CN105571922A - 一种上皮组织病变细胞特殊染色试剂及制备工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种上皮组织病变细胞特殊染色试剂及其制备工艺，上皮组织病变细胞特殊染色试剂按重量百分比的原料包括叶酸、亚甲基蓝、乙酸、果糖、半乳糖、葡萄糖和纯化水；在制备时，具体步骤如下：取料；将果糖、半乳糖和葡萄糖溶于纯化水中，搅拌至溶解；再在搅拌的过程中依次加入亚甲基蓝、叶酸和乙酸，搅拌均匀后得到成品。本发明在检测和染色后与对比色卡进行对比可准确知道上皮细胞病变程度，操作简单、使用卫生、方便，储存期长，适用于各类医疗单位作为上皮组织细胞特殊染色和体外诊断特殊染色时使用，也可为健康适龄人群的宫颈、阴道、外阴等临床常规病变的家庭自检粗筛，使常规人群也知道检测结果的正确意义，减少医疗费用。
Description
技术领域
本发明涉及组织细胞学特殊染色技术领域，具体是一种上皮组织病变细胞特殊染色试剂及制备工艺。
背景技术
上皮组织特殊染色液是宫颈脱落细胞的组织细胞学特殊染色技术，近年来迅速发展起来的一项氧化显色技术；能够提高组织细胞学染色的质量，使用方便、操作简单、可广泛应用于脱落细胞的组织细胞学特殊染色，特别是针对宫颈、阴道、外阴等临床常规病变的粗筛检查人群，也可作为健康人群常规自检。
目前，用于对人体上皮组织肿瘤细胞进行活体染色的方法主要有基于乙酸白化反应的方法、碘实验、甲苯胺蓝实验、亚甲基蓝染色、苏木素染色等。乙酸白化反应是通过将乙酸溶液，例如3-5%的乙酸溶液，涂抹在宫颈/阴道上皮组织上，等待一段时间之后观察所涂抹的上皮组织有无乙酸白化反应区，如果有白化区，则该上皮组织怀疑有肿瘤细胞；然而，此方法虽然敏感性高，但是特异性差，因为除了肿瘤细胞之外，部分炎症细胞也可以产生乙酸白化反应，因而产生假阳性的结果，并且该方法的特异性受操作者的技术水平和经验影响较大。碘实验的原理是糖原反应，是将卢戈氏碘液涂抹在宫颈上皮组织上，然后通过观察上皮细胞的碘染现象来进行的检测。其中，正常上皮呈赤棕色或黑色，而异常上皮呈厚的芥末黄或土黄色。但是，在上皮有炎症时，这些区域可能不会受到染碘，或是呈现无色的装填，所以碘实验对上皮细胞染色的特异性较低。使用甲苯胺蓝的方法易使中性白细胞和细菌的核碎片着色，导致较多假阳性，对表面有角化的粘膜白斑和癌不易着色，易造成假阴性。上皮组织苏木素染色后需要借助高倍显微镜进行观察，操作相对复杂，对操作者的专业技术和经验要求较高，且检查费时较长。亚甲基蓝与癌细胞的亲和性使恶性组织易于染成蓝色，有研究将其用于食道上皮组织的定位活检取材，其具有提高活检阳性率的作用。
上述项目颜色只能靠经验和文字说明，准确度低。
发明内容
本发明的目的在于提供一种操作简单、储存期长的一种上皮组织病变细胞特殊染色试剂及制备工艺，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种上皮组织病变细胞特殊染色试剂，按重量百分比的原料包括：叶酸0.1-1.5%、亚甲基蓝0.02-1%、乙酸2-4.5%、果糖0.1-15%、半乳糖0.1-15%、葡萄糖0.1-15%、纯化水49.5-97.58%。
作为本发明进一步的方案：所述上皮组织病变细胞特殊染色试剂，按重量百分比的原料包括：叶酸0.5-1.2%、亚甲基蓝0.2-0.8%、乙酸2.5-4%、果糖5-10%、半乳糖5-10%、葡萄糖5-10%、纯化水64-81.8%。
作为本发明再进一步的方案：所述上皮组织病变细胞特殊染色试剂，按重量百分比的原料包括：叶酸0.8%、亚甲基蓝0.5%、乙酸3.2%、果糖8%、半乳糖8%、葡萄糖8%、纯化水71.5%。
所述上皮组织病变细胞特殊染色试剂的制备工艺，具体步骤如下：
（1）按照重量百分比称取各原料；
（1）将果糖、半乳糖和葡萄糖溶于纯化水中，搅拌至溶解；
（3）将亚甲基蓝加入至步骤（2）搅拌好的溶液中再次搅拌溶解；
（4）将叶酸加入至步骤（3）搅拌好的溶液中再次搅拌25-35min至溶解；
（5）将乙酸加入至（4）得到的溶液中并继续均匀搅拌8-12min得到成品。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明在检测和染色后与对比色卡进行对比可准确知道上皮细胞病变程度，利用叶酸受体介导的宫颈异常病变普查新技术，操作简单、使用卫生、方便，储存期长，适用于各类医疗单位作为上皮组织细胞特殊染色和体外诊断特殊染色时使用，也可为健康适龄人群的宫颈、阴道、外阴等临床常规病变的家庭自检粗筛，自带比色卡，使常规人群也知道检测结果的正确意义，减少医疗费用。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本专利的技术方案作进一步详细地说明。
实施例1
一种上皮组织病变细胞特殊染色试剂，按重量百分比的原料包括：叶酸0.1%、亚甲基蓝0.02%、乙酸2%、果糖0.1%、半乳糖0.1%、葡萄糖0.1%、纯化水97.58%。
所述上皮组织病变细胞特殊染色试剂的制备工艺，具体步骤如下：
（1）按照重量百分比称取各原料；
（1）将果糖、半乳糖和葡萄糖溶于纯化水中，搅拌至溶解；
（3）将亚甲基蓝加入至步骤（2）搅拌好的溶液中再次搅拌溶解；
（4）将叶酸加入至步骤（3）搅拌好的溶液中再次搅拌25min至溶解；
（5）将乙酸加入至（4）得到的溶液中并继续均匀搅拌8min得到成品。
实施例2
一种上皮组织病变细胞特殊染色试剂，按重量百分比的原料包括：叶酸0.5%、亚甲基蓝0.2%、乙酸2.5%、果糖5%、半乳糖5%、葡萄糖5%、纯化水81.8%。
所述上皮组织病变细胞特殊染色试剂的制备工艺，具体步骤如下：
（1）按照重量百分比称取各原料；
（1）将果糖、半乳糖和葡萄糖溶于纯化水中，搅拌至溶解；
（3）将亚甲基蓝加入至步骤（2）搅拌好的溶液中再次搅拌溶解；
（4）将叶酸加入至步骤（3）搅拌好的溶液中再次搅拌28min至溶解；
（5）将乙酸加入至（4）得到的溶液中并继续均匀搅拌9min得到成品。
实施例3
一种上皮组织病变细胞特殊染色试剂，按重量百分比的原料包括：叶酸0.8%、亚甲基蓝0.5%、乙酸3.2%、果糖8%、半乳糖8%、葡萄糖8%、纯化水71.5%。
所述上皮组织病变细胞特殊染色试剂的制备工艺，具体步骤如下：
（1）按照重量百分比称取各原料；
（1）将果糖、半乳糖和葡萄糖溶于纯化水中，搅拌至溶解；
（3）将亚甲基蓝加入至步骤（2）搅拌好的溶液中再次搅拌溶解；
（4）将叶酸加入至步骤（3）搅拌好的溶液中再次搅拌30min至溶解；
（5）将乙酸加入至（4）得到的溶液中并继续均匀搅拌10min得到成品。
实施例4
一种上皮组织病变细胞特殊染色试剂，按重量百分比的原料包括：叶酸1.2%、亚甲基蓝0.8%、乙酸4%、果糖10%、半乳糖10%、葡萄糖10%、纯化水64%。
所述上皮组织病变细胞特殊染色试剂的制备工艺，具体步骤如下：
（1）按照重量百分比称取各原料；
（1）将果糖、半乳糖和葡萄糖溶于纯化水中，搅拌至溶解；
（3）将亚甲基蓝加入至步骤（2）搅拌好的溶液中再次搅拌溶解；
（4）将叶酸加入至步骤（3）搅拌好的溶液中再次搅拌32min至溶解；
（5）将乙酸加入至（4）得到的溶液中并继续均匀搅拌11min得到成品。
实施例5
一种上皮组织病变细胞特殊染色试剂，按重量百分比的原料包括：叶酸1.5%、亚甲基蓝1%、乙酸4.5%、果糖15%、半乳糖15%、葡萄糖15%、纯化水49.5%。
所述上皮组织病变细胞特殊染色试剂的制备工艺，具体步骤如下：
（1）按照重量百分比称取各原料；
（1）将果糖、半乳糖和葡萄糖溶于纯化水中，搅拌至溶解；
（3）将亚甲基蓝加入至步骤（2）搅拌好的溶液中再次搅拌溶解；
（4）将叶酸加入至步骤（3）搅拌好的溶液中再次搅拌35min至溶解；
（5）将乙酸加入至（4）得到的溶液中并继续均匀搅拌12min得到成品。
所述上皮组织病变细胞特殊染色试剂在使用时，打开上皮组织病变细胞特殊染色试剂的瓶盖，分别用大小棉签蘸取染色液近饱和，在上皮组织表面涂抹；宫颈特殊染色时，用蘸取上皮细胞特殊染色液的大棉签在宫颈表面用力涂抹五圈，再在宫颈外口用力按压10s即可；宫颈管特殊染色时，用蘸取上皮细胞特殊染色液的小棉签旋转进入宫颈管1.5-3cm，沿宫颈管内壁旋转五圈，逐步拉下棉签；阴道特殊染色时，用蘸取上皮细胞特殊染色液的小棉签用力涂抹阴道壁五圈，按压10s即可；立即取出棉签，观察，对照比色卡判读结果；若棉签颜色为黄色，则无病变，若棉签颜色为草绿色，则无异常病变；若棉签颜色为蓝色、墨绿色或黑色，则存在异常病变。
本发明是借助物理因素和化学因素的作用而进行的，物理因素如细胞及细胞物质对染料的毛细现象、渗透、吸附作用等，化学因素则是根据细胞物质和染料的不同性质而发生地各种化学反应。酸性物质对于碱性染料较易吸附，且吸附作用稳固；同样，碱性物质对酸性染料较易于吸附，如酸性物质细胞核对于碱性染料就有化学亲和力，易于吸附。但是，要使酸性物质染上酸性材料，必须把它们的物理形式加以改变，如改变pH值，才利于吸附作用的发生。相反，碱性物质如细胞质通常仅能染上酸性染料，若把它们变为适宜的物理形式，也同样能与碱性染料发生吸附作用。
本产品应用染色染料与组织细胞内的化学成分进行特异性反应或染料分子结构的基团与组织内的相应受体基团特异性结合而显色，当脱落细胞样本经本产品处理后，溶液内的叶酸就会通过细胞表面的受体与还原型的亚甲基蓝同时进入细胞浆内，溶液内的酸性物质促使细胞内的PH值降低到5.0-5.5，叶酸被还原成四氢叶酸，再参与一碳单位的代谢过程中，还原型的亚甲基蓝则被细胞内广泛存在的活性氧ROS氧化，变为蓝色的氧化型亚甲基蓝，细胞浆则被染色，由于有许多溶液复合生物分子的进入，使得细胞内的渗透压升高，致使氧化型亚甲基蓝逸出细胞外，则可在载体上显色。
本发明的优点如下：1.判读客观：提供客观准确依据，科学分流，有对应比色卡方便检测人员判读，减少主观误差；
2.快速准确：化学检测方法，操作简单，30s出结果，耗材检测成本较低更适合临床初筛和普查和家庭自检；
3.简便安全：操作简便，无需其他设备，无创检查，无疼痛或不适感，也适合家庭健康人群日常自检；
4.补充完善：与HPV、TCT、阴道镜不矛盾不替代，互相补充完善；
5.应用广泛：使用医疗机构上皮组织病变筛查，也适合家庭健康人群日常自检。
本发明在检测和染色后与对比色卡进行对比可准确知道上皮细胞病变程度，利用叶酸受体介导的宫颈异常病变普查新技术，操作简单、使用卫生、方便，储存期长，适用于各类医疗单位作为上皮组织细胞特殊染色和体外诊断特殊染色时使用，也可为健康适龄人群的宫颈、阴道、外阴等临床常规病变的家庭自检粗筛，自带比色卡，使常规人群也知道检测结果的正确意义，减少医疗费用。
上面对本专利的较佳实施方式作了详细说明，但是本专利并不限于上述实施方式，在本领域的普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本专利宗旨的前提下作出各种变化。
Claims (4)
1.一种上皮组织病变细胞特殊染色试剂，其特征在于，按重量百分比的原料包括：叶酸0.1-1.5%、亚甲基蓝0.02-1%、乙酸2-4.5%、果糖0.1-15%、半乳糖0.1-15%、葡萄糖0.1-15%、纯化水49.5-97.58%。
2.根据权利要求1所述的上皮组织病变细胞特殊染色试剂，其特征在于，按重量百分比的原料包括：叶酸0.5-1.2%、亚甲基蓝0.2-0.8%、乙酸2.5-4%、果糖5-10%、半乳糖5-10%、葡萄糖5-10%、纯化水64-81.8%。
3.据权利要求1-2任一所述的上皮组织病变细胞特殊染色试剂，其特征在于，按重量百分比的原料包括：叶酸0.8%、亚甲基蓝0.5%、乙酸3.2%、果糖8%、半乳糖8%、葡萄糖8%、纯化水71.5%。
4.一种如权利要求1-2任一所述的上皮组织病变细胞特殊染色试剂的制备工艺，其特征在于，具体步骤如下：
（1）按照重量百分比称取各原料；
（1）将果糖、半乳糖和葡萄糖溶于纯化水中，搅拌至溶解；
（3）将亚甲基蓝加入至步骤（2）搅拌好的溶液中再次搅拌溶解；
（4）将叶酸加入至步骤（3）搅拌好的溶液中再次搅拌25-35min至溶解；
（5）将乙酸加入至（4）得到的溶液中并继续均匀搅拌8-12min得到成品。
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