CN108760445A - 一种染色槽染色方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种染色槽染色方法，在染色槽中对静止的细胞制片进行染色操作，所述染色操作具体包括：对细胞制片依次进行第一次冲洗液处理、第一次缓冲液处理、苏木素染色液处理、第二次缓冲液处理、盐酸酒精溶液处理和第三次缓冲液处理。本发明的染色槽染色方法具有可保证细胞核经苏木素染色后细胞核内部结构的清晰的优点。
Description
技术领域
本发明涉及脱落细胞染色技术，细胞核染色采用苏木素，包浆染色采用EAOG(简称巴氏染色)或者伊红(简称HE染色)，特别涉及一种在固定染色槽中进行的染色槽染色方法。
背景技术
现有液基细胞学检测技术，是将临床标本中的脱落细胞制片后，采用巴氏或者HE染色后才可以在光学显微镜下观察细胞核细微结构和胞浆形态，以对细胞做出形态学检查并判别异常，这就要求细胞核染色后内部结构务必清晰。
目前已经有二类染色技术，分别简称为缸染技术和槽染技术。已有的染色缸染色技术(缸染技术)，其染色方法为：将细胞制片装在玻片架上，一般是25个左右，再用人工或者机械，将玻片架分别送到一系列装有不同染色液或者其它溶液的染色缸中，按照规定顺序和时间来进行染色操作，所利用的溶液包括苏木素染色液，EA染色液、橘黄G染色液、EA染色液，乙醇、盐酸酒精，碳酸锂或者3％氨水、自来水等。
已有的染色槽染色技术(槽染技术)，其染色方法为：将玻片安装到染色版上，再在细胞制片上安装染色槽，利用染色槽上的硅胶圈进行底部密封，用染色版上的卡扣结构来压紧染色槽，建立一个敞口的桶状小容器。由人工或者机器驱动向这个染色槽中按照规定顺序和时间加入不同的溶液和染色液，进行染色操作，所利用的染液包括苏木素染色液，EAOG或者伊红染色液、缓冲液和乙醇等。
现有的染色缸染色技术一般包含盐酸酒精分化步骤，但现有的染色槽染色技术，没有看到利用盐酸酒精分化操作的，特别是对较小细胞来说，存在细胞核染色后内部结构不够清晰的问题。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是：提供一种将盐酸酒精分化引入到染色槽染色方法中，形成一种可保证细胞核染色后内部结构清晰的染色方法。
为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：
一种染色槽染色方法，在染色槽中对静止的细胞制片进行染色操作，所述染色操作具体包括：对细胞制片依次进行第一次冲洗液处理、第一次缓冲液处理、苏木素染色液处理、第二次缓冲液处理、盐酸酒精溶液处理和第三次缓冲液处理。
本发明的有益效果在于：
本发明对细胞制片进行苏木素染色后再进行盐酸酒精分化处理，具体包括第一次冲洗液处理、第一次缓冲液处理、苏木素染液处理、第二次缓冲液处理、盐酸酒精溶液处理和第三次缓冲液处理，即，设计上述包括苏木素染色和盐酸酒精分化处理的工艺步骤，使得经过上述盐酸分化处理后的细胞制片在进行后续的染色液染色(例如EA/OG染色液或者伊红染色液)之后，可很好地保证细胞核内部结构足够清晰。
附图说明
图1为本发明实施例一的染色槽染色方法染色后的细胞显微镜下图；
图2为本发明实施例二的染色槽染色方法染色后的细胞显微镜下图；
图3为本发明实施例三的染色槽染色方法染色后的细胞显微镜下图；
图4为对照试验组的采用现有技术中染色槽巴氏染色方法染色后的细胞显微镜下图。
具体实施方式
