CN108896376A - 改进的he染色方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种HE染色方法，该方法包括在电磁搅拌下，在41～44℃的温度下，对切片进行脱蜡、复水及苏木素染色的步骤。本发明的方法使脱蜡、复水和苏木素染色步骤均在升高的温度下进行，并配合电磁搅拌，使染色速度大大加快。而且，各步骤中的搅拌和温度条件一致，可在同一恒温设备中顺序进行，方便了操作，更便于染色质量的控制和获得一致性的染色效果。
Description
技术领域
本发明涉及组织切片染色的方法，特别涉及苏木素-伊红染色的方法。
背景技术
苏木素-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining)，简称HE染色，是石蜡切片技术里常用的染色方法之一。苏木素染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与细胞质内的核酸着蓝紫色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。现有技术虽然存在HE染色方法，但染色时间长。
已知，升高温度可以加快苏木精的氧化与着色速度。已有报道，在大约30-40℃的温度下进行染色，可加快染色速度。但是染色温度也不能过高，否则将导致着色过深(陈锦等，现代肿瘤医学，2015.5，Vol.23，No.9:1193-1195)。
此外，中国专利CN205172793U中公开了一种病理组织染色机。该装置可对苏木素染色缸和返蓝缸进行加温，并且苏木素染色缸的底部还设置了超声波振动器，可进行超声波振动以进一步加快染色。
中国专利申请CN107490511A中公开了一种苏木素染色液及HE染色方法。其中公开了在30～50℃下进行脱蜡步骤和在30～40℃下进行苏木素染色和分化的方法，但是该方法仅仅给出了温度范围，并没有进一步讨论不同温度对染色的影响。
然而，由于HE染色都需要进行脱蜡、复水、苏木素染色、分化、返蓝、伊红染色、脱水、透明化等繁琐步骤，仅对一两个步骤升温，虽然在一定程度上加快染色了，但是这样增加了方法整体的复杂程度，各步骤间存在加热或不加热，或者加热温度不一致的要求，需要多个加热设备和更大的操作空间，也增加了造成染色质量不能保持一致的人为因素。因此，该方法整体仍有在保证染色质量的前提下进一步加快速度的需求。
发明内容
针对上述问题，本发明的目的是提供一种快速、方便、不易掉片且染色质量好的染色方法。
因此，本发明提供了一种HE染色方法，该方法包括：
在电磁搅拌下，在41～44℃的温度下，对切片进行脱蜡、复水及苏木素染色的步骤。
根据一种优选的实施方式，所述电磁搅拌的转速可为800～1300rpm，优选为900～1200rpm，且所述温度可为42～43℃；最优选，所述电磁搅拌的转速为1000rpm，且所述温度为42℃。
针对伊红染色后需要进行脱水和透明化步骤的情况，本发明的方法可进一步包括在转速为800～1300rpm的电磁搅拌下和在41～44℃的温度下，对经苏木素-伊红染色后的切片进行脱水和透明化的步骤。
根据一种优选的实施方式，所述脱水和透明化的步骤在电磁搅拌的转速可为900～1200rpm，且所述温度为42～43℃的条件下进行；最优选，所述电磁搅拌的转速为1000rpm，且所述温度为42℃。
根据一种实施方式，所述脱蜡、复水及苏木素染色步骤在同一恒温温度下进行。优选地，上述步骤同时在同一转速下进行。
进一步地，所述脱蜡、复水、苏木素染色、脱水和透明化的步骤均在同一温度下进行。优选地，所述脱蜡、复水、苏木素染色、脱水和透明化的步骤均在同一电磁搅拌转速下进行。
在一些优选实施方式中，所有需加热的步骤都在同一温度和/或电磁搅拌转速下进行，因而所有步骤可在同一恒温箱中和同一电磁搅拌设备上完成，简化了步骤和设备，也方便了操作者，因而有利于进一步加快染色。
根据优选方法，上述加热步骤中各试剂置于密闭容器中预先恒温。
根据本发明更具体的HE染色方法，其中所述脱蜡步骤包括用至少三份脱蜡剂分别处理70～120秒，优选为90秒；和所述复水步骤包括用浓度在100％～85％之间逐步降低的至少三份乙醇溶液分别处理约50～70秒，优选为60秒。
所述苏木素染色优选进行3.5～4.5分钟，优选为4分钟。
所述脱水步骤优选地包括用浓度在85％～100％之间逐步升高的至少三份乙醇溶液分别处理约50～70秒，优选为60秒；且所述透明化步骤包括用至少两份透明剂分别处理70～120秒，优选为90秒。
