CN107290334A - 一种肿瘤标志物的检测试剂及其制备方法 - Google Patents

一种肿瘤标志物的检测试剂及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于尿液检测试剂，具体涉及一种对人体内异常代谢物——酪氨酸及其代谢衍生物的检测试剂及其制备方法。所述尿液中肿瘤标志物酪氨酸及其代谢衍生物检测试剂中包括Hg2+、Hg2 2+、Co2+、MoO4 2‑、SO4 2‑、NO3 ‑、NO2 ‑和SeO3 2‑的水溶液。本发明的试剂是在millon试剂原理的基础上进行创新，检测试剂中这些离子的加入，大大减小了尿液中各种干扰成分的影响，从而降低假阳性的出现，提高了检测的准确率，对应用于早期广谱筛查恶性肿瘤意义重大。

Description

一种肿瘤标志物的检测试剂及其制备方法
技术领域
本发明属于尿液检测试剂，具体涉及一种人体内异常代谢物——酪氨酸及其代谢衍生物的检测试剂及其制备方法。
背景技术
随着中国人口老龄化趋势的加剧、环境及生活方式的改变，癌症已成为严重危害中国居民健康和社会发展的主要疾病之一。同时，报告中显示，全球癌症病例呈现逐年增长趋势，由2012年的1400万，会逐年递增至2025年的1900万人，到2035年将达到2400万人。报告中还指出，中国新增癌症病例高居第一位，而且在肝、食道、胃、肺等四种恶性肿瘤中，中国新增病例和死亡人数均居世界首位。癌症之所以呈现难以治愈、死亡率高的情况，主要是缺少有效的早期确诊手段，以致不能在癌前病变阶段和发病早期进行及时的治疗。因此，一旦发现癌症患者多半已是中晚期了，给治疗增加了很大难度，所以早期诊断就成为提高癌症治疗率的关键。
目前癌症的检测手段主要依靠B超、X线、CT和核磁共振等高级精密仪器，这些仪器检测费用昂贵，根据我国的实情难以应用到人群癌症筛查和早期诊断，因而很多研究者致力于寻找其他的生物化学肿瘤标志物，以起到肿瘤早期筛查的作用。在寻找的过程中，多种血清肿瘤标志物被发现，并被作为肿瘤诊断的重要手段之一，但血清肿瘤标志物存在操作繁琐、成本高、有创性、早期检出率不理想等因素，不利于肿瘤的大规模筛查。而尿检，作为一项基本的实验室检查方法，不仅可用于泌尿系统疾病的诊断，对其他疾病包括恶性肿瘤都有诊断价值。近年来，尿液检测在肿瘤筛查中的应用越来越多。此种检测方法取材方便、操作易行、无创伤、患者依从性高，对应用于早期广谱筛查恶性肿瘤意义重大。
在癌前病变及癌症早中期，细胞的异常增值会引起身体的应激反应，导致人体内特征氨基酸代谢异常，尿液中的酪氨酸及其代谢衍生物的含量远远超过正常人，因此可以通过与尿液中的以上相关物质发生特异性反应，即可判断受试者体内是否有癌细胞活动，根据颜色即可判定体内是否有癌细胞代谢物，从而诊断受试者是否患有癌症。但由于尿液中成分复杂，某些微量成分或者因其他疾病导致的代谢异常物同样会与检测试剂中汞离子、亚汞离子结合生成颜色沉淀，会影响检测结果的准确性，造成误诊，因此本发明人采用在试剂中加入一些其他离子，与尿液中的干扰成分反应，以减小其对酪氨酸及其代谢衍生物检测的干扰，很大程度上避免了假阳性、假阴性的的出现，进一步提高了检测恶性肿瘤的阳性检出率。
发明内容
本发明提供了一种灵敏度高、准确性好的用于检测尿液中酪氨酸及其代谢衍生物的检测试剂及其制备方法，用以解决提高检测恶性肿瘤准确性的问题。
为了解决上述技术问题，本发明的技术方案是：所述尿液中肿瘤标志物酪氨酸及其代谢衍生物检测试剂，包括Hg2+、Hg2 2+、Co2+、MoO4 2-、SO4 2-、NO3 -、NO2 -和SeO3 2-的水溶液。
所述尿液中肿瘤标志物酪氨酸及其代谢衍生物检测试剂中Hg2+的浓度为0.62-1.53mol/L，Hg2 2+的浓度为0.66-0.9mol/L，Co2+的浓度为2.0-8.5mmol/L，MoO4 2-的浓度为3.5-9.0mmol/L，NO2 -的浓度为0.5-1.5mol/L，SeO3 2-的浓度为4.8-8.8mmol/L。
本发明还提供了尿液中肿瘤标志物酪氨酸及其代谢衍生物检测试剂的制备方法，包括如下步骤：
1）硫酸的制备：将市售硫酸用水稀释到原来的4-10倍，冷却至室温待用；
2）硝酸的制备：将市售硝酸用水稀释到原来的4-10倍，冷却至室温待用；
3）A溶液的制备：称取一定量硫酸汞溶于步骤1）配置的所述硫酸溶液中获得A溶液；
4）B溶液的制备：称取一定量硝酸亚汞溶于步骤2）配置的所述硝酸溶液中获得B溶液；
5）C溶液的制备：称取一定量亚硝酸汞溶于步骤2）配置的所述硝酸溶液中获得C溶液；
6）D溶液的制备：称取一定量硝酸钴溶于水中获得D溶液；
7）E溶液的制备：称取一定量钼酸钠溶于水中获得E溶液；
8）F溶液的制备：称取一定量亚硒酸溶于水中获得F溶液；
9）混合：将步骤3）、4）、5）、6）、7）和8）中制备的A、B、C、D、E和F溶液按1：
2.0-3.0：0.5~2.0：0.3~1.2：0.2~0.9：0.5~1.0体积比混合，即得所述尿液中肿瘤标志物酪氨酸及其代谢衍生物的检测试剂。
癌细胞的异常增值会引起身体的应激反应，导致人体内特征氨基酸代谢异常，尿液中的酪氨酸及其代谢衍生物的含量远远超过正常人，本发明通过试剂中的汞离子和亚汞离子与酪氨酸及其代谢衍生物络合反应生成红色或类红色沉淀，从而判定体内是否有癌细胞活动，是否有癌症，此检测方法具有灵敏度高的特点；另外，钴离子、部分汞离子能与尿液中的其他阴离子发生络合反应产生白色沉淀，减少干扰；而钼酸根离子能与尿液中的有机化合物如葡萄糖醛酸等有机酸反应产生非红色沉淀，能与尿液中的某些电解质络合生成一些非红色沉淀，还能结合因其他疾病导致异常代谢的血红蛋白并使之沉淀。
本发明提供了一种对人体尿液中酪氨酸及其代谢衍生物的检测试剂及其制备方法，此检测试剂是在millon试剂原理的基础上进行创新，检测试剂中这些离子的加入，大大减小了尿液中各种干扰成分的影响，从而降低假阳性的出现，提高了检测的准确率，对应用于早期广谱筛查恶性肿瘤意义重大。
具体实施方式
所有原材料均为分析纯级别的普通化学制剂，制备过程也在常温常压下进行。
实施例一
所述尿液中肿瘤标志物酪氨酸及其代谢衍生物检测试剂，包括Hg2+、Hg2 2+、Co2+、MoO4 2-、SO4 2-、NO3 -、NO2 -和SeO3 2-的水溶液，其中Hg2+的浓度为1mol/L，Hg2 2+的浓度为0.69mol/L，Co2+的浓度为3mmol/L，MoO4 2-的浓度为4.5mmol/L，NO2 -的浓度为1.1mol/L，SeO3 2-的浓度为5mmol/L。
制备过程如下：
1）硫酸的制备：将市售浓硫酸用水稀释到原来的4倍，冷却至室温待用；
2）硝酸的制备：将市售浓硝酸用水稀释到原来的4倍，冷却至室温待用；
3）A溶液的制备：称取一定量硫酸汞溶于步骤1）配置的所述硫酸溶液中，其中Hg2+
的含量为2.7mol/L；
4）B溶液的制备：称取一定量硝酸亚汞溶于步骤2）配置的所述硝酸溶液中，其中Hg2 2+
的含量为2.07mol/L；
5）C溶液的制备：称取一定量亚硝酸汞溶于步骤2）配置的所述硝酸溶液中，其中Hg2+
的含量为3.3mol/L，NO2 -的含量为6.6mol/L；
6）D溶液的制备：称取一定量硝酸钴溶于水中，其中Co2+的含量为18mmol/L；
7）E溶液的制备：称取一定量钼酸钠溶于水中，其中MoO4 2-的含量为54mmol/L；
8）F溶液的制备：称取一定量亚硒酸溶于水中，其中SeO3 2-的含量为60mmol/L；
9）混合：将步骤3）、4）、5）、6）、7）和8）中制备的A、B、C、D、E和F溶液按
1：2：1：1：0.5：0.5体积比混合，即得所述尿液中肿瘤标志物酪氨酸及其代谢衍生物的检测试剂。
实施例二
