CN106950093A - 一种pc膜直接抗酸染色的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明实施例公开了一种PC膜直接抗酸染色的方法,包括以下步骤:将PC膜装在容器中;收集体液,使体液存留在PC膜上;将消化液加入到体液中;改变PC膜上侧或下侧的气压,使PC膜上侧气压大于下侧气压,使PC膜上侧的液体从PC膜下侧过滤排出;往容器加入石碳酸复红染液,直到整张PC膜都被染液浸泡,浸泡15‑30min;把石碳酸复红染液抽滤干净,加水,再抽滤干净;往容器中加适量的酸性酒精,抽滤干净;加水,抽滤干净;往容器中加亚甲基蓝染液,直到整张PC膜被染液浸泡,染色1‑5min;抽滤干净;取PC膜直接采用合适的制片方式,100倍油镜下观察,抗酸菌染成红色,杂菌染成蓝色。本发明提供的染色方法直接通过过滤后在PC膜上染色,不用进行冲洗步骤,不会造成抗酸菌的损失,也避免了挑选样品涂片而出现的随机性,能提高镜检检出率。
Description
技术领域
本发明涉及一种微生物染色方法,尤其涉及一种PC膜直接抗酸染色的方法。
背景技术
在生物实验中,常常需要将特定微生物染色,以便检测其是否存在于样品中,以及数量统计等。现有的染色方法有痰涂片直接染色、夹层杯离心染色等,这些方法在染色时需要反复冲洗,抗酸菌很容易被冲洗掉,造成损失,影响镜检检出率。
另外,在取样涂片的过程,非常考验操作人员的经验,因为对样品进行液化和富集后,特定微生物容易聚集在某一位置,取样的位置不同,获得的涂片样品中特定微生物的数量随机性很大,从而影响涂片染色的准确率。
发明内容
本发明实施例所要解决的技术问题在于,提供一种PC膜直接抗酸染色的方法,可把抗酸菌富集在PC膜上,直接通过过滤后在PC膜上染色,不用进行冲洗步骤,不会造成抗酸菌的损失,能提高镜检准确率。
为了解决上述技术问题,本发明提供了一种PC膜直接抗酸染色的方法,包括以下步骤:
1) 将PC膜装在容器中,这个容器必须保证在过滤富集抗酸菌的过程中,密封性好,且不会造成PC膜变形;
2) 收集体液,使体液存留在PC膜上;
3) 将消化液加入到体液中,加入比例为消化液:体液=1:1到1:1.5,消化15-30min;
4) 改变PC膜上侧或下侧的气压,使PC膜上侧气压大于下侧气压,使PC膜上侧的液体从PC膜下侧过滤排出;
5) 往容器加入石碳酸复红染液,直到整张PC膜都被染液浸泡,浸泡15-30min;
6) 把石碳酸复红染液抽滤干净,加水,再抽滤干净;
7) 往容器中加适量的酸性酒精,抽滤干净;
8) 加水,抽滤干净;
9) 往容器中加亚甲基蓝染液,直到整张PC膜被染液浸泡,染色1-5min;抽滤干净;
10) 取PC膜直接采用合适的制片方式,100倍油镜下观察,抗酸菌染成红色,杂菌染成蓝色。
作为上述方案的改进,所述消化液为二硫苏糖醇(DTT)。
作为上述方案的改进,在步骤3)消化15-30min后,加入等体积的NALC-NaOH,震荡消化相同时间。
作为上述方案的改进,改变PC膜上侧或下侧的气压,使PC膜上侧气压大于下侧气压是指:在容器底部连接真空泵,将PC膜下侧空气抽出,从而使PC膜上侧气压大于下侧气压。
作为上述方案的改进,改变PC膜上侧或下侧的气压,使PC膜上侧气压大于下侧气压是指:在容器顶部连接真空泵,将空气压入PC膜上侧,从而使PC膜上侧气压大于下侧气压。
作为上述方案的改进,PC膜上侧和下侧的气压差为-30--70kPa。
实施本发明实施例,具有如下有益效果:
本发明提供的染色方法直接通过过滤后在PC膜上染色,不用进行冲洗步骤,不会造成抗酸菌的损失,也避免了挑选样品涂片而出现的随机性,能提高镜检准确率。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚,下面将对本发明作进一步地详细描述。
实施例1
本发明实施例提供了一种PC膜直接抗酸染色的方法,包括以下步骤:
1) 将PC膜装在容器中,这个容器必须保证在过滤富集抗酸菌的过程中,密封性好,且不会造成PC膜变形;目的:保证PC膜的完整性和易于观察。
2) 收集痰液,使含抗酸菌的液体(下面以痰液为例)存留在PC膜上。
3) 将消化液加入到痰液中,所述消化液为二硫苏糖醇(DTT),加入比例为消化液:痰液=1:1,消化15min;目的:保证痰液完全被液化,易于过滤。
4) 在容器底部连接真空泵,将PC膜下侧空气抽出,从而使PC膜上侧气压大于下侧气压,PC膜上侧和下侧的气压差为-70kPa,使PC膜上侧的液体从PC膜下侧过滤排出;目的:富集抗酸菌。
5) 往容器加入石碳酸复红染液,直到整张PC膜都被染液浸泡,浸泡15min。目的:保证抗酸菌染成红色。
6) 把石碳酸复红染液抽滤干净,加水,再抽滤干净。
7) 往容器中加适量的酸性酒精,抽滤干净;目的:把杂菌及PC膜上的石碳酸复红染料洗脱干净。
8) 加水,抽滤干净;目的:减少酸性酒精对复染染色的影响。
9) 往容器中加亚甲基蓝染液,直到整张PC膜被染液浸泡,染色2min。抽滤干净。
10) 取PC膜直接采用合适的制片方式,100倍油镜下观察,抗酸菌染成红色,杂菌染成蓝色。目的:杂菌被染成蓝色,易于与抗酸菌分辨。
本实施例直接通过过滤后在PC膜上染色,不用进行冲洗步骤,不会造成抗酸菌的损失,能提高镜检检出率。
实施例2
本发明实施例提供了一种PC膜直接抗酸染色的方法,包括以下步骤:
1) 将PC膜装在容器中,这个容器必须保证在过滤富集抗酸菌的过程中,密封性好,且不会造成PC膜变形;目的:保证PC膜的完整性和易于观察。
2) 收集痰液,使含抗酸菌的液体(下面以痰液为例)存留在PC膜上。
3) 将消化液加入到痰液中,所述消化液为二硫苏糖醇(DTT),加入比例为消化液:痰液=1:1,消化15min;然后加入等体积的NALC-NaOH,震荡消化相同时间。目的:保证痰液完全被液化,易于过滤。
4) 在容器底部连接真空泵,将PC膜下侧空气抽出,从而使PC膜上侧气压大于下侧气压,使PC膜上侧的液体从PC膜下侧过滤排出;目的:富集抗酸菌。
5) 往容器加入石碳酸复红染液,直到整张PC膜都被染液浸泡,浸泡15min。目的:保证抗酸菌染成红色。
6) 把石碳酸复红染液抽滤干净,加水,再抽滤干净。
7) 往容器中加适量的酸性酒精,抽滤干净;目的:把杂菌及PC膜上的石碳酸复红染料洗脱干净。
8) 加水,抽滤干净;目的:减少酸性酒精对复染染色的影响。
9) 往容器中加亚甲基蓝染液,直到整张PC膜被染液浸泡,染色2min。抽滤干净。
10) 取PC膜直接采用合适的制片方式,100倍油镜下观察,抗酸菌染成红色,杂菌染成蓝色。目的:杂菌被染成蓝色,易于与抗酸菌分辨。
本实施例直接通过过滤在PC膜上染色,不用进行冲洗步骤,不会造成抗酸菌的损失,能提高镜检检出率。
实施例3
本发明实施例提供了一种PC膜直接抗酸染色的方法,包括以下步骤:
1) 将PC膜装在容器中,这个容器必须保证在过滤富集抗酸菌的过程中,密封性好,且不会造成PC膜变形;目的:保证PC膜的完整性和易于观察。
2) 收集痰液,使含抗酸菌的液体(下面以痰液为例)存留在PC膜上。
3) 将消化液加入到痰液中,所述消化液为二硫苏糖醇(DTT),加入比例为消化液:痰液=1:1.5,消化30min;然后加入等体积的NALC-NaOH,震荡消化相同时间。目的:保证痰液完全被液化,易于过滤。
4) 在容器顶部连接真空泵,将空气压入PC膜上侧,从而使PC膜上侧气压大于下侧气压,PC膜上侧和下侧的气压差为-70kPa,使PC膜上侧的液体从PC膜下侧过滤排出;目的:富集抗酸菌。
5) 往容器加入石碳酸复红染液,直到整张PC膜都被染液浸泡,浸泡30min。目的:保证抗酸菌染成红色。
6) 把石碳酸复红染液抽滤干净,加水,再抽滤干净。
7) 往容器中加适量的酸性酒精,抽滤干净;目的:把杂菌及PC膜上的石碳酸复红染料洗脱干净。
8) 加水,抽滤干净;目的:减少酸性酒精对复染染色的影响。
9) 往容器中加亚甲基蓝染液,直到整张PC膜被染液浸泡,染色2min。抽滤干净。
10) 取PC膜直接采用合适的制片方式,100倍油镜下观察,抗酸菌染成红色,杂菌染成蓝色。目的:杂菌被染成蓝色,易于与抗酸菌分辨。
本实施例直接通过过滤后在PC膜上染色,不用进行冲洗步骤,不会造成抗酸菌的损失,能提高镜检检出率。
实施例4
本发明实施例提供了一种PC膜直接抗酸染色的方法,包括以下步骤:
1) 将PC膜装在容器中,这个容器必须保证在过滤富集抗酸菌的过程中,密封性好,且不会造成PC膜变形;目的:保证PC膜的完整性和易于观察。
2) 收集痰液,使含抗酸菌的液体(下面以痰液为例)存留在PC膜上。
3) 将消化液加入到痰液中,所述消化液为二硫苏糖醇(DTT),加入比例为消化液:痰液=1:1.5,消化20min;目的:保证痰液完全被液化,易于过滤。
4) 在容器底部连接真空泵,将PC膜下侧空气抽出,从而使PC膜上侧气压大于下侧气压,PC膜上侧和下侧的气压差为-30kPa,使PC膜上侧的液体从PC膜下侧过滤排出;目的:富集抗酸菌。
5) 往容器加入石碳酸复红染液,直到整张PC膜都被染液浸泡,浸泡20min。目的:保证抗酸菌染成红色。
6) 把石碳酸复红染液抽滤干净,加水,再抽滤干净。
7) 往容器中加适量的酸性酒精,抽滤干净;目的:把杂菌及PC膜上的石碳酸复红染料洗脱干净。
8) 加水,抽滤干净;目的:减少酸性酒精对复染染色的影响。
9) 往容器中加亚甲基蓝染液,直到整张PC膜被染液浸泡,染色5min。抽滤干净。
10) 取PC膜直接采用合适的制片方式,100倍油镜下观察,抗酸菌染成红色,杂菌染成蓝色。目的:杂菌被染成蓝色,易于与抗酸菌分辨。
本实施例直接通过过滤在PC膜上染色,不用进行冲洗步骤,不会造成抗酸菌的损失,能提高镜检检出率。
实施例5
本发明实施例提供了一种PC膜直接抗酸染色的方法,包括以下步骤:
1) 将PC膜装在容器中,这个容器必须保证在过滤富集抗酸菌的过程中,密封性好,且不会造成PC膜变形;目的:保证PC膜的完整性和易于观察。
2) 收集痰液,使含抗酸菌的液体(下面以痰液为例)存留在PC膜上。
3) 将消化液加入到痰液中,所述消化液为二硫苏糖醇(DTT),加入比例为消化液:痰液=1:1,消化15min;目的:保证痰液完全被液化,易于过滤。
4) 在容器底部连接真空泵,将PC膜下侧空气抽出,从而使PC膜上侧气压大于下侧气压,PC膜上侧和下侧的气压差为-70kPa,使PC膜上侧的液体从PC膜下侧过滤排出;目的:富集抗酸菌。
