CN102735517B - 一种b型流感嗜血杆菌发酵液的细菌荚膜染色方法 - Google Patents
一种b型流感嗜血杆菌发酵液的细菌荚膜染色方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102735517B CN102735517B CN201210221247.7A CN201210221247A CN102735517B CN 102735517 B CN102735517 B CN 102735517B CN 201210221247 A CN201210221247 A CN 201210221247A CN 102735517 B CN102735517 B CN 102735517B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- microslide
- haemophilus influenzae
- dyeing
- smear
- type haemophilus
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Abstract
本发明公开了一种b型流感嗜血杆菌发酵液的细菌荚膜染色方法,它包括预处理、制片、涂片、干燥、染色、二次干燥和镜检几个步骤。本方法采用负染色原理,保证了细菌荚膜的完整性,菌体范围大,容易辨认;染色效果好,荚膜与背景颜色对比明显,容易观察;操作过程简单,对实验员的操作技能要求不高,实验成功率高。
Description
技术领域
本发明涉及一种细菌染色方法,具体涉及一种b型流感嗜血杆菌发酵液的细菌荚膜染色方法。
背景技术
流感嗜血杆菌(学名Haemophilus influenzae),简称嗜血杆菌,前称费佛氏杆菌(或译拜菲尔氏菌)或流感杆菌,属孤菌科嗜血杆菌属,是一种没有运动力的革兰氏阴性杆菌。
流感嗜血杆菌分类为荚膜菌株和无荚膜菌株两类。其中,荚膜类的乙型流感嗜血杆菌,即b型流感嗜血杆菌(简称Hib)是毒性的主因之一。为预防由流感嗜血杆菌引起的侵袭性感染,现今常采用纯化的Hib荚膜多糖与破伤风类毒素蛋白共价结合制成的b型流感嗜血杆菌结合疫苗对其进行预防。
Hib结合型疫苗的生产过程包括菌种传代培养、罐培养、多糖提取、纯化、衍生和结合等步骤。罐培养后Hib荚膜含量对荚膜多糖的产量有着直接的影响,因此对罐培养发酵液中Hib荚膜进行染色观察可以在一定程度上判断Hib荚膜多糖的产量,为发酵工艺的改进提供一定的指标,对发酵工艺条件的改良优化具有指导意义。
常用的细菌荚膜染色方法有赫(Hiss)氏染色法、墨汁染色法、Tyler法等。
赫(Hiss)氏染色法的操作过程如下:
按常规方法涂片后在空气中自然干燥,然后用乙醇固定,滴加适量5ml结晶紫乙醇饱和溶液与95ml水的混合液后,加微热至发生蒸气,染色1min,最后使用200g/L硫酸铜水溶液将涂片上的染液洗去。观察结果,菌体及背景呈紫色,荚膜为鲜蓝色。
墨汁染色法的操作过程如下:
按常规方法涂片,在载玻片上滴1滴印度墨水或5%黑色素水溶液,加上盖玻片,轻轻压一下,使标本混合液变薄后即可镜检。观察结果,菌体及背景呈黑色,荚膜无色。
Tyler法的操作过程如下:
按按常规方法涂片后在空气中自然干燥,用20%CuSO4水溶液洗去结晶紫,用吸水纸吸干水分后,立即加1~2滴香柏油于涂片处,以防止CuSO4结晶的形成。取另一块干净的盖玻片与载玻片成45度角将混合物由左侧刮至右侧,并在空气中干燥。结果,菌体紫色,荚膜无色或浅紫色。
上述方法以及其他的一些方法都存在一定的缺点。首先,操作过程比较复杂,对实验员的操作技能要求较高,容导致实验失败;对染色剂的稳定性要求也较高,若选用大颗粒染色剂,往往会影响观察的结果;此外,这些方法染色后往往只能看到少数的几个菌体,且需要在显微镜下大范围查找,对于实际操作很不方便。而且由于细菌荚膜含水量高,加热会使菌体失水收缩,与细胞周围染料脱离而产生透明的明亮区,导致某些无荚膜的菌体被误认为有荚膜的菌体。
发明内容
本发明的目的即在于克服现有技术的不足,提供一种操作简单,染色效果好,结果清晰容易辨认的b型流感嗜血杆菌发酵液的细菌荚膜染色方法。
本发明的目的通过以下技术方案实现:
一种b型流感嗜血杆菌发酵液的细菌荚膜染色方法,它包括以下步骤:
A.预处理:取b型流感嗜血杆菌发酵液1ml,置冰浴中冷却0.5~1.5min;
B.制片:用0~20μL移液枪取预处理后的b型流感嗜血杆菌发酵液4~6μL滴于载玻片左上角,并取4~6μL绘图墨水滴于载玻片左下角,使b型流感嗜血杆菌发酵液与绘图墨水混合均匀;
C.涂片:取干净的盖玻片,与并使之与载玻片成45°角,然后将混合物由左侧刮至右侧;
D.干燥:将载玻片放置于空气中自然晾干;
E.染色:干燥后,在载玻片上滴浓度为0.5%沙黄溶液1~3滴,固定1.5~2.5min后用水将涂片上的沙黄溶液洗去;
F.二次干燥:用吸水纸吸干载玻片周围的水分,然后将载玻片晾干;
G.镜检:将二次干燥后的载玻片置于油镜下观察,观察到的菌体与背景为明亮的淡红色,荚膜无色。
本发明的优点在于:
1.操作过程简单,对实验员的操作技能要求不高,实验成功率高;
2.染色效果好,荚膜与背景颜色对比明显,容易观察;
3.采用负染色原理,保证了细菌荚膜的完整性,菌体范围大,容易辨认;
4.b型流感嗜血杆菌发酵液经冷却处理,可以准确地观察有荚膜的菌体数量。
附图说明
图1为实施例1的b型流感嗜血杆菌荚膜染色后的观察图;
图2为实施例2的b型流感嗜血杆菌荚膜染色后的观察图;
图3为实施例3的b型流感嗜血杆菌荚膜染色后的观察图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明,本发明的保护范围不限于以下所述。
实施例1:
一种b型流感嗜血杆菌发酵液的细菌荚膜染色方法,它包括以下步骤:
A.预处理:取b型流感嗜血杆菌发酵液1ml,置冰浴中冷却0.5min;
B.制片:用0~20μL移液枪取预处理后的b型流感嗜血杆菌发酵液4μL滴于载玻片左上角,并取4μL绘图墨水滴于载玻片左下角,使b型流感嗜血杆菌发酵液与绘图墨水混合均匀;
C.涂片:取干净的盖玻片,与并使之与载玻片成45°角,然后将混合物由左侧刮至右侧;
D.干燥:将载玻片放置于空气中自然晾干;
E.染色:干燥后,在载玻片上滴浓度为0.5%沙黄溶液1滴,固定1.5min后用水将涂片上的沙黄溶液洗去;
F.二次干燥:用吸水纸吸干载玻片周围的水分,然后将载玻片晾干;
G.镜检:如图1所示,将二次干燥后的载玻片置于油镜下观察,观察到的菌体与背景为明亮的淡红色,荚膜无色。
实施例2:
一种b型流感嗜血杆菌发酵液的细菌荚膜染色方法,它包括以下步骤:
A.预处理:取b型流感嗜血杆菌发酵液1ml,置冰浴中冷却1min;
B.制片:用0~20μL移液枪取预处理后的b型流感嗜血杆菌发酵液5μL滴于载玻片左上角,并取5μL绘图墨水滴于载玻片左下角,使b型流感嗜血杆菌发酵液与绘图墨水混合均匀;
C.涂片:取干净的盖玻片,与并使之与载玻片成45°角,然后将混合物由左侧刮至右侧;
D.干燥:将载玻片放置于空气中自然晾干;
E.染色:干燥后,在载玻片上滴浓度为0.5%沙黄溶液2滴,固定2min后用水将涂片上的沙黄溶液洗去;
F.二次干燥:用吸水纸吸干载玻片周围的水分,然后将载玻片晾干;
G.镜检:如图2所示,将二次干燥后的载玻片置于油镜下观察,观察到的菌体与背景为明亮的淡红色,荚膜无色。
实施例3:
一种b型流感嗜血杆菌发酵液的细菌荚膜染色方法,它包括以下步骤:
A.预处理:取b型流感嗜血杆菌发酵液1ml,置冰浴中冷却1.5min;
B.制片:用0~20μL移液枪取预处理后的b型流感嗜血杆菌发酵液6μL滴于载玻片左上角,并取6μL绘图墨水滴于载玻片左下角,使b型流感嗜血杆菌发酵液与绘图墨水混合均匀;
C.涂片:取干净的盖玻片,与并使之与载玻片成45°角,然后将混合物由左侧刮至右侧;
D.干燥:将载玻片放置于空气中自然晾干;
E.染色:干燥后,在载玻片上滴浓度为0.5%沙黄溶液3滴,固定2.5min后用水将涂片上的沙黄溶液洗去;
F.二次干燥:用吸水纸吸干载玻片周围的水分,然后将载玻片晾干;
G.镜检:如图3所示,将二次干燥后的载玻片置于油镜下观察,观察到的菌体与背景为明亮的淡红色,荚膜无色。
Claims (1)
1.一种b型流感嗜血杆菌发酵液的细菌荚膜染色方法,它包括以下步骤:
A.制片:b型流感嗜血杆菌发酵液滴于载玻片上,与绘图墨水混合均匀;
B.涂片:取干净的盖玻片,涂片;
C.染色:用沙黄对载玻片上的b型流感嗜血杆菌染色,在载玻片上滴浓度为0.5%沙黄溶液1~3滴,固定1.5~2.5min后用水将涂片上的沙黄溶液洗去;
D.镜检:将载玻片置于油镜下观察,观察到的菌体与背景为明亮的淡红色,荚膜无色;
其特征在于,
(1)制片前还包括预处理,所述预处理的方法为:取b型流感嗜血杆菌发酵液1ml,置冰浴中冷却0.5~1.5min;
(2)制片的方法为:用0~20μL移液枪取预处理后的b型流感嗜血杆菌发酵液4~6μL滴于载玻片左上角,并取4~6μL绘图墨水滴于载玻片左下角,使b型流感嗜血杆菌发酵液与绘图墨水混合均匀;
(3)涂片的方法为:取干净的盖玻片,与并使之与载玻片成45°角,然后将混合物由左侧刮至右侧;
(4)染色前需进行一次干燥,染色后进行二次干燥,所述一次干燥的方法为:将涂片后的载玻片放置于空气中自然晾干;二次干燥的方法为:染色后,用吸水纸吸干载玻片周围的水分,然后将载玻片晾干。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201210221247.7A CN102735517B (zh) | 2012-06-29 | 2012-06-29 | 一种b型流感嗜血杆菌发酵液的细菌荚膜染色方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201210221247.7A CN102735517B (zh) | 2012-06-29 | 2012-06-29 | 一种b型流感嗜血杆菌发酵液的细菌荚膜染色方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN102735517A CN102735517A (zh) | 2012-10-17 |
CN102735517B true CN102735517B (zh) | 2014-09-03 |
Family
ID=46991414
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201210221247.7A Expired - Fee Related CN102735517B (zh) | 2012-06-29 | 2012-06-29 | 一种b型流感嗜血杆菌发酵液的细菌荚膜染色方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN102735517B (zh) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104819886B (zh) * | 2015-04-21 | 2017-06-27 | 新乡医学院 | 一种细菌荚膜快速染色试剂及其染色方法 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1067682A (zh) * | 1991-06-07 | 1993-01-06 | 沈阳市皇姑区卫生防疫站 | 革兰氏、抗酸和荚膜细菌染色试品 |
