CN110398401A - 一种液基薄层细胞制片的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种液基薄层细胞制片的方法；所述方法包括：将预处理后的样本逐个放入板条，并将板条逐个上机；转移样本至转样杯；对转样杯中的样本进行样本处理；处理后的样本加样至沉降仓，静置沉降，吸去上清；巴氏染色；将巴氏染色后的玻片转移出沉降仓，液体封片。本发明优化了制片的步骤，增加了样本处理的过程，冲洗红细胞去除，换缓冲液加PBS，磁珠去除大部分白细胞干扰等步骤，大大提高了制片的质量。

Description

一种液基薄层细胞制片的方法
技术领域
本发明涉及一种液基薄层细胞制片的方法。
背景技术
妇女发展纲要(2011-2020)宫颈癌筛查覆盖率需达到80％，基于我国女性人口总数约6.5亿，30％从来没有进行过筛查的事实基础，目前筛查率远低于这一水平。主要是因为手工操作多，敏感性差，特异性差等问题。
液基薄层细胞检测工作原理为通过采集阴道或宫颈分泌物，获得脱落细胞后浸入液基细胞处理试剂中进行处理，试剂中的裂解成分能对红细胞进行裂解，去除红细胞对检验结果造成的干扰；同时试剂中的固定成分能保存固定白细胞、脱落上皮细胞等有价值的细胞；并使包裹在黏液中的有效细胞充分分离出来，防止有价值细胞的丢失。将有效细胞制备成细胞悬液，最后通过过滤离心方法清除黏液对制片的干扰，制成脱落细胞薄片。可用HE染色、巴氏染色或其他免疫组织化学染色等方法使细胞着色，再通过人工观察分析来检查阴道或宫颈的细胞形态，诊断子宫颈癌及其癌的前期变化、人乳头瘤病毒和单纯疱疹病毒感染。其中，液基细胞制片是后续染色及诊断的基础保障，只有合格的涂片才能正确反映病理状态，帮助医生做出正确诊断。
通过对现有专利文献的检索发现，申请号201110056356.3的中国发明专利申请公开了一种自动制作液基细胞的制片方法；其通过分离细胞、过滤沉降、提取细胞液、离心制片步骤，可在一台设备上进行自动制片，其自动化程度高，省时、省工、快速、高效。制片数量灵活，可一次制作多个玻片，适用范围广，自动精确地确定细胞提取量，细胞层薄，一致性好，背景干净，保证了玻片上的细胞转移数量均匀和一致性。然而，该方法并没有对样本进行处理，这时样本中依然有很多的白细胞和红细胞，影响观察。并且这里制片结束，没有实现染色和封片，没有真正实现整个流程的自动化。
发明内容
本发明的目的在于克服上述现有技术存在的不足，提供一种液基薄层细胞制片的方法。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
本发明涉及一种液基薄层细胞制片的方法，所述方法包括如下步骤：
S1、将预处理后的样本逐个放入板条，并将板条逐个上机；
S2、转移样本至转样杯；对转样杯中的样本进行样本处理；
S3、处理后的样本加样至沉降仓，静置沉降，吸去上清；
S4、巴氏染色；
S5、将巴氏染色后的玻片转移出沉降仓，液体封片。
优选的，步骤S1中，所述预处理包括样本整理、摆放、扫码。
优选的，步骤S2中，所述样本处理包括37℃孵育，反应体系切换，冲洗红细胞去除，换PBS缓冲液，加入磁珠去除白细胞干扰。
目前现有技术中，液基薄层细胞制片时通常做法是不做任何处理，这样就造成了样本中原本存在的红细胞和白细胞会干扰制片质量或者增加操作难度。
优选的，所述37℃孵育的时间为8-12min。
优选的，所述反应体系切换为生理盐水体系。
优选的，所述冲洗红细胞去除采用的冲洗液为生理盐水；冲洗时间为3-5min。
优选的，步骤S4中，所述巴氏染色包括如下步骤：
A1、步骤S3中样本静置沉降，吸去上清后置入无水乙醇或异丙醇8-12秒；
A2、置入PH7.8tris缓冲液3-8秒；
A3、置入苏木素染液2-6分钟；
