CN106124498A

CN106124498A - 一种隐血检测试剂盒及其应用

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Publication number: CN106124498A
Application number: CN201610545182.XA
Authority: CN
Inventors: 吴金秀
Original assignee: BEIJING JANE GRASS CHINESE MEDICINE TECHNOLOGY DEVELOPMENT CENTER
Current assignee: BEIJING JANE GRASS CHINESE MEDICINE TECHNOLOGY DEVELOPMENT CENTER
Priority date: 2016-07-12
Filing date: 2016-07-12
Publication date: 2016-11-16

Abstract

本发明提供一种隐血检测试剂盒，包括检测试剂和显色剂；所述检测试剂由以下质量百分比的各组分组成：乙醇29%‑35%，冰乙醇30%‑36%，纯化水31%‑37%，过氧化氢1%‑5%；所述检测试剂的制备方法为：将配方量的乙醇、冰乙醇、纯化水、过氧化氢常温下混合，搅拌均匀即得；所述显色剂为：愈创木脂。本发明还提供其应用。通过本发明的试剂盒，我们可以在早期肿瘤出现的第一时间，用更便捷的方法、更高的灵敏度、更便宜的价格，发现它的存在信号。换句话说，我们可以至少提早3‑10年发现早期癌症的信号。

Description

一种隐血检测试剂盒及其应用

技术领域

本发明属于预防医学技术领域，具体涉及一种隐血检测试剂盒及其应用。

背景技术

在传染病得到全面控制的今天，全球卫生工作的重点转到了慢性非传染性疾病的控制，其中，癌症防治已列为卫生战略的重中之重。

多年来，人类一直在探寻彻底攻克癌症的技术。近年来，基因治疗、靶向治疗先后应用于临床，显著提高了癌症患者的生存质量，但治愈率总体上还是有限，仍然没有彻底攻克癌症，而仅仅是治疗技术获得了一些进展而已。

世界卫生组织曾为此下过这样一个结论：当今，在没有找到彻底根治癌症的技术和手段前，唯一的办法就是做到对癌症的早期发现，只有早期发现才是提高癌症治愈率的关键。

日本，胃癌高发率曾列世界首位。但目前已明显下降，胃癌的5年生存率达80%以上，这要归功于胃癌普查，使胃癌的早期发现率提高到50%以上。

我们所提到的早期发现实际上就是恶性肿瘤的二级预防。恶性肿瘤的预防分为三级：一级预防（即病因学预防）：周期长、见效慢、难度大；三级预防（即综合治疗）：是目前耗费人力、物力、财力最大的领域，且晚期患者5年生存率仅20%左右；而二级预防（即“三早”：早发现、早诊断、早治疗）：是当前癌症防治的根本出路。因为按现有的医疗技术，90%以上的早期癌症都可得到治愈，有些早期癌甚至已达到100%的治愈率。

因此早发现与否，已成了癌症患者生与死的分界线！然而遗憾的是，目前我国各地医院的首诊病人，早期癌仅占10%以下，90%以上的患者失去了战胜癌症挽救生命的宝贵时机。可见，加强全民癌症普查意识、大力推广癌症的早期普查及筛查工作、提高癌症早期发现率已刻不容缓！

在国内，用于恶性肿瘤检测、诊断的手段可分为影像学、病理学、TM（肿瘤标记物）三大类。但是这些方法都无例外要借助先进的电子设备，技术再先进、仪器再精密，对大样本人群来说，仍不能用于癌症的普查和筛查，个中缘由不仅是技术尚不成熟，还存在着操作复杂、无法定位、费用昂贵、时间及人力消耗大等弊端，对少数人来说可以做到，但对大多数人来说难以承受。更重要的是，借助影像学检查发现的肿块，通常已进入临床癌阶段，90%以上的患者也已处于中、晚期了。而在国外，对于早期癌症发现的手段也比较多。实际上，我国和发达国家相比，在硬件设施上差距很小，但在预防观念、操作技术、规范诊疗、卫生条件等软件方面则差距要大很多，这也是导致我国早期癌首诊率低下、癌症存活率低下的主要原因。

为此，寻找有效、简便、易行的筛查方法，为后续的肿瘤临床诊断提供依据，是当前亟待解决的问题，尤其是在发展中国家。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明提供了一种隐血检测试剂盒。其检测范围是空腔脏器，包括消化系统、呼吸系统、泌尿系统、生殖系统。

