TWI356063B - Antibodies to m-csf - Google Patents

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TWI356063B
TWI356063B TW093127189A TW93127189A TWI356063B TW I356063 B TWI356063 B TW I356063B TW 093127189 A TW093127189 A TW 093127189A TW 93127189 A TW93127189 A TW 93127189A TW I356063 B TWI356063 B TW I356063B
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Vahe Bedian
Madhav Narasimha Devalaraja
Joseph Edwin Low
James Leslie Mobley
Sirid-Aimee Kellermann
Ian Foltz
Mary Haak-Frendscho
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Warner Lambert Co
Amgen Fremont Inc
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    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Description

1356063 九、發明說明： 、【發明所屬之技術領域】 本發明提供可與人類Μ-CSF行特異性結合並作為M-CSF 拮抗劑之分離的人類抗體或其抗原結合部分與包括該抗體 或部分之組合物。 【先前技術】 巨噬細胞群落刺激因子（Μ-CSF)係稱為群落刺激因子 (CSFs)之蛋白質家族的一員。Μ-CSF為一種分泌性或細胞 表面骑蛋白，此種醣蛋白包括二個以二硫鍵連結之次單 元，且其總分子量由40至90 kD不等（史坦雷（Stanley) E.R. 等人，Mo/· Dev.，46:4-10(1997))。如同其它 CSFs， M-CSF係由巨噬細胞、單核球及人類關節組織細胞（如軟骨 細胞及滑液纖維母細胞）對蛋白質（如介白素-1或腫瘤壞死 因子-α產生反應而產生的。Μ-CSF可促使多潛能造血前驅 幹細胞形成巨噬細胞群（史坦雷E.R.等人，Mo/. ，46:4-10(1997))。 M-CSF典型係與其受體結合以行使生物作用。o/m·? 包含五種細胞外Ig功能部位、一穿透膜功能部位及一具有 二個激酶功能部位之細胞内功能部位。當Μ-CSF與c/ms結 合時，受體會行同-二聚體化並開啟一包含JAK/STAT、PI3K 及ERK途徑之階梯訊息轉導途徑。 秦、 Μ-CSF為單核球/巨噬細胞之功能、活化及存活的重要調 考 節者。某些動物模式已證實Μ-CSF於不同疾病（包含類風濕 性關節炎（RA)及癌症）中的角色。巨喔細胞包括RA中之主要 95567.doc 1356063 作用（key effector)細胞》在RA中滑液巨噬細胞之浸潤程度 顯示出與潛在關節破壞程度有密切關係。於類風濕病關節 中’由單核球/巨噬細胞、纖維母細胞及内皮細胞内皮細胞 所内源性產生之M-CSF可作用於單核球/巨噬細胞系之細胞 以促進其存活並分化為可破壞骨質之破骨細胞並增加 前-炎症細胞功能，如細胞毒性、超氧化物產生、吞嗡作用、 化學驅向性及第二種細胞激素產生。如以M-CSF處理鼠之 無乳鍵球菌（Strepococcus agalactiae)聲波-誘發之實驗性關 卽炎模式可導致病變增加（亞伯德（Abd)，A.H.，等人， Lymphokine Chtokine Res. 10:43-50 (1991)) 0 同樣地，於鼠 科動物模式之膠原蛋白誘發的關節炎（CIA)(其為一種RA模 式）中以皮下注射M-CSF可導致RA疾病的症狀明顯惡化（坎 貝爾（Campbell) I.K.等人，乂 5ζ·ο/· 68:144-150 (2000))。此外，對RA及其它自體免疫疾病有高敏感性的 MRL/lpr鼠之基礎M-CSF血清濃度較高（（Yui)M.A.等人，dm. J Ραί/ζο/. 139^255.26^99^}。維持 CIA 需要内源性 餐 M-CSF，此可由M-CSF中和鼠單株抗體能顯著減少已發生 疾病之嚴重程度來證實（坎貝爾I.K.等人，乂 LewA:.別〇/. 68:144-150 (2000)) 〇 有關癌症方面’以反向寡核苷酸抑制結腸刺激因子可因降 緩巨嗤細胞-媒介之ECM分解而抑制腫瘤初期生長及鼠之 結腸腫瘤異種移殖物（西亞德侯辛（Seyedhossein)，A.等人， Cawcer ，62:5317-5324 (2002))。 M-CSF與結合及其後續對單核球/巨噬細胞之活化 95567.doc 1356063 作用對一些疾病狀態十分重要。除RA與癌症外，其餘 M-CSF·相關疾病狀態實例包含骨質疏鬆症、破壞性關節 炎、動脈粥樣硬化發生、腎絲球體腎炎、川崎病（Kawasaki disease)及HIV-1感染’其中單核球/巨噬細胞與相關細胞 類型皆扮演重要角色》如破骨細胞類似巨噬細胞並在某種 程度上可由M-CSF調節》破骨細胞成熟初期由M-CSF所誘 發之生長及分化訊息對破骨細胞後續於骨質中之活性為必 要的。 局部骨侵蝕及更具擴散性的近-關節骨質疏鬆症二種型 式之破骨細胞所媒介的骨質流失為RA主要未解決的問 題。此種骨質流失後果包含關節畸形、機能性失能、骨折 風險增加及死亡率增高。對破骨細胞生成而言，M-CSF為 獨特必需者’且於動物模式關節炎中實驗性地阻礙此種細 胞激素可成功地停止關節破壞。已知其它型式之破壞性關 節炎（如乾癬性關節炎）中也有類似的破壞性途徑運作，並可 呈現類似的干預作用。 更年期後之骨質流失起因於缺陷性骨骼重塑，其係繼發 於失衡之骨質形成與因雌激素缺乏所導致的豐沛破骨細胞 媒介之骨質再吸收。於小鼠活體内使用阻礙性抗體來中和 M-CSF可顯示完全預防破骨細胞數量增加、骨質重吸收增 加及由印巢切除術誘發所產生之骨質流失。 有多重證據顯示M_CSF於動脈粥樣硬化發生及機械性傷 害動脈壁後的增殖性血管内膜增生所扮演的重要角色。動 脈粥樣硬化病灶中所有主要的細胞類型皆顯示可表現 95567.doc 1356063 M-CSF ’且其可藉暴露於氧化脂蛋白質進一步向上調節 (up-regulate)。以中和c•力^抗體阻斷1^[_(：517訊號可減少以高 脂肪食物餵食之載體蛋白E缺陷性鼠主動脈根部之巨噬細 胞-衍生泡沫細胞的堆積β 於實驗性及人類腎絲球體腎炎中，腎絲球體m_csf之表 現已發現會與局部巨嗟細胞堆帛、活化及增殖#同局部化 且與腎絲球體傷害及蛋白尿程度有關。藉由對抗受體^加 之抗體封鎖M-CSF訊號可顯著地向下調節（d〇wn_regu丨ate) 於實驗性單側輸尿管阻塞所誘發之腎炎症反應期間小白鼠 之局部巨嗟細胞堆積。 川崎病（KD)為一種未知原因之急性、熱性的小兒科血管 k。其最常見及嚴重之併發症包含動脈瘤擴張型式之冠狀 動脈血管分布。血清M-CSF濃度於急性期川崎病呈顯著升 高，而於以靜脈注射免疫球蛋白治療後呈正常化。巨細胞 關卽炎（GC A)為一種炎症性血管病變，主要發生於年長者， 其中T細胞及巨噬細胞浸潤中大型動脈壁所導致之臨床後 果包含失明及繼發於動脈阻塞之中風。巨噬細胞於GCA中 的作用牵連可由血管病灶中源自炎症介體之巨噬細胞濃度 升高而證實。 頃報告M-CSF可使人類單核球衍生之巨噬細胞於活體外 更易受HIV-1感染。於一近期的研究中，m_csf可增加單核 球-衍生之巨嗟細胞受感染的頻率、每個受感染細胞中所表 現之HI V mRNA的數量及每個受感染之培養物中所表現之 前病毒DNA的濃度。 95567.doc 由於M-CSF於不同疾病所扮演的重要角色，故需要可抑 制M-CSF活性之方法。 目前強烈需求治療性抗-M-CSF抗體》 【發明内容】 .本發明亦提供組合物，其包括可於該治療中發生作用之 本發明的抗-M-CSF抗體之重鏈及/或輕鏈、其變異區戍其抗 原結合部分，或可編碼該抗體、抗體鏈或其變異區之核酸 分子，及醫藥可接受載劑。於某些具體實施例中，該組合 物可進一步包括另一組分’如治療劑或診斷劑。本發明亦 提供診斷及治療方法。於某些具體實施例中，該組合物之 使用量係治療或預防特定疾病或病況所需之治療有效量。 本發明亦提供以有效量之本發明抗-M-CSF抗體或其抗 原結合部分、可編碼該抗體之核酸或其重鏈及/或輕鏈、變 異區或其抗原結合部分來治療或預防不同疾病及病況之方 法’如（但不限於）炎症、癌症、動脈粥樣硬化發生、神經失 調及心臟的失調。 本發明提供分離之細胞株，如可產生抗_M_CSF抗體或其 原結合部分之融合瘤。 本發明亦提供可编碼抗-M-CSF抗體之重鏈及/或輕鏈、其 可變區或其抗原結合部分的核酸分子。 本發明提供包括核酸分子之載體及宿主細胞以及可重組 產生由該核酸分子所編碼多狀的方法。 本發明亦提供可表現抗_M-CSF抗體之重鏈及/或輕鏈或 其抗原結合部分的非·人類基因轉殖動物或植物。 95567.doc •10- 1356063 【實施方式】 定義及通用技術 除非在此另有定義者，否則本發明所使用的科學及技術 名詞之意義應如同熟諳此藝者所認知一般。此外，除非係 上下文所需，否則單數名詞可包含複數型且複數名詞可包 含單數型。一般來說，在此所使用之命名，凡與細胞及組 織培養、分子生物學、免疫學、微生物學、遺傳學及蛋白 質與核酸化學及雜交等技術相關者皆為吾人所熟知且常用 $ 於本技藝中者。 除非另有指定，否則本發明之方法及技術一般按照此項 技藝中為吾人所熟知之常見方法進行，如見述於本專利申 請文中所提各種一般及更特定之文獻。請見如山姆布魯克 (Sambrook)等人，C/om>lg .· a [a6〇rcIi〇〇/
Manual > 2d ed. » Cold Spring Harbor Laboratory Press » Cold
Spring Harbor，Ν.Υ·(1989)與奥斯貝爾（Ausubel)等人，
Current Protocols in Molecular Biology . Greene Publishing Φ ASS〇Ciates(1992)及哈勞（Harlow)與連恩（Lane)心心〇办: A Laboratory Manual » Cold Spring Harbor Laboratory
Press ’ Cold Spring Harbor，N.Y.(1990)，其係以引用的方 式併入本文中。酵素反應與純化技術係依廠商說明書進 行’以如本技藝中通用方法或在此所述方法完成。相關的 命名法’及在此所述之分析化學、合成有機化學及醫藥與 醫藥化學的實驗步驟及技術係為吾人所熟知且常用於本技 藝者。化學合成、化學分析、藥物製備、調配及遞送與病 95567.doc 1356063 患治療係採用標準技術。 應瞭解下列名巧（除有指定）具有下列意義. 多狀-5司包含天然或人造蛋白質、蛋白質片段及蛋白 質序列之多肽類似物。多肽可為單體或聚合物。 "分離蛋白質”分離多肽"或"分離抗體"等詞為一種蛋白 質、多肽或抗體，其依其起源或衍生來源可包括一至四種 下列狀況··（1)未含在自,然狀態中會伴隨之天然相關組份， ⑺不含其它源自相同物種之蛋白質，(3)係由源自不同物種 之細胞所表現，或（4)不會於自然界產生。因此，一種由化 學合成或於與自然產生之細胞不同的細胞系統中所合成之 多肽可稱為自其天然相關組份中"分離"出。蛋白質亦可藉 由分離法使用此項技藝中為吾人所熟知之蛋白質純化技術 使其實質上不含天然相伴隨之組份。 分離抗體實例包含一種使用M_CSF進行親和力純化之抗 -M-CSF抗體、一種於生體外由融合瘤或其它細胞株合成之 抗-M-CSF抗體及一種源自基因轉殖鼠之人類抗_m_csf抗鲁 體。 當至少約60至75%之樣本顯示為單一種類多肽時，蛋白 質或多肽為"實質上精純"、”實質上同質的，，或，，實質上純化 "。該多肽或蛋白質可為單體或多聚體。實質上精純多肽或 蛋白質典型地包括約5〇%、60%、70%、80%或90% W/W之 蛋白質樣本’更常為純度約95%且較佳為99%以上。蛋白質 純度或同質性可藉許多於此項技藝中為吾人所熟知的方法 表示’如蛋白質樣本之異丙烯醯胺凝膠電泳，再以此項技 95567.doc •12· 1356063 '. 藝中為吾人所熟知之染色劑將凝膠染色以便顯現個別多狀 帶。為供某些目的，使用HPLC或其它熟諳此藝者所熟知之 純化方法可得較高的分辨度。 在此所用之"多肽片段"一詞意指刪除胺基端及/或羧基端 之多肽’但其剩餘的胺基酸序列與自然產生序列中相對位 置者相同。於某些具體實施例中，片段長度至少為5、6、8 或ίο個胺基酸。於其它具體實施例中，片段長度至少為14、 20、50或至少為70、80、90、100、150或200個胺基酸。 鲁 在此所用之"多肽類似物，，一詞意指包括含有實質上與部 分胺基酸序列相同之片段的多肽且其至少具有一種下列特 性：⑴於適當結合狀況下與M_CSFR特異性結合，（2)抑制 M-CSF能力。 典型地，多肽類似物比自然產生之序列多包括一保留性胺 基酸取代段（或插入段或刪除段）(> 類似物長度典型為至少2〇 或25個胺基酸’較佳為至少50、60、70、80、90、100、150 或200個胺基酸或者更長，且經常可與完整的多狀一樣長。鲁 於某些具體實施例中，抗體或其抗原結合部分之胺基酸 取代基之特徵為：⑴可降低對蛋白質水解之敏感性，⑺可 降低對氧化作用之敏感性’（3)可改變形成蛋白質複合物之 口親和力’或（4)可賦予或修飾此種類似物其它理化或機 此特|±類似物可包含自然產生狀序列以外之各種突變蛋 白序列。如可；自姑.立L , '目…、、產生的序列中產生單一或複數胺基酸 取代基（佳為保留性胺基酸取代基），較佳為於形成分子間 接觸之功能部位以外的多肽部分。 95567.doc •13- 1356063 保留性胺基酸取代基不會實質上改變親代序列之構造特 徵，如取代胺基酸不應改變組成免疫球蛋白結合功能部位 之反平行β-摺頁（於親代序列中所產生）或中斷構成親代序 列特徵之其它二級構造型式。通常，甘胺酸及脯胺酸類似 物不會用於反平行β-摺頁中》本技藝認可之多肽二級與三 級構造實例見述於戶roieiws，anc? A/o/ecw/ar
克雷頓（Creighton)編輯，W· H. Freeman and Company，New York (1984)) ； Introduction to Proteir' 布蘭登（Branden)及 J.圖茲（Tooze)編輯，Garland
Publishing，New York，N.Y.(1991));及桑頓（Thornton)等 人，iWi/Mre 354:105(1991)，各文以引用的方式併入本文中。 非肽類似物常用於醫藥工業作為與模板肽具有類似特性 之藥物。這些非肽化合物類型稱為”擬肽類（peptide mimetics)"或"擬肽物質（peptidomimetics)"佛席爾 (Fauchere) ’ 乂 ji/v. Drwg 15:29 (1986);維貝（Veber)
及福萊丁格（Freidinger)，Γ/MS1 392 頁（1985);及伊文斯 (Evans)等人，乂 Med C/iem· 30:1229(1987)，其係以引用的 方式併入本文中。此種化合物通常係藉由電腦化分子模型 之助而產生。構造類似治療可用之肽的擬肽物質可用於產 生相同療效或預防作用。通常擬肽物質結構上類似於模範 多肽（即具有所需之生化特性或醫藥活性的多肽），如人類抗 體，但具有一或多種肽鍵可視需要藉此技藝中為吾人所熟 之群的鍵來取 、一 CHsCH-(順式 知之方法由選自由下列各物組成 代：--CH2NH--、--CH2S--、--ch2-ch2-- 95567.doc -14- 1356063 及反式）、--COCH2--、--CH(OH)CH2--及-CH2SO--。以相同 類型之D-胺基酸（如以D-離胺酸代替L-離胺酸）有系統的取 代一致性序列中一或多種胺基酸亦可用於產生更穩定的 肽。此外，包括一致性序列或實質上與一致性序列變異物 相同之受限制性肽可藉由本技藝中已知之方法產生（理索 (Rizo)及潔雷舒（Gierasch) ，Ann, Rev. Biochem. 61:387(1992)，以引用的方式併入本文中）；如藉添加内半 胱胺酸殘基可形成能環化肽的分子内二硫橋。 ”抗體"意指完整抗體或可與完整抗體競爭特異性結合之 抗原結合部分。一般請見Fundamental Immunology，第7章 (保羅（Paul)，W.編輯，第 2版./iavewiVaj，N.Y.(1989))(以 引用的方式將其針對所有目的之全部内容併入本文中）。抗 原結合部分可藉DNA重組技術或藉酵素性或化學性法分裂 完整的抗體來製備。於某些具體實施例中，抗原結合部分 包含 Fab、Fab·、F(ab')2、Fd、Fv、dAb及互補決定區（CDR) 片段、單鏈抗體（SCFV)、欲合型抗體、二聚體與至少包含足 以賦予可與多肽特異性抗原結合之部分抗體的多肽。 由N-端至C-端，成熟的輕鏈及重鏈可變區皆包括fri、 CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3 及 FR4區。將胺基酸分配 至各功能部位係依照卡巴特（Kabat)之定義，*S叫〇/ Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health ’ Bethesda，Md.(1987及 1991))，裘帝亞（Chothia)及 萊斯克（Lesk)，乂 Mo/.β!，ο/· 196:901-917 (1987)或裘帝亞等 人 ’ 342:878-883(1989) » 95567.doc -15- 1356063 在此所用之以數字提及的抗體係與由相同數字之融合瘤 所獲得的單株抗體相同。如單株抗體3.8·3係與由融合瘤 3.8.3所獲得之抗體相同。 在此所用之Fd片段意指由Vh及Ch1功能部位所組成之抗 體片段；Fv片段係由抗體之單臂的乂與乂^^功能部位組成； 而 dAb 片段（華德（Ward)等人，__ 341 :544-546(1989)) 係由VH功能部位組成。 於某些具體實施例中，抗體為一種單鏈抗體（seFv)，其中| 之vL及VH功能部位係藉由可使其合成單一蛋白鏈之合成連 結子配對而形成一單價分子（博德（Bird)等人& 242:423-426(1988)及休士頓（Huston)等人，/v〇c &ζ·. USA 85:5879-5883(1988)。於某些具體實施例中，抗體 為二聚體（即二價抗體）’其中之Vh& Vl功能部位係於單一 多肽鏈上表現，但其所使用之連結子過短無法供相同鏈上 二功能部位間之配對，從而迫使功能部位與另一鏈之互補 功能部位配對並產生二個抗原結合部位（請見如霍利格 φ (Holliger) R等人，以 USA 90:6444-6448 (1993) 及波傑克（p〇ijak) R. j·等人，2:11211123 (1994) )。於某些具體實施例中，一或多個源自本發明抗體 之CDRs可併入一分子中（無論共價或非共價）形成一可與 M CSF行特異性結合之免疫連結物（丨mmun〇adhesin) ^於此 種具體貫轭例中，CDR(s)可合併為較大多肽鍵的一部分， 其可共價連捿至另一多肽鏈或其可為非共價性結合。 於具有一或多種結合位置之具體實施例中，結合部位可 95567.doc 1356063 彼此相同或不同。 在此所用之"人類抗體"一詞意指任何抗體，其中之變異 區及固足功能部位序列為人類序列。該名詞包含具有源自 人類基因之序列的抗體，但其已經由改變如以減少可能 的免疫原性、増加親和力、排除可能引起不欲折疊之半胱 胺酸等。該名詞包含於非人類細胞所重組產生之抗體，其
可能帶來非典型人類細胞之蛋白質醣化作用。這些抗體可 藉下述各種方法製備。
在此所用之"嵌合型抗體"一詞意指一抗體包括源自二或 多種不同抗體之部位。於一具體實施例中，—或多種CDRS 係源自人類抗-M-CSF抗體》於另一具體實施例中，所有 CDRs皆源自人類抗-M-CSF抗體。於另一具體實施例中，源 自一種以上人類抗-M-CSF抗體之CDRs係結合於一嵌合型 抗體中。例如’嵌合型抗體可包括源自第一種人類抗 -M-CSF抗體輕鏈之Cdri、源自第二種人類抗體 輕鏈之CDR2及源自第三種人類抗_m-CSF抗體輕鏈之CDR3 與源自一或多種其它抗-M-CSF抗體重鏈之CDRs。此外，框 構區可源自於已經被採用一或多種CDR之抗-M-CSF抗體之 一或源自一或多種不同人類抗體。 抗體片段或類似物或免疫球蛋白分子可容易地由熟諳此 藝者依照本專利說明書之指導來製備。較佳片段或類似物 之胺基端與羧基端係存在於接近機能性功能部位之邊緣。 構造性與機能性功能部位可藉由比較核苷酸及/或胺基酸 序列資料與公共或專利序列資料庫來鑑別。較佳為採用電 95567.doc 17 腦化對照方法來鑑別出現於其它已知構造及/或功能蛋白 質之序列主體或預期之蛋白質構造功能部位。可鑑別摺疊 成為已知三維構造之蛋白質序列的方法已為人所知。請見 飽伊（Bowie)等人，Science 253:164 (1991)。 在此所用之"表面電漿共振"一詞意指一種光學現象，其 可藉檢測生物感應基質内蛋白質濃度變化分析即時生物特 異性交互作用，如使用比亞寇（BIAC〇RETM)系統（法馬西亞 生物感測公司（Pharmacia Biosensor AB)，Uppsala，Sweden and Piscataway，N.J.)。進一步敘述請見強森（J〇nss〇n)仏 等人，知《•細/. d 5 1:19-26 (1993);強森U.等人， 价价咖以 ΐι:620·627 (1991);強森 B 等人，^ M〇/ 心 8:125-131(1995)·，及強森 B.等人，⑽ 198 :268-277(1991)。
”KD" —詞意指特定抗體·抗原交互作用之平衡解離常數。 "抗原決定位"一詞包含任何可與免疫球蛋白或τ_細胞受 體行特定結合或用別的方法與分子互相作用之蛋白質決定 子。抗原決定位決定子通常由具化學活性之表面群組（如胺 基酸或糖類側鏈等分子）構成且通常具有特定之三維構造 特徵以及特定電荷特徵。抗原決定位可為"線狀"或"構形的 (conformational)"。於線狀抗原決定位中，所有蛋白質與交 互作用分子(如抗體)間之交互作用的位置係沿著該蛋白質 主要的胺基酸序列直線地發生《於構形的抗原決定位中， 交互作用產生的位置係穿過蛋白質上互相分離的胺基酸殘 基。當解離常數U mM’較佳為_ nM且最佳為训nM 95567.doc -18- 1356063 時，可稱抗體能與抗原行特異性結合。於某些具體實施例 中，艮0為1{>1"1至50〇pm〇於其它具體實施例中，kd係介於 5〇〇ρΜ^μ_。於其它具體實施财，κ〇係介κΐμΜ至 1〇〇 ηΜ間。於其它具體實施财，Kd係介於1〇〇祕至1() nM » —旦測定出抗原上所需之抗原決定位，即可使用如本 發明中所述之技術產生該抗原決定位之抗體。或者，於發 現抗原決定位的期間，抗體產生及特性描述可說明所需之 k原決定位的資訊。接著由該資訊中可競爭性篩選能與相 | 同抗原决疋位結合之抗體。一種可達到此目的之方法為進 行乂互競爭性研究以尋找可互相競爭性結合之抗體，如可 競爭與抗原結合之抗體《有一種根據交互競爭性且非常完 整的"分類（binning)"抗體的過程可見述於國際專利公告案 號 WO 03/4873 1。. 在此所用之2 0種常見胺基酸及其縮寫係遵循慣例來使 用。請見办(第 2版，E.S.葛洛布（Golub) 及 D.R.格倫（Gren)，Eds.，Sinauer Associates，Sunderland， ·
Mass.(1991))，其係以引用的方式併入本文中。 "多核苷酸"一詞在此係指一種核苷酸長度至少為丨〇個鹼 基之聚合物型式，無論是核糖核苷酸或去氧核苷酸或任一 類型核苷酸之經修飾型式。該名詞包含單股及雙股型式。 在此所用之"分離的多核苷酸”一詞意指基因組、cDNA或 合成來源或其某些混合物之多核苷酸，根據起源或衍生來 源，該”分離的多核苷酸"包含有下列一至三項特徵：（丨）與 該”分離的多核苷酸"於自然界原出處之全部或部分多核苦 95567.doc -19· 1356063 酸無關’（2)可人工操作地連接至在自然界中不會連接在一 起之多㈣酸’或（3)於自料不會成為較大序列的一部分。 在此所用之"寡核苷酸”一詞包含自然產生，及經修飾之 ㈣酸’其藉自然產生及非自然產生之寡核芽酸鍵連接在 一起。募核苷酸為多核苷酸之亞族，其長度通常包括2〇〇 個鹼基或更少《較佳寡核苷酸長度為1〇至6〇個鹼基且最佳 長度為為 12、13、14、15、16、17、18、19 或 20 至 40 個鹼 基。寡核苷酸通常為單股，如引子及探子；但寡核苷酸也可| 為雙股（如用於建構基因突變子本發明之寡核苷酸可為正 向或反向寡核苷酸。 在此所用之”自然產生的核苷酸”一詞包含去氧核糖核苷 酸及核糖核苷酸。在此所用之"經修飾核苷酸"包含具有經 修飾或取代醣基及類似物之核苷酸。在此所用之"寡核苷酸 鍵"意指包含寡核苷酸鍵’如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、 碰代鱗酸Ss、一砸代礎酸醋、安尼宴硫代填酿（phosphoroa nilothioate)、佛秀蘭尼拉迭特（ph〇sh〇raniladate)、填醯胺· 酯（phosphoroamidate)及其類似物。請見如拉普朗虛 (LaPlanche)等人，心及以.14:9081(1986);斯得克 (Stec)等人，*/. Soc· 106:6077(1984);史坦（Stein) 專 k ’ Nucl· Acids Res. 16:3209( 1988);榮（Zon)等人，
Drwg Deizgw 6:539(1991);榮等人，
Oligonucleotides and Analogues A Practical Approach ' 87-108 頁（F.艾克斯坦（Eckstein)，Ed.，Oxford University Press，Oxford England( 1991));美國專利第 5，151,510號； 95567.doc -20- 1356063 烏爾曼（Uhlmarm)及沛曼（Peyman)，chemical Reviews 90 · 543 (1990)，其揭露内容係以引用的方式併入本文中。 右需要時寡核苷酸可包含標記以供檢測。 人為操作連接”的序列同時包含鄰近所欲基因之表現性 控制序列以及於反式或於相當距離外作用來控制所欲基因 之表現性控制序列。在此所用之"表現性控制序列"一詞意 指產生表現性及處理其所連接的編碼序列所必需之多核苷 酸序列。表現性控制序列包含適當的轉錄起始、終止、啟| 動子及增強子序列；有效的RNA處理訊號（如接合及多腺核 苷酸化訊號）；可穩定細胞質1][1111^八之序列、可提高轉譯效率 之序列（即科札克（Kozak)—致性序列）、可增加蛋白質穩定 性之序列’且當需要時可包含能增加蛋白質分泌之序列。 此種控制序列之種類依宿主生物而不同；於原核生物中， 此種控制序列通常包含啟動基因、核醣體結合部位及轉錄 終止序列；於真核生物中，此種控制序列通常包含啟動基 因及轉錄終止序列，"控制序列"一詞意欲包含至少所有表 _ 現性及加工所必須之組份，且亦可包含其它之有益組份， 如前導序列及融合夥伴（fusion partner)序列。 在此所用之"載體”一詞意指可運送另—核酸至其連接處 的核酸分子。於某些具體實施例中之載體為一種質體，即 額外DNA片段連接至環狀雙股dna環中。於某些具體實施 例中，載體為病毒性載體’其中附加之DNA片段可連接至 病毒基因組中。於某些具體實施例中，載體可在其所導入 之宿主細胞宁進行自發性複製（如具有源自細菌之複製能 95567.doc •21· 1356063 力之細菌載體及游離基因哺乳動 〇 两礼勁物栽體）。於其它具體實施 例中，载體（如非游離基因哺乳動 札切柳戰體）於導入宿主細胞後 可併入佰主細胞基因組，並 制L , 此了與宿主基因組一起複 製。此外，某些载體可指揮苴 ^ lA 详八Α人工刼作所連結基因的表 現性。此種載體在此稱為丨丨舌^ 叫“ Μ ^組表現性載體"(或簡稱為"表現 性載體"）。 在此所用之•'重組宿主細胞— 肥I A間％佰主細胞"）一詞意 才日一已導入重組表現性載體 秋^A肥應了解"重組宿主細胞 "及，宿主細胞"不僅指特定之主要細胞，且亦指該細胞之子 代》由於突變或環境影響，因此某些修飾可能發生在子代， 事實上此種子代可能不會與親代細胞完全相同，但仍包含 於在此所用之"宿主細胞,,一詞範圍内。 在此所用之it擇性雜交"一詞意指進行可察覺且特異性 的結合。如本發明之多核苦酸、寡核普酸及片段可於雜交 並^洗條件狀況中與核酸股進行選擇性雜交以便儘量減少 大量的與非待定核酸之可檢測結合。·,高度嚴格性,,或"高度 嚴格的"條件狀況可用於達成此項技藝令已知且在在此討 論的選擇性雜交之條件狀U高度嚴格性，，或，，高嚴格的 條件狀況實例為將一多核苷酸與另一種多核苷酸共同培 月，其中之一多核苷酸可附著於固體表面（如細胞膜），培養 雜交緩衝液為6X SSPE或SSC、50%甲醯胺（f0rmamide)、5χ 顧哈爾兹氏（Denhardt's)試劑、〇·5% SDS、100 pg/mi變性切 段之鮭魚精子DNA，雜交溫度為“。(^達12_16小時，隨後再 於55°C、使用lx ssc、〇 5〇/〇 SDS之沖洗緩衝液進行兩次沖 95567.doc -22- 1356063 洗。亦見於山姆布魯克等人，前述，9.50-9.55頁》 序列相同度百分比"一詞係形容核酸序列内容，意指殘 基百分比當比較及匹配第一種鄰近序列與第二種鄰近序列 時其最大相同程度。序列相同度之比較線性長度可大於至 少約9個核苷酸，通常至少約丨8個核苷酸，更通常為至少約 24個核苷酸，典型地至少約28個核苷酸，更典型地為至少 約32個核苷醆，且較佳為至少約36、48或更多個核苷酸。 有一些此項技藝中已知之不同演算法可用於測量核苷酸序 | 列相同度。如多核苷酸序列之比對可使用FASTA、Gap或 Bestfit ’ 其為（Wisconsin Package) 10.0版之程式，巨分子序 列分析 k 料庫（GCG)，Madison，Wisconsin。包含如 FASTA2 及FASTA3之FASTA程式可提供受測及搜尋序列間最佳重 疊區之線性排列及序列相同度（皮爾森（Pears〇n)， 五似少m〇/· 183··63-98(1990);皮爾森，M〇/.价0/. 132:185-219(2000);皮爾森，似W/jW 五似少册0/· 266:227-258 (1996);皮爾森，/.从〇/仏〇/ 276:71_84 (1998);以引用的籲 方式併入本文中）。除非另外指定，否則使用特定程式或演 鼻法之内定參數。例如，測定核酸序列間之序列相同度可 使用FASTA及其内定參數（字母大小為6及供作評比基礎之 NOPAM係數）或使用Gap及其内定參數（如GCG第6,1版所提 供者）’其以引用的方式併入本文中。 除非另外指定，當提及一核苷酸序列時係包含其補體。 因此，當提及含特定序列核酸時應瞭解其係包含其互補 股，及其互補性序列。 95567.doc -23- 1356063 "序列相同度百分比"一詞意指一種比例，其表示相較於所 比較的殘基總數時’目標物所擁有相同數目殘基的比例。 當提及核酸或其片段時’"實質上類似"或”實質上序列類 似"等詞意指當將適當核苷酸插入段或刪除段與另一核酸 (或其互補&)進行最佳化比對時’其核苦酸序列相同度為至 少約85% ’較佳為至少約90%，且更佳為至少約95%、96〇/〇、 97%、98°/。或99%核苷酸驗基，以上可以任何為吾人所熟知 之上述序列相同度演算法（如FASTA、BLAST或Gap)來測 量。 當形容多肽時實質上相同度"一詞意指二個肽序列，當 進行最佳化比對時（如以GAP或BESTFIT程式、依程式所提 供使用内定間隔重量（gap weights))，共同擁有至少7〇〇/0、 75%或80%序列相同度，較佳為至少9〇%或95%序列相同 度，且更佳為至少97%、98%或99%的序列相同度。於某些 具體實施例中，不同的殘基位置係因保留性胺基酸取代基 互異。"保留性胺基酸取代基•，意指其中之胺基酸殘基係以 另一具有類似化學特性（如電荷或疏水性）之側鏈R基的胺 基酸殘基所取代。保留性胺基酸取代基通常並不會實質上 改變蛋白質之機能特性。在二或多種胺基酸序列因保留性 取代基而互異之情況下，其序列相同度可向上調整以修正 取代基之保留性本質。可製備該調整之方法為熟諳此藝者 所熟知之方法。請見如皮爾森，Mo/.价〇/. 243·307-31 (1994)。具有類似化學構造之側鏈的胺基酸實例 包3 . 1]脂族側鏈：甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、白胺酸及 95567.doc •24- 1356063 異白胺酸；2]脂族-羥基側鏈：絲胺酸及蘇胺酸；3]含醯胺 之側鏈：天冬醯胺及麩醯胺酸；4]芳族側鏈：苯丙胺酸、 酪胺酸及色胺酸；5]鹼性側鏈：離胺酸、精胺酸及組織胺 酸；6]酸性侧鏈：天冬胺酸及縠胺酸；及7]含硫之側鏈：半 胱胺酸及曱硫胺酸。保留性胺基酸取代基為：纈胺酸-白胺 酸-異白胺酸、苯丙胺酸-路胺酸、離胺酸-精胺酸、丙胺酸-绳 胺酸、穀胺酸-天冬胺酸及天冬醯胺-麩醯胺酸。 或者，保留性置換為PAM250對數相似矩陣 _ (log-likelihood matrix)中任何具有正值之改變，其係見述於 戈理特（Gonnet)等人，256: 1443-45(1992)，其以 引用的方式併入本文中。"適度保留性"置換為ΡΑΜ250對數 相似矩陣中任何具有非負值之改變。 多肽之序列相同度典型係使用序列分析軟體來測量。蛋白 質分析軟體在比對序列時係測量不同取代、刪除及其它修 飾方式（包含保留性胺基酸取代基）之相同度。例如包含如 "Gap"及"Bestfit”等程式之GCG可採用程式特定的内定參數修 來測定緊密相關之多肽間的序列同質性或序列相同度，如測 疋源自不同種生物之同型多狀或野外型蛋白質及其突變蛋 白間之相同度。請見如GCG 6.1版。比較多肽序列亦可使用 FASTA並採用内定或建議參數，請見GCG 6.1版（University of Wisconsin Wl)。FASTA(如 FASTA2 及 FASTA3)可提供查詢 及搜尋序列間的最佳重疊部分區之線性排列及序列相同度 (皮爾森，五《Zymo/. 183:63-98 (1990);皮爾森， Mw/zd Mo/.价〇/· 132:185-219(2000))。當比較本發明序列 95567.doc -25- 1356063 與包含大量源自各種生物之序列的資料庫時，另一較佳演 算法演算法為電腦程式BLAST，特別係blastp或tblastn，其 使用該程式所提供之内定參數。請見如阿特休爾（Altschul) 等人，·/. Mo/. 215:403-410(1990);阿特休爾等人， iVwc/eic acirfs 25:3389-402(1997)。 比較多肽序列同質度所需之長度通常至少約16個胺基酸 殘基’通常為至少約20個殘基，更常為至少約24個殘基， 典型為至少約28個殘基’且較佳為多於約35個殘基。當搜 _ 尋包含大量源自各種生物之序列的資料庫時，最好比較胺 基酸序列。 在此所用之"標記"或"標記（labeled)”等詞將另一分子併 入抗體中。於一具體實施例中，標記為一種可察覺的標記， 如合併放射標定胺基酸或附著至經生物素處理功能部位之 多肽’其可藉有記號的抗生物素蛋白（如包含螢光標記或酵 素活性之鏈黴抗生物素蛋白，其可藉光學或比色法檢測）進 行檢測。於另一具體實施例中，標記或標記可具治療性，鲁 如藥物共軛物（drug conjugate)或毒素。標記多肽及醣蛋白 之各種方法在此項技藝中已為人所知且可加以運用。多肽 之標記實例包含（但不限於）下列：放射性同位素或放射性核 素（如 3H、14C、15N、35S、90Y、”Tc、mIn、125ι、131ι、營 光標記（如FITC、若丹明（rhodamine)、鑭系元素磷光體 (lanthanide phosphors))、酵素性標記（如山葵過氧化酶 (horseradish peroxidase)、β·半乳糖苷酶、螢光酵素、鹼性 磷酸酶）、化學發光標記、生物素處理之基團、可藉二級通 95567.doc • 26 - 1356063 訊序列（如白胺酸拉鍊成對序列’二級抗體之結合部位、金 屬結合功能部位、抗原決定位標計）識別之預先測定的多肽 抗原決定位、磁性劑（如此螯合物）、毒素，如百日咳毒素、 紅豆杉醇、細胞鬆弛素B(cytochalasin B)、短桿菌素 D(gramicidin D)、溴化乙錠（ethidium bromide)、依米丁 (emetine)、絲裂徽素（mitomycin)、依託泊音(et〇p〇side)、替 尼泊苷（tenoposide)、長春新鹼、長春花鹼、秋水仙鹼、 阿黴素、柔紅黴素（daunorubicin)、鹽酸米托蔥現(dihydroxy · anthracin dione)、米托蔥醌（mitoxantrone)、光輝黴素 (mithramycin)、放線菌素D、1-脫氫睪丸酮、糖皮質激素、 普羅卡因（procaine)、丁卡因（tetracaine)、利多卡因 (lidocaine)、普萘洛爾（propranolol)及嗓羅徽素（puromycin) 與其類似物或同系物。於某些具體實施例中，標記係藉不 同長度之延長臂附著以降低可能的空間障礙。 縱觀本說明書及申請專利範圍，應瞭解"包括（comprise)” 等詞或如"包括（comprises)"或”包括（comprising)，，等變形意 鲁 味著包含指定的整體或整體群組但不排除任何其它整體或 整體群組。 人類抗-M-CSF抗體及其特性 於一具體實施例中，本發明提供人類化抗-M-CSF抗體。 於另一具體實施例中，本發明提供人類抗-M-CSF抗體。於 某些具體實施例中，人類抗-M-CSF抗體之製備係藉由免疫 非人類基因轉殖動物（如齧齒動物），其基因組包括人類免疫 球蛋白基因以.便齧齒動物可產生人類抗體。 95567.doc -27· 1356063 本發明抗-Μ-CSF抗體可包括人類κ或人類人輕鏈或由此 起源之胺基酸序列。於某些包括κ輕鏈之具體實施例中，輕 鏈變異功能部位（VL)係部分由人類V&012、VftL2、VfcL5、 V*A27或VaB3基因及J*1、JJ、J*3或基因所編碼。於本 發明特定具體實施例中’輕鏈變異功能部位係由 νΛ012/】尺3、V々L2/J/：3、、\^5"尺4、VaA27/J尺4 或 V々B3/J&1基因編碼。
於某些具體實施例中，Μ-CSF抗體之VL包括一或多種與 種株胺基酸序列有關之胺基酸取代基。於某些具體實施例 中，抗-Μ-CSF 抗體之 VL 包括1、2、3、4、5、6、7、8、9 或10個與種株胺基酸序列有關之胺基酸取代基。於某些具 體實施例中’ 一或多種源自種株之取代基係位於輕鏈之 CDR區。於某些具體實施例中，與種株有關之胺基酸取代 基係位於一或多個與位於下列抗體中任一或多種VL之種株 有關的取代基相同的位置上：252、88、100、3.8.3、2.7.3、 1.120.1、9.14.41、8· 10.3F、9.7.2IF、9.14.4、8.10.3、9.7.2、 % 9.7.2C-Ser、9.14.4C-Ser、8.10.3C-Ser、8.10.3-CG2、 9.7.2-CG2 ' 9.7.2-CG4、9.14.4 CG2、9.14.4-CG4、 9.14_4-Ser、9.7.2-Ser、8.10.3-Ser、8.10.3-CG4、8.10.3FG1 或9.14.4G1。如相較於見於抗體88之VL中的種株，抗-M-CSF 抗體之\^可包含一或多種胺基酸取代基，而當相較於抗體 252 2VL中的種株時，抗-Μ-CSF抗體之VL可包含它種胺基 酸取代基；其中抗體252使用與抗體88相同之VK基因。於某 些具體實施例中，其胺基酸變化係位於一或多個相同位 95567.doc • 28 - 置’但包含比原參考抗體含有更多的不同突變。 於某些具體實施例中，與種株有關之胺基酸變化可於一 或多個與抗體 252、88、100、3.8.3、2.7.3、1.120.卜 9.14.41、 8.10.3F、9.7.2IF、9.14.4、8.10.3、9.7.2、9.7.2C.Ser、 9.14.4C-Ser、8.10.3C-Ser、8.10.3-CG2、9.7.2-CG2、 9.7.2- CG4、9.14.4-CG2、9.14.4 CG4、9.14.4-Ser、9.7.2-Ser、 8.10.3- Ser、8.10.3-CG4、8.10.3FG1 或 9.14.4G1 之任一 vL 上 的相同位置產生’但在相對於原參考抗體中之胺基酸位置 上的變化可成為表現保留性胺基酸取代基。如，若於這些 抗體中其中之一所含之特定位置已由種株發生變化且為穀 胺酸’則吾人可於該位置取代天冬胺酸。同樣地，若相較 於種株之胺基酸取代基為絲胺酸，吾人可於該位置以蘇胺 酸取代絲胺酸。保留性胺基酸取代基先前已有敘述。 於某些具體實施例中，人類抗-M-CSF抗體之輕鏈包括與 抗體 252(SEQ ID NO : 4)、88(SEQID NO : 8)、100(SEQ ID NO : 12)、3.8.3(SEQ ID NO : 16)、2.7.3(SEQ ID NO : 20)、 1.120.1(SEQ ID NO : 24)、9.14.4I(SEQ ID NO : 28)、8.10.3F (SEQ ID NO : 32)、9.7.2IF(SEQ ID NO : 36)、9.14.4 (SEQ ID NO : 2 8)、8.10.3(SEQ ID NO : 44)、9.7.2(SEQ ID NO : 48)、 9.7.2C-Ser(SEQ ID NO : 52)、9.14.4C-Ser(SEQ ID NO : 56)、 8.10.3C-Ser(SEQ ID NO : 60)、8.10.3-CG2(SEQ ID NO : 60)、 9.7.2- CG2(SEQ ID NO : 52)、9.7.2-CG4(SEQ ID NO : 52)、 9.14.4- CG2(SEQ ID NO : 56)、9.14.4-CG4(SEQ ID NO: 56)、 9.14.4- Ser(SEQ ID NO : 28)、9.7.2-Ser(SEQID NO : 48)、 95567.doc -29- 1356063 8.10.3- Ser(SEQ ID NO : 44)、8_10.3-CG4(SEQID NO : 60) 8.10.3FG1(SEQ ID NO : 32)或 9.14.4G1(SEQ ID NO : 28)之
Vl胺基酸序列相同的胺基酸序列，或者該胺基酸序列可具 有多達1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個保留性胺基酸取 代基及/或總數多達3個的非-保留性胺基酸取代基。於某些 具體實施例中，輕鏈包括起源自任何一種上述抗體之CDR1 起點至CDR3末端的胺基酸序列。 於某些具體實施例中，抗-M-CSF抗體之輕鏈至少包括種 φ 株之輕鍵CDR1、CDR2或CDR3或在此所述之抗體序列。於 另一具體實施例中，該輕鏈可包括獨立地選自抗體252、 88、100、3.8.3、2·7·3、1.120.1、9.14.41、8.10.3F、9.7.2IF、 9.14.4、8· 10.3、9.7_2、9.7.2C-Ser、9.14.4C-Ser、8.10.3C-Ser、 8.10.3- CG2、9.7.2-CG2、9.7.2-CG4、9.14.4-CG2 > 9.14.4- CG4、9.14.4-Ser、9.7.2-Ser、8.10.3-Ser、8.10.3-CG4、 8.10.3?01或9.14.401之00111、€0112或€0113區，或者各具 有少於4個或少於3個保留性胺基酸取代基及/或合計3個（或 φ 較少）非-保留性胺基酸取代基之CDR區。於其它具體實施例 中，抗-M-CSF抗體之輕鏈包括輕鏈CDR1、CDR2或CDR3， 其各獨立地選自具有包括選自SEQ ID NOS : 4、8、12、16、 20、24、28、32、36、44、48、52、56 或 60 之 VL 區胺基酸 序列的輕鏈變異區之抗體的CDR1、CDR2及CDR3區，或者 其可由能編碼選自 SEQIDNOS : 3、7、11、27、31、35、 43或47之VL區的核酸分子編碼而得。抗-厘彳”抗體之輕鏈 可包括抗體的CDR1、CDR2及CDR3區，該抗體包括選自 95567.doc •30- 1356063 252、88、100、3.8.3、2·7·3、1.120.1、9.14.41、8.10.3F、 9.7.2IF、9.14.4、8.10.3、9.7.2、9.7.2C-Ser、9.14.4C-Ser、 8.10.3C-Ser、8.10.3-CG2、9.7.2-CG2 、9.7.2-CG4、 9.14.4CG2' 9.14.4-CG4' 9.14.4-Ser> 9.7.2-Ser' 8.10.3-Ser ' 8.10.3- CG4、8.10.3FG1 或 9.14.4G1 或 SEQ ID NOS : 4、8、 12、16、20、24、28、32、36、44、48、52、56或60之 VL 區胺基酸序列。 於某些具體實施例中，輕鏈包括抗體252、88、100、3.8.3、 % 2.7.3、1.120.卜 9·14.41、8.10.3F、9.7.2IF ' 9.14.4、8.10.3、 9.7.2、9.7.2C-Ser、9.14.4C-Ser、8.10.3C-Ser、8.10.3-CG2、 9.7.2-CG2 、9.7.2-CG4 、9.14.4-CG2 、9.14.4-CG4 、 9.14.4- Ser、9.7.2-Ser、8.10.3-Ser、8.10.3-CG4、8.10.3FG1 或9.14.4G1之CDR1、CDR2及CDR3區，或者該CDR區各自 具有少於4個或少於3個保留性胺基酸取代基及/或總數為3 個（或更少）的非-保留性胺暴酸取代基。 關於重鏈，於某些具體實施例中，重鏈胺基酸序列之變 $ 異區係由人類 VH3-11、VH3-23、VH3-7、VH1-18、VH3-33、 Vh3-48基因及Jh4、JH6、J^b^JH^b基因部分編碼。於本發 明特定具體實施例中，重鏈變異區係由 Vh3-11/Dh7-27/Jh6 、 VH3-7/DH6-13/JH4 、
Vh3-23/Dh1-26/Jh4 、 VH31 l/DH7-27/ JH4 、
Vh3-33/Dh1-26/Jh4 、 VH1 -1 8/DH4-23/JH4 、 VH3-ll/DH7-27tJH4b 、 VH3-48/DH1-26/JH4b 、 VH3-11 /DH6-13/JH6b、VH3-11/DH7 27/JH4b、VH3-48/DHl-6/JH4b或 95567.doc -31 - VH3_ll/DH6-13/JH6b基因編碼》於某些具體實施例中，抗-M-CSF抗體之VH包含一或多種與種株胺基酸序列有關之胺 基酸取代、刪除或插入（附加ρ相較於種株胺基酸序列，於 某些具體實施例中，重鏈之變異功能部位包括1、2、3、4、 5、6、7、8、9、1〇、11、12、13、14、15、16、17或 18個 突變。於某些具體實施例中，相較於種株胺基酸序列之突 變為非··保留性取代基。於某些具體實施例中，突變係位於 重鏈之CDR區。於某些具體實施例中，胺基酸改變係於一 或多個與源自任一或多種抗體252、88、100、3.8.3、2.7.3、 1 ·12(M、9.14.41、8.10.3F、9.7.2IF、9.14.4、8.10.3、9.7.2、 9.7.2C-Ser、9.14.4C-Ser、8.10.3C-Ser、8.10.3-CG2、 9.7.2- CG2、9.7.2CG4、9.14.4-CG2、9.14.4-CG4、9.14.4-Ser、 9.7.2- Ser、8.10.3-Ser、8.10.3-CG4、8.10.3FG1 或 9.14.4G1 之VH的種株之突變相同的位置上產生。於其它具體實施例 中，胺基酸改變係位於一或多個參考抗體的相同位置，但 包含不同的突變》 於某些具體實施例中，重鏈包括抗體252(SEQID NO : 2)、 88(SEQID NO:6) ' 100(SEQ ID NO ： 10) > 3.8.3(SEQ ID NO ： 14)、2.7.3(SEQ.ID NO : 18)、1.120.1(SEQ. ID NO : 22)、 9.14.4I(SEQ ID NO _· 26)、8.10.3F(SEQ ID NO : 30)、9.7.2IF (SEQ ID NO : 34)、9.14.4(SEQ ID NO : 38)、8.10.3(SEQ ID NO : 30)、9.7.2(SEQ ID NO : 46)、9.7.2C-Ser(SEQID NO : 50)、9.14.4C-Ser(SEQ ID NO : 54)、8.10.3C-Ser(SEQID NO : 58) ' 8.10.3-CG2(SEQ ID NO ： 62) > 9.7.2-CG2(SEQID NO ： 95567.doc • 32· 1356063 66) ' 9.7.2-CG4(SEQ ID NO ： 703 ' 9.14.4-CG2(SEQID NO ： 74) ' 9.14.4-CG4(SEQ ID NO ： 78) ' 9.14.4-Ser(SEQ ID NO ： 82)、9.7.2-Ser(SEQ ID NO : 86)、8.10.3-Ser(SEQ ID NO : 90) 8.10.3-CG4(SEQID NO ： 94) ' 8.10.3FG1(SEQID NO ： 98)或9.14.4G1(SEQID NO: 102)之變異功能部位（VH)的胺 基酸序列，或者該胺基酸序列具有多達1、2、3、4、5、6、 7、8、9或10個保留性胺基酸取代基及/或總數達3個的非-保 留性胺基酸取代基。於某些具體實施例中，該重鏈包括源 自任一前述抗體中自CDR1起點至CDR3末端之胺基酸序 列。 於某些具體實施例中，該重鏈包括抗體252、88、100、 3.8.3、 2.7.3、1.120.1、9.14.41、8.10.3F、9.7.2IF、9· 14·4、 8.10.3、 9.7.2、9_7.2C-Ser、.9_14_4C-Ser、8.10.3C-Ser、 8.10.3- CG2 、9.7.2-CG2 、9.7.2-CG4 、9.14.4-CG2 、 9.14.4- CG4、9.14.4-Ser、9.7.2Ser、8.10.3-Ser、8.10.3-CG4、 8.10.3?01或9.14.401之重鏈(：0111、€0112及€0113區，或者 該CDR區各含有少於8個，少於6個，少於4個或少於3個保 留性胺基酸取代基及/或總數達3個（或更少）的非-保留性胺 基酸取代基。 於某些具體實施例中’其重鏈如前所述包括了在此所述 之抗體序列的種株或抗體CDR3，且亦可包括種株序列之 CDR1及CDR2區’或者可包括抗體序列之cdri及CDR2 區’其各自獨立地選自包括選自252、88、100、3.8.3、2.7.3、 1.120.卜 9.14.41、8.10.3F、9.7.2IF、9.14.4、8.10.3、9.7.2、 95567.doc -33- 1356063 9.7.2C-Ser、9.14.4C-Ser、8.10.3C-Ser、8.10.3-CG2、 9.7.2- CG2、9.7.2CG4、9.14.4-CG2、9.14.4-CG4、9.14.4-Ser、 9.7.2- Ser、8.10.3-Ser、8.10.3-CG4、8.10.3FG1 或 9.14.4G1