A4、置入PH7.8tris缓冲液0.8-1.2分钟；
A5、置入无水乙醇或异丙醇，重复2遍；
A6、置入EA-OG混合染液2-6分钟；
A7、置入无水乙醇或异丙醇8-12秒，重复2遍；
A8、置于二甲苯8-12秒，重复2遍；
A9、湿封片。
优选的，步骤S5中，巴氏染色后的玻片转移出沉降仓后，自动清洁臂清洗沉降仓。实现了重复利用沉降仓。
优选的，步骤S5中，所述的液体封片采用的封片试剂为紫外光固化胶。也就是说，所述的液体封片是在紫外照射条件下凝固完成封片的。
目前传统封片，采用的技术都是盖玻片封片，市场上面没有采用液体封片技术。主要原因有：1.在医学封片上，传统都是用的盖玻片封片。2.盖玻片封片方法，手工操作时，比较简单，但是在仪器上，不容易实现。本发明采用液体封片，使得全面实现了可自动化的操作。
与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：
1.优化了制片的步骤，增加了样本处理的过程，冲洗红细胞去除，换缓冲液加PBS，磁珠去除大部分白细胞干扰等步骤，大大提高了制片的质量；
2.全面实现了可自动化的操作；
3.独特的清洗沉降仓的步骤设计(目前市场的同类都是一次性的沉降仓，用完即抛弃，本发明采用的是清洗沉降仓，重复利用沉降仓的设计)，节省了耗材的消耗；节省了资源；
4.优化了过程中的巴氏染色过程；
5.封片步骤，采用了液体封片的方法，在行业属于独创；具体而言，传统封片方法是：手工封片，手工在样本滴加中性树脂，并手工将盖玻片盖在样本上；而本发明的液体封片的方法是指：滴加液体封片液，即：紫外固化胶，再用紫外灯照射，液体封片液本身有晶紫外照射，固化的特性；采用这种方法，易于规范化实现自动化。
附图说明
通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本发明的其它特征、目的和优点将会变得更明显：
图1为转移样本至转样杯工序的设备示意图；
图2为自动巴氏染色工序的设备示意图；
图3为液体封片工序的设备示意图；
图4为本发明制片方法制得的得到的宫颈细胞液基片1的显微照片；
图5为本发明制片方法制得的得到的宫颈细胞液基片2的显微照片；
图6为本发明制片方法制得的得到的宫颈细胞液基片3的显微照片；
图7为本发明制片方法制得的得到的宫颈细胞液基片4的显微照片；
图8为本发明制片方法制得的得到的宫颈细胞液基片5的显微照片；
图9为省略步骤4的样本处理后得到的宫颈细胞液基片1的显微照片；
图10为省略步骤4的样本处理后得到的宫颈细胞液基片2的显微照片；
图11为省略步骤4的样本处理后得到的宫颈细胞液基片3的显微照片；
图12为省略步骤4的样本处理后得到的宫颈细胞液基片4的显微照片；
图13为省略步骤4的样本处理后得到的宫颈细胞液基片5的显微照片；
其中，1为样本杯，2为转样臂，3为转样针，4为试剂臂，5为试剂针，6为沉降仓，7为玻片，8为封片剂臂，9为封片剂针，10为玻片导轨10。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干调整和改进。这些都属于本发明的保护范围。
实施例1
本实施例涉及一种液基制片的方法，用于病理分析前对人体细胞标本(本实施例中为宫颈分泌物细胞)的制片；由以下步骤组成，是专为病理、临床、疾控、质检、质量部门的各类专业实验室的自动化制片而设计：
步骤1、样本预处理：样本整理，重新摆放，扫码等预处理步骤；
步骤2、板条式上机：将样本逐个放入板条，并将板条逐个上机；
步骤3、转移样本至转样杯：如图1所示，转样臂2会移动转样针3进行吸取样本，并将样本吐液至样本杯1中；
步骤4、转样杯中的样本处理：37度孵育，反应体系切换，冲洗去除红细胞残留，加PBS缓冲液，加磁珠试剂去除大部分白细胞干扰；
步骤5、加样：将步骤4处理后的样本，经加样臂上的加样针吸取转运至沉降仓中，丢弃转样杯；然后仪器自动清洗加样针，或者更换TIP；
步骤6、静置沉降：使样本中的细胞(目标物)沉降至沉降仓的底部；
步骤7、吸去上清：吸去沉降后的上清液；
步骤8、巴氏染色：如图2所示，试剂臂4会通过转移试剂针5，对沉降仓6下方的玻片7上静置沉降的细胞依次进行以下处理：
8.1制片结束后直接置入无水乙醇/异丙醇10秒；
8.2然后置入tris缓冲液(PH7.8)5秒；
8.3置入苏木素染液(夏天3分钟，冬天5分钟)；
8.4tris缓冲液(PH7.8)1分钟；
8.5无水乙醇或异丙醇，过2遍；
8.6置入EA/OG混合液(夏天3分钟，冬天5分钟)；
8.7无水乙醇/异丙醇10秒，2遍；
8.8二甲苯(环保透明剂)10秒，2遍；
步骤9、转移玻片：清洗沉降仓，自动清洁臂清洗沉降仓；
步骤10、液体封片：如图3所示，玻片导轨10将巴氏染色处理后的玻片7移至液体封片工序，封片剂臂8通过封片剂针9在玻片7上加封片试剂(紫外光固化胶)，紫外照射凝固完成封片；
步骤11、转移至阅片步骤。
本实施例中采用上述步骤重复了五次，获得的液基片如图4-8所示；由图4-8可知，均为单层细胞，均匀性好，一致性高。作为对照，省略上述步骤4的样本处理，其余步骤均相同；同样重复五次，获得的液基片如图9-13所示；由图9-13可知，细胞堆叠严重，均匀性差，透明度低。
以上对本发明的具体实施例进行了描述。需要理解的是，本发明并不局限于上述特定实施方式，本领域技术人员可以在权利要求的范围内做出各种变形或修改，这并不影响本发明的实质内容。

Claims (9)

1.一种液基薄层细胞制片的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
S1、将预处理后的样本逐个放入板条，并将板条逐个上机；
S2、转移样本至转样杯；对转样杯中的样本进行样本处理；
S3、处理后的样本加样至沉降仓，静置沉降，吸去上清；
S4、巴氏染色；
S5、将巴氏染色后的玻片转移出沉降仓，液体封片。
2.如权利要求1所述的液基薄层细胞制片的方法，其特征在于，步骤S2中，所述样本处理包括37℃孵育，反应体系切换，冲洗红细胞去除，换PBS缓冲液，加入磁珠去除白细胞干扰。
3.如权利要求2所述的液基薄层细胞制片的方法，其特征在于，所述37℃孵育的时间为8-12min。
4.如权利要求2所述的液基薄层细胞制片的方法，其特征在于，所述反应体系切换为生理盐水体系。
5.如权利要求2所述的液基薄层细胞制片的方法，其特征在于，所述冲洗红细胞去除采用的冲洗液为生理盐水；冲洗时间为3-5min。
6.如权利要求1所述的液基薄层细胞制片的方法，其特征在于，步骤S1中，所述预处理包括样本整理、摆放、扫码。
7.如权利要求1所述的液基薄层细胞制片的方法，其特征在于，步骤S4中，所述巴氏染色包括如下步骤：
A1、步骤S3中样本静置沉降，吸去上清后置入无水乙醇或异丙醇8-12秒；
A2、置入PH7.8 tris缓冲液3-8秒；
A3、置入苏木素染液2-6分钟；
A4、置入PH7.8 tris缓冲液0.8-1.2分钟；
A5、置入无水乙醇或异丙醇，重复2遍；
A6、置入EA-OG混合染液2-6分钟；
A7、置入无水乙醇或异丙醇8-12秒，重复2遍；
A8、置于二甲苯8-12秒，重复2遍；
A9、湿封片。
8.如权利要求1所述的液基薄层细胞制片的方法，其特征在于，步骤S5中，巴氏染色后的玻片转移出沉降仓后，自动清洁臂清洗沉降仓。
9.如权利要求1所述的液基薄层细胞制片的方法，其特征在于，步骤S5中，所述的液体封片采用的封片试剂为紫外光固化胶。
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