CN109799124A - 一种结核分枝杆菌荧光抗酸染色液 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种结核分枝杆菌荧光抗酸染色液，包括染色剂、脱色剂、复染剂和清洗液；每100ml所述染色剂包括以下含量的各组分：金胺O 0.01‑0.5g、罗丹明B 0.01‑0.5g、促进剂1‑5g、保湿剂1‑10ml、醇溶剂11‑40ml、去离子水50‑70ml。本发明采用传统的三步染色法，将金胺O和罗丹明B两种荧光染料结合到一起，大大缩短了荧光抗酸染色时间，同时由于两种荧光染料的同时存在，这种方法可以在同一视野观察两种荧光，更能快速找出抗酸性菌。且该染色液同时适用于手工染色和自动染色机染色，更具有临床实用性。
Description
技术领域
本发明属于检测技术领域，涉及一种结核分枝杆菌荧光抗酸染色液。
背景技术
抗酸染色法Acid－fast staining method 1882年由埃利希(F.Ehrlich)首创并经F.齐尔(Ziehl)改进而创造出的细菌染色法。其中最具代表性的为对结核菌的齐尔-尼尔森(Ziehl-Neelsen)染色法和齐尔-加贝特(Ziehl-Gabbet)染色法。该方法染色的样本需要阅片300个视野，时间长，且敏感性低。而荧光染色样本仅需检查50个视野，可缩短阅片时间，敏感度高。
结核分枝杆菌荧光染色法通常使用金胺O或金胺O和罗丹明B联合使用作为荧光染料。金胺O荧光染色法第一步金胺O染色要15分钟，脱色2分钟，复染2分钟，整个染色过程大概需要20分钟。而金胺O和罗丹明B联合使用时，罗丹明B作为单独溶液，先使用罗丹明B染色30-90S，再滴加金胺O染液染色15分钟，四步染色，操作复杂，染色时间较长。
现有技术中，专利CN108931413A中公开了一种改良型结核分枝杆菌快速抗酸荧光染色试剂，其采用的染料为金胺O。且其品稳定性好，两种试剂，只需两步操作即可完成染色，且染色时间由传统的20分钟缩减到2分钟左右。
专利CN104297038A中公开了一种结核分枝杆菌荧光抗酸染色染液，其采用的染料为罗丹明B。该方法继承了荧光染色法的快速、敏感、简单等固有优点，又避免了荧光快速衰减的缺点。
专利CN108931413A中改变了传统的三步法染色方式，对于临床检验，客户则更接受三步法染色。专利CN104297038A中仅适用罗丹明B为荧光染料，对于多数客户来讲，更倾向于金胺O的荧光颜色。因此，本发明提供的染色剂仍采用三步染色法，染色时间较传统时间短，同时可配合自动染片机使用，更具有临床实用性。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种结核分枝杆菌荧光抗酸染色液。将两种染料联合且同时使用，同时满足手工和机器两种染色方法，且同时兼顾传统的三步染色法，更便于临床应用的推广。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
本发明提供了一种结核分枝杆菌荧光抗酸染色液，包括染色剂、脱色剂、复染剂和清洗液；所述染色剂包括以下质量百分含量的各组分：每100ml所述染色剂包括以下含量的各组分：金胺O 0.01-0.5g、罗丹明B 0.01-0.5g、促进剂1-5g、保湿剂1-10ml、醇溶剂11-40ml、去离子水50-70ml。所述金胺O或罗丹明B含量过高时，会导致贮存时间久而致染料沉积。
更有选所述金胺O与罗丹明B的含量比大于等于1:1，以金胺O为主染料。
优选地，所述促进剂为苯酚；所述保湿剂为甘油；所述醇溶剂为乙醇、异丙醇。由于异丙醇具有更强的细胞通透性，更容带染料渗入细胞内，但气味重，因此将异丙醇胡乙醇联合使用可达到最佳的效果。
优选地，所述脱色剂为酸性酒精，包括以下质量百分含量的各组分：酸0.5-5％，酒精95-99.5％。
优选地，所述酒精为无水酒精或95％酒精。
优选地，所述复染剂为高锰酸钾水溶液或亚甲基蓝水溶液。
优选地，所述高锰酸钾水溶液的质量浓度为0.1-2％；所述亚甲基蓝水溶液的质量浓度为0.1-2％。
优选地，所述清洗液为乙醇。更优选无水乙醇或95％乙醇。用于仪器清洗或者样本仪器内固定。
本发明还提供了一种基于前述的结核分枝杆菌荧光抗酸染色液的染色方法，包括以下步骤：
采用染色液对痰标样本进行手工染色或自动染色机染色，即可。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明采用传统的三步染色法，将金胺O和罗丹明B两种荧光染料结合到一起，大大缩短了荧光抗酸染色时间，同时由于两种荧光染料的同时存在，这种方法可以在同一视野观察两种荧光，更能快速找出抗酸性菌。
本发明同时适用于手工染色和自动染色机染色，更具有临床实用性，且配合抗酸染色仪器(自动染色机)使用，染色时间短，效率高，环境干净整洁，减少操作人员与样本接触的时间，降低了生物危害。
附图说明
通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本发明的其它特征、目的和优点将会变得更明显：
图1为本发明手工染色的结果；
图2为本发明机器染色的结果。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变化和改进。这些都属于本发明的保护范围。
实施例1
本实施例提供了一种结核分枝杆菌荧光抗酸染色液，包括以下组分：
(1)染色剂
(2)脱色剂
37％盐酸 1ml
无水乙醇 99ml
(3)复染剂
高锰酸钾 0.5g
去离子水 100ml
(4)清洗液
95％乙醇 100ml
选取结核杆菌阳性和阴性痰标本各5张，用上述试剂进行手工抗酸染色，染色步骤：染色剂覆盖痰膜染色10min，清水冲洗，脱色剂脱色1-2min，清水冲洗，复染剂复染1min，清水冲洗，干燥待检。
在＞410nm荧光显微镜下观察，如图1所示，阳性结核杆菌呈杆状荧光，阴性标本则没有杆状荧光出现。结果显示，该试剂能够使结核杆菌具备荧光标记，且本试剂染色时间更短。
另选取同一批结核杆菌阳性和阴性痰标本，采用上海皓信公司的自动染片机进行荧光抗酸染色，ABCDE分别为染色剂、脱色剂、复染剂、去离子水、清洗剂，选择程序P5,开启加热，酸性酒精中，高锰酸钾中，进行荧光抗酸染色，染色时间8-10min。
同样将染色样本在＞410nm荧光显微镜下观察，结果如图2所示，阳性结核杆菌呈杆状荧光，阴性标本则没有杆状荧光出现。结果显示，该试剂使用自动化染色能够使结核杆菌备荧光标记，且染色时间短，染色环境整洁，操作人员几乎不用直接接触样本，生物危害性低。
实施例2
本实施例提供了一种结核分枝杆菌荧光抗酸染色液，包括以下组分：
(1)染色剂
(2)脱色剂
37％盐酸 5ml
无水乙醇 95ml
(3)复染剂
高锰酸钾 0.5g
去离子水 100ml
(4)清洗液
95％乙醇 100ml
选取结核杆菌阳性和阴性痰标本各5张，用上述试剂进行手工抗酸染色，染色步骤：染色剂覆盖痰膜染色10min，清水冲洗，脱色剂脱色1-2min，清水冲洗，复染剂复染1min，清水冲洗，干燥待检。
在＞410nm荧光显微镜下观察，阳性结核杆菌呈杆状荧光，阴性标本则没有杆状荧光出现。结果显示，该试剂能够使结核杆菌具备荧光标记，且本试剂染色时间更短。
另选取同一批结核杆菌阳性和阴性痰标本，采用上海皓信公司的自动染片机进行荧光抗酸染色，ABCDE分别为染色剂、脱色剂、复染剂、去离子水、清洗剂，选择程序P5,开启加热，酸性酒精中，高锰酸钾中，进行荧光抗酸染色，染色时间8-10min。
同样将染色样本在＞410nm荧光显微镜下观察，阳性结核杆菌呈杆状荧光，阴性标本则没有杆状荧光出现。结果显示，该试剂使用自动化染色能够使结核杆菌备荧光标记，且染色时间短，染色环境整洁，操作人员几乎不用直接接触样本，生物危害性低。
实施例3
本实施例提供了一种结核分枝杆菌荧光抗酸染色液，包括以下组分：
(1)染色剂
(2)脱色剂
37％盐酸 0.5ml
无水乙醇 99.5ml
(3)复染剂
高锰酸钾 0.5g
去离子水 100ml
(4)清洗液
无水乙醇 100ml
选取结核杆菌阳性和阴性痰标本各5张，用上述试剂进行手工抗酸染色，染色步骤：染色剂覆盖痰膜染色10min，清水冲洗，脱色剂脱色1-2min，清水冲洗，复染剂复染1min，清水冲洗，干燥待检。
在＞410nm荧光显微镜下观察，阳性结核杆菌呈杆状荧光，阴性标本则没有杆状荧光出现。结果显示，该试剂能够使结核杆菌具备荧光标记，且本试剂染色时间更短。
另选取同一批结核杆菌阳性和阴性痰标本，采用上海皓信公司的自动染片机进行荧光抗酸染色，ABCDE分别为染色剂、脱色剂、复染剂、去离子水、清洗剂，选择程序P5,开启加热，酸性酒精中，高锰酸钾中，进行荧光抗酸染色，染色时间8-10min。
同样将染色样本在＞410nm荧光显微镜下观察，阳性结核杆菌呈杆状荧光，阴性标本则没有杆状荧光出现。结果显示，该试剂使用自动化染色能够使结核杆菌备荧光标记，且染色时间短，染色环境整洁，操作人员几乎不用直接接触样本，生物危害性低。
以上对本发明的具体实施例进行了描述。需要理解的是，本发明并不局限于上述特定实施方式，本领域技术人员可以在权利要求的范围内做出各种变化或修改，这并不影响本发明的实质内容。在不冲突的情况下，本申请的实施例和实施例中的特征可以任意相互组合。
Claims (7)
1.一种结核分枝杆菌荧光抗酸染色液，其特征在于，包括染色剂、脱色剂、复染剂和清洗液；每100ml所述染色剂包括以下含量的各组分：金胺O 0.01-0.5g、罗丹明B0.01-0.5g、促进剂1-5g、保湿剂1-10ml、醇溶剂11-40ml、去离子水50-70ml。
2.根据权利要求1所述的结核分枝杆菌荧光抗酸染色液，其特征在于，所述促进剂为苯酚；所述保湿剂为甘油；所述醇溶剂为乙醇、异丙醇。
3.根据权利要求1所述的结核分枝杆菌荧光抗酸染色液，其特征在于，所述脱色剂为酸性酒精，包括以下体积百分含量的各组分：酸0.5-5％，酒精95-99.5％。
4.根据权利要求3所述的结核分枝杆菌荧光抗酸染色液，其特征在于，所述酒精为无水酒精或95％酒精。
5.根据权利要求1所述的结核分枝杆菌荧光抗酸染色液，其特征在于，所述复染剂为高锰酸钾水溶液或亚甲基蓝水溶液。
6.根据权利要求1所述的结核分枝杆菌荧光抗酸染色液，其特征在于，所述清洗液为乙醇。
7.一种基于权利要求1所述的结核分枝杆菌荧光抗酸染色液的染色方法，其特征在于，包括以下步骤：
采用染色液对痰标样本进行手工染色或自动染片机染色，即可。
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