CN104406975A

CN104406975A - 一种尿液中对羟基苯丙氨酸检测试剂的制备方法

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Publication number: CN104406975A
Application number: CN201410708907.3A
Authority: CN
Inventors: 杨子中; 詹俊新; 高云峰; 崔志强; 向仕飞
Original assignee: GUIZHOU FUMEIDI BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: GUIZHOU FUMEIDI BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Priority date: 2014-12-01
Filing date: 2014-12-01
Publication date: 2015-03-11

Abstract

一种尿液中对羟基苯丙氨酸检测试剂的制备方法，包括以下步骤：(1)将硫酸汞加入6mol/L的硫酸溶液中搅拌溶解后，稀释得到浓度为15-20％(m/v)的硫酸汞溶液；(2)将硝酸亚汞加入到12mol/L的硝酸溶液中，搅拌溶解稀释，得到绿色液体，放置待溶液绿色褪去后，制得浓度为60-70％(m/v)的硝酸亚汞溶液；(3)将硫酸镍溶解到蒸馏水中，稀释，为浓度为2-5％(m/v)的硫酸镍溶液；(4)制得a-亚硝基-β-萘酚浓度为2-5％(m/v)的a-亚硝基-β-萘酚溶液；(5)将制得的步骤(1)中硫酸汞溶液、步骤(2)中硝酸亚汞溶液、步骤(3)中硫酸镍溶液、步骤(4)中a-亚硝基-β-萘酚溶液按体积比1～1.5∶1.2～1.8∶0.2～0.4∶0.05～0.1的比例进行混合后，得到检测试剂。

Description

一种尿液中对羟基苯丙氨酸检测试剂的制备方法

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种尿液中对羟基苯丙氨酸检测试剂的制备方法。

背景技术

随着全球城市化、工业化、老龄化进程的加剧，加之生存环境的污染、各种不良生活方式、职业暴露、生物物理和遗传因素的影响，全世界恶性肿瘤的发病率和死亡率呈逐年上升的趋势，我国也不例外，恶性肿瘤已成为严重危害人类生命健康的重要疾病之一。流行病学调查数据显示，我国恶性肿瘤死亡率属于世界较高水平，我国恶性肿瘤死亡率已上升为居民死因顺位的第一位，而且与生态环境、生活方式相关的肿瘤呈现持续性增长势头。目前关于肿瘤发生的原因并未完全阐明，故而缺乏有效的预防手段。

目前，肿瘤的临床诊断主要依据于患者的临床表现、各种影像学检查和实验室检测技术。但是，临床上很多癌症患者在早期并无明显的症状，发现时往往已到了晚期，比如肝癌和卵巢癌，在早期基本上无任何症状。各种影像学检测技术，如X线、B超、CT、磁共振，作为重要的肿瘤辅助诊断手段，通常也不能发现较小的早期肿瘤，而且需要特殊昂贵的仪器投入，因而在应用上存在一定的局限性，尤其是不适用于大范围的肿瘤筛查以及在基层单位或者经济不发达的偏远地区使用。

现代医学经过研究发现，早期发现，是治疗肿瘤的关键，如能在肿瘤发生的早期进行检测和诊断，其治疗的成功率则会大大提高。肿瘤的发展通常分为5个阶段：良性、肿瘤细胞启动期、肿瘤早期、肿瘤中期、晚期。实际上，在肿瘤发展的前4个阶段早期发现、早期治疗，都是可以完全治愈的，在前三个阶段发现并治疗，治愈率可达100％。癌症的可怕之处，就在于前三个阶段，影像学根本无法检测出来，即便到了肿瘤中期，也只有非常专业的医生用较先进的设备才能测出。世界卫生组织的研究认为：目前1/3的癌症是可以预防的；1/3的癌症可以通过积极治疗而延长患者生命；1/3的癌症是可以通过早期发现、早期诊断、早期治疗而痊愈的。这意味着肿瘤的早期发现成为可能，对癌症的治疗和预防也具有重要意义。