针对空腔脏器类的癌症进行筛查，这些器官包括鼻腔、鼻咽、副鼻窦、喉、支气管、肺、食管、胃、肠、肾盂、膀胱、子宫腔和阴道，它们发生的癌占人体癌症总发病率的70%以上。

空腔脏器都有一个空腔，他们与外界相通，空腔里的内容物经常要向外界排泄，他们所发生的恶性肿瘤，大多数来自空腔器官内的粘膜层上皮细胞。当上皮细胞癌变时，细胞之间粘着性下降，癌细胞极易坏死、脱落，粘膜下出现微血管暴露，病灶区粘膜就会随之发生糜烂、渍破、渗血等病理表现，当然，这种极其微量的渗血，肉眼是看不见的，但是用隐血检测试剂盒，即便是万分之一的血浓度也能检测出。

从另一方面看，绝大部分慢性炎症，溃疡，息肉溃烂也可出血，因此假阳性率虽较高，但它毕竟是一种有效的初筛手段，因为粘膜上的糜烂、溃疡、息肉大多属癌前病变，检测出来进行及早治疗，就有预防癌变的作用。

本发明的技术方案为：

一种隐血检测试剂盒，包括检测试剂和显色剂；

所述检测试剂由以下质量百分比的各组分组成：乙醇29%-35%，冰乙醇30%-36%，纯化水31%-37%，过氧化氢1%-5%；

所述检测试剂的制备方法为：将配方量的乙醇、冰乙醇、纯化水和过氧化氢常温下混合，搅拌均匀即得；

所述显色剂为：愈创木脂。

本发明的检测试剂灵敏度高，达10万分之一，且保质期长，配制后，保质期为3年。

作为优选，所述试剂盒还包括隐血珠和棉签；

所述隐血珠由胶囊、棉线和医用脱脂棉组成；

所述棉签置于塑料套管中。

本发明还提供上述隐血检测试剂盒的使用方法，步骤如下：

（1）收集样品；

（2）对样品进行检验：一混、二摇、三滴、四观察、五记录；

一混：将检测试剂倒入显色剂中，旋紧试剂瓶盖；

二摇：将试剂瓶轻轻摇晃至粉末全部溶解；

三滴：将试剂瓶外盖取下，将试剂滴到已采集标本的棉签、棉球或痰上，瓶口不要直接接触样本，避免交叉污染；

四观察：滴一项观察一项，三秒内观察颜色变化，三秒后无效；无变色者为阴性反应，变色者为阳性反应，三秒钟后变色者仍然按阴性结果统计；

五记录：及时记录结果；

（3）对检测结果进行分析：

当被测样本中血红蛋白含量＞100mg/L时，即显色；显色代表样本中有隐血；当样品中血红蛋白的含量大于等于100mg /L，小于200 mg /L时，显色为介于比色板上“+”级和“++”级之间的蓝色；当样品中血红蛋白的含量大于等于200mg /L，小于1000 mg /L时，显色为介于比色板上“++”级和“+++”级之间的蓝色；当样品中的血红蛋白的含量大于等于1000 mg /L时，显色为比色板上“+++”级或更深的蓝色。

本发明还提供上述隐血检测试剂盒在检测胃、鼻腔、痰、肛门、尿、乳头、阴道部位隐血中的应用。

本发明还提供上述隐血检测试剂盒在早期癌症初筛中的应用。

本发明的试剂盒具有以下技术优势：

1）高灵敏度和长的保质期：灵敏度为10万分之一；保质期长达3年。

A、炎症人群也可筛出。如慢性炎症、溃疡、息肉等癌前病变；

B、某一部位若连续三次阴性，则十到十五年内基本上不会有中、晚期肿瘤的发生；

C、阳性反应者，有慢性炎症、溃疡、息肉及肿瘤的可能，尤其对于“++”、“+++”者，则有必要前往医院做进一步的系统排查和确诊。

2）操作简便、检测快速、无创伤：

采集样本、滴试剂，轻松两步，操作简单易行。每项检测只需3秒钟即出结果。

3）系统定位：

男士5项，女士7项，包括空腔脏器的各部位；

此外，通过5-7项的检测，经进一步地系统排查和确诊，可发现不同部位的空腔脏器的恶性肿瘤，如表1。

表1 不同部位的空腔脏器所对应的恶性肿瘤

4）政府大力支持，适合大面积推广：

与其它检测方法比较，可节省数千元乃至上万元，无需特殊条件及设备，无痛苦、无伤害，费用低，相比其它筛查方法，广大受检人群更易于接受。

通过“隐血检测试剂”，我们可以在早期肿瘤出现的第一时间，用更便捷的方法、更高的灵敏度、更便宜的价格，发现它的存在信号。换句话说，我们可以至少提早3-10年发现早期癌症的信号。