脱蜡剂、透明剂通常为二甲苯。因二甲苯有一定毒性，因此已开发了很多二甲苯替代品，例如：美国National Diagnotics公司Histo-Clear II环保型组织透明剂II、上海宏兹实业的H-H0101型标本处理液、东振化工有限公司的TO(主要成分为松节油)、上海华壹生物科技有限公司的Van-Clear环保透明剂等，但不限于此。这些脱蜡/透明剂可同样用于本发明。优选使用环境友好的脱蜡/透明剂。
用于复水和脱水的梯度乙醇溶液通常使用的是1～3份100％乙醇和1～3份梯度乙醇溶液，如95％乙醇溶液、90％乙醇溶液和85％乙醇溶液中的一种或多种。通常总共使用3～6份梯度乙醇溶液来完成复水和脱水。
根据本发明，所述的HE染色方法，进一步包括在苏木素染色后，在室温下，对所述切片在盐酸酒精中分化、随后在流水中进行返蓝以及在伊红溶液中染色的步骤。
可用于本发明的伊红可以是水溶性的，也可是醇溶性的。使用水溶性伊红可省略后面的脱水和透明化步骤，可进一步加快HE染色。根据本发明无论使用水溶性还是醇溶性的伊红均可获得良好的染色效果。
本发明的方法使复杂的脱蜡步骤和苏木素染色步骤均在升高的温度下进行，并且配合电磁搅拌，使染色速度大大加快，整体染色时间缩短到仅需约18～25分钟。而且脱蜡和苏木素染色的搅拌和温度条件一致，可在同一恒温设备中顺序进行，方便了操作，更便于染色质量的控制和获得一致性的染色效果。
附图说明
图1示出了根据实施例1制备的切片的显微镜照片，其中A～D分别为在37℃、41℃、43℃和45℃条件下染色的切片的显微镜照片。
图2示出了根据实施例3制备的切片的显微镜照片，其中A～C分别为在搅拌转速为800rpm(A)、1000rpm(B)和1200rpm(C)条件下染色的切片的显微镜照片。
图3为示出了根据实施例3制备的切片的显微镜照片，其中A～C分别为在42℃、1000rpm(A)；室温、1000rmp(B)；42℃、无搅拌(C)；室温、无搅拌(D)条件下染色的切片的显微镜照片。
图4为示出了根据实施例4制备的同一蜡块切下的切片照片，其中A～B分别为在42℃、1000rpm电磁搅拌条件下(A)和42℃、59KHz超声振动条件下(B)染色的切片照片。
图5为示出了根据实施例4制备的切片的显微镜照片，其中A～C分别为在42℃、1000rpm电磁搅拌条件下(A)和42℃、59KHz超声振动条件下(B、C)染色的切片的显微镜照片。
具体实施方式
周知，HE染色在制得切片后需经历脱蜡、复水、苏木素染色、分化、返蓝、伊红染色、脱水和透明化等繁琐步骤。常规的染色在室温下进行，受环境温度的影响，以及操作者的经验不同，都会对染色质量产生影响。
在这些步骤中，通常认为升高温度可加快苏木素的染色，但是过高的温度会导致苏木素染色过深。现有的一些报道中通常对个别步骤采用在升高的温度下进行，这造成HE染色各步需在不同的温度下进行。而且对染色进程的加快程度有限。
还有一些方法中公开了采用超声振动来进一步加快染色剂的分子运动，以加快染色。但是本发明人发现，这样的方法会造成严重的掉片。
本发明人对整个HE染色过程的大部分步骤在升高温度下，特别在增加搅拌的条件下对染色质量的控制进行了研究。发现在特定的温度和搅拌条件下，可以实现最优的染色效果和最短的染色时间。而且对大部分步骤可使用同样温度和搅拌条件，这不仅简化了整个HE染色的操作，还使染色质量更容易控制，从而能使各批次染色的效果更为一致。
以下通过具体实施例来进一步说明本发明的效果。
实验仪器：
切片机(武汉俊杰JJQ-P3016)；
生物组织摊烤片机(武汉俊杰JK-6)；
恒温水浴箱(HH-VS-B)；
超声仪(上海冠特)；
恒温磁力搅拌器(上海精科，90-1)；
显微镜(奥林巴斯，bx53)。
实验试剂：
标本前处理液(二甲苯替代品，上海宏兹实业，H-H0101)；
苏木素(中衫金桥，批号15102001)；
水溶性伊红(中衫金桥，批号20170222)或醇溶性伊红(中衫金桥，批号20170222)。
实验材料：
随机选取12个石蜡包埋块，并随机编号为1-12。将切片机的切片厚度调至3μm，将1-12号蜡块每一个连续切片50张蜡片，同一个蜡块的蜡片编为相同的编号，烤干待用。实验前收取编号为1-12的一张蜡片，在生物组织摊烤片机里烘烤十分钟待用。
实验步骤：
方法1、采用醇溶性伊红进行染色的步骤
将水浴箱温度调为预订温度，将盛有标本前处理液(×3)、100％乙醇(×3)、95％乙醇水溶液(×2)、90％乙醇水溶液(×1)、85％乙醇水溶液(×1)和苏木素染色液(×1)的染色缸均放入水浴箱中。
在各染色缸中放入搅拌磁子。
脱蜡：