所述尿液中肿瘤标志物酪氨酸及其代谢衍生物检测试剂，包括Hg2+、Hg2 2+、Co2+、MoO4 2-、SO4 2-、NO3 -、NO2 -和SeO3 2-的水溶液，其中Hg2+的浓度为1.05mol/L，Hg2 2+的浓度为0.69mol/L，Co2+的浓度为3mmol/L，MoO4 2-的浓度为3.5mmol/L，NO2 -的浓度为1.0mol/L，SeO3 2-的浓度为6mmol/L。
制备过程如下：
1）硫酸的制备：将市售浓硫酸用水稀释到原来的5倍，冷却至室温待用；
2）硝酸的制备：将市售浓硝酸用水稀释到原来的5倍，冷却至室温待用；
3）A溶液的制备：称取一定量硫酸汞溶于步骤1）配置的所述硫酸溶液中，其中Hg2+
的含量为3.28mol/L；
4）B溶液的制备：称取一定量硝酸亚汞溶于步骤2）配置的所述硝酸溶液中，其中Hg2 2+
的含量为1.66mol/L；
5）C溶液的制备：称取一定量亚硝酸汞溶于步骤2）配置的所述硝酸溶液中，其中Hg2+
的含量为3mol/L，NO2 -的含量为6mol/L；
6）D溶液的制备：称取一定量硝酸钴溶于水中，其中Co2+的含量为36mmol/L；
7）E溶液的制备：称取一定量钼酸钠溶于水中，其中MoO4 2-的含量为105mmol/L；
8）F溶液的制备：称取一定量亚硒酸溶于水中，其中SeO3 2-的含量为45mmol/L；
9）混合：将步骤3）、4）、5）、6）、7）和8）中制备的A、B、C、D、E和F溶液按
1：2.5：1：0.5：0.2：0.8体积比混合，即得所述尿液中肿瘤标志物酪氨酸及其代谢衍生物的检测试剂。
实施例三
所述尿液中肿瘤标志物酪氨酸及其代谢衍生物检测试剂，包括Hg2+、Hg2 2+、Co2+、MoO4 2-、SO4 2-、NO3 -、NO2 -和SeO3 2-的水溶液，其中Hg2+的浓度为1mol/L，Hg2 2+的浓度为0.7mol/L，Co2+的浓度为3mmol/L，MoO4 2-的浓度为4.0mmol/L，NO2 -的浓度为0.9mol/L，SeO3 2-的浓度为5.5mmol/L。
制备过程如下：
1）硫酸的制备：将市售浓硫酸用水稀释到原来的6倍，冷却至室温待用；
2）硝酸的制备：将市售浓硝酸用水稀释到原来的6倍，冷却至室温待用；
3）A溶液的制备：称取一定量硫酸汞溶于步骤1）配置的所述硫酸溶液中，其中Hg2+
的含量为3.3mol/L；
4）B溶液的制备：称取一定量硝酸亚汞溶于步骤2）配置的所述硝酸溶液中，其中Hg2 2+
的含量为1.9mol/L；
5）C溶液的制备：称取一定量亚硝酸汞溶于步骤2）配置的所述硝酸溶液中，其中Hg2+
的含量为2.7mol/L，NO2 -的含量为5.4mol/L；
6）D溶液的制备：称取一定量硝酸钴溶于水中，其中Co2+的含量为36mmol/L；
7）E溶液的制备：称取一定量钼酸钠溶于水中，其中MoO4 2-的含量为48mmol/L；
8）F溶液的制备：称取一定量亚硒酸溶于水中，其中SeO3 2-的含量为41.25mmol/L；
9）混合：将步骤3）、4）、5）、6）、7）和8）中制备的A、B、C、D、E和F溶液按
1：2.2：1：0.5：0.5：0.8体积比混合，即得所述尿液中肿瘤标志物酪氨酸及其代谢衍生物的检测试剂。
实施例四 对比例
所述尿液中肿瘤标志物酪氨酸及其代谢衍生物检测试剂，包括Hg2+、Hg2 2+、SO4 2-、NO3 -和NO2 -的水溶液。
制备过程如下：
1）硫酸的制备：将市售浓硫酸用水稀释到原来的5倍，冷却至室温待用；
2）硝酸的制备：将市售浓硝酸用水稀释到原来的5倍，冷却至室温待用；
3）A溶液的制备：称取一定量硫酸汞溶于步骤1）配置的所述硫酸溶液中，其中Hg2+
的含量为3.3mol/L；
4）B溶液的制备：称取一定量硝酸亚汞溶于步骤2）配置的所述硝酸溶液中，其中Hg2 2+
的含量为1.6mol/L；
5）C溶液的制备：称取一定量亚硝酸汞溶于步骤2）配置的所述硝酸溶液中，其中Hg2+
的含量为2.7mol/L，NO2 -的含量为5.4mol/L；
6）混合：将步骤3）、4）和5）中制备的A、B和C溶液按1：2：1体积比混合，即
得对比例检测试剂。
实施例五 效果验证实验
1.实验对象
实验对象 人数（人） 年龄分布（岁） 平均年龄（岁）
恶性肿瘤确诊患者 625 25-74 49.65
非肿瘤良性疾病患者 734 25-76 45.53
健康人 800 21-79 50.73
2.实验方法
检测者应停药三天，取晨尿（空腹8h）5ml加入装有1ml试剂（实施例一制备的检测试剂）的安瓿瓶中，稍加振荡静置约5min，将沉淀颜色与标准比色板对照判定结果，结果及颜色如下表1所示：
表1尿液中检测酪氨酸及其代谢衍生物判定标准
检测标准 颜色
阴性 白色或浅黄色
弱阳性 浅红色
阳性 红色
强阳性 砖红色
3.实验结果
癌症筛查：
表2各组尿液比较
表3不同恶性肿瘤检测结果
癌症名 乳腺癌 胃癌 肺癌 肝癌 妇科肿瘤 恶性淋巴瘤 其他肿瘤
患者例数 128 120 114 101 78 63 21
阳性数 128 119 113 99 78 63 20
阳性率% 100% 99.2% 99.1% 98% 100% 100% 95.2%
如上所示，在医院提供的625名恶性肿瘤确诊患者中，诊断出阳性结果的有620名病人，检出率达99.2%，在非肿瘤良性疾病患者组（3.7%）和健康人组（0.5%）检出率均低于5%，说明本发明提供的尿液中检测酪氨酸及其代谢衍生物的检测试剂对检测恶性肿瘤的灵敏度高，阳性率高，表3的结果也证明了此试剂能广泛的应用于检测各种恶性肿瘤。
实施例六 对比例
与实施例五的实验对象相同，实验方法也相同，其中所用的检测试剂改为实施例四中制备的对比例检测试剂，测试结果如表4。
表4各组尿液比较
通过对比例可以进一步发现，本发明提供的技术方案大大降低了假阳性的概率，提高了检测的精准度。

Claims (3)

1.一种尿液中肿瘤标志物酪氨酸及其代谢衍生物检测试剂，其特征在于，包括Hg2+、Hg2 2 +、Co2+、MoO4 2-、SO4 2-、NO3 -、NO2 -和SeO3 2-的水溶液。
2.根据权利要求1所述的一种尿液中肿瘤标志物酪氨酸及其代谢衍生物检测试剂，其特征在于，所述检测试剂中Hg2+的浓度为0.62-1.53mol/L，Hg2 2+的浓度为0.66-0.9mol/L，Co2+的浓度为2.0-8.5mmol/L，MoO4 2-的浓度为3.5-9.0mmol/L，NO2 -的浓度为0.5-1.5mol/L，SeO3 2-的浓度为4.8-8.8mmol/L。
3.根据权利要求1所述的一种尿液中肿瘤标志物酪氨酸及其代谢衍生物检测试剂的制备方法，包括如下步骤：
硫酸的制备：将市售硫酸用水稀释到原来的4-10倍，冷却至室温待用；
硝酸的制备：将市售硝酸用水稀释到原来的4-10倍，冷却至室温待用；
A溶液的制备：称取一定量硫酸汞溶于步骤1）配置的所述硫酸溶液中获得A溶液；
B溶液的制备：称取一定量硝酸亚汞溶于步骤2）配置的所述硝酸溶液中获得B溶液；
C溶液的制备：称取一定量亚硝酸汞溶于步骤2）配置的所述硝酸溶液中获得C溶液；
D溶液的制备：称取一定量硝酸钴溶于水中获得D溶液；
E溶液的制备：称取一定量钼酸钠溶于水中获得E溶液；
F溶液的制备：称取一定量亚硒酸溶于水中获得F溶液；
混合：将步骤3）、4）、5）、6）、7）和8）中制备的A、B、C、D、E和F溶液按1：2.0-3.0：0.5~2.0：0.3~1.2：0.2~0.9：0.5~1.0体积比混合，即得所述尿液中肿瘤标志物酪氨酸及其代谢衍生物的检测试剂。
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