抗體之重鏈的抗體。於另一具體實施例中，重鏈包括在此 所述之抗體序列的CDR3，且亦可包括CDR1及CDR2區，其 各自獨立地選自重鏈變異區之CDR1及CDR2區，該重鏈變 異區包括選自 SEQ ID NOS : 2、6、10、Η、18、22、26、 30、34、38、46、50 ' 54、58、62、66、70、74、78、82、 86、90、94、98或102之VH區胺基酸序列，或者其可由能編 碼選自 SEQ ID NOS : 1、5、9、25、29、33、37、45、97 或101之VH區的核酸序列編碼。於另一具體實施例中，該抗 體包括上述之一種輕鏈及上述之一種重鏈。 一可發生之胺基酸取代基類型為將一或多個抗體（其可 能為化學活性者）中之半胱胺酸改變為另一種殘基，如（不限 於）丙胺酸或絲胺酸。於一具體實施例中，有一非正規半胱 胺酸之取代基。該取代基可位於變異功能部位之框構區或 Φ 抗體固定功能.部位中。於另一具體實施例中，該半胱胺酸 係位於抗體之非正規區。 另一可產生之胺基酸取代基類型為移除抗體中任何可能 的蛋白質水解部位’特別是位於抗體中變異功能部位之 CDR或框構區或固定功能部位者。取代半胱胺酸殘基及移 除蛋白質水解部位可減少抗體產物中任何異質性的風險並 從而増強其同質性《另一類的胺基酸取代係移除可能形成 脫胺作用部位之天冬醯胺-甘胺酸對；其係藉由修改殘基之 95567.doc •34· 1356063 一或二個殘基同時修改來完成。 於某些具體實施例中，本發明抗-Μ-CSF抗體重鏈之C-端 離胺酸並不呈現（路易斯（Lewis) D.A·等人，C/iem，66 (5) : 5 85-95(1994))。於本發明不同之具體實施例中，抗 -Μ-CSF抗體之重鏈及輕鏈可視需要包含訊息序列。 以一觀點而言’本發明係有關於抑制人類抗_m_csf單株
抗體及設計來製造該抗體之細胞株。表1列舉可編碼下列單 株抗體的重鏈及輕鏈之變異區的核酸及相對應之可預期胺 基酸序列之序列識別碼（SEQ ID N〇s): 252、88、1()Q、3 8 3、 2.7.3、1.120.1、9.14.41、8.10.3F、9.7.2IF、9.14.4、8.10 及9.7.2。額外之變異抗體9 7 2(：加、9 14 4^ 8.U).3C-Ser、8.10.3_CG2、9 7 2獨、97· 9.14.4-CG2、9.14_4_CG4、9l44Ser、9 7 2_Ser、8i()3^ W4 8.U)獨⑷七观可藉熟諳此藝 來製備。 ‘
95567.doc
• 35 - 9.14.41 25 26 27 28 9.14.4 37 38 27 28 9.14.4C-Ser 54 56 9.14.4C-CG2 74 56 9.14.4CG4 78 56 9.14.4-Ser 82 27 28/ 9.14.4-G1 101 102 27 28/ 8.10.3F 29 30 31 32 8.10.3 29 30 43 44 8.10.3-C-Ser 58 60 8.10.3-CG2 62 「 60 _ 8.10.3-Ser 90 43 44 8.10.3-CG4 94 60 8.10.3FG1 97 98 31 32 9.7.2IF 33 34 35 36 9.7.2 45 46 47 48 9.7.2-C-Ser 50 52 9.7.2-CG2 66 52 9.7.2-CG4 70 52 9.7.2-Ser 86 47 48 抗-Μ-CSF抗體之種類及亞類 1356063 抗-M-CSF抗體之種類及亞類可藉任何此項技藝中已知 之方法測定。通常，抗體之種類及亞類可使用對特定抗體 具特異性之種類及亞類的抗體進行測定《此種抗體已商品 化。種類及亞類可藉ELISA或西方墨點法（Western Blot)以 及其它技術來測定。或者，種類及亞類之測定可藉由對所 有或部分之抗體重鏈及/或輕鏈的固定功能部位進行排 序，比較其胺基酸序列與已知之各種免疫球蛋白的種類及 亞類es之胺基酸序列’並測定抗體之種類及亞類。 於某些具體實施例中，抗-M-CSF抗體為單株抗體。抗 95567.doc -36· 1356063 -Μ-CSF抗體可為IgG、IgM、IgE、IgA或IgD分子。於較佳 具體實施例中，抗-M-CSF抗體為IgG且亞類為IgG卜IgG2、 IgG3或IgG4。於另一較佳具體實施例中，該抗體為亞類 IgG2或IgG4。於另一較佳具體實施例中，該抗體為亞類 IgG卜 品種及分子選擇性 於本發明另一觀點中，抗-Μ-CSF抗體同時顯示出品種及 分子選擇性。於某些具體實施例中，抗-Μ-CSF抗體可與人 類、食蟹狼（cynomologus monkey)及鼠Μ-CSF結合。遵照說 明書的教導，吾人可使用此項技藝中為吾人所熟知之方法 測定抗-Μ-CSF抗體之品種選擇性。如吾人可使用西方墨點 法、FACS、ELISA、RIA、細胞增殖試驗或Μ-CSF受體結合 分析測定品種選擇性。於一較佳具體實施例中，吾人可使 用細胞增殖試驗或ELIS A測定品種選擇性。 於另一具體實施例中，抗-Μ-CSF抗體對Μ-CSF具有至少 大於其對GM-/G-CSF選擇性100倍之選擇性。於某些具體實 施例中，抗-Μ-CSF抗體並不會與除Μ-CSF外的任何其它蛋 白質顯示任何可察覺的特異性結合。吾人可依照說明書指 示使用此項技藝中為吾人所熟知方法測定抗-Μ-CSF抗體 對Μ-CSF之選擇性。例如吾人可使用西方墨點法、FACS、 ELISA或RIA測定選擇性。 確認由抗-Μ-CSF抗體辨識之Μ-CSF抗原決定位 本發明提供一種人類抗-Μ-CSF單株抗體，其可與M-CSF 結合並與同一抗原決定位競爭、交互競爭及/或結合，及/ 95567.doc -37- 1356063 或與具有相同KD之Μ-CSF結合，其係（a)選自252、以、ι〇〇、 3.8.3 ^2.7.3 ^ 9.14.41 ^8.1〇.3F，9<7>2IF.9>14.4, 8·1〇·3、9.7.2、9.7.2C_Ser、9.14.4c_Ser、81〇 3哪、 8.10.3- CG2、9.7.2-CG2、9.7.2-CG4、9.144CG2、 9.14.4- CG4、9.14.4_Ser、9.7.2_Ser、8.1〇n 8 i〇 3_cg4、 8_10.3卩〇1或9.14.4〇1之抗體’（15)—種抗體，其包括具有5£(^ ID NO : 2、6、10、14、18、22、26、30、34、38、46 ' 5〇、 54 58 、 62 、 66 、 70 、 74 、 78 、 82 、 86 、 9〇 、 94 、 98或l〇2
之胺基酸序列的重鏈變異區；（c)一種抗體，其包括具有SEQ ID NO : 4、8、12、16、20、24、28、32、36、44、48、52、 56或60之胺基酸序列的輕鏈變異區；（d) 一種抗體，其包括 (b)中定義之重鏈變異區及（c)中定義之輕鏈變異區。 吾人可藉由使用本技藝中已知之方法測定抗體是否可與 相同抗原決定位進行結合、競爭結合、交又競爭結合，或 與具有與一抗-Μ-CSF抗體相同之Kd。於一具體實施例中， 吾人可使本發明之抗-Μ-CSF抗體於飽和條件狀況下與 Μ-CSF結合並接著測量受試抗體與m-CSF結合的能力。若 受試抗體與抗Μ-CSF抗體可於同一時間與m-CSF結合，則 受試抗體亦可如同抗Μ-CSF抗體一樣與不同抗原決定位結 合。然而’若受試抗體無法與Μ-CSF同時結合，則受試抗 體可與相同抗原決定位、一部分重疊抗原決定位或位於人 類抗-Μ-CSF抗體所結合之抗原決定位的鄰近抗原決定位 進行結合。此實驗可使用ELISA、RIA或FACS來進行《於 一較佳具體實施例中，實驗係使用BIACORE™進行。 95567.doc -38- 1356063 抗Μ-CSF抗體對Μ-CSF之結合親和力 於本發明某些具體實施例中，抗M-CSF抗體與μ-CSF結 合具有高親和力。於某些具體實施例中，抗Μ-CSF抗體與 Μ-CSF結合之kd為1 X 1(Γ7 Μ或以下。於其它較佳具體實施 例t ’可與Μ-CSF結合之抗體的抗體KD為1 X 1〇-8 Μ、1 χ ΙΟ·9 Μ、1 χ ίο·1。Μ、i χ 1〇·" Μ、j χ 1〇-ΐ2 Μ或以下。於某 些具體實施例中，為ΙρΜ至500 ρΜ。於其它具體實施例 中，KD介於500 ΡΜ至1 μΜ間。於其它具體實施例中，Kd ^ "於1 μΜ至1〇〇 nM間。於其它具體實施例中，kd介於1〇〇 mM至1〇 。於一更佳具體實施例中，可與m_csf結合 之抗體具有與選自 252、88、100、3.8.3、2.7.3、1.120.1、 9.14.41、8.10.3F、9.7.2IF、9.14.4、8.10.3、9.7.2、9,7.2C-Ser、 9.14.4C-Ser、8.1〇.3C-Ser、8.10.3-CG2、9.7.2-CG2、 9.7.2- CG4、9.14.4CG2、9.14.4-CG4、9.14.4-Ser、9.7.2-Ser、 m3-Ser·、8.UK3-CG4、8.10.3FG1 或 9.14.4G1 之抗體實質 上相同的kd。於另一較佳具體實施例中，可與M_CSF結合| 之抗體具有貫質上與包括一輕鏈之CDR2及或重鏈之CDR3 的抗體相同的Kd ’後者抗體係選自252、88、100、3.8.3、 2.7.3、1.120.1、9.14.41、8.1 0.3F、9.7.2IF、9.14.4、8.10.3、 9.7.2 9_7.2C-Ser、9.14.4C-Ser、8.1〇.3C-Ser、8.10.3-CG2、 9.7.2- CG2^9.7.2-CG4>9.14.4CG2^9.14.4-CG4^9.14.4-Ser> 9_7.2-Ser、8.10.3-Ser、8.10.3-CG4、8.10.3FG1 或 9.14.4G1。 於另一較佳具體實施例中，可與Μ-CSF結合之抗體具有與 種抗體實貝上相同的〖〇，該抗體包括具有seq N〇 ·· 95567.doc -39. 1356063 2 、 6 、 10 、 14 、 18 、 22 、 26 、 30 、 34 、 38 、 46 、 50 、 54 、 58、62、66、70、74、78、82、8ό、90、94、98 或 102 之胺 基酸序列的重鏈變異區，或者該抗體包括具有8£(^1〇1^0: 4 、 8 、 12 、 16 、 20 、 24 、 28 、 32 、 36 、 44 、 48 、 52 、 56或 60之胺基酸序列的輕鏈變異區。於另一較佳具體實施例 中，可與M-CSF結合之抗體具有與一種抗體實質上相同的 KD，該抗體包括具有 SEq ID no : 4、8、12、16、20、24、 28 ' 32、36、44、48、52、50或60之Vl區胺基酸序列的輕 鏈變異區之CDR2，且可視需要包括CDR1及/或CDR3，或者 該抗體可包括具有SEQ ID NO : 2、6、10、14、18、22、 26、30、34 ' 38、46、50、54、58 ' 62 ' 66、70、74、78 ' 82、86、90、94、98或102之VH區胺基酸序列的重鏈變異區 之CDR3，且可視需要包括CDR1及/或CDR2。 於某些具體實施例中，抗-M-CSF抗體具有低解離速率。 於某些具體實施例中，抗-M-CSF抗體之koff為2.0 X 1〇 -4 s-i 或更低。於其它較佳具體實施例中，與M-CSF結合之抗體 的koffg2.〇 X 1〇·5或者k〇f^2 0 x 1〇·6 s-i或更低。於某些具 體實施例中，1^。„實質上與在此所述之抗體相同，如選自 252、88、1〇〇、3.8.3、2.7.3、1.120.1、9.14.41、8.10.3F、 9.7.2IF、9.14.4、8.10.3、9.7.2、9.7.2C-Ser、9.14.4C-Ser、 8.1〇.3C-Ser > 8.10.3-CG2、9.7.2-CG2、9.7.2CG4、 9.14.4-CG2、9.14.4-CG4、9.14.4-Ser、9.7.2-Ser、8.10.3-Ser、 8.10.3-CG4、8.10.3FG1或9.14.4G1之抗體。於某些具體實 施例中’與M_CSF結合之抗體具有與一種抗體實質上相同 95567.doc -40- 1356063 的 koff ，該抗體包括（a)選自 252、88、100、3.8.3、2.7.3、 1.120.1、9.14.41、8.10.3F、9.7.2IF、9.14.4、8.10.3、9·7.2、 9.7.2C-Ser、9_14.4C-Ser、8.10.3C-Ser、8.10.3-CG2、 9.7.2- CG2、9.7.2CG4、9.14.4-CG2、9.14.4-CG4、9.14.4-Ser、 9.7.2- Ser、8.10.3-Ser、8.10.3-CG4、8.10.3FG1 或 9.14.4G1 之抗體的重鏈之CDR3，並可視需要包括CDR1及/或CDR2 ; 或（b)選自 252、88、100、3.8.3、2.7.3、1.120.1、9.14.41、 8.10.3F' 9.7.2IF> 9.14.4'8.10.3'9.7.2'9.7.2C-Ser' 9.14.4C-Ser、8.10.3C-Ser、8.10.3-CG2、9.7.2-CG2、9.7.2-CG4、 9.14.4-CG2' 9.14.4-CG4'9.14.4-Ser' 9.7.2-Ser' 8.10.3-Ser' 8.10.3-CG4、8.10.3FG1 或 9.14.4G1 之抗體輕鏈的 CDR2，並 可視需要包括CDR1及/或CDR3。於某些具體實施例中，與 M-CSF結合之抗體具有與一種抗體實質上相同的kQff，該抗 體包括具有 SEQ ID NO: 2、6、10、14、18、22、26、30、 34、38、46、50、54、58、62 ' 66、70、74、78、82、86 ' 90、94、98或102之胺基酸序列重鏈變異區；或者該抗體可 包括具有 SEQ ID NO: 4、8、12、16、20、24、28、32、 36、44、48、52、56或60之胺基酸序列輕鏈變異區。於另 一較佳具體實施例中’可與M-CSF結合之抗體具有實質上 與一種抗體相同之koff，該抗體包括具有seq ID NO : 4、8、 12、16、20、24、28、32、36、44、48、52、56 或 60 之胺 基酸序列的輕鏈變異區之CDR2，並可視需要包括CDR1&/ 或CDR3 ;或者該抗體可包括具有seqidn〇: 2、6、1〇、 14、18、22、26、30、34、38、46 ' 50 ' 54、58、62、66、 95567.doc •41 · 1356063 70、74、78、82、86、90、94、98或102之胺基酸序列重鏈 變異區的CDR3，並可視需要包括CDR1及/或CDR2。 抗-M-CSF抗體對M-CSF之結合親和力及解離速率可藉本 技藝中已知之方法來測定。結合親和力可藉競爭性 ELISAs、RLAs、表面電漿共振（如藉使用BIACORE™技術） 來測量。解離速率可藉表面電漿共振來測量^較佳地，結 合親和力及解離速率可藉由表面電漿共振測量。更佳地， 結合親和力及解離速率可使用BIACORE™技術來測量。實 例VI中舉例一種可藉BIAC〇RETM技術測定抗_M_CSF單株 抗體之親和力常數的方法。 藉抗-M-CSF抗趙抑制M-CSF活性 M-CSF與c-fms結合之抑制作用 於另一具體實施例中，本發明提供一種抗_m_csf抗體， 其可抑制M-CSF與C-/WJ受體結合並阻止或預防心之活 化作用。於另一較佳具體實施例中，m_CSF屬於人類。於 另一較佳具體實施例中，抗，河/卯抗體為人類抗體。IC5〇 可經由ELISA、RLA及以細胞為主的分析（如細胞增殖試 驗、全血單核球形狀變化分析或受體結合抑制分析）進行測 里。於一具體實施例中’抗體或其可抑制細胞增殖部分藉 由細胞增殖試驗測量之^以為不超過8 〇 χ 1〇_7 M，較佳為 不超過3x1〇7m，或者更佳為不超過8xi〇_8m。於另一具 體實施例中，藉單核球形狀變化分析測量之IC5〇不超過2 χ 10 Μ ’較佳為不·超過9 〇 χ1〇·7Μ，或者更佳為不超過 1〇 Μ。於另一較佳具體實施例中，由受體結合分析測量之 95567.doc -42- IC5〇不超過2 x 1CT6 Μ，較佳為不超過8.0 χ 10_7 Μ，或者更 佳為不超過7.0 χ 1(Γ8 Μ »實例III、IV及V舉例了不同類型 之分析。 另一方面，相較於無抗體之細胞增殖情況，本發明之抗 -M-CSF抗體可抑制單核球/巨噬細胞對M-CSF反應所產生 的增殖達至少20%，更佳為40%、45%、50%、55%、60%、 65%、70〇/〇、80%、85%、90%、95%或 100% ° 製備抗體及可產生抗體之細胞株的方法 免疫 於某些具體實施例中，人類抗體之製備係對非人類動物 進行免疫，其基因組中包括含M-CSF抗原之某些或完整之 人類免疫球蛋白重鏈及輕鏈基因座。於一較佳具體實施例 中，非人類動物為愛先諾基因轉殖鼠（XENOMOUSE™)動物 (安根尼克斯公司（Abgenix Inc·)，Fremont，CA)。另一種可 利用之非-人類動物為美德瑞斯（Medarex)公司出品的基因 轉殖鼠（美德瑞斯公司，Princeton，NJ)。 愛先諾基因轉殖鼠（XENOMOUSETM)為經設計的鼠種，其 包括大片段之人類免疫球蛋白重鏈及輕鏈基因座且不產生 鼠抗體。請見如格林（Green)等人，iVaiwre Geweiics 7:13-21 (1994)及美國專利號 5,916,771、5,939,598、5,985,615、 5,998,209 ' 6,075，181、6,091，001、6,1 14,598、6，130,364、 6，162,963 及 6，150,584。亦見於 WO 91/10741 、WO 94/02602 ' WO 96/34096、WO 96/33735 ' WO 98/16654 ' WO 98/24893 ' WO 98/50433 ' WO 99/4503 1 ' WO 99/53049 > 95567.doc -43- 1356063 WO 00/09560及 WO 00/037504 中。 另一方面，本發明提供一種由非_人類、非·鼠科動物製 備抗-M-CSF抗體之方法，其係以m-CSF抗原對包括人類免 疫球蛋白基因座之非-人類基因轉殖動物來進行免疫。吾人 可使用上述引用之文件中的方法製造此種動物。敘述於這 些文件中之方法可如美國專利號5,994,619所述之方法加以 修改。美國專利號5,994,619敘述新穎之源自豬及牛的培養 内細胞團（CICM)細胞及細胞株’及已插入異源性〇να之基 因轉瘦CICM細胞之製備方法。CICM基因轉殖細胞可用於 製造經選殖的基因轉殖胚胎、胎兒及後代β，619專利中亦敘 述製造基因轉殖動物之方法，其可傳遞異源性DNa至其子 代。於較佳具體實施例中’非-人類動物為鼠、綿羊、豬、 山羊、牛或馬》 愛先諾基因轉殖鼠可產生完整人類抗體之類成人全部功 能（adult-like human repertoire)並可產生抗原特異性人類抗 體。於某些具體實施例中，愛先諾基因轉殖鼠在導入百萬 驗基大小之人類重鍵基因座及κ輕鏈基因座之種株組態酵 母人造染色體（YAC)片段後可包含近80%之人類抗體V基因 功能》於其它具體實施例中，愛先諾基因轉殖鼠進一步包 3近乎_^個人輕鍵基因座。請見曼德兹（Mendez)等人， geweizci 15:146-156 (1997)，格林及雅可布維茨
(Jakobovits) ，《/. 188:483-495(1998)及 WO 98/24893 ’其揭露内容係以引用的方式併入本文中。 於某些具體實施例中，包括人類免疫球蛋白基因之非-人 95567.doc • 44 · 1356063 類動物為具有人類免疫球蛋白·•微小基因座（minil〇cus),^ 動物》於微小基因座研究中，藉由内含源自1§基因座之單 獨基因來模擬外源性Ig基因座。依此，可將一或多種Vh基 因、一或多種DH基因、一或多種JH基因、mu固定功能部位 及第二種固定功能部位（較佳為γ固定功能部位）形成一結構 並用以插入動物體中《該研究係特別見述於美國專利號 5,545,807 > 5,545,806 ' 5,569,825 ' 5,625,126 ' 5,633,425 '
5,661,016 ' 5,770,429、5,789,650、5,814,318、5,591，669、 5,612,205、5,721，367、5,789,215及 5,643,763，其係以引用 的方式併入本文中β 另一方面，本發明提供一種製備人類化抗·μ-csf抗體之 方法。於某些具體實施例中，非-人類動物係於可允許抗體 產生之條件狀況下，以下述之M-CSF抗原免疫。可產生抗 體之細胞係分離自動物，與骨聽瘤融合以產生融合瘤，並 分離出可編碼所欲抗-M-CSF抗體之重鏈及輕鏈的核酸。隨 後使用熟諳此藝者已知及如下進一步所述之技術設計處理 · 這些核酸以降低非-人類序列含量，即，將抗體人類化以減 少人類之免疫反應。 於某些具體實施例中，M-CSF抗原為分離及/或純化之 M-CSF。於較佳具體實施例中，M-CSF抗原為人類M-CSF。 於某些具體實施例中，M-CSF抗原為M-CSF之片段《於某 些具體實施例中，M-CSF片段為M-CSF之細胞外功能部 位。於某些具體實施例中，M-CSF片段包括至少一種M-CSF 之抗原決定位。於其它具體實施例中’ M-CSF抗原為一種 95567.doc -45- 1356063 細胞’其可於表面表現或過度表現Μ-CSF或其.免疫原性片 段。於某些具體實施例中’ M-CSF抗原為一種m-CSF融合 蛋白。Μ-CSF可使用已知技術由天然來源純化。重組m csf 已有商品可提供。 動物之免疫可藉由此項技藝中已知之任何方法進行。請 見如哈勞及連恩 ’ J.j Λ/αwwα/，New
York: ColdSpring Harbor Press’ 1990。免疫非人類動物（如 小白鼠、大白鼠、綿羊、山羊、豬、牛及馬）之方法於此項 技藝中為吾人所熟知》請見如前述之哈勞及連恩，及美國 專利5,994,619號《於一較佳具體實施例中，m-CSF抗原係 與佐劑一同投藥以促進免疫反應。示範性佐劑包含佛氏 (Freund’s)完全或不完全佐劑、RIBI(胞壁醯二肽）或isc〇m (免疫刺激複合物）。此種佐劑可藉由將多肽隔離於局部沉積 中以保護多肽免於快速消失，或者其可包含能刺激宿主分 泌對巨嗟細胞有化學活性之因子及其他免疫系統組份。較 佳地’若投予多肽時，免疫計劃中可包含投予一或多次多 · 肽’延續至數週以上的時間。實例丨例示一種可於愛先諾基 因轉殖鼠中製備抗·Μ-CSF單株抗體之方法。 抗體及可產生抗體的細胞株之製備 於以Μ-CSF抗原對動物進行免疫後，可由動物獲得抗體 及/或可產生抗體的細胞。於某些具體實施例中，包含抗 -Μ-CSF抗體之企清係藉放血或犧牲動物由動物獲得。血清 可以其取自動物時之原樣直接使用，可由血清獲得一免疫 球蛋白部分，或者可由血清純化出抗_M_CSF抗體。 95567.doc -46- 1356063 於某些具體實施例中，產生抗體之永生株化細胞株係由 免疫動物所分離之細胞所製造。於免疫後，犧牲動物並將 淋巴結及/或脾臟B細胞永生株化^株化細胞之方法包含（但 不限於）以致癌基因對其進行轉移感染、以致癌基因病毒對 其進行感染、於可選擇永生細胞之條件狀況下進行培養、 以致癌性或致突變化合物處理、將其與已株化細胞（如骨髓 瘤細胞）融合以及不活化腫瘤抑制基因。請見如前述哈勞及 連恩。若採用與骨髓瘤細胞融合之方法，骨髓瘤細胞較佳 為不分泌免疫球蛋白多肽（非_分泌性細胞株）者。株化細胞 係使用M-CSF、其部分或可表現M_CSF之細胞來進行篩 選。於一較佳具體實施例中，最出的篩檢係使用酵素免疫 分析法（ELISA)或放射免疫分析法進行。EUSA篩檢實例見 於WO 00/37504,以引用的方式併入本文中。 將可產生抗-M-CSF抗體的細胞（如融合瘤）加以選擇、選 殖並進一步篩選其所需之特性，包含強勁生長力、高抗體 產量及所需之抗體特性，如下進一步討論者。融合瘤可於 同源（syngeneic)動物、缺乏免疫系統之動物（如裸鼠）的活體 内或於/¾•體外細胞培養來進行擴展。選擇、選殖及擴展融 合瘤之方法為熟諳此藝者所熟知。 於一較佳具體實施例中，該免疫動物為非-人類動物，其 可表現人類免疫球蛋白基因且脾臟B細胞可與源自非-人類 動物相同種類之骨髓瘤細胞株融合。於一更佳具體實施例 中免疫動物係炎先諾基因轉殖鼠且該骨趙瘤細胞株為一 種非-分泌性鼠骨髓瘤。於一更佳具體實施例中，骨髓瘤細 95567.doc -47· 1356063 胞株為P3-X63-AG8-653。請見如實例卜 因此於一具體實施例中，本發明可提供製備能產生針對 M-CSF的人類單株抗體或其片段之細胞株的方法，其包 括：⑷以M-CSF、M-CSF部分或可表現M_CSF之細胞或組 織對在此所述之非-人類基因轉殖動物進行免疫；（b)使基因 轉殖動物進行__CSF之免疫反應：⑷由基因轉殖動物分 離B淋巴細胞’·（(1)永生株化b淋巴細胞；（幻產生株化b淋巴 細胞之獨立單株細胞群；及（f)筛選株化之B淋巴細胞以確認 針對M-CSF之抗體。 另一方面，本發明係提供可產生人類抗_MCSF抗體之融 合瘤。於一較佳具體實施例中，該融合瘤為如上述之鼠融 〇瘤。於其它具體實施例中，該融合瘤可於非-人類，非-鼠 物種中製備，如大白鼠綿羊、豬、山羊、牛或馬。於另一 具體實施例中’該融合瘤為人類融合瘤。 於另較佳具體實施例中，基因轉殖動物係以M-CSF進 灯免疫，原始細胞（如脾臟或周圍血球細胞）係由免疫基因轉 瘦動物分離出並確認能產生可針對所欲抗原之特定抗體之 單獨細胞。將源自各獨立細胞之聚腺苷酸化mRNA加以分離 並進行反轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR)，將正向引子與變異 區序列融合’如可識別大部分或全部人類重鏈與輕鏈變異 基因 "p U Ί ^ 區的退化（degenerate)引子及可融合至固定或 區 s ϊ u之反向引子。隨後將重鏈與輕鏈變異區之 cDNAs加以選殖並表現於任何適當宿主細胞中（如骨髓瘤 、細胞）所表現之嵌合型抗體擁有個別的免疫球蛋白固定 95567.doc -48- 1356063 £ ’如重鍵及K或λ固尤功能部位β請見巴布科克
(Babcook) ’ J.S.等人，如 uSA 93:7843-48, 1996,其係以引用的方式併入本文中。然後以 在此所述方法確任並分離抗M-CSF抗體》 於另一具體實施例中，嗟菌體展示技術可用於提供包含 全部功能及具有各種M-CSF親和力之抗體庫。為製備該類 產品’不需將源自免疫動物之Β細胞加以永生株化，反之， 原始Β細胞即可直接做為DNA來源。得自Β細胞（如源自脾 臟）之cDNAs混合物可用於製備表現庫，如轉移感染至大腸 桿菌（E. coli)之噬菌體展示庫。測試所產生細胞對M_cSFi 免疫活性❶可自該表現庫鑑別出高親和力人類抗體的技術 係見述於葛瑞菲斯（Griffiths)等人，五乂，13:3245-3260 (1994);尼西姆（Nissim)等人，出處同上，692_698頁及葛瑞 菲斯等人’出處同上，12:725_734。最後，自源自表現庫之 選殖株中確認出可對抗原產生所欲強度的結合親和力者， 並將可編碼負責該結合之產物的DNA加以回收及用以操作 標準重組表現。噬菌體展示庫亦可使用先前處理過之核苷酸 序列來建構並以類似方式進行篩選。可編碼重鏈及輕鏈之 cDNAs通常係獨立提供或連接形成Fv類似物以供噬菌體庫 生產。 隨後於㈣體庫中篩選對财㈣有最高親和力之抗體 並由適當選殖方法收集遺傳基因物f。更多次㈣選可增 加所分離原始抗體的親和力。 另一方面，本發明係提供可產生人類抗-M-CSF抗體之融 95567.doc •49· 1356063 s瘤於較佳具體實施例中，該融合瘤為如上所述之鼠 融α瘤。於其它具體實施例中，該融合瘤可於非-人類、非-鼠 物種(如大白鼠、綿羊、豬、山羊、牛或馬)中製造。於另一 具體實％例中，該融合瘤為人類融合瘤。 製作抗體之核酸、載趙、宿主細胞及重组方法 核酸 本發明亦包含可編碼抗·M_CSF抗體之核酸分子。於某些 具體實施例中’由不同核酸分子編碼抗-M-CSF免疫球蛋白 之重鏈及輕鏈。於其它具體實施例中，同樣的核酸分子可 編碼抗-M-CSF免疫球蛋白之重鏈及輕鏈。於一具體實施例 中’核酸可編碼本發明之M_csf抗體。 於某些具體實施例中，可編碼輕鏈的變異功能部位之核 酸分子包括人類％ L5、〇12、L2、Β3、Α27基因及、 Ja：3或J&4基因。 於某些具體實施例中，可編碼輕鏈之核酸分子可編碼比 種株胺基酸序列多包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個 突變之胺基酸序列。於某些具體實施例中，其核酸分子所 包括的核苷酸序列可編碼出比種株序列多包括1、2、3、4、 5、6、7、8、9或10個非·保留性胺基酸取代基及/或j、2或3 非-保留性取代基之VL胺基酸序列。取代基可位於cdr區、 框構區’或於固定功能部位中。 於某些具體貫施例中’核酸分子可編瑪出比種株序列多 包括一或多種變異之VL胺基酸序列，其中該種株序列與見 於下列抗體252、88、1〇〇、3.8.3、2.7.3、1.120.1、9.14.41、 -50- 95567.doc ΓΙ356063 8.10.3F、9.7.2IF、9.14.4、8.10.3、9.7.2、9.7.2C-Ser、 9.14.4C-Ser 、 8.10.3C-Ser 、 8.10.3-CG2 、 9.7.2-CG2 、 9.7.2-CG4、9.14.4-CG2、9.14.4CG4、9.14.4-Ser、9.7.2-Ser、 8.10.3-Ser、8.10.3-CG4、8.10.3FG1 或9.14.4G1其中之一的 VL之種類相同。
於某些具體實施例中，與見於抗體252、88、100、3.8.3、 2.7.3、1.120.1、9.14.4、8.10.3 或 9.7.2之一的 VL之種株序列 相較，其核酸分子可編碼至少三種胺基酸突變》 於某些具體實施例中，該核酸分子包括一種核苷酸序 列，其可編碼單株抗體252(SEQIDNO: 4)、88(SEQIDNO : 8)、100(SEQ ID NO: 12)、3.8.3(SEQ ID NO: 16)、2.7.3(SEQID NO:20)、1.120.1(SEQIDNO:24)、9.14.4I(SEQIDNO: 28) > 8.10.3F(SEQID NO ： 32) ' 9.7.2IF(SEQID NO ： 36) '
9.14.4(SEQID NO: 28)、8.10.3(SEQID NO: 44)、9.7.2(SEQID NO : 48)、9.7.2C-Ser(SEQID NO : 52)、9.14.4C-Ser(SEQID NO ： 56) > 8.10.3C-Ser(SEQID NO ： 60) ' 8.10.3-CG2(SEQ ID · NO : 60)、9.7.2-CG2(SEQID NO : 52)、9.7.2-CG4(SEQID NO ： 52) ' 9.14.4CG2(SEQID NO ： 56) ' 9.14.4-CG4(SEQID NO: 5 6)、9.14.4-Ser(SEQID NO: 28)、9.7.2-Ser(SEQID NO : 48) ' 8.10.3-Ser(SEQID NO ： 44) > 8.10.3-CG4(SEQ IO NO ： 60)、8.10.3FG1(SEQID NO : 32)或 9.14.4G1(SEQID NO : 28) 之VL胺基酸序列或其部分。於某些具體實施例中，該部分 至少包括CDR2區。於某些具體實施例中，核酸可編碼該抗 體之輕鏈CDRs的胺基酸序列。於某些具體實施例中，該部 • 51 - 95567.doc rI356063 分為包括CDR1-CDR3之連續部分。 於某些具體實施例中之核酸分子包括一種核苦酸序列， 其可編碼下列 SEQ IDNOS : 4、8、12、16、20、24、28、 36 44 48 ' 52 ' 56或60之一的輕鏈胺基酸序列。於 某些較佳具體實施例中，核酸分子包括SEq id N〇s : 3、7、 11、27 ' 31、35、43或47之輕鏈核苷酸序列或其部分。 於某些具體實施例中之核酸分子所編碼之乂胺基酸序列 至少具有與下列各物7〇%、75%、8〇%、85%、9〇%、95%、 97%、98%或99%的相同度：顯示於圖iiVL胺基酸序列或抗 體 252、88、1〇〇、3.8·3、2·7·3、i 12〇 卜 9 14 4Ι、8 1〇 3ρ、 9.7.2IF、9.14.4、8.10.3、9.7.2、9.7.2C-Ser、9.14.4C-Ser、 8.10.3C-Ser、8.10.3-CG2、9.7.2-CG2、9.7.2-CG4、 9.14.4-CG2、9.14.4-CG4、9.14.4-Ser、9.7.2Ser、8.10.3-Ser、 8-10,3-CG4、8.10.3FG1 或 9.14.4G1 中任一種抗體之 Vl 胺基 酸序列’或任一 SEQ ID NOS : 4、8、12、16、20、24、28、 32、36、44、48、52、56或60之胺基酸序列。本發明核酸 鲁 分子包含核酸，其可於高度嚴格條件環境（如上所述中）與下 列各物進行雜交：可編碼SEQ ID NOS : 4、8、12、16、20、 24、28、32、36、44、48、52、56或60之輕鏈胺基酸序列 或具有 SEQIDNOS :3、7、11、27、31、35、43 或 47 之輕 鍵核酸序列的核酸序列。 於另一具體實施例中，該核酸可編碼選自下列所組成之 群的抗體之完整輕鏈：252、88、100、3.8.3、2.7.3、1.120.1、 9·14·4Ι、8.10.3F、9.7.2IF、9·14·4、8·10·3、9·7·2、9.7.2C-Ser、 -52- 95567.doc 1356063 9.14.4C-Ser、8.10.3C-Ser、8.10.3-CG2、9.7.2-CG2、 9.7.2-CG4、9.14.4-CG2、9.14.4-CG4、9.14.4-Ser、9.7.2-Ser、 8.10.3-Ser、8.10.3-CG4、8.10.3?〇1或9.14.4〇1或是一包括 SEQ ID NOS : 4、8、12、16、20、24、28、32、36、44、 48、52、56或60之胺基酸序列的輕鏈及輕鏈固定區，或者 包括突變之輕鏈。此外，該核酸可包括SEQ ID NOS : 3、7、 11、27、31、35、43或47之輕鏈核苷酸序列及可編碼輕鏈固 定區之核苷酸序列，或可编碼包括突變之輕鏈的核酸分子。 於另一較佳具體實施例中，該核酸分子可編碼重鏈（VH) 之變異功能部位’其中該重鍵（Vh)包括一人類Vh 1-18、 3-33、3-11、3-；23、3-48或3-7基因序列或由其所衍生之序 列。於不同具體實施例中’核酸分子包括一人類Vh 1 -18 基因、一 DH4-23基因及一人類JH4基因；一人類vH 3-33基 因、一人類DHl-26基因及一人類JH4基因；一人類VH 3-11 基因、一人類DH7-27基因及一人類JH4基因；一人類VH 3-11 基因、一人類DH 7-27基因及一人類JH6基因；一人類VH 3-23 基因、一人類Dh1-26基因及一人類jh4基因；一人類Vh3-7 基因、一人類Dh6-13基因及一人類jh4基因；一人類vh3-11 基因、一人類Dh7-27基因及一人類jH4b基因；一人類Vh3-48 基因、一人類Dh卜26基因5及一人類jH4b基因；一人類 Vh3-11基因、一人類dh6-13基因及一人類jH0b基因或一源 自人類基因之序列》 於某些具體實施例中，相較於人類V、D或j基因之種株 胺基酸序列，該核酸分子所編碼之胺基酸序列包括〖、2、3、 95567.doc -53- 1356063 94、98或102之重鏈胺基酸序列的核苷酸序列，或為具有 SEQ ID NOS : 1、5、9、25、29、33、37、45、97或 101 之 核苷酸序列的核酸。 於另一具體實施例中，該核酸可编碼選自252、88、100、 3.8.3、 2.7.3、1.120.1、9.14.41、8.10.3F、9.7.2IF、9.14.4、 8.10.3、 9.7.2、9.7.2C-Ser、9.14.4C-Ser、8.10.3C-Ser、 8.10.3- CG2 、9.7.2-CG2、9.7.2-CG4、9.14.4-CG2、 9.14.4- CG4、9.14.4-Ser、9.7.2-Ser、8.10.3-Ser、8.10.3-CG4、 8.10.3FG1或9.14.4G1之抗體的完整重鏈，或具有SEQ ID NOS : 2、6、10、14、18、22、26、30、34、38、46 ' 50、 54 、 58 、 62 、 66 、 70 、 74 、 78 、 82 、 86 、 90 、 94 、 98或102 之胺基酸序列的重鏈及重鏈之固定區，或包括突變之重 鏈。此外，該核酸可包括SEQ ID NOS : 1、5、9、25、29、 33、37、45、97或101之重鏈核苷酸序列及可編碼輕鏈固定 區之核苷酸序列或可編碼包括突變之重鏈的核酸分子。 可編碼抗-M-CSF抗體之重鏈或完整輕鏈或其部分之核 酸分子可由任何能產生此種抗體之來源分離。於不同具體 實施例中’核酸分子係由以M-CSF免疫之動物所分離之B細 胞分離或由源自此種可表現抗—M-CSF抗體之B細胞的株化 細胞所分離出。分離可編碼抗體之mRNA的方法於此項技藝 中為吾人所熟知。請見如山姆布魯克等人，mRNA可用於產 生cDNA以供用於聚合酶連鎖反應（pCR)或抗體基因之 cDNA選殖。於一較佳具體實施例中，該核酸分子係分離自 一融合瘤’該融合瘤的融合成員之一為來自非_人類基因轉 • 56· 95567.doc 1356063 殖動物的可產生人類免疫球蛋白之細胞。於一更佳具體實 施例t，可產生人類免疫球蛋白之細胞係由基因轉殖動物 分離。於另一具體實施例中，可產生人類免疫球蛋白之細 胞係源自如上述之非-人類、非_鼠基因轉殖動物。於另一具 體實施例中，核酸係分離自非_人類、非_基因轉殖動物。也 可採用分離自非-人類、非-基因轉殖動物之核酸分子，如人 類化抗體。 於某些具體實施例中，可編碼本發明抗M-CSF抗體重鏈 之核酸包括可編碼本發明Vh功能部位之核苷酸序列，其於 框構内與得自任何來源之可编碼重鏈固定功能部位的核苷 酸序列相接合。同樣地，可編碼本發明抗_m_csf抗體輕鍵 之核酸分子包括可編碼本發明V L功能部位之核苷酸序列也 於框構内與得自任何來源可編碼輕鏈固定功能部位之核皆 酸序列相接合。 於本發明更進一步之觀點，可編碼重鏈（VH)及輕鏈（VL) 變異功能部位之核酸分子係轉化為完整之抗體基因。於一 _ 具體實施例中，可編碼VH4 VL功能部位之核酸分子係藉插 入表現性載體轉化為完整之抗體基因，其令該表現性載體 已可分別編碼重鏈（CH)或輕鏈（cL)之固定功能部位，以便 部分可經人工操作連接至載體中之Ch部分’而Vl部分可 經人工操作連接至载體中之Cl部分。於另一具體實施例 中’可編碼VH及/或VL功能部位之核酸分子能藉連接作用轉 化為完整抗體基因，如使用標準分子生物技術黏接可編碼 vH及/或vL功能部位之核酸分子及可編碼Ch及/或Cl功能部 95567.doc •57· 1356063 位之核酸分子。人類重鏈及輕鏈免疫球蛋白固定功能部位 基因之核酸序列已為此項技藝中所知。請見如卡巴特等 人 ’ Sequences of Proteins of Immunological Interest，第 3 版，见故PW/，No. 91-3242，1991。能編碼完整重鏈及/或 輕鏈之核酸分子接著可導入細胞中進行表現並分離抗 -M-CSF 抗體。 該核酸分子可用於重組性表現大量之抗—M-CSF抗體。該 核酸分子亦可用於製備嵌合型抗體、雙特異性抗體、單鏈 抗體、免疫連結物、二聚體、突變的抗體及抗體衍生物， 請見以下進一步敘述。若核酸分子係源自非人類、非_基因 轉殖動物，該核酸分子可用於進行抗體人類化作用，其亦 見述於下。 於另一具體實施例中，本發明核酸分子可做為特定抗體 序列之探針或PCR引子。例如’該核酸可於診斷方法中做 為探針或做為PCR引子以放大可使用之〇να區，特定言 之，用以分離可編碼抗-M-CSF抗體之變異功能部位的附加 核酸分子。於某些具體實施例中，該核酸分子為寡核苷酸。 於某些具體實施例中，寡核苷酸係來自所欲抗體之重鏈與 輕鏈的高度變異區。於某些具體實施例中，寡核苷酸可編 碼下列抗體之一或多種CDRS的全部或部分：抗體252、88、 100、3.8.3、2.7.3或1.120.1或其在此所述之變異株。 載體 本發明提供包括核酸分子之載體，該核酸分子可編碼本 發明之抗-M-CSF抗體的重鏈或其抗原結合部分。本發明亦 95567.doc ，58· 1356063 k供包括核酸分子之费體兮技& m額㈣酸分子可編碼該抗體之輕 鏈或其抗原結合部分。本發明尚提供包括核酸分子之載 體’該核酸分子可編碼融合蛋白、經修飾抗體、抗體片段 及其探針。 於某些具體實施例t，本發明抗-M_CSF抗體或其抗原結 合部分之表現可藉將可編碼部分或完整輕鏈及重鏈之 DNAs(如前述方法㈣）插人至表現性載體中以便該基因可 經人工操作連接至必需之表現性控制序列（如轉錄及轉譯 控制序列）。表現性載體包含質體、反轉錄病毒、腺病毒' 腺相關病毒（AAV)'植物病毒如花椰菜嵌紋病毒、菸草嵌紋 病毒、粘接質體、YACs、EBV衍生之游離基因及類似物。 該抗體基因可連接至載體以便載體内之轉錄及轉譯控制序 列提供其所需之調節抗體基因轉錄及轉譯作用。所選擇的 表現性載體及表現性控制序列應能相容於所採用之表現性 宿主細胞。該抗體輕鍵基因及抗體重鍵基因可插入不同的 載體中。於一較佳具體實施例中’兩種基因係皆插入相同 · 表現性載體中。該抗體基因可藉標準方法（如連接抗體基因 片段及載體上之互補限制性部位，或者若無限制性部位則 採鈍端接合反應）插入表現性載體中。 一種便利的載體為可編碼功能性之完整人類CH或CL免疫 球蛋白序列，並具有適當設計之限制部位以便任何VH或VL 序列可容易地插入及表現，如前所述。於此種載體中，接 合點通常發生於插入之J區中接合供體部位以及為於人類C 功能部位前之接合受體部位之間’且亦發生在人類CH表現 95567.doc -59- 1356063 序列中所產生之接合區。聚腺苷酸化作用及轉錄終止發生 於編碼區下游之天然染色體部位。重組表現性載體亦可編 碼一種訊息肽，其可促進抗體鏈由宿主細胞分泌。該抗體 鏈基因可選殖入載體中以便訊息肽可在框構内連接至該免 疫球蛋白鏈之胺基端。訊息肽可為免疫球蛋白訊息肽或異 種的訊息肽（即一源自非-免疫球蛋白蛋白質之訊息肽）。 除抗體鏈基因外，本發明之重組表現性載體攜帶可控制 宿主細胞中抗體鏈基因表現性的調節序列。熟諳此藝者應 瞭解表現性載體的設計（包含選擇調節序列）應依據的因子 有所選擇用以轉化的宿主細胞、所需之蛋白質表現程度 等。對哺乳動物宿主細胞表現而言，較佳的調節序列包含 可指揮哺乳動物細胞高量蛋白質表現的病毒成份，如起源 自反轉錄病毒LTRs、細胞巨大病毒（CMV)(如CMV啟動基因 /增強子）、猿病毒40(SV40)(如SV40啟動基因/增強子）、腺 病毒（如腺病毒主要延遲啟動基因（AdMLP))、多瘤病毒及強 力哺乳動物啟動基因（如天然免疫球蛋白及肌動蛋白啟動 基因）之啟動基因及/或增強子。進一步敘述病毒調節元件及 其序列，請見如美國專利號5，168,062、美國專利號4,510,245 及美國專利號4,968,615。可於植物中表現抗體之方法，包 含啟動基因及載體之敘述，以及植物的轉化已為本技藝所 知。請見如美國專利第6,5 17,529號，其以引用的方式併入 本文中。可於細菌細胞或真菌細胞（如酵母細胞）中表現多肽 之方法亦於此項技藝中為吾人所熟知。 除抗體鏈狀基因及調節序列外，本發明之重組表現性載 95567.doc •60· 1356063 體可運送附加之序列，如能調配宿主細胞中載體複製之序 列（如複製起源）及可選擇標記基因。可選擇標記基因可幫助 選擇已導入載體之宿主細胞（請見如美國專利號 4,399’2 16、4,634,665及5，179,0 17)。如典型之選擇性標記基 因會對其所導入的宿主細胞賦予對藥物（如G418、效高黴素 或甲胺蝶呤）的耐受性。較佳之選擇性標記基因包含二氫葉 酸還原酶（DHFR)基因（用於具有甲胺蝶呤選擇性/放大作用 之dhfr-宿主細胞）、抗新黴素基因（用於G418選擇）及穀胺酸 合成酶基因。 重组ί產蛋白質之非-融合瘤宿主細胞及方法 可編碼抗-M-CSF抗體之核酸分子及包括這些核酸分子 之載體可用來轉移感染適當的哺乳動物、植物、細菌或酵 母宿主細胞。轉化可藉任何已知方法將多核苷酸導入至宿 主細胞中。將異質多核苷酸導入哺乳動物細胞中之方法於 本技藝中為吾人所熟知，且其包含葡聚醣·媒介轉移感染、 磷酸鈣沉澱物、凝聚胺（p〇lybrene)_媒介轉移感染、原生質 融合、電穿孔法、將多核苷酸封裝於脂質體中及直接顯微 注射DNA至核中。此外，核酸分子可藉病毒載體導入至哺 乳動物細胞種。轉化細胞方法於此項技藝中為吾人所熟 知。凊見如美國專利號4,399，216、4,912,040、4,740,461及 4,959,455(這些專利係以引用的方式併入本文中）。轉化植 物細胞方法於此項技藝中為吾人所熟知，包含如土壤桿菌 (Agrobacterium)-媒介轉化、拜歐力司提克（bi〇listic)轉化、 直接;主射、電穿孔法及病毒轉化。轉化細菌及酵母細胞之 95567.doc -6卜 1356063 方法於此項技藝中亦為吾人所熟知。 可供作表現宿主之哺乳動物細胞株於此項技藝中為吾人 所熟知’且包含許多來自美國菌種保存中心（(American Type Culture Collection) ATCC)之株化細胞株。這些包含， 特定言之’中國倉鼠卵巢細胞（CHO)細胞、NSO、SP2細胞、 HeLa細胞、幼倉鼠腎（BHK)細胞、猴子腎細胞（c〇S)、人類 肝細胞癌細胞（如Hep G2)、A549細胞及一些其它的細胞 株。特定較佳細胞株的選擇係根據測定那一種細胞株具有 高程度表現。其它可使用之細胞株為昆蟲細胞株，如Sf9細 胞。為產生抗體，將可編碼抗體基因之重組表現性載體導 入哺乳動物宿主細胞後，培養宿主細胞一段時間使其足以 表現抗體，或者更佳地，抗體可分泌至宿主細胞所生長之 培養基中。抗體可使用標準蛋白質純化方法由培養基中回 收。植物佰主細胞包含如煙草（Nicotiana)、阿拉伯芬 (Arabidopsis)、浮萍、玉米、小麥、馬鈴薯等。細菌性宿主 細胞包含大腸桿菌（E. c〇n)及鏈黴菌屬（strept〇myces species)。酵母宿主細胞包含裂殖酵母菌 (SchiZ〇SaCChar〇myces P〇mbe)、酒酵母（Sacchar〇myces cerevisiae)及嗜甲醇酵母菌（pichia past〇ris)。 此外，源自製備細胞株之本發明抗體（或其它所屬部分） 的表現可使用-些已知技術來提高。如麩醯胺酸合成酶基 因表現系統(GS系統)為一種於某些條件下常見之加強表現 的方法。有請系統全部或部分的討論可見歐洲專利號〇 2 16 8 4 6、0 2 5 6 〇 s s « λ ，、^ 323 997與歐洲專利公告案號 95567.doc -62- 1356063 89303964.4 〇 由不同細胞株或基因轉殖動物表現之抗體可能會具有彼 此不同的蛋白質醣化作用。然而，所有由在此所提供的核 酸分子所編碼的抗體或包括在此所提供的胺基酸序列皆為 本發明之部分，無論抗體之蛋白質醣化狀態或模式或改變。 基因轉殖動物及植物
