CN107167350B - 一种茄子根茎部组织的石蜡切片的制备方法 - Google Patents
一种茄子根茎部组织的石蜡切片的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107167350B CN107167350B CN201710345264.4A CN201710345264A CN107167350B CN 107167350 B CN107167350 B CN 107167350B CN 201710345264 A CN201710345264 A CN 201710345264A CN 107167350 B CN107167350 B CN 107167350B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- ethanol
- test material
- paraffin
- glass slide
- placing
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 title claims abstract description 104
- 244000061458 Solanum melongena Species 0.000 title claims abstract description 38
- 235000002597 Solanum melongena Nutrition 0.000 title claims abstract description 33
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 38
- 230000007480 spreading Effects 0.000 claims abstract description 12
- 238000003892 spreading Methods 0.000 claims abstract description 12
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 claims abstract description 11
- 238000007789 sealing Methods 0.000 claims abstract description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 233
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 131
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 119
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 100
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 87
- 239000008096 xylene Substances 0.000 claims description 53
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 50
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 35
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 34
- 239000001993 wax Substances 0.000 claims description 33
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 29
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 28
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims description 22
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 21
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 17
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 claims description 13
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 claims description 10
- 238000007598 dipping method Methods 0.000 claims description 10
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 10
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims description 10
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 10
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims description 7
- 238000002844 melting Methods 0.000 claims description 6
- 230000008018 melting Effects 0.000 claims description 6
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 6
- PANKHBYNKQNAHN-JTBLXSOISA-N Crocetin Natural products OC(=O)C(\C)=C/C=C/C(/C)=C\C=C\C=C(\C)/C=C/C=C(/C)C(O)=O PANKHBYNKQNAHN-JTBLXSOISA-N 0.000 claims description 5