本发明的试剂盒不是癌症的最终确诊手段（癌症的最终确诊手段为病理活组织检查）；但是可提早很多年向受检者发出预警信号：某部位若出现阳性，需根据不同情况及时采取相应的后续措施。如：前往医院做系统排查、确诊，做到防患于未然；初筛时按脏器分别进行，其结果具有定位目标；使用定位：丰富了体检的内容。属预防医学领域。临床价值：通过快捷、价格低廉、行之有效的筛查手段，在无症状人群中发现早期癌症及癌前病变患者，从而给予及时的诊断与治疗。

附图说明

附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为市售。

图1为比色板颜色。

实施例1

本发明的一种隐血检测试剂盒包括检测试剂、显色剂、隐血珠和棉签，还可以包括痰盒。

其中，

（1）检测试剂由以下组分组成：

乙醇（CH₃CH₂OH） 29%≤乙醇质量百分比浓度≤35%

冰乙醇（CH₃COOH） 30%≤冰乙醇质量百分比浓度≤36%

纯化水 31≤纯化水质量百分比浓度≤37%

过氧化氢 1%≤过氧化氢质量百分比浓度≤5%。

检测试剂的制备方法为：

将配方量的乙醇、冰乙醇、纯化水和过氧化氢常温下混合，搅拌均匀即得。

比如，检测试剂可以由以下质量百分数的各组分组成：

乙醇29%、冰乙醇36%、纯化水33%、过氧化氢2%；或

乙醇32%、冰乙醇30%、纯化水33%、过氧化氢5%；或

乙醇35%、冰乙醇30%、纯化水31%、过氧化氢4%；或

乙醇33%、冰乙醇35%、纯化水31%、过氧化氢1%；或

乙醇31%、冰乙醇31%、纯化水37%、过氧化氢1%；或

乙醇30%、冰乙醇32%、纯化水35%、过氧化氢3%；或

乙醇33%、冰乙醇31%、纯化水32%、过氧化氢4%。

（2）显色剂为愈创木脂（干粉）。

（3）隐血珠由胶囊、棉线和医用脱脂棉组成：将医用脱脂棉放在胶囊中，棉线系在医用脱脂棉的中间，再扣上胶囊壳，得到隐血珠，外引线的长度大于口腔至胃部长度。

（4）棉签置于塑料套管中。

本发明试剂盒的检测原理为：

通过乙醇和冰乙醇与检测样品中的血红蛋白反应，愈创木脂显色，再与标准比色板（参见图1）对比，从而对样品中血红蛋白的含量进行半定量测定：血红蛋白含量越高，显现的蓝色越深。具体为：

当样品中血红蛋白的含量小于100mg /L时不显色，即为阴性；当样品中血红蛋白的含量大于等于100mg /L，小于200 mg /L时，显色为浅蓝色，即为介于比色板上“+”级和“++”级之间的蓝色；当样品中血红蛋白的含量大于等于200mg /L，小于1000 mg /L时，显色进一步加深，为介于比色板上“++”级和“+++”级之间的蓝色；当样品中的血红蛋白的含量大于等于1000 mg /L时，显色最深，为比色板上“+++”级或更深的蓝色。

