JP2008515774A - ｈＫ１結合タンパク質 - Google Patents

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Abstract

本発明は、ｈＫ１結合ポリペプチドならびにこのようなポリペプチドを含む組成物およびこのようなポリペプチドを作製する方法および使用する方法を特徴とする。本発明は、免疫グロブリン重鎖（ＨＣ）可変ドメイン配列および免疫グロブリン軽鎖（ＬＣ）可変ドメイン配列を含むタンパク質を提供し、ここでこのＨＣ可変ドメイン配列およびこのＬＣ可変ドメイン配列は、ｈＫ１に結合して、ｈＫ１の酵素活性を阻害する抗原結合部位を形成する。

Description

本特許出願は、これによりその内容が参照して本明細書に組み込まれる２００４年８月３日に提出された米国特許出願第６０／５９８，５０６号、および２００４年１０月４日に提出された米国特許出願第６０／６１５，７２１号に対する優先権を主張する。
（背景）
ヒト組織カリクレインには、ＫＬＫ１遺伝子によってコードされ、時々は膵／腎カリクレイン、ｈＰＲＫ、またはＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）Ｍ２５６２９もしくはＭ３３１０５と呼ばれるタンパク質であるｈＫ１が含まれる。一般に、非特許文献１を参照されたい。
Ｙｏｕｓｅｆら，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ，２００１年，第２２巻，ｐ．１８４−２０４
（要旨）
本開示は、特に、ｈＫ１結合タンパク質を提供する。「ｈＫ１結合タンパク質」は、ｈＫ１と相互作用できるタンパク質またはそのフラグメント、特別にはそのプロテアーゼ活性フラグメントを意味する。ｈＫ１結合タンパク質には、高親和性でｈＫ１に結合する抗体およびｈＫ１酵素活性を阻害できる抗体が含まれる。ｈＫ１結合タンパク質は、被験体へ、例えば喘息（例、アレルギー性および非アレルギー性喘息）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、多発性硬化症、乾癬、慢性関節リウマチ、変形性関節症、鼻炎、副鼻腔炎、炎症性腸疾患（クローン病および潰瘍性大腸炎など）、免疫媒介性糖尿病、急性膵炎、間質性膀胱炎、および腫瘍性障害（例、転移性膵腺癌もしくは腫瘍性血管新生）、または他のｈＫ１関連性障害などの障害を処置するために投与することができる。
１つの態様では、本開示は、ｈＫ１に結合する、そして重鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列および軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列を含むタンパク質を特徴とする。該タンパク質は、ｈＫ１の活性部位に結合できる、または活性部位を立体的に閉塞させることができる。１つの実施形態では、該タンパク質は、ｈＫ１活性部位残基６５、１２０、もしくは２１４のうちの１つまたは複数、またはそのような残基の５アミノ酸内の残基に接触する。１つの実施形態では、該タンパク質は、ｈＫ１酵素活性を阻害する。例えば、該タンパク質は、２００、８０、５０、４０、３０、２０、１０、５、４、３、２．５もしくは１ｎＭ未満のＩＣ５０、例えば１〜２０ｎＭ、およびそれらの間の他の範囲内のＩＣ５０を備えるｈＫ１を阻害できる。該タンパク質は、１０−７Ｍ、１０−８Ｍ、５・１０−９Ｍ、１０−９Ｍ、１０−１０Ｍ、１０−１１Ｍ、もしくは１０−１２Ｍ未満のＫｄ、例えば１０−８Ｍ〜１０−１１Ｍ、およびその間の他の範囲内のＫｄを備えるｈＫ１へ結合することができる。
１つの実施形態では、該タンパク質は、ｈＫ１が１２アミノ酸より大きなタンパク質基質、例えば高分子量キニノーゲン、低分子量キニノーゲン、上皮成長因子、プロインスリン、低密度リポタンパク質、プロプレニン、血管作用性腸ペプチド、プロコラゲナーゼ、および／またはアンジオテンシノーゲンと相互作用するのを防止する。また別の実施形態では、該タンパク質は、ｈＫ１が１２アミノ酸より小さいペプチド基質と相互作用するのを防止する。
１つの実施形態では、該タンパク質は、アプロチニンまたはα１−アンチトリプシンもしくはカリスタチンなどの他のタンパク質プロテアーゼ阻害剤によって不活性化されるｈＫ１分子に結合することはできない。
１つの実施形態では、該タンパク質は、ヒトにおける免疫原性反応を誘発しない。例えば、該タンパク質は、ヒト化抗体、ヒト抗体、または有効なヒト抗体である。１つの実施形態では、該タンパク質は、１つまたは複数のＣＤＲ、例えば少なくとも３、４、５、もしくは６個のヒトＣＤＲを含んでいる。１つの実施形態では、該タンパク質は、本明細書に記載した１つまたは複数のＣＤＲ、例えば配列番号１〜１０２０および１３８０〜１３８５のうちの１つまたは複数を含んでいる。１つの実施形態では、該タンパク質は、配列番号７、８、９、１０、１１および１２のうちの１つまたは複数の、例えば３、４、５もしくは６個のＣＤＲを含んでいる。また別の実施形態では、該タンパク質は、配列番号１３８０、１３８１、１３８２、１３８３、１３８４および１３８５のうちの１つまたは複数の、例えば３、４、５、もしくは６個のＣＤＲを含んでいる。また別の実施形態では、該タンパク質は、配列番号１０９、１１０、１１１、１１２、１１３および１１４のうちの１つまたは複数の、例えば３、４、５、もしくは６個のＣＤＲを含んでいる。また別の実施形態では、該タンパク質は、配列番号１５１、１５２、１５３、１５４、１５５および１５６のうちの１つまたは複数の、例えば３、４、５、もしくは６個のＣＤＲを含んでいる。１つの実施形態では、該タンパク質は、１つまたは複数のヒトフレームワーク領域もしくは実質的にヒトフレームワーク領域、例えば少なくとも３、４、５、もしくは６個のヒトフレームワーク領域を含んでいる。１つの実施形態では、該タンパク質は、配列番号１１９９〜１３６９および１３７７のアミノ酸配列を有する可変重鎖由来の１つまたは複数のフレームワーク領域および／または配列番号１０２２〜１１９８および１３７６のアミノ酸配列を有する可変軽鎖由来の１つまたは複数のフレームワーク領域を含んでいる。１つの実施形態では、該タンパク質は、配列番号１２４５の可変重鎖配列由来の１つまたは複数のフレームワーク領域および／または配列番号１０７０の可変軽鎖配列由来の１つまたは複数のフレームワーク領域を含んでいる。また別の実施形態では、該タンパク質は、配列番号１２０６の可変重鎖配列由来の１つまたは複数のフレームワーク領域および／または配列番号１０２９の可変軽鎖配列由来の１つまたは複数のフレームワーク領域を含んでいる。また別の実施形態では、該タンパク質は、配列番号１３５４の可変重鎖配列由来の１つまたは複数のフレームワーク領域および／または配列番号１１８３の可変軽鎖配列由来の１つまたは複数のフレームワーク領域を含んでいる。
ＨＣ ＣＤＲ１は、そのうちの少なくとも３、４、もしくは５アミノ酸が本明細書に記載した抗体のＨＣ ＣＤＲ１配列、例えば配列番号１０、１１２、１５４もしくは１３８３のＨＣ ＣＤＲ１と同一である少なくとも５アミノ酸長を有するアミノ酸配列を含んでいてよい。
ＨＣ ＣＤＲ２は、そのうちの少なくとも１０、１２、１４、１５、１６、もしくは１７アミノ酸が本明細書に記載した抗体のＨＣ ＣＤＲ２配列、例えば配列番号１１、１１３、１５５もしくは１３８４のＨＣ ＣＤＲ２と同一である少なくとも１５、１６、もしくは１７アミノ酸長を有するアミノ酸配列を含んでいてよい。ＨＣ ＣＤＲ２は、そのうちの少なくとも１４、１５、１６、もしくは１７アミノ酸が本明細書に記載した抗体のＨＣ ＣＤＲ２配列、例えば配列番号１１、１１３、１１５もしくは１３８４のＨＣ ＣＤＲ２と同一である少なくとも１７アミノ酸長を有するアミノ酸配列を含んでいてよい。
ＨＣ ＣＤＲ３は、そのうちの少なくとも５、６、７、もしくは８アミノ酸が本明細書に記載した抗体のＨＣ ＣＤＲ３配列、例えば配列番号１２、１１４、１５６もしくは１３８５のＨＣ ＣＤＲ３と同一である少なくとも７もしくは８アミノ酸長を有するアミノ酸配列を含んでいてよい。
ＬＣ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３は、本明細書に記載した抗体の対応するＬＣ ＣＤＲ配列、例えば配列番号７、１０９、１５１もしくは１３８０のＬＣ ＣＤＲ１、配列番号８、１１０、１５２もしくは１３８１のＬＣ ＣＤＲ２、配列番号９、１１１、１５３もしくは１３８２のＬＣ ＣＤＲ３と同一である、または各１０アミノ酸について長さが２アミノ酸未満しか相違しないアミノ酸配列を含んでいてよい。
１つの実施形態では、Ｈ１およびＨ２超可変ループは、本明細書に記載した抗体と同一の基本構造を有する。１つの実施形態では、Ｌ１およびＬ２超可変ループは、本明細書に記載した抗体と同一の基本構造を有する。
１つの実施形態では、ＨＣ可変ドメイン配列のアミノ酸配列は、本明細書に記載した抗体のＨＣ可変ドメイン、例えば配列番号１２０６、１２４５もしくは１３５４のＨＣ可変ドメインのアミノ酸配列と少なくとも７０、８０、８５、９０、９２、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である。１つの実施形態では、ＬＣ可変ドメイン配列のアミノ酸配列は、本明細書に記載した抗体のＬＣ可変ドメイン、例えば配列番号１０２９、１０７０もしくは１１８３のＬＣ可変ドメインのアミノ酸配列と少なくとも７０、８０、８５、９０、９２、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である。例えば、ＨＣおよびＬＣ可変ドメイン配列のアミノ酸配列は、本明細書に記載した抗体のＨＣおよびＬＣ可変ドメイン、例えば配列番号１２４５のＨＣ可変ドメインおよび配列番号１０７０の軽鎖可変ドメイン、配列番号１２０６のＨＣ可変ドメインおよび配列番号１２０９の軽鎖可変ドメイン、配列番号１３５４のＨＣ可変ドメインおよび配列番号１１８３の軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列と少なくとも７０、８０、８５、９０、９２、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である。
ＨＣおよびＬＣ可変ドメイン配列のアミノ酸配列は、高ストリンジェンシー条件下で本明細書に記載した核酸配列もしくは可変ドメインをコードする核酸配列へ、または本明細書に記載したアミノ酸配列、例えば配列番号１２４５および／または配列番号１０７０、配列番号１２０６および／または配列番号１０２９、配列番号１３５４および／または配列番号１１８３のアミノ酸配列をコードする核酸へハイブリダイズする配列によってコードすることができる。１つの実施形態では、ＨＣおよび／またはＬＣ可変ドメインの１つまたは複数のフレームワーク領域（例、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、および／またはＦＲ４）のアミノ酸配列は、本明細書に記載した抗体のＨＣおよびＬＣ可変ドメインの対応するフレームワーク領域、例えば配列番号１２４５および配列番号１０７０、配列番号１２０６および配列番号１０２９、配列番号１３５４および配列番号１１８３のアミノ酸配列と少なくとも７０、８０、８５、９０、９２、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である。１つの実施形態では、１つまたは複数の重鎖フレームワーク領域（例、ＨＣ ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３）は、ヒト生殖細胞系抗体、例えばＶＨＩＩＩ生殖細胞蛍光体またはＨ１およびＨ２超可変ループ内の１〜３基本構造と適合性である生殖細胞系抗体配列に由来する対応するフレームワーク領域の配列と少なくとも７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、もしくは１００％同一である。
１つの実施形態では、１つまたは複数の軽鎖フレームワーク領域は、ヒト生殖細胞系抗体についての対応するフレームワーク領域の配列と少なくとも８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、または１００％同一である。
１つの実施形態では、重鎖可変ドメイン配列は、Ｈ１およびＨ２超可変ループについての１〜３のＣｈｏｔｈｉａ基本構造を有する可変ドメインを形成する。
ＨＣ ＣＤＲ３は、Ｒ−（ＲＶ）−Ｇ−Ｘ−（ＷＹ）−（ＹＧ）−（ＡＧＳ）−（ＦＭ）−Ｄ−（ＹＩＶ）−Ｗを含んでいてよい。ＨＣ ＣＤＲ３は、Ｙ−（ＹＰ）−Ｙ−（ＹＧ）−（ＡＧ）−（ＭＦ）−Ｄ−（ＶＩ）を含んでいてよい。ＬＣ ＣＤＲ１は、（ＲＧ）−Ａ−Ｓ−（ＱＳ）−Ｓ−（ＩＶ）−（ＳＧ）−（ＳＧ）−Ｙ−（ＬＹ）−（ＮＡ）を含んでいてよい。ＬＣ ＣＤＲ１は、（ＲＧＶ）−Ａ−Ｓ−（ＱＳ）−Ｓ−（ＩＶ）−（ＳＧ）−（ＳＴ）−（ＹＮ）−Ｌ−（ＮＡ）を含んでいてよい。ＬＣ ＣＤＲ１は、Ｒ−Ａ−Ｓ−Ｑ−Ｘ−Ｉ−（ＳＧ）−（ＳＬＧ）−Ｘ−（ＬＹ）を含んでいてよい。ＬＣ ＣＤＲ２は、Ｉ−Ｙ−（ＡＧ）−（ＡＶ）−Ｓ−（ＮＳ）−（ＲＬ）−（ＰＡ）−Ｓ−Ｇ−（ＶＩ）を含んでいてよい。ＬＣ ＣＤＲ２は、Ｉ−Ｙ−（ＡＧ）−（ＡＶ）−Ｓ−Ｓ−（ＲＬ）−（ＰＡＱ）−（ＳＴ）−Ｇ−（ＶＩ）を含んでいてよい。ＬＣ ＣＤＲ３は、Ｑ−Ｑ−（ＹＳ）−（ＴＡＮＧＹ）−Ｓ−（ＳＰＴ）−（ＰＳ）−Ｘ−Ｔ−Ｆを含んでいてよい。ＬＣ ＣＤＲ３は、（ＣＡ）−Ｑ−（ＱＷ）−（ＹＤ）−Ｄ−Ｓ−Ｌ−Ｐ−Ｘ−Ｔ−Ｆまたは（ＣＡ）−Ｑ−（ＱＷ）−（ＹＤ）−Ｄ−Ｓ−Ｌ−Ｐ−Ｇ−Ｔ−Ｆを含んでいてよい。括弧内に提供したアミノ酸は、所定の位置の代替アミノ酸を示している。
１つの実施形態では、該タンパク質は、本明細書に記載した抗体、例えばＤＸ−２３００、Ｍ０９３−Ｆ０９、Ｍ１３７−Ｅ０１およびＭ００９７−Ｂ１２抗体によって結合されるエピトープの全部または一部に結合する。該タンパク質は、本明細書に記載した抗体、例えばＤＸ−２３００、Ｍ０９３−Ｆ０９、Ｍ１３７−Ｅ０１およびＭ００９７−Ｂ１２抗体のｈＫ１への結合を阻害できる、例えば競合的に阻害できる。該タンパク質は、エピトープ、例えば配座もしくは直鎖状エピトープに結合することができ、該エピトープは結合すると本明細書に記載した抗体、例えばＤＸ−２３００、Ｍ０９３−Ｆ０９、Ｍ１３７−Ｅ０１およびＭ００９７−Ｂ１２抗体のｈＫ１への結合を防止する。このエピトープは、例えば本明細書に記載した抗体、例えばＤＸ−２３００、Ｍ０９３−Ｆ０９、Ｍ１３７−Ｅ０１およびＭ００９７−Ｂ１２抗体によって認識されるものに空間的に極めて近位にある、または機能的に関連している、直鎖状配列もしくは立体配座空間内の重複もしくは隣接エピトープであってよい。
