RU2613175C1 - Способ изготовления гистологических препаратов - Google Patents
Способ изготовления гистологических препаратов Download PDFInfo
- Publication number
- RU2613175C1 RU2613175C1 RU2015157491A RU2015157491A RU2613175C1 RU 2613175 C1 RU2613175 C1 RU 2613175C1 RU 2015157491 A RU2015157491 A RU 2015157491A RU 2015157491 A RU2015157491 A RU 2015157491A RU 2613175 C1 RU2613175 C1 RU 2613175C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- histological
- plates
- lamination
- biological material
- fixation
- Prior art date
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
Landscapes
- Sampling And Sample Adjustment (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области медицины и биологии, а именно к гистологии, и к гистологической технике и может быть использовано в практике патоморфологических лабораторий лечебных учреждений и морфологических кафедр высших учебных заведений медицинского и биологического профиля.
Изобретение решает задачу создания ускоренного способа изготовления гистологических препаратов, которые можно было бы длительное время хранить в условиях лабораторий и многократно использовать для изучения. Это достигается тем, что для обезвоживания и фиксации биологического материала используют ацетон в присутствии обезвоженного хлорида кальция, взятого в количестве 10-12% от массы биологического материала. В качестве пластин для закрепления гистологических срезов используют пластины из ламинационных пленок, а защитную среду создают путем закатки гистологических срезов между пластинами из ламинационных пленок с полимерным клеем, предназначенными для холодного ламинирования. 3 пр.
Description
Изобретение относится к области медицины и биологии, а именно к гистологии, и к гистологической технике и может быть использовано в практике патоморфологических лабораторий лечебных учреждений и морфологических кафедр высших учебных заведений медицинского и биологического профиля.
Известен способ изготовления гистологических препаратов (Роскин Г.И. Микроскопическая техника. Изд-во «Наука», М., 1952, 447 с., Семченко В.В., Барашкова С.А., Ноздрин В.П., Артемьев В.Н. Гистологическая техника - 3-е изд. - Омск - Орел, 2006. - 290 с.), который включает фиксацию биологического материала в растворе 10-12% кислого или нейтрального забуференного формалина, промывку в проточной воде в течение 24 часов с последующим его проведением через спирты восходящей концентрации (50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 96% и абсолютном спирте), пропитку в растворах ароматических углеводов, затем в смеси хлороформа и парафина при 37°С. Затем биологический материал парафинируют и на парафиновом микротоме изготавливают срезы толщиной 5-7 мкм, которые монтируют на предметные стекла. Затем срезы на стеклах депарафинируют в 2-х порциях ксилола, проводят через спирты нисходящей концентрации (100%, 96%, 70% этанол), промывают дистиллированной водой, окрашивают, просветляют в двух порциях ксилола и заключают в полистирол или биомаунт. Основным недостатком известного способа является длительность изготовления гистологического препарата, который может составлять от нескольких дней до нескольких недель, а также использование большого количества химических растворителей.
Известен способ изготовления гистологических препаратов с использованием неионизирующего излучения бытовой микроволновой печи (патент RU №2104513, МПК G01N 1/28, G01N 33/483, приоритет от 06.03.1995 г., опубликовано 10.02.1998, который позволяет сократить время изготовления гистологических препаратов до 1 часа 20 минут. Существенным недостатком известного способа является специфичность липидно-белковых комплексов к термическим изменениям, что, в свою очередь, ведет к экзотермическим реакциям на макромолекулярном уровне, денатурации и деструкции белков, и, как следствие, деформации самой ткани на клеточном уровне.
Известен способ изготовления гистологических препаратов, при котором обезвоживание производят путем четырехкратной выдержки гистологических образцов в ацетоне [Р. Лилли. Патогистологическая техника и практическая гистохимия. - М.: Мир, 1969, с. 69]. Обезвоживание в ацетоне происходит быстро: при использовании на каждой стадии свежего ацетона достаточного выдержать образец в каждой порции растворителя по 20 мин. Однако использование свежего растворителя на каждой стадии дорого. Поэтому свежий ацетон используют только для четвертой стадии, сдвигая сосуды на одну позицию; четырежды использованный ацетон очищают перегонкой. При обезвоживании по такой схеме образцы выдерживают в каждой порции по 40 мин. Гистологические препараты, изготовляемые по данной методике, нуждаются в постоянном контроле и сопровождаются перемещением среза из жидкой среды в воздушную, что, как известно, приводит к нежелательной деформации тканей.
Известен способ изготовления гистологических препаратов, в соответствии с которым для заключения и длительного хранения окрашенных гистологических препаратов применяют 19-21%-ный раствор пенопласта в ксилоле, стабилизированный добавлением диметилфталата из расчета 1:100. После нанесения капли раствора на подготовленный срез и высыхания он оказывается заключенным в прозрачный и устойчивый при хранении материал в виде пленки (патент RU №2117273, приоритет от 28.09.1994 г., МПК G01N 1/28, опубликовано 10.08.1998). Одним из недостатков известного способа является то, что полученная пленка не является прочной по отношению к повреждающим агентам. Использование такой пленки приемлемо для хранения базы экспресс-диагностики, но не для частого использования в качестве учебного материала.
Известен способ изготовления гистологических препаратов, в соответствии с которым для заключения и длительного хранения окрашенных гистологических препаратов на предметное стекло с окрашенным срезом наносят каплю состава (патент RU №2499988, приоритет от 17.07.2012, МПК G01N 1/28, опубликовано 27.11.2013 г.) полученного растворением пенополиуретана (ППУ) и дибутилфталата в ксилоле так, чтобы она полностью покрыла срез. Затем накрывают покровным стеклом. После полного высыхания препарата, которое наступает через 16 минут, препарат готов к микрокопированию. Одним из недостатков известного способа является использование хрупких покровных стекол для монтировки срезов, которые, как правило, разрушаются вследствие длительного использования и неосторожного обращения при световой микроскопии, что особенно неудобно в работе морфологических кафедр высших учебных заведений медицинского и биологического профиля.
Задачей изобретения является создание ускоренного способа изготовления гистологических препаратов, которые можно было бы длительное время хранить в условиях лабораторий и многократно использовать для изучения.
Техническим результатом является проведение обезвоживания и фиксации биологического материала в среде органического растворителя в один этап и последующее заключение гистологического среза в пластины из ламинационных пленок.
Это достигается тем, что для обезвоживания и фиксации биологического материала используют ацетон в присутствии обезвоженного хлорида кальция, взятого в количестве 10-12% от массы биологического материала. В качестве пластин для закрепления гистологических срезов используют пластины из ламинационных пленок, а защитную среду создают путем закатки гистологических срезов между пластинами из ламинационных пленок с полимерным клеем, предназначенными для холодного ламинирования.
В соответствии с заявленным изобретением способ изготовления гистологических препаратов включает обезвоживание и фиксацию биологического материала в среде органического растворителя, а именно ацетона в присутствии обезвоженного хлорида кальция, взятого в количестве 10-12% от массы биологического материала, в течение 1-2 часов при комнатной температуре, последующее парафинирование и приготовление из него срезов, которые закрепляют на пластинах, затем размягчают в воде и депарафинируют в ксилоле, окрашивают известными реагентами. Отличительным является то, что гистологический срез сначала натягивают на полимерную пластину из пленки для холодного ламинирования, выполненную в виде пакета, состоящую их двух одинаковых пластин, спаянных по краю короткой стороны, внутренние поверхности которых покрыты полимерным клеем. Подготовленный гистологический срез накрывают второй пластиной и осуществляют проводку через ламинатор. Пленки для ламинирования представляют собой композитный материал, состоящий их трех слоев: полиэстровой основы (PET), полиэтилена (РЕ) и этилена винилацетата (EVA). Пленки для холодного ламинирования покрыты специальным клеем, который активируется при низких температурах от 37°С
Среднее время изготовления гистологических препаратов заявленным способом составляет от 1,5 до 8 часов. Осуществление обезвоживания и фиксации в среде ацетона в присутствии обезвоженного хлорида кальция в один этап позволяет не только ускорить данный процесс, но и значительно сэкономить расход органического растворителя, который может быть после регенерации использован повторно. Количество добавляемого в ацетон хлорида кальция было подобрано эмпирическим путем. В лабораторных условиях изготовлены гистологические препараты из различных типов тканей и органов (щитовидной железы, печени, сердца, легкого, мозга и др.).
Пример 1
Выполнено взятие биологического материала - кусочка миокарда - методом аутопсии массой 50 г. Кусочек биологического материала выдерживают в суспензии ацетона, взятого соответственно объему кассеты и 5 г обезвоженного хлорида кальция в течение одного часа, после чего извлекают из ацетона, производят заливку в парафин и нарезку парафинового блока на микротоме. Полученные срезы расправляют на теплой воде и монтируют на полимерной пластинке из пленки для ламинирования. Затем осуществляется последовательная проводка через следующие жидкости: ксилол (в течение одной минуты), холодная вода (в течение 2 минут), гематоксилин (в течение 4 минут), холодная вода (в течение 4 минут), эозин (в течение 2 минут), теплая вода (в течение 2 минут). Окрашенные срезы накрывают второй полимерной пластинкой и пропускают через ламинатор, после чего гистологический препарат можно исследовать с помощью микроскопа. При изготовлении гистологических препаратов использовались ламинатор PingDa PD230-1 и пленка для ламинирования Lamir 54×86 125 мкм А8.
Пример 2
Выполнено взятие биологического материала - паренхимы печени - методом аутопсии массой 30 г. Далее материал выдерживают в суспензии ацетона и 3,6 г хлорида кальция массой в течение одного часа, после чего производят заливку в парафин и нарезку парафинового блока на микротоме. Аналогично примеру 1 срезы расправляют на теплой воде и монтируют на полимерной пластине из пленки для ламинирования. После осуществляется последовательная проводка через следующие жидкости: ксилол (в течение одной минуты), холодная вода (в течение 2 минут), гематоксилин (в течение 4 минут), холодная вода (в течение 4 минут), эозин (в течение 2 минут), теплая вода (в течение 2 минут). Окрашенные срезы накрывают второй полимерной пластиной из пленки для ламинирования, пропускают через ламинатор, после чего препарат можно исследовать с помощью микроскопа. При изготовлении гистологических препаратов использовались ламинатор PingDa PD230-1 и пленка для ламинирования Lamir 54×86 125 мкм А8.
Пример 3
Выполнено взятие кусочка биологического материала - кости массой 35 г - и помещение его в ацетон с 4,2 г безводного хлорида кальция. Далее материал выдерживают в суспензии в течение одного часа, по истечении которого производят заливку в парафин и нарезку парафинового блока на микротоме. Полученные срезы расправляют на теплой воде и монтируют на полимерной пластинке из пленки для ламинирования. Затем осуществляется последовательная проводка через следующие жидкости: ксилол (в течение одной минуты), холодная вода (в течение 2 минут), гематоксилин (в течение 4 минут), холодная вода (в течение 4 минут), эозин (в течение 2 минут), теплая вода (в течение 2 минут). Окрашенные срезы накрывают второй полимерной пластинкой для ламинирования и пропускают через ламинатор, после чего исследуют с помощью микроскопа. При изготовлении гистологических препаратов использовались ламинатор PingDa PD230-1 и пленка для ламинирования Lamir 54×86 125 мкм А8.
Использование заявленного способа изготовления гистологических препаратов позволяет получить тонкие гибкие небьющиеся гистологические препараты высокого качества. Между полимерными листками можно вкладывать маркировочную табличку, что создает дополнительные удобства для хранения изготовленных препаратов и использования их в учебном процессе морфологических кафедр высших учебных заведений медицинского и биологического профиля. Заявленный способ существенно сокращает время изготовления гистологических препаратов и не требует сложного оборудования, поэтому может успешно применяться при экспресс-диагностике в практике патоморфологических лабораторий лечебных учреждений.
Claims (1)
- Способ изготовления гистологических препаратов, включающий обезвоживание и фиксацию биологического материала в среде органического растворителя, парафинирование и приготовление из него срезов, которые закрепляют на оптически прозрачных пластинах, затем размягчают в воде и депарафинируют в ксилоле, окрашивают известными реагентами и заключают в защитную среду, отличающийся тем, что обезвоживание и фиксацию биологического материала производят в среде ацетона в присутствии обезвоженного хлорида кальция, взятого в количестве 10-12% от массы биологического материала, в качестве пластин для закрепления гистологических срезов используют пластины из ламинационных пленок, а защитную среду создают путем закатки гистологических срезов между пластинами из ламинационных пленок с полимерным клеем, предназначенными для холодного ламинирования.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2015157491A RU2613175C1 (ru) | 2015-12-31 | 2015-12-31 | Способ изготовления гистологических препаратов |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2015157491A RU2613175C1 (ru) | 2015-12-31 | 2015-12-31 | Способ изготовления гистологических препаратов |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2613175C1 true RU2613175C1 (ru) | 2017-03-15 |
Family
ID=58458113
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2015157491A RU2613175C1 (ru) | 2015-12-31 | 2015-12-31 | Способ изготовления гистологических препаратов |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2613175C1 (ru) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2705811C1 (ru) * | 2018-12-28 | 2019-11-12 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Институт экспериментальной медицины" (ФГБНУ "ИЭМ") | Способ выявления эндотелиальных клеток на гистологических препаратах |
RU2790929C1 (ru) * | 2022-05-18 | 2023-02-28 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр онкологии имени Н.Н. Петрова" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ подготовки секционного материала для электронномикроскопического исследования нервной системы |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2104513C1 (ru) * | 1995-03-06 | 1998-02-10 | Ростовский научно-исследовательский онкологический институт Минздравмедпрома России | Способ изготовления гистологических препаратов |
RU2420299C1 (ru) * | 2010-03-04 | 2011-06-10 | Федеральное государственное учреждение "Межотраслевой научно-технический комплекс "Микрохирургия глаза" имени академика С.Н. Федорова Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи" | Способ приготовления гистологических препаратов |
UA83269U (ru) * | 2013-04-15 | 2013-08-27 | Житомирский Национальный Агроэкологический Университет | Способ изготовления гистологических срезов для выявления нуклеиновых кислот |
RU2530612C1 (ru) * | 2013-09-10 | 2014-10-10 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Кубанский государственный аграрный университет" | Способ подготовки нематод для морфологического и гистологического исследования |
-
2015
- 2015-12-31 RU RU2015157491A patent/RU2613175C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2104513C1 (ru) * | 1995-03-06 | 1998-02-10 | Ростовский научно-исследовательский онкологический институт Минздравмедпрома России | Способ изготовления гистологических препаратов |
RU2420299C1 (ru) * | 2010-03-04 | 2011-06-10 | Федеральное государственное учреждение "Межотраслевой научно-технический комплекс "Микрохирургия глаза" имени академика С.Н. Федорова Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи" | Способ приготовления гистологических препаратов |
UA83269U (ru) * | 2013-04-15 | 2013-08-27 | Житомирский Национальный Агроэкологический Университет | Способ изготовления гистологических срезов для выявления нуклеиновых кислот |
RU2530612C1 (ru) * | 2013-09-10 | 2014-10-10 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Кубанский государственный аграрный университет" | Способ подготовки нематод для морфологического и гистологического исследования |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2705811C1 (ru) * | 2018-12-28 | 2019-11-12 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Институт экспериментальной медицины" (ФГБНУ "ИЭМ") | Способ выявления эндотелиальных клеток на гистологических препаратах |
RU2797125C1 (ru) * | 2022-04-06 | 2023-05-31 | Сергей Владимирович Сирак | Способ подготовки образцов костной ткани с имплантированным металлом для гистологического исследования |
RU2790929C1 (ru) * | 2022-05-18 | 2023-02-28 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр онкологии имени Н.Н. Петрова" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ подготовки секционного материала для электронномикроскопического исследования нервной системы |
RU2817937C1 (ru) * | 2023-10-25 | 2024-04-23 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Самарский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ выявления паренхимы сонного гломуса для световой микроскопии с помощью ультрафиолетового излучения |
RU2820907C1 (ru) * | 2023-10-25 | 2024-06-11 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Самарский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ выявления паренхимы сонного гломуса посредством обработки его дихроматом калия для проведения электронной микроскопии |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Culling | Handbook of histopathological and histochemical techniques: including museum techniques | |
Beament | The cuticular lipoids of insects | |
Olivera et al. | Human ex vivo wound healing model | |
Yeung et al. | The glycol methacrylate embedding resins—technovit 7100 and 8100 | |
CN102859344A (zh) | 用于生物材料的澄清试剂和其用途 | |
CN106572650A (zh) | 在环境温度下稳定凝血细胞 | |
Bullock et al. | The cell kinetics of teleost fish epidermis: epidermal mitotic activity in relation to wound healing at varying temperatures in plaice (Pleuronectes platessa) | |
RU2613175C1 (ru) | Способ изготовления гистологических препаратов | |
Yeung et al. | Glycol methacrylate: The art of embedding and serial sectioning | |
Tremblay et al. | Ultrastructural analyses of microglial interactions with synapses | |
Bemenderfer et al. | Processing and sectioning undecalcified murine bone specimens | |
Small et al. | The haemoglobin in the condensed chromatin of mature amphibian erythrocytes: a further study | |
Kovács | The application of traditional transmission electron microscopy for autophagy research in Caenorhabditis elegans | |
Jerome et al. | Specimen preparation | |
RU2420299C1 (ru) | Способ приготовления гистологических препаратов | |
Everts et al. | Transmission electron microscopy of bone | |
McAuliffe | Routine histology techniques for the developing and adult central nervous system | |
Cerri et al. | Examination of galectin localization using confocal microscopy | |
CN104663647A (zh) | 一种心脏组织固定剂及其制备方法和应用 | |
EP3434102B1 (en) | Method for long-term preservation of anatomical material | |
Ottone | Fundamentals on Plastination | |
JP4214746B2 (ja) | 細胞培養基板及びその製造方法 | |
Wiggins et al. | Using Ex Vivo Liver Organ Cultures to Measure Lymphocyte Trafficking | |
Araújo et al. | Electron Microscopy of Cryptococcus neoformans: Processing Challenges to Avoid Artifacts | |
Yeung et al. | LR white acrylic resin |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20190101 |