CN103725040B - 一种苏木素伊红染色液及其制备方法 - Google Patents
一种苏木素伊红染色液及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103725040B CN103725040B CN201310752989.7A CN201310752989A CN103725040B CN 103725040 B CN103725040 B CN 103725040B CN 201310752989 A CN201310752989 A CN 201310752989A CN 103725040 B CN103725040 B CN 103725040B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- liquid
- hematorylin
- eosin stains
- dyeing
- eosin
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Coloring (AREA)
- Cosmetics (AREA)
Abstract
本发明提供一种苏木素伊红染色液，包括苏木素染色液和伊红染色液，所述苏木素染色液，包括苏木素、铝盐、氧化剂、苯扎氯铵、醇、弱酸以及水；所述伊红染色液，包括伊红、比布列西猩红、焰红B、水以及乙醇。本发明还提供了所述苏木素伊红染色液的制备方法及其染色方法。本发明的苏木素伊红染色液对切片进行染色时，背景清晰、层次分明、染色效果好、易于读片，且不易褪色，便于长期存放。
Description
技术领域
本发明涉及一种标本分析前处理试剂，具体涉及一种苏木素伊红染色液及其制备方法、以及其染色方法。
背景技术
苏木素伊红染色方法，简称HE染色法，是组织学、胚胎学、病理学中使用最为广泛的技术方法。HE染色是将组织切片或细胞涂片等分别浸入苏木素染色液和伊红染色液中，经过适当的时间和处理，使组织、细胞及其他成分染上不同深浅的颜色，产生不同的折射率，从而便于光学显微镜下进行观察和研究。
苏木素是一种碱性染料，由洋苏木中提取，被氧化后生成苏木因，同媒染剂共同使用，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色。苏木素的分子式为C16H14O6，结构式如下：
常用的苏木素染色液主要有Ehrlich苏木素染色液、Harris苏木素染色液、Cole苏木素染色液、Mayer苏木素染色液、Carazzi苏木素染色液、改良Lillie-Mayer苏木素染色液以及Gill改良苏木素染色液等。但是，目前苏木素染色液均具有以下缺陷：1）氧化过程易产生金属膜或染色使用过程易致染料沉淀，从而污染切片，且在制片过程中，切片上的上述污渍很难去除，导致染色不均，甚至出现无法读片，需要重新制片；2）在染色阶段易出现假性蓝色染色，将部分细胞质也染为蓝色，对后续观测结果的准确性产生影响。
伊红，为酸性染料，分为水溶性和醇溶性两种，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。
水溶性伊红的结构式为：
醇溶性伊红的结构式为：
伊红染色液在水中可离解成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷结合，从而使细胞质染成深浅不一的红色。目前，采用的伊红染色液主要为：水溶性伊红的水溶液、醇溶性伊红的95%乙醇溶液以及水溶性伊红和焰红的80%乙醇溶液。美国专利文献US2011053279A1中，还公开了一种检测在聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质的染色方法及其有机染色剂，其中，公开的染色剂为伊红Y或焰红B中的一种。然而，上述所有采用伊红作为染色剂的染色液中，均存在以下问题：1）染料的组成单一，造成对细胞质以及细胞外基质染色时，层次不够清晰；2）由于伊红染色强度较低，上述伊红染色液中均需加入乙酸作为促染剂，以加强染色强度，而促染剂的加入会导致染色色彩层次的弱化，进一步加剧了染色层次不够清晰的问题；同时，加入促染剂后，不仅在后续对切片的处理过程中，需洗涤酸性物质，且酸性物质残留时，会造成切片保存过程中易于褪色，得到的切片无法长期存放。
因此，现有的苏木素伊红染色液，苏木素染色液易产生金属膜或染料沉淀而使染色不均且易出现假性蓝色染色，同时伊红染色液染色层次不清晰、着色效果不好，进而造成了染色后的组织切片或细胞涂片等的背景模糊，读片困难。
发明内容
为此，本发明所要解决的第一个技术问题在于提供一种背景清晰、层次分明、染色效果好、易于读片的苏木素伊红染色液。
本发明所要解决的第二个技术问题在于现有技术中的苏木素伊红染色液中，苏木素染色液易产生金属膜和染料沉淀而使染色不均且易出现假性蓝色染色，进而提供一种染色均匀、假性蓝色染色低的苏木素伊红染色液。
本发明所要解决的第三个技术问题在于现有技术中的苏木素伊红染色液中，伊红染色液染色层次不清晰、着色效果不好，进而提供一种层次清晰、着色效果好的苏木素伊红染色液。
本发明提供了所述苏木素伊红染色液的制备方法。
本发明还提供了所述苏木素伊红染色液的染色方法
为解决上述技术问题，本发明的苏木素伊红染色液，包括苏木素染色液和伊红染色液。
所述苏木素染色液，每100ml所述苏木素染色液中包括如下组分：
苏木素0.3-1g；铝盐0.5-10g；氧化剂0.025-2.26g；苯扎氯铵0.05-1g；醇5-60ml；弱酸0.03-6.3g；余量为水；
进一步的，所述氧化剂与所述苏木素的质量比小于或等于2.3；
所述醇占所述苏木素染色液的20%-60%（V/V）时，所述铝盐的重量应小于或等于10×（1.2-v）g；所述v为所述醇占所述苏木素染色液的体积百分比。
所述伊红染色液，每100ml所述伊红染色液中包括如下组分：
伊红0.3-0.5g；比布列西猩红0.03-0.05g；焰红B0.15-0.25g；乙醇5-60ml；余量为水。
其中，所述氧化剂为红色氧化汞、碘酸钠、高锰酸钾、高碘酸钾、次氯酸钠、次氯酸钙、过氧化氢中的一种或多种的混合物。进一步的，每100ml所述苏木素染色液中，所述红色氧化汞优选为0.03-0.5g，最优选为0.25g；所述碘酸钠优选为0.03-0.2g，最优选为0.1g；所述高锰酸钾优选为0.02-0.18g，最优选为0.09g；所述高碘酸钾优选为0.01-0.05g，最优选为0.025g；所述次氯酸钙优选为0.3-2g，最优选为1g；所述次氯酸钠优选为0.3-2g，最优选为1g；所述过氧化氢优选为0.34-2.26g，最优选为1.13g。
所述红色氧化汞与所述苏木素的质量比小于或等于0.5；所述碘酸钠与所述苏木素的质量比小于或等于0.2;所述高锰酸钾与所述苏木素的质量比小于或等于0.18;所述高碘酸钾与所述苏木素的质量比小于或等于0.05;所述次氯酸钠与所述苏木素的质量比小于或等于2；所述次氯酸钙与所述苏木素的质量比小于或等于2；所述过氧化氢与所述苏木素的质量比小于或等于2.26。
所述弱酸为柠檬酸、水杨酸、冰乙酸中的一种或多种的混合物。进一步的，每100ml所述苏木素染色液中，所述柠檬酸优选为0.1-0.6g，最优选为0.2g；所述水杨酸优选为0.03-0.18g，最优选为0.06g；所述冰乙酸优选为1.05-6.3g，最优选为2.1g。
所述醇为乙醇、甲醇、乙二醇、异丙醇、丙三醇中的一种或多种混合物。
所述铝盐为硫酸铝钾、硫酸铝铵、硫酸铝、硝酸铝、氯化铝中的一种或多种的混合物。进一步的，每100ml所述苏木素染色液中，所述硫酸铝铵优选为5.5g、所述硫酸铝钾优选为5.5g、所述硫酸铝优选为3.6g、所述硝酸铝优选为4.5g、所述氯化铝优选为2.8g。
所述水为去离子水或蒸馏水中的一种。
所述伊红为水溶性伊红Y。
优选的，所述苏木素染色液，包括如下组分：苏木素1g；硫酸铝3.6碘酸钠0.1g；苯扎氯铵0.1g；乙醇10ml；冰乙酸2.1g；余量为水。
所述伊红染色液，每100ml所述伊红染色液中还包括苯扎氯铵0.05-1g。
优选的，所述伊红染色液，每100ml所述伊红染色液中包括如下组分：伊红0.5g；比布列西猩红0.04g；焰红B0.21g；苯扎氯铵0.1g；乙醇20ml。
本发明的苏木素伊红染色液的制备方法，包括以下步骤，
1）苏木素染色液的配制：
a.按选定的体积分数取醇并按选定的比例取苏木素，将所述苏木素加入醇中，溶解，得到苏木素醇溶液，备用；
b.按选定的体积分数取水并按选定的比例取铝盐，使所述铝盐完全溶解于水中，加入步骤a中得到的所述苏木素醇溶液，得到混合液；
c.按选定的比例取氧化剂、苯扎氯铵、弱酸，将所述氧化剂搅拌加入步骤b中得到的所述混合液中，加热溶液变深紫色后，冷却，加入所述苯扎氯铵、弱酸，混合均匀，过滤，即得苏木素染色液；
2）伊红染色液的配制：
将伊红、比布列西猩红、焰红B溶解于水中，加入乙醇，过滤，即得伊红染色液。
进一步地，所述伊红染色液的配制还包括在向所述水中加入所述伊红、所述比布列西猩红、所述焰红、所述乙醇后，再加入按选定的比例称取的所述苯扎氯铵的步骤。
需要说明的是，在所述苏木素染色液的制备过程中，选用多种所述氧化剂时，各所述氧化剂应分批加入所述混合液。
本发明的苏木素伊红染色液的染色方法，包括以下步骤：
1）切片预处理：取待染色石蜡切片按常规方式脱蜡、水化；
2）苏木素伊红染色：将步骤1）中得到的经预处理后切片置于所述苏木素染色液中染色3-10min；取出后水洗，分化，水洗，返蓝后，再水洗；取所述伊红染色液对切片染色10-60s；
3）切片脱水、透明、封片：将步骤2）得到的染色后的切片采用常规方式脱水，透明处理，封片，即可。
进一步地，所述苏木素伊红染色液的染色方法，所述步骤1）为：取石蜡切片置于二甲苯中脱蜡2-3次，每次5-10min；将上述石蜡切片依次置于无水乙醇中2-3次、每次3-5min，体积分数为90%-95%的乙醇中1-2次、每次1-3min，体积分数为60%-80%的乙醇中1-3min，再用蒸馏水水洗1-5min。
优选的，所述步骤1）为：取石蜡切片置于二甲苯中脱蜡3次，每次5min；将上述石蜡切片依次置于无水乙醇中2次、每次3min，体积分数为95%的乙醇中2次、每次3min，体积分数为70%的乙醇中3min，再用蒸馏水水洗5min。
所述步骤2）为：将步骤1）中得到的经预处理后切片置于所述苏木素染色液中染色3-10min；取出后水洗1-20min，用0.1%-1%盐酸乙醇分化1-60s后，水洗1-5min，用0.2%氨水或饱和碳酸锂水溶液返蓝30s-60s后，水洗1-5min；取所述伊红染色液对切片染色10-60s。
优选的，所述步骤2）为：将步骤1）中得到的经预处理后切片置于所述苏木素染色液中染色5min；取出后水洗5min，用0.25%盐酸乙醇分化30s后，水洗5min，用1.36%的碳酸锂水溶液中返蓝30s后，水洗5min；取所述伊红染色液对切片染色15s。
所述步骤3）为：将步骤2）得到的染色后的切片分别用体积分数为60-80%的乙醇脱水10-30s，体积分数为95%的乙醇脱水2-3次、每次1-5min，无水乙醇脱水2-3次，每次1-5min；再置于二甲苯中透明2-3次，每次2-5min；封片，即可。
优选的，所述步骤3）为：将步骤2）得到的染色后的切片分别用体积分数为80%的乙醇脱水30s，体积分数为95%的乙醇脱水2次、每次3min，无水乙醇脱水2次，每次3min；再置于二甲苯中透明2次，每次5min；封片，即可。
其中，所述二甲苯可以是邻二甲苯、间二甲苯、对二甲苯中的一种或多种的混合物。不同的二甲苯在对所述石蜡切片进行染色过程中，效果并无差异。
需要说明的是，采用所述苏木素染色液及所述伊红染色液进行染色时，本领域技术人员可根据染色情况及染色要求对染色、分化、返蓝时间做适当调整。