根据对大量正常人，一般病人及癌症患者尿样的核磁共振分析，发现癌症患者尿液中有特异性物质，该物质属羟基苯基衍生物，例如羟苯基丙氨酸，羟苯基丙酮酸，羟苯氨基乙酸，对羟基苯丙氨酸等。米伦(Millon)据此发明了Hg+-硝酸测定羟苯基丙氨酸的米伦试剂US5,066,601提出Hg+、Hg2+酸性溶液癌症检测试剂，用于临床。公开号为CN1096374的“癌症显示剂”专利申请，对米伦试剂加以改进，提出了Hg+，Hg²⁺和/或Ni²⁺组成的酸性溶液癌症显示试剂。根据大量的临床研究，发现该试剂存在以下问题：(1)HNO₃-H₂SO₄酸性体系的Hg⁺/Hg²⁺浓度较低，因此临床的灵敏度偏低，(2)作为稳定剂的Ni²⁺，由于Ni²⁺离子的兰绿色，当用量过多时会影响沉淀的颜色，因此影响检测。(3)由于Hg+的还原性，在空气中容易被氧化，而该显示剂中缺乏抗氧化剂或者其它抗氧化措施以致显示剂不能长期保存，影响临床应用：(4)该显示剂用金属汞置换方法以及硝酸浓度过高(例如HNO₃良度为12N)时都会释放出大量的氮化物有害气体。

发明内容

本发明针对现有技术中的不足之处，提供一种尿液中对羟基苯丙氨酸检测试剂的制备方法及装有所述检测试剂的试剂盒。

本发明通过下述技术方案得以解决：

一种尿液中对羟基苯丙氨酸检测试剂的制备方法，所述检测试剂是将分别含有Hg₂ ²⁺、Hg²⁺、Ni²⁺、a-亚硝基-β-萘酚的酸溶液按一定比例混合制得。

一种尿液中对羟基苯丙氨酸检测试剂的制备方法，包括以下步骤：

(1)硫酸汞的制备：将硫酸汞加入6mol/L的硫酸溶液中搅拌溶解后，再用6mol/L的硫酸溶液稀释，得到浓度为15-20％(m/v)的硫酸汞溶液；

(2)硝酸亚汞溶液的制备：将硝酸亚汞加入到12mol/L的硝酸溶液中，搅拌溶解后，用12mol/L硝酸溶液稀释，得到绿色液体，放置待溶液绿色褪去后，方可使用，最终制得浓度为60-70％(m/v)的硝酸亚汞溶液；

(3)硫酸镍溶液的制备：将硫酸镍溶解到蒸馏水中，然后用蒸馏水稀释，制得蓝绿色液体，为浓度为2-5％(m/v)的硫酸镍溶液，待用；

(4)将a-亚硝基-β-萘酚溶解于6mol/L的硝酸溶液中，制得a-亚硝基-β-萘酚浓度为2-5％(m/v)的a-亚硝基-β-萘酚溶液；

(5)混合：将制得的步骤(1)中硫酸汞溶液、步骤(2)中硝酸亚汞溶液、步骤(3)中硫酸镍溶液、步骤(4)中a-亚硝基-β-萘酚溶液按体积比1～1.5∶1.2～1.8∶0.2～0.4∶0.05～0.1的比例进行混合后，得到尿液中对羟基苯丙氨酸的检测试剂。

在一种优选实施方式中，步骤(1)中制得硫酸汞溶液浓度为18％(m/v)，步骤(2)中硝酸亚汞溶液浓度为65％(m/v)，步骤(3)中硫酸镍溶液浓度为3％(m/v)，步骤(4)中a-亚硝基-β-萘酚溶液浓度为4％(m/v)。

本发明还涉及一种用于尿液中对羟基苯丙氨酸代谢物检测的试剂盒，包括检测试剂，所述检测试剂采用上面任一所述的制备方法制备而成。

本发明依据原理：尿液是人体不断产生，不断排泄的代谢产物，在全身各个织组与部分细胞代谢过程中，代谢产物就溶在尿液中形成一个复杂的含多种有机物及有机化学成分的混合物，尿液中成分与含量可以准确的反映体内各器官的生理功能和状态，特别是当体内肿瘤因子活动时，体内相对部分的分子量为4000～6000的蛋白代谢异常使尿液中的硫脲、硫乙醇胺、酪氨酸、色氨酸等多种有机构含量与含毒激素明显增加，这种情况下，尿液与对对羟基莱丙氨酸(酪氨酸)尿液检测试剂汇合发生桃红色反应，这种明显的颜色反应就是本试剂完成代谢异常尿检的基础原理。

