RU2549989C2 - Способ микроскопического исследования нативного соскоба корня языка - Google Patents
Способ микроскопического исследования нативного соскоба корня языка Download PDFInfo
- Publication number
- RU2549989C2 RU2549989C2 RU2013141705/15A RU2013141705A RU2549989C2 RU 2549989 C2 RU2549989 C2 RU 2549989C2 RU 2013141705/15 A RU2013141705/15 A RU 2013141705/15A RU 2013141705 A RU2013141705 A RU 2013141705A RU 2549989 C2 RU2549989 C2 RU 2549989C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- tongue
- smear
- root
- gram
- smears
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Sampling And Sample Adjustment (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к микробиологии, а именно к способу микроскопического исследования нативного соскоба слизистой корня языка. Сущность способа состоит в том, что деревянным шпателем забирают 0,5 мл биоматериала из глубокого соскоба со слизистой на границе задней трети спинки и корня языка, готовят два мазка на двух предметных стеклах площадью 1,5-2,0 см2, мазки высушивают 20 минут, осуществляют фиксацию мазка жаром в пламени спиртовки непрерывно в течение 5-6 секунд, окрашивают сложным дифференциальным методом Грама, микроскопируют с иммерсией при объективе х100, просматривают не менее 10 полей зрения на каждом стекле, учитывая количественные и качественные характеристики микроорганизмов, клеток и ядер эпителия. Изобретение позволяет осуществить более точное исследование нативного соскоба c языка. 4 ил., 1 табл., 2 пр.
Description
Изобретение относится к медицине, в частности к микробиологии, и может быть использовано в стоматологии, терапии, педиатрии, дерматологии.
Микрофлора полости рта является важной составляющей, необходимой для здоровья человека. В настоящее время известно, что с изменением качественного и количественного состава микробиома полости рта связано развитие кариеса, специфических и неспецифических воспалительных процессов полости рта, многих заболеваний, включая неврологические и сердечно-сосудистые (Боровский Е.В., Машкиллейсон А.Л. Заболевания слизистой оболочки полости рта и губ. - М.: Медицина, 1994. - 297 с; Терапевтическая стоматология: национальное руководство /под ред. Проф. Л.А. Дмитриевой, проф. Ю.М. Максимовского «ГЭОТАР - Медиа», 2009. - 912 с; Янушевич О.О., Гринин В.М., Почтаренко В.А., Рунова Г.С. Заболевания пародонта. Современный взгляд на клинико-диагностические и лечебные аспекты/ под ред. О.О. Янушевича. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010. - 160 с). Однако использование микроскопических методов исследования как клинической лабораторной диагностики заболеваний полости рта, ограничено. В последние годы предпочтение отдается культуральным/микробиологическим методам исследования микрофлоры полости рта из патологического очага (Николаев А.И., Цепов Л.М. Практическая терапевтическая стоматология. - М.: МЕДпресс-информ, 2010. - 924 с).
Но недостатком культурального/микробиологического исследования микрофлоры полости рта является:
- его высокая стоимость;
- трудоемкость методики;
- невыполнение правил забора и транспортировки биологического материала снижает качество результатов;
- требование создания как аэробных, так и анаэробных условий культивирования увеличивает стоимость расходных материалов;
- наличие в составе микроорганизмов полости рта трудно культивируемых и некультивируемых форм не позволяет выделять их и изучать свойства.
Кроме того, с целью диагностики и профилактики заболеваний внедряются новые молекулярно-генетические методы исследования микрофлоры полости рта: ПНР, секвенирование, генотипирование.
Но недостатком их является:
- доступность метода в крупных и хорошо оснащенных центрах, НИИ;
- высокая стоимость оборудования и расходных материалов;
- значительная затрата времени на исследование;
- требование высокой квалификации обученного персонала.
Известны способы микроскопического исследования окрашенных препаратов соскоба слизистой оболочки спинки языка, применяемые в стоматологии для диагностики лептотрихиоза полости рта (Боровский Е.В., Чумаков А.А., Миренова Л.Г. Диагностика и лечение лептотрихоза слизистой полости рта: методические рекомендации. - М.: ММСИ имени Н.А. Семашко, 1987. - 4 с). По данной методике берут соскоб металлическим стоматологическим инструментом/шпателем и наносят на предметное стекло. После высушивания на воздухе 20 минут проводится фиксация мазка смесью Никифорова 20-30 минут. На высушивание и окрашивание по Романовскому-Гимзе официнальной смесью азура и эозина требуется 40 минут. Дальнейшее промывание и высушивание - 20 минут и микроскопия с увеличением ×40, затем ×100.
Но недостатком этого микроскопического метода исследования окрашенного мазка из флоры полости рта является:
- затраты времени на фиксацию, окрашивание и высушивание мазка не менее 120 минут;
- недоступность эфира для приготовления смеси Никифорова;
- использование одного предметного стекла снижает качество приготовления мазка заданной толщины;
- невозможность морфологической дифференциации химической структуры клеточной стенки, то есть принадлежности микроба к грам+ или грам- бактериям;
- необходимость делать соскоб с языка в кабинете стоматолога специальными инструментами.
Известен также негативный способ микроскопического исследования соскоба слизистой оболочки спинки языка, других слизистых полости рта, применяемый в дерматологии для лабораторной диагностики лептотрихиоза и грибковой инфекции полости рта (Клиническая дерматовенерология: в 2 т. / под ред. Ю.К. Скрипкина, Ю.С. Бутова. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009. - Т.1. - 720 с.). Делают соскоб с языка металлическим шпателем, наносят на предметное стекло, не высушивая, смешивают с каплей 10% раствора щелочи - КОН (калиевой) или NaOH (натриевой) и накрывают покровным стеклом. Препарат немедленно изучают под микроскопом с увеличением ×10 и ×40.
Но недостатком этого микроскопического метода исследования неокрашенного мазка флоры полости рта является:
- изучение микрофлоры в соскобе возможно не более 10 минут после смешивания с щелочью, в дальнейшем микробы в препарате разрушаются, утрачивая морфологию, искажая микроскопическую картину;
- для исследования доступна только форма микробной клетки и количество микроорганизмов в поле зрения;
- преимущественно используется для изучения клеток грибов, которые не разрушаются под действием щелочи, а не множества представителей бактериального мира;
- щелочь разрушает связи между бактериями, невозможно составить представление о взаимодействии бактерий в микробиоме;
- невозможность дифференциации бактерий по химической структуре клеточной стенки, то есть принадлежности микроба к грам+ или грам- бактериям;
- щелочь разрушает эпителий, что делает невозможным исследование в соскобе эпителиальных клеток ни по количеству, ни по структуре;
- консультирование по спорным результатам микроскопии возможно проводить только непосредственно во время исследования; невозможно вернуться к изучению препарата на следующий день или позже.
Специфическим маркером баланса симбиотических отношений макроорганизма и микроорганизмов микрофлоры тела человека считают состояние его микробиомов (Нетрусов А.И., Бонч-Осмоловская Е.А., Горленко Е.М. Экология микроорганизмов / под ред. Проф. А.И. Нетрусова. - М.: Академиа, 2004. - 272 с.), которое коррелирует с потреблением питательных веществ, отражает различные физиологические состояния макроорганизма и показывает изменение иммунного статуса.
Задача - предложить способ микроскопического исследования нативного соскоба со слизистой корня языка, лишенный вышеперечисленных недостатков.
Технический результат состоит в возможности выявления количества микроорганизмов микробиома полости рта, их химической принадлежности по строению клеточной стенки к грамнегативным или грампозитивным бактериям, морфологии, пространственного расположения, коадгезии между собой и гистадгезии к клеткам эпителия, путем применения сложной дифференциальной окраски фиксированного мазка из глубокого соскоба корня языка, содержащего основных представителей микробиома, методом Грама.
Технический результат достигается тем, что в качестве биоматериала для микроскопии используется глубокий соскоб корня языка, который берут на границе задней трети спинки и корнем языка стерильным деревянным шпателем, с усилием надавливая на слизистую. Забранный в количестве 0,5 мл нативный биоматериал наносится шпателем поочередно на два сухих стерильных предметных стекла и равномерно распределяется на каждом стекле площадью около 1,5-2 см2 в пределах круга-метки. Препараты высушиваются на воздухе 20 минут, фиксируются мазками вверх в пламени спиртовки непрерывно 5-6 секунд и окрашиваются сложным дифференциальным методом Грама (Общая и санитарная микробиология с техникой микробиологических исследований: учебное пособие / под ред. А.С. Лабинской, Л.П. Блинковой, А.С. Ещиной. - М.: Медицина, 2004. - 576 с. / с. 93-94). Метод датского бактериолога Ханса Христиана Грама включает последовательное окрашивание фиксированного мазка карболовым генцианвиолетом, обработку раствором Люголя, обесцвечивание спиртом, промывание водой и докрашивание водно-спиртовым раствором фуксина. Используют приготовленные по рецептуре красители и/или набор реагентов для окраски по Граму производителя ЗАО ЭКОлаб ТУ 9389-083-70423725-2007, РУ ФСР 2008/03335 от 23.09.08.
Результаты оценивают следующим образом: окрашенные по Граму мазки на двух предметных стеклах исследуются под биологическим микроскопом с иммерсией, используется объектив иммерсионный ×100 и окуляр ×15 (см. фото 1-4).
Методом случайной выборки нами было обследовано 2700 человек разного пола, национальности, социального положения и возраста - дети от 1 года и взрослые люди до 87 лет. У всех исследуемых установлен микроскопический статус соскоба корня языка: микроскопическим методом определены количественное содержание бактерий в 0,5 мл соскоба, принадлежность к грам+ или грам- бактериям, морфология и размеры бактерий, наличие бактерий, схожих с лептотрихиями, и грибов, схожих с кандидами, коэффициенты коадгезии и гистадгезии, количество и характеристика клеток и ядер эпителия.
Результаты представлены в таблице 1.
При анализе данных, представленных в таблице 1, видно, что применение способа микроскопии нативного соскоба корня языка, окрашенного методом Грама, объективно характеризует как качественный, так и количественный состав микробиома полости рта в его естественном состоянии, включая клетки эпителия слизистой корня языка.
Преимущества предложенного способа:
- в качестве метода клинической лабораторной диагностики способ полностью раскрывает картину биопленок/взаимодействия бактерий между собой и состояния эпителия;
- способ не инвазивен и безопасен для пациента;
- для получения результата о составе микробиома требуется 30 минут;
- предложенный способ может быть применен в любом лечебном учреждении, в амбулаторных условиях кабинета любого специалиста;
- фиксированные мазки можно доставлять и окрашивать в баклаборатории стандартным методом Грама; не требует специально обученного персонала;
- способ может использоваться при проведении мероприятий по скрининг-диагностике состояния микробиома полости рта;
- может явиться профилактическим методом в группах риска по заболеванию кариесом зубов и патологии желудочно-кишечного тракта.
Пример 1
Аркадий Г., 19 лет. Практически здоров. Содержание бактерий в соскобе с языка умеренное, преобладают грампозитивные кокки, имеются грамнегативные диплококки, что соответствует норме микробиома. Лептотрихии единичные в поле зрения микроскопа, длиной до 15 мкм, клеток грибов не обнаружено. Клетки эпителия типичные, 0-1 в поле зрения, с хорошо структурированным ядром, коэффициент гистадгезии умеренный, коадгезия микроорганизмов между собой невысокая.
Пример 2
Марина Д., 51 год. Диагноз: красный плоский лишай. Сахарный диабет II типа. В соскобе с языка большое количество микроорганизмов, которые располагаются скоплениями по типу «шаров», преобладают грамнегативные кокки и палочки. Лептотрихии до 20-30 в каждом поле зрения, длина их до 40 мкм, имеются ложные гифы грибов до 3-5 в поле зрения. Эпителий разрушен, 8-10 в поле зрения, множество ядер, коэффициент гистадгезии высокий, коадгезия микроорганизмов между собой очень высокая.
Таблица 1 | ||||
Микроскопическое исследование соскоба корня языка (M±n) | ||||
Группы (n=100) | Выявление разницы в строении клеточной стенки бактерий (грам+ и грам-) | Выявление клеток эпителия и ядер | Выявление гистадгезии (бактерии на поверхности клеток эпителия) | Выявление коадгезии (склеивание бактерий между собой) |
(абс.иссл.) | (абс.иссл.) | (абс.иссл.) | (абс.иссл.) | |
Исследуемая группа (метод Грама) | 100,0 | 98,0±2,0 | 100,0 | 96,0±1,8 |
Контрольная группа (метод Романовского - Гимзы) | 0,0 | 88,0±1,8 | 68,0±2,8 | 76,0±2,7 |
Группа сравнения (негативный метод - 10% КОН) | 0,0 | 0,0 | 0,0 | 0,0 |
*(M±m) |
Т.о. предлагается способ микроскопического исследования нативного соскоба слизистой корня языка, включающий забор материала стерильным шпателем, приготовление мазка на предметном стекле, высушивание, фиксацию мазка и его окрашивание, микроскопию с иммерсией и объектив ×100, отличающийся тем, что для исследования забирают 0,5 мл биоматериала из глубокого соскоба со слизистой на границе задней трети спинки и корня языка, готовят два мазка на двух предметных стеклах площадью 1,5-2,0 см2 каждый, далее мазки высушивают на воздухе 20 минут, фиксируют жаром в пламени спиртовки в течение 5-6 секунд, окрашивают сложным дифференциальным методом Грама, просматривают не менее 10 полей зрения на каждом стекле, подсчитывают общее количество микроорганизмов, коэффициенты коадгезии и гистадгезии, пространственное расположение бактерий, преобладание грам+ или грам- бактерий, наличие бактерий, схожих с лептотрихиями, геликобактерами, наличие ложных гиф грибов, количество и состояние клеток и ядер эпителия.
Claims (1)
- Способ микроскопического исследования нативного соскоба слизистой корня языка, включающий забор материала стерильным шпателем, приготовление мазка площадью 1,5-2,0 см2 на предметном стекле, высушивание на воздухе 20 минут, фиксацию мазка жаром в пламени спиртовки и его окрашивание сложным дифференциальным методом Грама, микроскопию с иммерсией и объектив ×100, отличающийся тем, что для исследования деревянным шпателем забирают 0,5 мл биоматериала из глубокого соскоба со слизистой на границе задней трети спинки и корня языка, готовят два мазка на двух предметных стеклах, далее мазки высушивают и фиксируют жаром в пламени спиртовки непрерывно в течение 5-6 секунд, окрашивают, просматривают не менее 10 полей зрения на каждом стекле, учитывая количественные и качественные характеристики микроорганизмов, клеток и ядер эпителия.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2013141705/15A RU2549989C2 (ru) | 2013-09-10 | 2013-09-10 | Способ микроскопического исследования нативного соскоба корня языка |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2013141705/15A RU2549989C2 (ru) | 2013-09-10 | 2013-09-10 | Способ микроскопического исследования нативного соскоба корня языка |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2013141705A RU2013141705A (ru) | 2015-03-20 |
RU2549989C2 true RU2549989C2 (ru) | 2015-05-10 |
Family
ID=53285452
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2013141705/15A RU2549989C2 (ru) | 2013-09-10 | 2013-09-10 | Способ микроскопического исследования нативного соскоба корня языка |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2549989C2 (ru) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2615349C1 (ru) * | 2016-01-12 | 2017-04-04 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Северо-Западный государственный медицинский университет имени И.И. Мечникова" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ определения степени тяжести изменений микробиоты полости рта, тонкой и толстой кишки у больных красным плоским лишаем слизистой оболочки рта с гепатобилиарными расстройствами, исключая гепатиты и обострения заболеваний гепатобилиарной системы и поджелудочной железы |
RU2636623C1 (ru) * | 2017-02-01 | 2017-11-24 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Дальневосточный государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО ДВГМУ Минздрава России) | Микробиома корня языка как прогностическая модель дисбиотического состояния генитального тракта у беременных |
RU2668498C1 (ru) * | 2017-08-24 | 2018-10-01 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Дальневосточный государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО ДВГМУ Минздрава России) | Микроскопический способ определения обезвоженности тканей полости рта на модели микробиома языка |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2210770C2 (ru) * | 2001-11-19 | 2003-08-20 | Алтайский государственный медицинский университет | Способ определения состояния слизистой оболочки полости рта |
RU2276190C2 (ru) * | 2004-06-02 | 2006-05-10 | Военный университет радиационной, химической и биологической защиты | Экспрессный способ определения микроскопических грибов, бактерий и дрожжей |
RU2279077C1 (ru) * | 2004-11-09 | 2006-06-27 | Анастасия Геннадьевна Бурда | Способ дифференциальной диагностики форм десквамативного глоссита |
-
2013
- 2013-09-10 RU RU2013141705/15A patent/RU2549989C2/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2210770C2 (ru) * | 2001-11-19 | 2003-08-20 | Алтайский государственный медицинский университет | Способ определения состояния слизистой оболочки полости рта |
RU2276190C2 (ru) * | 2004-06-02 | 2006-05-10 | Военный университет радиационной, химической и биологической защиты | Экспрессный способ определения микроскопических грибов, бактерий и дрожжей |
RU2279077C1 (ru) * | 2004-11-09 | 2006-06-27 | Анастасия Геннадьевна Бурда | Способ дифференциальной диагностики форм десквамативного глоссита |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
ЛЕЩЕНКО В.М. Лабораторная диагностика грибковых заболеваний. Москва.-Медицина, 1977. С. 41-54. МУРАДОВА Е.О. Микробиология. Курс лекций. М.: Эксмо, 2007, с.292-297 * |
СТРЕЛЬНИКОВА Н.В. Микробиологические свойства потенциальных патогенов человека рода LEPTOTRICHIA. Автореферат. Владивосток. 2010. СТРЕЛЬНИКОВА Н.В. и др. О LEPTOTRICHIA BACCALIS - коменсалах полости рта человека // Дальневосточный медицинский журнал, 2004, 4, с.99-101. ПРУНТОВА О.В. и др. Лабораторный практикум по общей микробиологии. Владимир. 2005. ГАЛЫНКИН В.А. и др. Методы исследования в фармацевтической микробиологии. 2007, с.16-20. * |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2615349C1 (ru) * | 2016-01-12 | 2017-04-04 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Северо-Западный государственный медицинский университет имени И.И. Мечникова" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ определения степени тяжести изменений микробиоты полости рта, тонкой и толстой кишки у больных красным плоским лишаем слизистой оболочки рта с гепатобилиарными расстройствами, исключая гепатиты и обострения заболеваний гепатобилиарной системы и поджелудочной железы |
RU2636623C1 (ru) * | 2017-02-01 | 2017-11-24 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Дальневосточный государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО ДВГМУ Минздрава России) | Микробиома корня языка как прогностическая модель дисбиотического состояния генитального тракта у беременных |
RU2668498C1 (ru) * | 2017-08-24 | 2018-10-01 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Дальневосточный государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО ДВГМУ Минздрава России) | Микроскопический способ определения обезвоженности тканей полости рта на модели микробиома языка |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2013141705A (ru) | 2015-03-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6430648B2 (ja) | 細菌由来のナノベシクルを用いた細菌性感染疾患の原因菌の同定方法 | |
Nwachukwu et al. | Antibiotic susceptibility patterns of bacterial isolates from surgical wounds in Abia State University Teaching Hospital (ABSUTH), Aba–Nigeria | |
CN108883088A (zh) | 利用色酮衍生物的上皮间质转化抑制活性的作为纤维化预防及治疗用药剂学组合物的新用途 | |
RU2549989C2 (ru) | Способ микроскопического исследования нативного соскоба корня языка | |
Pieralisi et al. | Tongue coating frequency and its colonization by yeasts in chronic kidney disease patients | |
Sato et al. | Positive effects of oral antibiotic administration in murine chronic graft-versus-host disease | |
EP2123774A1 (de) | Verfahren zur Charakterisierung der biologischen Aktivität von Helminth-Eiern | |
RU2384844C2 (ru) | Способ обнаружения нейтрофильных ловушек | |
Broadhurst et al. | Cytoplasmic inclusion bodies in the human throat | |
Vignesh et al. | Iodine-glycerol as an alternative to lactophenol cotton blue for identification of fungal elements in clinical laboratory | |
Mwanzia et al. | Association of oral microbial community dysbiosis and dental disorders among pregnant woman attending Gatanga Health Center, Kigali, Rwanda | |
RU2789238C1 (ru) | Способ дифференциальной диагностики красного плоского лишая слизистой оболочки рта | |
RU2463349C2 (ru) | Способ обнаружения нейтрофильных внеклеточных ловушек в мукозальных секретах | |
RU2733451C1 (ru) | Способ оценки насыщения эозинофилов мокроты и назального секрета эозинофильным катионным протеином | |
Jemikalajah et al. | Incidence of Escherichia coli among patients presenting urinary tract infections | |
TW201117111A (en) | Fish body image analysis system for use in the screening of a candidate as a skin whitening agent and applications of the same | |
Esenwah | Isolation and Identification of the Microorganisms most Prevalent in External Eye Infections as seen in an Eye Clinic in Owerri | |
Antony | Study of Biofilm forming capacity of pathogens involved in Chronic Rhinosinusitis | |
Yousif et al. | Isolation and identification of bacteria and fungi from patients with otitis media in the city of Hawija and studying the sensitivity of antibiotics to them | |
RU2659155C1 (ru) | Способ сбора и первичного посева жидкости назального лаважа от пациентов с муковисцидозом для микробиологического исследования | |
Ze’evi Ma’or et al. | Topical Application of Synbiotic Bacillus Preparations Positively Affects Skin (Micro) Biology | |
Weichselbaum | The Elements of pathological histology with special reference to practical methods | |
JP2023177266A (ja) | 尿沈渣分析装置で使用される精度管理物質 | |
Sai | Influence of sugar and stevia to the cariogenicity of oral streptobacilli | |
HADAM et al. | Identification of anti-microbial peptides and traces of microbial DNA in infrainfundibular compartments of human scalp terminal hair follicles |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20150911 |