CN105755099A - 一种巴氏染色液及其制备方法 - Google Patents

一种巴氏染色液及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种巴氏染色液及其制备方法，属于生物技术领域。所述巴氏染色液，包括改良苏木素染色液、EA50染色液和橙黄G染色液。其中，改良苏木素染色液包括以下组分：碘酸钠、苏木色精、硫酸铝钾、乙醇、冰醋酸和水。所述EA50染色液包括以下组分：亮绿、伊红、磷钨酸、甲醇、冰醋酸、乙醇和水。所述橙黄G染色液包括以下组分：橙黄G、磷钨酸、乙醇和水。本发明提供的巴氏染色液染色均匀、染色后的细胞结构清晰、细胞着色鲜艳，易于临床上病理切片的观察判断。

Description

一种巴氏染色液及其制备方法
技术领域
本发明涉及生物技术技术领域，尤其涉及一种适于临床使用的巴氏染色液及其制备方法。
背景技术
目前，子宫颈炎、肺结核、胸膜炎、尿路感染等疾病成为我国临床上的常见疾病、多发病，这些疾病的发病率高，治愈时间长，如何诊断这些疾病成为一个研究的热点。
液基薄层细胞学技术可辅助临床医生对上述疾病提早发现并制定正确的治疗方案，使患者尽快康复，减少痛苦，因而受到研究人员和临床医生的关注。
液基薄层细胞学技术的重要步骤之一就是对细胞进行染色，而巴氏染色液是最常用的染色方法之一。利用巴氏染色液染色的标本细胞透明度好，结构清晰，制片色彩丰富而鲜艳，因能显示鳞状上皮细胞的不同角化程度而常用于妇科标本的染色。
但传统的巴氏染色液配制较为复杂，染色液易陈旧，而且染色效果不稳定，影响医生的病理阅片的准确性，影响疾病的诊断。
发明内容
本发明要解决的问题是传统的巴氏配制复杂、染色不均匀、染色效果不稳定，影响疾病的诊断。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：提供一种巴氏染色液。所述巴氏染色液包括改良苏木素染色液、EA50染色液和橙黄G染色液。其中，改良苏木素染色液包括以下组分：碘酸钠、苏木色精、硫酸铝钾、乙醇、冰醋酸和水。
进一步地，每100ml改良苏木素染色液，包括以下组分，
碘酸钠0.003～0.005g
苏木色精0.1～0.3g
硫酸铝钾1～3g
无水乙醇10～30ml
冰醋酸1～3ml
余量为纯化水。
优选地，所述EA50染色液包括以下组分：亮绿、伊红、磷钨酸、甲醇、冰醋酸、乙醇和水。
进一步地，每100mlEA50染色液，包括以下组分：
亮绿0.02～0.06g
水溶性伊红0.1～0.4g
磷钨酸0.1～0.3g
甲醇5～20ml
冰醋酸1～3ml
纯化水5～10ml
余量为95％乙醇。
优选地，所述橙黄G染色液包括以下组分：橙黄G、磷钨酸、乙醇和水。
进一步地，每100ml橙黄G染色液，包括以下组分：
橙黄G0.2～0.6g
磷钨酸0.2～0.4g
无水乙醇90～95ml
余量为纯化水。
本发明的另一个目的在于提供一种上述的巴氏染色液的制备方法。所述制备方法中，改良苏木素液的制备包括如下步骤：
(1)将苏木色精溶于无水乙醇，得到A液；
(2)将硫酸铝钾溶于纯化水，得到B液；
(3)将A液和B液混合，得到混合液；
(4)将碘酸钠、冰醋酸加入到混合液中，搅拌溶解后加入纯化水，即得改良苏木素染色液。
进一步地，所述制备方法中，EA50染色液的制备方法包括如下步骤：
(1)将水溶性伊红溶于一部分纯化水中，得到C液；
(2)将亮绿溶于剩余的纯化水中，得到D液；
(3)将甲醇和95％乙醇混合，得到E液；
(4)将C液、D液同时加入到E液中，搅拌均匀后加入磷钨酸和冰醋酸，混合均匀后即得EA50染色液。
优选地，所述EA50染色液的制备方法中，步骤(1)和步骤(2)中的纯化水的量相同。
进一步地，所述制备方法中，橙黄G染色液的制备包括如下步骤：将橙黄G溶于无水乙醇中，溶解后再加入磷钨酸，之后加入纯化水，混合均匀后即得橙黄G染色液。
本发明具有的优点和积极效果是：本发明提供的巴氏染色液染色均匀、染色后的细胞结构清晰、细胞着色鲜艳，易于临床上病理切片的观察判断。
本发明提供的巴氏染色液中，包括改良苏木素染色液、EA50染色液和橙黄G染色液，分别对细胞的不同部位进行染色：改良苏木色素染色液对细胞核进行染色，待检细胞的细胞核呈深蓝色或深紫色，核仁呈红色；EA50染色液对细胞浆进行染色，待检细胞的细胞浆显示粉红色或蓝绿色，不全角化细胞的细胞浆呈粉红色；橙黄G染色液对细胞浆进行染色，完全角化细胞的细胞浆呈橘黄色。三种染色液相互配合，临床上可以多方位观测染色结果，判断切片的病理情况，使得诊断结果更为准确。
本发明提供的巴氏染色液及其制备方法中，改良苏木素染色液使用苏木色精可现配现用，性能稳定，配制过程中无需加热和骤冷的步骤，无需提前配制，简化了现有技术中配制的步骤。本发明中的改良苏木素染色液的制备方法，可防止苏木素染色液表面因苏木素过度氧化形成的氧化膜影响染色液的使用，避免过度氧化的苏木素结晶而污染涂片。本发明提供的巴氏染色液中，EA50染色液和橙黄G染色液配制简单，两种染色液均不易沉淀，细胞浆着色鲜艳、染色效果稳定。
附图说明
图1是使用本发明实施例1提供的巴氏染色液染色后的宫颈细胞的示意图。
图2是使用本发明实施例2提供的巴氏染色液染色后宫颈细胞的示意图。
图3是使用本发明实施例3提供的巴氏染色液染色后的宫颈细胞的示意图。
图4是使用本发明实施例4提供的巴氏染色液染色后的宫颈细胞的示意图。
具体实施方式
为了更好的理解本发明，下面结合具体实施例和附图对本发明进行进一步的描述。
实施例1
一种巴氏染色液，包括改良苏木素染色液、EA50染色液和橙黄G染色液。
其中，每100ml改良苏木素染色液包括以下组分：碘酸钠0.003g、苏木色精0.1g、硫酸铝钾1g、无水乙醇10ml、冰醋酸1ml，余量为纯化水。
上述改良苏木素染色液的制备方法，包括以下步骤：
(1)将苏木色精溶于无水乙醇，得到A液；
(2)将硫酸铝钾溶于纯化水，得到B液；
(3)将A液和B液混合，得到混合液；
(4)将碘酸钠、冰醋酸加入到混合液中，搅拌溶解后加入纯化水，混合均匀后即得改良苏木素染色液。
每100mlEA50染色液包括以下组分：亮绿0.06g、水溶性伊红0.4g、磷钨酸0.3g、甲醇20ml、冰醋酸3ml、纯化水10ml，余量为95％乙醇。
上述EA50染色液的制备方法，包括以下步骤：
(1)将水溶性伊红溶于一半的纯化水中，得到C液；
(2)将亮绿溶于剩余另一半的纯化水中，得到D液；
(3)将甲醇和95％的乙醇混合，得到E液；
(4)将C液、D液同时加入到E液中，搅拌均匀后加入磷钨酸和冰醋酸，混合均匀后即得。
每100ml橙黄G染色液，包括以下组分：橙黄G0.3g、磷钨酸0.3g、无水乙醇92ml，余量为纯化水。
上述橙黄G染色液的制备包括如下步骤：将橙黄G溶于无水乙醇中，溶解后再加入磷钨酸，之后加入纯化水，混合均匀后即得。
使用本发明提供的巴氏染色液时，可按照现有技术中巴氏染色液的染色方法或者传统的缸染色法进行，作为一种实施方式，可按照下列步骤进行染色：
1、95％酒精固定；
2、清水冲洗；
3、改良苏木素染色液染色；
4、清水冲洗；
5、1％盐酸、酒精分化；
6、清水冲洗；
7、碱水(碱水为饱和的碳酸锂溶液或氨水溶液)返蓝；
8、清水冲洗；
9、85％酒精清洗；
10、95％酒精清洗；
11、橙黄G染色液染色；
12、95％酒精漂洗；
13、EA50染色液染色；
15、95％酒精漂洗；
16、无水乙醇清洗；
17、二甲苯清洗；
18、封片。
图1是使用本实施例提供的巴氏染色液进行染色后的一待检的宫颈细胞的图片，如图中所示，该图片染色清晰，颜色鲜艳，染色均匀，易于观察。实施例2
一种巴氏染色液，包括改良苏木素染色液、EA50染色液和橙黄G染色液。
其中，每100ml改良苏木素染色液包括以下组分：碘酸钠0.005g、苏木色精0.3g、硫酸铝钾3g、无水乙醇30ml、冰醋酸3ml，余量为纯化水。
每100mlEA50染色液包括以下组分：亮绿0.03g、水溶性伊红0.3g、磷钨酸0.2g、甲醇15ml、冰醋酸2ml、纯化水8ml，余量为95％乙醇。
每100ml橙黄G染色液，包括以下组分：橙黄G0.2g、磷钨酸0.2g、无水乙醇90ml，余量为纯化水。
本实施例中，改良苏木素染色液、EA50染色液及橙黄G染色液的制备与实施例1相同或等同。
图2是使用本实施例提供的巴氏染色液进行染色后的一待检的宫颈细胞的图片，如图中所示，该图片染色清晰、均匀，利于临床观察判断。
实施例3
一种巴氏染色液，包括改良苏木素染色液、EA50染色液和橙黄G染色液。
其中，每100ml改良苏木素染色液包括以下组分：碘酸钠0.004g、苏木色精0.2g、硫酸铝钾2g、无水乙醇20ml、冰醋酸2ml，余量为纯化水。
每100mlEA50染色液包括以下组分：亮绿0.02g、水溶性伊红0.1g、磷钨酸0.1g、甲醇5ml、冰醋酸1ml、纯化水5ml，余量为95％乙醇。
每100ml橙黄G染色液，包括以下组分：橙黄G0.6g、磷钨酸0.4g、无水乙醇95ml，余量为纯化水。
本实施例中，改良苏木素染色液、EA50染色液及橙黄G染色液的制备与实施例1相同或等同。
图3是使用本实施例提供的巴氏染色液进行染色后的一待检的宫颈细胞的图片，如图中所示，该图片染色均匀清楚，图片中的颜色鲜艳，易于观察。实施例4
一种巴氏染色液，包括改良苏木素染色液、EA50染色液和橙黄G染色液。
其中，每100ml改良苏木素染色液包括以下组分：碘酸钠0.005g、苏木色精0.2g、硫酸铝钾1g、无水乙醇25ml、冰醋酸3ml，余量为纯化水。
每100mlEA50染色液包括以下组分：亮绿0.05g、水溶性伊红0.2g、磷钨酸0.2g、甲醇10ml、冰醋酸3ml、纯化水6ml，余量为95％乙醇。
每100ml橙黄G染色液，包括以下组分：橙黄G0.4g、磷钨酸0.3g、无水乙醇94ml，余量为纯化水。
本实施例中，改良苏木素染色液、EA50染色液及橙黄G染色液的制备与实施例1相同或等同。
图4是使用本实施例提供的巴氏染色液进行染色后的一待检的宫颈细胞的图片，如图中所示，该图片染色清晰，颜色鲜艳，染色均匀，易于观察。
以上对本发明的实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，不能被认为用于限定本发明的实施范围。凡依本发明范围所作的均等变化与改进等，均应仍归属于本专利涵盖范围之内。

Claims (10)

1.一种巴氏染色液，其特征在于：包括改良苏木素染色液、EA50染色液和橙黄G染色液；其中，改良苏木素染色液包括以下组分：碘酸钠、苏木色精、硫酸铝钾、乙醇、冰醋酸和水。
2.根据权利要求1所述的巴氏染色液，其特征在于：每100ml改良苏木素染色液，包括以下组分，
碘酸钠0.003～0.005g
苏木色精0.1～0.3g
硫酸铝钾1～3g
无水乙醇10～30ml
冰醋酸1～3ml
余量为纯化水。
3.根据权利要求1或2所述的巴氏染色液，其特征在于：所述EA50染色液包括以下组分：亮绿、伊红、磷钨酸、甲醇、冰醋酸、乙醇和水。
4.根据权利要求3所述的巴氏染色液，其特征在于：每100mlEA50染色液，包括以下组分：
亮绿0.02～0.06g
水溶性伊红0.1～0.4g
磷钨酸0.1～0.3g
甲醇5～20ml
冰醋酸1～3ml
纯化水5～10ml
余量为95％乙醇。
5.根据权利要求1或2所述的巴氏染色液，其特征在于：所述橙黄G染色液包括以下组分：橙黄G、磷钨酸、乙醇和水。
6.根据权利要求5所述的巴氏染色液，其特征在于：每100ml橙黄G染色液，包括以下组分：
橙黄G0.2～0.6g
磷钨酸0.2～0.4g
无水乙醇90～95ml
余量为纯化水。
7.一种如权利要求1-6任一所述的巴氏染色液的制备方法，其特征在于：所述改良苏木素液的制备包括如下步骤：
(1)将苏木色精溶于无水乙醇，得到A液；
(2)将硫酸铝钾溶于纯化水，得到B液；
(3)将A液和B液混合，得到混合液；
(4)将碘酸钠、冰醋酸加入到混合液中，搅拌溶解后加入纯化水，即得改良苏木素染色液。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于：所述EA50染色液的制备方法包括如下步骤：
(1)将水溶性伊红溶于一部分纯化水中，得到C液；
(2)将亮绿溶于剩余的纯化水中，得到D液；
(3)将甲醇和95％乙醇混合，得到E液；
(4)将C液、D液同时加入到E液中，搅拌均匀后加入磷钨酸和冰醋酸，混合均匀后即得EA50染色液。
9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于：所述EA50染色液的制备方法中，步骤(1)和步骤(2)中的纯化水的量相同。
10.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于：所述橙黄G染色液的制备包括如下步骤：将橙黄G溶于无水乙醇中，溶解后再加入磷钨酸，之后加入纯化水，混合均匀后即得橙黄G染色液。
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