本發明之抗-M-CSF抗體亦可以基因轉殖方式經由哺乳 動物或植物來產生，其係以基因轉殖將所欲之免疫球蛋白 重鏈及輕鏈序列導入哺乳動物或植物並由此製備可復原型 式之抗體。有關於哺乳動物之基因轉殖生產，抗-M-CSF抗 體可由山羊奶、牛奶或其它哺乳動物的乳汁製造及取得。 請見如美國專利號 5,827,690、5,756,687、5,750，172 及 5,741，957。於某些具體實施例中，以如上述之m-CSF或其 免疫原性部分對包括人類免疫球蛋白基因座之非人類基因 轉殖動物進行免疫。於植物、酵母或真菌/藻類中製備抗體 之方法見述於如美國專利號6,〇46,037及5,959,177中。 於某些具體實施例中’非-人類基因轉殖動物或植物之製 備係藉標準基因轉殖技術導入一或多種可編碼本發明抗 -MCSF抗體之核酸分子至動物或植物中。請見霍根（H〇gan) 及美國專利號6,417,429 ’如前所述》用於製造基因轉殖動 物之基因轉殖細胞可為胚胎幹細胞或體細胞細胞。基因轉 殖之非-人類生物可為嵌合型、非嵌合型異合子及非嵌合型 同合子。請見如霍根等人’ .. 乂 ，Cold Spring Harbor 95567.doc -63· 1356063
Press (1999);傑克遜（Jackson)等人，Mowje Transgenic . A Practical Approach > Oxford University Press(2000);及平克特（Pinkert)，rrflwjgM/c Technology ： A Laboratory Handbook > Academic /Vew(i999)e於某些具體實施例中，基因轉殖之非_人類動 物含有一標的分裂處並可藉能編碼所欲之重鏈及/或輕鏈 的標的結構來加以置換。於一較佳具體實施例中，基因轉 殖動物包括並可表現能編碼可與M-CSF行特異性結合之重 鏈及輕鏈核酸分子，較佳為人類M-CSF。於某些具體實施 例中’基因轉殖動物包括可編碼經修飾之抗體（如單鏈抗 體、欺合型抗體或人類化抗體）的核酸分子。抗_M_CSF抗體 可於任何基因轉殖動物中製造。於一較佳具體實施例肀， 非-人類動物為小白鼠、大白鼠、綿羊、豬、山羊、牛或馬。 非-人類基因轉殖動物可於血液、乳汁、尿液、唾液、淚液、 黏液及其它體液中表現該經編碼之多肽。 嗤菌體展示庫 本發明提供一種製備抗-M-CSF抗體或其抗原結合部分 之方法’其步驟包括於噬菌體合成人類抗體庫，筛選含有 M-CSF或其部分之抗體庫，分離可與M_CSF結合之噬菌 體，並由該噬菌體取得抗體。以實例說明，一種製備抗體 庫供用於噬菌體展示技術步驟之方法包括以M_CSF或其抗 原部分免疫包括人類免疫球蛋白基因座之非·人類動物以 便引起免疫反應，由經免疫之動物抽取可產生抗體的細 胞；由該抽取細胞分離出RNA，將RNA反轉錄以產生 95567.do, • 64 - 1356063 cDNA，使用引子放大cDNA，並將cDNA插入噬菌體展示載 體以便於抗體可於噬菌體上表現。本發明之重組抗-M-CSF 抗體可以此方式獲得。 本發明之重組抗-M-CSF人類抗體可藉篩選重組之組合 抗體庫來分離。該抗體庫較佳為scFv噬菌體展示庫，其係 使用由B細胞所分離之mRNA所製備的人類VL及VH CDNAS 所產生。可製備及篩選此種抗體庫之方法為此項技藝中已 知。已有可供產生噬菌體展示庫之商品化套組（如法瑪西亞 重組噬菌體抗體系統，目錄號27-9400-01 ;及史崔塔金 (Stratagene)SurfZAP嗟菌體展示套組，目錄號240612)。亦 有其它可用於產生及篩選抗體展示庫之方法及試劑（請見 於如美國專利號5,223，409、PCT公告號WO 92/18619、WO 91/17271、WO 92/20791、WO 92/15679、WO 93/01288、 WO 92/01047、WO 92/09690、福斯（Fuchs)等人， Bio/Technology 9:1370-1372 (1991);黑（Hay)等人，//Mm. Antibod. Hybridoma 3:81-85(1992) \ #- M (Huse) A » «Sc/ence 246:1275-1281 (1989);邁克凱弗帝（McCafferty)等 人，iVaiwre 348··552-554 (1990);葛瑞菲斯等人，五Μβ〇 J· 12:725-734(1993);霍金斯（Hawkins)等人，·/· Mo/· 5/〇/· 226:889-896(1992);克雷克遜（Clackson)等人，Nature 352:624-628(1991);格蘭（Gram)等人，iVoc. d cat/. USA 89:3576-3580(1992);蓋瑞德（Garrad)等人， Bio/Technology 9:1373-1377(1991);胡見本（Hoogenboom) 等人，/Jet 19:4133-4137(1991);及巴爾巴斯 95567.doc -65· 1356063 (Barbas)等人，Proc. Λ^"· dead. Scz.· USA 88:7978-7982 (1991)。 於一具體實施例中，為分離具有所需特性之人類抗 -M-CSF抗體，首先採用在此所述之人類抗-M-CSF抗體來選 擇對M-CSF具有類似結合活性之人類重鏈及輕鏈序列，其 使用見述於PCT公告號WO 93/06213中之抗原決定位銘刻 (imprinting)法。運用於此方法中之抗體庫較佳為scFv抗體 庫，其製備及篩選係見述於PCT公告號W0 92/01047,邁克 凱弗帝等人，348:552-554 (1990);及葛瑞菲斯等人， 五M50 J. 12:725-734 (1993)。scFv抗體庫較佳係使用人類 M-CSF做為抗原來篩選。 一旦選定最初之人類VL與VH功能部位，即可進行”混合及 配對"試驗，其中不同對之最初選擇VL及VH部分經過M-CSF 結合之篩選以選出較佳VL/VH配對結合。此外，為進一步改 善抗體品質，較佳VL/VH配對之VL及VH部分可隨意產生突 變，較佳為VH及/或之CDR3區内，其方法類似活體内體 細胞突變過程，其係歸因於自然免疫反應過程中抗體之親 和力成熟之故。這種生體外親和力成熟可藉使用個別配合 VH CDR3或VL CDR3之PCR引子放大VH及VL功能部位來達 成，其中該弓丨子之某些位置已經攙入四種核苷酸鹼基之隨機 混合物以便所產生之可編碼VH及VL部分的PCR產物可將隨 機突變導入VH及/或Vl CDR3區。這些隨機突變的VH及 部分可再次進行與M-CSF結合篩選。 由重組免疫球蛋白展示庫篩選及分離出本發明抗 95567.doc -66- 1356063 -Μ-CSF抗體之後， 碼選定抗體之核酸 由展示包（如由噬菌體基因組）回收可編 ’並藉標準重組DNA技術次選殖入其他 表現性載體。若需要時，該核酸可進一步如上述加以操作 以產生其它本發明抗體型式。為表現由篩選組合庫所分離 之重組人類抗體，以如上述方法將可編碼抗體之dna選殖 入重組表現性載體並導入哺乳動物宿主細胞中，。 抗體種類轉變 本發明另一觀點係提供一種方法，其可將抗_M-CSF抗體 之種類或亞類轉變為另一種種類或亞類。於某些具體實施 例中，使用此項技藝中為吾人所熟知之方法來分離出可編 碼vL或vH但不包含任何可編碼Cl4 Ch之核酸序列的核酸 分子。接著將該核酸分子經人工操作連接至可編碼所需之 免疫球蛋白種類或亞類之C L或C Η的核酸序列。其可藉由使 用載體或包括CL或CH鏈之核酸分子來達成，如前述方法。 如原本為IgM之抗-Μ-CSF抗體可轉變種類成為一種〗gG。此 外’種類轉變可用於將IgG亞類轉變為另一種，如由IgG1 φ 轉變為IgG2。另一製備包括所需同型物之本發明抗體的方 法之步驟包括分離可編碼抗-Μ-CSF抗體之重鍵及可編碼 抗-Μ-CSF抗體之輕鏈的核酸，分離該可編碼vH區之序列， 連接VH序列至可編碼所需之同型物的重鍵固定功能部位之 序列，於細胞中表現出輕鏈基因及重鏈結構，並收集所需 同型物種類的抗-Μ-CSF抗體。 於某些具體實施例中’原本位於本發明抗-Μ-CSF抗體重 鍵位置228(根據歐洲編號會儀（EU-numbering convention) 95567.doc -67- 1356063 計算）之絲胺酸被換成脯胺酸。因此，IgG4之Fc區中的CPSC 次-序列變為CPPC，其係IgGl中的次-序列（阿爾博斯 (Aalberse) ’ R.C.及舒爾曼（Schunrman)，J.，少， 105:9-19(2002))。如位於 SEQ ID NO : 46之殘基 243(其相當 於歐洲編號會議中之殘基228)的絲胺酸可變為脯胺酸。同 樣地，位於SEQ ID NO: 3 8之殘基242(其相當於歐洲編號會 議中之殘基228)的絲胺酸可變為脯胺酸。於某些具體實施 例中，IgG4抗體之框構區可回復突變成為種株框構序列。 某些具體實施例同時包括框構區之回復-突變及Fc區之絲 胺酸變為脯胺酸。請見如表1中之SEQ ID NO : 54(抗體 9.14.4C-Ser)及 SEQ ID NO : 58(抗體 8.10.3C-Ser)。 去免疫化抗體 另一製備具有減低免疫原性抗體的方法為抗體去免疫 化。於本發明另一觀點中，抗體可使用見述於如PCT公告 WO 98/52976及WO 00/343 17號中（其全文係以引用的方式 併入本文中）之技術來進行去免疫化。 突變的抗體 於另一具體實施例中，核酸分子、載體及宿主細胞可用 於製備突變的抗-M-CSF抗體。該抗體於重鏈及/或輕鍵之變 異功能部位產生突變’如改變抗體之結合特性。如突變可 於一或多個CDR區中產生以增加或減少抗體對m-CSF之 KD，以增加或減少k()ff，或者改變抗體之結合親和性。定點 突變技術於此項技藝中為吾人所熟知。請見如山姆布魯克 等人及奧斯貝爾等人，如上述。於一較佳具體實施例中， 95567.doc -68 · 1356063 突變係發生在一位於抗·Μ·〇：δ]ρ抗體之變異功能部位的胺 基酸殘基上，其相較於種株而言已知被轉換。於另一具體 實施例中，一或多個突變係發生在一位於變異功能部位之 CDR區或框構區’或於單株抗體252、88、1〇〇、3 8 3、2 7 3、 1.120」、9.14.41、8.10.3F、9.7.2IF、9.14.4、8.10_3、9.7.2、 9.7.2C-Ser、9.14.4C-Ser、8,10.3C-Ser、8.10.3-CG2、 9.7.2- CG2、9.7.2-CG4、9.14.4CG2、9.14.4-CG4、9.14.4-Ser、 9.7.2- Ser、8.10.3-Ser、8.10.3-CG4、8.10.3FG1 或 9.14.4G1 之固定功能部位中的胺基酸殘基，其相較於種株而言已知 被轉換。於另一具體實施例_，一或多個突變發生在一胺 基酸殘基，且相較於下列各胺基酸序列，已知該胺基酸殘 基會被改變：選自 SEQ ID NOS : 2、6、10、14、18、22、 26、30、34、38、46、50、54、58、62、66、70、74、78、 82、86、90、94、98或102之重鏈胺基酸序列的變異區之CDR 區或框構區的種株，或者其出現於SEQ ID NOS : 1、5、9、 25、29、33、37、45、97或101中之重鏈核苷酸序列。於另 一具體實施例中，一或多種突變係發生於一胺基酸殘基， 相較於下列各胺基酸序列，已知該胺基酸殘基會被改變：選 自 SEQ ID NOS: 4、8、12、16、20、24、28、32、36、44、 48、52、56或60之輕鏈胺基酸序列的變異區之CDR區或框 構區的種株或出現於SEQ ID NOS :3、7、11、27、31、35、 4 3或4 7之輕鏈核苷酸序列。 於一具體實施例中，框構區已經突變以便於所產生之框 構區具有符合種株基因之胺基酸序列。突變可於框構區或 95567.doc •69· 1356063 固定功能部位產生以增加抗-M-CSF抗體之半衰期。請見如 PCT公告號WO 00/09560，其以引用的方式併入本文中。於 框構區或固定功能部位產生之突變亦可用以改變抗體的免 疫原性，以提供一位置，其可供共價或非_共價結合至另一 分子，或改變如補體結合之特性、FcR結合及抗體依賴型 細胞-媒介細胞毒性（ADCC)。如本發明，單一抗體可於任何 一或多處CDRs或變異功能部位或固定功能部位之框構區 產生突變。 於某些具體實施例_，相較於突變之前的抗_M_CSF抗% 體’在突變之抗M-CSF抗體中有由1至8個（包含其間任何數 字）的胺基酸突變位於VH或VL功能部位。於上述任何突變之 中’其可於一或多種CDR區中產生。而且，任一突變皆可 為保留性胺基酸取代基。於某些具體實施例中，其固定功 能部位含有不超過5、4、3、2或1個胺基酸變化。 經修飾之抗體 於另一具體實施例中’可產生融合抗體或免疫連結物，鲁 其包括本發明抗-M-CSF抗體之全部或部分，並連接至另一 多肽。於一較佳具體實施例中，僅有抗-M-CSF抗體之變異 功能部位連接至多肽。於另一較佳具體實施例中，抗 -M-CSF抗體之VH功能部位係連接至第一個多肽，而抗 -M-CSF抗體之VL功能部位係連接至第二個多肽’第二個多 狀與第一個多肽的關聯方式為其VH及VL功能部位彼此互相 作用以形成抗體結合部位。於另一較佳具體實施例中， 功能部位藉連結子由Vl功能部位分離以便VH& vL功能部 95567.doc -70- 1356063 位可彼此互相作用（請見下面有關單鏈抗體的部分）。Vh連 結子-VL抗體再連接至所欲之多肽。融合抗體可用以將多肽 加入可表現M-CSF之細胞或組織。該多肽可為一種治療 劑，如毒素、生長因子或其它調節蛋白質，或者其可為診 斷劑’如易於觀察之酵素，如山葵過氧化酶。此外，產生 融合抗體時，其中二個（或多個）單鏈抗體可互相連接。若吾 人希望於單一多肽鏈上創造二價或多價抗體，或者若吾人 希望創造雙特異性抗體，這點就相當的實用。 · 為產生一單鏈抗體，可編碼DNA片段之（scFv)Vh-及VL-係 以人工操作連接至另一可編碼彈性連結子之片段（如編碼 胺基酸序列（Gly4 -Ser)3)，使得VH及VL序列可表現成為鄰 近的單鏈蛋白質’且該v L及v h功能部位以彈性連結子連 結。請見如博德等人’ 242:423-426(1988);休士頓 等人，iVoc, iWzi/· USA 85:5879-5883(1988);邁 克凱弗帝等人，ATijii/re 348:552-554 (1990) »單鏈抗體可為 單價（若僅使用單一 VH及VL)、二價（若使用二種乂?1及Vl)或._ 多價（若使用多於二種VH及VL) »可產生能與M-CSF及另一 分子行特異性結合之雙特異性或多價抗體。 於其它具體實施例中’經修飾抗體可使用抗_M_CSF抗 體.編碼核酸分子來製備。例如"卡帕抗體（Kappa bodies)"(依爾（111)等人，70 : 949-57(1997))、” 微型抗體（Minibodies)"(馬汀（Martin)等人，«/. 13 : 5303-9(1994))、”二聚體"（霍利格等人， USA 90: 6444-6448(1993))或"健奴辛司（janusins)"(卓聶克 95567.doc 1356063 (Traunecker)等人，10:36553659(1991)及卓暴克等 人，/”ί. ·/. Cancer (Suppl.) 7:51-52(1992))可依照說明書所 授方法使用標準分子生物技術來製備。 雙特異性抗體或抗原結合片段可藉由包含融.合瘤之融合 或Fab'片段之連結等各種方法來製備。 請見如桑席維萊（Songsivilai)及拉赫曼（Lachmann)，c//w / 顚腳/· 79 _· 315-321(1990)、寇司鐵尼（K〇stelny)等 人，·/. 148:1547-1553(1992)。另外，雙特異性抗 體可形成為"二聚體，，或"健奴辛司"。於某些具體實施例中， 雙特異性抗體可與二種不同M-CSF抗原決定位結合。於某 些具體實施例中，雙特異性抗體具有第一種重鏈及第一種 輕鏈，其係源自單株抗體252、88、1〇〇、3 8 3、2 7 3、 1.120.1、9.14.41、8.l〇.3F、9.7.2IF、9.14 4、8 1〇 3或 9 7 2， 以及額外附加之抗體重鏈及輕鏈。於某些具體實施例中之 額外附加之輕鏈及重鏈亦來自上述相同單株抗體之一，但 仍不同於第一種重鏈及輕鏈。 於某些具體實施例中，上述經修飾抗體之製備可使用下 列各物：來自在此所提供的人類抗 -M-CSF單株抗體之一或
經衍生及標定之抗體
經衍生以使該衍生或標記不致負面 面影響M-CSF結合》因 95567.doc ，72· 1356063 此，本發明之抗體與抗體部分係欲同時包含在此所述之完 整及經修飾型式的人類抗-M-CSF抗體。如本發明之抗體抗 體部分可功能性地連接（藉化學結合、基因融合、非共價鍵 進行結合或用別的方法）至一或多種其他分子實體，如另一 抗體（如雙特異性抗體或二聚體）、檢測劑、細胞毒性藥物、 藥劑及/或可媒介結合抗體或抗體部分與另一分子（如鏈黴 抗生物素蛋白核心區或聚組織胺酸標籤）之蛋白質或肽。 有一型經衍生抗體的製備係交又結合二或多種抗體（各 為同類或不同類，如產生雙特異性抗體）而成。適當交叉 連結子包含其為異雙功能（heterobifunctional)者，其具有二 個以適當間隔（如間-馬來醯亞胺笨曱醯基羥基號拍酿亞 胺酯）分隔之確實反應群組’或為同種雙功能 (homobifunctional)(如琥珀醯亞胺基辛二酸酯）。此種連結子 可得自皮爾斯（Pierce)化學公司，Rockford，111。 另一類經衍生抗體為標定抗體。本發明之抗體或抗體結 合部分可衍生運用之檢測劑包含螢光化合物，包含營光 素、異硫氰酸螢光素、若丹明、5-二曱胺-i_萘磺醯氣、藻 紅素、鑭系元素磷光體及類似物。抗體亦能以可供檢測之 酵素標定’如山葵過氧化酶、β-半乳糖苷酶、營光酵素、 驗性磷酸酶、葡萄糖氧化酶及類似物。當抗體以可檢測酵 素標定時，其檢測方法為添加額外的試劑供酵素利用以產 生可識別之反應產物。如當採用山葵過氧化酶試劑時，添 加過氧化氫及二胺基聯苯胺能產生可檢測之有色反廊產 物。抗體亦可以生物素標定，並藉間接測量抗生物素蛋白 95567.doc -73- 1356063 或鍵徵抗生物素蛋白結合進行檢測。抗體亦可藉由能以二 級通訊子（如白胺酸拉鍊配對序列、二級抗體之結合部位、 金屬結合功能部位、抗原決定位標記）識別之預先測定的多 肽抗原決定位加以標定。於某些具體實施例中，標記可藉 不同長度之延長臂附著以減少可能的空間障礙。 抗-Μ-CSF抗體亦可以放射標定胺基酸標定。放射標定抗 M CSF抗體可同時用於♦斷及治療目的。例如以放射標定 抗-Μ-CSF抗體可藉^射線或其它診斷技術來檢測能表現 Μ-CSF之腫瘤《另外，放射標定抗_M_CSF抗體可治療性地 作為癌性細胞或腫瘤之毒素。標記多肽實例包含（不限於） 下列放射性同位素或放射核素-、14(：、15n、、9(3γ、 99Tc、mIn、1251 及 131ι。 抗-Μ-CSF抗體亦可與化學基團（聚乙二醇（pEG)、甲基或 乙基或碳水化合物）來衍生。這些基團可用於改善抗體之生 物特性，如增加血清半衰期或增強組織結合。 醫藥組合物及套組 本發明亦有關於包括人類抗_MCSF拮抗劑抗體之組合 物’其可供有需要的病患來治療類風濕性關節炎、骨質疏 鬆症或動脈硬化。於某些具體實施例中，治療之病患為人 類。於其它具體實施例中，病患為獸醫的病患。可以本發 明拮抗劑抗-Μ - C S F抗體治療之高増殖性失調（其中單核球 扮演重要角色）可包含任何組織或器官並包含（但不限於）腦 癌、肺癌、鱗狀細胞癌、膀胱癌、胃癌、胰臟癌、乳房癌、 頭癌、頸癌、肝癌、腎癌、卵巢癌、攝護腺癌、結腸直腸、 95567.doc • 74- 1356063 食道癌、埽科癌症、鼻咽癌或▼狀腺癌、黑色素瘤、淋巴 瘤、白血病或多發性骨髓瘤。特定言之，本發明之人類拮 抗劑抗-M-CSF抗體可用於治療或預防乳癌、攝護腺癌、結 腸癌及肺癌。 本發明亦包含可供治療選自由下列病況組成之群的組合 物：哺乳動物（包含人類）之關節炎、乾癬性關節炎、雷特 氏（Rater’s)症候群、痛風、創傷性關節炎、德國麻疹關節 炎與急性滑膜炎、類風濕性關節炎、類風濕性脊椎炎、僵 直性脊椎炎、骨關節炎、痛風性關節炎及其它關節炎病況、 敗血症、敗血性休克、内毒素性休克、格蘭氏陰性菌敗血 症、中毒性休克症候群、阿滋海默症（Alzhei_，s di_e)、 中風、神經創傷、氣喘、成人令吸道箸迫症候群、腦型癦 疾 '慢性肺炎疾病、石夕肺病、肺部類肉瘤病、骨質再吸收 疾病、骨質疏鬆症、再狹窄、心臟及腎臟再灌注性傷害、 血栓形成、腎絲球性腎炎、糖尿病、移植物與接受者之反 應、異體臟器排斥、發炎性腸道疾病、克隆氏（〜心)症、 潰瘍^结腸炎、多發性硬化症、肌肉變性、濕療、接觸性 皮膚人牛皮鸯、曝傷或結膜炎性休克（conjunctivitis shock)，該級合物白社、、Λ这 θ
匕括~療有效I之本發明人類抗_M_CSF 單株抗體及醫藥可接受載劑β 治療可包含投予& 或夕種本發明之拮抗劑抗-MCSF單株 抗體或其抗原結合片與， 。 月奴其可早獨或與醫藥可接受載劑共 同奴藥。在此所用之”醫 晉樂可接文載劑"意指任何及所有溶 劑、分散媒介物、外类 卜表塗層 '抗卤劑及抗真菌劑、等張劑 95567.doc •75· 1356063 及吸收延緩劑及其生理相容類似物。某些藥學可接受載劑 實例為水、食鹽水、磷酸緩衝食鹽水、葡萄糖、甘油、乙 醇及其類似物以及其混合物。在許多情況下，較佳為組合 物中包含等張劑，如糖類、多醇類如甘露醇、山梨糖醇或 氯化"外附加之醫藥可接受物質實例為濕潤劑或少量 助劑’如濕潤劑或乳化劑、防腐劑或緩衝劑，其可增加抗 體之保存期或效力。 本發明抗-M-CSF抗體及包括這些抗體之組合物可與一 或多種其它治療劑、診斷劑或預防劑共同投藥。額外^加 之治療劑包含其它抗瘤、抗-腫瘤、抗-血管增生或化學治療 劑。此種附加之藥劑可包含於相同組合物中或分別投藥Υ 於某些具體實施例中’一或多種之本發明抑制性抗_m_csf 抗體可做為疫苗或疫苗之佐劑。 本發明組合物可為各種型式，如液態、半固態及固態劑 型，如液態溶液（如可注射及灌注溶液）、分散液或懸浮液、 錠劑、片劑、粉劑、脂質體及栓劑。較佳型式取決於預期 之投藥方法及治療用途。典型的較佳組合物為可注射或灌 溶液型式，如類似運用於人類被動免疫之組合物。較佳投 藥方式為非經腸胃投藥（如靜脈注射、皮下注射、腹腔注 射、肌肉注射）。於一較佳具體實施例中，抗體係以投藥靜 脈灌;i或注射。於另一較佳具體實施例中，該抗體可藉肌 肉注射或皮下注射投藥。於另一具體實施例中，本發明包 含一種以抗體或其可行特異性結合M-CSF之抗原結合部分 治療需治療之病患，其步驟包括：（a)投予有效量之可編碼 95567.doc •76· 1356063 重鍵或其抗原結合部分之分離核酸分子、可編竭輕鍵或其 抗原結合部分之分離核酸分子，或同時投予可編碼輕鍵及 重鍵或其抗原結合部分之核酸分子；及（b)表現該核酸分子。 治療性組合物典型地需為無菌且於製造及貯存條件下穩 定。組合物可調配為溶液、微乳化溶液、分散液、脂質體 或其它適於高藥物濃度之指定構造。無菌可注射溶液之製 備可藉由混合含需要量抗_M_CSF抗體之合適溶劑與視需 要之-種上列成分或上列成分之聯合物，然後再加以無菌 過濾一般地，分散劑之製備係藉由將活性化合物併入包 含基礎分散培養基及必需之上列其它成分之無菌載劑中。 至於可供製備無菌可注射溶液之無菌粉劑，較佳製備方法 為藉真空乾燥及冷凍乾燥處理無菌過濾溶液以產生包括活 性成分及任何附加所需成分之粉末。維持溶液之適當流動 性可藉由如使用塗層（如㈣脂）、於分散液中維持所需顆粒 大小及使用表面活性劑。延長可注射組合物之吸收作用可 藉由於組合物中包令可μ組m 旁了延緩吸收之藥劑（如單硬脂酸鹽類 及明膠）而達成》 本發明抗體可藉各種t 本技β中已知之方法投藥’雖然對 許多治療用途而言，較伟奸越.全& 、 权佳技樂途徑/方法為皮下注射、肌肉 注射或靜脈灌注。熟蜂益土處a a此藝者應瞭解投藥途徑及/或方式係 取決於所需之結果。 於某些具體實施例中，兮a τ这抗體組合物之活性成分可盥能 防止抗體快速釋出的载劑一 、 J 起製備，如經控制釋放調配 物’包含植入物、經古明你卜 反及收貼片及微膠囊遞送系統。可使 95567.doc •77- 1356063 用生物可分解、生物相容性聚合物，如乙烯—醋酸乙稀、 聚酐類、聚甘醇酸、膠原蛋白、聚原酸酯及聚乳酸。許多 可製備此種調配物的方法都已申請專利或普遍為熟諳此藝 者所熟知。讀 ^ 如 Sustained and Controlled Release Drug 办价m(J. R.魯賓遜（Robinson)編輯，Marcel Dekker，Inc.，New York，1978)。 於某些具體實施例中，本發明抗-M-CSF抗體可口服投 藥’如與惰性稀釋劑或可吸收之食用載劑合用。該化合物 (及視需要之其它成分）亦可封入硬膠囊或軟膠囊中，壓縮為 旋劑或直接併入病患飲食中。對治療性之口服投藥，抗 -M-CSF抗體可與賦形劑併用，並以可食錠劑、口頰錠劑、 喉片、膝囊、芳香酒劑、懸浮液、糖漿、扁片及其類似物 之型式運用。除了藉非經腸胃投予本發明化合物外，該化 合物可能需要以能預防其不活化作用之物質包覆或與可預 防其不活化作用之物質共同投予。 附加之活性化合物亦可併入組合物中。於某些具體實施 例中，本發明抗-M-CSF抗體可與一或多種附加之治療劑共 同調配及/或投藥。這些藥劑包含可與其它標的物結合之抗 體、抗癌劑、抗腫瘤劑、化學治療劑、可抑制M_CSF之肽類 似物、能與M-CSF結合之可溶性c-yVKs、一或多種可抑制 M-CSF之化學藥劑、抗炎劑、抗-凝血劑、可降血壓藥劑（即 血官收縮素·轉化酶（ACE)抑制劑）。此種組合療法可需要較 低劑量之抗-M-CSF抗體以及共同投予之藥劑，從而避免可 能的毒性或與各種單一藥物療法相關之併發症。 95567.doc -78- 1356063 本發明之抑制性抗_M_CSF抗體及包括該抗體之組合物 亦可與其它治療攝生法合併投藥，特定言之為與放射療法 併用治療癌症。本發明化合物亦可與抗癌劑併用（如内皮細 胞抑制素（endostatin)及癌細胞血管阻斷素（angi〇statin))或 胞毒藥物（如阿錐霉素（adriamyCin，俗稱小紅莓）、道諾霉素 (daUnomycin、順氣胺鉑（cis-platinum)、依託泊苷 (etoposide)、紫杉醇（tax〇1)、剋癌易（Ux〇tere)及生物鹼（如 氧化長春花鹼（Vincristine)、法呢基（famesyl)轉移酶抑制劑' VEGF抑制劑）及抗代謝劑（如胺甲喋呤）。 本發明化合物亦可與抗病毒劑（如維拉賽特（Viracept)、 AZ、阿昔洛韋（acicl〇vir)及泛昔洛韋（famcicl〇vir)與抗敗血 症化合物（如華倫特（Valant))併用。 本發明組合物可包含"治療有效量”或"預防有效量"之本 發明抗體或其抗原結合部分。”治療有效量"意指，以劑量 及所需時間而言，可有效達到所需之治療效果的用量。抗 體或抗體部分之治療有效量可依各種因素而不同，如個體 之疾病狀態、年齡、性別及體重，以及抗體或抗體部分誘 發個體所需反應的能力。治療有效量亦代表於該劑量時任 何抗體或抗體部分之毒性或有害作用低於其有益治療作 用° "預防有效量"意指’以劑量及所需時間而言，可有效 達到所需之預防作用的份量。典型地，由於預防性劑量係 用於染病前或患病早期之病患，預防有效量將小於治療有 效量》 可調整劑量攝生法以提供最佳所欲反應（如治療或預防 95567.doc •79· 1356063 反應）。如可投予單一巨大劑量、可於一段時間内投予數次 分割劑量或該劑量可視治療狀態之迫切需要而成比例地減 少或増加。將非經腸胃組合物調配成為單位劑型特別有 利，其可成為易於投藥且統一之劑量單位型式。在此所用 之單位劑型意指實際不連接的單位，其適合供作欲治療之 哺乳動物病患的單位劑型之用；各單位包含預先定量之活 性化合物，其加上所需之醫藥載劑、經計算可產生所需療 效。本發明劑量型式之規格直接取決於（a)抗-M-CSF抗體或 片#又之獨特特性及欲達成之特定治療或預防作用，及（b)在 合成此種抗體之技藝中對個體治療感受性的内在限制因 素。 本發明抗體或抗體部分之治療或預防有效量之示範性 非-限制性範圍為0.025至50 mg/kg，更佳為〇」至5〇 mg/kg , 更佳為0.1-25、0.1至1〇或0.1至3 mg/kg。應注意的是劑量值 可隨所需減輕之病況類型及嚴重性而變化。應進一步瞭解 對任何特定病患而言，特定之劑量攝生法應於一段時間後 依個體需要及投藥者或監督投予組合物者之專業判斷來加 以調整，且在此所示之劑量範圍僅為示範性的且並非意欲 限制本申請專利組合物之範圍或運用β 本發明另一觀點係提供套組，其包括本發明抗M 抗 體或其抗原結合部分或包括此種抗體或部分之組合物。2 抗體或組合物外，套組可包含沴斷劑或治療劑。套組亦^ 包含使用於診斷或治療法的指示。於―較佳具體實施例 中，該套組包含了抗體或包括該抗體之組合物及可用於下 95567.doc •80- 1356063 述方法中之診斷劑。於另一較佳具體實施例，該套植包含 抗體或一種包括該抗體及-或多種可用於下述方法中之治 療劑的組合物。本發明具體實施例之一為一套組，其包= 容器、對患有炎症之人類投予抗_M.CSF抗體的指示或測量 生物樣本中之cm4+CD16+單核球數量及抗_Mcsf抗體的 指示。 本發明亦有關於可供抑制哺乳動物異常細胞生長之組合 物，其包括某份量之本發明抗體以及某份量化學治療劑， 其中化合物、鹽類、溶劑化物或前驅藥及化學治療劑之含 莖可共同作用以抑制不正常細胞之生長。許多化學治療劑 為此項技藝中已知。於某些具體實施例中，該化學治療劑 係選自由下列各物組成之群：有絲分裂抑制劑、烧化劑、 抗代謝劑、嵌入型（intercalating)抗生素、生長因子抑制劑、 細胞循環抑制劑、酵素、異構酵素抑制劑、生物反應調節 劑、抗-荷爾蒙、如抗-雄激素物質及抗·血管新生劑。 抗-血管增生劑，wMMP_2(間質金屬結合蛋白酶2)抑制 劑MMP-9(間質金屬結合蛋白酶_9)抑制劑及(環氧 化酶II)抑制劑皆可與本發明抗_M-CSF抗體併用。可用之 C〇X-n抑制劑實例包含希樂葆（CELEBREX)™(塞來考昔 (celecoxib)) 伐地考昔（valdecoxib)及羅非考昔 (rofecoxib)。可用之間質金屬結合蛋白酶抑制劑實例見述於 WO 96/33m(i996年1〇月24日公開）、w〇⑽之川叩州年 3月7曰公開）、歐洲專利公告案號973〇4971 年7月8 曰申凊）、歐洲專利公告案號993〇8617 2(1999年1〇月29申 95567.doc 1356063 請）、WO 98/07697( 1998 年 2 月 26 日公開）、WO 98/03516 (1998 年 1 月 29 日公開）、WO 98/349 18(1998 年 8 月 13 曰公 開）、WO 98/34915(1998 年 8 月 13 日公開）、WO 9W33768 (1998年8月6日公開）、WO 98/30566(1998年7月16日公開）、 歐洲專利公告606,046(1994年7月13曰公開）、歐洲專利公告 931,788 (1999年 7 月 28 日公開）、WO 90/05719(1998年 5月 31 曰公開）、WO 99/52910(1999 年 10 月 21 日公開）、WO 99/52889 (1999年 10月 21 日公開）、WO 99/29667( 1999年 6月 17日公開）、PCT國際專利申請（PCT International Application)案號 PCT/IB98/ 011 13(1998年 7月 21 曰申請）、歐 洲專利公告案號99302232.1 (1999年3月25日申請）、英國專 利專利公告案號9912961.1 (1999年6月3曰申請）、美國臨時 申請案號60/148，4 64 (1999年8月12曰申請）、美國專利號 5,863,949 (1999年1月26曰頒予）、美國專利號5,861，510 (1999年1月19日頒予）及歐洲專利公告78〇,386(1997年6月 25日公開），其全部内容皆以引用的方式併入本文中。較佳 之MMP抑制劑為不會呈現關節疼痛者。更佳者為可選擇性 抑制MMP-2及/或MMP9 ’而不會影響其它基質金屬蛋白質 酶（即 MMP-1、MMP-3、MMP-4 ' MMP-5、MMP-6、MMP-7、 MMP-8、MMP-10、MMP-11、MMP-12及 MMP-13)者。用於 本發明中之某些特定MMP抑制劑實例為AG3340、RO 32_3555、RS 13-0830，而其化合物係列舉如下： 3-[[4-(4-氟-笨敦基）·苯續酿]經基胺甲酿基_環戊基）胺 基]-丙酸、3-外-3-[4-(4-氟-笨氧基）-苯磺醯胺基]·8_氧雜·二 95567.doc • 82 - 1356063 環[3.2.1]辛烷-3-羧酸羥基醯胺、（211，311)1-[4-(2氯-4-氟-苄 氧基）-苯磺醯]-3-羥基-3-甲基-哌啶-2-羧酸羥基醯胺、 4-[4-(4-氟-苯氧基）-苯磺醯胺基]四氫-啦喃-4-羧酸羥基醯 胺、3-[[4-(4-氟-苯氧基）苯磺醯]-(1-羥基胺甲醯基-環丁 基）-胺基]•丙酸、4-[4(4-氯·苯氧基）-笨磺醯胺基]-四氫 喃-4-羧酸羥基醯胺、（R) 3-[4-(4-氣-笨氧基）-笨磺醯胺 基]-四氫-吡喃-3-羧酸羥基醯胺、（2R，3R)l-[4-(4-氟-2-甲基-
苄氧基）-苯續酿]-3-經基-3-甲基-娘咬-2-叛酸經基醢胺、 3-[[4-(4-氟-苯氧基）-笨磺醯]_(ι·羥基胺甲醯基-丨_甲基-乙 基）-胺基]-丙酸、3-[[4-(4-氟-苯氧基）笨磺醯]-(4-羥基胺甲 醯基-四氫-。比喃-4-基）-胺基]-丙酸、3-外-3-[4-(4-氣-苯氧 基）-苯磺醯胺基]-8-氧雜-二環[3.2.1]辛烷-3-羧酸羥基醯 胺、3-内·3-[4-(4-氟苯氧基苯磺醯胺基]·8·氧雜，二環 [3.2.1]辛烷-3-羧酸羥基醯胺及（R)3_[4_(4_氟_苯氧基苯
磺醯胺基]四氮-呋喃_3_羧酸羥基醯胺；及醫藥可接受鹽類 及該化合物之溶劑化物。 包括本發明人類抗-M-CSF單株抗體之化合物可併用訊 息轉導抑制劑，如可抑制EGF-R(表皮生長因子受體）反應之 藥劑’如EGFR抗體、EGF抗體及EGF_R抑制劑分子；vEGF (血管内皮生長因子）抑制劑，如可抑制VEGF之vegf受體及 分子；及erbB2受體抑制劑，如有機分子或可與受體 結合之抗體，如賀癌平（HERCEpTIN)TM(基因科技公司 (Genentech，Inc.))。EGF-R抑制劑見述於如 W〇 95/19970 中（1995年7月27曰公開）、WO 98/1445 1(1998年4月9曰公 95567.doc -83 - 1356063 開）、WO 98/02434 (1998年1月22曰公開）及美國專利號 5,747498 (1998年5月5日頒予），且此種物質可如在此所述 運用於本發明。EGFR-抑制劑包含（但不限於）單株抗體C225 及抗-EGFR 22Mab(免疫克隆生物製藥公司 (ImClonesystems Incorporated))、ABX-EGF(安根尼克斯 (Abgenix)/細胞基因系統工程公司(Cell Genesys))、 EMD-7200 (默克（Merck) KgaA)、EMD-5590(默克 KgaA)、 MDX-447/H-477(美德瑞斯公司及默克KgaA)及化合物 φ ZD-1834 、 ZD-1838 及 ZD-1839(阿斯特捷利康 (AstraZeneca)) 、PKI-166(諾華（Novartis))、PKI-166/ CGP-75166(諾華）、ΡΤΚ 787(諾華）、CP 701(瑟法隆 (Cephalon)、來氟米特（leflunomide)(法瑪西亞 /(Sugen))、 CI-1033 (華納蘭勃特帕克大衛藥廠（Warner Lambert Parke Davis))、Cl-1033/PD 183,805(華納蘭勃特帕克大衛藥廠）、 CL-387,785(惠氏大藥廠（Wyeth-Ayerst))、BBR-1611(德商百 靈佳曼漢公司（Boehringer Mannheim GmbH)/羅氏 鲁 (Roche))、那阿密定（Naamidine) A(必治妥施貴寶（Bristol Myers Squibb))、RC-3940-II(法瑪西亞）、BIBX-1382(百靈 佳殷格翰（Boehringer Ingelheim))、OLX-103(默克公司）、 VRCTC-310(文帖克研究公司（Ventech Research))、EGF融合 毒素（喜瑞金公司（Seragen Inc.))、DAB-389(喜瑞金/力歐建 德（Lilgand))、ZM-252808(帝國癌症研究基金會（Imperial Cancer Research Fund))' RG-50864(INSEAM)、LFM-A12(帕 克休斯（Parker Hughes)癌症中心）、WHI-P97(帕克休斯癌症 95567.doc -84- 1356063 中心）、GW-282974(葛蘭素（Glaxo))、ΚΤ-8391(協和發酵 (Kyowa Hakko))及EGF-R疫苗（約克製藥公司（York Medical)/ 免疫分子中心（Centro de Immunologia Molecular ，CIM))。這些及其它EGF-R-抑制劑可用於本發 明中。 VEGF抑制劑，如SU-5416及SU-6668(速健公司（Sugen Inc.))、阿瓦斯丁（AVASTIN)™(基因科技公司）、SH-268(先
靈（Schering))及NX-1838(明曰之星（NeXstar))亦可與本發 明化合物混合。VEGF抑制劑係見述於如WO 99/24440(1999 年5月20日公開）、PCT國際專利申請案號 PCT/IB99/00797( 1999年 5 月 3 曰申請）、WO 95/21613(1995 年8月17日公開）、WO 99/61422(1999年12月2日公開）、美 國專利號 5,834,504(1998 年 11 月 10 日頒予）、WO 98/50356 (1998年11月12曰公開）、美國專利號5,883,113 (1999年3月 16曰頒予）、美國專利號5,886,020(1999年3月23日頒予）、美 國專利號 5,792,783(1998 年 8 月 11 日頒予）、WO 99/10349 φ (1998年3月4日公開）、WO 97/32856(1997年9月12曰公開）、 WO 97/22596( 1997年 6 月 26 日公開）、WO 98/54093 (1998 年 12月3日公開）、WO 98/02438(1998年1月22日公開）、WO 99/16755(1999年4月 8 曰公開）及 WO 98/02437 (1998年 1 月 22日公開），其全文以引用的方式併入本文中。其它某些特 定用於本發明VEGF抑制劑實例為IM862(赛全公司（Cytran Inc.));基因科技公司之抗-VEGF單株抗體；以及安奇歐酶 angiozyme)，一種來自力寶酶 （Ribozyme)公司及奇龍 95567.doc •85· 1356063 (Chiron)公司的合成核酶。這些及其它VEGF抑制劑可如在 此所述者運用於本發明。ErbB2受體抑制劑，如 GW-282974(葛蘭素威康（Glaxo Wellcome) pic)及單株抗體 AR-209(阿隆聶克司（Aronex)製藥公司）及2B-1(奇龍公 司），可進一步與本發明化合物併用，如見述於WO 98/02434(1998年 1 月 22 日公開）、WO 99/3 5 146(1999 年 7月 15 日公開）、WO 99/35132(1999年7月 15 日公開）、WO 98/02437 (1998 年 1 月 22 曰公開）、WO 97/13760( 1997 年 4 月 17 曰公 開）、WO 95/19970( 1995年7月27曰公開）、美國專利號 5,5 8 7,45 8(1996年12月24曰頒予）及美國專利號5,877,305 (1999年3月2日頒予），其全部内容以引用的方式併入本文 中。用於本發明之erbB2受體抑制劑亦見述於美國專利號 6,465,449(2002年10月15曰頒予）及美國專利號6,284,764 (2001年9月4日頒予）中，兩者全文内容皆以引用的方式併入 本文中。ErbB2受體抑制劑或化合物及見述於上述PCT申請 案、美國專利號與美國臨時申請案中之物質，以及其它可 抑制erbB2受體之化合物與物質，可依本發明所述與本發明 化合物併用。 抗生存（anit-survival)劑包含抗-IGF-IR抗體及抗-整合素 劑，如抗-整合素抗體。 消炎劑可與本發明抗-M-CSF抗體併用《對治療類風濕性 關節炎而言，本發明人類抗-M-CSF抗體可與下列藥劑併 用：如TNF-α抑制劑，如TNF藥物（如雷米卡德 (REMICADE™)、CDP-870 及修密拉（HUMIRATM))及 TNF 受 95567.doc -86· 1356063
體免疫球蛋白分子（如英普瑞爾（ENBREL)™)、IL-1抑制 劑、受體拮抗劑或可溶性IL-lra(如肯尼銳特（Kineret)或ICE 抑制劑）、COX-2抑制劑（如塞來考昔、羅非考昔、伐地考昔 及依託考昔（etoricoxib))、金屬蛋白酶抑制劑（較佳為 MMP-13選擇性抑制劑）、p2X7抑制劑、α2δ配體（如鎮頑癲 (NEUROTIN™)及普瑞巴林（PREGAB ALIN™))、低劑量甲胺 蝶吟、來氟米特、經氯奎寧、d-青徽胺（d-penicillamine)、 金諾芬（auranoHn)或非經腸或口服金（parenteral or oral gold)。本發明化合物亦可與現存可治療骨關節炎之治療劑 併用。可併用之適當藥劑包含標準非類固醇消炎劑（以下稱 為NSAID's)如匹若西卡（piroxicam)、待克菲那 (diclofenac)、丙酸如萘普生（naproxen)、氟比洛芬 (flurbiprofen)、苯氧苯丙酸（fenoprofen)、_ 洛芬（ketoprofen) 及布洛芬（ibuprofen)、芬那美特（fenamates)(如曱芬那酸
(mefenamic acid))、叫丨 B朵美辛（indomethacin)、蘇林達克 (sulindac)、阿扎丙宗（apazone)、°比。坐啉_ 類（pyrazolones)(如 苯丁吐酮（phenylbutazone))、水揚酸鹽（如阿斯匹靈 (aspirin))、COX-2抑制劑如塞來考昔、伐地考昔、羅非考 昔及依託考昔，止痛劑及關節内治療劑，如類固醇及破尿 酸如透明質酸（hyalgan)及欣維可（synvisc)。 抗凝劑可與本發明抗-M-CSF抗體併用。抗凝劑實例包含 (但不限於）殺鼠靈（warfarin)(香豆素（COUMADIN™))、肝素 及依諾肝素（enoxaparin)(婁福諾克司（LOVENOX)™)。 本發明人類抗-M-CSF抗體亦可與心血管製劑，如飼離子 95567.doc •87· 1356063 阻斷劑、降血脂製劑，如還原酶抑制劑（statins)、微纖維酸 類（fibrates)、β-阻斷劑（p_b丨〇ckers)、Ace抑制劑、血管收縮 素-2受體拮抗劑及血小板聚集抑制劑併用。本發明化合物 亦可與CNS藥物併用，如抗抑鬱劑（如舍曲林（sertra丨丨此)）、 巴金森氏症（Parkinsonian)用藥（如丙炔苯丙胺（deprenyl)、 左旋·多巴（dopa)、力必平（REQUIpTM)、樂伯克 (MIRAPEX™)、MAOB抑制劑，如司來吉蘭（selegmne)及雷 沙吉蘭（rasagiline)、comp抑制劑（如答是美（Tasmar))、a_2 抑制劑、多巴胺（dopamine)再吸收抑制劑、nMDA拮抗劑、 尼古丁興奮劑、多巴胺興奮劑及神經元氧化氮合成酶抑制 劑）及阿/兹海默症藥物，如多奈齊（d〇nepezil)、塔克寧 (tacrine)、α2δ配體（如鎮頑癲及普瑞巴林）抑制劑、c〇x_2 抑制劑、丙戊茶鹼或美翠芳聶（metryfonate)。 本發明人類抗-M-CSF抗體亦可與骨質疏鬆症藥物併 用，如（roloxifene)、屈洛昔芬（dr〇i〇xifene)、拉索昔芬 (lasofoxifene)或福善美（fosamax)及免疫抑制劑，如fk-506 與雷帕黴素（rapamycin)。 實用診斷方法 另一方面，本發明可提供診斷方法。抗M-CSF抗體可用 於檢測活體外或活體内生物樣本之M-CSF ^於一具體實施 例中，本發明提供一種可診斷有需要的病患體内能表現 M-CSF之腫瘤的存在或其位置之方法，其步驟包括將抗體 注射至病患，藉由定位抗體結合處測定病患之M-CSF表 現，比較病患與正常參考對象或標準之表現並診斷腫瘤之 -88- 95567.doc 1356063 存在或位置。 抗-Μ-CSF抗體可用於常見的免疫分析法，包含（但不限 於）ELISA ' RIA、FACS、免疫組織染色、西方墨點法或免 疫沈澱法《本發明抗-Μ-CSF抗體可用於檢測源自人類之 Μ-CSF。於另一具體實施例中，抗_M_CSF抗體可用於檢測 源自靈長類（如食蟹猴、恆河猴、黑猩猩或猿）之M_CSF。本 發明提供一種可檢測生物樣本中Μ-CSF之方法，其包括將 生物樣本與本發明抗-Μ-CSF抗體接觸並檢測已結合之抗 體。於—具體實施例中，抗-Μ-CSF抗體可直接以可檢測的 標記來標定。於另一具體實施例中，抗_M-CSF抗體（第一種 抗體）並未標定而第二種抗體或可與抗-Μ-CSF抗體結合之 其匕分子為已標定。如為熟諳此藝者所熟知，第二種抗體 係選擇可與第一種抗體之特定品種及種類行特異性結合 者。如’若抗-Μ-CSF抗體為人類IgG，那麼第二種抗體可 為抗·人類-IgG。其它可結合抗體之分子包含（但不限於）蛋 白質A及蛋白質〇，二者皆已商品化，如源自皮爾斯化學公 司。 抗體或第二種抗體之適當標記已揭示於上，並包含不同 酵素、辅基、螢光物質、發光物質及放射性物質。適當酵 素實例包含山葵過氧化酶、驗性鱗酸酶、β半乳糖苷酶或 乙酿膽驗酯酶；適當輔基複合物實例包含鏈黴抗生物素蛋 白/生物素及抗生物素蛋白/生物素；適當螢光物質實例包含 缴形明、螢光素、異硫氰酸螢光素、若丹明、二氯三畴胺 螢光素、丹磺醯氣或藻紅素；發光物實例包含魯米諾 95567.doc -89- 1356063 (1Umin〇1);適當玫射性物實例包含125I、131I、35S或3H。 於其它具體實施例中，M_CSF可於生物樣本中藉競爭性 免疫分析法、利用以可檢測物質標定之M_CSF標準及未標 定之抗-M-CSF抗體進行分析。於此分析中，將生物樣本、 已標定之M-CSF標準與抗—M-CSF抗體加以混合，並測定標 定之M-CSF標準與未標定抗體結合的量。生物樣本中之 M-CSF含量為標定M_CSF標準與抗_M_CSF抗體結合之量的 反比。