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 claims description 5
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 claims description 5
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 5
- 238000009835 boiling Methods 0.000 claims description 5
- PANKHBYNKQNAHN-JUMCEFIXSA-N carotenoid dicarboxylic acid Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C(=O)O)C=CC=C(/C)C(=O)O PANKHBYNKQNAHN-JUMCEFIXSA-N 0.000 claims description 5
- 239000006059 cover glass Substances 0.000 claims description 5
- PANKHBYNKQNAHN-MQQNZMFNSA-N crocetin Chemical compound OC(=O)C(/C)=C/C=C/C(/C)=C/C=C/C=C(\C)/C=C/C=C(\C)C(O)=O PANKHBYNKQNAHN-MQQNZMFNSA-N 0.000 claims description 5
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 5
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 claims description 5
- 238000009966 trimming Methods 0.000 claims description 5
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 claims description 5
- 238000009736 wetting Methods 0.000 claims description 5
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 claims description 4
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 4
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 claims description 4
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 claims description 4
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 9
- 238000011160 research Methods 0.000 abstract description 8
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 abstract description 4
- 230000007170 pathology Effects 0.000 abstract description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 abstract description 3
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 abstract description 3
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 abstract description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 abstract description 2
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 abstract description 2
- 238000004018 waxing Methods 0.000 abstract 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 10
- 230000008569 process Effects 0.000 description 6
- 239000000834 fixative Substances 0.000 description 5
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- OARRHUQTFTUEOS-UHFFFAOYSA-N safranin Chemical compound [Cl-].C=12C=C(N)C(C)=CC2=NC2=CC(C)=C(N)C=C2[N+]=1C1=CC=CC=C1 OARRHUQTFTUEOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001106067 Atropa Species 0.000 description 1
- 241000208011 Digitalis Species 0.000 description 1
- 101100136092 Drosophila melanogaster peng gene Proteins 0.000 description 1
- RZSYLLSAWYUBPE-UHFFFAOYSA-L Fast green FCF Chemical compound [Na+].[Na+].C=1C=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C(=CC(O)=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=CC=1N(CC)CC1=CC=CC(S([O-])(=O)=O)=C1 RZSYLLSAWYUBPE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N Selenium Chemical compound [Se] BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003484 anatomy Anatomy 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000004660 morphological change Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/2813—Producing thin layers of samples on a substrate, e.g. smearing, spinning-on
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/36—Embedding or analogous mounting of samples
Abstract
本发明涉及一种茄子根茎部组织的石蜡切片的制备方法，属于生物组织学技术领域。该方法包括固定与软化、脱水、透明、浸蜡、包埋、修蜡与切片、展片与烤片、脱蜡、复水、染色、封片和观察十一大步骤。本发明方法是一种快捷、安全、实用的茄子根茎部组织石蜡切片方法，该方法得到的结果可操作性强、可重复率高、稳定可靠，镜下观察切片质量高、效果好、组织结构清晰。本方法不仅可用于研究、观察及判断茄子根茎部细胞组织的形态结构变化，从而对茄子的生理、病理和形态学进行研究，还可广泛应用于茄果类乃至其它植物的组织切片实验中，具有较好的科研应用前景。
Description
技术领域
本发明属于生物组织学技术领域，具体涉及一种茄子根茎部组织的石蜡切片的制备方法。
背景技术
石蜡组织切片技术是组织学常规制片技术中最为广泛应用的一种方法。不仅用于观察正常细胞组织的形态结构，也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法，已广泛应用于众多学科领域的研究中。但由于植物的组织结构特异性，不同材料的具体操作方法也不尽相同。
目前，在茄子上开展的石蜡切片技术研究较少，且效果并不理想（切片破碎不完整且清晰度差）。因此如何克服现有技术的不足是目前生物组织学技术领域亟需解决的问题。
发明内容
本发明的目的是为了有效观察茄子根茎部的组织结构，对茄子的生理和病理进行研究，并解决现有技术的不足，提供一种茄子根茎部组织的石蜡切片的制备方法。本发明方法是在传统石蜡切片的基础上，对茄子根茎部组织开展石蜡切片技术研究，通过技术改良与创新，最终摸索出的一套简单高效、可操作性强、可重复率高、结果清晰且稳定可靠的实验技术方法。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种茄子根茎部组织的石蜡切片的制备方法，包括如下步骤：
步骤（1）固定与软化：
选取新鲜茄子植株，截取地上1～3cm处的茎部组织和地下1～3cm处的主根组织作为石蜡切片的试验材料；
将所选的试验材料去杂，截成长为0.48～0.52cm的小段，放入FAA固定液中，于3～5℃下固定3～5d；
之后，在固定液中再加入体积是固定液体积5%的甘油对试验材料进行初次软化，5～7d后，将试验材料取出，放置于体积比为1：1的甘油与体积浓度为70%的乙醇混合液中，于35～38℃的暗培养箱中进行二次软化处理15d以上；
步骤（2）脱水：将经步骤（1）处理后的试验材料用体积浓度为30%的乙醇冲洗1～2次，之后将试验材料放置于体积浓度为50%乙醇中30min，取出后再依次放置在体积浓度为70%、85%、95%的乙醇中各处理2h，最后放置在纯乙醇中处理2次，每次30min，两次处理不需要间隔时间；
步骤（3）透明：将经步骤（2）脱水后的试验材料置于体积比为1：1的乙醇与二甲苯的混合溶剂中1～2h，之后再置于二甲苯中两次，每次1.5～2h，两次处理不需要间隔时间；
步骤（4）浸蜡：将经步骤（3）处理的试验材料浸泡于二甲苯中，放入38℃的烘箱中，并不断提高烘箱温度，白天每6h升高1℃，晚上每12h升高1℃，同时每2h向二甲苯中添加1～2 g石蜡粉末；
当烘箱温度升至56～57℃且溶液体积达到二甲苯体积的2倍以上时，将试验材料置于石蜡液中处理3次，每次处理24h，且每更换一次石蜡液后烘箱需升温1℃，最终烘箱温度为58℃；
步骤（5）包埋：首先对包埋盒及经步骤（4）处理的试验材料进行预热，预热温度为65～71℃，之后，先在包埋盒中加入石蜡液至形成底座，石蜡液的加入量为刚刚覆盖包埋盒底部即可；3～5s后再向包埋盒中倒入能没过试验材料的石蜡液，待底座变白后将试验材料转入包埋盒中进行包埋，待石蜡液全部凝结后，将石蜡块取出，备用；
步骤（6），修蜡与切片：对步骤（5）得到的石蜡块进行修理，要求将试验材料周围多余的蜡块去除，得到切面平整、截面为矩形或梯形的试验材料蜡块；将试验材料蜡块切片，切片厚度为8～10μm；
步骤（7），展片与烤片：将蒸馏水与刷过粘片剂的载玻片进行预热，预热温度为40～42℃；然后在载玻片上滴上1 mL的蒸馏水，之后将步骤（6）得到切片正面朝上放置在载玻片上展片，再用滤纸将多余的蒸馏水吸除；接着将载玻片放置在40～45℃的烘箱中进行烤片3～7d，待肉眼可见蜡带已基本融化即完成烤片；
步骤（8），脱蜡：将步骤（7）烤片后的载玻片从烘箱中拿出后立即放入二甲苯浸泡40min，再换成新的二甲苯浸泡至肉眼观察试验材料周围的蜡完全脱去；
步骤（9），复水：将经步骤（8）脱蜡后的载玻片依次放入体积比为1：1的乙醇与二甲苯的混合溶剂、纯乙醇、体积浓度为95%乙醇、体积浓度为85%乙醇、体积浓度为70%乙醇、体积浓度为50%乙醇、体积浓度为30%乙醇、体积浓度为15%乙醇、蒸馏水中，各浸泡2～3min；
步骤（10），染色：将经步骤（9）复水后的载玻片放入质量浓度为1%的番红花红T水溶液中，于29～31℃的培养箱中放置4～6h，然后依次放置于用蒸馏水、体积浓度为15%乙醇、体积浓度为30%乙醇、体积浓度为50%乙醇、体积浓度为70%乙醇、体积浓度为85%乙醇、体积浓度为95%乙醇中，各10s；接着放置于质量浓度为1%的固绿溶液中5s，再放置于纯乙醇中2次，每次2min；之后放置于体积比为1：1的乙醇与二甲苯的混合溶剂中2 min，最后放置于二甲苯中2次，每次3～6 min；
步骤（11），封片：将步骤（10）染色的载玻片在二甲苯中沾湿后，用擦镜纸擦去载玻片底部和周围多余的二甲苯，在载玻片中央滴入加拿大中性树胶，轻微晃动玻片让中性树胶与二甲苯充分混合，从载玻片一端轻放上盖玻片，放入35～40℃的烘箱中烤干，得到茄子根茎部组织的永久切片，即可观察。
进一步，优选的是，步骤（1）中，去杂时，采用流水冲洗去杂。
进一步，优选的是，步骤（1）中，每100mL FAA固定液中含福尔马林5mL、冰醋酸5mL、体积浓度为70%的乙醇90mL。
进一步，优选的是，步骤（1）中，固定所采用的FAA固定液体积为试验材料体积的20倍以上。
进一步，优选的是，步骤（4）、步骤（5）中，石蜡液为石蜡经过以上多次加热沸腾并纱布过滤所得，石蜡的熔点为56～58℃。
进一步，优选的是，步骤（5）中，预热的具体方法是在烘片机上，对包埋盒及装有试验材料的广口瓶进行预热；将试验材料转入包埋盒中是采用经酒精灯预热过的镊子来转入。
进一步，优选的是，步骤（7）中所述的粘片剂的配制方法为1g明胶溶解于100mL蒸馏水中，加入2g苯酚和15mL甘油，充分混匀后于121℃下高温灭菌，即得。
进一步，优选的是，步骤（8）中，再换成新的二甲苯浸泡时间为20min。
本发明得到的切片可放在光学显微镜下观察，用测微尺进行测量，用显微成像系统或显微镜摄像头进行拍照。
本发明与现有技术相比，其有益效果为：
1、软化：本方法在软化过程中，通过在固定液中添加甘油进行初次软化，并使用35～38℃的暗培养箱加温软化，从而加速软化过程、缩短软化时间、提高软化效果，更好的保证了材料的完整性。
2、浸蜡：本方法以38℃为浸蜡起点（软化处理的温度），58℃（所用石蜡的最高熔点）为浸蜡终点，并通过每天逐步升高烘箱处理温度3℃和每2 h添加一次石蜡粉末，使得浸蜡过程持续、完整，浸蜡效果均匀、细腻；为后期蜡带和材料的完整、清晰、透明奠定了良好的基础。
3、预热：本方法在包埋、展片和脱蜡时，均采用了保温预热的方法，使试验材料和蜡在处理过程中避免温差过大所造成的气泡、脱离和变形，从而保证了试验材料和蜡带的良好融合和完整性。
4、染色：由于石蜡切片在染色过程中往往是番红染色难、固绿染色容易而出现片子发绿，看不到材料的木质部（本应被番红染成红色）；本方法通过将染缸放入培养箱中处理，并缩短固绿染色时间，从而有效缩短染色过程、增加染色效果，使染出的片子红绿分明、组织结构清晰。
5、适用范围：本方法可重复性高，适用范围广，可用于制作不同茄子材料（栽培茄、野茄）、不同生长时期（幼苗、成株）的根茎部组织的石蜡切片。
综上所述，为了对茄子的病理和生理组织结构变化开展研究，申请人经过多次实验探索出一种快捷、安全、实用的茄子根茎部组织石蜡切片方法，该方法得到的结果可操作性强、可重复率高、稳定可靠，镜下观察切片质量高、效果好、组织结构清晰。本方法不仅可用于研究、观察及判断茄子根茎部细胞组织的形态结构变化，从而对茄子的生理、病理和形态学进行研究，还可广泛应用于茄果类乃至其它植物的组织切片实验中，具有较好的科研应用前景。
附图说明
图1为现有技术1的显微镜图；图中1~6均为根部横切面显微镜图；
图2为现有技术2的显微镜图；图中A图为野颠茄根横切面显微镜图；B图为喀西茄根横切面显微镜图；
图3为本发明切片10倍目镜×10倍物镜下的结构示意图；
图4为本发明切片10倍目镜×40倍物镜下的结构示意图；
图5为本发明切片10倍目镜×100倍物镜下的结构示意图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的详细描述。
本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过购买获得的常规产品。
本发明除非另有说明，否则百分号代表质量百分数。
本实施例所采用的烘片机的型号为DB-B2，厂家为北京亚欧德鹏科技有限公司；
包埋盒中凹槽尺寸为24mm×24mm×9mm，优选放入2～4个试验材料；
本发明实施例所采用的石蜡切片机为徕卡RM2016轮转式切片机。
本发明实施例用镊子和接种针将切片正面朝上放置在载玻片上展片。
实施例1
一种茄子根茎部组织的石蜡切片的制备方法，包括如下步骤：
步骤（1）固定与软化：
选取新鲜茄子植株，截取地上1～3cm处的茎部组织和地下1～3cm处的主根组织作为石蜡切片的试验材料；
将所选的试验材料采用流水冲洗去杂，截成长为0.48～0.52cm的小段，放入FAA固定液中，于3℃下固定3d；每100mL FAA固定液中含福尔马林5mL、冰醋酸5mL、体积浓度为70%的乙醇90mL；固定所采用的FAA固定液体积为试验材料体积的20倍以上。
之后，在固定液中再加入体积是固定液体积5%的甘油对试验材料进行初次软化，5d后，将试验材料取出，放置于体积比为1：1的甘油与体积浓度为70%的乙醇混合液中，于35℃的暗培养箱中进行二次软化处理15d以上；处理时间越长软化效果越好；
步骤（2）脱水：将经步骤（1）处理后的试验材料用体积浓度为30%的乙醇冲洗1次，之后将试验材料放置于体积浓度为50%乙醇中30min，取出后再依次放置在体积浓度为70%、85%、95%的乙醇中各处理2h，最后放置在纯乙醇中处理2次，每次30min，两次处理不需要间隔时间；
步骤（3）透明：将经步骤（2）脱水后的试验材料置于体积比为1：1的乙醇与二甲苯的混合溶剂中1h，之后再置于二甲苯中两次，每次1.5h，两次处理不需要间隔时间；
步骤（4）浸蜡：将经步骤（3）处理的试验材料浸泡于二甲苯中，放入38℃的烘箱中，并不断提高烘箱温度，白天每6h升高1℃，晚上每12h升高1℃，同时每2h向二甲苯中添加1g石蜡粉末；
当烘箱温度升至56～57℃且溶液体积达到二甲苯体积的2倍以上时，将试验材料置于石蜡液中处理3次，每次处理24h，且每更换一次石蜡液后烘箱需升温1℃，最终烘箱温度为58℃；
步骤（5）包埋：首先对包埋盒及经步骤（4）处理的试验材料进行预热，预热温度为65℃，之后，先在包埋盒中加入石蜡液至形成底座；石蜡液的加入量为刚刚覆盖包埋盒底部即可；3s后再向包埋盒中倒入能没过试验材料的石蜡液，待底座变白后将试验材料转入包埋盒中进行包埋，待石蜡液全部凝结后，将石蜡块取出，备用；
步骤（6），修蜡与切片：对步骤（5）得到的石蜡块进行修理，要求将试验材料周围多余的蜡块去除，得到切面平整、截面为矩形或梯形的试验材料蜡块；将试验材料蜡块切片，切片厚度为8～10μm；
步骤（7），展片与烤片：将蒸馏水与刷过粘片剂的载玻片进行预热，预热温度为40℃；然后在载玻片上滴上1mL的蒸馏水，之后将步骤（6）得到切片正面朝上放置在载玻片上展片，再用滤纸将多余的蒸馏水吸除；接着将载玻片放置在40℃的烘箱中进行烤片3～7d，待肉眼可见蜡带已基本融化即完成烤片；
步骤（8），脱蜡：将步骤（7）烤片后的载玻片从烘箱中拿出后立即放入二甲苯浸泡40min，再换成新的二甲苯浸泡至肉眼观察试验材料周围的蜡完全脱去；从烘箱拿出载玻片时，采用夹子夹好，中间隔开避免粘片；
步骤（9），复水：将经步骤（8）脱蜡后的载玻片依次放入体积比为1：1的乙醇与二甲苯的混合溶剂、纯乙醇、体积浓度为95%乙醇、体积浓度为85%乙醇、体积浓度为70%乙醇、体积浓度为50%乙醇、体积浓度为30%乙醇、体积浓度为15%乙醇、蒸馏水中，各浸泡2min；
步骤（10），染色：将经步骤（9）复水后的载玻片放入质量浓度为1%的番红花红T水溶液中，于29℃的培养箱中放置4h，然后依次放置于用蒸馏水、体积浓度为15%乙醇、体积浓度为30%乙醇、体积浓度为50%乙醇、体积浓度为70%乙醇、体积浓度为85%乙醇、体积浓度为95%乙醇中，各10s；接着放置于质量浓度为1%的固绿溶液中5s，再放置于纯乙醇中2次，每次2min；之后放置于体积比为1：1的乙醇与二甲苯的混合溶剂中2 min，最后放置于二甲苯中2次，每次3min；
步骤（11），封片：将步骤（10）染色的载玻片在二甲苯中沾湿后，用擦镜纸擦去载玻片底部和周围多余的二甲苯，在载玻片中央滴入加拿大中性树胶，轻微晃动玻片让中性树胶与二甲苯充分混合，从载玻片一端轻放上盖玻片，放入35℃的烘箱中烤干，得到茄子根茎部组织的永久切片，即可观察。
其中，步骤（4）、步骤（5）中，石蜡液为石蜡经过以上多次加热沸腾并纱布过滤所得，石蜡的熔点为56～58℃。
步骤（5）中，预热的具体方法是在烘片机上，对包埋盒及装有试验材料的广口瓶进行预热；将试验材料转入包埋盒中是采用经酒精灯预热过的镊子来转入。
实施例2
一种茄子根茎部组织的石蜡切片的制备方法，包括如下步骤：
步骤（1）固定与软化：
选取新鲜茄子植株，截取地上1～3cm处的茎部组织和地下1～3cm处的主根组织作为石蜡切片的试验材料；
将所选的试验材料采用流水冲洗去杂，截成长为0.48～0.52cm的小段，放入FAA固定液中，于5℃下固定5d；每100mL FAA固定液中含福尔马林5mL、冰醋酸5mL、体积浓度为70%的乙醇90mL；固定所采用的FAA固定液体积为试验材料体积的20倍以上。
之后，在固定液中再加入体积是固定液体积5%的甘油对试验材料进行初次软化，7d后，将试验材料取出，放置于体积比为1：1的甘油与体积浓度为70%的乙醇混合液中，于38℃的暗培养箱中进行二次软化处理15d以上；处理时间越长软化效果越好；
步骤（2）脱水：将经步骤（1）处理后的试验材料用体积浓度为30%的乙醇冲洗2次，之后将试验材料放置于体积浓度为50%乙醇中30min，取出后再依次放置在体积浓度为70%、85%、95%的乙醇中各处理2h，最后放置在纯乙醇中处理2次，每次30min，两次处理不需要间隔时间；
步骤（3）透明：将经步骤（2）脱水后的试验材料置于体积比为1：1的乙醇与二甲苯的混合溶剂中2h，之后再置于二甲苯中两次，每次2h，两次处理不需要间隔时间；
步骤（4）浸蜡：将经步骤（3）处理的试验材料浸泡于二甲苯中，放入38℃的烘箱中，并不断提高烘箱温度，白天每6h升高1℃，晚上每12h升高1℃，同时每2h向二甲苯中添加2 g石蜡粉末；
当烘箱温度升至56～57℃且溶液体积达到二甲苯体积的2倍以上时，将试验材料置于石蜡液中处理3次，每次处理24h，且每更换一次石蜡液后烘箱需升温1℃，最终烘箱温度为58℃；
步骤（5）包埋：首先对包埋盒及经步骤（4）处理的试验材料进行预热，预热温度为71℃，之后，先在包埋盒中加入石蜡液至形成底座；石蜡液的加入量为刚刚覆盖包埋盒底部即可； 5s后再向包埋盒中倒入能没过试验材料的石蜡液，待底座变白后将试验材料转入包埋盒中进行包埋，待石蜡液全部凝结后，将石蜡块取出，备用；
步骤（6），修蜡与切片：对步骤（5）得到的石蜡块进行修理，要求将试验材料周围多余的蜡块去除，得到切面平整、截面为矩形或梯形的试验材料蜡块；将试验材料蜡块切片，切片厚度为8～10μm；
步骤（7），展片与烤片：将蒸馏水与刷过粘片剂的载玻片进行预热，预热温度为42℃；然后在载玻片上滴上1 mL的蒸馏水，之后将步骤（6）得到切片正面朝上放置在载玻片上展片，再用滤纸将多余的蒸馏水吸除；接着将载玻片放置在45℃的烘箱中进行烤片3～7d，待肉眼可见蜡带已基本融化即完成烤片；
步骤（8），脱蜡：将步骤（7）烤片后的载玻片从烘箱中拿出后立即放入二甲苯浸泡40min，再换成新的二甲苯浸泡至肉眼观察试验材料周围的蜡完全脱去；从烘箱拿出载玻片时，采用夹子夹好，中间隔开避免粘片；
步骤（9），复水：将经步骤（8）脱蜡后的载玻片依次放入体积比为1：1的乙醇与二甲苯的混合溶剂、纯乙醇、体积浓度为95%乙醇、体积浓度为85%乙醇、体积浓度为70%乙醇、体积浓度为50%乙醇、体积浓度为30%乙醇、体积浓度为15%乙醇、蒸馏水中，各浸泡3min；
步骤（10），染色：将经步骤（9）复水后的载玻片放入质量浓度为1%的番红花红T水溶液中，于31℃的培养箱中放置6h，然后依次放置于用蒸馏水、体积浓度为15%乙醇、体积浓度为30%乙醇、体积浓度为50%乙醇、体积浓度为70%乙醇、体积浓度为85%乙醇、体积浓度为95%乙醇中，各10s；接着放置于质量浓度为1%的固绿溶液中5s，再放置于纯乙醇中2次，每次2min；之后放置于体积比为1：1的乙醇与二甲苯的混合溶剂中2 min，最后放置于二甲苯中2次，每次6 min；
步骤（11），封片：将步骤（10）染色的载玻片在二甲苯中沾湿后，用擦镜纸擦去载玻片底部和周围多余的二甲苯，在载玻片中央滴入加拿大中性树胶，轻微晃动玻片让中性树胶与二甲苯充分混合，从载玻片一端轻放上盖玻片，放入40℃的烘箱中烤干，得到茄子根茎部组织的永久切片，即可观察。
其中，步骤（4）、步骤（5）中，石蜡液为石蜡经过以上多次加热沸腾并纱布过滤所得，石蜡的熔点为56～58℃。
步骤（5）中，预热的具体方法是在烘片机上，对包埋盒及装有试验材料的广口瓶进行预热；将试验材料转入包埋盒中是采用经酒精灯预热过的镊子来转入。
步骤（7）中所述的粘片剂的配制方法为1g明胶溶解于100mL蒸馏水中，加入2g苯酚和15mL甘油，充分混匀后于121℃下高温灭菌，即得。
步骤（8）中，再换成新的二甲苯浸泡时间为20min。
实施例3
一种茄子根茎部组织的石蜡切片的制备方法，包括如下步骤：
步骤（1）固定与软化：
选取新鲜茄子植株，截取地上1～3cm处的茎部组织和地下1～3cm处的主根组织作为石蜡切片的试验材料；
将所选的试验材料采用流水冲洗去杂，截成长为0.48～0.52cm的小段，放入FAA固定液中，于4℃下固定4d；每100mL FAA固定液中含福尔马林5mL、冰醋酸5mL、体积浓度为70%的乙醇90mL；固定所采用的FAA固定液体积为试验材料体积的20倍以上。
之后，在固定液中再加入体积是固定液体积5%的甘油对试验材料进行初次软化，6d后，将试验材料取出，放置于体积比为1：1的甘油与体积浓度为70%的乙醇混合液中，于37℃的暗培养箱中进行二次软化处理15d以上；处理时间越长软化效果越好；
步骤（2）脱水：将经步骤（1）处理后的试验材料用体积浓度为30%的乙醇冲洗2次，之后将试验材料放置于体积浓度为50%乙醇中30min，取出后再依次放置在体积浓度为70%、85%、95%的乙醇中各处理2h，最后放置在纯乙醇中处理2次，每次30min，两次处理不需要间隔时间；
步骤（3）透明：将经步骤（2）脱水后的试验材料置于体积比为1：1的乙醇与二甲苯的混合溶剂中1.5h，之后再置于二甲苯中两次，每次1.8h，两次处理不需要间隔时间；
步骤（4）浸蜡：将经步骤（3）处理的试验材料浸泡于二甲苯中，放入38℃的烘箱中，并不断提高烘箱温度，白天每6h升高1℃，晚上每12h升高1℃，同时每2h向二甲苯中添加1.7g石蜡粉末；
当烘箱温度升至56～57℃且溶液体积达到二甲苯体积的2倍以上时，将试验材料置于石蜡液中处理3次，每次处理24h，且每更换一次石蜡液后烘箱需升温1℃，最终烘箱温度为58℃；
步骤（5）包埋：首先对包埋盒及经步骤（4）处理的试验材料进行预热，预热温度为68℃，之后，先在包埋盒中加入石蜡液至形成底座；石蜡液的加入量为刚刚覆盖包埋盒底部即可；4s后再向包埋盒中倒入能没过试验材料的石蜡液，待底座变白后将试验材料转入包埋盒中进行包埋，待石蜡液全部凝结后，将石蜡块取出，备用；
步骤（6），修蜡与切片：对步骤（5）得到的石蜡块进行修理，要求将试验材料周围多余的蜡块去除，得到切面平整、截面为矩形或梯形的试验材料蜡块；将试验材料蜡块切片，切片厚度为8～10μm；
步骤（7），展片与烤片：将蒸馏水与刷过粘片剂的载玻片进行预热，预热温度为41℃；然后在载玻片上滴上1 mL的蒸馏水，之后将步骤（6）得到切片正面朝上放置在载玻片上展片，再用滤纸将多余的蒸馏水吸除；接着将载玻片放置在43℃的烘箱中进行烤片5d，待肉眼可见蜡带已基本融化即完成烤片；
步骤（8），脱蜡：将步骤（7）烤片后的载玻片从烘箱中拿出后立即放入二甲苯浸泡40min，再换成新的二甲苯浸泡至肉眼观察试验材料周围的蜡完全脱去；从烘箱拿出载玻片时，采用夹子夹好，中间隔开避免粘片；
步骤（9），复水：将经步骤（8）脱蜡后的载玻片依次放入体积比为1：1的乙醇与二甲苯的混合溶剂、纯乙醇、体积浓度为95%乙醇、体积浓度为85%乙醇、体积浓度为70%乙醇、体积浓度为50%乙醇、体积浓度为30%乙醇、体积浓度为15%乙醇、蒸馏水中，各浸泡2.5min；
步骤（10），染色：将经步骤（9）复水后的载玻片放入质量浓度为1%的番红花红T水溶液中，于30℃的培养箱中放置5h，然后依次放置于用蒸馏水、体积浓度为15%乙醇、体积浓度为30%乙醇、体积浓度为50%乙醇、体积浓度为70%乙醇、体积浓度为85%乙醇、体积浓度为95%乙醇中，各10s；接着放置于质量浓度为1%的固绿溶液中5s，再放置于纯乙醇中2次，每次2min；之后放置于体积比为1：1的乙醇与二甲苯的混合溶剂中2 min，最后放置于二甲苯中2次，每次5min；
步骤（11），封片：将步骤（10）染色的载玻片在二甲苯中沾湿后，用擦镜纸擦去载玻片底部和周围多余的二甲苯，在载玻片中央滴入加拿大中性树胶，轻微晃动玻片让中性树胶与二甲苯充分混合，从载玻片一端轻放上盖玻片，放入38℃的烘箱中烤干，得到茄子根茎部组织的永久切片，即可观察。
其中，步骤（4）、步骤（5）中，石蜡液为石蜡经过以上多次加热沸腾并纱布过滤所得，石蜡的熔点为56～58℃。
步骤（5）中，预热的具体方法是在烘片机上，对包埋盒及装有试验材料的广口瓶进行预热；将试验材料转入包埋盒中是采用经酒精灯预热过的镊子来转入。
步骤（7）中所述的粘片剂的配制方法为1g明胶溶解于100mL蒸馏水中，加入2g苯酚和15mL甘油，充分混匀后于121℃下高温灭菌，即得。
步骤（8）中，再换成新的二甲苯浸泡时间为20min。
本发明得到的切片可放在光学显微镜下观察，用测微尺进行测量，用显微成像系统或显微镜摄像头进行拍照。
如图1~5，本方法与传统方法（已报道文献）比较可见，本方法镜下观察切片质量高、效果好、组织结构完整且清晰。
图1为现有技术1（王桂芹, 王秀艳, 段亚军. 茄子砧木与栽培种根的解剖结构比较. 2002. 沈阳农业大学学报. 33(4): 255-257.）的根部横切图；
图2为现有技术2（马莉, 房志坚. 野颠茄及其混淆品喀西茄的性状与显微鉴别.中药材 2012, 35（2）: 216-220.）的横切显微镜图；
图1和图2均来自于以上参考文献。
本方法与常规方法比较，结果如表1所示。
表1
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
Claims (6)
1.一种茄子根茎部组织的石蜡切片的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤（1）固定与软化：
选取新鲜茄子植株，截取地上1～3cm处的茎部组织和地下1～3cm处的主根组织作为石蜡切片的试验材料；
将所选的试验材料去杂，截成长为0.48～0.52cm的小段，按FAA固定液体积为试验材料体积的20倍以上计，将试验材料放入FAA固定液中，于3～5℃下固定3～5d；所述FAA固定液是每100mLFAA固定液中含福尔马林5mL、冰醋酸5mL、体积浓度为70%的乙醇90mL；
之后，在固定液中再加入体积是固定液体积5%的甘油对试验材料进行初次软化，5～7d后，将试验材料取出，放置于体积比为1：1的甘油与体积浓度为70%的乙醇混合液中，于35～38℃的暗培养箱中进行二次软化处理15d以上；
步骤（2）脱水：将经步骤（1）处理后的试验材料用体积浓度为30%的乙醇冲洗1～2次，之后将试验材料放置于体积浓度为50%乙醇中30min，取出后再依次放置在体积浓度为70%、85%、95%的乙醇中各处理2h，最后放置在纯乙醇中处理2次，每次30min；
步骤（3）透明：将经步骤（2）脱水后的试验材料置于体积比为1：1的乙醇与二甲苯的混合溶剂中1～2h，之后再置于二甲苯中两次，每次1.5～2h；
步骤（4）浸蜡：将经步骤（3）处理的试验材料浸泡于新的二甲苯中，放入38℃的烘箱中，并不断提高烘箱温度，白天每6h升高1℃，晚上每12h升高1℃，同时每2h向二甲苯中添加1～2g石蜡粉末；
当烘箱温度升至56～57℃且溶液体积达到二甲苯体积的2倍以上时，将试验材料置于石蜡液中处理3次，每次处理24h，且每更换一次石蜡液后烘箱需升温1℃，最终烘箱温度为58℃；
步骤（5）包埋：首先对包埋盒及经步骤（4）处理的试验材料进行预热，预热温度为65～71℃，之后，先在包埋盒中加入石蜡液至形成底座，石蜡液的加入量为刚刚覆盖包埋盒底部即可；3～5s后再向包埋盒中倒入能没过试验材料的石蜡液，待底座变白后将试验材料转入包埋盒中进行包埋，待石蜡液全部凝结后，将石蜡块取出，备用；
步骤（6），修蜡与切片：对步骤（5）得到的石蜡块进行修理，要求将试验材料周围多余的蜡块去除，得到切面平整、截面为矩形或梯形的试验材料蜡块；将试验材料蜡块切片，切片厚度为8～10μm；
步骤（7），展片与烤片：将蒸馏水与刷过粘片剂的载玻片进行预热，预热温度为40～42℃；然后在载玻片上滴上1mL的蒸馏水，之后将步骤（6）得到切片正面朝上放置在载玻片上展片，再用滤纸将多余的蒸馏水吸除；接着将载玻片放置在40～45℃的烘箱中进行烤片3～7d，待肉眼可见蜡带已基本融化即完成烤片；
步骤（8），脱蜡：将步骤（7）烤片后的载玻片从烘箱中拿出后立即放入二甲苯浸泡40min，再换成新的二甲苯浸泡至肉眼观察试验材料周围的蜡完全脱去；
步骤（9），复水：将经步骤（8）脱蜡后的载玻片依次放入体积比为1：1的乙醇与二甲苯的混合溶剂、纯乙醇、体积浓度为95%乙醇、体积浓度为85%乙醇、体积浓度为70%乙醇、体积浓度为50%乙醇、体积浓度为30%乙醇、体积浓度为15%乙醇、蒸馏水中，各浸泡2～3min；
步骤（10），染色：将经步骤（9）复水后的载玻片放入质量浓度为1%的番红花红T水溶液中，于29～31℃的培养箱中放置4～6h，然后依次放置于用蒸馏水、体积浓度为15%乙醇、体积浓度为30%乙醇、体积浓度为50%乙醇、体积浓度为70%乙醇、体积浓度为85%乙醇、体积浓度为95%乙醇中，各10s；接着放置于质量浓度为1%的固绿溶液中5s，再放置于纯乙醇中2次，每次2min；之后放置于体积比为1：1的乙醇与二甲苯的混合溶剂中2 min，最后放置于二甲苯中2次，每次3～6 min；
步骤（11），封片：将步骤（10）染色的载玻片在二甲苯中沾湿后，用擦镜纸擦去载玻片底部和周围多余的二甲苯，在载玻片中央滴入加拿大中性树胶，轻微晃动玻片让中性树胶与二甲苯充分混合，从载玻片一端轻放上盖玻片，放入35～40℃的烘箱中烤干，得到茄子根茎部组织的永久切片，即可观察。
2.根据权利要求1所述的茄子根茎部组织的石蜡切片的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，去杂时，采用流水冲洗去杂。
3.根据权利要求1所述的茄子根茎部组织的石蜡切片的制备方法，其特征在于，步骤（4）、步骤（5）中，石蜡液为石蜡经过多次加热沸腾并纱布过滤所得，石蜡的熔点为56～58℃。
4.根据权利要求1所述的茄子根茎部组织的石蜡切片的制备方法，其特征在于，步骤（5）中，预热的具体方法是在烘片机上，对包埋盒及装有试验材料的广口瓶进行预热；将试验材料转入包埋盒中是采用经酒精灯预热过的镊子来转入。
5.根据权利要求1所述的茄子根茎部组织的石蜡切片的制备方法，其特征在于，步骤（7）中所述的粘片剂的配制方法为1g明胶溶解于100mL蒸馏水中，加入2g苯酚和15mL甘油，充分混匀后于121℃下高温灭菌，即得。
6.根据权利要求1所述的茄子根茎部组织的石蜡切片的制备方法，其特征在于，步骤（8）中，再换成新的二甲苯浸泡时间为20min。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710345264.4A CN107167350B (zh) | 2017-05-16 | 2017-05-16 | 一种茄子根茎部组织的石蜡切片的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710345264.4A CN107167350B (zh) | 2017-05-16 | 2017-05-16 | 一种茄子根茎部组织的石蜡切片的制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN107167350A CN107167350A (zh) | 2017-09-15 |
| CN107167350B true CN107167350B (zh) | 2020-04-21 |
Family
ID=59816251
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201710345264.4A Expired - Fee Related CN107167350B (zh) | 2017-05-16 | 2017-05-16 | 一种茄子根茎部组织的石蜡切片的制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN107167350B (zh) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107843470B (zh) * | 2017-10-13 | 2021-01-15 | 济南金域医学检验中心有限公司 | 一种皮肤组织切片的制作方法 |
| CN108871842A (zh) * | 2018-04-19 | 2018-11-23 | 北京林业大学 | 一种芍药根茎组织的徒手切片方法及其应用 |
| CN109115573B (zh) * | 2018-08-27 | 2021-06-25 | 河南牧业经济学院 | 文冠果扦插枝条及其愈伤组织的石蜡制片方法 |
| CN109459262A (zh) * | 2018-12-21 | 2019-03-12 | 东北农业大学 | 一种成熟玉米根系临时切片的制备方法 |
| CN109632425A (zh) * | 2019-01-11 | 2019-04-16 | 北京林业大学 | 一种芍药地下根茎的石蜡切片制作方法 |
| CN114383906A (zh) * | 2021-12-22 | 2022-04-22 | 中国农业科学院棉花研究所 | 一种植物根系石蜡切片的制备方法 |
| CN114235536B (zh) * | 2021-12-24 | 2024-03-19 | 贵州大学 | 一种观察两年生马尾松茎干木质素沉积的切片制备方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103528871A (zh) * | 2013-09-20 | 2014-01-22 | 湖南农业大学 | 芒属植物快速切片染色的方法 |
| CN106404475A (zh) * | 2016-06-29 | 2017-02-15 | 西南大学 | 一种鸭茅根部组织石蜡切片的制备方法 |
| CN106525530A (zh) * | 2016-11-04 | 2017-03-22 | 河南科技大学 | 一种树木茎干组织的石蜡切片方法 |
| CN106546473B (zh) * | 2016-11-26 | 2019-02-15 | 中国热带农业科学院南亚热带作物研究所 | 一种用于甘蔗不同节位侧芽包埋制片方法 |
-
2017
- 2017-05-16 CN CN201710345264.4A patent/CN107167350B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103528871A (zh) * | 2013-09-20 | 2014-01-22 | 湖南农业大学 | 芒属植物快速切片染色的方法 |
| CN106404475A (zh) * | 2016-06-29 | 2017-02-15 | 西南大学 | 一种鸭茅根部组织石蜡切片的制备方法 |
| CN106525530A (zh) * | 2016-11-04 | 2017-03-22 | 河南科技大学 | 一种树木茎干组织的石蜡切片方法 |
| CN106546473B (zh) * | 2016-11-26 | 2019-02-15 | 中国热带农业科学院南亚热带作物研究所 | 一种用于甘蔗不同节位侧芽包埋制片方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 四倍体刺槐茎段组织石蜡切片的制作方法;权金娥等;《西北林学院学报》;20141231;第29卷(第3期);第140-144页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN107167350A (zh) | 2017-09-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN107167350B (zh) | 一种茄子根茎部组织的石蜡切片的制备方法 | |
| CN105973673B (zh) | 一种桉树组织的石蜡切片方法 | |
| Smith | The acetocarmine smear technic | |
| CN107490511A (zh) | 一种苏木素染色液和he染色方法 | |
| CN109855936B (zh) | 一种组织完整、利于显微观察的植物组织切片的制备方法 | |
| CN103630421A (zh) | 一种芍药成熟种胚的石蜡切片制作方法 | |
| CN102967493A (zh) | 植物组织快速石蜡制片的方法 | |
| CN106501053B (zh) | 岩黄连叶片的石蜡切片方法 | |
| CN105738172A (zh) | 一种蚧虫玻片标本的绿色制作方法 | |
| CN106383047A (zh) | 一种观察植物叶部真菌病害组织病理学过程的染色方法 | |
| CN107576552B (zh) | 一种观察月季黑斑病侵染过程的石蜡切片染色方法 | |
| CN106546473B (zh) | 一种用于甘蔗不同节位侧芽包埋制片方法 | |
| CN108375599A (zh) | 一种微小型昆虫复眼的透射电镜样品制片方法 | |
| CN109738249A (zh) | 一种观察花芽分化过程的石蜡切片的制作方法 | |
| CN107702955B (zh) | 一种石蜡切片的制备方法 | |
| CN110132673B (zh) | 一种制备金针菇子实体组织切片的方法 | |
| CN103940647A (zh) | 一种中华鳖胚胎期性腺的连续石蜡切片制作方法及其在性别判定中的应用 | |
| CN106501043B (zh) | 一种有效观察油棕雌蕊解剖结构的石蜡切片方法 | |
| CN105241686B (zh) | 小鲵科动物视网膜显微组织切片的制备方法 | |
| CN108333013A (zh) | 一种枣花石蜡切片的制备方法 | |
| CN107202720B (zh) | 一种石榴籽粒的石蜡切片方法 | |
| Debenham | A modified technique for the microscopic examination of the xylem of whole plants or plant organs | |
| CN108007755A (zh) | 一种有效观察番茄根结巨型细胞石蜡切片方法 | |
| CN105806680A (zh) | 一种植物组织快速石蜡制片的方法 | |
| CN109374378A (zh) | 一种甜菜叶石蜡包埋制片的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20200421 Termination date: 20210516 |