CN1293091C - 含铝离子的用于蛋白质染色的处理液和使用它的染色方法 - Google Patents
含铝离子的用于蛋白质染色的处理液和使用它的染色方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1293091C CN1293091C CNB038067293A CN03806729A CN1293091C CN 1293091 C CN1293091 C CN 1293091C CN B038067293 A CNB038067293 A CN B038067293A CN 03806729 A CN03806729 A CN 03806729A CN 1293091 C CN1293091 C CN 1293091C
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- staining
- solution
- protein
- gel
- aluminum ions
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/13—Labelling of peptides
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6803—General methods of protein analysis not limited to specific proteins or families of proteins
- G01N33/6827—Total protein determination, e.g. albumin in urine
- G01N33/683—Total protein determination, e.g. albumin in urine involving metal ions
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6803—General methods of protein analysis not limited to specific proteins or families of proteins
- G01N33/6827—Total protein determination, e.g. albumin in urine
- G01N33/6839—Total protein determination, e.g. albumin in urine involving dyes, e.g. Coomassie blue, bromcresol green
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Hematology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Computational Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
本发明涉及包括铝离子的、用于蛋白质染色的处理液和使用该处理液的染色方法。更具体地说涉及包括铝离子的、用于蛋白质染色的处理液和使用该处理液的染色方法,所述处理液在通过考马斯亮蓝CBB染料对蛋白质染色时使用。所公开的包含铝离子的、用于蛋白质CBB染色的处理液可以降低检测限,从而提高灵敏性,缩短染色时间,并可省略脱色步骤。
Description
技术领域
本发明涉及包含铝离子的、用于蛋白质染色的染色液和使用该处理液的染色方法。
背景技术
蛋白质组学中对于实验结果的分析重要的蛋白质染色是使二维空间的蛋白质变得可见的步骤。此后,说明书中所述的“着色(dying)”指“染色(staining)”。
双向凝胶电泳(此后称作“2-D凝胶电泳”)是在二维空间中利用作为蛋白质特征的分子量和电荷的差异将细胞中的蛋白质展开的方法。各种条件下蛋白质表达差异的对比分析就是在2-D凝胶电泳的基础上进行的。
传统上,基于蛋白质组学中2-D凝胶电泳的蛋白质染色通过诸如银染、基于荧光的染色和CBB染色如G250或R250的染色技术进行。
通过银染料的银染虽然表现出优异的灵敏性,但它具有一个缺陷,即灵敏性依赖于蛋白质的类型。
和其他染料相比,无论如何CBB染色都具有经济优势,因为它们不需要昂贵的器具。另外,CBB染色具有容易的实验过程,相对不依赖于蛋白质的类型。结果,CBB染色已经通过2-D凝胶电泳有效地用于分析各种条件下的蛋白质。
虽然CBB染色通常用于蛋白质组学,但它具有约30ng/条带或更高的低检测限。使用包含铵离子的染色液通过促进CBB染色过程中染料和蛋白质的疏水反应来提高染色灵敏性。需要约1至2天对蛋白质进行染色和脱色,该方法具有相对长的加工时间。
发明内容
提供了包含铝离子的、用于蛋白质染色的染色液和使用其进行蛋白质染色的方法。
下文将详细描述本发明。
在通过CBB染色对蛋白质进行染色时,提供了包含铝离子的染色液。
具有3+阳离子的铝离子(Al3+)增加染色速度,强化染料CBB与蛋白质的相互作用。
铝离子优选由选自硫酸铝、氯化铝和醋酸铝的铝盐提供,最优选由硫酸铝提供。
优选的是,铝离子的存在量在总染色液的1w/v%至40w/v%范围内。如果铝盐的量少于1w/v%,对染色时间和染色效力的影响减小。但是,如果高于40w/v%,则鉴定不到蛋白质,因为背景部分深度染色。
染色液包含含量在总染色液的5v/v%至40v/v%范围内的醇化合物。对于适当蛋白质染色来说,醇化合物是染色液中的必要元素。如果醇化合物的量低于5v/v%,则染色推迟。但是,如果高于40v/v%,染色不能适当地进行。