吾人可使用上述免疫分析法以達成數種目的。如抗 -M-CSF抗體可用於檢測細胞培養物中的細胞内或細胞表 面上或分泌至組織培養基之M-CSF。抗-M-CSF抗體可用於 測定細胞表面上或分泌至組織培養基中之Μ-eSF含量，其 中該培養基已使用不同化合物處理。本方法可用以鑑別可 用來抑制或活化M-CSF表現或分泌之化合物《依照該方 法’將一細胞樣本以測試化合物處理一段時間而另一樣本 則未經處理。若欲測良M-CSF總量，將細胞溶解並使用上 述一種免疫測定法來測量M-CSF總量。比較經處理與未處 理細胞中M-CSF總量以測定受試化合物的效果。 有一種可測量M-CSF總量之免疫分析法係ELISA或西方 墨點法。若欲測良細胞表面之M-CSF濃度，不可將細胞溶 解，並上述免疫分析法之一來測量細胞表面之M-CSF濃 度。一種可測定細胞表面M-CSF濃度之免疫分析法步驟可 包含以可檢測標記（如生物素或1251)來標記細胞表面蛋白 質，以抗-M-CSF抗體免疫沉澱M-CSF，隨後再檢測標定 95567.doc •90· 1356063 Μ-CSF。另-供測定M_CSF位置之免疫分析法（如細胞表面 濃度）可為免疫組織化學法。如ELISA、RIA、西方墨點法、 免疫組織化學、嵌入膜蛋白質之細胞表面標記及免疫沉澱 等方法為此項技藝中為吾人所熟知者。請見如哈勞及連 恩，如前。此外，免疫分析法可將規模放大以供高產量篩 選’以便測試大量可抑制或活化M-CSF之化合物。 另一可測量所分泌之M_CSF濃度的免疫分析法實例為抗 原捕捉分析、ELISA、免疫組織染色分析、西方墨點法及 使用本發明抗體之類似方法。若欲測量所分泌之m_csf， 可分析細胞培養基或體液（如血清、尿液或滑液）中已分泌之 M-CSF及/或將細胞溶解以釋出已製造但尚未分泌之 M-CS卜可敎已分泌之M_CSF丨農度的免疫分析法步驟包 含以可檢測之標記（如生物素或ΐ25〗）*所分泌之蛋白質加以 標記，以抗-M-CSF抗體免疫沉澱M-CSF並接著檢測標定 M-CSF。另一可測定所分泌之M_CSF濃度的免疫分析法步 驟可包含（a)預先將抗_M_CSF抗體與微量滴定盤表面結 合；（b)添加包含已分&M_CSF的組織培養細胞培養基或體 液至微量滴定盤的小孔中與抗抗體結合；（c)添加可 檢測抗-M-CSF抗體之抗體，如以地高辛苷元（dig〇xigenin) 標定之抗-M-CSF，其可與M-CSF之抗原決定位結合，但此 抗原決定位與步驟（a)之抗_M_CSF抗體所結合者不同；〇) 添加抗體至與過氧化酶結合之地高辛苷元；及（e)添加過氧 化酶基質，其可產生一種有色反應產物，其可定量以測定 組織培養細胞基或體液樣本中所分泌之M_CSF濃度。如 95567.doc -91 - 1356063 ELISA、RLA、西方墨點法、旁痛紐鈾儿斑”· 尤设組織化學及抗原捕捉分析 等方法係於此項技藝t為吾人所孰知 八所热知❶請見如哈勞及連 恩’如前。此外，為了測試大量可柚去丨 八里J幵剌或活化M-CSF之化 合物，免疫分析法可擴大規模以供高生產率篩選。 本發明抗-M-CSF抗體亦可用於測定組織或起源於組織 之細胞中的細胞表面M.CSF濃度^某些具體實施例中， 組織係源自患病組織。於某些具體實施例中，該組織可為 腫瘤或其活體組織。於本方法之某些具體實施例中，其可 為自病患割除之組織或活體組織。接著可藉上述方法使用 免疫分析法加以測定該組織或活體組織的，如m_csf總 量、細胞表面M-CSF濃度或M-CSF的位置。 該方法之步驟可包括對需進行該診斷試驗之病患投予一 種可檢測之標定抗-M_CSF抗體或一種包括該抗體之組合 物並對病患進行影像分析以測定可表現M_CSF之組織的位 置。影像分析係於醫學技藝中為吾人所熟知的方法，且包 含（但不限於）x_射線分析、核磁共振影像（MRI)或電腦斷層 (CE)。抗體可以任何適用於活體内影像之藥劑標定，如對 比劑，如鋇（其可用於心射線分析）或鎂對比劑，如釓螯合 物，其可用於MRI或CE〇其它標記藥物包含（但不限於）放 射性同位素，如"Tc。於另一具體實施例中，抗-M-CSF抗 體並未標定，但可藉由投予第二種抗體或其它可與抗 M CSF抗體結合之可檢測分子來顯影。於—具體實施例 中’活體組織係自病患獲得以測定所欲組織是否可表現 M-CSF。 95567.doc -92- 1356063 本發明抗-Μ-CSF抗體亦可用於測定體液（如血清、尿液或 源自組織之滑液）中M-CSF所分泌之濃度。於某些具體實: 例中，體液係源自患病組織。於某些具體實施例_，也 / 趙夜 係源自腫瘤或其活體組織。於某些本方法 1 S η肢耳施例 中，體液係自病患分離。隨後將體液運用於免疫分析法中 以藉前述方法測定分泌之M-CSF濃度。本發明之一具體實 施例為一種分析M-CSF拮抗劑活性之方法，其包括：對靈 長類或人類病患投予M-CSF拮抗劑並測量生物樣本中 CD14 + CD16 +單核球數量。 _ 實用治療方法 於另一具體實施例中，本發明提供一種方法，其可藉由 對而要之病患投予抗-M-CSF抗體而抑制M-CSF活性β在此 所述之任何類型抗體皆可做治療之用。於一較佳具體實施 例中，抗-M-CSF抗體為人類嵌合型或人類化抗體。於另一 較佳具體實施例中，M-CSF屬於人類且病患亦為人類病 患。或者，該病患可為能表現可與抗_M-CSF抗體交互作用 鲁 之M-CSF的哺乳動物。該抗體可對能表現與抗體交互作用 之M-CSF的非-人類哺乳動物（即靈長類）投藥作為獸醫用途 或一種人類疾病之動物模式。此種動物模式可用於評估本 發明抗體之療效。 在此所述之"一種M-CSF活性有害的失調"一詞意欲包含 疾病及其它失調，其中罹患該失調病患所出現之高濃度 M-CSF現象顯示或讓人懷疑其為該失調之病理生理學的原 因或為促成失調惡化的因素β此類失調可藉由如所分泌及/ 95567.doc -93· 或於細胞表面之M-CSF濃度增加或患有該疾病之病患受影 響細胞或組織中C-/WS之酪胺酸自體磷酸化反應増加而證 實。可使用如上述之抗-M-CSF抗體檢測M-CSF之濃度增加。
於一具體實施例中，抗-M-CSF抗體能用來對患有可表現 C-/WM之腫瘤或可分泌M-CSF與可於細胞表面表現M-CSF
之腫瘤的病患投藥。較佳地，腫瘤所表現之c-/ms或M-CSF 濃度高於正常組織。腫瘤可為固體腫瘤或可為非-固體腫 瘤’如淋巴瘤。於一更佳具體實施例中，可對患有可表現 c-/m；ss之腫瘤、可表現M-CSF之腫瘤或可分泌MCSF之癌性 腫瘤的病患投予抗-M-CSF抗體。另外，腫瘤可為癌性。於 一更佳具體實施例中，腫瘤可為肺癌、乳癌、攝護腺癌或 結腸癌。於另一較佳具體實施例中，對病患投予之抗 -M-CSF抗體造成M-CSF不再與受體結合。於一較佳具 體實施例中，該方法可導致腫瘤重量或體積不増加或減 少。於另一具體實施例中，該方法可導致腫瘤細胞上之心加在 不被M-CSF結合。於另一具體實施例中，該方法可導致腫 瘤細胞上之M-CSF不被C-/Ws結合。於另一具體實施例中， 該方法可導致腫瘤細胞分泌iM_CSF不被結合。於一 較佳具體實施例t，該抗體係選自由下列組成之群：252、 B8M00.3.S.3>2.7.3M.120.1^9.14.41，8.10.3F.9.7.2IF^ 9.14.4、8.10.3、9.7.2、9.7.2C-Ser、9.l4.4C-Ser、8.10.3C-Ser 8.10.3- CG2、9.7,2-CG2、9.7.2-CG4、9.14.4-CG2、 9.14.4- CG4、9.14.4-Ser、9.7.2_Ser、8 1〇 3 Ser 8 i〇 3_cg4 8.10.3FG1或9.14.4G卜或其包括重鏈、㈣或抗原結合區 95567.doc -94- 1356063 於另一較佳具體實施例中，抗_M_CSF抗體可對能表現不 當之高濃度Μ-CSF的病患投藥。於此項技藝中已知高濃度 M-CSF表現性可導致各種常見癌症。於一具體實施例中， 該方法係有關於治療癌症，如腦癌、鱗狀細胞癌、膀胱癌、 胃癌、胰臟癌、乳癌、頭部癌症、頸部癌症、食道癌、攝 護腺癌、結腸直腸癌、肺癌、腎癌、腎臟癌、子宮癌、婦 科癌或甲狀腺癌。可以如本發明方法之本發明化合物治療 的病患包含，如已診斷為患有肺癌、骨癌、胰臟癌、皮膚 癌、頭及頸部癌症、皮膚或眼内黑色素瘤、子宮癌、卵巢 癌' 直腸癌、肛門區癌症、胃癌、結腸癌、乳癌、婦科腫 瘤（如子宮肉瘤、輸卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、陰道 癌或陰戶癌）、霍奇金氏症（Hodgkin，s disease)、食道癌、小 腸癌、内分泌系統癌症（如f狀腺癌、副甲狀腺癌或腎上腺 癌）、軟組織之肉瘤、尿道癌、陰莖癌、攝護腺癌、慢性或 急性白血病、固體腫瘤（除血液、骨髓或淋巴系統外之身體 組織癌症，如肉瘤 '癌或淋巴瘤）、童年期固體腫瘤、淋巴 球性淋巴瘤、膀胱癌、腎臟或輸尿管癌（如腎細胞癌、腎盂 癌）或中樞神經系統腫瘤（如原發性CNS淋巴瘤、脊柱腫瘤、 腦幹神經膠質瘤或腦下垂體腺瘤）的病患。於一更佳具體實 施例中’抗.Μ-CSF抗體可對患有乳癌、攝護腺癌、肺癌或 結腸癌之病患投藥。於―更佳具體實施例中，該方法可導 癌症停止異吊地增殖，或者不增加或 抗體可投藥-次，但更佳為可多次投藥。如該： 體可自 每日投樂三次至每六個月或更久投藥一次。投藥時間表可 95567.doc •95· 1356063 為如每曰三次、每曰二次、每曰一次、每二曰一次、每三 日一次、每週一次、每二週一次、每月一次、每二月一次、 每二月一次及每六個月一次。抗體亦可經由微型藥泵持續 投藥。該抗體可藉由口服投藥、黏膜投藥、頰内投藥、鼻 内投藥、吸入投藥、靜脈注射、皮下注射、肌肉注射、非 經腸月投藥、腫瘤内或局部投藥途徑進行投藥。抗體可於 腫瘤的部位或發炎的身體部分投藥，投入至腫瘤或發炎的 身體部分内或於遠離腫瘤的位置或發炎之身體部分處投 藥β亥抗體可投藥一次、至少二次或至少投予一段時間直 到病況經治療、減輕或治癒。只要腫瘤存在，該抗體通常 可持續給予，前提為該抗體可導致腫瘤或癌症停止生長或 減少重量或體積或直到發炎的身體部分治癒。抗體通常可 以則述醫藥組合物之一部分來投予。抗體劑量範圍通常為 0.1-100 mg/kg，更佳為 0 5_50mg/kg，更佳為 12〇mg/kg, 且更佳為1-10 mg/kg。抗體之血清濃度可藉任何本技藝中已 知之方法測量。 另一方面，抗-M-CSF抗體可與其它治療劑（如抗炎劑、抗 凝血劑可降低或減少血壓劑、抗癌劑或分子）對患有高增殖 性失調（hyperproUferative dis〇rder)(如癌或腫瘤）病患共同 投藥。一方面，本發明係有關於一種可治療哺乳動物高增 殖性失調之方法，其包括對該哺乳動物投予治療有效量之 本發明化合物並結合選自由下列各物組成之群的抗-腫瘤 劑（但不限於）：有絲分裂抑制劑、烷化劑 '抗-代謝劑、嵌 入斌劑、生長因子抑制劑、細胞週期抑制劑、酵素、異構 95567.doc -96- 1356063 酵素抑制劑、生物反應調節劑、抗-荷爾蒙、激酶抑制劑、 基質金屬蛋白酶抑制劑、基因療法及抗-雄激素物質。於一 更佳具體實施例中，抗體可與抗癌藥共同投藥，如阿錐霉 素或紫杉醇（taxal)。於另一較佳具體實施例中，抗體或組 合療法係與放射線療法，化學療法、光動力療法、手術或 其它免疫療法一起投予。於另一較佳具體實施例中，抗體 可與另一抗體共同投藥。如抗-M-CSF抗體可與已知可抑制 腔瘤或癌細胞增殖之抗體或其它藥劑共同投藥，如可抑制鲁 erbB2受體' EGF-R、CD20或VEGF之抗體或藥劑。 共同投予抗體以及附加之治療劑（組合療法）包含投予一 種包括抗-M-CSF抗體及附加之治療劑之醫藥組合物，以及 投予一或多種分開的醫藥組合物，一種包括抗_M CSF抗體 而另一種包括附加之治療劑。此外，雖然共同投藥或組合 療法通常指抗體及附加之治療劑於同一時間共同投藥，但 亦包含抗體及附加之治療劑於不同時間投藥之實例。例如 抗體可每二天投藥一次，而附加之治療劑則每日投藥一籲 次。或者，該抗體可於以附加治療劑治療失調前或治療後 投予。同樣地，抗-M-CSF抗體之投予可於進行其它療法（如 放射線療法、化學療法、光動力療法、手術或其它免疫療 法）之前或之後投藥。 抗體與一或多種附加之治療劑（組合療法）可投予一次、 一人或至7 ί又時間，直到病況已經治療、減輕或治療。 較佳地，組合療法可多次投藥。组合療法可由每日投藥三 次至每六個月投藥-次。投藥時間表可為如每日三次、每 95567.doc -97- 曰二次、每曰一次、每二曰一泠 _ — 母三日一次、每週一次、 母二週一次、每月一次'每二個日 斤 > 一個月一次、每三個月一次及 母/、個月一次或者其可藉微型 _ 樂粟持續投樂《組合療法可 错口服投藥、黏膜投藥、頰内投藥、鼻内投藥、吸入投藥、 靜脈注射、皮下注射、肌肉注射’非經腸胃道投藥、腫瘤 内或局部投藥途徑。 組合療法可於距腫瘤部位較遠的部位投藥。只要該腫瘤 存在，組合療法通常可持續給予，前題為該抗體可導致腫 瘤或癌症停止生長或重量或體積減少。 於另一具體實施财，抗-M_CSF抗體係以放射標記、免 疫毒素或毒素標定，或為一種包括毒性肽之融合蛋白。抗 M-CSF抗體或抗·m-CSF抗體融合蛋白將放射標記、免疫毒 素、毒素或毒性肽導入可表現M_CSF2細胞中。於一較佳 具體實施例中’放射標記、免疫毒素、毒素或毒性狀於抗 -M-CSF抗體與M_CSF在標的細胞表面結合後方才内在化。 另一方面，抗-M-CSF抗體可用於治療非癌性狀態，其中 之雨濃度M-CSF及/或M-CSF係與非癌性狀態或疾病有關。 於一具體實施例中，該方法之步驟包括對病患投予抗 -M-CSF抗體，該病患患有由高濃度m_CSF及/或M-CSF濃度 或活性所引起或惡化之非癌性病理狀態。於_更佳具體實 施例中’抗-M-CSF抗體可減緩非癌性病理狀態的發展。於 一更佳具體實施例中，抗-M-CSF抗體可中止或反轉（至少在 某種程度上）非癌性之病理狀態。 基因療法 95567.doc • 98 · 1356063 本發明核酸分子可藉基因療法對需要之病患投藥。該療 法可用於活體内或活體外。於一較佳具體實施例中，其係 對病患投予可編碼重鏈及輕鏈之核酸分子。於__更佳具體 實施例中’可投予核酸分子以便其能穩定地併人心胞染色 體中，因為這些細胞係專供抗體製造。於―較佳具體實施 例中’前驅B細胞可經轉移感染或活體外感染並再·移植至 需要之病患。於另一具體實施例中 則驅B細胞或其它細胞 係於活體内感染，其係使用已知可感染所欲之細胞類型的 病毒。用於基因療法之代表性載體包含脂質體、f體及病 毒性載體。示紐病毒載體為反轉㈣毒、腺病毒及腺相 關病毒。於活體内或活體外感染後，抗體之漠度表現可由 接受治療病患取得之樣本中、使用任何此項技藝中已知或 在此所述之免疫分析法監測。 於-較佳具體實施例中，基因療法的步驟包括投予經分 離之可編碼抗-M-CSF抗體的重鏈或其抗原結合部分之核 酸分子’以及表現該核酸分子。於另―具體實施例中，基 因療法的步驟包括投予經分離之可編碼抗抗體輕 鏈或其抗原結合部分的核酸分子，以及表現該核酸分子。 於更佳方法中，基因療法的步驟包括投予經分離之可編 碼重鏈或其抗原結合部分的核酸分子及一種已分離之可編 碼本發明抗_M_CSF抗體之輕鏈或其抗原結合部分的核酸 刀子，以及表現該核酸分子。基因療法的步驟亦可包括投 予另外的抗癌劑，如紫杉醇或阿錐霉素。 為使本發明更加被瞭解，提供下列實例。這些實例僅供 95567.doc -99- 1356063 說明之目的，不可理解為欲以任何方式限制本發明範圍。
實例I 產生可製備抗-M-CSF抗體之細胞株 本發明抗體之製備、選擇與如下述： 免疫作用及產生融合瘤 8至10週齡之愛先諾基因轉殖鼠以腹腔注射或於其後腳 墊以人類M-CSF(10 pg/每劑/鼠）進行免疫《將該劑量於三至 八週以上的期間内重覆5至7次。於進行融合前4曰，最候一 φ 次對老鼠注射含人類M-CSF之PBS。將取自免疫鼠之脾臟及 淋巴結淋巴球與非分泌性骨髓瘤P3-X63-Ag8.653細胞株融 合’再將融合之細胞進行如前述之HAT選擇（嘉福力（Galfre) ; 及米爾斯坦（Milstein)，MeiZ/od 73:3-46，1981)。 可取得一組全部都會分泌M-CSF特異性人類IgG:7及IgG4 抗體之融合瘤。抗體亦可使用如巴伯庫克（Babcook)，J.S. 等人，iVoc. iWii/. USA 93:7843-48，1996所述之 愛先馬克司（XENOMAX™)技術產生。選擇9種設計來製造 _ 本發明抗體之細胞株供進一步研究並定名為252、88、100、 3.8.3、2.7.3、1.120.1、9.14.4、8.10.3及 9.7.2。 該融合瘤係於2003年8月8日依布達佩斯條約（Budapest Treaty)儲存於美國菌種保存中心（ATCC)，10801 University Blvd. ， Manassas ， VA 20110-2209。融合瘤指定之登錄號如 下： 融合瘤 3.8.3(LN 15891) PTA-5390 PTA-5391 融合瘤 2.7.3(LN 15892) 95567.doc -100- 1356063 PTA-5392 PTA-5393 PTA-5394 PTA-5395 PTA-5396 PTA-5397 PTA-5398 PTA-5399 PTA-5400 PTA-5401 融合瘤 1.120.1(LN 15893) 融合瘤 9.7.2(LN 15894) 融合瘤 9.14.4(LN 15895) 融合瘤 8.10.3(LN 15896) 融合瘤 88-y(UC 25489) 融合瘤 88-k(UC 25490) 融合瘤 100-y(UC 25491) 融合瘤 100-k(UC 25492) 融合瘤 252-y(UC 25493) 融合瘤 252-k(UC 25494) 實例Π 基因利用分析 可編碼單株抗體 252、88、100、3.8.3、2.7.3、1.120.1、 9.14.4、8.10.3及9.7.2之重鏈及輕鏈的DNA係由各自的融合 瘤細胞株所選殖出且其DNA序列可藉熟諳此藝者已知之方 法測定。此外，源自融合瘤細胞株9.14.4、8.1 0.3及9.7.2之 DNA係於可變區之特定框構區進行突變及/或進行同型 物-轉換以分別獲得如9.14.41、8.10.3F及9.7.2IF。由抗體之 核酸序列及預期之胺基酸序列，可測定各抗體鏈所使用基 因之相同度（"VBASE")。表2提出如本發明選定抗體的基因 使用情況： 95567.doc -101 - 1356063 表2 重鏈及輕鏈基因使用狀況 選殖株 重鏈 κ輕鏈 SEQ ID NO : VH DH JH SEQ ID NO: V欠 Jk 252 1,2 3-11 7-27 6 3,4 012 3 88 5,6 3-7 6-13 4 7,8 012 3 100 9,10 3-23 1-26 4 11,12 L2 3 3.8.3 14 3-11 7-27 4 16 L5 3 2.7.3 18 3-33 1-26 4 20 L5 4 1.120.1 22 1-18 4-23 4 24 B3 1 9.14.41 25,26 3-11 7-27 4b 27,28 012 3 8.10.3F 29,30 3-48 1-26 4b 31,32 A27 4 9.7.2IF 33,34 3-11 6-13 6b 35,36 012 3 9.14.4 37,38 3-11 7-27 4b 27,28 012 3 8.10.3 29,30 3-48 1-26 4b 43,44 A27 4 9.7.2 45,46 3-11 6-13 6b 47,48 012 3 8.10.3FG1 97,98 3-48 1-26 4b 31,32 A27 4 9.14.4G1 101,102 3-11 7-27 4b 27,28 012 3 9.14.4C-Ser 54 3-11 7-27 4b 56 012 3 9.14.4-CG2 74 3-11 7-27 4b 56 012 3 9.14.4-CG4 78 3-11 7-27 4b 56 012 3 8.10.3C-Ser 58 3-48 1-26 4b 60 A27 4 8.10.3-CG2 62 3-48 1-26 4b 60 A27 4 8.10.3-CG4 94 3-48 1-26 4b 60 A27 4 8.10.3-Ser 90 3-48 1-26 4b 43,44 A27 4 9.7.2C-Ser 50 3-11 6-13 6b 52 012 3 9.7.2-CG2 66 3-11 6-13 6b 52 012 3 9.7.2-CG4 70 3-11 6-13 6b 52 012 3 9.7.2-Ser 86 3-11 6-13 6b 47,48 012 3 9.14.4-Ser 82 3-11 7-27 4 27,28 012 3 重鏈及輕鏈之特定殘基的突變生成係藉預設引子依照廠 商之操作指南使用快速變化定點突變套組（出自Stratagene) 95567.doc -102- 1356063 來進行》突變藉自動化定序加以確認，並突變之插入段次 選殖入表現性載體中。將表現性載體轉移感染至HEK293細 胞以產生足供特性描述的抗體。
實例III M-CSF鼠單核球細胞增殖分析
進行活體外分析以測量於抗-M-CSF抗體存在之下的 M-CSF-依賴性鼠單核球細胞之增殖情況，從而測定抗 -M-CSF抗體抑制程度。 取得鼠單核球細胞、M-NFS-60細胞（得自美國菌種保存中 心（ATCC)(Manassas ’ VA))，並保持於 RPMI-1640培養基 中，培養基包含2mM L-麩醯胺酸（ATCC)、10%加熱不活化 之胎牛血清（FBS)(萊富生命科技股份有限公司 (Invitrogen)，Carlsbad ’ CA)、0.05 mM 2-疏基乙醇（西格瑪 (Sigma)，St. Louis MO)(分析培養基）、以及 15 ng/ml人類 M-CSF。將M-NSF-60細胞分裂到5 X 104供次曰使用或2.5 X 104以供兩日内使用。用於分析前，細胞以RPMI-1640沖洗 修 三次’計數並使用分析培養基調整體積以產生2 X 1 〇5細胞 /ml。所有條件狀況皆一式三份地於96-孔經處理之組織培養 盤（康寧（Corning)，Corning ’ NY)中進行。於各小孔中加入 5 0 pi之經清洗細胞、體積25 μΐ之100 pM或1000 PM M-CSF 以及存於醋酸鹽缓衝液（140 mM氣化納、20 mM醋酸鈉及〇 2 1^/爪1聚山梨醇酐脂肪酸酯8〇，？115.5)中，體積25 01之各 種濃度的受試或控制抗體，使最终體積為100 μΐ。單獨測試 本發明抗體及與人類M-CFS—起進行。培養皿於37°c之5% 95567.doc •103- 1356063 C〇2中培養24小時。 於24小時後’每孔添加1〇 μ丨之〇 5 μ ci 3h_胸腺嘧啶（安瑪 西亞生物科技有限公司（Amersham Bi〇sciences.) Piscataway，NJ)並與細胞振動3小時，為檢測結合之胸腺嘧 咬含量’將細胞採集至預先潤濕之單濾（unifilter) GF/C濾板 (帕卡德（Packard)，Meriden，CT)再以水沖洗1〇次。讓試盤 乾燥隔夜。將底蓋加至濾板上。然後，於每個小孔中添加 45 μΐ的微新特（Microscint) 20 (帕卡德，Meriden，CT) » 加 上頂蓋後，將試盤置於液態閃爍計數儀（Trilux microbeta counter)(華萊士（Wallac)，Norton，OH)中進行計數。 ic 貫驗顯不本發明之抗-Μ - C S F抗體可抑制對jyj - c S F反 應之鼠單核球的細胞增殖。另外，藉使用不同濃度抗體， 測定出抗體252、88、100、3.8.3、2.7.3、1.12(M、9 14 41、 8.10^、9.7.2^、9.14.4、8.10.3及9.7.2抑制鼠單核球細胞 增殖之IC5G(細胞增殖試驗，表3a及表3b)。 表3a 抗體 252 88 100 3.8.3 2.7.3 M-CSF鼠單核 球細胞增殖試 驗[IC50，M] 1.86 x ΙΟ.10 2.31 χ 1〇-ιο 7.44 χ ΙΟ'10 7.3χ ΙΟ*11 1.96 χ ΙΟ·10 人類全血單核 球活化試驗 8.67 χ ΙΟ*10 5.80 χ ΙΟ'10 1.53χ ΙΟ'10 8.6 χ ΙΟ*11 ΤΊΤ1Γ ΙΟ'10 [IC50 · M] 受體結合抑制 分析[IC5G，Ml 7.47 χ ΙΟ'10 4.45 χ ΙΟ'10 1.252χ ΙΟ·9 7.0 χ ΙΟ'11 3.08 χ ΙΟ'10 1.120,1 "Γ99Γ 10*10 8.85 X 1〇-'°
TT57T 10·10 95567.doc -104·
--- 表3b 抗體 9.14.41 8.10.3F 9.7.2IF 9.14.4 8.10.3 9.7.2 M-CSF 鼠 球細胞增殖試 驗[ic50，Ml ----- 2.02 X 1〇-1〇 4· 13 X 10·10 7.37 X 10·丨0 2.02 X 10·10 4.13 X 10'10 7.37 X 10'10 人類全血單核 球活化試驗 [IC5〇 » Μ] \2A9lT 1〇-10 4.46 X 10.10 1. 125x ΙΟ'9 6.48 X 10·10 2.8 X 1〇·10 1.98 X 1〇-10 党體結合抑制 試驗[IC5G，Ml 2.97 X 1〇-ιο 9.8 X 10'11 5.29 X 10·10 4.1 X 10*'1 1.5 X 10'9 6 X 10'12 實例 IV 1356063 人類全釭單核球活化試驗 在抗-M-CSF抗體存在的情況下進行活體外分析，測量 M-CSF依賴性單核球形狀變化以測定抗M_CSF抗體可否抑‘ 制全血中單核球活化作用及其對單核球形狀變化之抑制程 度。 於96-孔組織培養盤之個別小孔中，混合6 ^之丨.7 抗 M-CSF及94 μΐ之人類全血，使最終濃度成為1〇2 μΜ抗 M-CSF抗體。該培養皿於c〇2組織培養保溫器中於37〇(：培籲 養。然後’將孔盤由保溫箱中移出。於各小槽中加入丨〇〇 4 之固定液（含〇·5°/。福馬林之磷酸鹽緩衝食鹽水（不含MgCl2 或CaCh))將孔盤於室溫下培育1〇分鐘。將來自各孔之各樣 本各取1 80 μΐ與1 ml之紅血球溶解緩衝液混合。將試管震盪 2秒》接著將樣本於37。(：之榣動水浴中培養5分鐘以溶解紅 血球細胞’但讓單核球維持完整。緊接著此培育之後，於 營光-活化細胞抑· 9¾ (FACS)機（BD Beckman FACS)判讀樣本 並使用FACS Station軟體3.4版進行資料分析。 95567.doc -105· 1356063 這些實驗顯示，相較於控制樣本，本發明抗-M_CSF抗體 可抑制單核球形狀改變。使用單核球形狀變化分析可測定 抗體 252、88、100、3.8.3、2.7_3、1.120.1、9.14.41、8 10 3F、 9.7.2IF、9.14.4、8.10.3及9.7.2之1(：5()(人類全血單核球活化 作用，表3a及表3b)。
實例V c-/mi受艘結合抑制分析 進行活體外分析測量在抗-M-CSF抗體存在的情況下與 | 受體結合之M-CSF以測定抗-M-CSF抗體是否可抑制 M-CSF與受體結合及其抑制程度。 沖洗以人類C-/WS或M-NSF-60細胞轉移感染之NIH 3T3 細胞，該細胞係維持於不含鎂或鈣之杜比克氏（Dulbecc〇ls) 磷酸鹽緩衝食鹽水中。BNIH-3T3細胞由含5 mM乙二胺四 乙鹽（EDTA)，pH 7.4之組織培養皿中移出。將nih-3T3 細胞放回組織培養器中1-2分鐘並輕敲燒瓶以鬆脫細胞。再 將NIH-3T3，細胞及M-NSF-60細胞移至50 ml試管令並以反 · 應緩衝液（lx RPMI(不含重碳酸納），含5〇 mM N-2-經乙基 哌讲-：^，-2乙烷磺酸（11£?£8)，？117.4)沖洗二次。然後，將 NIH-3T3細胞再懸浮於最終濃度為丨.5 χ 細胞/ml之反應 緩衝液中。將M-NSF-60細胞再懸浮於最終濃度為2 5 X ι〇6 細胞/ml之反應緩衝液中。 進行分析時，於結合試管中混合9 μΐ之無菌〇 4 M蔗糖溶
液、100 μΐ之丨25I-M-CSF(安瑪西亞公司，imQ7228v)，最終 濃度為 200 μΜ’ 溶劑為含 50 mM HEPES 之 RPMI-1640(pH 95567.doc •106- 1356063
7_4)、0.2%牛血清白蛋白及100 μΐ最終濃度為200 nM之未標 定M-CSF。隨後於每個試管中加入50μ1之濃度漸增的受試 抗體。為測定抗體之非特異性結合，吾人亦採用加入200 ηΜ M-CSF之樣本。而控制組試管並未添加抗體。然後於每管 内加入15,000個NIH-3T3細胞或250,000個M-NSF-60細胞。 所有試管皆於室溫中培養3小時並再以10,000 rpm離心2分 鐘。將包含細胞顆粒之試管的尖端戴出並使用帕卡德眼鏡 蛇II伽瑪計數器（Packard Cobra II Gamma counter)測定與細 胞結合之M-CSF數量。由總括的結合減去非-特異性結合可 測定特異性結合》所有分析係一式二份地進行。結合資料 使用電腦軟體Graph Pad Prism 2.01進行分析。 這些實驗顯示相較於控制組樣本，本發明抗-M-CSF抗體 可抑制M-CSF與c-/mi受體結合。此外，藉使用不同濃度抗 體，測定出下列各抗體抑制受體結合之IC5〇 :抗體252、88、
100、3.8_3、2.7.3、1.120.1、9.14.41、8.10.3F、9.7.2IF、 9.14.4、8.10.3及9.7.2(受體結合抑制試驗，表3a及表3b)。
實例VI 經由BIACORE™測定抗-M-CSF單株抗體之親和力常數(KD) 純化抗體之親和力測量係使用BIACORETM 3 000儀器，依 照廠商建議步驟、藉表面電漿共振來進行。 對抗體3.8.3、2.7.3及1.120.1而言，該實驗係利用 BIACORE™ 3000 儀器，於 25°C、在包含 0.0005% 吐溫 (Tween)-20之杜比克氏磷酸鹽緩衝食鹽水中進行。由沉降速 度實驗可獲知蛋白質濃度或藉使用得自胺基酸序列之理論 95567.doc -107· 消光係數於280 nm測量樣本波長亦可《以實驗測量抗體與 固定抗原之結合時，M-CSF可藉標準直接胺耦合步驟固定 於B1片上。準備3.8.3、2·7·3及1.120.1之0.69 μΜ抗體樣本。 將這些樣本以3倍率連續稀釋成為8·5 ηΜ或2.8 ηΜ，約為稀 釋100倍之濃度。對各濃度而言，樣本以兩份注射4分鐘， 流量為5 μΐ/min。監測分離2000秒。使用BIACORETM Biaevaluation軟體將資料進行全球比對成為一簡單1:1結合 模式。在所有案例中，本方法係用來獲得Iff值且發現此資 料組非常相符於得自全球比對結合及解離數據資料。 對抗體252、88及100而言，該實驗係於BIACORE™ 3000 儀器，於25°(：、在1^34?緩衝液（0.01]^^1£?£8、？117.4、 0.15 M NaCM、3 mM EDTA、0.005%表面活性劑 P20)中進行。 為實驗測量抗體與固定抗原之結合，M-CSF可藉標準直接 胺耦合步驟固定於CM5研究級感應片上。所準備的抗體252 and 100樣本為12.5 ηΜ、抗體88樣本為25.0 ηΜ。將這些樣 本以二倍率連續稀釋至0.78 ηΜ，約成為15-30倍稀釋濃度。 將各濃度之樣本一式二份地以隨機順序注射3分鐘，流量為 30 μΐ/min。監測分離300秒。使用 BIACORE™ Biaevaluation 軟體將資料進行全球比對成為一簡單1:1結合模式。在所有 案例中，本方法係用來獲得koff值且發現此資料組非常相符 於得自全球比對結合及解離數據資料。 表 4顯示抗體252，88，100，3.8.3，2.7.3 及 1.120.1之結 果。 95567.doc -108- 1356063
表4 _ 252 88 100 3.8.3 2.7.3 1.120.1 K〇(M) 1,33x10." ----—_—— 1.33xl0'9 2.0χ10·π 4.0xl〇·10 4.7xl0·9 5.4xl0'9 K〇ff(l/s) l.〇3xl〇·6 7.3xl0·5 實例VII 由8.10.3融合瘤細胞製備8.10.3抗體
抗體8.ΐ〇·3係於3L射流旋轉器（sparged spinners)製備。3L 射流旋轉燒瓶為一種玻璃器皿，其使用以磁性平台所控制 推動器來混合培養物。將旋轉器連接至氣體管線以供給5% # C〇2及空氣。首先將81〇·3融合瘤細胞解離在丁_25細胞培養 燒瓶中。細胞逐漸擴充直到有足量細胞可供植入射流旋轉 器中。 < 以8.10.3融合瘤細胞播種於二個3L之射流旋轉燒瓶内，培 養基為不含融合瘤血清’兩個射流燒瓶之其它細節見表5。 所顯示超低IgG血清（吉布可（Gibco) cat# 16250-078)、L-麵
酿胺酸（JRH生物科技公司cat# 59202-SOOM)、非·必須胺基 酸（吉布可cat# 11140-050)、蛋白月東（迪富可（Difc〇) cat# 211693)、葡萄糖（由JT貝克（Baker) cat# 1920-07所自製材 料）及抗-起泡C(西格瑪cat.# A-8011)的濃度為其於培養基 之最終濃度。平衡各反應器體積使用無融合瘤灰清培養基。 表5.於兩個3L射流旋轉器中培育融合瘤8.10.3之條件狀
條件狀況 播種密度（ΐχΐ〇6 旋轉器1 旋轉器2 ------ 丨.16 ml 細胞/ml) 0.16 ml 95567.doc •109· 1356063
不含融合瘤血清培養基（吉布可cat# 平衡 平衡 12045-076 超低IgG血清（吉布可cat# 16250-078) 5% 5% L-麩醯胺酸（JRH生物科技公司cat# 8 mmol/L 8mmoVL 59202-SOOM) 非-必須胺基酸（吉布可cat# 11140-050) 1% 1% 蛋白腺(Difco cat# 211693) 1 g/L 1 g/L 2M葡萄糖（由JT貝克自製材料） 8g/L 8g/L 抗-起泡C(西格瑪cat.# A-8011) 1 ml/L lml/L
讓培養物成長15天，當生存力低於20%時進行收集。生 存力可藉錐藍（trypan blue)排除法以自動化細胞計數器（西 戴克司（Cedex)，印話華提司（Innovatis))測定。採集可藉離 心及隨後之過慮作用達成。於7000 rpm離心1 5分鐘後可獲 得澄清之上清液並隨後以無菌0.22 μιη 4”阿波提凱普 (Opticap)密理博（Millipore)濾膜（cat# KVSC04HB3)過濾至 10L 無菌 TC-Tech袋（cat#P/N 12420 袋型號 CC-10-112420)。 濾液隨後於下列實例中進行純化。
實例VIII 抗-M-CSF抗體之純化 首先預備蛋白質A管柱（安瑪西亞製藥公司），藉由以3管 柱體積之8M尿素沖洗，再以20 mM Tris(pH 8)平衡沖洗。 來自實例VII之最終濾出液在裝入蛋白質A管柱之前，先藉 重力-滴落方式攙入2°/。v/v之1 M Tris pH 8.3及0.02%之 NaN3。裝填完成後，以5管柱體積之20 mM Tris(pH 8)沖洗 95567.doc -110- 1356063 樹脂，接著以5管柱體積之洗脫緩衝液（〇 lM甘胺酸pH3 〇) 沖洗。注意任何沉澱物，接著攙入1〇%v/v之iMTrispH8 3 以洗提抗體。經洗提之蛋白質接著以透析緩衝液（14〇福
NaC1/20mM醋酸鈉pH 5.5)進行透析成為原洗提物之ι〇〇倍 份量。於透析後’該抗體以〇·22μ_膜進行無菌過渡並貯 存直到進一步應用》
實例IX 猴子實驗處理及單核球計數 每劑1組採用一隻雄性與一隻雌性食蟹猴，於約5分鐘以 上的時間以靜脈注射投予載劑或抗體8 1〇 3(如實例νπ& VIII中所述製備），劑量分別為0、01、i或5 mg/kg，容量 為3.79 mL/kg〇於投藥後24及72小時及每週（共3週）採集供 臨床貫驗分析之血液樣本《單核球計數係藉光散射光散射 使用亞伯特診斷公司之細胞達因系統（Abb〇ttPark，nUn〇is) 測定。 於所有劑量組之單核球總數（圖1八及i B)中可觀察到劑量 · -依賴性減少（〜25%至85%)。於第2週時0」及！ mg/kg組之單 核球計數似乎回升至接近控制組，而5mg/kg組之單核球計 數於第3週時仍減少。 CDU + CD16+單核球亞族分析 將靈長類全企抽入含有肝素鈉之真空採血管（Vacutainer be)令將〇.2 ml之各血液樣本加入含1 〇 mi紅血球溶解緩 衝液（西格瑪（Sigma))之15 ml圓椎形聚丙烯離心機試管 中，並於370C水浴中培養15分鐘。接著將試管於索福 95567.doc -111 - 1356063 (Sorvall) RT7離心機以L200 rpm離心5分鐘。吸出上清液， 將顆粒再懸浮於10 ml之4°C FACS缓衝溶液中（漢克氏 (Hanks')平衡鹽溶液/2%FBS/0.02%疊氮化鈉），並將試管再 次以1,200 rpm離心5分鐘。吸出上清液並將顆粒再懸浮於由 下列各物所組成之抗體混合物中：80 μΐ 4°C FACS緩衝液、 10 μΐ FITC-結合抗_人類CD14單株抗體（BD生物科技公司， San Diego，CA)、〇5 μ1 CyS_pE_ 結合抗-人類 cm6 單株抗 體（BD生物科技公司，San Dieg〇，CA)&i〇 y pE結合抗_ 人類CDS9單株抗體（BD生物科技公司，San Dieg〇，CA)。 細胞懸浮液於冰上培養20分鐘，之後加入4£>Ct1〇mlFACS 緩衝液並將細胞如前述方式離心。吸出上清液，並將細胞 顆粒再懸浮於400 μΐ FACS緩衝溶液中並於FACSCanber流 速細胞分析儀（BD生物科技公司，SanJose，CA)分析細胞。 每樣本中收集30,000個細胞之資料。 併用前角（forward angle)光散射及直角（〇rth〇g〇nai)光散 射來鑑別單核球族群。進一步分析單核球群細胞之CD14及 CD16表現性。可觀察到二種明顯的單核球族群，一種可表 現南濃度之CD14及低濃度（或無）之CDi6 (CD14++C!D16_) 而另一種可表現較低濃度之CD14及高濃度之CD16 (cm4+CD16+>，類似前述之二種單核球亞族見於人類週邊 血液中（辛格勒-黑特布拉克（Ziegler_Heitbr〇ck) H w， /所/抑《0/0灯7b如少17:424-428(1996))。對受測之各靈長類 而言，於以8.10.3注射後第1、3、7、14及21日各次抽血後 進行測定CD14+CD16 +亞族中之單核球百分比。 95567.doc •112· 1356063 圖4?顯示抗體1.120.1(8£()1〇1^〇:24之殘基21-134)之輕 鏈變異區的預期胺基酸序列之線性排列與種株vkB3、Jki序 列（SEQ ID NO : 112)之對照。 圖4〇顯示抗體252(8£(^1〇1^〇:2之殘基20-136)之重鏈變 異區的預期胺基酸序列之線性排列與種株vh3-11、Dh7-27
Jh6序列（SEQ ID NO : 106)之對照。
圖4H顯示抗體88(SEQ ID NO 3 : 6之殘基20-138)之重鏈 變異區的預期胺基酸序列之線性排列與種株VH3-7、 DH6-13、JH4序列（SEQ ID NO : 105)之對照。 圖41顯示抗體l〇〇(SEQ ID NO: 10之殘基20-141)之重鏈 變異區的預期胺基酸序列之線性排列與種株VH3-23、 DHl-26、JH4序列（SEQ ID NO : 104)之對照。 圖4J顯示抗體3.8.3(SEQ ID NO : 14之殘基20-135)之重 鏈變異區的預期胺基酸序列之線性排列與種株VH3-11、 DH7-27、JH4序列（SEQ ID NO : 108)之對照。 圖4K顯示抗體2.7.3(SEQ ID NO : 18)之重鏈變異區的預 · 期胺基酸序列之線性排列與種株VH3-33、DHl-26、JH4序列 (SEQ ID NO: 110)之對照。 圖4L顯示抗體1.120.1( SEQ ID NO: 22)之重鍵變異區的 預期胺基酸序列之線性排列與種株VH1-18、DH4-23、JH4序 列（SEQ ID NO : 111)之對照。 圖4M顯示抗體8.1〇_3(SEQ ID NO : 44)之輕鏈變異區的預 期胺基酸序列之線性排列與種株VkA27、JK4序列（SEQ ID NO : 114)之對照》 95567.doc •116- 1356063 圖4N顯示抗體8.10.3(SEQIDNO : 30)之重鏈變異區的預 期胺基酸序列之線性排列與種株VH3- 48、Ε)η1·26、^物序 列（SEQ ID NO : 113)之對照。 圖40顯示抗體9.14.4(SEQIDNO : 28)之輕鏈變異區的預 期胺基酸序列之線性排列與種株Vk012、Jk3序列（SEQ ID NO : 103)之對照。 圖4P顯示抗體9.14.4(SEQ ID NO : 38)之重鍵變異區的預 期胺基酸序列之線性排列與種株VH3-11、DH7-27、JH4b序 列（SEQ ID NO : 116)之對照。 圖4Q顯示抗體9.7.2( SEQ ID NO : 48)之輕鍵變異區的預 期胺基酸序列之線性排列與種株Vk012、Jk3序列（SEQ ID NO : 103)之對照。 圖4R顯示抗體9 7.2(SEQ ID NO : 46)之重鏈變異區的預 期胺基酸序列之線性排列與種株VH3-11、DH6-13、JH6b序 列（SEQ ID NO : 115)之對照。 圖4S顯示抗體9.14.4I(SEQ ID NO : 28)之輕鏈變異區的預 _ 期胺基酸序列之線性排列與種株VkO 12、Jk3序列（SEQ ID NO : 103)之對照。 圖4T顯示抗體9.14.4I(SEQ ID NO: 26)之重鏈變異區的預 期胺基酸序列之線性排列與種株VH3-11、DH7-27、JH4b序 列（SEQ ID NO : 116)之對照。 圖4U顯示抗體8.i〇.3F(SEQ ID NO : 32)之輕鏈變異區的 預期胺基酸序列之線性排列與種株VkA27、Jk4序列（SEQ ID NO : 114)之對照。 95567.doc 117 1356063 圖4V顯示抗體8.10.3F(SE Q ID NO : 30)之重鏈變異區的 預期胺基酸序列之線性排列與種株VH3-48、Dh1-26、JH4b 序列（SE Q ID NO : 113)之對照。 圖4W顯示抗體9.7.2IF(SE Q ID N 0 : 36)之輕鏈變異區的 預期胺基酸序列之線性排列與種株Vk012、Jk3序列（SE Q ID NO : 103)之對照。 圖4又顯示抗體9.7.21卩（3£()1〇1^0:34)之重鏈變異區的 預期胺基酸序列之線性排列與種株VH3-11、DH6-13、JH6b 序列（SEQ ID NO : 115)之對照。 圖4Y顯示抗體9.7_2C-Ser(SEQ ID NO : 52)之輕鏈變異區 的預期胺基酸序列之線性排列與種株Vk012、Jk3序列（SEQ ID NO : 103)之對照。 圖4Z顯示抗體9.7.2C-Ser(SEQ ID NO : 50)之重鏈變異區 的預期胺基酸序列之線性排列與種株VH3-11、DH6-13、JH6b 序列（SEQ ID NO: 115)之對照。 圖4八八顯示抗體9.14.4(：-861：(8£()10 1^0:56)之輕鏈變異 區的預期胺基酸序列之線性排列與種株Vk012、Jk3序列 (SEQ ID NO : 103)之對照》 圖4BB顯示抗體9.14.4C-Ser(SEQ ID NO : 54)之重鏈變異 區的預期胺基酸序列之線性排列與種株VH3-11、〇h7-27、 Jpi4b序列（SEQ ID NO : 116)之對照。 圖4(：(：顯示抗體8.10.3(：-861：(3£91〇]^〇:60)之輕鏈變異 區的預期胺基酸序列之線性排列與種株VkA27、jk4序列 (SEQ ID NO : 114)之對照。 95567.doc •118- 1356063 圖4DD顯示抗體8.10.3C-Ser(SEQIDNO : 58)之重鏈變異 區的預期胺基酸序列之線性排列與種株VH3-48、DHl-26、 JH4b序列（SEQ ID NO : 113)之對照。 圖4EE顯示抗體8.1 0.3-CG2(SEQ ID NO : 60)之輕鏈變異 區的預期胺基酸序列之線性排列與種株VkA27、JKk4序列 (SEQ ID NO : 114)之對照。 圖4FF顯示抗體8.10.3-CG2(SEQ ID NO : 62)之重鏈變異 區的預期胺基酸序列之線性排列與種株VH3-48、DHl-26、 JH4b序列（SEQ ID NO : 113)之對照。 圖4GG顯示抗體9.7.2-CG2(SEQ ID NO: 52)之輕鏈變異區 的預期胺基酸序列之線性排列與種株丫"12、Jk3序列（SEQ ID NO : 1〇3)之對照。 圖4HH顯示抗體9_7.2-CG2(SEQ ID NO: 66)之重鏈變異區 的預期胺基酸序列之線性排列與種株VH3-1卜DH6-13、JH6b 序列（SEQ ID NO : 115)之對照。 圖411顯示抗體9.7.2-CG4(SEQ ID NO : 52)之輕鏈變異區 的預期胺基酸序列之線性排列與種株Vk012、Jk3序列（SEQ ID NO : 1〇3)之對照。 圖4JJ顯示抗體9.7.2-CG4(SEQ ID NO : 70)之重鏈變異區 的預期胺基酸序列之線性排列與種株VH3-1卜DH6-13、JH6b 序列（SEQ ID NO : 115)之對照。 圖4KK顯示抗體9.14.4-CG2(SEQIDNO: 56)之輕鍵變異 區的預期胺基酸序列之線性排列與種株VkO 12、Jk3序列 (SEQ ID NO : 103)之對照。 -119- 95567.doc 1356063 圖4LL顯示抗體9.14.4-CG2(SEQ ID NO : 74)之重鏈變異 區的預期胺基酸序列之線性排列與種株VH3-11、DH7-27、 JH4b序列（SEQ ID NO : 116)之對照。 圖4MM顯示抗體9.1 4.4-CG4(SEQ ID NO : 56)之輕鍵變 異區的預期胺基酸序列之線性排列與種株vk〇12、Jk3序列 (SEQ ID NO : 103)之對照。 圖4NN顯示抗體9.14.4-CG4(SEQIDNO: 78)之重鏈變異 區的預期胺基酸序列之線性排列與種株VH3-11、DH7-27、 Jh41?序列（SEQ ID NO : 116)之對照。 圖400顯示抗體9.14.4-Ser(SEQ ID NO : 28)之輕鏈變異 區的預期胺基酸序列之線性排列與種株Vk〇12、Jk3序列 (SEQ ID NO : 103)之對照。 圖4PP顯示抗體9.14.4-Ser(SEQIDNO: 82)之重鏈變異區 的預期胺基酸序列之線性排列與種株VH3-U、DH7-27、JH4b 序列（SEQ ID NO : 116)之對照。 圖4QQ顯示抗體9.7.2-Ser(SEQ ID NO : 48)之輕鍵變異區 的預期胺基酸序列之線性排列與種株Vk012、jk3序列（SEq ID NO : 1〇3)之對照。 圖4RR顯示抗體9.7.2-Ser(SEQ ID NO : 86)之重鏈變異區 的預期胺基酸序列之線性排列與種株VH3-11、dh6- U、JH6b 序列（SEQ ID NO : 115)之對照。 圖4SS顯示抗體8.10.3-Ser(SEQ ID NO : 44)之輕鍵變異區 的預期胺基酸序列之線性排列與種株VkA27、jk4序列（SEQ ID NO : 114)之對照。 95567.doc -120- 1356063 圖4TT顯示抗體8.10.3-Ser(SEQ ID NO : 90)之重鏈變異區 的預期胺基酸序列之線性排列與種株Vh3_48、Dh丨_26、jH4b 序列（SEQ ID NO : 113)之對照。 圖4UU顯示抗體8.1〇.3-CG4(SEQ ID NO : 60)之輕鏈變異 區的預期胺基酸序列之線性排列與種株VkA27、jk4序列 (SEQ ID NO : 1 14)之對照。 圖4VV顯示抗體8.1〇.3-CG4(SEQ ID NO : 94)之重鍵變異 區的預期胺基酸序列之線性排列與種株VH3-48、Dhi_26、 Jh41d序列（SEQ ID NO : 113)之對照。 圖4\\^顯示抗體9.14.401(8丑(）10>^0:28)之輕鏈變異區 的預期胺基酸序列之線性排列與種株VkO 12、Jk3序列（SEq ID NO : 103)之對照。 圖4父又顯示抗體9.14.4〇1(8£(51〇1^〇:102)之重鏈變異區 的預期胺基酸序列之線性排列與種株VH3-1卜DH7-27、JH4b 序列（SEQ ID NO : 116)之對照。 圖4丫丫顯示抗體8.10.3?〇1(8丑(^1〇1^〇:32)之輕鏈變異區 的預期胺基酸序列之線性排列與種株VkA27、Jk4序列（SEQ ID NO : 114)之對照。 圖4ZZ顯示抗體8.10.3FG1(SEQ ID NO ·· 98)之重鏈變異區 的預期胺基酸序列之線性排列與種株VH3-48、DH1 -26、JH4b 序列（SEQ ID NO : 113)之對照。 95567.doc -121 - 1356063 序列表 <110> ΑΒσΕΝΙΧ,ΓΝα 華納蘭勃特帕克大衛藥廠 <12 0> M-CSF 之抗體
<130> ABX-PF4 PCT
