CN110973117B - 一种大鼠眼球组织细胞固定液及其制备方法、应用方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种组织细胞固定液及其制备方法、应用方法，以重量份计，包括以下成分：甲醛28～36份、乙二醇1～2份、山梨醇1～4份、异丁醇2～3份、高碳醇7～9份、NaH2PO4·2H2O 2.5～3.6份、Na2HPO4·12H2O 8.2～9.3份、H2O 400～500份。组织细胞固定液制备方法包括以下步骤：将2.5～3.6份NaH2PO4·2H2O、8.2～9.3份Na2HPO4·12H2O与400～500份H2O混合成a液；取所述a液总量的四分之三与28～36份甲醛混合成b液；取所述a液总量的四分之一与1～2份乙二醇、1～4份山梨醇、2～3份异丁醇以及7～9份高碳醇混合成c液；将b液以及c液混合均匀，得到所述组织细胞固定液。本发明组织细胞固定液能够很好的保持组织细胞的固有形态，并且更加环保。
Description
技术领域
本发明涉及了生物技术领域，具体的是一种大鼠眼球组织细胞固定液及其制备方法、应用方法。
背景技术
为了防止组织细胞的死后变化，防止组织细胞的自溶和腐败，保持组织细胞的固有形态。通常需要用到组织细胞固定液。
组织细胞固定液能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长以使组织细胞保持固有形态。
传统的组织细胞固定液一般采用醛类物质。醛类物质的使用对环境及操作人员的健康造成不利影响。
因此，需要对现有的组织细胞固定液进行进一步的改进，以使其在保持较好固定作用的基础上，还能更加环保。
发明内容
为了克服现有技术中的缺陷，本发明实施例提供了一种大鼠眼球组织细胞固定液及其制备方法、应用方法，其能够很好的保持组织细胞的固有形态，并且更加环保。
本发明公开了一种组织细胞固定液，以重量份计，包括以下成分：
甲醛28～36份、
乙二醇1～2份、
山梨醇1～4份、
异丁醇2～3份、
高碳醇7～9份、
NaH2PO4·2H2O 2.5～3.6份、
Na2HPO4·12H2O 8.2～9.3份、
H2O 400～500份。
所述高碳醇的制备方法包括以下步骤：
将司盘80和吐温60复配成HLB值为13～16乳化剂；
将0.5份硬脂酸、0.5份甘油、1.5份聚乙烯醇、4份单硬脂酸乙二醇酯，2份十四醇以及5份石蜡混合均匀得到油相；
将0.2份氢氧化钠和30份去离子水混合均匀得到水相；
将所述乳化剂、所述油相以及所述水相加入三颈瓶中搅拌反应，即得所述高碳醇。
作为优选，所述搅拌反应的温度为80～90℃，反应时间为40～60min。
本发明还提供了一种组织细胞固定液的制备方法，包括以下步骤：
将 2.5～3.6份NaH2PO4·2H2O、8.2～9.3份Na2HPO4·12H2O与 400～500份H2O混合成a液；
取所述a液总量的四分之三与28～36份甲醛混合成b液；
取所述a液总量的四分之一与1～2份乙二醇、1～4份山梨醇、2～3份异丁醇以及7～9份高碳醇混合成c液；
将所述b液、所述c液混合均匀，得到所述组织细胞固定液。
作为优选，将所述b液以及所述c液在40～60℃下混合30～40min。
本发明同时提供了一种组织细胞固定方法，所述组织细胞固定方法为：将组织细胞取材后，向组织细胞中加入组织细胞固定液，混合固定，其混合温度为室温，混合时间为3～24h。
作为优选，向组织细胞中加入组织细胞体积6～10 倍体积的组织细胞固定液。
本发明的有益效果如下：
本发明组织细胞固定液能够防止组织细胞的死后变化，防止自溶和腐败，以保持组织细胞的固有形态。能够使细胞内的蛋白质、脂肪、糖和酶等各种抗原成分转变成不溶性物质。同时使组织中的各种物质沉淀和凝固起来而产生不同的折射率，造成光学上的差异，以便染色后易于鉴别和观察。还兼有硬化作用，使组织硬化，增加组织硬度，以便于制片。并能够防止细胞过度收缩或膨胀而失去其原有形态结构。使用本发明组织细胞固定液固定的组织细胞能对染料产生不同亲和力而着色清晰，便于辨认。
本发明组织细胞固定液添加了醇类物质，同时减少甲醛的使用，不仅能对组织细胞达到较佳的固定效果，还能够降低组织细胞固定液的刺激性、毒性以及腐蚀性，同时降低了对环境的危害以及降低了对作业人员健康的危害，具有很好的应用价值。
为让本发明的上述和其他目的、特征和优点能更明显易懂，下文特举较佳实施例，作详细说明如下。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
以下实施例1～3中，高碳醇的制备方法包括以下步骤：
将司盘80和吐温60复配成HLB值为15的乳化剂；
将0.5份硬脂酸、0.5份甘油、1.5份聚乙烯醇、4份单硬脂酸乙二醇酯，2份十四醇以及5份石蜡混合均匀得到油相；
将0.2份氢氧化钠和30份去离子水混合均匀得到水相；
将上述配置得到的乳化剂、油相以及水相加入三颈瓶中搅拌反应，搅拌反应的温度为85℃，反应时间为50min即得高碳醇。
实施例1
制备组织细胞固定液：
将 3.6份NaH2PO4·2H2O、 8.2份Na2HPO4·12H2O与 500份H2O混合成a液；
取a液总量的四分之三与28份甲醛混合成b液；
取a液总量的四分之一与2份乙二醇、1份山梨醇、3份异丁醇以及7份高碳醇混合成c液；
将b液以及c液在60℃下混合30min，得到所述组织细胞固定液。
固定组织细胞：将组织细胞取材后，向组织细胞中加入组织细胞体积10 倍体积的组织细胞固定液，混合固定，其混合温度为室温，混合时间为3h。
实施例2
制备组织细胞固定液：
将 2.5份NaH2PO4·2H2O、 9.3份Na2HPO4·12H2O与 400份H2O混合成a液；
取a液总量的四分之三与36份甲醛混合成b液；
取a液总量的四分之一与1份乙二醇、4份山梨醇、2份异丁醇以及9份高碳醇混合成c液；
将b液以及c液在40℃下混合40min，得到所述组织细胞固定液。
固定组织细胞：将组织细胞取材后，向组织细胞中加入组织细胞体积6倍体积的组织细胞固定液，混合固定，其混合温度为室温，混合时间为24h。
实施例3
制备组织细胞固定液：
将3.05份NaH2PO4·2H2O、 8.75份Na2HPO4·12H2O与 450份H2O混合成a液；
取a液总量的四分之三与32份甲醛混合成b液；
取a液总量的四分之一与1.5份乙二醇、2.5份山梨醇、2.5份异丁醇以及8份高碳醇混合成c液；
将b液以及c液在45℃下混合35min，得到所述组织细胞固定液。
固定组织细胞：将组织细胞取材后，向组织细胞中加入组织细胞体积8 倍体积的组织细胞固定液，混合固定，其混合温度为室温，固定时间为13.5h。
对比例1
本对比例与实施例3的区别在于，将组织细胞固定液c液中的所有醇类物质均换成甲醛。具体如下：
制备组织细胞固定液：
将3.05份NaH2PO4·2H2O、8.75份Na2HPO4·12H2O与 450份H2O混合成a液；
取a液总量的四分之三与32份甲醛混合成b液；
取a液总量的四分之一与14.5份甲醛混合成c液；
将b液以及c液在45℃下混合35min，得到所述组织细胞固定液。
固定组织细胞：将组织细胞取材后，向组织细胞中加入组织细胞体积8 倍体积的组织细胞固定液，混合固定，其混合温度为室温，固定时间为13.5h。
结果测试：
取D大鼠双侧眼球为测试样品，采用实施例1～3以及对比例1中制备得到的组织细胞固定液，分别对样品进行处理，再观察组织结构及染色效果，结果如下：
表1
由表1可知，实施例3为最佳的实施例，其切片厚度仅5μm就能切出完整的切片，同时对比例1中完全采用甲醛固定，其切片厚度需要6μm能切出完整的切片。实施例3中固定后的组织细胞具有很好的染色效果，并且固定后组织结构清晰、组织完整。
实施例3中添加醇类物质，同时减少甲醛的使用，其固定效果优于对比例1中完全使用甲醛的固定效果。从而，采用本发明中添加醇类物质的组织细胞固定液，不仅能够达到较好的固定效果，还能够降低组织细胞固定液的刺激性、毒性以及腐蚀性，同时降低对环境的危害以及降低对作业人员健康的危害。
本发明中应用了具体实施例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想；同时，对于本领域的一般技术人员，依据本发明的思想，在具体实施方式及应用范围上均会有改变之处，综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。
Claims (5)
1.一种大鼠眼球组织细胞固定液，其特征在于，以重量份计，包括以下成分：
甲醛28～36份、
乙二醇1～2份、
山梨醇1～4份、
异丁醇2～3份、
高碳醇7～9份、
NaH2PO4·2H2O 2.5～3.6份、
Na2HPO4·12H2O 8.2～9.3份、
H2O 400～500份；
所述高碳醇的制备方法包括以下步骤：
将司盘80和吐温60复配成HLB值为13～16乳化剂；
将0.5份硬脂酸、0.5份甘油、1.5份聚乙烯醇、4份单硬脂酸乙二醇酯，2份十四醇以及5份石蜡混合均匀得到油相；
将0.2份氢氧化钠和30份去离子水混合均匀得到水相；
将所述乳化剂、所述油相以及所述水相加入三颈瓶中搅拌反应，即得所述高碳醇；
所述搅拌反应的温度为80～90℃，反应时间为40～60min。
2.一种如权利要求1所述的大鼠眼球组织细胞固定液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
将 2.5～3.6份NaH2PO4·2H2O、8.2～9.3份Na2HPO4·12H2O与 400～500份H2O混合成a液；
取所述a液总量的四分之三与28～36份甲醛混合成b液；
取所述a液总量的四分之一与1～2份乙二醇、1～4份山梨醇、2～3份异丁醇以及7～9份高碳醇混合成c液；
将所述b液、所述c液混合均匀，得到所述组织细胞固定液。
3.根据权利要求2所述的大鼠眼球组织细胞固定液的制备方法，其特征在于，将所述b液以及所述c液在40～60℃下混合30～40min。
4.一种大鼠眼球组织细胞固定方法，其采用如权利要求1中所述的大鼠眼球组织细胞固定液，其特征在于，所述大鼠眼球组织细胞固定方法为：将组织细胞取材后，向组织细胞中加入组织细胞固定液，混合固定，其混合温度为室温，混合时间为3～24h。
5.根据权利要求4所述的大鼠眼球组织细胞固定方法，其特征在于，向大鼠眼球组织细胞中加入大鼠眼球组织细胞体积6～10 倍体积的组织细胞固定液。
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| 三种小鼠眼球组织石蜡切片固定液固定效果的比较;孙良等;《中国组织工程研究》;20190909;5492-5496 * |
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