将烘烤完成的放有蜡片的染色架放入第一缸标本前处理液中，并将染色缸放在恒温磁力搅拌器上，将转速调为预订速度，处理1.5min。
将该第一缸标本前处理液放回水浴箱，同时将完成脱蜡第一步的染色架放入第二缸标本前处理液中，同样在恒温磁力搅拌器上，将转速调为预订速度，处理1.5min。
将该第二缸标本前处理液放回水浴箱，同时将完成脱蜡第二步的染色架放入第三缸标本前处理液中，同样在恒温磁力搅拌器上，将转速调为预订速度，处理1.5min。
复水：
接着以同样的方式依次用无水乙醇、无水乙醇、95％乙醇进行复水处理，分别在恒温磁力搅拌器上，在预订转速下处理1min。
将染色架取出，过水。
苏木素染色：
将过水的染色架放入苏木素染色缸中，并在磁力搅拌器上，在预订转速下处理4min。
分化和返蓝：
将染色架取出，过水洗净苏木素，至盐酸酒精中分化，再置于流水中返蓝7min。
伊红染色：
将染色架取出，放入醇溶性伊红中染色5～10秒。
脱水：
将经过伊红染色的染色架取出，依次放入75％、85％、95％和100％乙醇中，并分别在磁力恒温搅拌器上，在预订转速下处理1min。
透明化：
将染色架取出，放入第一缸二甲苯中，在磁力恒温搅拌器上，在预订转速下处理1.5min。
接着，放入第二缸二甲苯中，在磁力恒温搅拌器上，在预订转速下处理1.5min。
最后用中性树胶封片。
不计入冲洗时间的染色总时长为约25.5分钟。
方法2、采用水溶性伊红进行染色的步骤
按以上方法1的步骤完成苏木素染色、分化和返蓝后进行以下步骤：
将染色架取出，放入伊红溶液中染色5～10秒，再用水洗净伊红残液，冷风吹干，中性树胶封片。
不计入冲洗时间的染色总时长为约18.5分钟。
实施例1：不同温度对HE染色效果的影响
按上述方法2(流程总时长18.5分钟)进行14组实验，其中各组实验中水浴箱的温度分别设定在30℃、35℃、37℃、40℃、41℃、42℃、43℃、44℃、45℃、46℃、47℃、48℃、49℃和50℃，电磁搅拌转速固定为1000rpm。结果如下表1所示。
表1：温度对染色效果的影响
由上表可见，在一个相同的转速(1000rpm)下，温度的升高对切片的掉片没有明显影响。进一步参考图1，可以看到在低于41℃时苏木素着色较浅(B)，在低于37℃(A)时在高倍镜下有视野模糊的现象，是因为脱蜡没有完全的原因，在高于44℃(D)时有苏木素染色过深的现象，而在42～43℃(C)时，苏木素染色适中。
实施例2：不同温度对HE染色效果的影响
按上述方法1(流程总时长25.5分钟)进行14组实验，其中各组实验中水浴箱的温度分别设定在30℃、35℃、37℃、40℃、41℃、42℃、43℃、44℃、45℃、46℃、47℃、48℃、49℃和50℃，电磁搅拌转速固定为1000rpm。结果如下表2所示。
表2：温度对染色效果的影响
由上表可见，对伊红染色后的脱水和透明化步骤在加热和搅拌条件下进行取得了与实施例1类似的效果。即，在一个相同的转速(1000rpm)下，温度的升高对切片的掉片没有明显影响；在低于41℃时苏木素着色较浅，在低于37℃时在高倍镜下有视野模糊的现象，是因为脱蜡没有完全的原因，在高于44℃(D)时有苏木素染色过深的现象，而在42～43℃时，苏木素染色适中。
实施例3：不同转速对于HE染色效果的影响
按上述方法2(流程总时长18.5分钟)进行五组实验，其中水浴箱的温度固定为42℃，各组实验中电磁搅拌转速分别设定为800rpm、900rpm、1000rpm、1100rpm、1200rpm。结果如下表3所示。
表3转速对染色效果的影响
在一个相同的温度下，转速的升高对掉片没有明显影响。结合图2，可以看出在低于900rpm(A)时，苏木素着色较浅，在高于1100rpm(C)时，苏木素着色较深。在42℃下，优选的转速为900-1100rpm(B)，着色适中。
用伊红水溶液按照方法1充分该实验，获得了类似的效果。
实施例4：对比室温和无搅拌条件下处理时间不变时的染色效果
按上述方法2进行4组实验，其中各组实验中的条件如下表4所示。另外，作为对比，在室温无搅拌的条件下按照方法2进行实验，但是各步骤的时间根据常规的经验做法进行，具体地，不同之处在于脱蜡处理分别进行5分钟，复水处理分别进行3分钟，苏木素染色进行8分钟，最终总染色时长为39分钟。全部实验条件及结果示于表4中。
表4对比室温和无搅拌的情况对染色效果的影响
| 温度(℃) | 转速(rpm) | 时长(min) | 染色情况 |
| 42 | 1000 | 18.5 | 苏木素着色适中，视野清晰 |
| 室温 | 1000 | 18.5 | 苏木素着色较浅，视野较模糊 |
| 42 | 0 | 18.5 | 苏木素着色较浅 |
| 室温 | 0 | 18.5 | 苏木素着色较浅，视野较模糊 |
| 室温 | 0 | 39 | 苏木素着色适中，视野清晰 |
在室温和无搅拌的条件下，仍采用较短的处理时间，对掉片没有明显影响，但是，在室温和/或无搅拌的情况下，较容易使脱蜡不完全，造成苏木素着色较浅。可参见图3，其中A示出了42℃、1000rpm条件下的染色效果，着色适中且视野清晰；B示出了室温、1000rmp搅拌条件下的染色效果，着色较浅且视野模糊；C示出了42℃、无搅拌条件下的染色效果，着色较浅；D示出了室温、无搅拌条件下的染色效果，着色较浅且视野模糊
实施例5：电磁搅拌与超声振动条件对染色效果的影响
按上述方法2在42℃、1000rpm条件下进行1组实验；另外，按上述方法2，区别在于将电磁搅拌用超声振动(超声仪，功率设定为100％，频率设定为59KHz)替代，进行1组实验。结果如下表5所示。
表5对比电磁搅拌和超声振动对染色效果的影响
| 温度(℃) | 转速(rpm) | 超声频率 | 掉片情况 | 镜检情况 |
| 42 | 1000 | 0 | 极少 | 组织完整 |
| 42 | 0 | 59KHz | 严重 | 组织断裂 |
进一步参考图4，其中分别示出了电磁搅拌和超声振动条件下的切片照片，其中在超声诊断条件下出现严重的掉片现象，且进一步参考图5的显微镜照片可见，超声振动还造成多处组织断裂。
以上所述仅为本发明的优选实施方式，并非因此限制本发明的专利范围，凡是在本发明的发明构思下，利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构变换，或直接/间接运用在其他相关的技术领域均包括在本发明的专利保护范围内。
Claims (10)
1.一种HE染色方法，该方法包括：
在电磁搅拌下，在41～44℃的温度下，对切片进行脱蜡、复水及苏木素染色的步骤。
2.根据权利要求1所述的HE染色方法，其中所述电磁搅拌的转速为800～1300rpm；优选为900～1200rpm，且所述温度为42～43℃。
3.根据权利要求1所述的HE染色方法，进一步包括在转速为800～1300rpm的电磁搅拌下，在41～44℃的温度下，对经苏木精-伊红染色后的切片进行脱水和透明化的步骤。
4.根据权利要求3所述的HE染色方法，其中所述脱水和透明化的步骤在电磁搅拌的转速为900～1200rpm，且所述温度为42～43℃的条件下进行。
5.根据权利要求1所述的HE染色方法，其中，所述脱蜡、复水及苏木精染色步骤在同一恒温温度下进行；优选地，所述脱蜡、复水及苏木素染色的步骤在同一电磁搅拌转速下进行。
6.根据权利要求3或4所述的HE染色方法，其中，所述脱蜡、复水、苏木素染色、脱水和透明化的步骤在同一恒温温度下进行；优选地，所述脱蜡、复水、苏木素染色、脱水和透明化的步骤在同一电磁搅拌转速下进行。
7.根据权利要求1～4中任一项所述的HE染色方法，其中所述脱蜡步骤包括用至少三份脱蜡剂分别处理70～120秒；和所述复水步骤包括用浓度在100％～85％之间逐步降低的至少三份乙醇溶液分别处理约50～70秒。
8.根据权利要求1～4中任一项所述的HE染色方法，其中所述苏木素染色进行3.5～4.5分钟。
9.根据权利要求3或4所述的HE染色方法，其中所述脱水步骤包括用浓度在85％～100％之间逐步升高的至少三份乙醇溶液分别处理约50～70秒；且所述透明化步骤包括用至少两份透明化剂分别处理70～120秒。
10.根据权利要求1～4中任一项所述的HE染色方法，进一步包括在苏木素染色后，在室温、无搅拌条件下，对所述切片在盐酸酒精中分化、随后在流水中进行返蓝以及在伊红溶液中染色的步骤。
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110361244A (zh) * | 2019-07-15 | 2019-10-22 | 上海市宝山区仁和医院 | 用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液与染色方法 |
| CN110779758A (zh) * | 2019-11-01 | 2020-02-11 | 上海市农业科学院 | 一种香菇石蜡切片的制备方法 |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20020142412A1 (en) * | 2000-10-31 | 2002-10-03 | Masashi Ogawa | Method for cutting a biological sample and a device used therefor |