WO2006112713A3 (en) * | 2005-04-18 | 2007-05-10 | Stichting Technologisch Top In | High throughput screening method for assessing heterogeneity of microorganisms |
CN101255458A (zh) * | 2008-04-03 | 2008-09-03 | 浙江大学 | 一种细菌的荚膜染色方法 |
-
2012
- 2012-06-29 CN CN201210221247.7A patent/CN102735517B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1067682A (zh) * | 1991-06-07 | 1993-01-06 | 沈阳市皇姑区卫生防疫站 | 革兰氏、抗酸和荚膜细菌染色试品 |
WO2006112713A3 (en) * | 2005-04-18 | 2007-05-10 | Stichting Technologisch Top In | High throughput screening method for assessing heterogeneity of microorganisms |
CN101255458A (zh) * | 2008-04-03 | 2008-09-03 | 浙江大学 | 一种细菌的荚膜染色方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN102735517A (zh) | 2012-10-17 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN102876081A (zh) | 苏木素染色液以及含苏木素染色液的巴氏染色试剂盒 | |
Burkinshaw et al. | The dyeing of poly (lactic acid) fibres with disperse dyes using ultrasound: Part 1–Initial studies | |
CN105802279A (zh) | 一种环保纳米染料组合物 | |
CN102286603B (zh) | 巴氏染色液及其快速染色方法 | |
CN102735517B (zh) | 一种b型流感嗜血杆菌发酵液的细菌荚膜染色方法 | |
CN106370503A (zh) | 有机速干封片剂 | |
CN104711315A (zh) | 一种肺炎链球菌的荚膜染色方法 | |
CN104777026A (zh) | 一种滴液式自动生物染色仪器 | |
CN104862997A (zh) | 一种耐高温的纺织染料 | |
CN107761409B (zh) | 一种紫红色液体分散染料及其制备方法与应用 | |
CN112129610B (zh) | 一种细菌荚膜染色方法及其用途 | |
CN104568551A (zh) | 一种抗酸染色法 | |
CN102493220A (zh) | 一种利用细菌染料灵菌红素对腈纶织物的染色方法 | |
CN110501336A (zh) | 肺炎链球菌的荚膜肿胀染色方法 | |
CN104390834A (zh) | 树脂切片的番红与甲基紫混合染色法及其染色液 | |
CN201689002U (zh) | 一种采用两步革兰染色的自动染色装置 | |
CN104819886B (zh) | 一种细菌荚膜快速染色试剂及其染色方法 | |
CN106950093A (zh) | 一种pc膜直接抗酸染色的方法 | |
CN109668771A (zh) | 一种液基脱落细胞染色液及其染色方法 | |
CN105624299A (zh) | 高致病性副溶血弧菌快速检测引物及试剂盒 | |
CN102010615B (zh) | 竹叶染料及提取方法和用途 | |
Okoye et al. | Beta vulgaris Ethanolic Root Extract: A Novel Cytoplasmic Dye for Tissue Demonstration | |
CN105040328A (zh) | 超临界二氧化碳果实纽扣染色釜及其染色工艺 | |
CN108165046A (zh) | 一种纺织用动植物性紫色染料 | |
Genevieve et al. | Acid-Base Indicator Properties of Dye from Local Plant: The Rosella Calyces (Hibiscus Sabdariffa) |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20140903 Termination date: 20170629 |
|
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |