CN217351367U - 用于糖尿病肾脏病变早期诊断的试剂盒 - Google Patents

Abstract

本实用新型属于疾病检测技术领域，具体技术方案为：用于糖尿病肾脏病变早期诊断的试剂盒，包括盒体，盒体分为第一加液区、混液区和第二加液区，混液区内活动插装有浸润式试管架，反应管竖直插装在浸润式试管架内，第一加液区的顶部设置有两个卡槽，第二加液区的顶部设置有三个卡槽，每个卡槽内均插装有气压释液器，气压释液器的出液口伸入各自的添加管道内，添加管道的底部排液口延伸至反应管的正上方，第一加液区的顶部开有正方形凹槽，正方形凹槽内存放有双层封口膜，本实用新型采用一步法RT‑PCR，通过检测糖尿病肾病患者外周血中的生物标志物，创伤性较小，提高筛查准确率，减少传统筛查流程步骤，一步到位，节省人力物力。

Description

用于糖尿病肾脏病变早期诊断的试剂盒

技术领域

本实用新型属于疾病检测技术领域，具体涉及一种基于miRNA的糖尿病肾病早期诊断用的试剂盒。

背景技术

糖尿病肾病是较为常见的一类糖尿病并发症，属于微血管并发症，具有较高的危险性，是糖尿病患者重要的死亡原因。糖尿病肾病发病早期以肾功能受损为主要表现，并不会产生过于严重的后果，但如果不能及时得到确诊和科学的治疗，就可能恶化发展成为尿毒症，威胁患者的健康，甚至生命。

临床上对糖尿病肾病的早期筛查主要方法为肾功能指标检测、尿微量白蛋白检测和肾脏穿刺活检。但是，肾功能指标检测在糖尿病肾病早期诊断具有较大的局限性、尿微量白蛋白检测中微量蛋白尿仅是肾小球损伤的一个标志，对糖尿病肾病并无特异性、肾脏穿刺活检是一种创伤性检查且检查条件苛刻，需掌握好适应症和禁忌症。目前,对于糖尿病肾病诊断和疾病进展传统检测依赖于尿微量白蛋白检测。在肾功能下降早期发展阶段可以发现异常。市场上已有尿微量白蛋白检测试纸产品，然而，对于某些患者而言，尿微量白蛋白既不是肾功能不全的准确标志，也不是糖尿病肾病进展的可靠预测因子，此外,检测到微量蛋白尿时组织损伤和炎症可能已经发生。目前所出的试剂盒虽价格较低，但其检测结果对于糖尿病肾病不具有特异性，仅是肾小球损伤的一个标志，仍需后期排查其他病因，繁琐复杂且容易漏诊，漏诊风险极大，易错过最佳治疗时间，只能作为糖尿病肾病的辅助检测手段。

RT-PCR（实时荧光逆转录-聚合酶链式反应）是将逆转录实验和实时荧光定量PCR实验结合起来的实验方法，在定量分析某种疾病的生物标志物表达水平方面具有重要意义。然而市场上相关试剂盒却仅用于实验研究，原因是实验过程中试剂盒仅提供试剂，实验所需环境例如避免光污染、适宜的反应温度以及特异性的加液体积试剂盒均无法提供。

miRNA作为标志物进行疾病诊断与病情评估有三方面的优势，一是miRNA在人体内分布广泛，不仅存在于器官、骨骼和肌肉，在外周血、尿液和组织液也普遍存在，能够实现无创取样，取样便捷;二是miRNA稳定性高，相较于其他容易被机体代谢的物质，不容易受到检测时间的影响;三是荧光定量PCR的敏感度极高，能够实现对痕量物质的高精度定量，即使是miRNA含量极微的血清样本，也能实现miRNA定量。

miRNA试剂盒检测致力于糖尿病肾病的早期检测，可作为糖尿病肾病早期检测的第一道防线，较以往检测方法，特异性更高，且相比市场同等特异性产品价格更低，减轻了人民的经济压力，且易于把握最佳治疗时机从而进行后续的治疗。

鉴于此，如何能利用生物标志物制备出一种适于临床实践应用的试剂盒就是本实用新型所要解决的问题。

实用新型内容

为解决现有技术存在的技术问题，本实用新型提供了一种基于miRNA的糖尿病肾病早期诊断用的试剂盒，实现一步检测到位，减少了传统的筛查流程步骤，提高了筛查的准确率。

为实现上述目的，本实用新型所采用的技术方案为：用于糖尿病肾脏病变早期诊断的试剂盒，包括盒体，盒体分为第一加液区、混液区和第二加液区，第一加液区置于混液区的左侧，第二加液区置于混液区的右侧。

混液区内活动插装有浸润式试管架，反应管竖直插装在浸润式试管架内，反应管的开口朝上布置。第一加液区的顶部设置有两个卡槽，一个卡槽内活动插装有第一气压释液器，第一气压释液器的出液口伸入第一添加管道内，第一添加管道的底部排液口延伸至反应管的正上方，第一添加管道流出的液体流入到反应管内；另一个卡槽内活动插装有第二气压释液器，第二气压释液器的出液口伸入第二添加管道内，第二添加管道的底部排液口延伸至反应管的正上方，第二添加管道流出的液体流入到反应管内。

第二加液区的顶部设置有三个卡槽，其中一个卡槽内活动插装有第三气压释液器，第三气压释液器的出液口伸入第三添加管道内，第三添加管道的底部排液口延伸至反应管的正上方，第三添加管道流出的液体流入到反应管内；另一个卡槽内活动插装有第四气压释液器，第四气压释液器的出液口伸入第四添加管道内，第四添加管道的底部排液口延伸至反应管的正上方，第四添加管道流出的液体流入到反应管内；另一个卡槽内活动插装有第五气压释液器，第五气压释液器的出液口伸入第五添加管道内，第五添加管道的底部排液口延伸至反应管的正上方，第五添加管道流出的液体流入到反应管内。

第一加液区的顶部设置有两个卡槽，每个卡槽内均活动插装有气压释液器，每个气压释液器的出液口均伸入各自的添加管道内，每个添加管道的底部排液口均置于反应管的正上方。

第二加液区的顶部设置有三个卡槽，每个卡槽内均活动插装有气压释液器，每个气压释液器的出液口均伸入各自的添加管道内，每个添加管道的底部排液口均置于反应管的正上方。

第一加液区的顶部开有正方形凹槽，正方形凹槽内存放有固定大小的双层封口膜，双层封口膜由防护层及封口膜层采用干式复合连接，通过双层封口膜封闭反应管的管口，避免环境外源污染反应管，方便操作者在反应管离心时的工作。

第一加液区的第一气压释液器内装有裂解终止液，第一加液区的第二气压释液器内装有一步法RT-PCR反应预混液，预混液中的关键酶实现一步法RT-PCR反应，简化了先RT后PCR的传统操作流程。后续操作者利用PCR芯片技术，向PCR反应板中加入特异性的引物和探针（Taqman探针），即可实现同时对多个特异miRNA的定量检测，进而为糖尿病肾病的早期诊断提供依据。

第二加液区的第三气压释液器、第四气压释液器内均装有洗涤液，第二加液区的第五气压释液器内装有特制裂解液，向血液样本中直接添加该试剂，省去了裂解血液样本内miRNA的过程中RNA的纯化以及QPCR过程中的RNA纯度分析。

盒体的前端开有通槽，浸润式试管架以抽拉的方式活动安装在通槽内，浸润式试管架的外侧面上装有拉手，通过抽拉拉手以控制浸润式试管架插入/脱离通槽。在血液样本裂解过程中，抽出浸润式试管架，向其内试管外周空间添加冰水，可创造适宜温度条件。

添加管道为弧形结构，添加管道为管径渐变式结构，添加管道的顶部开口直径大于底部开口直径，添加管道的结构方便液体流入，也不会造成管道内的液体残留在内壁上。

浸润式试管架包括上端开口的恒温壳体，恒温壳体内装有底座，底座通过四根撑杆与顶座相连，底座内设有内凹型卡座，顶座上设有圆形通孔，反应管的底部卡装在内凹型卡座内，反应管的上部置于圆形通孔内，反应管的外径略小于圆形通孔的内径，反应管在浸润式试管架内不会随意晃动。

气压释液器呈倒置水滴型结构，包括弹性气囊和锥形管，弹性气囊相对于锥形管可拆卸，锥形管的顶部与弹性气囊相连通，锥形管的底部设有出液口，锥形管的底部通过由含有聚乙烯醇和聚丙烯酸部分中和产物的混合物制得的膜密封，该膜结构具有优异的耐水性和隔氧性，几乎不变色且不与储存液反应，能较长时间保存试剂。在检测时，对气囊突出试剂盒上部平面部分进行按压，突破气囊下方隔气膜即可进行试剂添加操作。

其中，作为优选的，盒体为棕色半透明LDPE材质。

其中，为了避免添加管道内液体残留，添加管道采用具有荷叶纳米结构的低粘性、超疏水氧化铝材料，具有良好稳定性，能有效规避储存于橡胶气囊中的miRNA裂解、RCR反应液再添加过程中的损失，减少试剂盒结构对检测结果准确度的影响。

本实用新型与现有技术相比，具体有益效果体现在：

一、本实用新型通过检测糖尿病肾病患者外周血中的生物标志物，创伤性较小，提高筛查准确率，减少传统筛查流程步骤，一步到位，节省人力物力。

二、本实用新型采用一步法RT- PCR，比起冗杂的先RT后PCR的传统方法，简化操作流程，也更加节省时间。

三、反应液添加通路采用低粘性、超疏水纳米材料，极大程度地减少试剂添加过程损耗，减少操作误差，检测结果更加准确。

四、试管离心时采用双层封口膜密封，规避试管内液体离心时的损耗；另外，双层封口膜具有优异的耐水性和隔氧性，且性质稳定，能最大程度保存盒内试剂。

五、本实用新型的盒体采用棕色半透明LDPE材质，能够有效避免光污染。

六、本实用新型采用气压释液器添加液体，简化了加液流程。

七、本实用新型采用荷叶状纳米氧化铝超疏水通道，减少了加注试剂的挂壁损耗。

八、浸润式试管架内添加冰水，为反应管创造适宜的反应温度条件。

九、本实用新型采用可替换式试剂密封存储气囊并配置简易替换装，提高单个试剂盒利用率，减少了耗材。

附图说明

图1为本实用新型的立体图。

图2为本实用新型的主视图。

图3为本实用新型的俯视图。

图4为本实用新型的内部结构示意图。

图5为图1中浸润式试管架的结构示意图。

图6为图1中气压释液器的结构示意图。

图中，1为盒体，2为第一加液区，21为气压释液器，211为弹性气囊，212为锥形管，22为添加管道，23为正方形凹槽，3为混液区，31为浸润式试管架，311为恒温壳体，312为底座，313为撑杆，314为顶座，315为内凹型卡座，32为拉手，4为第二加液区，5为反应管。

具体实施方式

为了使本实用新型所要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本实用新型进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本实用新型，并不用于限定本实用新型。

如图1-6所示，用于糖尿病肾脏病变早期诊断的试剂盒，包括盒体1，盒体1分为第一加液区2、混液区3和第二加液区4，第一加液区2置于混液区3的左侧，第二加液区4置于混液区3的右侧。

混液区3内活动插装有浸润式试管架31，反应管5竖直插装在浸润式试管架31内，反应管5的开口朝上布置。

第一加液区2的顶部设置有两个卡槽，每个卡槽内均活动插装有气压释液器21，每个气压释液器21的出液口均伸入各自的添加管道22内，每个添加管道22的底部排液口均置于反应管5的正上方。

第二加液区4的顶部设置有三个卡槽，每个卡槽内均活动插装有气压释液器21，每个气压释液器21的出液口均伸入各自的添加管道22内，每个添加管道22的底部排液口均置于反应管5的正上方。