本发明的试剂盒的储存条件及有效期：-5℃-35℃储存，有效期3年，开包后应一次性用完。

实施例2

应用本发明的试剂盒的检测方法具体如下：

一、检测时，试剂盒的组成参见表2。

表2

其中，表中“七项”包括：鼻腔分泌物、痰液、乳房分泌物、胃液、尿液、阴道和肛门分泌物；“五项”包括：鼻腔分泌物、痰液、胃液、尿液和肛门分泌物。

二、样本收集方法：

1、鼻毛检查：清晨洗脸前，取一棉签放在一侧鼻毛区（约1厘米深），轻擦2-3圈，然后再移到另一侧鼻孔，同样方法，轻擦2-3圈后取出；

2、乳房液检查：妇女在非哺乳期有液体溢出者，拿一根棉签吸附溢出液（先用手挤压乳房，然后吸取溢液）；

3、阴道检查：妇女在非月经期或绝经期，用一根棉签放进阴道口处吸附分泌液；

4、肛门检查：取一棉签放在肛门口，轻擦2-3圈；

5、尿液检查：用尿液将棉签浸湿；

6、痰液检查：早晨刷牙漱口后，用力咳嗽，将深部痰咳出，吐在白纸上或痰盒里备检测用；

7、胃肠检查：早晨刷牙漱口后，将胶囊和细线放在口里（先放1/3线在口里，喝一大口温水咽下胶囊，再边喝水边吞咽，将胶囊送到胃里，饮水30-50毫升），只留线头在口外，10分钟后拉出胶囊包裹的医用脱脂棉，放在白纸上。

8、将取样后的棉签或隐血珠里的棉球或痰按原次序对应放置。

三、检验方法：一混、二摇、三滴、四观察、五记录。

一混：将试剂Ⅰ瓶中试液全部倒入试剂Ⅱ瓶中，旋紧瓶盖；

二摇：将试剂瓶轻轻摇晃至粉末全部溶解；

三滴：将试剂瓶外盖取下，将试剂滴到已采集标本的棉签、棉球、痰上。注意：瓶口不要直接接触样本，避免交叉污染；

四观察：按从左到右的顺序，滴一项观察一项，三秒内观察颜色变化，三秒后无效。无变色者为阴性反应，变色者为阳性反应。

五记录：滴一项记录一项，三秒钟后变色者仍然按阴性结果统计。

四、检测结果参考值

当样品中血红蛋白的含量小于100mg /L时不显色，即为阴性；当样品中血红蛋白的含量大于等于100mg /L，小于200 mg /L时，显色为介于比色板上“+”级和“++”级之间的蓝色；当样品中血红蛋白的含量大于等于200mg /L，小于1000 mg /L时，显色为介于比色板上“++”级和“+++”级之间的蓝色；当样品中的血红蛋白的含量大于等于1000 mg /L时，显色为比色板上“+++”级或更深的蓝色。

五、对检测结果进行分析

当被测样本中血红蛋白含量＞100mg/L时，即显色；显色代表样本中有隐血，对应的“+”越多，比色板上的颜色越深，代表样本中隐血越多。当发现样本中有隐血时，建议进行病理检查，以确定产生隐血的具体原因。

六、本发明的试剂盒的性能

1、检测低限：血红蛋白含量＜100mg/L时，不显色或显示比比色板上“+”级浅的蓝色，符合率100%；

2、相关性：

当样品中血红蛋白的含量大于等于100mg /L，小于200 mg /L时，显色为介于比色板上“+”级和“++”级之间的蓝色；当样品中血红蛋白的含量大于等于200mg /L，小于1000 mg /L时，显色为介于比色板上“++”级和“+++”级之间的蓝色；当样品中的血红蛋白的含量大于等于1000 mg /L时，显色为比色板上“+++”级或更深的蓝色。

3、批内重复性

用同一批次试剂分别对100mg/L的血红蛋白进行测定，结果相同。

4、批间重复性

用不同批号试剂分别对100mg/L的血红蛋白进行测定，结果相同。

5、稳定性

在环境温度-5℃-35℃的储存条件下，产品的保质期为36个月。

实施例3

应用本发明的试剂盒与参比试剂（北京首都医科大学临床医学科技中心的“防癌隐血检测试剂盒”生产批号：20090907）进行对比试验研究，并运用统计学的方法检测两者的一致性。

用本发明的试剂盒与参比试剂共同检测胃液、肛门分泌物、痰液、鼻腔、尿液样本各217份，乳头分泌物、阴道分泌物样本各219份，参比试剂和本发明的试剂盒检测各种标本均表现为显著相关。

结论：两种试剂在检验胃、鼻腔、痰、肛门、尿、乳头液、阴道隐血方面无显著差异。

具体对比试验过程如下：

1.1样本来源

医院检验科负责样本收集。

1.2样本数量

收集胃液、鼻腔、肛门分泌物、阴道、乳头、痰液和尿液样本。共采集正常体检人群278人，其中男性59人，女性219人。共收集符合要求的胃液、鼻腔、肛门、痰液和尿液样本各217份，乳头分泌物、阴道分泌物样本各219份。