为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果，以下结合实施方式并配合附图予以说明。
本发明最关键的构思在于：针对染色槽染色方法，在细胞制片静止的情况下，先进行苏木素染色，再进行盐酸分化处理，并使操作步骤最简化。
本发明提供一种染色槽染色方法，在染色槽中对静止的细胞制片进行染色操作，所述染色操作具体包括对制片后的玻片依次进行第一次冲洗液处理、第一次缓冲液处理、苏木素处理、第二次缓冲液处理、盐酸酒精溶液处理和第三次缓冲液处理。
从上述描述可知，本发明的有益效果在于：
本发明对原有的染色缸染色技术进行改进，形成新的染色槽染色技术，包括：第一次冲洗液处理、第一次缓冲液处理、苏木素处理、第二次缓冲液处理、盐酸酒精溶液处理和第三次缓冲液处理，即设计上述包括苏木素染色和盐酸分化处理的工艺步骤，经过上述盐酸分化处理后的细胞制片在进行后续的染色液染色(例如EA/OG染色液或者伊红染色液)之后，可很好地保证细胞核内部结构足够清晰。
本发明的染色机理为：
盐酸酒精分化处理能够使细胞染色后核内部结构清晰的原理是盐酸酒精可以去除非特异性的苏木素染色，包括细胞核组分过量结合的苏木素染料和包浆中残留的苏木素染料。苏木素是碱性染料，可以在媒染剂的作用下，以离子键或者氢键与细胞核内的酸性染色质结合，使染色质着色，但也很容易导致染料过量结合，使染色质染色太深，甚至苏木素染料会通过吸附作用残留在胞浆内，使后续的包浆染色不正常，最终导致细胞核染色后，在光学显微镜下，内部结构看不清楚。
进一步的，所述第一次冲洗液处理、第一次缓冲液处理、苏木素处理、第二次缓冲液处理、盐酸酒精溶液处理和第三次缓冲液处理的处理时间依次为20秒以上、30-120s、15秒-5分钟、30-60秒、3-7秒和30秒以上。例如，其处理时间可以依次为：49-52秒、46-49秒、73-122秒、46-50秒、4-6秒和38-42秒。
进一步的，所述第一次冲洗液处理、第一次缓冲液处理、苏木素处理、第二次缓冲液处理、盐酸酒精溶液处理和第三次缓冲液处理的处理时间依次为50s、48s、75s、48s、5s和40s。
进一步的，将第三次缓冲液处理后的玻片依次进行第四次缓冲液处理、第二次冲洗液处理、EA/OG染色液处理、第三次冲洗液处理和第四次冲洗液处理。
进一步的，所述第四次缓冲液处理、第二次冲洗液处理、EA/OG染色液处理、第三次冲洗液处理和第四次冲洗液处理的处理时间依次为至少38秒、至少46秒、至少73秒、至少37秒和至少47秒。例如，其处理时间可以依次为：38-42秒、46-50秒、73-77秒、37-41秒和47-51秒。
进一步的，所述第四次缓冲液处理、第二次冲洗液处理、EA/OG染色液处理、第三次冲洗液处理和第四次冲洗液处理的处理时间依次为40s、48s、75s、39s和49s。
进一步的，所述第一次冲洗液处理、第二次冲洗液处理、第三次冲洗液处理和第四次冲洗液处理中采用的冲洗液均为无水乙醇、或者无水乙醇与异丙醇的混合物。
进一步的，所述第一次缓冲液处理、第二次缓冲液处理、第三次缓冲液处理和第四次缓冲液处理中采用的缓冲液均为含有无机盐的偏弱碱性缓冲液。
进一步的，所述盐酸酒精溶液处理中采用的盐酸酒精溶液为盐酸与酒精的混合溶液，所述盐酸酒精溶液中盐酸的体积比浓度为0.4-1.0％，所述盐酸酒精溶液中酒精的体积比浓度为70-100％。
进一步的，将制片后的玻片固定于染色槽中，然后进行所述染色操作，所述染色槽的内径不超过25mm。
由上述描述可知，本发明将原有的染色缸染色技术进行改进，形成新的染色槽染色技术，即：利用染色槽固定细胞制片的染色区域，染色槽内径不大于25mm，高度可变，玻片静止不动，用手工或者机械方法依次加入缓冲液、冲洗液、盐酸酒精、苏木素染色液、EA/OG染色液(或者伊红染色液)等。
上述第一次冲洗液处理、第二次冲洗液处理、第三次冲洗液处理、第四次冲洗液处理、第一次缓冲液处理、第二次缓冲液处理、第三次缓冲液处理、第四次缓冲液处理、苏木素处理、盐酸酒精溶液处理、EA/OG染色液处理中，其处理时间、加液次数、加液量可变均可根据实际情况进行变化，具体的，处理时间是指加入液体后静止停留的时间，这个时间一到，溶液去除；加液量是指每次加入液体的体积；加液次数是指同一种溶液可以重复加入一次以上，或者同一种溶液加入\抽出一次以上；
所述盐酸酒精溶液指的是含有0.4-1.0％(体积浓度)盐酸的70-100％(体积浓度)酒精；所述缓冲液指的是含有无机盐的偏弱碱性缓冲液；所述冲洗液指的是无水乙醇和异丙醇混合物，或者无水乙醇。
本发明的实施例一为：
本实施例的细胞染色方法，将原有的染色缸染色技术进行改进，形成新的染色槽染色技术，具体特征就是利用染色槽固定染色区域，染色槽内径小于25mm，高度可变，玻片静止不动，对细胞制片进行苏木素染色后，再进行盐酸酒精分化处理。具体为：用手工或者机械方法依次加入冲洗液、缓冲液、苏木素、缓冲液、盐酸酒精溶液和缓冲液，即，依次进行第一次冲洗液处理、第一次缓冲液处理、苏木素处理、第二次缓冲液处理、盐酸酒精溶液处理和第三次缓冲液处理，具体流程和时间参数如下：
冲洗液50s—缓冲液48s—苏木素120s—缓冲液48s—盐酸酒精5s—缓冲液40s；
上述冲洗液、缓冲液、苏木素和盐酸酒精溶液的处理时间、加液次数及加液量均可根据实际需求进行改变。
然后将第三次缓冲液处理后的玻片依次进行第四次缓冲液处理、第二次冲洗液处理、EA/OG染色液处理、第三次冲洗液处理和第四次冲洗液处理，完成后续的染色，具体操作为：依次加入缓冲液、冲洗液、EA/OG、冲洗液、冲洗液，其具体流程和时间参数如下：
缓冲液40s—冲洗液48s—EA/OG120s—冲洗液39s—冲洗液49s。
本发明的实施例二为：
本实施例的细胞染色方法，仅下述工艺与实施例一不同，其他均与实施例一相同。
所述第一次冲洗液处理、第一次缓冲液处理、苏木素处理、第二次缓冲液处理、盐酸酒精溶液处理和第三次缓冲液处理的处理时间依次为49s、46s、115s、46s、3s和38s。所述第四次缓冲液处理、第二次冲洗液处理、EA/OG染色液处理、第三次冲洗液处理和第四次冲洗液处理的处理时间依次为38s、46s、115s、37s和47s。
本发明的实施例三为：
本实施例的细胞染色方法，仅下述工艺与实施例一不同，其他均与实施例一相同。
所述第一次冲洗液处理、第一次缓冲液处理、苏木素处理、第二次缓冲液处理、盐酸酒精溶液处理和第三次缓冲液处理的处理时间依次为52s、49s、125s、50s、7s和42s。所述第四次缓冲液处理、第二次冲洗液处理、EA/OG染色液处理、第三次冲洗液处理和第四次冲洗液处理的处理时间依次为42s、50s、125s、41s和51s。
效果测试
将实施例一至实施例三获得的染色后的玻片置于显微镜下观察并拍照。另，取采用现有染色槽染色方法染色后的细胞显微镜下图作为对照试验。
对照试验测试，现有染色槽巴氏染色工艺(不含有盐酸酒精分化步骤)见下表1。
表1
| 冲洗液 | 50S |
| 缓冲液 | 48S |
| 苏木素染色液 | 120S |
| 缓冲液 | 40S |
| 缓冲液 | 40S |
| 冲洗液 | 48S |
| EA/OG染色液 | 120S |
| 冲洗液 | 39S |
| 冲洗液 | 49S |
实施例一至实施例三获得的染色后的玻片细胞高倍显微镜图像依次如图1-3所示，对照试验组获得的染色后的玻片细胞高倍显微镜图像如图4。图1-4中成团细胞均为宫颈腺细胞高倍显微镜图像。
根据图1-3，图1-3中细胞核经苏木素染色后细胞核内部结构均呈现清晰图像，而图4中细胞核经苏木素染色后细胞核内部结构则呈现明显不清晰的图像。
综上所述，本发明提供的染色槽染色方法具有可保证细胞核经苏木素染色后细胞核内部结构的清晰的优点。
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等同变换，或直接或间接运用在相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。
Claims (10)
1.一种染色槽染色方法，其特征在于，在染色槽中对静止的细胞制片进行染色操作，所述染色操作具体包括：对细胞制片依次进行第一次冲洗液处理、第一次缓冲液处理、苏木素染色液处理、第二次缓冲液处理、盐酸酒精溶液处理和第三次缓冲液处理。
2.根据权利要求1所述的染色槽染色方法，其特征在于，所述第一次冲洗液处理、第一次缓冲液处理、苏木素染色液处理、第二次缓冲液处理、盐酸酒精溶液处理和第三次缓冲液处理的处理时间依次为20秒以上、30-120s、15秒-5分钟、30-60秒、3-7秒和30秒以上。
3.根据权利要求2所述的染色槽染色方法，其特征在于，所述第一次冲洗液处理、第一次缓冲液处理、苏木素染色液处理、第二次缓冲液处理、盐酸酒精溶液处理和第三次缓冲液处理的处理时间依次为50s、48s、120s、48s、5s和40s。
4.根据权利要求1所述的染色槽染色方法，其特征在于，将第三次缓冲液处理后的玻片依次进行第四次缓冲液处理、第二次冲洗液处理、EA/OG或者伊红染色液处理、第三次冲洗液处理和第四次冲洗液处理。
5.根据权利要求4所述的染色槽染色方法，其特征在于，所述第四次缓冲液处理、第二次冲洗液处理、EA/OG或者伊红染色液处理、第三次冲洗液处理和第四次冲洗液处理的处理时间依次为至少38秒、至少46秒、至少73秒、至少37秒和至少47秒。
6.根据权利要求5所述的染色槽染色方法，其特征在于，所述第四次缓冲液处理、第二次冲洗液处理、EA/OG或者伊红染色液处理、第三次冲洗液处理和第四次冲洗液处理的处理时间依次为40s、48s、120s、39s和49s。
7.根据权利要求4所述的染色槽染色方法，其特征在于，所述第一次冲洗液处理、第二次冲洗液处理、第三次冲洗液处理和第四次冲洗液处理中采用的冲洗液均为无水乙醇、或者无水乙醇与异丙醇的混合物。
8.根据权利要求4所述的染色槽染色方法，其特征在于，所述第一次缓冲液处理、第二次缓冲液处理、第三次缓冲液处理和第四次缓冲液处理中采用的缓冲液均为含有无机盐的偏弱碱性缓冲液。
9.根据权利要求1或4所述的染色槽染色方法，其特征在于，所述盐酸酒精溶液处理中采用的盐酸酒精溶液为盐酸与酒精的混合溶液，所述盐酸酒精溶液中盐酸的体积浓度为0.4-1％，所述盐酸酒精溶液中酒精的体积浓度为70-100％。
10.根据权利要求1所述的染色槽染色方法，其特征在于，将细胞制片固定于染色槽下面，然后进行所述染色操作，所述染色槽的内径为小于25mm。
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