5) 往容器加入石碳酸复红染液,直到整张PC膜都被染液浸泡,浸泡15min。目的:保证抗酸菌染成红色。
6) 把石碳酸复红染液抽滤干净,加水,再抽滤干净。
7) 往容器中加适量的酸性酒精,抽滤干净;目的:把杂菌及PC膜上的石碳酸复红染料洗脱干净。
8) 加水,抽滤干净;目的:减少酸性酒精对复染染色的影响。
9) 往容器中加亚甲基蓝染液,直到整张PC膜被染液浸泡,染色5min。抽滤干净。
10) 取PC膜直接,采用合适的制片方式,100倍油镜下观察,抗酸菌染成红色,杂菌染成蓝色。目的:杂菌被染成蓝色,易于与抗酸菌分辨。
本实施例直接通过过滤后在PC膜上染色,不用进行冲洗步骤,不会造成抗酸菌的损失,能提高镜检检出率。
以上所揭露的仅为本发明一种较佳实施例而已,当然不能以此来限定本发明之权利范围,因此依本发明权利要求所作的等同变化,仍属本发明所涵盖的范围。
Claims (6)
1.一种PC膜直接抗酸染色的方法,其特征在于,包括以下步骤:
1) 将PC膜装在容器中,这个容器必须保证在过滤富集抗酸菌的过程中,密封性好,且不会造成PC膜变形;
2) 收集体液,使体液存留在PC膜上;
3) 将消化液加入到体液中,加入比例为消化液:体液=1:1到1:1.5,消化15-30min;
4) 改变PC膜上侧或下侧的气压,使PC膜上侧气压大于下侧气压,使PC膜上侧的液体从PC膜下侧过滤排出;
5) 往容器加入石碳酸复红染液,直到整张PC膜都被染液浸泡,浸泡15-30min;
6) 把石碳酸复红染液抽滤干净,加水,再抽滤干净;
7) 往容器中加适量的酸性酒精,抽滤干净;
8) 加水,抽滤干净;
9) 往容器中加亚甲基蓝染液,直到整张PC膜被染液浸泡,染色1-5min,抽滤干净;
10) 取PC膜直接采用合适的制片方式,100倍油镜下观察,抗酸菌染成红色,杂菌染成蓝色。
2.如权利要求1所述的PC膜直接抗酸染色的方法,其特征在于,所述消化液为二硫苏糖醇(DTT)。
3.如权利要求2所述的PC膜直接抗酸染色的方法,其特征在于,在步骤3)消化15-30min后,加入等体积的NALC-NaOH,震荡消化相同时间。
4.如权利要求1所述的PC膜直接抗酸染色的方法,其特征在于,改变PC膜上侧或下侧的气压,使PC膜上侧气压大于下侧气压是指:在容器底部连接真空泵,将PC膜下侧空气抽出,从而使PC膜上侧气压大于下侧气压。
5.如权利要求1所述的PC膜直接抗酸染色的方法,其特征在于,改变PC膜上侧或下侧的气压,使PC膜上侧气压大于下侧气压是指:在容器顶部连接真空泵,将空气压入PC膜上侧,从而使PC膜上侧气压大于下侧气压。
6.如权利要求4或5所述的PC膜直接抗酸染色的方法,其特征在于, PC膜上侧和下侧的气压差为-30--70kPa。
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Legal Events
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---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
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Application publication date: 20170714 |