本发明的用于尿液中对羟基苯丙氨酸代谢物早期筛查的检测试剂，是在Millon试剂原理基础上进行创新，它排除了尿液中碱性物质、金属离子和其他相关物质对试剂检测的干扰，可以长期保存，使用快速安全，并提高了检测的灵敏度和准确性，经肿瘤医院的临床验证，准确率(符合率)达到5％以上，适合大量推广应用。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面对本发明实施例的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于所描述的本发明的实施例，本领域普通技术人员在无需创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

尿液中对羟基苯丙氨酸检测试剂的制备方法，包括如下步骤：

(1)硫酸汞的制备：将硫酸汞加入6mol/L的硫酸溶液中搅拌溶解后，再用6mol/L的硫酸溶液稀释，得到浓度为15％(m/v)的硫酸汞溶液；

(2)硝酸亚汞溶液的制备：将硝酸亚汞加入到12mol/L的硝酸溶液中，搅拌溶解后，用12mol/L硝酸溶液稀释，得到绿色液体，放置待溶液绿色褪去后，方可使用，最终制得浓度为60％(m/v)的硝酸亚汞溶液；

(3)硫酸镍溶液的制备：将硫酸镍溶解到蒸馏水中，然后用蒸馏水稀释，制得蓝绿色液体，为浓度为2％(m/v)的硫酸镍溶液，待用；

(4)将a-亚硝基-β-萘酚溶解于6mol/L的硝酸溶液中，制得a-亚硝基-β-萘酚浓度为2％(m/v)的a-亚硝基-β-萘酚溶液。

(5)混合：将制得的步骤(1)中硫酸汞溶液、步骤(2)中硝酸亚汞溶液、步骤(3)中硫酸镍溶液、步骤(4)中a-亚硝基-β-萘酚溶液按体积比1∶1.2∶0.2∶0.05的比例进行混合后，得到尿液中对羟基苯丙氨酸的检测试剂。

实施例2

(1)硫酸汞的制备：将硫酸汞加入6mol/L的硫酸溶液中搅拌溶解后，再用6mol/L的硫酸溶液稀释，得到浓度为20％(m/v)的硫酸汞溶液；

(2)硝酸亚汞溶液的制备：将硝酸亚汞加入到12mol/L的硝酸溶液中，搅拌溶解后，用12mol/L硝酸溶液稀释，得到绿色液体，放置待溶液绿色褪去后，方可使用，最终制得浓度为70％(m/v)的硝酸亚汞溶液；

(3)硫酸镍溶液的制备：将硫酸镍溶解到蒸馏水中，然后用蒸馏水稀释，制得蓝绿色液体，为浓度为5％(m/v)的硫酸镍溶液，待用；

(4)将a-亚硝基-β-萘酚溶解于6mol/L的硝酸溶液中，制得a-亚硝基-β-萘酚浓度为5％(m/v)的a-亚硝基-β-萘酚溶液。

(5)混合：将制得的步骤(1)中硫酸汞溶液、步骤(2)中硝酸亚汞溶液、步骤(3)中硫酸镍溶液、步骤(4)中a-亚硝基-β-萘酚溶液按体积比1.5∶1.2∶0.4∶0.1的比例进行混合后，得到尿液中对羟基苯丙氨酸的检测试剂。

实施例3

(1)硫酸汞的制备：将硫酸汞加入6mol/L的硫酸溶液中搅拌溶解后，再用6mol/L的硫酸溶液稀释，得到浓度为18％(m/v)的硫酸汞溶液；

(2)硝酸亚汞溶液的制备：将硝酸亚汞加入到12mol/L的硝酸溶液中，搅拌溶解后，用12mol/L硝酸溶液稀释，得到绿色液体，放置待溶液绿色褪去后，方可使用，最终制得浓度为65％(m/v)的硝酸亚汞溶液；

(3)硫酸镍溶液的制备：将硫酸镍溶解到蒸馏水中，然后用蒸馏水稀释，制得蓝绿色液体，为浓度为3％(m/v)的硫酸镍溶液，待用；

(4)将a-亚硝基-β-萘酚溶解于6mol/L的硝酸溶液中，制得a-亚硝基-β-萘酚浓度为4％(m/v)的a-亚硝基-β-萘酚溶液。

(5)混合：将制得的步骤(1)中硫酸汞溶液、步骤(2)中硝酸亚汞溶液、步骤(3)中硫酸镍溶液、步骤(4)中a-亚硝基-β-萘酚溶液按体积比1∶1.5∶0.3∶0.08的比例进行混合后，得到尿液中对羟基苯丙氨酸的检测试剂。

实施例4

(3)硫酸镍溶液的制备：将硫酸镍溶解到蒸馏水中，然后用蒸馏水稀释，制得蓝绿色液体，为浓度为4％(m/v)的硫酸镍溶液，待用；

(5)混合：将制得的步骤(1)中硫酸汞溶液、步骤(2)中硝酸亚汞溶液、步骤(3)中硫酸镍溶液、步骤(4)中a-亚硝基-β-萘酚溶液按体积比1.3∶1.8∶0.3∶0.1的比例进行混合后，得到尿液中对羟基苯丙氨酸的检测试剂。

经肿瘤医院的临床验证，选择2000例均为经组织学确诊的癌症病人，随机分为4组，每组500例，分别采用实施例1-4的检测试剂进行检测，结果分别检出487、476、483、479例发生桃红色反应(为阳性患者)，准确率(符合率)分别为97.4％、95.2％、96.6％、95.8％，准确率达到95％以上。患者在家就可以自己检测，便于癌症的早期发现和康复，适合大量推广应用。

本发明还涉及一种用于尿液中对羟基苯丙氨酸代谢物早期筛查和检测的试剂盒，其包含上述实施例1-4任一中方法制备的检测试剂。所述试剂盒可以采用已知的试剂盒，用户可以在家中常备，随时进行检测，使用便捷，准确率高。

最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims

1.一种尿液中对羟基苯丙氨酸检测试剂的制备方法，其特征在于：所述检测试剂是将分别含有Hg₂ ²⁺、Hg²⁺、Ni²⁺、a-亚硝基-β-萘酚的酸溶液按一定比例混合制得。

2.一种尿液中对羟基苯丙氨酸检测试剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(5)混合：将制得的步骤(1)中硫酸汞溶液、步骤(2)中硝酸亚汞溶液、步骤(3)中硫酸镍溶液、步骤(4)中a-亚硝基-β-萘酚溶液按体积比1～1.5∶1.2～1.8∶0.2～0.4∶0.05～0.1的比例进行混合后，得到尿液中对羟基苯丙氨酸代谢物的检测试剂。

3.根据权利要求2所述的尿液中对羟基苯丙氨酸检测试剂的制备方法，其特征在于：步骤(1)中制得硫酸汞溶液浓度为18％(m/v)。

4.根据权利要求3所述的尿液中对羟基苯丙氨酸检测试剂的制备方法，其特征在于：步骤(2)中硝酸亚汞溶液浓度为65％(m/v)。

5.根据权利要求4所述的尿液中对羟基苯丙氨酸检测试剂的制备方法，其特征在于：步骤(3)中硫酸镍溶液浓度为3％(m/v)。

6.根据权利要求5所述的尿液中对羟基苯丙氨酸检测试剂的制备方法，其特征在于：步骤(4)中a-亚硝基-β-萘酚溶液浓度为4％(m/v)。

7.一种用于尿液中对羟基苯丙氨酸代谢物检测的试剂盒，包括检测试剂，其特征在于：所述检测试剂采用权利要求1-6任一所述的制备方法制备而成。