第一加液区2的顶部开有正方形凹槽23，正方形凹槽23内存放有固定大小的双层封口膜，双层封口膜由防护层及封口膜层采用干式复合连接，通过双层封口膜封闭反应管5的管口，避免环境外源污染反应管5，方便操作者在反应管5离心时的工作。

第一加液区2的一个气压释液器21内装有裂解终止液，第一加液区2的第另一个气压释液器21内装有一步法RT-PCR反应预混液，预混液中的关键酶实现一步法RT-PCR反应，简化了先RT后PCR的传统操作流程。后续操作者利用PCR芯片技术，向PCR反应板中加入特异性的引物和探针（Taqman探针），即可实现同时对多个特异miRNA的定量检测，进而为糖尿病肾病的早期诊断提供依据。

第二加液区4的两个气压释液器21内均装有洗涤液，第二加液区4的另一个气压释液器21内装有特制裂解液，向血液样本中直接添加该试剂，省去了裂解血液样本内miRNA的过程中RNA的纯化以及QPCR过程中的RNA纯度分析。

盒体1的前端开有通槽，浸润式试管架31以抽拉的方式活动安装在通槽内，浸润式试管架31的外侧面上装有拉手32，通过抽拉拉手32以控制浸润式试管架31插入/脱离通槽。在血液样本裂解过程中，抽出浸润式试管架31，向其内试管外周空间添加冰水，可创造适宜温度条件。

添加管道22为弧形结构，添加管道22为管径渐变式结构，添加管道22的顶部开口直径大于底部开口直径，添加管道22的结构方便液体流入，也不会造成管道内的液体残留在内壁上。

浸润式试管架31包括上端开口的恒温壳体，恒温壳体内装有底座312，底座312通过四根撑杆313与顶座314相连，底座312内设有内凹型卡座315，顶座314上设有圆形通孔，反应管5的底部卡装在内凹型卡座315内，反应管5的上部置于圆形通孔内，反应管5的外径略小于圆形通孔的内径，反应管5在浸润式试管架31内不会随意晃动。

气压释液器21呈倒置水滴型结构，包括弹性气囊211和锥形管212，弹性气囊211相对于锥形管212可拆卸，锥形管212的顶部与弹性气囊211相连通，锥形管212的底部设有出液口，锥形管212的底部通过由含有聚乙烯醇和聚丙烯酸部分中和产物的混合物制得的膜密封，该膜结构具有优异的耐水性和隔氧性，几乎不变色且不与储存液反应，能较长时间保存试剂。在检测时对气囊突出试剂盒上部平面部分进行按压，突破气囊下方隔气膜即可进行试剂添加操作。

其中，作为优选的，盒体1为棕色半透明LDPE材质。

其中，为了避免添加管道22内液体残留，添加管道22采用具有荷叶纳米结构的低粘性、超疏水氧化铝材料，具有良好稳定性，能有效规避储存于橡胶气囊中的miRNA裂解、RCR反应液再添加过程中的损失，减少试剂盒结构对检测结果准确度的影响。

本实用新型的具体工作过程为：

一、拉动拉手32，将0℃左右的冰水置于浸润式试管架31中。

二、取500ul受试者的外周血置入反应管5中，从槽6中取出双层封口膜，撕去双层封口膜的防护层，用双层封口膜层将管口封闭，将管以5000×离心10分钟以沉淀样本，之后用移液器弃去上清液（不要影响沉淀）。

三、将反应管5置于浸润式试管架31中，两份洗涤液分别置于对应的气压释液器21内，裂解液、终止液和预混液分别置于对应的气压释液器21内。

四、挤压气压释液器21（内含洗涤液）上部的气囊，待其中液体全部流入反应管5后，拉动拉手32将反应管5从浸润式试管架31中取出。用双层封口膜将管口封闭，将反应管5置于涡旋器上直至沉淀溶解，再将反应管5以5000×离心2分钟，用移液器弃去上清液。

五、将反应管5置于浸润式试管架31中，挤压气压释液器21（内含洗涤液）上部的气囊，待其中液体全部流入反应管5后，拉动拉手32将反应管5从浸润式试管架31中取出。用封口膜将管口封闭，将反应管5置于涡旋器上直至沉淀溶解，再将反应管5以5000×离心2分钟，用移液器弃去上清液。

六、将反应管5置于浸润式试管架31中，挤压气压释液器21（内含裂解液）上部的气囊，待其中液体全部流入反应管5后，用移液器上下移动5次混合以分解沉淀。

七、挤压气压释液器21（内含终止液）上部的气囊，待其中液体全部流入反应管5后，用移液器上下移动5次混合以分解沉淀。

八、挤压气压释液器21（内含预混液）上部的气囊，待其中液体全部流入反应管5后，用封口膜将管口封闭，拉动拉手32将反应管5从浸润式试管架31中取出，在荧光定量PCR扩增仪中进行PCR扩增反应。

九、PCR扩增反应后，得到特异性miRNA在受试者外周血中的表达量，判断受试者特异性miRNA是否在正常范围内，进而为糖尿病肾病的早期诊断提供依据。

以上所述仅为本实用新型的较佳实施例而已，并不用以限制本实用新型，凡在本实用新型的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包在本实用新型范围内。

Claims (8)

1.用于糖尿病肾脏病变早期诊断的试剂盒，其特征在于，包括盒体（1），所述盒体（1），所述盒体（1）分为第一加液区（2）、混液区（3）和第二加液区（4），所述第一加液区（2）和第二加液区（4）分置混液区（3）的两侧；

所述混液区（3）内活动连接有浸润式试管架（31），反应管（5）竖直插装在浸润式试管架（31）内；

所述第一加液区（2）的顶部设置有两个卡槽，每个卡槽内均活动插装有气压释液器（21），每个气压释液器（21）的出液口均伸入各自的添加管道（22）内，每个添加管道（22）的底部排液口均置于反应管（5）的正上方；

所述第二加液区（4）的顶部设置有三个卡槽，每个卡槽内均活动插装有气压释液器（21），每个气压释液器（21）的出液口均伸入各自的添加管道（22）内，每个添加管道（22）的底部排液口均置于反应管（5）的正上方；

所述第一加液区（2）的顶部开有正方形凹槽（23），所述正方形凹槽（23）内存放有双层封口膜。

2.根据权利要求1所述的用于糖尿病肾脏病变早期诊断的试剂盒，其特征在于，所述第一加液区（2）的其中一个气压释液器（21）内装有终止液，所述第一加液区（2）的另一个气压释液器（21）内装有预混液。

3.根据权利要求2所述的用于糖尿病肾脏病变早期诊断的试剂盒，其特征在于，所述第二加液区（4）的其中两个气压释液器（21）内均装有洗涤液，所述第二加液区（4）的另一个气压释液器（21）内装有裂解液。

4.根据权利要求1所述的用于糖尿病肾脏病变早期诊断的试剂盒，其特征在于，所述盒体（1）的前端开有通槽，所述浸润式试管架（31）以抽拉的方式活动安装在通槽内，所述浸润式试管架（31）的外侧面上装有拉手（32）。

5.根据权利要求1所述的用于糖尿病肾脏病变早期诊断的试剂盒，其特征在于，所述添加管道（22）为弧形结构，添加管道（22）为管径渐变式结构，添加管道（22）的顶部开口直径大于底部开口直径。

6.根据权利要求1所述的用于糖尿病肾脏病变早期诊断的试剂盒，其特征在于，所述浸润式试管架（31）包括上端开口的恒温壳体，所述恒温壳体内装有底座（312），底座（312）通过四根撑杆（313）与顶座（314）相连，所述底座（312）内设有内凹型卡座（315），所述顶座（314）上设有圆形通孔。

7.根据权利要求1所述的用于糖尿病肾脏病变早期诊断的试剂盒，其特征在于，所述气压释液器（21）包括弹性气囊（211）和锥形管（212），所述锥形管（212）的顶部与弹性气囊（211）相连通，锥形管（212）的底部设有出液口，锥形管（212）的底部通过膜封闭。

8.根据权利要求1所述的用于糖尿病肾脏病变早期诊断的试剂盒，其特征在于，所述盒体（1）为棕色半透明LDPE材质。

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