对所选数量的样品进行分析，具备统计学意义，所获得的结论合理有效，能对被考核试剂做出科学评价，同时最大限度节约社会成本。

1.3 入选标准

年龄18岁以上，男女不限。

1.4 排除标准

痔疮出血者；妇女月经期；检查前12小时内进食肉类食品或维生素C类药物；胃部取样未空腹；哺乳期妇女及前后三个月者；食道静脉曲张的患者；肛裂者。

2 样本收集方法

参见实施例2，第二项。

3 样本检测方法

本发明的试剂盒的检测方法参见实施例2，参比试剂的检测方法参见其说明书。

4 临床研究数据的统计分析方法

采用SPSS13.0统计软件，对研究试剂和对比试剂做出相关性检验。以P＜0.05为显著性差异，P＜0.01为非常显著差异。

5 临床研究结果及分析

（1）受检者一般资料参见表3。

表3 受检者一般资料

（2）胃液隐血试验结果参见表4和表5。

表4 交叉表

表5

a.对比组＜实验组

b.对比组＞实验组

c.对比组=实验组

轶和检验值：-1.606 P值：0.108

Kappa检验值：0.834 P值：0.000

经SPSS统计软件对两种方法进行配对轶和检验和Kappa检验，两种检验方法无统计学差异，两种试剂一致性很好。

（3）鼻腔分泌物隐血试验结果参见表6和表7。

表6 交叉表

表7

a.对比组＜实验组

b.对比组＞实验组

c.对比组=实验组

轶和检验值：-1.528 P值：0.127

Kappa检验值：0.840 P值：0.000

（4）痰液隐血试验结果参见表8和表9。

表8 交叉表

表9

a.对比组＜实验组

b.对比组＞实验组

c.对比组=实验组

轶和检验值：-1.606 P值：0.108

Kappa检验值：0.857 P值：0.000

（5）肛门分泌物隐血试验结果参见表10和表11。

表10 交叉表

表11

a.对比组＜实验组

b.对比组＞实验组

c.对比组=实验组

轶和检验值：-1.500 P值：0.134

Kappa检验值：0.877 P值：0.000

（6）尿液隐血试验结果参见表12和表13。

表12 交叉表

表13

a.对比组＜实验组

b.对比组＞实验组

c.对比组=实验组

轶和检验值：-1.387 P值：0.166

Kappa检验值：0.885 P值：0.000

（7）阴道分泌物隐血试验结果参见表14和表15。

表14 交叉表

表15

a.对比组＜实验组

b.对比组＞实验组

c.对比组=实验组

轶和检验值：-0.535 P值：0.593

Kappa检验值：0.883 P值：0.000

（8）乳头分泌物隐血试验结果参见表16和表17。

表16 交叉表

表17

a.对比组＜实验组

b.对比组＞实验组

c.对比组=实验组

轶和检验值：-1.000 P值：0.317

Kappa检验值：0.911 P值：0.000

（9）结果

以上试验结果说明，本发明的隐血检测试剂盒与参比试剂进行平行对照试验后，检验结果经配对轶和检验和Kappa一致性检验，在检验胃隐血、鼻腔隐血、痰隐血、肛门隐血、尿隐血、乳头液隐血、阴道隐血七个隐血指标方面，两种试剂无显著差异，一致性良好。

6 结论

两种试剂在检验胃、鼻腔、痰、肛门、尿、乳头液、阴道隐血方面无显著差异，参比试剂和本发明的试剂盒总体间的符合情况很好，可以应用于临床检测。

最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种隐血检测试剂盒，其特征在于：包括检测试剂和显色剂；

所述检测试剂的制备方法为：将配方量的乙醇、冰乙醇、纯化水、过氧化氢常温下混合，搅拌均匀即得；

所述显色剂为：愈创木脂。

2.根据权利要求1所述隐血检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括隐血珠和棉签；

所述隐血珠由胶囊、棉线和医用脱脂棉组成；

所述棉签置于塑料套管中。

3.权利要求1或2所述的隐血检测试剂盒的使用方法，其特征在于：步骤如下：

（1）收集样品；

一混：将检测试剂倒入显色剂中，旋紧试剂瓶盖；

二摇：将试剂瓶轻轻摇晃至粉末全部溶解；

五记录：及时记录结果；

（3）对检测结果进行分析：

4.权利要求1或2所述的隐血检测试剂盒在检测胃、鼻腔、痰、肛门、尿、乳头、阴道部位隐血中的应用。

5.权利要求1或2所述的隐血检测试剂盒在早期癌症初筛中的应用。