<14 0> TW093127189 <141> 2004-09-08 <150> US 60/502,163 <151> 2003-09-10 <160> 117 <170> Patentln Ver. 3.2 <210> 1 <211> 1383 <212> DNA <213>智人 <400> 1 atggagttgg gtgcagctgg tgtgcagcct gggaaggggc gactctgtga caaatgaaca gggatggacg ccatccgtct ggctgcctgg ctgaccagcg agcagcgtgg gatcacaagc tgcccaccgt cccaaggaca agccacgaag gccaagacaa accgttgtgc ggcctcccag caggtgtaca tgcctggtca ccggagaaca tacagcaagc gtgatgcatg aaa ggctgtgctg tggagtctgg ctggattcac tggagtggat agggccgatt gcctgagagc tctggggcca tccccccggc tcaaggacta gcgtgcacac tgaccgtgcc ccagcaacac gcccagcacc ccctcatgat accccgaggt agccacggga accaggactg cccccatcga ccctgccccc aaggcttcta actacaagac tcaccgtgga aggctctgca gattttcctt gggaggcttg cttcagtgac ttcatacatt caccatctcc cgaggacacg agggaccacg gccctgctct cttccccgaa cttcccagct ctccagcaac caaggtggac acctgtggca ctcccggacc ccagttcaac ggagcagttc gctgaacggc gaaaaccatc atcccgggag ccccagcgac cacacctccc caagagcagg caaccactac gttgctatta gtcaagcctg tactacatga agtggtagtg agggacaacg gccgtgtatc gtcaccgtct agaagcacct ccggtgacgg gtcctacagt ttcggcaccc aagacagttg ggaccgtcag cctgaggtca tggtacgtgg aacagcacgt aaggagtaca tccaaaacca gagatgacca atcgccgtgg atgctggact tggcagcagg acgcagaaga taaaaggtgt gagggtccct gctggatccg gtagtaccat ccaagaactc actgtgcgag cctcagcttc ccgagagcac tgtcgtggaa cctcaggact agacctzacac agcgcaaatg tcttcctctt cgtgcgtggt acggcgtgga tccgtgtggt agtgcaaggt aagggcagcc agaaccaggt agtgggagag ccgacggctc ggaacgtctt gcctctccct ccagtgtcag gagactctcc ccaggctcca atactacgca actgtatctg agccctgggt caccaagggc agcggccctg ctcaggcgct ctactccctc ctgcaacgta ttgtgtcgag ccccccaaaa ggtggacgtg ggtgcataat cagcgtcctc ctccaacaaa ccgagaacca cagcctgacc caatgggcag cttcttcctc ctcatgctcc gtctccgggt 60 120 1ΘΟ 240 300 360 420 480 540 600 660 720 780 840 900 960 1020 1080 1140 1200 1260 1320 1380 1383
95567.DOC IT人 246PRJ > > > > 0 12 3 1X11 2 2 2 2 <400> 2
Met Glu Leu Gly Leu Cys Trp lie Phe Leu Val Ala lie lie Lys Gly 1 5 10 15
Val Gin Cys Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys 20 25 30
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45
Ser Asp Tyr Tyr Met Ser Trp lie Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60
Glu Trp lie Ser Tyr lie Ser Gly Ser Gly Ser Thr lie Tyr Tyr Ala 65 70 75 80
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn 85 90 95
Ser Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110
Tyr His Cys Ala Arg Ala Leu Gly Gly Met Asp Val Trp Gly Gin Gly 115 120 125
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 130 135 140
Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Ueu 145 ISO 155 160
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 165 170 175
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 180 IBS 190
Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 195 200 205
Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro 210 215 220
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu 225 230 235 240
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu 245 250 255
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu 260 265 270 •1
95567.DOC 1356063 2IAV ο N ^ 3 7 D fee
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gin 275 280 285
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 290 295 300
Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu 305 310 315 320
Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 325 330 335
Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro He Glu Lys Thr lie Ser Lys 340 345 350
Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 355 360 365
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 370 375 380
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin 385 390 395 400
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly 405 410 415
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin 420 425 430
Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 435 440 445
His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455 460 <210> <211> <212> <213> <400> 3 atgagggtcc ctgctcagct cctggggctc ctgctaccct ggctccgagg tgccagatgt 60 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 120 atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc ggctttttaa attggtatca gcagaaacca 180 gggaaagccc ccaagctcct gatctatgct acatccagtt tgcaaagtgg ggtcccattc 240 aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 300 gaagattttg caacttatta ctgtcaacag agttacagtg tcccattcac tttcggccct 360 gggaccaaag tggatatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 420 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgct agcgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 430 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 540 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 600 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 660 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 702
95567.DOC
1356063 <210> 4 c211> 234 <212> PRT <213>智人 》 <400> 4
Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Arg 10 15
Met Arg Val Pro Ala Gin Leu Leu 1 5
Gly Ala Arg Cys Asp lie Gin Met 20
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr 35 40 lie Ser Gly Phe Leu Asn Trp Tyr 50 55
Lys Leu Leu lie Tyr Ala Thr Ser 65 70
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly 85
Ser Leu Gin Pro Glu Asp Phe Ala 100
Ser Val Pro Phe Thr' Phe Gly Pro 115 120
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe 130 135
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val 145 150
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gin Trp 165
Gly Asn Ser Gin Glu Ser Val Thr 180
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr 195 200
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val 210 215
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly 225 230
Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser 25 30 lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser 45
Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro 60
Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Phe 75 80
Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser 90 95
Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr 105 110
Gly Thr Lys Val Asp lie Lys Arg 125 lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin 140
Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr · 155 ISO
Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser 170 175
Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr 185 190
Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 205
Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro 220
Glu Cys
<210> 5 <211> 1389 <212> DNA 4-
95567.DOC 1356063 <213>智人 <400> 5 atggaatttg ggctgtgctg ggttttcctt gttgctattt tagaaggtgt ccagtgtgag 60 gtgcagctgg tggagtctgg gggaggcttg gtccagcctg gggggtccct gagactctcc 120 tgtgcagcct ctggattcac ctttagtagc tattggatga gctgggtccg ccaggctcca 180 gggaaggggc tggagtgggt ggccaacata aagcaagatg gaagtgagaa atactatgtg 240 gactctgtga agggccgatt caccatctcc agagacaacg ccaagaactc actgtacctg 300 caaatgaaca gcctgagagc cgaggacabg gctgtgtatt actgtgctcc gggtatagca 360 gcagctggta gggcctactg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc agcttccacc 420 aagggcccat ccgtcttccc cctggcgccc tgctctagaa gcacctccga gagcacagcg 480 gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 540 ggcgctctga ccagcggcgt gcacaccttc ccagctgtcc tacagtcctc aggactctac 600 tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcaacttcg gcacccagac ctacacctgc 660 aacgtagatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga cagttgagcg caaatgttgt 720
gtcgagtgcc caccgtgccc agcaccacct gtggcaggac cgtcagtctt cctcttcccc 780 ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc cggacccctg aggtcacgtg cgtggtggtg 840 gacgtgagcc acgaagaccc cgaggtccag ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg 900 cataatgcca agacaaagcc acgggaggag cagttcaaca gcacgttccg tgtggtcagc 960 gtcctcaccg ttgtgcacca ggactggctg aacggcaagg agtacaagtg caaggtctcc 1020 aacaaaggcc tcccagcccc catcgagaaa accatctcca aaaccaaagg gcagccccga 1080 gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc cgggaggaga tgaccaagaa ccaggtcagc 1140 ctgacctgcc tggtcaaagg cttctacccc agcgacatcg ccgcggagtg ggagagcaat 1200 gggcagccgg agaacaacta caagaccaca cctcccatgc tggactccga cggctcctcc 1260 ttcctctaca gcaagctcac cgtggacaag agcaggtggc agcaggggaa cgtcttctca 1320 tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac cactacacgc agaagagcct ctccctgtct 1380 ccgggtaaa 1389 <210> 6 <211> 463 <212> PRT <213>智人 <400> 6 Met Glu Phe 1 Val Gin Cys
Pro Gly Gly 35 Ser Ser Tyr 50 Glu Trp Val 65 Asp Ser Val Ser Leu Tyr
Gly Leu Cys Trp Val 5
Glu Val Gin Leu Val 20
Ser Leu Arg Leu Ser 40
Trp Met Ser Trp Val 55
Ala Asn He Lys Gin 70
Lys Gly Arg Phe Thr d5
Leu Gin Met Asn Ser 100
Phe Leu Val Ala lie Leu Glu Gly 10 15
Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin 25 30
Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 45
Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu 60
Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val 75 80 lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn 90 95
Leu Axg Ala Glu Asp Thr Ala Val l〇5 no
95567.DOC 1356063
Tyr Tyr Cys Ala Pro Gly lie Ala Ala Ala Gly Arg Ala Tyr Trp Gly 115 120 125
Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 130 135 140
Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 145 150 155 160
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 165 170 175
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 180 185 190
Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 195 200 205
Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 210 215 220
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys 225 230 235 240
Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 245 250 255
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr 260 265 270
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 275 280 285
Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 290 295 300
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser 305 310 315 320
Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 325 330 335
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie 340 345 350
Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro 355 360 355
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu 370 375 380
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 385 390 395 400
Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser 405 410 415
95567.DOC 1356063
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 420 425 430
Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 435 440 445
His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455 460 <210> 7 <211> 702 <212> DNA <213>智人：
<400> 7
atgagggtcc ctgctcagct cctggggctc ctgctactct ggctccgagg tgccagatgt 6Q gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgttggaga cagagtcacc 120 atcacttgcc ggccaagtca ggacattagc agttatttaa attggtatca gcagaaacca 180 gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatta 240 aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 300 gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta ccccattcac tttcggccct 360 gggaccaaag tggatatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 420 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgct agcgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 480 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 540 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 600 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 660 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 702 <210> 8 <211> 234 <212> PRT 智人 <400> 8
Met Arg Val Pro Ala Gin Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Arg IS 10 15
Gly Ala Arg Cys Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser 20 25 30
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Pro Ser Gin Asp 35 40 .45 lie Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro 50 55 60
Lys Leu Leu He Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Leu 65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Θ5 90 95
Ser Leu Gin Pro Glu Asp Phe A.la Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr 100 ' 105 110
95567.DOC 1356063—
Ser Thr Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp lie Lys Axg 115 120 125
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin 130 135 140
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
145 150 155 ISO
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser 165 170 175
Gly Asn Ser Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr 180 185 190
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 195 200 205
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro 210 215 220
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 <210> 9 <211> 1398 <212> DNA c213>智人 <400> 9 atggagtttg ggctccgctg gatttttctt gtggctattt taaaaggtgt ccagtgtgag 60 gtgcagctgt tggagtctgg gggaggcttg gtacagcctg gggggtccct gagactctcc 120 tgtgcagcct ctggattcac ctttagcagc tatgccatga gctgggtccg ccaggctcca 180 gggaaggggc tggaatgggt ctcagctatt agtggtcgtg gtggtaggac atacttcgca 240 gactccgtga agggccggtt caaatgaaca gcctgagagc agtgggcgct acggattttt gcctccacca agggcccatc agcacagcgg ccctgggctg tggaactcag gcgctctgac ggactctact ccctcagcag tacacctgca acgtagatca aaatgttgtg tcgagtgccc ctcttccccc caaaacccaa gtggtggtgg acgtgagcca gtggaggtgc ataatgccaa gtggtcagcg tcctcaccgt aaggtctcca acaaaggcct cagccccgag aaccacaggt caggtcagcc tgacctgcct gagagcaatg ggcagccgga ggctccttct tcctctacag gtcttctcat gctccgtgat tccctgtctc cgggtaaa caccatctcc agagacaatt cgaggacacg gccgtatatt tgactactgg ggccagggaa ggtcttcccc ctggcgccct cctggtcaag gactacttcc cagcggcgtg cacaccttcc cgtggtgacc gtgccctcca caagcccagc aacaccaagg accgtgccca gcaccacctg ggacaccctc atgatctccc cgaagacccc gaggtccagt gacaaagcca cgggaggagc tgtgcaccag gactggctga cccagccccc atcgagaaaa gtacaccccg cccccatccc ggtcaaaggc ttctacccca gaacaactac aagaccacac caagctcacc gtggacaaga gcatgaggct ctgcacaacc ccaagaacac gctgtatctg tctgtgcggt agaaggctat ccctagtcac cgtctcctca gctctagaag cacctccgag ccgaaccggt gacggtgtcg cagctgtcct acagtcctca gcaacttcgg cacccagacc tggacaagac agttgagcgc tggcaggacc gtcagtcttc ggacccctga ggtcacgtgc tcaactggta cgtggacggc agttcaacag cacgttccgt acggcaagga gtacaagtgc ccatctccaa aaccaaaggg gggaggagat gaccaagaac gcgacatcgc cgtggagtgg ctcccatgct ggactccgac gcaggtggca gcaggggaac actacacgca gaagagcctc 300 360 420 4Θ0 540 600 660 720 780 840 900 960 1020 1080 1140 1200 1260 1320 1380 1390
-8-
95567.DOC 1356063 <210> 10 <211> 466 <212> PRT <213>智人 <400> 10
Met Glu Phe Gly Leu Arg Trp lie Phe Leu Val Ala lie Leu Lys Gly IS 10 15
Val Gin Cys Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin 20 25 30
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45
Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 S5 60
Glu Trp Val Ser Ala lie Ser Gly Arg Gly Gly Arg Thr Tyx Phe Ala 65 70 75 80
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn 85 90 95
Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110
Tyr Phe Cys Ala Val Glu Gly Tyr Ser Gly Arg Tyr Gly Phe Phe Asp 115 120 125
Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys 130 13S 140
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu
145 ISO 155 160
Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro 165 170 175
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr 180 185 190
Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val 195 200 205
Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn 210 215 220
Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg 225 230 235 240
Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly 245 250 255
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie
95567.DOC 1356063 260 265 270
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 275 2Θ0 285
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Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg 305 310 31S 320
Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys 325 330 335
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu 340 345 350
Lys Thr lie Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr 355 360 355
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu 370 375 380
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp 385 390 395 400
Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met 405 410 415
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 420 425 430
Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 435 440 445
Glu Ala Leu His Asn Hxs Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 460
450 455
Gly* Lys 465 <210> 11 <211> 702 <212> DNA <213>智人 <400> 11 atggaagccc cagctcagct tctcttcctc gaaatagtga tgacgcagtc tccagccacc ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc ggccaggctc ccaggctcct catctatggt aggatcagtg gcagtgggtc tggaacagag gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag gggaccaaag tggatatcaa acgaactgtg tctgatgagc agttgaaatc tggaactgct cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg ctgctactct ggctcccaga taccactgga 60 ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc 120 agcaacttag cctggtacca gcagaaacct 180 gcatccacca gggccagtgg tatcccagac 240 ttcactctca tcatcagcag cctgcagtct 300 tctaataact ggccattcac tttcggccct 360 gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 420 agcgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 480 gataacgccc tccaatcggg taactcccag 540 •10-
95567.DOC 1356063
Val Thr Lys Ser Phe 225 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt <210> 12 <211> 234 <212> PRT <213>智人 <400> 12
Met Glu Ala Pro Ala Gin Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro IS 10 15
Asp Thr Thr Gly Glu lie Val Met Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser 20 25 30
Val Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser 35 40 45
Val Ser Ser Asn Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro 50 55 60
Arg Leu Leu lie Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Ser Gly lie Pro Asp 65 70 75 80
Arg lie Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu lie lie Ser 85 90 95
Ser Leu Gin Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Asn 100 105 110
Asn Trp Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp lie Lys Arg 115 120 125
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin 130 135 140
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 145 150 155 160
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser 165 170 175
Gly Asn Ser Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr 180 185 190
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 195 200 205
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95567.DOC -11 -
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Val Gin Cys Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys 20 25 30
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45
Ser Asp Tyr Tyr Met Ser Trp lie Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60
Glu Trp Phe Ser Tyr lie Ser Ser Ser Gly Ser Thr lie Tyr Tyr Ala 65 70 75 80
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn 85 90 95
Ser Leu Ser Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Leu Thr Gly Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr 115 120 125
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 130 135 140
Leu Ala Pro Cys Ser Axg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly 145 150 X55 160
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 165 170 175
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin 180 185 190
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 195 200 205
Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser 210 215 220
Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys 225 230 235 240 12-
95567.DOC 1356063
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 245 250 255
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val 260 265 270
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gin Phe 275 280 285
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 290 295 300
Arg Glu Glu Gin Phe Asa Ser Thr Phe Axg Val Val Ser Val Leu Thr 305 310 315 320
Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val 325 330 335
Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Thr 340 345 350
Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg 355 -360 365
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly 370 375 380
Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro 385 390 395 400
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser 405 410 415
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin 420 425 430
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 435 440 445
Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455 460 <2X0> 15 <400> 15 000 <210> 16 <211> 236 <2X2> PRT 智人: <400、、16
Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gin Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp -13-
95567.DOC 1356063 15 10 15
Phe Pro Gly Ser Arg Cys Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser 20 25 30
Val Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr lie Ser Cys Arg Ala Ser 35 40 45
Gin Asp lie Ser Gly Trp Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly hys 50 55 60
Ala Pro Lys Leu Leu lie Ser Ala Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val 65 70 75 80
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 85 90 95 lie Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin 100 105 110
Thr Asn Ser Phe Pro Phe Thx Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp lie 115 120 125
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp 130 135 140
Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 145 ISO 155 160
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 165 170 175
Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp 180 185 190
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 195 200 205
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser 210 215 220
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Axg Gly Glu Cys 225 230 235 <210> 17 <400> 17 000 <210> 18 <211> 463 <212> PRT <213>智人· -14·
95567.DOC 1356063 <400> 18
Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Val Phe Leu Val Ala Leu Leu Arg Gly IS 10 15
Cys Gin Cys Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin 20 25 30
Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45