本发明的苏木素伊红染色液可按照上述步骤对石蜡切片进行染色，但是，需要说明的是，本发明的苏木素伊红染色液的染色对象包括但不限于石蜡切片，本领域技术人员也可采用常规手段对冰冻切片、培养基细胞等进行染色操作。
本发明的上述技术方案相比现有技术具有以下优点：
（1）本发明的苏木素伊红染色液，所述苏木素染色液包括：苏木素、醇、铝盐、氧化剂、弱酸、苯扎氯铵以及水。其中加入了苯扎氯铵，苯扎氯铵是一种阳离子表面活性剂，具有良好的粘泥剥离作用与分散、渗透的作用，能很好的去除对切片进行苏木素染色时产生的金属膜和染料沉淀、残渣，解决了切片的除渍问题，避免了因金属膜、染料沉淀造成的读片困难问题，使苏木素染色更为均匀并加强了染料液的着色效果。同时，经过多次验证表明，加入苯扎氯铵后，苏木素染色阶段对细胞质的假性蓝色染色显著减少，使切片的背景更加清晰。另外，苯扎氯铵属于非氧化性杀菌剂，具有高效的广谱杀菌能力，可抑制霉菌等多种细菌的产生，延长染色液的有效期，使用时也可防止污染切片，达到良好的染色效果。
（2）本发明的苏木素伊红染色液，所述伊红染色液包括伊红、比布列西猩红、焰红B、苯扎氯铵、乙醇以及水。采用伊红、比布列西猩红、焰红B三种不同深浅的染料组成，可使染色的层次分明，色彩鲜艳，并且，以上三种染料联用，具有较为理想的着色强度，可保证足够的染色强度，不需加入促染剂，从而避免了促染剂对染色色彩层次的弱化的问题，也避免了洗涤促染剂的操作，简化了使用伊红染色液染色时的操作步骤，使用更为方便，同时，也不存在促染剂残留而使染色后的切片易褪色、不易长期保存的问题。
（3）本发明的苏木素伊红染色液，所述伊红染色液还包括0.05%-1%的苯扎氯铵，苯扎氯铵的添加，避免染料残渣的产生污染切片，具有一定的匀染作用，防止伊红染色过染、染色不均，并起到良好的抑菌、杀菌作用，使所述伊红染色液不易污染切片，且具有较长的有效期。
（4）本发明的苏木素伊红染色液，所述苏木素染色液与所述伊红染色液共同使用，所述苏木素染色液对细胞核内的染色质与胞质内的核糖体染色，染色均匀、假性蓝色染色较少；所述伊红染色液对细胞质和细胞外基质染色，层次丰富，着色清晰，由此得到的切片背景清晰、层次分明、染色效果好、易于读片，且不易褪色，便于长期存放。
附图说明
为了使本发明的内容更容易被清楚的理解，下面根据本发明的具体实施例并结合附图，对本发明作进一步详细的说明。
图1是采用本发明实施例1得到的所述苏木素伊红染色液对甲状腺乳头状癌亚型进行染色的病理切片图；
图2是采用本发明实施例2得到的所述苏木素伊红染色液对甲状腺乳头状癌细胞涂片进行染色的病理切片图；
图3是采用本发明实施例3得到的所述苏木素伊红染色液对甲状腺乳头状癌细胞涂片（核内包含体）进行染色的病理切片图；
图4是采用本发明实施例4得到的所述苏木素伊红染色液对甲状腺滤泡癌瘤栓转移进行染色的病理切片图；
具体实施方式
本发明下述各实施例中，所述的苏木素、醇、铝盐、氧化剂、弱酸、苯扎氯铵、水溶性伊红Y、比布列西猩红以及焰红B可以选用现有技术中常规采用的产品进行苏木素伊红染色液的制备，以下仅给出其中一种型号的产品予以阐述本发明的效果，市售各型号的产品之间效果并无差异。其中：
苏木素，阿拉丁试剂（上海）有限公司，高级纯，99%
苯扎氯铵，上海阿达玛斯试剂有限公司，GR，纯度98%
水溶性伊红Y，上海沪试化工有限公司，BS，纯度90%
比布列西猩红，CAS编码为4196-99-0，上海沃凯生物技术有限公司，BS，纯度70%
焰红B，CAS编码为18472-87-2，梯希爱（上海）化成工业发展有限公司，BS，纯度85%
实施例1
本实施例的苏木素伊红染色液，包括苏木素染色液和伊红染色液，其中，每100ml所述苏木素染色液中包括如下组分：
苏木素1g；铝盐：硫酸铝铵10g；氧化剂：红色氧化汞0.25g；苯扎氯铵0.1g；醇：乙醇10ml；弱酸：冰乙酸2.1g；余量为去离子水。
每100ml所述伊红染色液中包括如下组分：伊红Y0.5g；比布列西猩红0.04g；焰红B0.21g；苯扎氯铵0.1g；乙醇20ml；余量为去离子水。
其制备方法如下：
1）苏木素染色液的配制：
a.按选定的比例取醇、苏木素，将所述苏木素加入醇中，溶解，得到苏木素醇溶液，备用；
b.按选定的比例取水、铝盐，使所述铝盐完全溶解于水中，加入步骤a中得到的所述苏木素醇溶液，得到混合液；
c.按选定的比例取氧化剂、苯扎氯铵、弱酸，将所述氧化剂搅拌加入步骤b中得到的所述混合液中，加热溶液变深紫色后，冷却，加入所述苯扎氯铵、弱酸，混合均匀，过滤，即得苏木素染色液；
2）伊红染色液的配制：
按选定的比例取伊红、比布列西猩红、焰红B、水、乙醇以及苯扎氯铵，向所述水中加入所述伊红、所述比布列西猩红、所述焰红B、苯扎氯铵，混合均匀，再加入所述醇，过滤，即得伊红染色液。
取经上述步骤制得的所述苏木素伊红染色液，对石蜡切片进行染色操作，具体包括以下步骤：
1）切片预处理：取石蜡切片置于二甲苯中脱蜡3次，每次5min；将上述石蜡切片依次置于无水乙醇中2次、每次3min，体积分数为95%的乙醇中2次、每次3min，体积分数为70%的乙醇中3min，再用蒸馏水水洗5min；
2）苏木素伊红染色：将步骤1）中得到的经预处理后切片置于所述苏木素染色液中染色5min；取出后水洗5min，用0.25%盐酸乙醇分化30s后，水洗5min，用1.36%的碳酸锂水溶液中返蓝30s后，水洗5min；取所述伊红染色液对切片染色15s；
3）切片脱水、透明、封片：将步骤2）得到的染色后的切片分别用体积分数为80%的乙醇脱水30s，体积分数为95%的乙醇脱水2次、每次3min，无水乙醇脱水2次，每次3min；再置于二甲苯中透明2次，每次5min；封片，即可。
实施例2
本实施例的苏木素伊红染色液，包括苏木素染色液和伊红染色液，其中，每100ml所述苏木素染色液中包括如下组分：
苏木素0.3g；铝盐：硫酸铝钾10g；氧化剂：碘酸钠0.03g；苯扎氯铵0.525g；醇：乙二醇5ml；弱酸：水杨酸0.03g；余量为蒸馏水。
每100ml所述伊红染色液中包括如下组分：伊红Y0.4g；比布列西猩红0.03g；焰红0.25g；苯扎氯铵1g；乙醇5ml；余量为蒸馏水。
其制备方法如下：
1）苏木素染色液的配制：
a.按选定的比例取醇、苏木素，将所述苏木素加入醇中，溶解，得到苏木素醇溶液，备用；
b.按选定的比例取水、铝盐，使所述铝盐完全溶解于水中，加入步骤a中得到的所述苏木素醇溶液，得到混合液；
c.按选定的比例取氧化剂、苯扎氯铵、弱酸，将所述氧化剂搅拌加入步骤b中得到的所述混合液中，加热溶液变深紫色后，冷却，加入所述苯扎氯铵、弱酸，混合均匀，过滤，即得苏木素染色液；
2）伊红染色液的配制：
按选定的比例取伊红、比布列西猩红、焰红、水、乙醇以及苯扎氯铵，向所述水中加入所述伊红、所述比布列西猩红、所述焰红、苯扎氯铵，混合均匀，再加入所述乙醇，过滤，即得伊红染色液。
取经上述步骤制得的所述苏木素伊红染色液，对石蜡切片进行染色操作，具体包括以下步骤：
1）切片预处理：取石蜡切片置于二甲苯中脱蜡2次，每次10min；将上述石蜡切片依次置于无水乙醇中3次、每次4min，体积分数为90%的乙醇中1次、每次2min，体积分数为60%的乙醇中2min，再用蒸馏水水洗1min；
2）苏木素伊红染色：将步骤1）中得到的经预处理后切片置于所述苏木素染色液中染色10min；取出后水洗1min，用1%盐酸乙醇分化1s后，水洗3min，用0.2%氨水溶液返蓝30s后，水洗3min；取所述伊红染色液对切片染色10s；
3）切片脱水、透明、封片：将步骤2）得到的染色后的切片分别用体积分数为60%的乙醇脱水10s，体积分数为95%的乙醇脱水3次、每次1min，无水乙醇脱水3次，每次1min；再置于二甲苯中透明2次，每次2min；封片，即可。
实施例3
本实施例的苏木素伊红染色液，包括苏木素染色液和伊红染色液，其中，每100ml所述苏木素染色液中包括如下组分：
苏木素0.65g；铝盐：硫酸铝6.25g；氧化剂：高锰酸钾0.11g；苯扎氯铵0.05g；醇：丙三醇32.5ml；弱酸：柠檬酸0.2g；余量为去离子水。
每100ml所述伊红染色液中包括如下组分：伊红Y0.3g；比布列西猩红0.05g；焰红B0.15g；苯扎氯铵0.525g；乙醇60ml；余量为蒸馏水。
其制备方法同实施例2中的制备方法。
取经上述步骤制得的所述苏木素伊红染色液，对石蜡切片进行染色操作，具体包括以下步骤：
1）切片预处理：取石蜡切片置于二甲苯中脱蜡3次，每次7.5min；将上述石蜡切片依次置于无水乙醇中2次、每次5min，体积分数为93%的乙醇中2次、每次1min，体积分数为80%的乙醇中1min，再用蒸馏水水洗3min；
2）苏木素伊红染色：将步骤1）中得到的经预处理后切片置于所述苏木素染色液中染色10min；取出后水洗20min，用0.1%盐酸乙醇分化16s后，水洗1min，用饱和碳酸锂水溶液返蓝30s后，水洗1min；取所述伊红染色液对切片染色60s；
3）切片脱水、透明、封片：将步骤2）得到的染色后的切片分别用体积分数为70%的乙醇脱水20s，体积分数为95%的乙醇脱水2次、每次5min，无水乙醇脱水2次，每次5min；再置于二甲苯中透明3次，每次3min；封片，即可。
实施例4
本实施例的苏木素伊红染色液，包括苏木素染色液和伊红染色液，其中，每100ml所述苏木素染色液中包括如下组分：
苏木素1g；铝盐：氯化铝0.5g；氧化剂：过氧化氢2.3g；苯扎氯铵1g；醇：甲醇60ml；弱酸：冰乙酸2.1g、柠檬酸0.2g；余量为水。
每100ml所述伊红染色液中包括如下组分：伊红Y0.5g；比布列西猩红0.04g；焰红B0.2g；苯扎氯铵0.05g；乙醇32.5ml；余量为水。
其制备方法同实施例2中的制备方法。
取经上述步骤制得的所述苏木素伊红染色液，对石蜡切片进行染色操作，具体包括以下步骤：
1）切片预处理：取石蜡切片置于二甲苯中脱蜡3次，每次5min；将上述石蜡切片依次置于无水乙醇中2次、每次3min，体积分数为95%的乙醇中2次、每次3min，体积分数为70%的乙醇中3min，再水洗5min；
2）苏木素伊红染色：将步骤1）中得到的经预处理后切片置于所述苏木素染色液中染色6.5min；取出后水洗11min，用0.5%盐酸乙醇分化30s后，水洗5min，用0.2%稀氨水返蓝30s后，水洗5min；取所述伊红染色液对切片染色15s；
3）切片脱水、透明、封片：将步骤2）得到的染色后的切片分别用体积分数为80%的乙醇脱水30s，体积分数为95%的乙醇脱水2次、每次3min，无水乙醇脱水2次，每次3min；再置于二甲苯中透明2次，每次5min；封片，即可。
实施例5
本实施例的苏木素伊红染色液，包括苏木素染色液和伊红染色液，其中，每100ml所述苏木素染色液中包括如下组分：
苏木素1g；铝盐：硝酸铝10g；氧化剂：次氯酸钠1g；苯扎氯铵1g；醇：异丙醇10ml；弱酸：柠檬酸0.03g；余量为水。
每100ml所述伊红染色液中包括如下组分：伊红Y0.5g；比布列西猩红0.04g；焰红B0.21g；苯扎氯铵0.1g；乙醇20ml；余量为水。
其制备方法同实施例2中的制备方法。
取经上述步骤制得的所述苏木素伊红染色液，对石蜡切片进行染色操作，具体包括以下步骤：
1）切片预处理：取待染色石蜡切片按常规方式脱蜡、水化；
2）苏木素伊红染色：将步骤1）中得到的经预处理后切片置于所述苏木素染色液中染色3min；取出后水洗，分化，返蓝后，再水洗；取所述伊红染色液对切片染色12s；
3）切片脱水、透明、封片：将步骤2）得到的染色后的切片采用常规方式脱水，透明处理，封片，即可。
实施例6
本实施例的苏木素伊红染色液，包括苏木素染色液和伊红染色液，其中，每100ml所述苏木素染色液中包括如下组分：
苏木素1g；硫酸铝3.6g；碘酸钠0.1g；苯扎氯铵0.1g；乙醇10ml；冰乙酸2.1g；余量为水。
每100ml所述伊红染色液中包括如下组分：伊红Y0.5g；比布列西猩红0.04g；焰红B0.21g；苯扎氯铵0.1g；乙醇20ml；余量为水。
其制备方法同实施例2中的制备方法。
取经上述步骤制得的所述苏木素伊红染色液，对石蜡切片进行染色操作，具体包括以下步骤：
1）切片预处理：取待染色石蜡切片按常规方式脱蜡、水化；
2）苏木素伊红染色：将步骤1）中得到的经预处理后切片置于所述苏木素染色液中染色10min；取出后水洗，用返蓝剂返蓝后，再水洗；取所述伊红染色液对切片染色10s；
3）切片脱水、透明、封片：将步骤2）得到的染色后的切片采用常规方式脱水，透明处理，封片，即可。
实施例7
本实施例的苏木素伊红染色液，包括苏木素染色液和伊红染色液，其中，每100ml所述苏木素染色液中包括如下组分：
苏木素1g；铝盐：按1:2的重量比混合的氯化铝、硝酸铝10g；氧化剂：高碘酸钾0.05g；苯扎氯铵1g；醇：按1:1的体积比混合的甲醇与异丙醇10ml；弱酸：按2:3的重量比混合的柠檬酸、水杨酸0.05g；余量为水。
每100ml所述伊红染色液中包括如下组分：伊红Y0.5g；比布列西猩红0.04g；焰红B0.21g；苯扎氯铵0.1g；乙醇20ml；余量为水。
其制备方法同实施例2中的制备方法。
取经上述步骤制得的所述苏木素伊红染色液，对石蜡切片进行染色操作，具体包括以下步骤：
1）切片预处理：取待染色石蜡切片按常规方式脱蜡、水化；
2）苏木素伊红染色：将步骤1）中得到的经预处理后切片置于所述苏木素染色液中染色6.5min；取出后水洗，分化，返蓝后，再水洗；取所述伊红染色液对切片染色10s；
3）切片脱水、透明、封片：将步骤2）得到的染色后的切片采用常规方式脱水，透明处理，封片，即可。
实施例8
本实施例的苏木素伊红染色液，包括苏木素染色液和伊红染色液，其中，每100ml所述苏木素染色液中包括如下组分：
苏木素1g；铝盐：按1:3的重量比混合的硫酸铝、氯化铝10g；氧化剂：红色氧化汞0.03g、碘酸钠0.03g、高锰酸钾0.02g、高碘酸钾0.02g、次氯酸钠0.3g、次氯酸钙0.3g、过氧化氢0.34g；苯扎氯铵1g；醇：按1:1的体积比混合的甲醇与异丙醇10ml；弱酸：水杨酸0.03g、柠檬酸0.1g、冰醋酸1g；余量为水。
每100ml所述伊红染色液中包括如下组分：伊红Y0.5g；比布列西猩红0.04g；焰红B0.21g；苯扎氯铵0.1g；乙醇20ml；余量为水。
其制备方法同实施例2中的制备方法。
取经本实施例制得的所述苏木素伊红染色液，采用常规方式对冰冻切片进行染色操作。
实施例9
本实施例的苏木素伊红染色液，包括苏木素染色液和伊红染色液，其中，每100ml所述苏木素染色液中包括如下组分：
苏木素1g；铝盐：按1：2：5的质量比混合的硫酸铝钾、硫酸铝铵、硫酸铝10g；氧化剂：按1：3的重量比混合的高锰酸钾、高碘酸钾0.05g；苯扎氯铵0.1g；醇：按1：3的体积比混合的乙醇与丙三醇10ml；弱酸：柠檬酸0.03g；余量为水。
每100ml所述伊红染色液中包括如下组分：伊红Y0.5g；比布列西猩红0.04g；焰红B0.21g；苯扎氯铵0.1g；乙醇20ml；余量为水。
其制备方法同实施例2中的制备方法。
取经本实施例制得的所述苏木素伊红染色液，采用常规方式对培养基细胞进行染色操作。
实施例10
本实施例的苏木素伊红染色液，包括苏木素染色液和伊红染色液，其中，每100ml所述苏木素染色液中包括如下组分：
苏木素1g；铝盐：按1：3：2的质量比混合的硫酸铝、氯化铝、硝酸铝10g；氧化剂：按5：1的重量比混合的次氯酸钙、过氧化氢2g；苯扎氯铵0.1g；醇：按1：3：4：1的体积比混合的甲醇、乙二醇、乙醇与丙三醇10ml；弱酸：柠檬酸0.1g；余量为水。
每100ml所述伊红染色液中包括如下组分：伊红Y0.5g；比布列西猩红0.04g；焰红B0.21g；苯扎氯铵0.1g；乙醇20ml；余量为水。
其制备方法同实施例2中的制备方法。
取本实施例制得的所述苏木素伊红染色液，采用常规方式对冰冻切片进行染色操作。
实施例11
本实施例的苏木素伊红染色液，包括苏木素染色液和伊红染色液，其中，每100ml所述苏木素染色液中包括如下组分：
苏木素1g；铝盐：按1：3：2：4：1的质量比混合的硫酸铝钾、硫酸铝铵、硫酸铝、硝酸铝、氯化铝10g；氧化剂：按1：3：1的重量比混合的碘酸钠、高锰酸钾、高碘酸钾0.1g；苯扎氯铵0.1g；醇：丙三醇10ml；弱酸：水杨酸0.03g；余量为水。
每100ml所述伊红染色液中包括如下组分：伊红Y0.5g；比布列西猩红0.04g；焰红B0.21g；苯扎氯铵0.1g；乙醇20ml；余量为水。
其制备方法同实施例2中的制备方法。
取本实施例制得的所述苏木素伊红染色液，采用常规方式对培养基细胞进行染色操作。
对比例1
本对比例中的苏木素伊红染色液，包括苏木素染色液与伊红染色液，所述苏木素染色液不包括苯扎氯铵，其余组分以及所述伊红染色液均与实施例1相同，并按照实施例1的制备方法制备。
取本对比例制得的所述苏木素伊红染色液，按照实施例1的染色方法染色。
对比例2
本对比例中的苏木素伊红染色液，包括苏木素染色液与伊红染色液，所述伊红染色液不包括，苯扎氯铵、比布列西猩红以及焰红B，其余组分以及所述苏木素染色液均与实施例1相同，并按照实施例1的制备方法制备。
取本对比例制得的所述苏木素伊红染色液，按照实施例1的染色方法染色。
对比例3
本对比例中的苏木素伊红染色液，包括苏木素染色液与伊红染色液，所述伊红染色液不包括，苯扎氯铵、比布列西猩红，其余组分以及所述苏木素染色液均与实施例1相同，并按照实施例1的制备方法制备。
取本对比例制得的所述苏木素伊红染色液，按照实施例1的染色方法染色。
对比例4
本对比例中的苏木素伊红染色液，包括苏木素染色液与伊红染色液，所述伊红染色液不包括，比布列西猩红以及焰红B，其余组分以及所述苏木素染色液均与实施例1相同，并按照实施例1的制备方法制备。
取本对比例制得的所述苏木素伊红染色液，按照实施例1的染色方法染色。
对比例5
本对比例中的苏木素伊红染色液，包括苏木素染色液与伊红染色液，所述伊红染色液不包括，苯扎氯铵，其余组分以及所述苏木素染色液均与实施例1相同，并按照实施例1的制备方法制备。
取本对比例制得的所述苏木素伊红染色液，按照实施例1的染色方法染色。
对比例6
本对比例中的苏木素伊红染色液，包括苏木素染色液与伊红染色液，所述苏木素染色液不包括苯扎氯铵，所述伊红染色液不包括苯扎氯铵、比布列西猩红以及焰红B，其余组分均与实施例1相同，并按照实施例1的制备方法制备。
取本对比例制得的所述苏木素伊红染色液，按照实施例1的染色方法染色。
效果对比例
为说明本发明的效果，将实施例1-11及对比例1-6中得到的所述苏木素染色液及所述伊红染色液，在20℃下用于常规染色两周，观察染色液情况。
取实施例1-11及对比例1-6中得到的所述苏木素染色液及所述伊红染色液，分别按照实施例1-11及对比例1-6中所述的染色方法进行染色，观察得到的切片或培养基细胞。
观察结果如下：
结论：
本发明所述的苏木素伊红染色液，对切片进行染色时，背景清晰、层次分明、染色效果好、易于读片，且不易褪色，便于长期存放。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。
Claims (15)
1.一种苏木素伊红染色液，包括苏木素染色液和伊红染色液，其特征在于，
每100ml所述苏木素染色液中包括如下组分：
苏木素0.3-1g；铝盐0.5-10g；氧化剂0.025-2.26g；苯扎氯铵0.05-1g；醇5-60ml；弱酸0.03-6.3g；余量为水；
每100ml所述伊红染色液中包括如下组分：
伊红0.3-0.5g；比布列西猩红0.03-0.05g；焰红B0.15-0.25g；乙醇5-60ml；余量为水。
2.根据权利要求1所述的苏木素伊红染色液，其特征在于，所述苏木素染色液中，
所述氧化剂与所述苏木素的质量比小于或等于2.3；
所述醇占所述苏木素染色液的20%-60%（V/V）时，所述铝盐的重量应小于或等于10×（1.2-v）g；所述v为所述醇占所述苏木素染色液的体积百分比。
3.根据权利要求1或2所述的苏木素伊红染色液，其特征在于，
所述氧化剂为红色氧化汞、碘酸钠、高锰酸钾、高碘酸钾、次氯酸钠、次氯酸钙、过氧化氢中的一种或多种的混合物；
所述弱酸为柠檬酸、水杨酸、冰乙酸中的一种或多种的混合物；
所述醇为乙醇、甲醇、乙二醇、异丙醇、丙二醇、丙三醇中的一种或多种混合物；
所述铝盐为硫酸铝钾、硫酸铝铵、硫酸铝、硝酸铝、氯化铝中的一种或多种的混合物；
所述水为去离子水或蒸馏水中的一种；
所述伊红为水溶性伊红Y。
4.根据权利要求3所述的苏木素伊红染色液，其特征在于，所述苏木素染色液，每100ml所述苏木素染色液中包括如下组分：
苏木素1g；硫酸铝3.6g；碘酸钠0.1g；苯扎氯铵0.1g；乙醇10ml；冰乙酸2.1g；余量为水。
5.根据权利要求1、2或4所述的苏木素伊红染色液，其特征在于，所述伊红染色液，还包括苯扎氯铵0.05-1g。
6.根据权利要求5所述的苏木素伊红染色液，其特征在于，所述伊红染色液，每100ml所述伊红染色液中包括如下组分：
伊红Y0.5g；比布列西猩红0.04g；焰红B0.21g；苯扎氯铵0.1g；乙醇20ml。
7.权利要求1-6任一所述的苏木素伊红染色液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）苏木素染色液的配制：
a．按选定的比例取醇、苏木素，将所述苏木素加入醇中，加热溶解，得到苏木素醇溶液，备用；
b．按选定的比例取水、铝盐，使所述铝盐完全溶解于水中，加入步骤a中得到的所述苏木素醇溶液，得到混合液；
c．按选定的比例取氧化剂、苯扎氯铵、弱酸，将所述氧化剂搅拌加入步骤b中得到的所述混合液中，加热溶液变深紫色后，冷却，加入所述苯扎氯铵、弱酸，混合均匀，过滤，即得苏木素染色液；
2）伊红染色液的配制：
将伊红、比布列西猩红、焰红B溶解于水中，加入乙醇，过滤，即得伊红染色液。
8.根据权利要求7所述的苏木素伊红染色液的制备方法，其特征在于，所述伊红染色液的配制还包括在向所述水中加入所述伊红、所述比布列西猩红、所述焰红B、所述乙醇后，再加入按选定的比例称取的所述苯扎氯铵的步骤。
9.使用权利要求1-6任意一项所述的苏木素伊红染色液的染色方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）切片预处理：取待染色石蜡切片按常规方式脱蜡、水化；
2）苏木素伊红染色：将步骤1）中得到的经预处理后切片置于所述苏木素染色液中染色3-10min；取出后水洗，分化，水洗，返蓝后，再水洗；取所述伊红染色液对切片染色10-60s；
3）切片脱水、透明、封片：将步骤2）得到的染色后的切片采用常规方式脱水，透明处理，封片，即可。
10.根据权利要求9所述的苏木素伊红染色液的染色方法，其特征在于，所述步骤1）为：取石蜡切片置于二甲苯中脱蜡2-3次，每次5-10min；将上述石蜡切片依次置于无水乙醇中2-3次、每次3-5min，体积分数为90%-95%的乙醇中1-2次、每次1-3min，体积分数为60%-80%的乙醇中1-3min，再水洗1-5min。
11.根据权利要求10所述的苏木素伊红染色液的染色方法，其特征在于，所述步骤1）为：取石蜡切片置于二甲苯中脱蜡3次，每次5min；将上述石蜡切片依次置于无水乙醇中2次、每次3min，体积分数为95%的乙醇中2次、每次3min，体积分数为70%的乙醇中3min，再用蒸馏水水洗5min。
12.根据权利要求9-11任一所述的苏木素伊红染色液的染色方法，其特征在于，所述步骤2）为：将步骤1）中得到的经预处理后切片置于所述苏木素染色液中染色3-10min；取出后水洗1-20min，用0.1%-1%盐酸乙醇分化1-60s后，水洗1-5min，用0.2%氨水或饱和碳酸锂水溶液返蓝30s-60s后，水洗1-5min；取所述伊红染色液对切片染色10s-60s。
13.根据权利要求12所述的苏木素伊红染色液的染色方法，其特征在于，所述步骤2）为：将步骤1）中得到的经预处理后切片置于所述苏木素染色液中染色5min；取出后水洗5min，用0.25%盐酸乙醇分化30s后，水洗5min，用1.36%的碳酸锂水溶液中返蓝30s后，水洗5min；取所述伊红染色液对切片染色15s。
14.根据权利要求10、11或13所述的苏木素伊红染色液的染色方法，其特征在于，所述步骤3）为：将步骤2）得到的染色后的切片分别用体积分数为60-80%的乙醇脱水10-30s，体积分数为95%的乙醇脱水2-3次、每次1-5min，无水乙醇脱水2-3次，每次1-5min；再置于二甲苯中透明处理2-3次，每次2-5min；封片，即可。
15.根据权利要求14所述的苏木素伊红染色液的染色方法，其特征在于，所述步骤3）为：将步骤2）得到的染色后的切片分别用体积分数为80%的乙醇脱水30s，体积分数为95%的乙醇脱水2次、每次3min，无水乙醇脱水2次，每次3min；再置于二甲苯中透明处理2次，每次5min；封片，即可。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310752989.7A CN103725040B (zh) | 2013-12-31 | 2013-12-31 | 一种苏木素伊红染色液及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310752989.7A CN103725040B (zh) | 2013-12-31 | 2013-12-31 | 一种苏木素伊红染色液及其制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103725040A CN103725040A (zh) | 2014-04-16 |
| CN103725040B true CN103725040B (zh) | 2016-03-23 |
Family
ID=50449349
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201310752989.7A Active CN103725040B (zh) | 2013-12-31 | 2013-12-31 | 一种苏木素伊红染色液及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103725040B (zh) |
Families Citing this family (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2968460C (en) * | 2014-12-18 | 2021-06-15 | Ventana Medical Systems, Inc. | Hematoxylin solution comprising chloride and sulphate, and methods of preparation and use |
| CN104897453A (zh) * | 2015-05-27 | 2015-09-09 | 四川农业大学 | 一种器官组织的快速染色方法 |
| CN104893359A (zh) * | 2015-06-02 | 2015-09-09 | 运城市妇幼保健院 | 一种脱落细胞标本快速染色剂及其制备方法 |
| CN105181423B (zh) * | 2015-09-29 | 2018-04-17 | 上海太阳生物技术有限公司 | 碱性磷酸酶(nap)染色液(化学染色法) |
| CN105651580B (zh) * | 2015-12-28 | 2019-01-29 | 北京雷根生物技术有限公司 | 一种苏木素伊红混合染色液 |
| CN105699155B (zh) * | 2016-01-29 | 2019-09-24 | 山东省千佛山医院 | 肠黏膜脑源性神经营养因子bdnf标本的染色化学检测方法 |
| CN106644656B (zh) * | 2017-01-06 | 2019-01-22 | 杨海玉 | 苏木素-伊红一步染色法 |
| CN107063811B (zh) * | 2017-02-21 | 2021-07-06 | 广州市妇女儿童医疗中心 | 一种采用偏振光显微镜观察胶原纤维的染色方法 |
| CN108531540B (zh) * | 2017-03-06 | 2021-01-01 | 哈尔滨格林标本技术开发有限公司 | 一种新型无汞环保苏木素染液及其制备方法 |
| CN107490511B (zh) * | 2017-07-25 | 2019-05-07 | 四川金域医学检验中心有限公司 | 一种苏木素染色液和he染色方法 |
| CN108362539A (zh) * | 2018-03-20 | 2018-08-03 | 九江职业技术学院 | 一种改良苏木素染色液及其制备方法 |
| CN108414328A (zh) * | 2018-04-04 | 2018-08-17 | 南京烁朴生物科技有限公司 | 一种改良型苏木精染色液试剂、制备方法和染色方法 |
| CN111380734A (zh) * | 2018-12-28 | 2020-07-07 | 哈尔滨格林标本技术开发有限公司 | 一种无汞环保伊红染色液及其制备方法 |
| CN110823664A (zh) * | 2019-11-27 | 2020-02-21 | 武汉医尔特科技有限公司 | 一种苏木素染色液及其制备方法 |
| CN113324822B (zh) * | 2021-06-30 | 2022-06-24 | 艾佧科技(北京)有限公司 | 一种树脂包埋带植入材料骨组织磨片的he染色方法 |
| CN114459861A (zh) * | 2021-12-27 | 2022-05-10 | 桂林优利特医疗电子有限公司 | 一种液基脱落细胞染色液及染色方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1764469A (zh) * | 2003-03-31 | 2006-04-26 | 西泰克公司 | 巴氏染色方法 |
| CN103096866A (zh) * | 2010-03-19 | 2013-05-08 | 墨尔本大学 | 多孔牙齿羟基磷灰石的检测方法及试剂盒 |
-
2013
- 2013-12-31 CN CN201310752989.7A patent/CN103725040B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1764469A (zh) * | 2003-03-31 | 2006-04-26 | 西泰克公司 | 巴氏染色方法 |
| CN103096866A (zh) * | 2010-03-19 | 2013-05-08 | 墨尔本大学 | 多孔牙齿羟基磷灰石的检测方法及试剂盒 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 一种再改良的Harris苏木素染液的最新配制法;黎红等;《海南医学》;20060728(第07期);139 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103725040A (zh) | 2014-04-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103725040B (zh) | 一种苏木素伊红染色液及其制备方法 | |
| CN103694732A (zh) | 一种苏木素染色液及其含苏木素染色液的he染色液 | |
| Gamble et al. | The hematoxylins and eosin | |
| CN104744967A (zh) | 一种伊红染色液及其含伊红染色液的he染色液 | |
| CN105651580B (zh) | 一种苏木素伊红混合染色液 | |
| CN102392284B (zh) | 铝阳极氧化膜着色封闭一步处理的方法 | |
| CN102787321B (zh) | 烧结钕铁硼表面镍铜镍镀层的退镀液及其退镀工艺 | |
| CN102206826B (zh) | 复匹配型铜缓蚀剂及其制备方法、表面处理方法 | |
| CN105839093A (zh) | 一种电镀铜用常温无铬钝化液及其钝化工艺 | |
| CN102534722B (zh) | 用于铝合金焊接区域、盲孔工件表面的染色前处理剂及其应用工艺 | |
| CN104342736A (zh) | 一种铝合金氧化膜无镍常温封闭工艺及封闭剂 | |
| CN103526258A (zh) | 二步法铸铝合金微弧氧化处理方法 | |
| CN101251449A (zh) | 一种医学组织切片染色方法 | |
| CN104630760A (zh) | 一种黄铜表面制备紫色化学转化膜的制备方法 | |
| CN102167914A (zh) | 无汞型环保苏木素染色液 | |
| CN104651905A (zh) | 一种阳极铝匀染缓染助剂及其操作液,和阳极铝匀染缓染处理工艺 | |
| CN112798385A (zh) | 一种环保苏木素染色液、巴氏染色液及其制备方法与应用 | |
| CN103305855A (zh) | 一种节能环保型铝合金阳极氧化膜退除工艺 | |
| CN101994109A (zh) | 一种不锈钢着色液、制备方法及着色方法 | |
| CN103276431B (zh) | 铝制品高光阳极工艺 | |
| CN102286603A (zh) | 巴氏染色液及其快速染色方法 | |
| CN103628310A (zh) | 一种棉织物增深染色方法 | |
| CN106756939A (zh) | 铝钝化液及其制备方法 | |
| CN110907257A (zh) | 一种苏木素染液及其制备方法、应用方法 | |
| CN102181851B (zh) | 镁合金表面涂装的无水前处理方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20170818 Address after: 214063 Jiangsu city of Wuxi province Qian Rong Lu No. 20 Patentee after: Wuxi Jiangyuan Industry Company Jiangsu Institute of Nuclear Medicine Address before: 214063 Jiangsu city of Wuxi province Qian Rong Lu No. 20 Patentee before: Jiangsu Prov. Inst. of Atomic Medicine |
|
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder | ||
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder |
Address after: 214063 Jiangsu city of Wuxi province Qian Rong Lu No. 20 Patentee after: Wuxi Jiangyuan industrial technology and Trade Co.,Ltd. Address before: 214063 Jiangsu city of Wuxi province Qian Rong Lu No. 20 Patentee before: WUXI JIANGYUAN INDUSTRIAL TECHNOLOGY AND TRADE Corp. |