醇化合物优选选自甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇和异丁醇,较优选乙醇。
然后,提供了使用包含铝盐的上述染色液进行蛋白质染色的方法,包括下列步骤:
(a)用去离子水洗涤凝胶,所述的凝胶通过将一定程度纯化的蛋白质进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(以后称作“SDS-PAGE”)获得;
(b)用第一溶液和第二溶液处理所得的凝胶;
(c)在包含铝离子的第三溶液中处理所得的凝胶;
(d)往所得的包括凝胶的第三溶液中加入包含CBB染料的第四溶液。
在步骤(a)中,对一定程度纯化的蛋白质进行SDS-PAGE之后,从玻璃板取下的凝胶用去离子水洗涤。
在步骤(b)中,步骤(a)所得的凝胶用包含30v/v%乙醇和2v/v%磷酸的第一水溶液处理三次,然后用包含2v/v%磷酸的第二水溶液处理三次。
在步骤(c)中,步骤(b)所得的凝胶浸在包含1v/v%至40v/v%铝离子、5v/v%至40v/v%醇化合物和2v/v%磷酸的第三水溶液中。
在步骤(d)中,作为CBB染色液的包含2w/v%G250的第四水溶液和0.2g/L叠氮钠加入浸有步骤(c)所得凝胶的第三溶液中。这里,调节第四溶液使之具有0.5至2范围内的终浓度。当凝胶的尺寸为7×10cm时,使用的第一至第四溶液的量为50ml,当尺寸为20×24cm时,使用量为250ml。在第一至第三溶液中的处理时间分别是30分钟。在包含CBB染料的第四溶液中的处理时间为30min至48小时。较长的处理时间是适用的。
图1a至1d是说明从兔、E.coli、牛或蛋中分离的蛋白质进行双向凝胶电泳之后各种蛋白质的染色结果以表现本发明效果的图。
图1a是说明使用根据本发明的、包含15w/v%铝离子的处理液的各种蛋白质CBB染色结果的图,图1b是说明使用根据本发明的、包含5w/v%铝离子的处理液的各种蛋白质CBB染色结果的图。
另一方面,图1c是说明使用包含铵离子的处理液的各种蛋白质CBB染色结果的图,图1d是说明使用酸性银的各种蛋白质的酸性银染结果的图。
图1a至1d所示的各个泳道示出了每个蛋白质的分子量(单位:kDa)。泳道依次表示兔骨骼肌肌浆球蛋白(200kDa)、E.coli磷酸化酶b(116kDa)、兔骨骼肌半乳糖苷酶(97kDa)、牛血清白蛋白(66kDa)、蛋清卵清蛋白(45kDa)和牛碳酸酐酶(31kDa)。图上方的数字表示蛋白质的稀释程度(2倍系列稀释),数字越大,稀释程度越大。
当说明使用包含铝离子的处理液的CBB染色结果的图1a和1b与说明使用包含铵离子的处理液的CBB染色结果的图1c相比较时,图1a和1b中的蛋白质在高稀释倍数的情况下染色良好。这里表明本发明具有更高的灵敏性。
根据本发明的蛋白质的检测限低于0.5ng/条带。使用包含铝离子的处理液时的染色灵敏性比使用包含铵离子的处理液时提高约2至10倍。
当说明使用包含铝离子的染色液的CBB染色结果的图1a和1b与说明银染结果的图1d相比较时,银染表现出依赖于蛋白质的类型,因为第一泳道的肌浆球蛋白几乎未染色;而CBB染色表现出不依赖于蛋白质的类型,因为所有的蛋白质都得到了检测。
图2是说明染色力依赖于处理时间的相对变化的图。当蛋白质用包含铝离子的染色液进行CBB染色时,染色强度优于使用包含铵离子的处理液进行染色时。这里表明染色时间大大缩短。
和使用铵离子时相比,使用铝离子时染色时间缩短了10倍(10%)。90%以上的蛋白质得以染色需要两小时。
图3是说明从兔大脑组织获得的100μg蛋白质的CBB染色结果的图。如图3中不同的点所示,通过使用公开的、包含铝离子的染色液进行CBB染色,所有的蛋白质都得以染色。
当没有蛋白质时,染料和凝胶结合,从而形成背景。但是,在本发明中,即使在不进行脱色步骤的时候,通过调节上述铝离子、醇化合物和CBB染色液的量来测定蛋白质的位置和量也是没有问题的。
附图说明
图1a是说明凝胶电泳之后,使用根据本发明的、包含15w/v%铝离子的染色液的各种蛋白质CBB染色结果的图。
图1b是说明凝胶电泳之后,使用根据本发明的、包含5w/v%铝离子的染色液的各种蛋白质CBB染色结果的图。
图1c是说明凝胶电泳之后,使用包含铵离子的染色液的各种蛋白质CBB染色结果的图。
图1d是说明凝胶电泳之后,使用酸性银的各种蛋白质银染结果的图。
图2是说明染色强度依赖于处理时间的相对变化的图。
图3是说明从兔大脑组织获得的100μg蛋白质的CBB染色结果的图。
优选实施方案
下文将参考优选的实施方案来解释本发明。本发明的实施方案是示例性的,并不局限于所公开的具体形式。
实施例
使用7×10cm的十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶将由兔骨骼肌肌浆球蛋白、E.coli磷酸化酶b、兔骨骼肌半乳糖苷酶、牛血清白蛋白、蛋清卵清蛋白和牛碳酸酐酶组成的纯化蛋白质进行电泳之后,从玻璃板上取下的凝胶用去离子水简单地洗涤。凝胶用包含30v/v%乙醇和2v/v%磷酸水溶液的第一溶液(50ml)三次处理30分钟,并用包含2v/v%磷酸水溶液的第二溶液(50ml)三次处理30分钟。
然后,将凝胶在包含15w/v%硫酸铝、20v/v%乙醇和2v/v%磷酸的第三溶液(50ml)中浸泡30分钟。然后,往其中加入包含2w/v%G250和0.2g/L叠氮钠的第四溶液,使具有总溶液1v/v%的终浓度(CBB G250的终浓度为0.002w/v%)。这里,通过将染色时间调节至120分钟对蛋白质进行所公开的CBB染色。
工业应用
公开的、包含铝离子的、用于蛋白质CBB染色的染色液具有较低的检测限,从而可以提高灵敏性,缩短染色时间,且其进行不需要脱色步骤。
Claims (8)
1.一种包括铝离子的、用于蛋白质染色的染色液,其中蛋白质由考马斯亮蓝染料染色。
2.权利要求1的染色液,其中铝离子由选自硫酸铝、氯化铝和醋酸铝的铝盐提供。
3.权利要求1的染色液,其中铝离子的存在量在总染色液的1w/v%至40w/v%范围内。
4.权利要求1的染色液,其中染色液包括含量在总染色液的5v/v%至40v/v%范围内的醇化合物。
5.蛋白质染色的方法,包括以下步骤:
(a)用去离子水洗涤凝胶,所述的凝胶通过将一定程度纯化的蛋白质进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳获得;
(b)用第一溶液和第二溶液处理所得的凝胶;
(c)在包含铝离子的第三溶液中处理所得的凝胶;
(d)往所得的包括凝胶的第三溶液中加入包含考马斯亮蓝染料的第四溶液。
6.权利要求5的方法,其中铝离子由选自硫酸铝、氯化铝和醋酸铝的铝盐提供。
7.权利要求5的方法,其中铝离子的存在量在第三溶液的1w/v%至40w/v%范围内。
8.权利要求5的方法,其中第三溶液包括含量在第三溶液的5v/v%至40v/v%范围内的醇化合物。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR10-2002-0015847A KR100445939B1 (ko) | 2002-03-23 | 2002-03-23 | 알루미늄 이온을 포함하는 단백질 염색용 처리용액 및 이를 이용한 단백질 염색방법 |
KR10-2002-0015847 | 2002-03-23 | ||
KR1020020015847 | 2002-03-23 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN1642972A CN1642972A (zh) | 2005-07-20 |
CN1293091C true CN1293091C (zh) | 2007-01-03 |
Family
ID=28450056
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CNB038067293A Expired - Fee Related CN1293091C (zh) | 2002-03-23 | 2003-03-24 | 含铝离子的用于蛋白质染色的处理液和使用它的染色方法 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20050164399A1 (zh) |
EP (1) | EP1487861A4 (zh) |
JP (1) | JP2006503262A (zh) |
KR (1) | KR100445939B1 (zh) |
CN (1) | CN1293091C (zh) |
AU (1) | AU2003210061A1 (zh) |
WO (1) | WO2003080793A2 (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104004382A (zh) * | 2014-05-20 | 2014-08-27 | 北京五康新兴科技有限公司 | 一种考马斯亮蓝染色液和染色方法 |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN100422721C (zh) * | 2006-05-26 | 2008-10-01 | 南京大学 | 一种利用糖基萘酚的铝离子检测方法 |
KR100915584B1 (ko) * | 2007-09-27 | 2009-09-03 | 주식회사 베네비오 | 단백질 염색용 조성물 |
CN105319188B (zh) * | 2014-07-15 | 2018-04-20 | 温州安得森生物科技有限公司 | 槲皮素及其衍生物在磷酸化蛋白质荧光检测中的应用 |
CN108168984B (zh) * | 2017-12-21 | 2021-02-19 | 上海中科新生命生物科技有限公司 | 一种蛋白质page凝胶电泳快速染色试剂盒及染色方法 |
Family Cites Families (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB1147671A (en) * | 1966-05-19 | 1969-04-02 | Fisons Pharmaceuticals Ltd | Antiperspirant compositions |
CA1110554A (en) * | 1977-10-25 | 1981-10-13 | John A. Clements | Phase separator for continuous-flow analytical systems |
DE2826757A1 (de) * | 1978-06-19 | 1979-12-20 | Henkel Kgaa | Verwendung einer kombination von adstringierenden sauren aluminiumsalzen mit estern der citronensaeure, acetylcitronensaeure, ein- und zweibasischer aliphatischer hydroxycarbonsaeuren und antioxidantien als deodorantien |
US4239495A (en) * | 1979-02-12 | 1980-12-16 | Sherwood Medical Industries Inc. | Determination of protein |
DE3112442A1 (de) * | 1981-03-28 | 1982-10-07 | Merck Patent Gmbh, 6100 Darmstadt | Thiazinfarbstoffe enthaltende faerbeloesung und verfahren zu ihrer herstellung |
JPS5999260A (ja) * | 1982-11-27 | 1984-06-07 | Saburo Yasuda | 体液中の蛋白質検出用試験片 |
CA1225317A (en) * | 1984-12-04 | 1987-08-11 | Gerald Krystal | Protein assay by silver binding |
JPS62204159A (ja) * | 1986-03-04 | 1987-09-08 | Otsuka Pharmaceut Co Ltd | 蛋白定量用試薬組成物 |
ES2079653T3 (es) * | 1990-04-06 | 1996-01-16 | Yamasa Shoyu Kk | Metodos para determinar anticuerpos antifosfolipidos. |
US5132439A (en) * | 1990-11-19 | 1992-07-21 | Promega Corporation | Protein staining compositions and methods |
US6057160A (en) * | 1997-08-06 | 2000-05-02 | Washington State University Research Foundation | Methods for preparation and use of a coomassie brilliant blue/protein complex |
KR100298471B1 (ko) * | 1998-07-20 | 2001-09-22 | 최중갑 | 복합염료 조성물을 이용한 폴리아크릴아미드 겔상의 단백질의 검출방법 및 복합염료 조성물 |
EP1174498A3 (en) * | 2000-05-24 | 2004-01-28 | Riken | Blood coagulation factor IX-activating protein and antibody thereto |
-
2002
- 2002-03-23 KR KR10-2002-0015847A patent/KR100445939B1/ko not_active IP Right Cessation
-
2003
- 2003-03-24 EP EP03745029A patent/EP1487861A4/en not_active Withdrawn
- 2003-03-24 WO PCT/KR2003/000571 patent/WO2003080793A2/en not_active Application Discontinuation
- 2003-03-24 US US10/506,182 patent/US20050164399A1/en not_active Abandoned
- 2003-03-24 CN CNB038067293A patent/CN1293091C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2003-03-24 JP JP2003578523A patent/JP2006503262A/ja active Pending
- 2003-03-24 AU AU2003210061A patent/AU2003210061A1/en not_active Abandoned
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104004382A (zh) * | 2014-05-20 | 2014-08-27 | 北京五康新兴科技有限公司 | 一种考马斯亮蓝染色液和染色方法 |
CN104004382B (zh) * | 2014-05-20 | 2016-01-20 | 北京五康新兴科技有限公司 | 一种考马斯亮蓝染色液和染色方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
KR20030076858A (ko) | 2003-09-29 |
WO2003080793A2 (en) | 2003-10-02 |
AU2003210061A1 (en) | 2003-10-08 |
CN1642972A (zh) | 2005-07-20 |
EP1487861A2 (en) | 2004-12-22 |
WO2003080793A3 (en) | 2003-11-27 |
KR100445939B1 (ko) | 2004-08-25 |
US20050164399A1 (en) | 2005-07-28 |
JP2006503262A (ja) | 2006-01-26 |
EP1487861A4 (en) | 2005-06-08 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Bjornsson | Simultaneous preparation and quantitation of proteoglycans by precipitation with alcian blue | |
Moller et al. | Combined alcian blue and silver staining of subnanogram quantities of proteoglycans and glycosaminoglycans in sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gels | |
Latt et al. | Optical studies of complexes of quinacrine with DNA and chromatin: implications for the fluorescence of cytological chromosome preparations | |
Horst et al. | Alkaline urea solubilization, two-dimensional electrophoresis and lectin staining of mammalian cell plasma membrane and plant seed proteins | |
Bordbar et al. | Binding and fluorescence study on interaction of human serum albumin (HSA) with cetylpyridinium chloride (CPC) | |
CN1293091C (zh) | 含铝离子的用于蛋白质染色的处理液和使用它的染色方法 | |
Bobb et al. | Gel isoelectric focusing for following the successive carbamylations of amino groups in chymotrypsinogen A | |
CN101548181A (zh) | 利用毛细管电泳法的血红蛋白分析方法及该方法中使用的添加剂 | |
WO2020221182A1 (zh) | 05sar-page及其制备方法和应用 | |
Sugita et al. | Heterogeneity of the minimum functional unit of hemocyanins from the spider (Argiope bruennichii), the scorpion (Heterometrus sp.), and the horseshoe crab (Tachypleus tridentatus) | |
US20050279636A1 (en) | Gel for electrophoresis and method for preparing the same | |
CA2448728C (en) | Electrophoresis methods | |
Geroch et al. | 1. Preparation and Characterisation of Highly Purified 5 S RNA from Escherichia coli | |
Harris et al. | Template properties of embryo chromatin from eggs of the milkweed bug, Oncopeltus fasciatus | |
CN1851444A (zh) | 小麦高、低分子量麦谷蛋白亚基的分离分析方法 | |
CN103278370A (zh) | 一种适合于双向电泳的大小鼠睾丸组织样品全蛋白提取和分离的方法 | |
US8262881B2 (en) | Method for finger-printing heparins | |
CN103694329B (zh) | 电荷‑质量双聚焦二维凝胶电泳分离方法及其试剂盒 | |
Rogakou et al. | Rapid histone extraction for electrophoretic analysis | |
Spitnik-Elson | Fractionation of ribosomal protein from Escherichia coli by ammonium sulfate precipitation | |
KR101944711B1 (ko) | 단백질 흡착 방지 기능을 갖는 소프트 콘택트렌즈 보존액 및 이의 제조방법 | |
Potempa et al. | A third form for the major glycoprotein of the human erythrocyte membrane in sodium lodecyl sulfate: Electrophoresis as band PAS-4 and high ionic strength | |
CN108007997A (zh) | 一种用于双向电泳的香菇菌丝体总蛋白提取和分离方法 | |
CN1268659C (zh) | 用于自动切胶仪的聚丙烯酰胺凝胶的制备及其应用方法 | |
CN108828049B (zh) | 一种小麦高低分子量麦谷蛋白亚基sds-page分离方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
C19 | Lapse of patent right due to non-payment of the annual fee | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |