实施例2采用本发明的方法洗涤后盖片显微镜下观察示意图，显示无棕色、无污垢、无裂纹、无擦痕，表面光滑。图4为实施例3采用本发明的方法洗涤后盖片显微镜下观察示意图，显示无棕色、无污垢、无裂纹、无擦痕，表面光滑。图5为实施例4采用本发明的方法洗涤后盖片显微镜下观察示意图，显示无棕色、无污垢、无裂纹、无擦痕，表面光滑。经洗涤后再次使用全自动免疫组化仪做完免疫组化检测，组织全部染色，染色均匀，定位准确，如图6所示，图6是使用实施例1方案洗涤盖片后用于全自动免疫组化染色仪染色效果示意图，组织全部染色，染色均匀，定位准确。
对比例1的结果：肉眼观察发现不能完全去除DAB染色成棕色的颜色、有污垢、有裂纹，和实施例1对比，实施例1明显好于对比例1，如图7所示，图7是采用实施例1的方法洗涤后盖片和采用对比例1的方法洗涤后盖片的肉眼观察对比示意图。对比例1在显微镜下观察发现盖片表面和试剂滴加端有棕色的颜色、有污垢、有裂纹，特别是滴加试剂突起端转折凹槽部位污垢不能清除，如图8和图9所示，图8是采用对比例1的方法洗涤后盖片显微镜下观察一种示意图，盖片表面有棕色、有污垢、有裂纹。图9是采用对比例1的方法洗涤后盖片显微镜下观察另一种示意图，盖片试剂滴加端有棕色、有污垢、有裂纹。经再次使用全自动免疫组化仪做完免疫组化检测，会影响检测，部分检测病例会导致局部或区域性显色失败的假阴性，如图10所示，图10是采用对比例1的方法洗涤后盖片用于全自动免疫组化仪染色后效果示意图，组织部分区域不染色的假阴性。
对比例2的结果：盖片肉眼观察表面棕色和污垢大面积存在，如图11所示，图11是采用对比例2的方法洗涤后盖片肉眼观察的示意图，表面棕色和污垢大面积存在。显微镜下观察表面棕色和污垢大面积存在，因无尘吸水布擦拭时由于棕色难以擦除，用力过猛，发现大量擦痕，如图12所示，图12是采用对比例2的方法洗涤后盖片表面显微镜下观察的示意图，棕色和污垢大面积存在、大量擦痕。显微镜下观察试剂滴加端棕色和污垢大面积存在，如图13所示，图13是采用对比例2的方法洗涤后盖片试剂滴加端显微镜下观察的示意图，棕色和污垢大面积存在，因试剂滴加端突起端转折凹槽部无尘洗吸水布无法擦到，故无擦痕。对比例2方案洗涤后影响后期制片质量，只能丢弃。
对比例3的结果：肉眼观察有棕色和污垢存在，颜色比洗涤前稍淡，污垢稍少，显微镜下观察盖片表面和试剂滴加端存在少量棕色及污垢的碎屑，如图14和图15所示，图14是采用对比例3的方法洗涤后盖片显微镜下观察盖片表面的示意图，表面存在少量棕色及污垢的碎屑。图15是采用对比例3的方法洗涤后盖片试剂滴加端显微镜下观察盖片表面的示意图，试剂滴加端存在少量棕色及污垢的碎屑。
对比例4的结果：盖片恢复新购买时的颜色，显微镜下未见棕色、污垢，但表面和试剂滴加端出现细微裂纹，表面粗糙，如图16和图17所示，图16是采用对比例4的方法洗涤后盖片显微镜下观察盖片表面的一种示意图，显微镜下未见棕色、污垢，但表面出现细微裂纹，表面粗糙。图17是采用对比例4的方法洗涤后盖片显微镜下观察盖片表面的另一种示意图，显微镜下未见棕色、污垢，但试剂滴加端出现细微裂纹，表面粗糙。影响染色质量，只能丢弃。
讨论
免疫组化染色是现在病理常规项目，全自动免疫组化仪逐渐替代手工和半自动免疫组化仪的病理科越来越多，使染色程序得到规范化(丁伟,王德田.简明病理学技术[M].杭州:浙江科学技术出版社,2014:33,157-158)，对于病理诊断十分重要。现各大厂家提供的大部分全自动免疫组化仪使用中需要盖片来稳定试剂平均铺开。当一张盖片用几次后颜色被DAB显色剂染成棕色，表面和转折凹槽处制片后留下大量污垢，影响以后制片质量，使试剂不能在载有被检测组织玻片上均匀铺开，发生局部圆形和椭圆形或区域性显色失败的假阴性，直接导致诊断困难或诊断错误并给临床下一步治疗带来误导性。轻者重新制片浪费试剂，重者误诊，引起纠纷。
盖片介绍：盖片大小84mm×3.2mm×4mm，依次分为：手持端、玻片覆盖区、试剂滴加端，分上下两面，“玻片覆盖区”的下面平整光滑，与玻片形成细微缝隙，有利试剂覆盖。分左右两端，一端为“手持端”，另一端为“试剂滴加端”，“试剂滴加端”有一长约3mm形如铅笔尖样突起，试剂滴加至“试剂滴加端”向两边分开，起到进一步平均分布试剂的作用。盖片是全自动免疫组化仪制片的关键装置，用于控制试剂滴加后均匀平铺于玻片，让玻片上被检测的组织切片都能全部覆盖到试剂，保证检测的准确性，厂家的此设计以求达到最佳染色效果。将玻片放到玻片架上后，把盖片放置于除贴标签外的玻片上方，卡在玻片架上，“试剂滴加端”对准玻片贴标签端，和玻片架上的玻片表面保持细微的空隙，能让100-150μL试剂铺满玻片有效部位的中间1/2(玻片贴标签占玻片的1/3，为无组织、无效区)。盖片使用后，表面和转折凹槽处会有一定污垢，包括：少量石蜡油迹残留、组织碎屑、苏木素残留、DAB显色液染色成棕色并结合牢固，按照全自动免疫组化仪GAS95说明书建议盖片使用10次丢弃，或按照说明书洗涤后使用次数不超过25次，并且厂家提供的洗涤方案不能完全去除DAB染色成棕色颜色和污垢，特别是“试剂滴加端”转折凹槽部位污垢不能清除，影响制片，如直接丢弃，成本高造成浪费。
实施例1-4洗涤方案的优点1：褪色彻底，通过高锰酸钾溶液的氧化和偏重亚硫酸钠溶液的还原后，盖片恢复本来颜色，表面光亮平整。优点2：去污能力强，通过褪色后，污垢用无尘吸水布比较容易去除，但在凹槽处的污垢还是不能完全去除，放入盛有1～10％Tween_20溶液500mL的超声波清洗机中，清洗30min，清洗结束后用浓度为1～10％Tween_20溶液冲洗1min,，使盖片表面及凹槽处边角清洗干净。通过牙刷的刷洗后有效清除，Tween_20有亲水和去污效果，用1％Tween_20溶液冲洗，有利于进一步清除经过牙刷刷洗产生浮动的污垢和细颗粒物。优点3：延长盖片使用寿命，厂家推荐使用寿命10-25次，经8个月实验，现每片盖片做到360次仍然保持表面平整不开裂，制片效果好，还在继续使用中。优点4：节约成本，1)盖片成本，盖片一盒30片，售价为453元人民币，按一天做两批次，一批30片，现每片盖片做到360次算，盖片一年节约约1.3-3.2万元人民币。2)试剂成本，免疫组化试剂昂贵，如果染色失败或是染色质量问题导致诊断困难，会要求重新染色，其经济损失巨大。按照此盖片清洗步骤清洗，盖片干净，使免疫组化染色质量提高，直接挽回经济损失。
对比例存在的问题1：对比例1是厂家说明书推荐的洗涤方案，在用84消毒液和乙醇溶液无法消除DAB显色液引起的棕色和污垢，因试剂滴加端突起端转折凹槽部无尘洗吸水布无法擦到，留下大量棕色和污垢，并用烤箱60摄氏度烤制时间过长，导致盖片裂纹产生。问题2：对比例2只是一般的水洗和擦拭，只能去掉浮动的碎屑和液状染料，无法去除结合牢固的DAB显色液染色的棕色和结合牢固的污垢。并在用力试图擦掉的情况下，造成盖片表面的损伤，留下擦痕。同对比例1一样，也无法擦拭到试剂滴加端突起端转折凹槽部，留下大量棕色和污垢，但对比例2不用消毒剂、乙醇和烤箱，所以没有产生裂纹现象。问题3：对比例3试剂配制用量小和洗涤时间不够充分，所以还是会留下少许棕色和污垢，虽对继续使用不会造成太大影响，但长时间后越积越多，对染色质量产生不确定因素，故不推荐。问题4：对比例4由于试剂的配制用量大、洗涤时间过长，高锰酸钾是氧化剂，时间太长对盖片产生影响，10.1％Tween_20溶液浓度过高，不易洗涤多余的10.1％Tween_20溶液。在烤箱温度加大，时间增加的情况下，盖片产生了大量裂纹，造成损坏只能丢弃。
通过实施例和对比例的实验对比，实施例的洗涤方案洗涤的盖片恢复新购买时的颜色和清洁度，延长使用寿命，保证制片质量，间接加快了制片和诊断速度并节约成本，值得推广。
以上所述仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，虽然本发明已以较佳实施例揭露如上，然而并非用以限定本发明，任何熟悉本专利的技术人员在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用上述提示的技术内容作出些许更动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明方案的范围内。
Claims (9)
1.一种全自动免疫组化仪盖片的洗涤方法，其特征在于，包括以下步骤：全自动免疫组化仪做完免疫组化检测后的盖片用自来水冲洗表面干净后，依次用浓度为0.5～5％的高锰酸钾溶液、浓度为0.5～2％偏重亚硫酸钠溶液、用浓度为1～10％Tween_20溶液冲洗，获得清洗干净的全自动免疫组化仪盖片。
2.根据权利要求1所述的全自动免疫组化仪盖片的洗涤方法，其特征在于，包括以下步骤：全自动免疫组化仪做完免疫组化检测后的盖片用自来水冲洗表面干净后，然后放入蒸馏水中浸泡，沥干至不滴水，加入浓度为0.5～5％的高锰酸钾溶液静置，自来水冲洗至无高锰酸钾溶液颜色后再用水冲洗，放入蒸馏水中浸泡，沥干至不滴水后放入浓度为0.5～2％偏重亚硫酸钠溶液静置，自来水冲洗，放入盛有浓度为1～10％Tween_20溶液的超声波清洗机中清洗，然后用浓度为1～10％Tween_20溶液冲洗，用牙刷蘸浓度为1～10％Tween_20溶液轻轻刷洗盖片表面及边角，来回刷，然后用浓度为1～10％Tween_20溶液冲洗，并浸泡在浓度为1～10％Tween_20溶液中静置，蒸馏水冲洗，沥干至不滴水，擦干后悬挂，在温度为40～60℃的条件下烘烤5～20min，获得清洗干净的全自动免疫组化仪盖片。
3.根据权利要求2所述的全自动免疫组化仪盖片的洗涤方法，其特征在于，包括以下步骤：全自动免疫组化仪做完免疫组化检测后的盖片用自来水冲洗表面干净后，然后放入500mL蒸馏水中浸泡1min，沥干至不滴水，加入浓度为0.5～5％的高锰酸钾溶液500mL静置1h，自来水冲洗至无高锰酸钾溶液颜色后再用水冲洗30s，放入蒸馏水500mL中浸泡1min，沥干至不滴水后放入浓度为0.5～2％偏重亚硫酸钠溶液500mL静置1～30min，自来水冲洗30s，放入盛有浓度为1～10％Tween_20溶液500mL的超声波清洗机中，清洗30min，清洗结束后用浓度为1～10％Tween_20溶液冲洗1min，用牙刷蘸浓度为1～10％Tween_20溶液轻轻刷洗盖片表面及边角，来回刷10次左右，然后用浓度为1～10％Tween_20溶液冲洗30s，并浸泡在浓度为1～10％Tween_20溶液500mL内10min，蒸馏水冲洗1min，沥干至不滴水，擦干后悬挂，在温度为40～60℃的条件下烘烤5～20min，获得清洗干净的全自动免疫组化仪盖片。
4.根据权利要求2所述的全自动免疫组化仪盖片的洗涤方法，其特征在于，所述高锰酸钾溶液是用高锰酸钾和蒸馏水混合制备而成。
5.根据权利要求2或3所述的全自动免疫组化仪盖片的洗涤方法，其特征在于，所述高锰酸钾溶液的浓度为0.5％、1％、3％、5％。
6.根据权利要求2所述的全自动免疫组化仪盖片的洗涤方法，其特征在于，所述偏重亚硫酸钠溶液是用偏重亚硫酸钠和蒸馏水混合制备而成。
7.根据权利要求2或3所述的全自动免疫组化仪盖片的洗涤方法，其特征在于，所述偏重亚硫酸钠溶液的浓度为0.5％、1％、1.5％、2％。
8.根据权利要求2所述的全自动免疫组化仪盖片的洗涤方法，其特征在于，所述Tween_20溶液是用Tween_20和蒸馏水混合制备而成。
9.根据权利要求2或3所述的全自动免疫组化仪盖片的洗涤方法，其特征在于，所述Tween_20溶液的浓度为1％、1.5％、5％、10％。
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Legal Events
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|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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