| US20050136509A1 (en) * | 2003-09-10 | 2005-06-23 | Bioimagene, Inc. | Method and system for quantitatively analyzing biological samples |
| CN2919230Y (zh) * | 2006-07-12 | 2007-07-04 | 解建军 | 病理切片染色柜 |
| CN201413267Y (zh) * | 2009-05-20 | 2010-02-24 | 赵晓辉 | 生物组织石蜡切片he染色用8缸自动染色机 |
| CN103694732A (zh) * | 2013-12-31 | 2014-04-02 | 江苏省原子医学研究所 | 一种苏木素染色液及其含苏木素染色液的he染色液 |
| CN205175793U (zh) * | 2015-10-30 | 2016-04-20 | 杨杰 | 病理组织染色机 |
| CN107490511A (zh) * | 2017-07-25 | 2017-12-19 | 四川金域医学检验中心有限公司 | 一种苏木素染色液和he染色方法 |
-
2018
- 2018-04-16 CN CN201810338701.4A patent/CN108896376B/zh active Active
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20020142412A1 (en) * | 2000-10-31 | 2002-10-03 | Masashi Ogawa | Method for cutting a biological sample and a device used therefor |
| US20050136509A1 (en) * | 2003-09-10 | 2005-06-23 | Bioimagene, Inc. | Method and system for quantitatively analyzing biological samples |
| CN2919230Y (zh) * | 2006-07-12 | 2007-07-04 | 解建军 | 病理切片染色柜 |
| CN201413267Y (zh) * | 2009-05-20 | 2010-02-24 | 赵晓辉 | 生物组织石蜡切片he染色用8缸自动染色机 |
| CN103694732A (zh) * | 2013-12-31 | 2014-04-02 | 江苏省原子医学研究所 | 一种苏木素染色液及其含苏木素染色液的he染色液 |
| CN205175793U (zh) * | 2015-10-30 | 2016-04-20 | 杨杰 | 病理组织染色机 |
| CN107490511A (zh) * | 2017-07-25 | 2017-12-19 | 四川金域医学检验中心有限公司 | 一种苏木素染色液和he染色方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 印永祥: "MICROM HMS 760X 玻片自动染色机应用体会", 《齐齐哈尔医学院学报》 * |
| 王庆容 等: "不同温度对HE染色效果的影响", 《江苏农业科学》 * |
| 陈杰主编: "《临床病理科诊断常规》", 30 November 2012, 中国医药科技出版社 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110361244A (zh) * | 2019-07-15 | 2019-10-22 | 上海市宝山区仁和医院 | 用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液与染色方法 |
| CN110361244B (zh) * | 2019-07-15 | 2022-04-12 | 上海市宝山区仁和医院 | 用于线性染色仪快速冷冻切片的苏木素染液与染色方法 |
| CN110779758A (zh) * | 2019-11-01 | 2020-02-11 | 上海市农业科学院 | 一种香菇石蜡切片的制备方法 |
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