Ser Ser Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60
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Asp Ser Val Lys Gly Axg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn 85 90 95
Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110
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Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 165 170 175
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Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys 210 215 220
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Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr 260 265 270
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gin Glu Asp Pro Glu 275 280 285
Val Gin Phe Asn Trp Ίγτ Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
95567.DOC -15-
1356063 290 295 300
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 305 310 315 320
Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 325 330 335
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser lie Glu Lys Thr lie 340 345 350
Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro 355 360 365
Pro Ser Gin Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu 370 375 380
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp He Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 385 390 395 400
Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 405 410 415
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 420 425 430
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His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455 460 ;210> 19 <400> 19 000 0 12 3 1111 2 2 2 2 < < < < 6 T人 o 3 Rr; 2 2P智 <400> 20
Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gin Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp 1 5 10 15
Phe Pro Gly Ser Arg Cys Asp lie Gin Met Thr Gin Set Pro Ser Ser 20 25 30
Val Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser 35 40 45
Gin Asp lie Ser Ser Trp Leu A.la Trp Tyr Gin Arg Lys Pro Gly Lys 50 55 60 -16-
95567.DOC 1356063
Ala Pro Lys Leu Gin lie Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val 65 70 75 80
Pro Ser Arg Phe Asn Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser 85 90 95 lie Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin 100 105 110
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Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp 180 185 190
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Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235 <210> 21 <400> 21 000 <210> 22 <211> 464 <212> PRT <213>智人 <400> 22
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95567.DOC 1356063 50 55 60
Glu Trp Met Gly Trp lie Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala 65 70 75 80
Gin Lys Leu Gin Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Thr . 85 90 95
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Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Ala Tyr Gly Ala Asn Phe Phe Asp Tyr Trp 115 120 125
Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 130 135 140
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Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 180 185 190
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His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys 225 230 235 240
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser 245 250 255
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met He Ser Arg. 260 265 270
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 275 280 285
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Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val 305 310 315 320
Ser Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 325 330 335
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr 340 345 350 -18 -
95567.DOC 1356063 lie Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu 355 360 365
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Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 420 425 430
Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 435 440 445
Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455 460 <210> 23 <400> 23 000 <210> 24 <211> 240 <212> PRT <213>智人 <400> 24
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Val Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr lie Asn Cys Lys Ser Ser Gin Ser 35 40 45 lie Leu Phe Phe Ser Asn Asa Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Arg Gin 50 55 60
Lys Pro Gly Gin Pro Pro Asn Leu Leu lie Tyr Trp Ala Ser Thr Arg 65 70 75 80
Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp 85 90 95
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95567.DOC 1356063 .Tyr Cys Gin Gin Tyr Tyr Ser Ser Pro Trp Thr Phe Gly Gin Gly Thr 115 120 125
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145 150 155 ISO
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95567.DOC 1356063 245 250 255
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Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser 405 410 415
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin 420 425 430
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 435 440 445
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<210> 28 <211> 236 <212> PRT 智人 _ <400> 28
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Leu Arg Gly Ala Arg Cys Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser 20 25 30
Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Pro Ser 35 40 45
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agcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 540 tggaactcag gcgctctgac cagcggcgtg cacaccttcc cagctgtcct acagtcctca 600 ggactcCact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcaacttcgg cacccagacc 660 tacacctgca acgtagatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagac agttgagcgc 720 aaatgttgtg tcgagtgccc accgtgccca gcaccacctg tggcaggacc gtcagtcttc 780 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacgtgc 840 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagacccc gaggtccagt tcaactggta cgtggacggc 900 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagcca cgggaggagc agttcaacag cacgttccgt 960 gtggtcagcg tcctcaccgt tgtgcaccag gactggctga acggcaagga gcacaagtgc 1020 aaggtctcca acaaaggcct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa aaccaaaggg 1080 cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggaggagat gaccaagaac 1140 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1200 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacac ctcccatgct ggactccgac 1260 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggcggca gcaggggaac 1320 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1380 tccctgtctc cgggtaaa 1398
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95567.DOC 1356063
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95567.DOC 1356063
Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met 405 410 415
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Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 435 440 445
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 450 455 460
Gly Lys 465 5说人 3170DN智 Λ Λ Λ > 0 12 3 1 X 1 X 2 2 2 2 < < < <
<400> 31 atggaaaccc cagcgcagct tctcttcctc ctgctactct gaatttgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcagttact cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta ggagggacca aggtggagat caaacgaact gtggctgcac ccatctgatg agcagttgaa atctggaact gcctctgttg tatcccagag aggccaaagt acagtggaag gtggataacg caggagagtg tcacagagca ggacagcaag gacagcacct acgctgagca aagcagacta cgagaaacac aaagcctacg ggcctgagct cgcccgtcac aaagagcttc aacaggggag ggctcccaga taccaccgga 60 ctccagggga aagagccacc 120 tagcctggta ccagcagaaa 180 gcagggccac tggcatccca 240 tcaccatcag cagactggag 300 gctcacctct cactttcggc 360 catctgtctt catcttcccg 420 tgCgcctgct gaataacttc 480 ccctccaatc gggtaactcc 540 acagcctcag cagcaccctg 600 cctgcgaagt cacccatcag 660 agtgt 705 <210> 32 <211> 235 <212> PRT <213:> 智人 _ <400> 32 Met Glu Thr Pro Ala Gin Leu Leu Phe Leu Leu X 5 10 Asp Thr Thr Gly Glu Phe Val Leu Thr Gin Ser 20 25 Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys 35 40 Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin Gin 50 55 Pro Arg Leu Leu lie Tyr Gly Ala Ser Ser Arg 65 70 75
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95567.DOC • 26- 1356063
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95567.DOC 1356063 tgcctggtca aaggcttcta ccccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag 1200 ccggagaaca actacaagac cacacctccc atgctggact ccgacggctc cttcttcctc 1260 tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc 1320 gtgatgcatg aggctctgca caaccactac acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt 1380 aaa 1383 <210> 34 <211> 461 <212> PRT <213>智人 . <400> 34
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Val Gin Cys Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys 20 25 30
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45
Ser Asp Tyr Tyr Met Ser Trp lie Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60
Glu Trp Val Ser Tyr lie Ser Ser Ser Gly Ser Thr lie Tyr Tyr Ala 65 70 75 80
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn 85 90 95
Ser Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg He Gly Gly Met Asp Val Trp Gly Gin Gly 115 120 125
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 130 135 140
Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu 145 150 155 160
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 165 170 175
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 180 135 190
Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 195 200 205
Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro 210 215 220
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu 225 230 235 240
95567.DOC 28-
1356063
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu 245 250 255
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95567.DOC 1356063 ccgccatctg atgagcagtt gaaatctgga actgcctctg ttgtgtgcct gctgaataac ttctatccca gagaggccaa agtacagtgg aaggtggata acgccctcca atcgggtaac tcccaggaga gtgtcacaga gcaggacagc aaggacagca cctacagcct cagcagcacc ctgacgctga gcaaagcaga ctacgagaaa cacaaagtct acgcctgcga agtcacccat cagggcctga gctcgcccgt cacaaagagc ttcaacaggg gagagtgt <210> 36 <211> 236 <212> PRT <213>智人 <400> 36
Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gin Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp 15 10 15
Leu Arg Gly Ala Arg Cys Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser 20 25 30
Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser 35 40 4S
Gin Ser lie Ser Gly Phe Leu lie Trp Tyr Gin Gin Arg Pro Gly Lys 50 55 60
Ala Pro hys Leu Leu lie Tyr Ala Thr Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val 65 70 75 80
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 85 90 95 lie Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin 100 X05 110
Ser Tyr Ser Thr Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp lie 115 120 125
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp 130 135 140
Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 145 150 155 160
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 165 170 175
Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp 180 185 190
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 195 200 20S
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser 210 215 220
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235 30- 8 4 0 6 0 4 5 6 6 7 #
95567.DOC 1356063 <210> 37 <211> 1383 <212> DNA <213>智人 <400> 37 atggagtttg ggctgagctg ggttttcctt gttgctatta taaaaggtgt ccagtgtcag 60 gtgcagctgg tggagtctgg gggaggcttg gtcaagcctg gagggtccct gagactctcc 120 tgtgcagcct ctggattcac cttcagtgac tactatatga gctggatccg ccaggctcca 180 gggaagggac tggagtgggt ttcatacatt agtagtagtg gtagtaccat atactacgca 240 gactctgtga agggccgatt caccatctcc agggacaacg ccaagaactc actgtatctg 300 caaatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gccgtgtatt actgtgcgag aggcctaact 360 ggggactact ggggccaggg aaccctggtc accgtctcct cagcttccac caagggccca 420
tccgtcttcc ccctggcgcc ctgctctaga agcacctccg agagcacagc ggccctgggc 480 tgcctggtca aggactactt ccccgaaccg gtgacggtgt cgtggaactc aggcgctctg 540 accagcggcg tgcacacctt cccagctgtc ctacagtcct caggactcta ctccctcagc 600 agcgtggtga ccgtgccctc cagcagcttg ggcacgaaga cctacacctg caacgtagat 660 cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag agagttgagt ccaaatatgg tcccccatgc 720 ccatcatgcc cagcacctga gttcctgggg ggaccatcag tcttcctgtt ccccccaaaa 780 cccaaggaca ctctcatgat ctcccggacc cctgaggtca cgtgcgtggt ggtggacgtg 840 agccaggaag accccgaggt ccagttcaac tggtacgtgg atggcgtgga ggtgcataat 900 gccaagacaa agccgcggga ggagcagttc aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc 960 accgtcctgc accaggactg gctgaacggc aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa 1020 ggcctcccgt cctccatcga gaaaaccatc tccaaagcca aagggcagcc ccgagagcca 1080 caggtgtaca ccctgccccc atcccaggag gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc 1140 tgcctggtca aaggcttcta ccccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag 1200 ccggagaaca actacaagac cacgcctccc gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc 1260 tacagcaggc taaccgtgga caagagcagg tggcaggagg ggaatgtctt ctcatgctcc 1320 gtgatgcatg aggctctgca caaccacCac acacagaaga gcctctccct gtctccgggt 1380 aaa 1383
<210> 38 <211> 461 <212> PRT <213>智人
Phe Leu Val Ala lie lie Lys Gly 10 15 Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys 25 30 Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 45 <400> 38 Met Glu Phe Gly 1 Val Gin Cys Gin 20 Pro Gly Gly Ser 35
Leu Ser Trp Val 5 Val Gin Leu Val Leu Arg Leu Ser 40
Ser Asp Tyr Tyr Met Ser Trp lie Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60
Glu Trp Val Ser Tyr lie Ser Ser Ser Gly Ser Thr lie Tyr Tyr Ala 65 70 75 80
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn 85 90 95 •31
95567.DOC 1356063
Ser Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Leu Thr Gly Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr 115 120 125
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 130 135 140
Leu Ala Pro Cys Ser Axg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly 145 150 155 160
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 165 170 175
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin 160 185 190
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 195 200 205
Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser 210 215 220
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys 225 230 235 240
Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 245 250 255
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu 260 265 270
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gin Glu Asp Pro Glu Val Gin 275 280 285
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 290 295 300
Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 305 310 315 320
Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 325 330 335
Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser lie Glu Lys Thr lie Ser Lys 340 345 350
Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 355 360 365
Gin Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 370 375 380
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin
95567.DOC • 32-
1356063 385 390 395 400
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 40S 410 415
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin 420 425 430
Glu Gly Asn Val Phe 435 His Tyr Thr Gin Lys 450
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 440 445
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 455 460
<210> 39 <400> 39 000 <210> 40 <400> 40 000 <210> 41 <400> 41 000 <210> 42
<400> 42 000 <210> 43 <211> 705 <212> DNA c213>智人 <400> 43 atggaaaccc cagcgcagct tctcttcctc ctgctactct ggctcccaga taccaccgga 60 gaatttgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 120 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcagttact tagcctggta ccagcagaaa 180 cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 240 gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 300 cctgaagatt ttgtagtgta ttactgtcag cagtatggta gctcacctct cactttcggc 360 ggagggacca aggtggagat caaacgaact gtggctgcac catctgtctt catcttcccg 420 ccatctgatg agcagttgaa atctggaact gcctctgttg tgtgcctgct gaataacttc 490 tatcccagag aggccaaagt acagtggaag gtggataacg ccctccaatc gggtaactcc 540 caggagagtg tcacagagca ggacagcaag gacagcacct acagcctcag cagcaccctg 600 acgctgagca aagcagacta cgagaaacac aaagtctacg cctgcgaagt cacccatcag 660 -33-
95567.DOC 1356063 ggcctgagct cgcccgtcac aaagagcctc aacaggggag agtgc 705 <210> 44 <211> 235 <212> PRT <213>智人 <400> 44
Met Glu Thr Pro Ala Gin Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro IS 10 15
Asp Thr Thr Gly Glu Phe Val Leu Thr Gin Ser Pro Gly Thr Leu Ser 20 25 30
Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser 35 40 45
Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala 50 55 60
Pro Arg Leu Leu lie Tyr Gly* Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly lie Pro 65 70 75 80
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie 85 90 95
Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Val Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr 100 105 110
Gly Ser Ser Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 115 120 125
Arg' Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu 130 135 140
Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 145 150 155 160
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin 165 170 175
Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser 180 185 190
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 195 200 205
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser 210 215 220
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235 <210> 45 34·
95567.DOC 1356063 <211> 1386 <212> DNA <213>智人 <400> 45
atggagtttg ggctgagctg ggttttcctt gttgctatta taaaaggtgt ccagtgtcag 60 gtgcagctgg tggagtctgg gggaggcttg gtcaagcctg gagggtccct gagactctcc 120 tgtgcagcct ctggattcac cttcagtgac tactacatga gctggatccg ccaggctcca 180 gggaaggggc tggagtgggt ttcatacatt agtagtagtg gtagtaccat atactacgca 240 gactctgtga agggccgatt caccatctcc agggacaacg ccaagaattc actgtatctg 300 caaatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gccgtgtatt actgtgcgag gcgtatagga 360 ggtatggacg tctggggcca agggaccacg gtcaccgtct cctcagcttc caccaagggc 420 ccatccgtct tccccctggc gccctgctct agaagcaccc ccgagagcac agcggccctg 480 ggcCgcctgg tcaaggacta cttccccgaa ccggtgacgg tgtzcgtiggaa ctcaggcgct 540 crtgaccagcg gcgtgcacac cctcccagct gtcctacagt cctcaggact ctactccctc 600 agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcagc ttgggcacga agacctacac ctgcaacgta 660 gatcacaagc ccagcaacac caaggtggac aagagagCtg agtccaaata tggtccccca 720 tgcccatcat gcccagcacc tgagttcctg gggggaccat cagtcttcct gttcccccca 780 aaacccaagg acactctcat gatctcccgg acccctgagg tcacgtgcgt ggtggtggac 840 gtgagccagg aagaccccga ggtccagttc aactggtacg tggatggcgt ggaggtgcat 900' aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag ttcaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc 960 ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaac ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac 1020 aaaggcctcc cgtcctccat cgagaaaacc atctccaaag ccaaagggca gccccgagag 1080 ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccag gaggagatga ccaagaacca ggtcagcctg 1140 acctgcctgg ccaaaggctt ctaccccagc gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg 1200 cagccggaga acaactacaa gaccacgcct cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc 1260 ctctacagca ggctaaccgt ggacaagagc aggtggcagg aggggaatgt cttctcatgc 1320 tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac tacacacaga agagcctctc cctgtctccg 1380 ggtaaa 1386 <2X0> 46 <211> 4β2 <212> PRT <213>智人 <400> 46
Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Val 1 5
Val Gin Cys Gin Val Gin Leu Val 20
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Ser Asp Tyr Tyr Met Ser Trp lie 50 55
Glu Trp Val Ser Tyr lie Ser Ser 65 70
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr 85
Ser Leu Tyr Leu Gin Met Asn 100
Phe Leu Val Ala lie lie Lys Gly 10 15
Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys 25 30
Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 45
Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu 60
Ser Gly Ser Thr lie Tyr Tyr Ala 75 SO lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn 90 95
Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 105 110
•35
95567.DOC 1356063
Tyr Tyx Cys Ala Arg Arg lie Gly Gly Met Asp Val Trp Gly Gin Gly 115 120 125
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 130 135 140
Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu 145 ISO 155 160
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 165 170 175
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 180 185 190
Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 195 200 205
Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro 210 2X5 220
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro 225 230 235 240
Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 245 250 255
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro 260 265 270
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gin Glu Asp Pro Glu Val 275 280 285
Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 290 295 300
Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 305 310 315 320
Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 325 330 335
Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser lie Glu Lys Thr lie Ser 340 345 350
Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro 355 360 365
Ser Gin Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 370 375 380
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 385 390 395 400
Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 405 410 415 .36
95567.DOC 1356063
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Axg Leu Thr Val 420 425 Gin Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 435 440 Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser 450 455
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<210> 48 <211> 236 <212> PRT · <213>智人 <400> 48 Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gin Leu Leu Gly 1 5 10 Leu Arg Gly Ala Arg Cys Asp lie Gin Met Thr 20 25 Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr lie 35 40 Gin Ser He Ser Gly Phe Leu lie Trp Tyr Gin 50 S5 Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr Ala Thr Ser Ser 65 70 75 Pro Leu Arg Phe Ser Gly Ser Glu Ser Gly Thr 85 90 lie Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp Phe Ala Thr
Leu Leu Leu Leu Trp 15 Gin Ser Pro Ser Ser 30 Thr Cys Arg Ala Ser 45 Gin Arg Pro Gly Lys 60 Leu Gin Ser Gly Val 80 Asp Phe Thr Leu Thr 95 Tyr Tyr Cys Gin Gin
95567.DOC -37- 1356063 100 105 110
Ser Tyr Ser Thr Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp He 115 120 125
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe He Phe Pro Pro Ser Asp 130 135 140
Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 145 150 155 160
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 165 170 175
Gin Ser Gly Asa Ser Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp 180 185 190
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 195 200 205
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser 210 215 220
Ser Pro val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235 <210> 49 <400> 49 000 <210> 50 <211> 462 <212> PRT <2U>智人 <400> 50
Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Val Phe Leu Val Ala He lie Lys Gly IS 10 15
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Ser Asp Tyr Tyr Met Ser Trp lie Arg Gin Ala Pro Gly Lys Giy Leu 50 55 60
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Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn 85 90 95 • 38
95567.DOC 1356063
Ser Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala lie Arg lie Gly Gly Met Asp Val Trp Gly Gin Gly 115 120 125
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 130 135 X40
Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu 145 ISO 155 160
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 165 170 175
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 180 185 190
Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 195 200 205
Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro 210 215 220
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro 225 230 235 240
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 245 250 255
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro 260 265 270
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gin Glu Asp Pro Glu Val 275 280 285
Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 290 295 300
Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 305 310 315 320
Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 325 330 335
Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser lie Glu Lys Thr lie Ser 340 345 350
Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro 355 360 365
Ser Gin Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 370 37S 380
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 385 390 395 400 39·
95567.DOC 1356063 0 12 3 1 1 X X 2 2 2 2 < < < <
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Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gin Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp 15 10 15
Leu Arg Gly Ala Arg Cys Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser 20 25 30
Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser 35 40 45
Gin Ser lie Ser Gly Phe Leu lie Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys 50 55 60
Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyx Ala Thr Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val 65 70 75 80
Pro Ser Axg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr BS 90 95 lie Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin 100 105 110
Ser Tyr Ser Thr Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp lie 115 120 125
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp 130 135 140
Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr A.la Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 145 150 155 160
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
95567.DOC
-40- 1356063 165 170 175
Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp 180 185 190
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 195 200 205
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser 210 215 220
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235 <210> 53 <400> 53 000 <210> 54 <211> 461 <2X2> PRT <213>智人 <400> 54
Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Val Phe Leu Val Ala lie lie Lys Gly 15 10 15
Val Gin Cys Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys 20 25 30
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45
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Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 130 135 140
Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly
95567.DOC •41 -
1356063 145 150 155 160
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 165 170 175
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin 180 185 190
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 195 200 205
Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser 210 215 220
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys 225 230 235 240
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 245 250 255
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu 260 265 270
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gin Glu Asp Pro Glu Val Gin 275 280 285
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 290 295 300
Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 305 310 315 320
Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 325 330 335
Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser lie Glu Lys Thr lie Ser Lys 340 345 350
Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 355 360 365
Gin Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 370 375 380
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp He Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin 385 390 395 400
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 405 410 415
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin 420 425 430
Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 435 440 445 -42-
95567.DOC 1356063
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Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gin Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp 1 5 10 15
Leu Arg Gly Ala Arg Cys Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser 20 25 30
Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr He Thr Cys Arg Pro Ser 35 40 45
Gin lie He Ser Ser Leu Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys 50 55 60
Ala Pro Lys Leu Leu lie Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val 65 70 75 80
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 85 90 95 lie Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin 100 105 110
Ser Tyr Ser Thr Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp lie 115 120 125
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp 130 135 140
Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 145 150 155 160
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 165 170 175
Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp 180 18S 190
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 195 200 205
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser 210 215 220
95567.DOC -43·
1356063
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Val Gin Cys Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin 20 25 30
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Ser Ser Phe Ser Met Thr Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60
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Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Pro Leu Leu Ala Gly Ala Thr Phe Phe Asp 115 120 125
Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys 130 135 140
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu
145 150 155 ISO
Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro 155 170 175
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr 180 185 190
Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val 195 200 205 -44-
95567.DOC 1356063
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn 210 215 220
Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser 225 230 235 240
Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly 245 250 255
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 260 265 270 lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gin 275 280 285
Glu Asp Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 290 295 300
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Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly 325 330 335
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser lie 340 345 350
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Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val 420 425 430
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95567.DOC 45-
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Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin 165 170 175
Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser 180 185 190
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 195 200 205
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser 210 215 220
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235 <210> 61 <400> 61 46-
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Met Glu Leu Gly Leu Cys Trp Val Phe Leu Val Ala lie Leu Glu Gly 15 10 15
Val Gin Cys Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin 20 25 30
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45
Ser Ser Phe Ser Met Thr Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60
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Ser Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Axg Asp Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Pro Leu Leu Ala Gly Ala Thr Phe Phe Asp 115 120 125
Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys 130 135 140
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu
145 150 155 ISO
Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro 165 170 175
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Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val 195 200 205
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95567.DOC 1356063
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie 260 265 270
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Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg 305 310 3X5 320
Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys 325 330 335
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Lys Thr lie Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr 355 360 365
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Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 205
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Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu 235 240
49-
95567.DOC 1356063
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu 245 250 255
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu 260 265 270
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gin 275 280 285
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 290 295 300
Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu 305 310 315 320
Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 325 330 335
Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys 340 345 350
Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 355 360 365
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Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 435 440 445
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Val Gin Cys Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys 20 25 30
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Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 165 170 175
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin 180 185 190
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Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr- Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser 210 215 220
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95567.DOC 1356063
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu 260 265 270
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gin Glu Asp Pro Glu Val Gin 275 280 285
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 290 295 . 300
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Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 325 330 335
Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser lie Glu Lys Thr lie Ser Lys 340 345 350
Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 355 360 365
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Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin 420 425 430
Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 435 440 445
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95567.DOC • 52-
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Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly 145 150 155 160
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Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 195 200 205
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95567.DOC 1356063
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val 2S0 265 270
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Val Val His Gin Asp Tirp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val 325 330 335
Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr 工le Ser Lys Thr 340 345 350
Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg 355 360 365
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Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn 85 90 95
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Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly 145 150 155 160
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Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin 180 185 190
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 195 200 205
Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser 210 215 220
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyx Gly Pro Pro Cys 225 230 235 240
Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 245 250 255
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu -55·
95567.DOC 1356063 260 265 270
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gin Glu Asp Pro Glu Val Gin 275 280 285
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 290 295 300
Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 305 3X0 315 320
Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 325 330 335
Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser lie Glu Lys Thr lie Ser Lys 340 345 350
Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 355 360 365
Gin Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 370 375 380
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin 385 390 395 400
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95567.DOC • 56-
1356063 <210> 82 <211> 461 <212> PRT <213>智人 c400> 82
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Val Gin Cys Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Oly Gly Gly Leu Val Lys 20 25 3〇
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45
Ser Asp Tyr Tyr Met Ser Trp lie Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60
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Ser Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Leu Thr Gly Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr 115 120 125
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 130 135 140
Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly 145 150 155 160
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 165 170 175
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin 180 185 190
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 195 200 205
Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser 210 215 220
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys lyr Gly Pro Pro Cys 225 230 235 240
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 245 250 255
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met He Ser Arg Thr Pro Glu 260 265 270 57-
95567.DOC 1356063
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gin Glu Asp Pro Glu Val Gin 275 280 285
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 290 295 300
Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 305 310 315 320
Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 325 330 335
Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser lie Glu Lys Thr lie Ser Lys 340 345 350
Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 355 360 365
Gin Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 370 375 3β0
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin 3Θ5 390 395 400
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 405 410 415
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin 420 425 430
Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 435 440 445
His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455 460
<210> 83 <400> 83 000 <210> 84 <400> 84 000 <210> 85 <400> 85 000 <210> 86 • 58 -
95567.DOC 1356063 <211> 462 <212> PRT <213> .智人 <400> 8β
Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Val Phe Leu Val Ala lie He hys Gly 15 10 15
Val Gin Cys Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val hys 20 25 30
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45
Ser Asp Tyr Tyr Met Ser Trp lie Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60
Glu Tip Val Ser Tyr lie Ser Ser Ser Gly Ser Thr lie Tyr Tyr Ala 65 70 75 80
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn 85 90 95
Ser Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg lie Gly Gly Met Asp Val Trp Gly Gin Gly 115 120 125
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 130 135 140
Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu 145 150 155 160
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 165 170 175
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 180 185 190
Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 195 200 205
Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro 210 215 220
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro 225 230 235 240
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 245 250 255
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro 260 265 270
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gin Glu Asp Pro Glu Val -59·
95567.DOC 1356063 275 280 285
Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 290 295 300
Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 305 310 315 320
Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 325 330 335
Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser lie Glu Lys Thr lie Ser 340 345 350
Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro 355 360 365
Ser Gin Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 370 375 380
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 385 390 395 400
Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 405 410 415
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 420 425 430
Gin Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 435 440 445
Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455 460 <210> 87 <400> 87 000 <210> 88 <400> 88 000 <210> 89 <400> 89 000 60·
95567.DOC 1356063 <210> 90 <211> 467 <212> PRT <213>智人 <400> 90
Met Glu Leu Gly Leu Cys Trp Val Phe Leu Val Ala lie Leu Glu Gly IS 10 15
Val Gin Cys Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin 20 25 30
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45
Ser Ser Phe Ser Met Thr Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60
Glu Trp Val Ser Tyr He Ser Ser Arg Ser Ser Thr lie Ser T/r Ala 65 70 75 80
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn 85 90 95
Ser Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Axg Asp Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Pro Leu Leu Ala Gly Ala Thr Phe Phe Asp 115 120 125
Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys 130 135 140
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu 145 150 155 160
Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cya Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro 16S 170 175
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr ISO 185 190
Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val 195 200 205
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn 210 215 220
Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser 225 230 235 240
Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly 245 250 255
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 2S0 265 270 -61 -
95567.DOC 1356063 lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gin 275 280 285
Glu Asp Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 290 295 300
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Tyr 305 310 315 320
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly 325 330 335
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser lie 340 345 350
Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val 355 360 365
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gin Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser 370 375 380
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu 385 390 395 400
Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 405 410 415
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val 420 425 430
Asp Lys Ser Arg Trp Gin Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 435 440 445
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser 450 455 460
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95567.DOC 1356063 <210> 94 <211> 467 <212> PRT <213〉智人 <400> 94
Met Glu Leu Gly Leu Cys Trp Val Phe Leu Val Ala He Leu Glu Gly 15 10 15
Val Gin Cys Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin 20 25 30
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45
Ser Ser Phe Ser Met Thr Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60
Glu Trp Val Ser Tyr He Ser Ser Arg Ser Ser Thr lie· Ser Tyr Ala 65 70 75 80
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn 85 90 95
Ser Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Pro Leu Leu Ala Gly Ala Thr Phe Phe Asp 115 120 125
Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys 130 135 140
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu 145 150 155 160
Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro 165 - 170 175
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr 180 185 190
Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val 195 200 205
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn 210 215 220
Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser 225 230 235 240
Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly 245 250 255
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met • 63·
95567.DOC 1356063 260 265 270
He Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val val Asp Val Ser Gin 275 280 2Θ5
Glu Asp Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 290 295 300
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Tyr 305 310 315 320
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly 325 330 335
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser lie 340 345 350
Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val 355 360 365
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gin Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser 370 375 380
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu 385 390 395 400
Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyx Lys Thr Thr Pro Pro 405 410 415
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val 420 425 430
Asp Lys Ser Arg Trp Gin Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 435 440 445
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser 450 455 460
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<210> 98 <211> 470 <212> PRT 智人 <400> 98 Met Glu Leu Gly Leu Cys Trp Val Phe Leu Val Ala lie Leu Glu Gly X 5 10 15 Val Gin Cys Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin
20 25 30
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45 Ser Ser Phe Ser Met Thr Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Val Ser Tyr He Ser Ser Arg Ser Ser Thr He Ser Tyr Ala 70 75 80 Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn 85 90 95
Ser Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110
95567.DOC -65 1356063
Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Pro Leu Leu Ala Gly Ala Thr Phe Phe Asp 115 120 125
Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys 130 135 140
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Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
165 170 17S
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr 180 185 190
Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val 195 200 205
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr He Cys Asn 210 215 220
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro 225 230 235 240
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu 245 250 255
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 260 265 270
Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 275 280 285
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 290 295 300
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn 305 310 315 320
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp 325 330 335
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro 340 345 350
Ala Pro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu 355 360 365
Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn 370 375 380
Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie 385 390 395 400
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 405 410 415 -66
95567.DOC 1356063
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 420 425 430
Leu Thr val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys 435 440 445
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Ser Leu Ser Pro Gly Lys 465 470 <210> 99
<400> 99 000 <210> 100 <400> 100 000 <210> 101 <211> 1395 <212> DNA <213>智人 <400> 101 atggagtttg ggctgagctg gtgcagctgg tggagtctgg tgtgcagcct ctggattcac gggaagggac tggagtgggt gactctgtga agggccgatt caaatgaaca gcctgagagc ggggactact ggggccaggg tcggtcttcc ccctggcacc tgcctggtca aggactactt accagcggcg tgcacacctt agcgtggtga ccgtgccctc cacaagccca gcaacaccaa cacacatgcc caccgtgccc cccccaaaac ccaaggacac gtggacgtga gccacgaaga gtgcataatg ccaagacaaa agcgtcctca ccgtcctgca tccaacaaag ccctcccagc cgagaaccac aggtgtacac agcctgacct gcctggtcaa aatgggcagc cggagaacaa ttcttcctct acagcaagct tcatgctccg tgatgcatga tctccgggta aatag ggttttcctt gttgctatta gggaggcttg gtcaagcctg cttcagtgac tactatatga ttcatacatt agtagtagtg caccatctcc agggacaacg cgaggacacg gccgtgtatt aaccctggtc accgtctcct ctcctccaag agcacctctg ccccgaaccg gtgacggtgt cccggctgtc ctacagtcct cagcagcttg ggcacccaga ggtggacaag aaagttgagc agcacctgaa ctcctggggg cctcatgatc tcccggaccc ccctgaggtc aagttcaact gccgcgggag gagcagtaca ccaggactgg ctgaatggca ccccatcgag aaaaccatct cctgccccca tcccgggatg aggcttctat cccagcgaca ctacaagacc acgcctcccg caccgtggac aagagcaggt ggctctgcac aaccactaca taaaaggtgt ccagtgtcag gagggtccct gagactctcc gctggatccg ccaggctcca gtagtaccat atactacgca ccaagaactc actgtatctg actgtgcgag aggcctaact cagcttccac caagggccca ggggcacagc ggccctgggc cgtggaactc aggcgccctg caggactcta ctccctcagc cctacatctg caacgtgaat ccaaatcttg tgacaaaact gaccgtcagt cttcctcttc ctgaggtcac atgcgtggtg ggtacgtgga cggcgtggag acagcacgta ccgtgtggtc aggagtacaa gtgcaaggtc ccaaagccaa agggcagccc agctgaccaa gaaccaggtc tcgccgtgga gtgggagagc tgctggactc cgacggctcc ggcagcaggg gaacgtcttc cgcagaagag cctctccctg 60 120 180 240
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95567.DOC 1356063 <210> 102 <211> 464 <212> PRT <213>智人 <400> 102 .
Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Val Phe Leu Val Ala lie lie Lys Gly IS 10 15
Val Gin Cys Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys 20 25 30
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45
Ser Asp Tyr Tyr Met Ser Trp lie Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60
Glu Trp Val Ser Tyr lie Ser Ser Ser Gly Ser Thr lie Tyr Tyr Ala 65 70 75 BO
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn 85 90 95
Ser Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Leu Thr Gly Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr 115 120 125
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 130 135 140
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 145 150 155 160
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 165 170 175
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin 180 185 190
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 195 200 205
Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 210 215 220
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 225 230 235 240
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 245 250 255
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg
95567-DOC -68-
1356063 260
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 275
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Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 305 310
Ser Val Leu Thr Val Leu His 325
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 340 lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin 355
Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu 370 375
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 385 390
Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn 405
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 420
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Leu His Asn His Tyr Thr Gin 450 455 265 270
Val Val Asp Val Ser His Glu 280 285
Val Asp Gly Val Glu Val His 300
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Thr Leu Thr Cys Glu Ser 400 Leu Asp 415 Lys Ser Glu Ala Gly Lys
<210> 103 <211> 107 <212> PRT <213>智人 <400> 103
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser 1 5
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys 20
Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys 35
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Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser 25 30
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Val Gly 15 Ser Tyr Leu lie -69-
95567.DOC 1356063
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr Ser Thr Pro Phe 85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp lie Lys 100 105 <210> 104 <211> 120 <212> PRT <213>智人 <400> 104
Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Ala lie Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys β5 90 95
Ala Lys Tyr Ser Gly Ser Tyr Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105 110
Thr Leu val Thr Val Ser Ser Ala 115 120 <210> 105 <211> 119 <212> PRT <213>智人 <400> 105
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 •70·
95567.DOC 1356063
Trp Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ala Asn lie Lys Gin Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95
Arg Gly lie Ala Ala Ala Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala 115 <210> 106 <211> 117 <212> PRT <213>智人 <400> 106
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30
Tyr Met Ser Trp lie Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Tyr lie Ser Ser Ser Gly Ser Thr He Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Ala Leu Gly Gly Met Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val 100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala 115 <210> 107 <211> 107 <212> PRT <213> 智人 <400> 107
95567.DOC -71 -
Glu lie Val Met Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser Ser Asn 20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly lie Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Ser 65 70 7S 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asn Asn Trp Pro Phe 85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp lie Lys 100 105 <210> 108 <2X1> 115 <212> PRT <213>智人 <400> 108
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30
Tyr Met Ser Trp lie Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Tyr lie Ser Ser Ser Gly Ser Thr lie Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Leu Thr Gly Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr val 100 105 110
Ser Ser Ala 115
<210> 109 <211> 108 <212> PRT -72·
95567.DOC 1356063 <213>智人 <400> 109
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Ser Ser Trp 20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ala Asn Ser Phe Pro Phe 85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp lie Lys Arg 100 105 <210> 110 <211> 117 <212> PRT <2X3>智人- <400> 110
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ala Val lie Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Axg Gly Tyr Ser Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val 100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala 115 73-
95567.DOC 1356063 <210> 111 <211> 118 <212> PRT <213>智人 <400> 1X1
Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val bys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30
Gly lie Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45
Gly Trp lie Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gin Lys Leu 50 55 60
Gin Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Asp Tyr Gly Gly Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu 100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala 115 <210> 112 <211> 114 <212> PRT <213>智人 <400> 112
Asp lie Val Met Thr Gin Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 15 10 15
Glu Arg Ala Thr lie Asn Cys Lys Ser Ser Gin Ser Val Leu Tyr Ser 20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin 35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu lie Tyr Trp Ala Ser Thr Axg Glu Ser Gly Val 50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 lie Ser Ser Leu Gin Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin 85 90 95
Tyr Tyr Ser Thr Pro Trp Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie -74-
95567.DOC 1356063 100 105 110
Lys Arg
<210> 113 <211> 116 <212> PRT 智人' <400> 113
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Tyr lie Ser Ser Ser Ser Ser Thr lie Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr €5 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg lie Val Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110
Val Ser Ser Ala 115 <210> 114 <2X1> 109 <212> PRT <213>智人 <400> 114
Glu lie Val Leu Thr Gin Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 15 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 lie Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly lie Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Arg Leu Glu -75-
95567.DOC 1356063 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Gly Ser Ser Pro 85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg 100 105 <210> 115 <211> 114 <212> PRT <213>智人 <400> 115
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly IS 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30
Tyr Met Ser Trp lie Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Tyr lie Ser Ser Ser Gly Ser Thr lie Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 SO
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala lie Gly Met Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 100 105 110
Ser Ala <210> 116 <211> 115 <212> PRT <213>智人 <400> 116
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Axg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30
Tyr Met Ser Trp lie Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Tyr lie Ser Ser Ser Gly Ser Thr lie Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 SO -76-
95567.DOC 1356063
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Leu Thr Gly Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val 100 105 110
Ser Ser Ala 1X5 <210> 117 <211> 108 <212> PRT 智人- <400> 117
Asp He Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly IS 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Ser Ser Trp 20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ala Asn Ser Phe Pro Leu 85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg 100 105 77-
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Claims (2)

1356963^
27189號專利申請案 清專利範圍替換本(98年7月） 十、申請專利範圍： 公告本 1. 一種單株抗體，其可與M-CSF行特異性結合，其中該單株 抗體之重鏈胺基酸序列為SEQ ID NO: 30(不含訊息序 列），且該單株抗體之輕鏈胺基酸序列為SEQ ID NO: 32(不含訊息序列）。 2. 一種單株抗體之抗原結合片段，其中該單株抗體可與 M-CSF行特異性結合，其中該單株抗體之重鏈胺基酸序列 為SEQ ID NO: 3 0(不含訊息序列），且該單株抗體之輕鏈 胺基酸序列為SEQ ID NO: 32(不含訊息序列）。 3. 一種單株抗體，其可與M-CSF行特異性結合，其中該抗體 為單株抗體8.10.3F。 4. 一種單株抗體之抗原結合片段，其中該單株抗體可與 M-CSF行特異性結合，且其中該抗體為單株抗體8.10.3F。 5. 一種單株抗體或其抗原結合片段，其可與M-CSF行特異性 結合，其中該抗體包括抗體8.10.3F重鏈之CDR1、CDR2 及CDR3胺基酸序列，及抗體8.10.3F輕鏈之CDR1、CDR2 及CDR3胺基酸序列。 6. 一種單株抗體或其抗原結合片段，其可與M-CSF行特異性 結合，其中該抗體包括位於SEQ ID NO: 32之CDIU、CDR2 及CDR3之胺基酸序列，及位於SEQ ID NO: 3 0之CDR1、 CDR2及CDR3之胺基酸序列。 7. 一種單株抗體或其抗原結合片段，其可與M-CSF行特異性 結合，其中該抗體包括位於SEQ ID NO: 30(不含訊息序 列）之重鏈可變區，及位於SEQ ID NO: 32(不含訊息序列） 95567-980703.doc 1356063 之輕鏈可變區。 8.如請求項5之單株抗體或抗原結合片段，其中該抗體或片 段具有至少一種下列特性： (a)可與人類M-CSF之分泌亞型及人類M-CSF之膜結合亞 型結合； (b)對M-CSF之選擇性較其對GM-CSF或G-CSF之選擇性 高至少100倍；
(c) 與M-CSF結合時KD為1·〇χ1〇·7μ或更低； (d) 其與M-CSF之解離率（koff)為2.040.^-1或更少；及 (e) 在有人類c-/mi參與的情況下可與人類m-CSF結合。 9.如請求項5之單株抗體或抗原結合片段，其中該抗體係選 自由以下所組成之群：IgG、IgM、IgE、IgA及IgD。 1 〇·如δ月求項2之抗原結合片段，其中該片段係選自由以下所 組成之群：Fab片段、F(ab')2片段及fv片段。 11. 一種醫藥組合物，其包含如請求項丨之單株抗體及醫藥學 上可接受載劑。 12. —種醫藥組合物，其包含如請求項3之單株抗體及醫藥學 上可接受載劑。 13. —種醫藥組合物，其包含如請求項2之抗原結合片段及醫 藥學上可接受載劑。 14·如清求項6之單株抗體或抗原結合片段，其中該抗體或片 段具有至少一種下列特性： (a)可與人類M-CSF之分泌亞型及人類M CSF之膜結合亞 型結合； 95567-980703.doc , (D (b) 對M-CSF之選擇性較其對GM_CSF或g-CSF之選擇性 高至少100倍； (c) 與M-CSF結合時kd為i.〇x1〇-7M4更低； (d) 其與M-CSF之解離率（k〇ff)為2〇x1〇-4s-i或更少；及 (e) 在有人類c_fms參與的情況下可與人類m_csf結合。 15.如凊求項7之單株抗體或抗原結合片段，其中該抗體或片 段具有至少一種下列特性： Ο)可與人類M-CSF之分泌亞型及人類μ-CSF之膜結合亞 型結合； (b) 對M-CSF之選擇性較其對gm-CSF或G-CSF之選擇性 高至少1〇〇倍； (c) 與M-CSF結合時或更低； (d) 其與M-CSF之解離率（k(jff)為2.0><丨〇-4,或更少；及 (e) 在有人類參與的情況下可與人類M-CSF結合。 16·如請求項6之單株抗體或抗原結合片段，其中該抗體係選 自由以下所組成之群：IgG、IgM、IgE、IgA及IgD。 17. 如請求項7之單株抗體或抗原結合片段，其中該抗體係選 自由以下所組成之群：IgG、IgM、IgE、IgA及IgD。 18. 如請求項4之抗原結合片段，其中該片段係選自由以下所 組成之群：Fab片段、F(ab，）2片段及Fv片段。 19_如。月求項5之抗原結合片段，其中該片段係選自由以下所 組成之群：Fab片段、F(ab，）2片段及Fv片段。 20.如請求項6之抗原結合片段，其中該片段係選自由以下所 組成之群：Fab片段、F(ab，）2片段及Fv片段。 95567-980703.doc 21. 22. 23. 24. 25. 26. 27. 28. 29. 30. 31. 32. 以下所 段及醫 月长項7之抗原結合片段，其中該片段係選自由 :成之群：Fab片段、F(ab，)2片段及Fv片段。 種醫藥組合物，其包含如請求項4之抗原結合片 藥學上可接受載劑。 種醫樂組合物，其包含如請求項5之單株抗體或抗原結 合片段及醫藥學上可接受載劑。 種醫藥組合物，其包含如請求項6之單株抗體或抗原結 合片段及醫藥學上可接受載劑。 一種醫樂組合物，其包含如請求項7之單株抗體或抗原結 δ片奴及醫藥學上可接受載劑。 種士明求項1之單株抗體之用途，其係用於製備供治療 類風濕性關節炎之醫藥組合物。 一種如請求項3之單株抗體之用途，其係用於製備供治療 類風濕性關節炎之醫藥組合物。 一種如請求項2之抗原結合片段之用途，其係用於製備供 治療類風濕性關節炎之醫藥組合物。 一種如請求項4之抗原結合片段之用途，其係用於製備供 治療類風濕性關節炎之醫藥组合物。 一種如請求項5之單株抗體或抗原結合片段之用途，其係 用於製備供治療類風濕性關節炎之醫藥組合物。 一種如請求項6之單株抗體或抗原結合片段之用途，其係 用於製備供治療類風濕性關節炎之醫藥組合物❶ 一種如請求項7之單株抗體或抗原結合片段之用途，其係 用於製備供治療類風濕性關節炎之醫藥組合物。 95567-980703.doc 1356063 33. 一種如請求項1至7中任-項之單株抗體或抗原結合片段 之用途’其個於Μ可供治療選自由下所组成之病況 之醫藥組合物：關節炎、乾癖性關節炎、僵直性脊椎炎、 雷特氏（Reiter,s)症候群、痛風、創傷性關節炎、德國麻 療關節炎及急性滑膜炎與其它關節炎病況、敗企症、敗 血性休克、内毒素性休克、格蘭氏陰性g敗血症、中毒 性休克症候群、阿滋海默症（Alzheimer，s心㈣）、中風、 相創傷、氣喘、成人呼吸道箸迫症候群、腦型廬疾、 慢性肺炎疾病、料病、肺部類肉瘤病、骨質再吸收疾 病、骨質疏鬆症、再狹窄、心臟及腎臟再灌注性傷害、 血检形成、腎絲球性腎炎、糖尿病、移植物與接受者之 反應、異體臟器排斥、發炎性腸道疾病、克隆氏 症、潰瘍性結腸炎、多發性硬化症、肌肉變性、濕疹、 接觸性皮膚炎、牛皮癬、曬傷及結膜炎性休克 (conjunctivitis shock)。 34· -㈣請求項⑴中任一項之單株抗體或抗原結合片段 之用域，其係用於製備可治療有需要之病患之固態腫瘤 (如肉瘤、癌）或淋巴瘤之醫藥組合物。 35· —種分離細胞株，其可製造如請求項丨至？中任一項之單 株杬體或其抗原結合片段或該抗體或片段之重鏈。 36. 士吻求項35之分離細胞株，其可產生單株抗體8i〇3f或 與單株抗體8.1〇.3F具有相同胺基酸序列之抗體。 37. 種刀離核酸分子，其包含一核苷酸序列，該核苷酸序 列可編碼如請求項丨、3及5至7中任一項之單株抗體之重 95567-980703.doc 1356063 鏈或其抗原結合片段 片段® 或重鏈及輕鏈兩者或其抗原結合 38 丄其包含如請求項37之核酸分子，其中該載體 、擇“ 以人工方式連接至該核酸分子之表現控制 序列。 39. —種分離宿主細胞，其包含如請求項“之載體。 40. —種分離宿主細胞，其包含可編碼如請求項丨至？中任一 項之抗體或抗原結合片段之重鏈及輕鏈之核酸分子。 41. 一種製備抗_M_CSF抗體或其抗原結合片段之方法，其包 括於適當條件下培養如請求項35之細胞株及回收該抗= 或片段。 42· 種製備抗-M-CSF抗體或其抗原結合片段之方法，其勹 括於適當條件下培養如請求項40之宿主細胞及回收該抗 體或片段。
95567-980703.doc 1356063 Η' 第093127189號專利申請案 中文圖式替換本(98年7月）
相教於»试纛之玫褽百分比 24/ji 年~月$日修(更)正本 ΙΑ 涑foit 園游请i ΕΠΡ1 mg/kg p1omg/kg 國 5omg/kg 95567-fig-980703.doc 1356063 相较於a緘首之改霰百分比 o cn cn ο ο ο ο ο # 1B 蛾2庳
1, # ίβ Ρ0.1 mg/kg mlorng/kg 國 5omg/kg 95567-flg-980703.doc 1356063 單核球CD14+CD16+滅少百分比％ ο ro co ) 〇 〇 〇 ο
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WGQGTTVTVSSA {SEQ IDzo: 115> 3 { ss ID NO: 5°ϋ20 丨 136 ) lov'°LVESGGGLVKPGltnSLRLSCAAS GFTFSDYYgs WI'^QAPGKGI.ESVS YISSSGSTIYYADSVKGl73FTIS 匁 DNAKNSLYLQSMSLRAnDTAVYycA'^I'^GSDV ^S,R1 ^ CDSI^ CDS **VHVH3 — 11、D=D6 丨一3,α"αΗ6σ 9.7.2c-ser ---------------------- =8丨 G— DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQSISSYLN WY'°loKPGKAPKLLIY AASSLQS GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QQSYSTPFT FGPGTKVOIKR {SEQ ID NO: 103) FR1 ~CDiU ^ CDR2 FR3 CDR3 J *# · Vn012, JHJK3 9.7.2c-ser --------------------- 31 {residues 23-130 of SEQ IDZO: 52} CDFU FR2 -G7I CDW2 FR3 CDS 95567-fig-980703.doc -14- ⑧ 1356063 » · · ωοι^ΛΗ. -------------------------------FIT------------------R----S---------------------------------------DPLIAIATB·—— *莱爭汰 EVQLVrasGGGLVQ^GGSL^LSCAAS GFTFSSYSMN gvR'°APCKGLElsvs YISSSSSTIYYADSVKG RETISRDNAKNSLYLQMNSLRDEDTAVYYCAR ###IVG###FDY FSI C§1 ^ CDS ^ CDS 8.1P3C-Ser ------------ i SEQ ID NO: 58^^^20-141) ^Λ WGQGTLVTVSSA iss ID NO: 1131 _rc-la4DD *典· VHVH3-4'DUD1 丨 2'J=JH4b *,爷次 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC RASQSVSSSYLA WYQQKPGQAPLIY GASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC FSTsl21. ^ CDS ^ **^2QQYGSSPLT FGGGTKVEMKR I ss I Dzo: 60 汐*^21 丨 12-CDS J 8·10.3 -------------------- {SEQ IDzo: 一一公)a払cn **vnA27、J=JK4 8.10.3c-wer -------- 9.14.4?ser --------------------------------------------------------------------------------------------------G----- *#/M QVloLVESGGGltHvl:,:PGGSLl:pLSCAAS GFTFSDYYMS gIRQAPGKGLEWVS YISSSGSTIYYADSVKG l3eLTGDY Fil CD2 ^ CDS ^ . 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