該タンパク質は、全長抗体（例、ＩｇＧ（例、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、ＩｇＭ、ＩｇＡ（例、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２）、ＩｇＤ、およびＩｇＥ、しかし好ましくはＩｇＧ）であってよい、または抗原結合フラグメント（例、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２もしくはｓｃＦｖフラグメント、あるいは１つまたは複数のＣＤＲ）しか含んでいなくてもよい。抗体、またはその抗原結合フラグメントは、２本の重鎖および２本の軽鎖を含んでいてよい、または一本鎖抗体であってよい。抗体は、任意で、κ、λ、α、γ、δ、εもしくはμ定常領域遺伝子から選択された定常領域を含んでいてよい。好ましい抗体は、実質的にヒト抗体由来の重鎖および軽鎖定常領域、例えばヒトＩｇＧ１定常領域、その一部分、またはコンセンサス配列を含んでいる。
１つの実施形態では、ｈＫ１結合タンパク質はｈＫ１に結合し、ｈＫ１のｈＫ１触媒活性を阻害する、または減少させる。１つの実施形態では、ｈＫ１結合タンパク質は、ｈＫ１に対して５０ｎＭ、４０ｎＭ、３０ｎＭ、２０ｎＭ、５ｎＭ、１ｎＭ、５００ｐＭ、１００ｐＭ、５０ｐＭ、３０ｐＭ未満のＫｉを有していてよい。ｈＫ１結合タンパク質は、ｈＫ１酵素活性を優先的に他のプロテアーゼの少なくとも１００、２００、５００、もしくは１０００倍以上阻害することができる。
本開示は、本明細書に記載したポリペプチド各々をコードする核酸をさらに特徴とする。該核酸は、同族コドンまたは各ポリペプチドを生成するように翻訳できる任意のコドンセットを含んでいてよい。例えば、該核酸は、各ポリペプチドを生成するために翻訳でき、その中で発現する細胞のタイプについて一般的である共通コドンである１つまたは複数のコドンを含んでいてよい。１つの実施形態では、核酸はその中でコードされたポリペプチドが発現する細胞のタイプに対して少なくとも４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％以上共通するコドンを含んでいる。１つの実施形態では、該核酸は、配列番号１２４５の重鎖配列および／または配列番号１０７０の軽鎖配列、配列番号１２０６の重鎖配列および／または配列番号１０２９の軽鎖配列、配列番号１３５４の重鎖配列および／または配列番号１１８３の軽鎖配列をコードする。１つの実施形態では、該核酸は、配列番号１２４５の重鎖配列をコードし、１つまたは複数のコドンは共通コドンであり、例えばチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞内での発現のためには、例えば該核酸は配列番号１３７９のヌクレオチド配列を含んでいる。１つの実施形態では、該核酸は、配列番号１０７０の軽鎖配列をコードし、１つまたは複数のコドンは共通コドンであり、例えばチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞内での発現のためには、例えば該核酸は配列番号１３７８のヌクレオチド配列を含んでいる。さらに、本発明は本明細書に記載した核酸を含む宿主細胞を特徴とする。
さらにまた別の態様では、本発明は、ｈＫ１結合抗体、またはその抗原結合フラグメントを生成する方法を特徴とする。本方法は、重鎖可変領域、例えば本明細書に記載した重鎖可変領域を含むポリペプチドをコードする第１核酸配列を含有する宿主細胞を提供する工程と；軽鎖可変領域、例えば本明細書に記載した軽鎖可変領域を含むポリペプチドをコードする第２核酸配列を提供する工程と；およびｈＫ１と相互作用する抗原結合タンパク質を形成するために前記軽鎖および重鎖可変領域の組み立てを可能にする条件下において宿主細胞内で前記第１および第２核酸配列を発現させる工程と、を含んでいる。第１および第２核酸配列は、例えば各々同一もしくは相違するベクター上で発現して、連結していても連結していなくてもよい。第１および第２核酸配列は、同一分子の構成成分であってよい、または相違する分子（例、相違する染色体もしくはプラスミド）上に存在していてもよい。
宿主細胞は、真核細胞、例えば哺乳動物細胞、昆虫細胞、酵母細胞、または原核細胞、例えば大腸菌（Ｅ． ｃｏｌｉ）であってよい。例えば、哺乳動物細胞は培養細胞または細胞系であってよい。代表的な哺乳動物細胞には、リンパ球細胞系（例、ＮＳＯ）、ＣＨＯ、ＣＯＳ細胞、卵母細胞、およびトランスジェニック細胞由来の細胞、例えば哺乳動物上皮細胞が含まれる。例えば、本明細書に記載した抗体をコードする核酸はトランスジェニック動物内で発現させることができる。１つの実施形態では、該核酸は、組織特異的プロモーター（例、哺乳動物特異的プロモーター）の制御下に置かれ、該抗体はトランスジェニック動物内で生成される。例えば、該抗体分子は、トランスジェニックウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ヤギまたは齧歯類などのトランスジェニック動物の乳汁中へ分泌される。
本開示は、ｈＫ１関連性障害を改善する方法をさらに特徴とする。本方法は、ｈＫ１結合タンパク質（例、本明細書に記載したような）を被験体へ、障害もしくはそれの少なくとも１つの症状を改善するために有効な量で投与する工程を含んでいる。この障害は、炎症性障害であってよい。障害は、例えば、ＣＯＰＢ、喘息、慢性関節リウマチ、変形性関節症、多発性硬化症であってよい。障害は、鼻炎、副鼻腔炎、炎症性腸疾患（クローン病および潰瘍性大腸炎など）、免疫媒介性糖尿病、急性膵炎、間質性膀胱炎、または腫瘍性障害（例、転移性膵腺癌もしくは腫瘍性血管新生）であってよい。該タンパク質は、本明細書に記載した他の特徴を含んでいてよい。一般に、該タンパク質は、軽鎖（ＬＣ）可変ドメイン配列および重鎖（ＨＣ）可変ドメイン配列を含む抗原結合部位を含んでいる。該タンパク質は、ＩｇＧまたはＦａｂの形状にあってよい。典型的には、該タンパク質は被験体において免疫原性ではなく、例えば、該タンパク質はヒトもしくは有効なヒトフレームワークおよび定常ドメイン、例えば修飾されたヒト定常ドメインを含んでいる。１つの実施形態では、該タンパク質は、ｈＫ１を阻害する。本方法は、本明細書に記載した他の特徴を含んでいてよい。
本開示は、ｈＫ１関連性障害を予防または処置する方法をさらに特徴とする。本方法は、ｈＫ１結合タンパク質（例、本明細書に記載したような）を被験体へ、障害を予防または処置する、その少なくとも１つの症状の発生を遅延させる、またはその少なくとも１つの症状を改善するために有効な量で投与する工程を含んでいる。例えば、障害は、喘息（例、アレルギー性および非アレルギー性喘息）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、多発性硬化症、乾癬、慢性関節リウマチ、変形性関節症、鼻炎、副鼻腔炎、炎症性腸疾患（クローン病および潰瘍性大腸炎など）、免疫媒介性糖尿病、急性膵炎、間質性膀胱炎、または腫瘍性障害（例、転移性膵腺癌もしくは腫瘍性血管新生）である。該タンパク質は、本明細書に記載した他の特徴を含んでいてよい。一般に、該タンパク質は、軽鎖（ＬＣ）可変ドメイン配列および重鎖（ＨＣ）可変ドメイン配列を含む抗原結合部位を含んでいる。該タンパク質は、ＩｇＧまたはＦａｂの形状にあってよい。典型的には、該タンパク質は被験体において免疫原性ではなく、例えば、該タンパク質はヒトもしくは有効なヒトフレームワークおよび定常ドメイン、例えば修飾されたヒト定常ドメインを含んでいる。１つの実施形態では、該タンパク質は、ｈＫ１を阻害する。本方法は、本明細書に記載した他の特徴を含んでいてよい。
本開示は、被験体における気道炎症または気道過剰反応性を変調する方法をさらに特徴とする。本方法は、ｈＫ１結合タンパク質（例、本明細書に記載したような）を被験体へ、（ｉ）気管支組織カリクレイン活性を低下させるため、（ｉｉ）被験体における気道炎症を減少させるため、および／または（ｉｉｉ）被験体における気道過剰反応性を低下させるために有効な量で投与する工程を含んでいる。１つの実施形態では、該タンパク質は吸入によって、例えば計量式インヘラー（ｉｎｈａｌｅｒ）を用いて投与される。また別の実施形態では、該タンパク質は皮下注射によって投与される。
また別の態様では、本開示は、血管新生関連性障害を予防または処置する方法を特徴とする。本方法は、ｈＫ１結合タンパク質（例、本明細書に記載したような）を被験体へ、血管新生を減少させるため、および／または血管新生関連性障害、例えば腫瘍性障害を改善するために有効な量で投与する工程を含んでいる。例えば、障害は、悪性腫瘍増殖を特徴とする腫瘍性障害である。該タンパク質は、様々な方法によって、例えば注射、例えば皮下、筋内、または静脈内注射によって投与することができる。１つの実施形態では、該タンパク質は腫瘍へ局所的に投与される。
ｈＫ１結合タンパク質（第１物質）は、腫瘍性障害を処置するために有効である第２物質と組み合わせて投与することができる。例えば、第２物質は、ＶＥＧＦクラスの成長因子の活性を変調する、例えば第２物質はＶＥＧＦもしくはＶＥＧＦ受容体の活性を変調する。１つの実施形態では、第２物質はＶＥＧＦに結合する抗体である。第２物質のその他の例は、本明細書に提供されている。
本明細書で使用する「組み合わせて投与される」は、２種以上の物質が被験体へ同時に、またはある間隔内に、患者への各物質の作用がオーバーラップするように投与されることを意味する。好ましくは、第１および第２物質の投与は、組み合わせ作用が達成されるように十分に近い間隔があけられる。この間隔は、数分間、数時間、数日間、または数週間の間隔であってよい。一般に、物質は被験体において同時に生体内利用可能である、例えば検出可能である。第１および第２物質は、いずれの順序で投与されてもよい。好ましい実施形態では、物質の１つ、例えば第１物質の少なくとも１回の投与は、もう１つの物質、例えば第２物質の数分間、１、２、３、もしくは４時間以内に、または１もしくは２日間以内にさえ行なわれる。
１つの実施形態では、第１および第２物質は、同時に投与される。例えば、第１および第２物質は共調製される。また別の実施形態では、第１および第２物質は、異なる時点に投与される。
該タンパク質は、本明細書に記載した他の特徴を含んでいてよい。一般に、該タンパク質は、軽鎖（ＬＣ）可変ドメイン配列および重鎖（ＨＣ）可変ドメイン配列を含む抗原結合部位を含んでいる。該タンパク質は、ＩｇＧまたはＦａｂの形状にあってよい。典型的には、該タンパク質は被験体において免疫原性ではなく、例えば、該タンパク質はヒトもしくは有効なヒトフレームワークおよび定常ドメイン、例えば修飾されたヒト定常ドメインを含んでいる。１つの実施形態では、該タンパク質は、ｈＫ１を阻害する。本方法は、本明細書に記載した他の特徴を含んでいてよい。
用語の定義
本明細書で使用する用語「抗体」は、少なくとも１つの免疫グロブリン可変ドメインもしくは免疫グロブリン可変ドメイン配列を含むタンパク質を意味する。例えば、抗体は、重（Ｈ）鎖可変領域（本明細書ではＶＨと略記する）、および軽（Ｌ）鎖可変領域（本明細書ではＶＬと略記する）を含んでいてよい。また別の例では、抗体は２つの重（Ｈ）鎖可変領域および２つの軽（Ｌ）鎖可変領域を含んでいる。用語「抗体」は、抗体の抗原結合フラグメント（例、一本鎖抗体、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄフラグメント、Ｆｖフラグメント、およびｄＡｂフラグメント）ならびに完全抗体を含んでいる。
ＶＨおよびＶＬ領域は、「フレームワーク領域」（ＦＲ）と呼ばれるより保存されている領域に挟まれた「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）と呼ばれる超可変性の領域にさらに分けることができる。フレームワーク領域およびＣＤＲの範囲は、正確に規定されている（Ｋａｂａｔ， Ｅ．Ａ．， ｅｔ ａｌ． （１９９１） Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ， Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｕ．Ｓ． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ， ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ． ９１−３２４２およびＣｈｏｔｈｉａ， Ｃ． ｅｔ ａｌ． （１９８７） Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． １９６：９０１−９１７を参照）。本明細書ではＫａｂａｔの定義を使用する。各ＶＨおよびＶＬは、典型的には、アミノ末端からカルボキシ末端へ次の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で配列された３つのＣＤＲと４つのＦＲとから構成される。
「免疫グロブリンドメイン」は、免疫グロブリン分枝の可変もしくは定常ドメインからのドメインを意味する。免疫グロブリンドメインは、典型的には約７本のβストランドから形成される２つのβシート、および保存されたジスルフィド結合を含有する（例えば、Ａ．Ｆ． Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ａ．Ｎ． Ｂａｒｃｌａｙ １９８８ Ａｎｎ． Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ６：３８１−４０５を参照）。免疫グロブリン可変ドメインの超可変ループの基本構造は、Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ． （１９９２） Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２２７：７９９−８１７；Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ． （１９９２） Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２２７：７７６−７９８）；およびＴｏｍｌｉｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ． （１９９５） ＥＭＢＯ Ｊ． １４（１８）：４６２８−３８に記載されているようにその配列から推測することができる。
本明細書で使用する「免疫グロブリン可変ドメイン配列」は、免疫グロブリン可変ドメインの構造を形成できるアミノ酸配列を意味する。例えば、この配列は天然型可変ドメインのアミノ酸配列の全部または一部を含んでいてよい。例えば、この配列は、１つ、２つ、または３つ以上のＮ末端もしくはＣ末端アミノ酸、内部アミノ酸を除外することができ、１つまたは複数の挿入もしくは追加の末端アミノ酸を含んでいてよい、または他の代替アミノ酸を含んでいてよい。１つの実施形態では、免疫グロブリン可変ドメイン配列を含むポリペプチドは、他の免疫グロブリン可変ドメイン配列と結び付いて標的結合構造（もしくは「抗原結合部位」）、例えばｈＫ１と相互作用する、例えばｈＫ１に結合する、もしくはｈＫ１を阻害する構造を形成することができる。
抗体のＶＨもしくはＶＬ鎖は、それによって重鎖もしくは軽鎖免疫グロブリンを各々形成するために、重鎖もしくは軽鎖定常領域の全部または一部をさらに含んでいてよい。１つの実施形態では、抗体は、２本の重鎖免疫グロブリン鎖および２本の軽鎖免疫グロブリン鎖の四量体であるが、このとき重鎖および軽鎖免疫グロブリン鎖は、例えばジスルフィド結合によって相互連結されている。重鎖定常領域は、３つのドメインＣＨｌ、ＣＨ２およびＣＨ３を含んでいる。軽鎖定常領域は、ＣＬドメインを含んでいる。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有している。抗体の定常領域は、典型的には抗体の、様々な免疫系の細胞（例、エフェクター細胞）および伝統的補体系の第１成分（Ｃｌｑ）を含む宿主組織もしくは因子への結合を媒介する。用語「抗体」は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、ＩｇＭタイプ（ならびにそれらのサブタイプ）の無傷免疫グロブリンを含んでいる。免疫グロブリンの軽鎖は、κもしくはλのタイプであってよく、１つの実施形態では、抗体はグリコシル化されている。抗体は、抗体依存性細胞毒性および／または補体媒介性細胞毒性に対して機能的である可能性がある。
抗体の１つまたは複数の領域は、ヒトまたは有効なヒトであってよい。例えば、１つまたは複数の可変領域は、ヒトまたは有効なヒトであってよい。例えば、１つまたは複数のＣＤＲは、ヒト、例えばＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、ＨＣ ＣＤＲ３、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、およびＬＣ ＣＤＲ３であってよい。軽鎖ＣＤＲの各々は、ヒトであってよい。ＨＣ ＣＤＲ３は、ヒトであってよい。１つまたは複数のフレームワーク領域は、ヒト、例えばＨＣもしくはＬＣのＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、およびＦＲ４であってよい。１つの実施形態では、全フレームワーク領域は、例えばヒト体細胞、例えば免疫グロブリンを生成する造血細胞もしくは非造血細胞由来のヒトである。１つの実施形態では、ヒト配列は、例えば生殖細胞系核酸によってコードされる生殖細胞系配列である。１つまたは複数の定常領域は、ヒトまたは有効なヒトであってよい。また別の実施形態では、少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９２、９５、もしくは９８％のフレームワーク領域（例、集合的にＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３、または集合的にＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、およびＦＲ４）または全抗体はヒトまたは有効なヒトであってよい。例えば、ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３は集合的にヒト生殖細胞系ＶＨセグメントによってコードされるヒト配列と７０、７５、８０、８５、９０、９２、９５、９８、もしくは９９％同一であってよい。
抗体の全部または一部は、免疫グロブリン遺伝子もしくはそのセグメンチによってコードされてよい。代表的なヒト免疫グロブリン遺伝子には、κ、λ、α（ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）、γ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、δ、εおよびμ定常領域、ならびに無数の免疫グロブリン可変領域遺伝子が含まれる。全長免疫グロブリン「軽鎖」（約２５Ｋｄもしくは２１４アミノ酸）は、ＮＨ２末端（約１１０アミノ酸）では可変領域遺伝子によって、ＣＯＯＨ末端ではκもしくはλ定常領域遺伝子によってコードされる。全長免疫グロブリン「重鎖」（約５０Ｋｄもしくは４４６アミノ酸）は、同様に可変領域遺伝子（約１１６アミノ酸）および他の上述した定常領域遺伝子の１つ、例えばγ（約３３０アミノ酸をコードする）によってコードされる。
本明細書で使用する用語の全長抗体の「抗原結合フラグメント」（もしくは単純に「抗体部分」、または「フラグメント」）は、対象の標的へ特異的に結合する能力を維持している全長抗体の１つまたは複数のフラグメントを意味する。全長抗体の用語「抗原結合フラグメント」の中に含まれる結合フラグメントの例には、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価フラグメントであるＦａｂフラグメント；（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメントであるＦ（ａｂ’）２フラグメント；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント；（ｉｖ）抗体の一本鎖のＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖフラグメント、（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ， （１９８９） Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４−５４６）；および（ｖｉ）機能性を維持している単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が含まれる。さらに、Ｆｖフラグメントの２つのドメインであるＶＬおよびＶＨは別個の遺伝子によってコードされるが、それらは、組換え法を用いて、その中でＶＬおよびＶＨ領域が対になって一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる一本鎖分子を形成する一本鎖タンパク質にできる合成リンカーによって結合することができる。例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ． （１９８８） Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３−４２６；およびＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ． （１９８８） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｄ． ＵＳＡ ８５：５８７９−５８８３を参照。
抗体フラグメントは、当業者には知られている従来型技術を含む任意の適切な技術を用いて入手できる。用語「単一特異性抗体」は、特定の標的、例えばエピトープに対する単一結合特異性および親和性を示す抗体を意味する。この用語には、本明細書で使用するように単一分子組成物の抗体もしくはそのフラグメントの調製物を意味する、「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」が含まれる。本明細書で使用する「アイソタイプ」は、重鎖定常領域遺伝子によってコードされる抗体クラス（例、ＩｇＭまたはＩｇＧ１）を意味する。
「有効なヒト」免疫グロブリン可変領域は、その免疫グロブリン可変領域が正常なヒトにおいて免疫原性応答を誘発しないように、十分な数のヒトフレームワークアミノ酸位置を含んでいる免疫グロブリン可変領域である。「有効なヒト」抗体は、その抗体が正常なヒトにおいて免疫原性応答を誘発しないように、十分な数のヒトアミノ酸位置を含んでいる抗体である。
「ヒト化」免疫グロブリン可変領域は、その免疫グロブリン可変領域が正常なヒトにおいて免疫原性応答を誘発しないように、十分な数のヒトフレームワークアミノ酸位置を含むように修飾されている免疫グロブリン可変領域である。「ヒト化」免疫グロブリンの説明には、例えば米国特許第６，４０７，２１３号および第５，６９３，７６２号が含まれる。
本明細書で使用する「結合親和性」は、見かけの結合定数もしくはＫａを意味する。Ｋａは、解離定数（Ｋｄ）の逆数である。結合タンパク質は、例えば、特定の標的分子に対して１０−５、１０−６、１０−７もしくは１０−８Ｍ未満のＫｄを有することがある。第２標的に比して第１標的に対する結合リガンドのより高い親和性結合は、第２標的への結合についてのＫａ（もしくは数値によるＫｄ）より第１標的に対する結合についてより高いＫａ（もしくはより小さな数値のＫｄ）によって示すことができる。そのような場合には、結合タンパク質は、第２標的（例、ｈＫ１以外のタンパク質、例えば、血清アルブミン、ラミニン、またはグロビン）に比較して第１標的（例、ｈＫ１）に対する特異性を有する。結合親和性（例えば、特異性もしくは他の比較）における差は、少なくとも１．５、２、３、４、５、１０、１５、２０、５０、７０、８０、１００、５００、１０００、または１０５倍であってよい。
結合親和性は、平衡透析、平衡結合、ゲル濾過、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴、または分光法（例、蛍光アッセイを用いる）を含む様々な方法によって決定できる。結合親和性を評価するために代表的な条件は、ｐＨ７．２で３０℃のＰＢＳ（リン酸緩衝食塩液）中である。これらの技術を使用すると、結合タンパク質（または標的）濃度の関数として結合した、および遊離している結合タンパク質の濃度を測定することができる。結合した結合タンパク質（［Ｂｏｕｎｄ］）の濃度は、遊離している結合タンパク質（「Ｆｒｅｅ」）の濃度および標的上の結合タンパク質に対する結合部位の濃度に関連しており、このとき（Ｎ）は以下の方程式による標的分子１個当たりの結合部位の数である：
［Ｂｏｕｎｄ］＝Ｎ・［Ｆｒｅｅ］／（（１／Ｋａ）＋［Ｆｒｅｅ］）
Ｋａを正確に決定することは必ずしも必要というわけではなく、ときどきは例えばＥＬＩＳＡもしくはＦＡＣＳ分析などの方法を用いて決定される親和性の定量的測定値を入手すれば十分であり、これはＫａに比例しているので、そこで親和性の定性的測定値を入手するため、または例えばインビトロもしくはインビボアッセイのような機能的アッセイによって親和性の推測を入手するために、例えば２倍以上のようなより高い親和性が必要かどうかを決定する際などの比較のために使用できよう。
「単離された組成物」は、それから単離された組成物を入手できる天然サンプルの少なくとも１つの構成成分の少なくとも９０％から除去された組成物を意味する。人工的または自然に生成された組成物は、当該の種もしくは種の集団が重量／重量ベースで少なくとも５、１０、２５、５０、７５、８０、９０、９２、９５、９８、もしくは９９％純粋である場合に「少なくとも」所定の純粋度の「組成物」である可能性がある。
「エピトープ」は、結合タンパク質（例、Ｆａｂもしくは全長抗体などの抗体）によって結合されている標的化合物上の部位を意味する。標的化合物がタンパク質である場合は、その部位は完全にアミノ酸化合物から、完全にタンパク質のアミノ酸（例、グリコシル成分）の化学修飾から、またはそれらの組み合わせから構成されてよい。重複するエピトープには、少なくとも１つの共通アミノ酸残基が含まれる。
２つの配列間の「相同性」または「配列同一性」（これらの用語は本明細書では互換的に使用する）は、以下のとおりに実施される。配列は、最適比較のために整列させられる（例、第１および第２アミノ酸の一方もしくは両方にギャップを挿入できる、または最適アラインメントのための核酸配列および非相同配列は比較のためには無視することができる）。最適アラインメントは、ギャップペナルティ１２、ギャップ伸長ペナルティ４、およびフレームシフトギャップペナルティ５を用いるＢｌｏｓｓｕｍ ６２スコアリングマトリックスを備えるＧＣＧソフトウエアパッケージ内のＧＡＰプログラムを用いた場合の最高スコアとして決定される。対応するアミノ酸位置もしくはヌクレオチド位置のアミノ酸残基もしくはヌクレオチドが次に比較される。第１配列内の位置が第２配列内の対応する位置と同一のアミノ酸残基もしくはヌクレオチドによって占められている場合は、その分子はその位置で同一である（本明細書で使用するアミノ酸もしくは核酸の「同一性」は、アミノ酸もしくは核酸の「相同性」と同等である）。２つの配列間の同一性率は、それらの配列によって共有される同一位置の数の関数である。
好ましい実施形態では、比較のためにアラインメントされる参照配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、いっそうより好ましくは少なくとも６０％、およびいっそうより好ましくは少なくとも７０％、８０％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、または１００％である。例えば、参照配列は、免疫グロブリン可変ドメイン配列の長さであってよい。
本明細書で使用する用語「実質的に同一」（もしくは「実質的に相同」）は、第１および第２アミノ酸もしくは核酸配列が、例えば結合活性、結合優先性、もしくは生物活性のような類似の活性を有する（もしくは類似の活性を有するタンパク質をコードする）ように、第２アミノ酸もしくは核酸配列に対する十分な数の同一もしくは同等（例えば、類似の側鎖、例えば保存されたアミノ酸置換を備える）のアミノ酸残基もしくはヌクレオチドを含有するアミノ酸もしくは核酸配列を意味する。抗体の場合は、第２抗体は、同一抗原に対する同一特異性を有し、少なくとも５０％の親和性を有する。
本明細書に開示した配列に対して類似もしくは相同（例、少なくとも約８５％の配列同一性）である配列もまた、本出願の一部である。一部の実施形態では、配列同一性は、約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上であってよい。さらに、実質的同一性は、核酸区域が選択的ハイブリダイゼーション条件（例、高ストリンジェントのハイブリダイゼーション条件）下で相補鎖へハイブリダイズする場合に存在する。該核酸は、全細胞中、細胞溶解液中に存在してよい、または部分精製もしくは実質的純粋形で存在してよい。
本明細書で使用する用語「低ストリンジェンシー、中ストリンジェンシー、高ストリンジェンシー、または超高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズする」は、ハイブリダイゼーションおよび洗浄についての条件を説明している。ハイブリダイゼーション反応を実施するための指針は、参照して組み込まれるＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ， Ｎ．Ｙ． （１９８９）， ６．３．１−６．３．６の中に見いだすことができる。その参考文献には水性法および非水性法が記載されており、どちらも使用できる。本明細書で言及した特定のハイブリダイゼーション条件は、以下のとおりである：（１）低ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件は、約４５℃の６×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）中に入れ、次に少なくとも５０℃の０．２×ＳＳＣ、０．１％ ＳＤＳ中で２回洗浄する（洗浄温度は、低ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件については５５℃まで上昇させることができる）；（２）中ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件では、約４５℃の６×ＳＳＣ中に入れ、次に６０℃の０．２×ＳＳＣ、０．１％ ＳＤＳ中で１または複数回洗浄する；（３）高ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件では、約４５℃の６×ＳＳＣ中に入れ、次に６５℃の０．２×ＳＳＣ、０．１％ ＳＤＳ中で１または複数回洗浄する；および（４）超高ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件は、約６５℃の０．５％リン酸ナトリウム、７％ ＳＤＳ中に入れ、次に６５℃の０．２×ＳＳＣ、１％ ＳＤＳ中で１または複数回洗浄する。超高ストリンジェンシー条件（４）が好ましい条件であり、他に特に規定しない限り使用すべき条件である。本発明は、低、中、高、もしくは超高ストリンジェンシー条件で本明細書に記載の核酸またはその補体、例えば本明細書に記載した結合タンパク質をコードする核酸へハイブリダイズする核酸を含んでいる。該核酸は、参照核酸の長さと同一長さ、または３０、２０、もしくは１０％内の長さであってよい。該核酸は、免疫グロブリン可変ドメイン配列をコードする領域に対応することができる。
ｈＫ１結合タンパク質は、タンパク質の機能に実質的な作用を及ぼさない、本明細書に記載した結合タンパク質に比較して突然変異（例、保存的もしくは非必須アミノ酸置換）を有していてよい。特定の置換が許容されるかどうか、例えば結合活性などの生物学的特性に有害な影響を及ぼさないかどうかは、例えばＢｏｗｉｅ， ｅｔ ａｌ． （１９９０） Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４７：１３０６−１３１０の方法を用いて予測できる。
「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が類似の側鎖を有するアミノ酸残基と置換されているアミノ酸置換である。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当分野において規定されている。これらのファミリーには、塩基性側鎖（例、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β分岐側鎖（例、トレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖（例、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を備えるアミノ酸が含まれる。多数のフレームワークおよびＣＤＲアミノ酸残基が１つまたは複数の保存的置換を含むことが可能である。
バイオポリマーのためのコンセンサス配列は、様々なアミノ酸間で変動してよい位置を含んでいてよい。例えば、そのような状況における記号「Ｘ」は、一般に任意のアミノ酸（例えば、２０個の天然アミノ酸のいずれか、または１９の非システインアミノ酸のいずれか）を意味する。その他の許容されるアミノ酸は、例えば、括弧およびスラッシュを用いて表示することもできる。例えば、「（Ａ／Ｗ／Ｆ／Ｎ／Ｑ）」は、アラニン、トリプトファン、フェニルアラニン、アスパラギン、およびグルタミンがその特定位置で許容されることを意味している。
「非必須」アミノ酸残基は、結合物質、例えば抗体の野生型範囲から、生物活性を廃棄せずに、もしくはより好ましくは生物活性を実質的に変化させずに変化させることができる残基であり、他方「必須」アミノ酸残基はそのような変化を生じさせる。
用語「ポリペプチド」もしくは「ペプチド」（互換的に使用できる）は、ペプチド結合によって連結された３個以上のアミノ酸、例えば３〜６０、もしくは３０〜３００、または３００超のアミノ酸長のポリマーを意味する。ポリペプチドは、１つまたは複数の非天然アミノ酸を含んでいてよい。典型的には、ポリペプチドは天然アミノ酸しか含んでいない。「タンパク質」は、１つまたは複数のポリペプチド鎖を含んでいてよい。したがって、用語「タンパク質」は、ポリペプチドを含んでいる。タンパク質もしくはポリペプチドは、１つまたは複数の修飾、例えば、グリコシル化、アミド化、リン酸化などをさらに含んでいてよい。
用語「同族基質」は、その天然型変異体（例、スプライス変異体、天然型突然変異体、およびアイソフォーム）を含む、ｈＫ１の天然型基質を意味する。
本明細書で使用する用語「共通コドン」は、タンパク質を表現するために使用する細胞の種の配列内の特定アミノ酸を表している最も共通するコドンを意味する。「低共通コドン」は、特定種では頻回に発生するが共通コドンではないコドンである。共通コドンおよび低共通コドン以外の全コドンは、「非共通コドン」である。
「ｈＫ１関連性炎症障害」は、少なくとも一部にはｈＫ１、例えばｈＫ１のプロテアーゼ活性によって媒介される炎症反応を特徴とする障害を意味する。そのような障害については、ｈＫ１活性の減少は減少した炎症反応を生じさせる。代表的なｈＫ１関連性炎症障害には、喘息（例、アレルギー性および非アレルギー性喘息）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、多発性硬化症、乾癬、慢性関節リウマチ、変形性関節症、鼻炎、副鼻腔炎、炎症性腸疾患（クローン病および潰瘍性大腸炎など）、免疫媒介性糖尿病、急性膵炎および間質性膀胱炎が含まれる。
統計的有意性は、当技術分野において知られている任意の方法によって決定できる。代表的な統計的検定には、スチューデント（Ｓｔｕｄｅｎｔ）のＴ検定、マン・ホイットニー（Ｍａｎｎ Ｗｈｉｔｎｅｙ）Ｕノンパラメトリック検定、およびウィルコクソン（Ｗｉｌｃｏｘｏｎ）ノンパラメトリック統計的検定が含まれる。一部の統計的有意な関係は、０．０５もしくは０．０２未満のＰ値を有する。特定の結合タンパク質は、例えば、特異性、結合、または生物活性において、統計的有意である差を示す（例、Ｐ値＜０．０５もしくは０．０２）。用語「誘導する」、「阻害する」、「強化する」、「上昇させる」、「増加させる」、「減少させる」などは、例えば、２つの状態間の識別可能な定性的もしくは定量的差を意味する、そして２つの状態間の例えば統計的有意差のような差に関する。
他に特別に規定しない限り、本明細書で使用する全部の技術用語および科学用語は、本発明の属する分野の当業者によって一般に理解される意味と同一の意味を有する。本発明の実践または試験では本明細書に記載したものに類似もしくは同等である方法および材料を使用できるが、以下では適合する方法および材料について記載する。本明細書で言及する全刊行物、特許出願、特許、およびその他の参考文献は、全体として参照して組み込まれる。
ｈＫ１
代表的なｈＫ１タンパク質は次の配列を含んでいる：
＞ｓｐ｜Ｐ０６８７０｜ＫＬＫ１＿ＨＵＭＡＮカリクレイン１前駆体（ＥＣ３．４．２１．３５）（組織カリクレイン）（腎臓／膵臓／唾液腺カリクレイン）−ホモサピエンス（ヒト）。
Figure 2008515774
 典型的には、このタンパク質は成熟した加工されたタンパク質、例えば約２５〜２６２アミノ酸を含むタンパク質、またはそのフラグメント、例えばタンパク質分解的に活性なそのフラグメントである。
ｈＫ１タンパク質は、以下の特徴のうちの１つまたは複数を含んでいてよい。
Figure 2008515774
 ｈＫ１タンパク質は次の代表的な変異体もさらに含んでいてよい：
Figure 2008515774
 ｈＫ１のための代表的な基質には、プロインスリン、低密度リポタンパク質、心房性ナトリウム利尿因子の前駆体、プロレニン、血管作用性小腸ペプチド、プロコラゲナーゼ、およびアンジオテンシノーゲンが含まれる。本明細書に記載したｈＫ１結合タンパク質は、そのような基質を変調させるため、例えばそのような基質のタンパク質分解性開裂を減少させるために使用できる。
ｈＫ１へ結合する抗体は、例えば動物を免疫するための抗原として、または組換え抗体のライブラリーをスクリーニングするための標的としてｈＫ１を用いて入手できる。ｈＫ１のペプチドおよびフラグメントもまた使用できる。
ディスプレイライブラリー
１つの実施形態では、ｈＫ１へ結合するタンパク質を同定するためにディスプレイライブラリーが使用される。ディスプレイライブラリーは、実体の集団である；各実体は、入手可能なタンパク質成分（例、ＦａｂもしくはｓｃＦＶ）およびそのタンパク質成分をコードもしくは同定する回収可能な成分（例、核酸）を含んでいる。タンパク質成分は、任意の長さ、例えば３アミノ酸から３００超アミノ酸であってよい。選択では、ライブラリーの各メンバーのタンパク質成分はｈＫ１へ接触させられ、タンパク質成分がｈＫ１へ結合する場合は、ディスプレイライブラリーメンバーが、例えば支持体上への保持によって同定される。タンパク質成分は、１つまたは複数の免疫グロブリン可変ドメインもしくはまた別のドメインの変異体を含んでいてよい。ディスプレイのために免疫グロブリンドメインを使用する方法を以下で説明する（例えば、「抗体ディスプレイライブラリー」を参照）。
保持されたディスプレイライブラリーメンバーは、支持体から回収され、分析される。分析は、増幅および引き続いて類似もしくは異なる条件下での選択を含んでいてよい。例えば、ポジティブおよびネガティブ選択法を変化させることができる。分析は、タンパク質成分のアミノ酸配列の決定および詳細な特性解析のためのタンパク質成分の精製も含んでいてよい。
ディスプレイライブラリーのためには、様々なフォーマットを使用できる。例には以下のものが含まれる。
ファージディスプレイ。１つのフォーマットは、ウイルス、特別にはバクテリオファージを利用する。このフォーマットは、「ファージディスプレイ」と呼ばれている。タンパク質成分は、典型的にはバクテリオファージ外殻タンパク質へ共有結合している。この結合は、外殻タンパク質へ融合したタンパク質成分をコードする核酸の翻訳の結果として生じる。この結合は、柔軟性ペプチドリンカー、プロテアーゼ部位、または終止コドンの抑制の結果として組み込まれたアミノ酸を含んでいてよい。ファージディスプレイは、例えば、米国特許第５，２２３，４０９号；Ｓｍｉｔｈ （１９８５） Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２８：１３１５−１３１７；ＷＯ９２／１８６１９；ＷＯ９１／１７２７１；ＷＯ９２／２０７９１；ＷＯ９２／１５６７９；ＷＯ９３／０１２８８；ＷＯ９２／０１０４７；ＷＯ９２／０９６９０；ＷＯ９０／０２８０９；ｄｅ Ｈａａｒｄ ｅｔ ａｌ． （１９９９） Ｊ Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ ２７４：１８２１８−３０；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ． （１９９８） Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ４：１−２０；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ． （２０００） Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｔｏｄａｙ ２：３７１−８；Ｆｕｃｈｓ ｅｔ ａｌ． （１９９１） Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：１３７０−１３７２；Ｈａｙ ｅｔ ａｌ． （１９９２） Ｈｕｍ Ａｎｔｉｂｏｄ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ３：８１−８５；Ｈｕｓｅ ｅｔ ａｌ． （１９８９） Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：１２７５−１２８１；Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ ｅｔ ａｌ． （１９９３） ＥＭＢＯ Ｊ １２：７２５−７３４；Ｈａｗｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ． （１９９２） Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２２６：８８９−８９６；Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ． （１９９１） Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４−６２８；Ｇｒａｍ ｅｔ ａｌ． （１９９２） ＰＮＡＳ ８９：３５７６−３５８０；Ｇａｒｒａｒｄ ｅｔ ａｌ． （１９９１） Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：１３７３−１３７７；Ｒｅｂａｒ ｅｔ ａｌ． （１９９６） Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ． ２６７：１２９−４９；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ． （１９９１） Ｎｕｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ １９：４１３３−４１３７；およびＢａｒｂａｓ ｅｔ ａｌ． （１９９１） ＰＮＡＳ ８８：７９７８−７９８２に記載されている。
ファージディスプレイシステムは、繊維状ファージ（ファージｆｌ、ｆｄ、およびＭ１３）ならびに他のバクテリオファージ（例、Ｔ７バクテリオファージおよびλ形ファージ；例えば、Ｓａｎｔｉｎｉ （１９９８） Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２８２：１２５−１３５；Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ． （１９９６） Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｓ ６：１−６；Ｈｏｕｓｈｍｅｔ ａｌ． （１９９９） Ａｎａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ ２６８：３６３−３７０を参照）のために開発されてきた。繊維状ファージディスプレイシステムは、典型的には遺伝子ＩＩＩタンパク質などの小さな外殻タンパク質および遺伝子ＶＩＩＩタンパク質などの大きな外殻タンパク質への融合を使用するが、遺伝子ＶＩタンパク質、遺伝子ＶＩＩタンパク質、遺伝子ＩＸタンパク質などの他の外殻タンパク質、もしくはそれらのドメインへの融合もまた使用できる（例えば、ＷＯ００／７１６９４を参照）。１つの実施形態では、融合は遺伝子ＩＩＩタンパク質の１ドメイン、例えばアンカードメインもしくは「断端」へである（遺伝子ＩＩＩタンパク質のアンカードメインの説明については、例えば、米国特許第５，６５８，７２７号を参照）。非ペプチド結合、例えば非共有結合もしくは非ペプチド共有結合を用いて外殻へ提示されているタンパク質へ物理的に結び付けることもまた可能である。例えば、ジスルフィド結合および／またはｃ−ｆｏｓおよびｃ−ｊｕｎコイルドコイルを物理的結合のために使用することができる（例えば、Ｃｒａｍｅｒｉ ｅｔ ａｌ． （１９９３） Ｇｅｎｅ １３７：６９およびＷＯ０１／０５９５０参照）。
タンパク質成分を提示するバクテリオファージは、増殖させ、標準ファージ準備法、例えば増殖培地からのＰＥＧ沈降法を用いて採取することができる。個々のディスプレイファージの選択後には、選択されたタンパク質成分をコードする核酸を、増幅させた後に、選択されたファージで感染させた細胞もしくはファージ自体から単離することができる。個々のコロニーもしくはプラークを取り上げ、核酸を単離およびシーケンシングすることができる。
その他のディスプレイ法フォーマット。その他のディスプレイ法フォーマットには、セルベースディスプレイ法（例えば、ＷＯ０３／０２９４５６を参照）、タンパク質−核酸融合法（例えば、米国特許第６，２０７，４４６号を参照）、およびリボソームディスプレイ法（例えば、Ｍａｔｔｈｅａｋｉｓ ｅｔ ａｌ． （１９９４） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ ＵＳＡ ９１：９０２２ ａｎｄ Ｈａｎｅｓ ｅｔ ａｌ． （２０００） Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． １８：１２８７−９２；Ｈａｎｅｓ ｅｔ ａｌ． （２０００） Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ． ３２８：４０４−３０；およびＳｃｈａｆｆｉｔｚｅｌ ｅｔ ａｌ． （１９９９） Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ． ２３１（１−２）：１１９−３５を参照）が含まれる。
エピトープ特異的結合タンパク質。ディスプレイ法は、結合タンパク質、例えば、標的の特定のエピトープへ結合する抗体を入手するためにも使用できる。エピトープは、「立体配座」または「逐次」に分類できる。立体配座エピトープは、アミノ酸が実質的に配列内で離れている（例えば、少なくとも１、２、４、６、もしくは１０アミノ酸離れている）にもかかわらず、適正に折り畳まれた標的内で規定の相対方向付けを有するアミノ酸残基を含んでいる。逐次エピトープは、タンパク質の折り畳み状態（例えば、天然または折り畳まれていない）にかかわらず、抗体に結合する短い部分のポリペプチド鎖を含んでいる。立体配座エピトープのための結合タンパク質は、例えば特定エピトープが欠如している、またはエピトープ内で、例えばアラニンにより突然変異している競合する非標的分子を用いることによって同定することができる。そのような非標的分子は、以下で説明するようにネガティブ選択法において、ディスプレイライブラリーを標的へ結合させる場合は競合分子として、または例えば標的に対して特異的ではないディスプレイライブラリーメンバーを解離させる洗浄液中において捕捉するための事前溶出剤として使用することができる。また別の実施では、エピトープ特異的結合タンパク質は、標的分子上で当該のエピトープへ結合する競合結合タンパク質を用いてディスプレイライブラリーメンバーを溶出することによって同定される。逐次エピトープに結合する結合タンパク質は、例えば、標的タンパク質内で見いだされるアミノ酸配列を有する短鎖ペプチドを用いて選択できる。立体配座エピトープへ結合する結合タンパク質は、しばしば、立体配座エピトープ内に含まれるアミノ酸の一部を含有する１つまたは別のペプチドへ弱く結合する。そこで、極めて低ストリンジェンシー条件下でペプチドへの結合について選択し、次に折り畳まれた標的タンパク質への結合について選択できる。
親和性成熟。１つの実施形態では、標的に結合する結合タンパク質は、修飾された結合タンパク質のプールを提供するために、例えば突然変異誘発によって修飾される。修飾された結合タンパク質は、次に変化した機能特性（例えば、改良された結合、改良された安定性、インビボでの延長された安定性）を有する１つまたは複数の変化した結合タンパク質を同定するために評価される。１つの実施では、ディスプレイライブラリー技術は、修飾された結合タンパク質のプールを選択またはスクリーニングするために使用される。より高度の親和性結合タンパク質は、次に高ストリンジェンシーもしくはより競合的結合および洗浄条件を使用することによって、第２ライブラリーから同定される。その他のスクリーニング技術もまた使用できる。
一部の実施では、突然変異誘発は、知られている、または結合形面であると思われる領域が標的とされる。例えば、同定された結合タンパク質が抗体である場合、突然変異誘発は、本明細書に記載した重鎖もしくは軽鎖のＣＤＲ領域に方向付けることができる。さらに、突然変異誘発は、ＣＤＲに近い、もしくは隣接するフレームワーク領域、例えば特にＣＤＲ接合部の１０、５、もしくは３アミノ酸内のフレームワーク領域に方向付けることができる。抗体の場合は、突然変異誘発は、段階的改善を作製するために、１つもしくは数個のＣＤＲに限定することもできる。
１つの実施形態では、突然変異誘発は、１つまたは複数の生殖細胞系配列により類似する抗体を作製するために使用される。１つの代表的な生殖細胞化（ｇｅｒｍｌｉｎｉｎｇ）法には、単離抗体の配列に類似する（例えば、特定データベース内で最も類似する）１つまたは複数の生殖細胞系配列を同定する工程を含んでいてよい。次に突然変異（アミノ酸レベルでの）を付加的に、組み合わせて、またはその両方で単離抗体に作製することができる。例えば、一部もしくは全部の可能性のある生殖細胞系突然変異をコードする配列を含む核酸ライブラリーが作製される。突然変異した抗体は、次に、例えば単離抗体に比較して１つまたは複数の追加の生殖細胞系残基を有し、依然として有用である（例、機能的活性を有する）抗体を同定するために評価される。１つの実施形態では、多数の生殖細胞系残基ができる限り単離抗体内へ導入される。
１つの実施形態では、突然変異誘発は１つまたは複数の生殖細胞系残基を置換する、またはＣＤＲ領域内へ挿入するために使用される。例えば、生殖細胞系ＣＤＲ残基は、修飾される可変領域に類似する（例えば、最も類似する）生殖細胞系配列由来であってよい。突然変異誘発後、抗体の活性（例、結合もしくは他の機能的活性）は、生殖細胞系残基が忍容されるかどうかを決定するために評価できる。類似の突然変異誘発は、フレームワーク領域内で実施することができる。
生殖細胞系配列の選択は、様々な方法で実施できる。例えば、生殖細胞系配列は、それが選択性もしくは類似性の規定基準、例えば少なくとも所定の同一性率、例えば少なくとも７５、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、もしくは９９．５％の同一性を満たすかどうかで選択できる。この選択は、少なくとも２、３、５、もしくは１０の生殖細胞系配列を用いて実施できる。ＣＤＲ１およびＣＤＲ２の場合には、類似の生殖細胞系配列を同定する工程は、１つのそのような配列を選択する工程を含んでいてよい。ＣＤＲ３の場合には、類似の生殖細胞系配列を同定する工程は、１つのそのような配列を選択する工程を含んでいてよいが、アミノ末端部分およびカルボキシ末端部分に個別に寄与する２つの生殖細胞系配列を用いる工程を含むこともできる。他の実施では、２つまたは３つ以上の生殖細胞系配列が、コンセンサス配列を形成するために使用される。
１つの実施形態では、特定の参照可変ドメイン配列、例えば本明細書に記載した配列に関して、関連する可変ドメイン配列は、参照ＣＤＲ配列内の残基、ヒト生殖細胞系配列（すなわち、ヒト生殖細胞系核酸によってコードされるアミノ酸配列）内の対応する位置で残基に同一である残基である、参照ＣＤＲ配列内の残基と同一ではないＣＤＲアミノ酸位置の少なくとも３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、９５もしくは１００％を有する。
１つの実施形態では、特定の参照可変ドメイン配列、例えば本明細書に記載した配列に関して、関連する可変ドメイン配列は、ヒト生殖細胞系配列、例えば参照可変ドメイン配列に関連する生殖細胞系配列由来のＦＲ配列と同一であるＦＲ領域の少なくとも３０、５０、６０、７０、８０、９０もしくは１００％を有する。
したがって、所定の当該抗体と類似する活性を有するが、１つまたは複数の生殖細胞系配列、特別には１つまたは複数のヒト生殖細胞系配列により類似する抗体を単離することが可能である。例えば、抗体は、ＣＤＲ以外の領域（例、フレームワーク領域）内の生殖細胞系配列に対して少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、９９．５％同一であってよい。さらに抗体は、ＣＤＲ領域内で少なくとも１、２、３、４、もしくは５つの生殖細胞系残基を含むことができ、生殖細胞系残基は修飾される可変領域に類似する（例、最も類似する）生殖細胞系配列由来である。主要な当該の生殖細胞系配列は、ヒト生殖細胞系配列である。抗体の活性（例、結合活性）は、元の抗体のある係数、または１００、１０、５、２、０．５、０．１、および０．００１倍以内であってよい。代表的な生殖細胞系配列には、ＶＫＩ−Ｏ２、ＶＬ２−１、ＶＫＩＩＩ−Ｌ２：：ＪＫ２、ｖｇ３−２３、Ｖ３−２３：：ＪＨ４、およびＶ３−２３：：ＪＫ６が含まれる。
一部の代表的な突然変異誘発法には、誤りがちな（ｅｒｒｏｒ−ｐｒｏｎｅ）ＰＣＲ（Ｌｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ． （１９８９） Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ １：１１−１５）、組換え（例えば、ＵＳＳＮ １０／２７９，６３３参照）、ランダム開裂を用いるＤＮＡシャッフリング（Ｓｔｅｍｍｅｒ （１９９４） Ｎａｔｕｒｅ ３８９−３９１；ｔｅｒｍｅｄ “ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ”）、ＲＡＣＨＩＴＴ（商標）（Ｃｏｃｏ ｅｔ ａｌ． （２００１） Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ． １９：３５４）、特定部位突然変異誘発（Ｚｏｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ． （１９８７） Ｎｕｃｌ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ １０：６４８７−６５０４）、カセット突然変異誘発（Ｒｅｉｄｈａａｒ−Ｏｌｓｏｎ （１９９１） Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ． ２０８：５６４−５８６）および変性オリゴヌクレオチドの組み込み（Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ ｅｔ ａｌ． （１９９４） ＥＭＢＯ Ｊ １３：３２４５）が含まれる。
親和性成熟の１つの例では、本明細書に記載した方法は、最初にディスプレイライブラリーから標的に対する少なくとも最小結合特異性もしくは最小活性、例えば１ｎＭ、１０ｎＭ、または１００ｎＭ未満の結合に対する平衡解離定数を備えるｈＫ１に結合する結合タンパク質を同定するために使用される。最初に同定された結合タンパク質をコードする核酸配列は、変異を導入するため、例えば最初の結合タンパク質に比較して増強された特性（例えば、結合親和性、動態、もしくは安定性）を有する第２結合タンパク質を同定するためのテンプレート核酸として使用される。または、１つまたは複数のＣＤＲのアミノ酸配列は、単離配列および多数の隣接配列をコードする核酸を含む核酸ライブラリーを設計するためのガイドとして使用することができる。そのような多様化された核酸は、最初の単離体を含有するディスプレイベクター内へ導入することができ、改良された変異体がそのライブラリーから選択される。
オフレート選択。緩徐な解離速度は、特にポリペプチドとそれらの標的との相互作用に関して、高親和性の予測因子である可能性があるので、本明細書に記載した方法は、標的への結合相互作用について所望の動態解離速度（すなわち減少した）を備える結合タンパク質を単離するために使用できる。
ディスプレイライブラリーから緩徐に解離する結合タンパク質を選択するためには、ライブラリーが固定化標的に接触させられる。固定化標的は、次に、非特異的または弱く結合した生体分子を除去する第１溶液を用いて洗浄される。次に、固定化標的は、飽和量の遊離標的、例えば微粒子に付着していない標的の複製物を含む第２溶液を用いて溶出される。この遊離標的は、標的から解離する生体分子に結合する。再結合は、はるかに低濃度の固定化標的に比較して飽和量の遊離標的によって効果的に防止される。
第２溶液は、実質的に生理学的である、またはストリンジェントである溶液条件を有することができる。典型的には、第２溶液の溶液条件は、第１溶液の溶液条件と同一である。第２溶液の分画は、初期の分画を後期の分画から識別するために時間的順序で収集される。後期の分画は、初期の分画内の生体分子よりも標的から緩徐な速度で解離する生体分子を含んでいる。
さらにまた、長時間のインキュベーション後にさえ標的に結合したままであるディスプレイライブラリーメンバーを回収することもまた可能である。これらは、カオトロピック条件を用いて解離させることができる、または標的に付着したままで増幅させることができる。例えば、標的に結合したファージを細菌細胞に接触させることができる。
特異性についての選択およびスクリーニング。ディスプレイライブラリーの状況における「選択」は、ディスプレイライブラリーの多数のメンバーが標的に接触させられ、結合したメンバーが回収および増殖させられるプロセスを意味する。選択は、極めて多数のメンバー、例えば１０１０個を超えるメンバーを有するライブラリーからであってよい。ディスプレイライブラリーの状況における「スクリーニング」は、そのライブラリーの単離されたメンバーが１つずつ標的への結合について試験されるプロセスを意味する。自動法を通して、数千もの候補を高度に平行のプロセスにおいてスクリーニングすることができる。本明細書に記載したディスプレイライブラリー選択方法は、非標的分子へ結合するディスプレイライブラリーメンバーを廃棄する選択プロセスを含んでいてよい。
例えばｈＫ１結合タンパク質抗体について非標的分子の例には、例えばｈＫ１以外のプロテアーゼ、例えばｈＫ１以外のカリクレイン、例えばｈＫ２、ｈＫ３、ｈＫ４、ｈＫ５、ｈＫ６、ｈＫ７、ｈＫ８、ｈＫ９、ｈＫ１０、ｈＫ１１、ｈＫ１２、ｈＫ１３、ｈＫ１４、もしくはｈＫ１５が含まれる。有用なｈＫ１結合抗体は、１サブセットのカリクレインに対して特異的であってよく、例えばそれらはそのうちの少なくとも１つがｈＫ１である複数のカリクレインと相互作用することができる。
１つの実施では、いわゆる「ネガティブ選択」工程が標的および関連する非標的分子と関連するが異なる非標的分子とを識別するために使用される。ディスプレイライブラリーもしくはそのプールが非標的分子と接触させられる。非標的に結合しないサンプルのメンバーが収集され、引き続いての標的分子への結合についての選択または引き続いてのネガティブ選択にさえ使用される。ネガティブ選択工程は、標的分子へ結合するライブラリーメンバーを選択する前または後であってよい。
また別の実施では、スクリーニング工程が使用される。ディスプレイライブラリーメンバーが標的分子への結合について単離された後、各単離されたライブラリーメンバーは、それが非標的分子（例、上記に列挙した非標的）へ結合する能力について試験される。例えば、高スループットＥＬＩＳＡスクリーンを使用するとこのデータを入手できる。ＥＬＩＳＡスクリーンは、さらにまた標的への各ライブラリーメンバーの結合についての定量的データを入手するためにも使用できる。非標的および標的結合データは、ｈＫ１へ特異的に結合するライブラリーメンバーを同定するために、（例えば、コンピューターおよびソフトウエアを使用して）比較される。
本明細書に記載したディスプレイライブラリーの選択およびスクリーニング方法は、標的分子上の特定部位へ結合するディスプレイライブラリーメンバーについて選択する選択またはスクリーニングプロセスを含んでいてよい。例えば、本明細書に記載した高濃度の抗体を用いた溶出は、そのような抗体に結合されたエピトープへ結合するファージを選択する。バッファー中でエピトープを認識する競合抗体を用いて、および用いずにＥＬＩＳＡを実施することによってｈＫ１の特定エピトープへ結合するファージについてスクリーニングすることができる。
抗体ディスプレイライブラリー
１つの実施形態では、ディスプレイライブラリーは、タンパク質の多様なプールを表しており、その各々が少なくとも１つおよび典型的には２つの免疫グロブリン可変ドメインを含んでいる。ディスプレイライブラリーは、例えばヒト抗原を認識するヒトまたは有効なヒト抗体を同定するために特に有用である。抗体の定常およびフレームワーク領域はヒトであるので、これらの処置用抗体はそれ自体が抗原として認識されて標的にされるのを回避することができる。定常領域は、ヒト免疫系のエフェクター機能を補充するためにさらに最適化される。インビトロディスプレイ選択プロセスは、正常ヒト免疫系が自己抗原に対する抗体を生成する不能力を乗り越える。
典型的な抗体ディスプレイライブラリーは、ＶＨドメインおよびＶＬドメインを含むタンパク質を提示する。ディスプレイライブラリーは、抗体をＦａｂフラグメント（例えば、２本のポリペプチド鎖を用いて）または一本鎖Ｆｖ（例えば、一本のポリペプチド鎖を用いて）として提示できる。その他のフォーマットもまた使用できる。
Ｆａｂおよびその他のフォーマットの場合におけるように、提示された抗体は、軽鎖もしくは重鎖の一部として定常領域を含んでいてよい。１つの実施形態では、各鎖は、例えばＦａｂの場合におけるように、１つの定常領域を含んでいる。他の実施形態では、追加の定常領域が提示される。
抗体ライブラリーは、多数のプロセスによって構築できる（例えば、ｄｅ Ｈａａｒｄ ｅｔ ａｌ． （１９９９） Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ ２７４：１８２１８−３０；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ． （１９９８） Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ４：１−２０；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ． （２０００） Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｔｏｄａｙ ２１：３７１−８；ＵＳ２００３−０２３２３３３ ａｎｄ ＵＳ２００４−００２９１１３を参照）。さらに、各プロセスの要素は、他のプロセスの要素と結合することができる。これらのプロセスは、単一免疫グロブリンドメイン（例、ＶＨもしくはＶＬ）内へ、または多重免疫グロブリンドメイン（例、ＶＨおよびＶＬ）内へ導入されるように使用できる。変異は、免疫グロブリン可変ドメイン内へ、例えば重鎖および軽鎖可変ドメインの一方および両方のそのような領域を意味するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、およびＦＲ４の１つまたは複数の領域内へ導入することができる。１つの実施形態では、変異は所定の可変ドメインの全３つのＣＤＲ内へ導入される。また別の好ましい実施形態では、変異は、例えば重鎖可変ドメインのＣＤＲ１およびＣＤＲ２内へ導入される。任意の組み合わせが実現可能である。１つのプロセスでは、抗体ライブラリーは、ＣＤＲをコードする多様なオリゴヌクレオチドを、ディスプレイタンパク質もしくはその一部分をコードする核酸の対応する領域内へ挿入する工程によって構築される。オリゴヌクレオチドは、多種多様なサブユニット、例えば単量体ヌクレオチドもしくはトリヌクレオチドを用いることによって合成できる。例えば、Ｋｎａｐｐｉｋ ｅｔ ａｌ． （２０００） Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２９６：５７−８６は、トリヌクレオチド合成法およびオリゴヌクレオチドを受容するための遺伝子組換え制限部位を備えるテンプレートを用いて、オリゴヌクレオチドをコードするＣＤＲを構築する方法について記載している。
また別のプロセスでは、動物、例えば齧歯類が、ｈＫ１を用いて免疫される。動物は、任意でさらに反応を刺激するために抗原をブースト投与される。次に、動物から脾臓細胞が単離され、ＶＨおよび／またはＶＬドメインをコードする核酸が増幅させられ、ディスプレイライブラリー内で発現させるためにクローニングされる。
さらにまた別のプロセスでは、抗体ライブラリーが、ナイーブ生殖細胞系免疫グロブリン遺伝子（例、ヒト遺伝子）から増幅させた核酸から構築される。増幅させた核酸は、ＶＨおよび／またはＶＬドメインをコードする核酸を含んでいる。免疫グロブリンをコードする核酸の起源については、以下で説明する。増幅は、例えば保存された定常領域へアニールするプライマーを用いるＰＣＲ、または他の増幅方法を含んでいてよい。
免疫グロブリンドメインもしくはそのフラグメントをコードする核酸は、例えば、ヒト、霊長類、マウス、ウサギ、ラクダ、もしくは齧歯類の免疫細胞から入手できる。細胞は、特定の特性について選択できる。例えば、ナイーブＢ細胞を含む様々な成熟段階にあるＢ細胞を選択できる。
蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）は、表面結合ＩｇＭ、ＩｇＤ、もしくはＩｇＧ分子を発現するＢ細胞を選別するために使用できる。さらに、様々なアイソタイプのＩｇＧを発現するＢ細胞を単離することができる。ＢおよびＴ細胞は、例えばフィーダー細胞と一緒に培養する工程によって、またはＣＤ４０、ＣＤ４０リガンドもしくはＣＤ２０に対する抗体、ホルボールミリステート酢酸塩、細菌性リポ多糖、コンカナバリンＡ、フィトヘマグルチニンもしくはアメリカヤマゴボウマイトジェンなどのマイトジェンもしくは他の調節試薬を添加することによってインビトロで培養および刺激することができる。
細胞は、免疫障害、例えば全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）、慢性関節リウマチ、血管炎、シェーングレン症候群、全身性硬化症、または抗リン脂質症候群を有する被験体から単離することもできる。被験体は、ヒト、または動物、例えばヒト疾患の動物モデル、もしくは類似の障害を有する動物であってよい。細胞は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を含むトランスジェニック非ヒト動物から単離することができる。
細胞は、体細胞超変異のプログラムを活性化している可能性がある。細胞は、例えば、抗免疫グロブリン、抗ＣＤ４０、および抗ＣＤ３８抗体を用いた処置によって免疫グロブリンの体細胞突然変異誘発を受けるように刺激することができる（例えば、Ｂｅｒｇｔｈｏｒｓｄｏｔｔｉｒ ｅｔ ａｌ． （２００１） Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ． １６６：２２２８を参照）。また別の実施形態では、細胞はナイーブである。
免疫グロブリン可変ドメインをコードする核酸は、以下の代表的方法によって天然レパートリーから単離できる。第一に、ＲＮＡが免疫細胞から単離される。全長（例、キャップ付加）ｍＲＮＡが（例えば、仔ウシ腸ホスファターゼを用いて）分離される。次にキャップはタバコ酸性ピロホスファターゼを用いて除去され、逆転写を使用してｃＤＮＡが生成される。
第１（アンチセンス）鎖の逆転写は、任意の適切なプライマーを用いる任意の方法で実施できる。例えば、ｄｅ Ｈａａｒｄ ｅｔ ａｌ． （１９９９） Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ ２７４：１８２１８−３０を参照されたい。プライマー結合領域は、例えば免疫グロブリンの様々なアイソタイプを逆転写させるために、様々な免疫グロブリン間で一定であってよい。プライマー結合領域は、免疫グロブリンの特定のアイソタイプに特異的であってもよい。典型的には、プライマーは、少なくとも１つのＣＤＲをコードする配列に対して３’である領域に特異的である。また別の実施形態では、ポリ−ｄＴプライマーを使用してもよい（および、重鎖遺伝子にとっては好ましい可能性がある）。
合成配列は、逆転写された鎖の３’末端にライゲートすることができる。合成配列は、逆転写後のＰＣＲ増幅中にフォーワードプライマーを結合するためのプライマー結合部位として使用できる。合成配列の使用は、利用可能な多様性を十分に捕捉するために様々なフォーワードプライマーのプールを使用する必要を回避することができる。
次に可変ドメインをコードする遺伝子が、例えば１つまたは複数のラウンドを用いて増幅させられる。複数回ラウンドが使用される場合は、適合度を増加させるためにネステッドプライマーを使用できる。増幅させた核酸は、次にディスプレイライブラリーベクター内へクローニングされる。
抗体の生成
一部の抗体、例えばＦａｂは、細菌細胞、例えば大腸菌細胞内で生成できる。例えば、Ｆａｂがディスプレイ実体とバクテリオファージタンパク質（もしくはそのフラグメント）との間で抑制可能な終止コドンを含むファージディスプレイベクター内の配列によってコードされる場合は、そのベクター核酸は、終止コドンを抑制できない細菌細胞内へシャッフリングすることができる。この場合には、Ｆａｂは遺伝子ＩＩＩタンパク質に融合しておらず、培地中へ分泌される。
抗体は、真核細胞中で生成することもでき、１つの実施形態では、抗体（例、ｓｃＦｖ）はピキア（Ｐｉｃｈｉａ）（例えば、Ｐｏｗｅｒｓ ｅｔ ａｌ． （２００１） Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ． ２５１：１２３−３５を参照）、ハンセヌラ（Ｈａｎｓｅｕｌａ）、もしくはサッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属などの酵母細胞中で発現させられる。
１つの実施形態では、抗体、特別には全長抗体、例えば、ＩｇＧが哺乳動物細胞中で生成される。組換え発現のための代表的な哺乳動物宿主細胞には、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（例えばＫａｕｆｍａｎ ａｎｄ Ｓｈａｒｐ （１９８２） Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． １５９：６０１−６２１に記載されたようにＤＨＦＲ選択性マーカーとともに使用されるＵｒｌａｕｂ ａｎｄ Ｃｈａｓｉｎ （１９８０） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ ＵＳＡ ７７：４２１６−４２２０に記載されたｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞を含む）、リンパ球細胞系、例えばＮＳ０骨髄腫細胞およびＳＰ２細胞、ＣＯＳ細胞、Ｋ５６２、ならびにトランスジェニック動物、例えばトランスジェニック哺乳動物由来の細胞が含まれる。例えば、細胞は哺乳動物上皮細胞である。
免疫グロブリンドメインをコードする核酸配列に加えて、組換え発現ベクターは、宿主細胞（例、複製起源）内でのベクターの複製を調節する配列などの追加の配列および選択性マーカー遺伝子を運ぶことができる。選択性マーカー遺伝子は、その中にベクターが導入されている宿主細胞の選択を促進する（例えば、米国特許第４，３９９，２１６号、第４，６３４，６６５号および第５，１７９，０１７号を参照）。代表的な選択性マーカー遺伝子には、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）遺伝子（メトトレキサート選択／増幅を用いてｄｈｆｒ−宿主細胞中で使用するため）およびｎｅｏ遺伝子（Ｇ４１８選択のため）が含まれる。
抗体（例、全長抗体もしくはその抗原結合部分）の組換え発現のための代表的系では、抗体重鎖および抗体軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクターがリン酸カルシウム媒介性トランスフェクションによってｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞内へ導入される。組換え発現ベクター内では、抗体重鎖および抗体軽鎖は各々が、遺伝子の高レベルの転写を駆動するために、エンハンサー／プロモーター調節エレメント（例えば、ＳＶ４０、ＣＭＶ、アデノウイルスなどから誘導される、ＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節エレメントもしくはＳＶ４０エンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節エレメント）に機能的に結合している。組換え発現ベクターは、さらにＤＨＦＲ遺伝子も運ぶが、これはメトトレキサート選択／増幅を用いてベクターによりトランスフェクトされているＣＨＯ細胞の選択を可能にする。選択されたトランスフォーマント宿主細胞は、抗体重鎖および抗体軽鎖の発現を許容するように培養され、そして無傷抗体が培養培地から回収される。組換え発現ベクターを調製し、宿主細胞をトランスフェクトし、形質転換体について選択し、宿主細胞を培養し、そして培養培地から抗体を回収するためには標準分子生物学技術が使用される。例えば、一部の抗体は、プロテインＡもしくはプロテインＧを用いるアフィニティークロマトグラフィーによって単離できる。
Ｆｃドメインを含む抗体については、抗体生成系は、その中でＦｃドメインがグリコシル化される抗体を合成することができる。例えば、ＩｇＧ分子のＦｃ領域は、ＣＨ２ドメイン内のアスパラギン２９７でグリコシル化される。このアスパラギンは、二分岐型オリゴ糖を用いた修飾のための部位である。このグリコシル化は、Ｆｃγ受容体および補体Ｃ１ｑによって媒介されるエフェクター機能に参加する（Ｂｕｒｔｏｎ ａｎｄ Ｗｏｏｆ （１９９２） Ａｄｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ５１：１−８４；Ｊｅｆｆｅｒｉｓ ｅｔ ａｌ． （１９９８） Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｒｅｖ． １６３：５９−７６）。Ｆｃドメインは、アスパラギン２９７へ対応する残基を適切にグリコシル化する哺乳動物発現系内で生成することができる。Ｆｃドメインは、他の真核生物翻訳後修飾を含むこともできる。
抗体は、例えばＦｃ機能を変化させる修飾を含むこともできる。例えば、ヒトＩｇＧ１定常領域は、１つまたは複数の残基で、例えば米国特許第５，６４８，２６０号に記載の番号によると１つまたは複数の残基２３４および２３７で突然変異させることができる。その他の代表的修飾には、米国特許第５，６４８，２６０号に記載された修飾が含まれる。
抗体は、トランスジェニック動物によって生成することもできる。例えば、米国特許第５，８４９，９９２号は、トランスジェニック哺乳動物の乳腺中で抗体を発現させる方法について記載している。乳汁特異的プロモーターおよび当該の抗体をコードする核酸および分泌のためのシグナル配列を含む導入遺伝子が構築される。そのようなトランスジェニック哺乳動物の雌によって生成される乳汁は、その中に分泌された当該の抗体を含んでいる。抗体は、乳汁から精製できる、または一部の用途には直接的に使用できる。
例えば動物、例えば自然、ヒト、もしくは部分的ヒト免疫グロブリン遺伝子座を備える動物を用いて、免疫によってｈＫ１へ結合する抗体を生成することもまた可能である。１つの実施形態では、非ヒト動物は少なくとも一部のヒト免疫グロブリン遺伝子を含んでいる。例えば、ヒトＩｇ遺伝子座の大きなフラグメントを備える、マウス抗体生成が不完全なマウス系統を遺伝子組換えで作製することが可能である。ハイブリドーマテクノロジーを用いると、所望の特異性を備える遺伝子から誘導された抗原特異的モノクローナル抗体を生成して選択することができる。例えば、ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（商標）， Ｇｒｅｅｎ ｅｔ ａｌ． Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ７：１３−２１ （１９９４）、Ｕ．Ｓ． ２００３−００７０１８５およびＷＯ９６／３４０９６を参照されたい。
ｈＫ１の全部もしくは一部は免疫原として使用できる。
非ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列、例えば特定位置、例えば以下の位置の１つまたは複数（好ましくは、少なくとも５、１０、１２、もしくは全部）でコンセンサスヒトアミノ酸配列を挿入する置換を含むように修飾することもできる：（軽鎖の可変ドメインのＦＲ内で）４Ｌ、３５Ｌ、３６Ｌ、３８Ｌ、４３Ｌ、４４Ｌ、５８Ｌ、４６Ｌ、６２Ｌ、６３Ｌ、６４Ｌ、６５Ｌ、６６Ｌ、６７Ｌ、６８Ｌ、６９Ｌ、７０Ｌ、７１Ｌ、７３Ｌ、８５Ｌ、８７Ｌ、９８Ｌ、および／または（重鎖の可変ドメインのＦＲ内で）２Ｈ、４Ｈ、２４Ｈ、３６Ｈ、３７Ｈ、３９Ｈ、４３Ｈ、４５Ｈ、４９Ｈ、５８Ｈ、６０Ｈ、６７Ｈ、６８Ｈ、６９Ｈ、７０Ｈ、７３Ｈ、７４Ｈ、７５Ｈ、７８Ｈ、９１Ｈ、９２Ｈ、９３Ｈ、および／または１０３Ｈ（Ｋａｂａｔのナンバリングによる）。例えば、米国特許第６，４０７，２１３号を参照されたい。
代表的なヒト抗体
１つの実施形態では、本明細書に記載したｈＫ１結合抗体は、１つまたは複数のヒトフレームワーク配列、例えば、重鎖および／または軽鎖可変ドメイン配列内のヒトもしくは有効なヒトＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、および／またはＦＲ４を含んでいる。
１つの実施形態では、重鎖可変ドメイン配列は、Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ． （１９９２） Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２２７：７９９−８１７；Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ． （１９９２） Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２２７：７７６−７９８）による１〜３つの基本構造を有するＨ１およびＨ２超可変ループを有する。これらの構造に適合する代表的なフレームワークは、ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３各々に対して以下の配列を含んでいる：
Figure 2008515774
 一般に、１〜３つの基本構造と適合する任意のヒト生殖細胞系抗体配列由来のフレームワークは、重鎖のために使用できる。同様に、軽鎖フレームワークは、各々軽鎖ＣＤＲ二対して適合するヒト生殖細胞系抗体配列から選択することができる。ＶＨもしくはＶＬセグメント由来のフレームワークは、ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３に対して使用できる。
標的タンパク質の生成
ｈＫ１は、組換え発現技術によって、例えば大腸菌もしくはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）内での発現によって生成できる。ヒトカリクレインｈＫ１は、Ｉｒｉｅ ｅｔ ａｌ．． （１９８６） Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｉｎｔ． １３， ３７５−３８２に記載されたように、本質的に尿から同質性へ精製することができる。
結合アッセイ
ＥＬＩＳＡ。タンパク質、例えばｈＫ１と相互作用できる抗体は、ＥＬＩＳＡアッセイを用いて相互作用特性、例えば結合特性について評価できる。例えば、各タンパク質は、その底面が標的、例えば限定量の標的で被覆されているマイクロタイタープレートに接触させられる。プレートは、非特異的に結合したポリペプチドを除去するためにバッファーを用いて洗浄される。次に、プレートへ結合したタンパク質の量が、ポリペプチド、例えばポリペプチドのタグもしくは定常部分を認識できる抗体を用いてプレートを試験することによって決定される。抗体は、適切な基質が提供されると比色定量生成物を生成するアルカリホスファターゼなどの酵素へ結合させられる。該タンパク質は、細胞から精製できる、またはディスプレイライブラリーフォーマット内で、例えば繊維状バクテリオファージ外殻への融合としてアッセイできる。または、標的分子、例えばｈＫ１を発現する（例、生きている、もしくは固定された）細胞は、マイクロタイタープレート内でプレーティングし、ディスプレイライブラリー内に存在する、またはディスプレイライブラリーからの選択によって入手されたペプチド／抗体の親和性を試験するために使用できる。
また別のバージョンのＥＬＩＳＡアッセイでは、多様性ストランドライブラリーの各ポリペプチドがマイクロタイタープレートの相違するウエルを被覆するために使用される。ＥＬＩＳＡは、次に各ウエルをクエリーするために定常標的分子を用いて進行する。
ホモジニアス結合アッセイ。候補タンパク質と標的との結合相互作用は、例えば、アッセイの全成分が添加された後にホモジニアスアッセイを用いて分析することができ、追加の流体操作は必要とされない。例えば、蛍光共鳴エネルギー転移（ＦＲＥＴ）は、ホモジニアスアッセイとして使用できる（例えば、Ｌａｋｏｗｉｃｚ ｅｔ ａｌ．の米国特許第５，６３１，１６９号；Ｓｔａｖｒｉａｎｏｐｏｕｌｏｓ， ｅｔ ａｌ．の米国特許第４，８６８，１０３号を参照）。第１分子（例えば、その分画内で同定された分子）上の蛍光体標識は、第２分子（例、標的）が第１分子の近位にある場合はそれが放出した蛍光エネルギーを第２分子上の蛍光体標識が吸収できるように選択される。第２分子上の蛍光標識は、それが転移されたエネルギーを吸収すると蛍光を発する。標識間のエネルギー転移の効率は分子を分離している距離に関連しているので、分子間の空間関係を評価することができる。分子間で結合が発生する状況では、アッセイにおける「受容体」分子標識の蛍光放出が最大になるはずである。ＦＲＥＴによって監視するために構成される結合事象は、便宜的に当技術分野においてよく知られている標準的な蛍光測定検出手段を通して測定される。第１または第２結合分子の量を滴定することによって、平衡結合定数を推測するための結合曲線を作製することができる。
また別のホモジニアスアッセイの例は、Ａｌｐｈａ Ｓｃｒｅｅｎ（Ｐａｃｋａｒｄ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社、コネチカット州メリデン）である。Ａｌｐｈａ Ｓｃｒｅｅｎは、２つの標識されたビーズを使用する。１つのビーズは、レーザによって励起すると一重項酸素を生成する。もう１つのビーズは、一重項酸素が第１ビーズから拡散すると光シグナルを生成し、それと衝突する。シグナルは、２つのビーズが近位にある場合にのみ生成される。１つのビーズは、ディスプレイライブラリーメンバーに付着させ、他方のビーズは標的に付着させることができる。シグナルを測定して結合の程度が決定される。
ホモジニアスアッセイは、候補タンパク質がディスプレイライブラリービヒクル、例えばバクテリオファージに付着している場合に、または遊離分子としての候補タンパク質を使用して実施することができる。
表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ）。ディスプレイライブラリーから単離した分子とおよび標的との結合相互作用は、ＳＰＲを用いて分析することができる。ＳＰＲもしくは生体分子相互作用分析（ＢＩＡ）は、いずれの反応体も標識せずに、生体特異的相互作用をリアルタイムで検出する。ＢＩＡチップの結合表面（結合事象の指標）での質量の変化は、表面近くの光線の屈折率の変化を生じさせる（表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）の光学的現象）。屈折度の変化は検出可能なシグナルを生成し、これは生体分子間のリアルタイム反応の指標として測定される。ＳＰＲを使用する方法は、例えば、米国特許第５，６４１，６４０号；Ｒａｅｔｈｅｒ （１９８８） Ｓｕｒｆａｃｅ Ｐｌａｓｍｏｎｓ Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ；Ｓｊｏｌａｎｄｅｒ ａｎｄ Ｕｒｂａｎｉｃｚｋｙ （１９９１） Ａｎａｌ． Ｃｈｅｍ． ６３：２３３８−２３４５；Ｓｚａｂｏ ｅｔ ａｌ． （１９９５） Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｓｔｒｕｃｔ． Ｂｉｏｌ． ５：６９９−７０５およびＢＩＡｃｏｒｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＡＢ （スウェーデン国ウプサラ）によって提供されるオンライン情報源に記載されている。
ＳＰＲからの情報を使用すると、平衡解離定数（Ｋｄ）の正確かつ定量的尺度、ならびに生体分子の標的への結合についての、ＫｏｎおよびＫｏｆｆを含む動態パラメーターを提供することができる。そのようなデータを使用すると、様々な生体分子を比較できる。例えば、多様なストランドのライブラリーから選択された核酸によってコードされるタンパク質は、標的に対する高親和性を有する、または緩徐なＫｏｆｆを有する個体を同定するために比較できる。この情報は、構造―活性関係（ＳＡＲ）を開発するためにも使用できる。例えば、親タンパク質の成熟型の動態および平衡結合パラメーターは、親タンパク質のパラメーターと比較できる。所定の位置にある、特定の結合パラメーター、例えば高親和性および緩徐なＫｏｆｆと相関する変異体アミノ酸を同定することができる。この情報は、構造的モデリングと結び付けることができる（例えば、ホモロジーモデリング、エネルギー最小化、または結晶学もしくはＮＭＲによる構造決定を用いる）。結果として、タンパク質とその標的との物理的相互作用についての理解を系統立てて他の設計プロセスを導くするために使用できる。
タンパク質アレイ。ディスプレイライブラリーから同定したポリペプチドは、固体支持体、例えばビーズもしくはアレイ上に固定化できる。タンパク質アレイのためには、ポリペプチド各々が支持体上の固有のアドレスで固定化される。典型的には、アドレスは二次元アドレスである。タンパク質アレイについては、以下で説明する（例えば、診断薬を参照されたい）。
生物学的アッセイ
インビトロ生化学アッセイは、ｈＫ１タンパク質分解の阻害を評価するために使用できる。例えば、Ｂｏｕｒｇｅｏｉｓ ｅｔ ａｌ． （１９９７） Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２７２：２９５９０−２９５９５を参照されたい。ｈＫ１タンパク質分解を監視するために使用できる代表的なペプチド基質には、Ａｂｚ−ＦＲＳＡＲＱ−ＥＤＤｎｐ、Ａｂｚ−ＴＦＲＳＡＲＱ−ＥＤＤｎｐ、Ａｂｚ−ＦＴＦＲＳＡＲＱ−ＥＤＤｎｐ、Ａｂｚ−ＡＩＫＦＦＳＡＱ−ＥＤＤｎｐ、Ａｂｚ−ＶＩＡＧＲＳＬＮＰＮＱ−ＥＤＤｎｐ、Ａｂｚ−ＡＭＳＲＭＳＬＳＳＦＳＶＮＲＱ−ＥＤＤｎｐ、Ａｂｚ−ＡＩＫＦＦＳＲＱ−ＥＤＤｎｐ、およびＡｂｚ−ＴＦＦＳＡＲＱ−ＥＤＤｎｐ（式中、Ａｂｚはｏ−アミノベンゾイルを表し、ＥＤＤｎｐはＮ−（２，４−ジニトロフェニル）エチレンジアミンを表す）が含まれる。分子内でクエンチされた蛍光性ペプチドは伝統的溶液法によって合成できる：グルタミンはＣ末端残基として配置できる。例えば、Ｈｉｒａｔａ ｅｔ ａｌ． Ｌｅｔｔ． Ｐｅｐｔ． Ｓｃｉ． １，２９９−３０８を参照されたい。合成は、多重自動ペプチド合成装置（ＰＳＳＭ−８、Ｓｈｉｍａｄｚｕ社）を用いるＦｍｏｃ法により実施できる。分子内でクエンチされた蛍光性基質は、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド内の２ｍＭストック溶液として調製し、活性化バッファーを用いて希釈できる。基質の純度は、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析装置（ＴｏｆＳｐｅｃ−Ｅ、Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ社）および２．０ｍＬ／分で０．０７５％ ＴＦＡ中の０〜６０％のアセトニトリルの１０分間線形勾配により溶出するＣ１８カラム上での逆相クロマトグラフィーによってチェックした。
酵素動態を評価するための代表的な条件は、１ｍＭ ＥＤＴＡおよび０．０２％ ＩＧＥＰＡＬ（旧称：Ｎｏｎｉｄｅｔ Ｐ−４０）を含有する３７℃の５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌバッファー（ｐＨ８．３）中である。
動物モデル
米国特許第５，９１１，９８８号は、喘息についての代表的なマウスモデルについて記載している。マウスモデルは、マウスＫＬＫ１タンパク質も認識するｈＫ１結合タンパク質の能力を評価するために使用できる。マウスは、ｈＫ１を発現するように修飾することもできる。マウスにアレルゲンの長期反復吸入を受けさせると、肺におけるアレルギー性疾患の長期作用を評価するため、そしてヒトにおける肺の気道過剰反応性の誘導に関係する細胞、機構、分子、および媒介因子について正確に記述するために使用できる。
雌性ＢＡＬＢ／ｃマウス（６〜８週齢）を使用し、試験のための従来型条件下で維持することができる。
試薬：結晶質ＯＶＡはＰｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍ．社（イリノイ州ロックフォード）、硫酸アルミニウムカリウム（ａｌｕｍ）はＳｉｇｍａ Ｃｈｅｍ．社（ミズーリ州セントルイス）、発熱性物質無含有蒸留水はＢａｘｔｅｒ， Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ社（イリノイ州ディアフィールド）、０．９％塩化ナトリウム（生理食塩液）はＬｙｍｐｈｏｍｅｄ社（イリノイ州ディアフィールド）およびＴＲＡＰＰＳＯＬ（商標）ＨＰＢ−Ｌ１００（ヒドロキシプロピルβシクロデキストリン水溶液；４５（ｗ／ｖ）％水溶液）はＣｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ社（フロリダ州ゲーンズビル）から入手した。
アレルゲンによる免疫／惹起プロトコール：マウスには、ａｌｕｍを含む０．２ｍＬ（１００μｇ）のＯＶＡの腹腔内注射を実施した（Ｊ． Ｅｘｐ Ｍｅｄ． １９９６；１８４：１４８３−１４９４）。相違するプロトコールが使用されてもよい。例えば、マウスには、相違する日に別個に行なう０．０５ｍＬの生理食塩液中に溶解した１００μｇのＯＶＡの鼻腔内（ｉ．ｎ．）投与および０．０５ｍＬの生理食塩液中に溶解した５０μｇのＯＶＡのｉ．ｎ．投与の前に生理食塩液中に溶解した０．２ｍＬのケタミン（０．４４ｍｇ／ｍＬ）／キシラジン（６．３ｍｇ／ｍＬ）を用いて麻酔をしてもよい。ｈＫ１結合タンパク質を評価するために、該タンパク質は試験用量のｈＫ１結合タンパク質を用いて、例えば鼻腔内惹起前に投与し、そしてｈＫ１結合タンパク質を含んでいない対照投与を受けている対応する対照群マウスと比較することができる。
組織学的検査。気管および左肺（右肺は気管支肺胞洗浄（「ＢＡＬ」）のために使用する）を入手し、室温で約６〜１５時間かけて１０％中性ホルムアルデヒド溶液中で固定する。パラフィン中に包埋した後、組織を５μｍの切片に切断し、その後の様々な染色もしくは免疫標識により処理できる。Ｄｉｓｃｏｍｂｅの好酸球染色を使用すると、メチレンブルーの対比染色を示す細胞数を計数することができる。１単位の気道ドメイン（２，２００μｍ２）当たりの好酸球数は、形態測定学によって決定できる（Ｊ． Ｐａｔｈｏｌ． １９９２；１６６：３９５−４０４；Ａｍ Ｒｅｖ Ｒｅｓｐｉｒ Ｄｉｓ． １９９３；１４７：４４８−４５６）。線維症は、Ｍａｓｓｏｎの三色染色により同定できる。気道粘液は、以下の染色法によって同定できる：メチレンブルー、ヘマトキシリン＆エオシン、ムチカルミン、アルシアンブルー、およびアルシアンブルー／過ヨウ酸シッフ（ＰＡＳ）反応（Ｔｒｏｙｅｒ， Ｈ．， “Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｓ” ｉｎ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｏｆ Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， Ｌｉｔｔｌｅ， Ｂｒｏｗｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ， Ｂｏｓｔｏｎ， Ｍａｓｓ．， １９８０：８９−１２１；Ｓｈｅｅｈａｎ， Ｄ．Ｃ， ｅｔ ａｌ．， “Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｓ” ｉｎ Ｔｈｅｏｒｙ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｈｉｓｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｂａｔｔｌｅ Ｐｒｅｓｓ， Ｃｏｌｕｍｂｕｓ， Ｏｈｉｏ， １９８０：１５９−１７９）。ムチンは、ムチカルミン溶液を用いて染色できる；メタニルイエロー対比染色を使用した。酸性ムチンおよび硫酸化粘液物質は、アルシアンブルー（ｐＨ２．５）を用いて染色できる：ニュークレアファーストレッド対比染色法もまた使用できる。中性および酸性粘液物質は、アルシアンブルー（ｐＨ２．５）およびＰＡＳ反応によって同定した。気道（径０．５〜０．８ｍｍ）の粘液閉塞度もまた形態測定学によって評価できる。粘液による気道の径閉塞率は、０〜４＋までの半定量的スケール上で分類した。組織学的および形態計測学的分析は、プロトコール設計について遮蔽された個人によって実施できる。
肺機能試験。第２８日の生理食塩液またはＯＶＡいずれかの最終鼻腔内投与２４時間後に、例えば以前に記載された方法（１０， １９５８；１９２：３６４−３６８；Ｊ． Ａｐｐｌ． Ｐｈｙｓｉｏｌ． １９８８；６４：２３１８−２３２３；Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ． １９９６；１８４：１４８３−１４９４）、またはその変法を用いて、メタコリンの静脈内注入に対する肺機構をマウスのインビボで、プレチスモグラフィー法によって決定できる。肺機能試験の完了時に各マウスを心穿刺によって放血させると、気管を含む肺組織をその後の分析のために使用できる。
気管支肺胞洗浄。基幹気管支で左肺を結紮した後、右肺は０．４ｍＬの生理食塩液を用いて３回洗浄することができる。プールサンプルの０．０５ｍＬのアリコート由来の気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）液中の細胞は、血球計数器を用いて計数し、残りの液体は４℃で１０分間、２００ｇで遠心する。上清は、エイコサノイド分析を実施するまで−７０℃で保存する。１０％ウシ血清アルブミン（「ＢＳＡ」）を含有する生理食塩液中に溶解に細胞ペレットを再懸濁させた後、スライドガラス上でＢＡＬ細胞スメアを作製できる。好酸球を染色するために、乾燥したスライドをＤｉｓｃｏｍｂｅ希釈液（蒸留水中の０．０５％エオシン水溶液および５％アセトン（容積／容積）；Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ． １９７０；１３１：１２７１−１２８７）で５〜８分間かけて染色し、水で０．５分間すすぎ洗いし、２分間にわたり０．０７％メチレンブルーを用いて対比染色する。
気道粘液糖タンパク質のアッセイ。ＢＡＬ液中の粘液糖タンパク質は、スロットブロッティングおよびＰＡＳ染色によってアッセイする（Ａｎａｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． １９８９；１８２：１６０−１６４；Ａｍ． Ｊ． Ｒｅｓｐｉｒ． Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． １９９５；１２：２９６−３０６）。ニトロセルロース膜（孔径０．２μｍ；Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ ＆ Ｓｃｈｕｅｌｌ， Ｋｅｅｎｅ， Ｎ．Ｈ．）を蒸留水中で湿潤させ、次に生理食塩液に漬け、その後Ｍｉｎｉｆｏｌｄ ＩＩ ７２ウエルスロットブロット装置（Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ ＆ Ｓｃｈｕｅｌｌ社）内に配置した。ＢＡＬ液サンプル（０．０５ｍＬ）およびヒト呼吸ムチン糖タンパク質のストック液（２μｍ／ｍＬ）のアリコート（０．０５〜０．７５Ｌ）（Ａｍ． Ｊ． Ｒｅｓｐｉｒ． Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． １９９１；５：７１−７９）を真空給水装置によってニトロセルロース膜上へブロッティングし、粘液糖タンパク質をＰＡＳ反応によって視認する。ＰＡＳ染色を定量するためには、反射濃度測定法を実施できる。ＢＡＬサンプルのＰＡＳ反応性の積分強度は、ヒト呼吸気ムチンについての標準曲線との比較によって定量できる。
免疫細胞化学。モノクローナル抗体：ＣＤ１１ｃ（ＤＡＢ法）およびＭａｃ１（Ｂｅｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ社、Ｈｉｔｏｍｏｕｓｅ Ｋｉｔ（Ｚｙｍｅｄ社）を用いるＡＢＣ法）を使用すると、血管構造、気道および線維症のドメイン内／周囲における炎症細胞タイプ、例えば樹状細胞、マクロファージおよびリンパ球を同定することができる。
米国特許第６，４６２，０２０号は、関節炎についての代表的なマウスモデルである、誘導性ＩＩ型コラーゲン関節炎マウスモデルについて記載している。このマウスモデルを使用すると、ｈＫ１結合タンパク質が誘導性ＩＩ型コラーゲン関節炎の組織学的、放射線学的および臨床的外観に及ぼす作用を評価することができる。
自己免疫疾患は、有意で慢性的な罹病状態および身体障害を引き起こす。多数の形態にある関節炎は、１ファミリーの自己免疫疾患の代表である。臨床ドメインでは、慢性関節リウマチ（ＲＡ）は重症関節形成不全性疾患の最も一般的な形態である。ＲＡは進行性疾患である。
マウスＣＩＡにおいて発生する関節炎性病変の組織病理は、ヒト患者におけるＲＡの組織病理と極めて多数の類似性を共有している。マウスＣＩＡは、ＲＡの潜在的な処置的処置を試験するための有用なモデルである。
材料および方法：マウス：体重２５ｇのＤＢＡ／１（２）雄性マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ， Ｍｅ．またはＢ＆Ｋ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ， Ｋｅｎｔ Ｗａｓｈ．）をこの研究のために使用した。このマウス系統は、異種ＩＩ型コラーゲンの注射によってＣＩＡに罹患させることができる。ウシコラーゲン（ＢＣ）、フロイントの完全アジュバント（ＣＦＡ）およびフロイントの不完全アジュバント（ＩＣＦＡ）は、Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ社から入手できる。免疫のための抗原は、０．１Ｍ酢酸中で処理し、ＣＦＡもしくはＩＣＦＡを用いて調製する。
関節炎の誘導。免疫プロトコール：マウスには、試験期間中に規定間隔をあけてＣＦＡ中の１００μｇのＩＩ型コラーゲンを注射する。
マウスを関節炎の発生について規定間隔で試験する。関節炎の推定証拠には、連続２回の観察での前足および／または後足上の少なくとも１つの足指関節の腫脹および紅斑が含まれる。
関節炎の確定診断。関節の組織学検査：適切な間隔をあけて致死させた動物の足指関節を除去し、固定し、脱石灰化し、パラフィン中に包埋し、切片作製し、そして一般的細胞および構造の特徴を観察するため、および適切に各関節のパンヌスの軟骨性マトリックスを検出するために染色する。細胞充実度および炎症面積は、組織学的顕微鏡写真のデジタル化ならびに標準面積および地点計数技術を適用することによって定量した。
足指関節の放射線学的評価は、ＩＩ型コラーゲンによる免疫後の関節変化の発生を検出するために実施する。この研究のために、マンモグラフィーイメージングシステムが改変されている。関節の軟組織（パンヌス）の平均面積は、各放射線写真に含まれている内部標準との比較によって隣接硬質組織の密度の変化と一緒に、コンピューターデジタル化放射線写真の分析によって決定される。硬質組織およびパンヌスのドメインの変化する密度についてのベースライン時対照として機能するために、同一期間にわたり追加のマウスを使用し、密度および面積データを比較する。対照群および実験群マウスについての密度および面積における差の有意性は、各時点に対のＴ検定を用いて評価する。
関節炎の評価。動物を毎日、関節炎の発生について観察する。関節炎指数は、各足の関与の重症度を０〜４のスケール上で等級付けすることによって引き出される。スコア付けは、関節周囲紅斑および浮腫、ならびに関節の変形の程度に基づく。後足の腫脹については、定張力カリパスを用いて内果から外果までの足首の太さを測定することによっても定量される。
Ｔｕｏｈｙ ｅｔ ａｌ． （Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． （１９８８） １４１：１１２６−１１３０）， Ｓｏｂｅｌ ｅｔ ａｌ． （Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． （１９８４） １３２：２３９３−２４０１）、およびＴｒａｕｇｏｔｔ （Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ． （１９８９） １１９：１１４−１２９）は、多発性硬化症の実験的自己免疫脳炎（ＥＡＥ）マウスモデルについて記載している。マウスモデルを使用すると、多発性硬化症の症状を調節するためのｈＫ１結合タンパク質を評価することができる。
薬学的組成物
さらに特徴とするのは、例えば本明細書に記載したｈＫ１結合タンパク質、例えばｈＫ１結合抗体を含む組成物、例えば薬学的に受容可能な組成物である。本明細書で使用する「薬学的組成物」は、診断（例、インビボイメージング）使用のための化合物（例、標識化合物）ならびに処置もしくは予防使用のための化合物を含んでいる。
本明細書で使用する「薬学的に受容可能なキャリア」は、生理的に適合する任意および全部の溶媒、分散媒、コーティング剤、抗菌剤および抗真菌剤、等張性物質および吸収遅延剤などを含んでいる。１つの実施形態では、キャリアは水以外である。好ましくは、キャリアは、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄もしくは上皮投与（例、注射もしくは注入による）のために適合する。投与経路に依存して、活性化合物は、その化合物を不活性化する可能性のある酸およびその他の天然条件の作用からその化合物を保護するために、物質内に被覆されてもよい。
「薬学的に受容可能な塩」は、親化合物の所望の生物活性を維持し、望ましくない毒物学的作用を全く付与しない塩を意味する（例えば、Ｂｅｒｇｅ， Ｓ．Ｍ．， ｅｔ ａｌ． （１９７７） Ｊ． Ｐｈａｒｍ． Ｓｃｉ． ６６：１−１９を参照）。そのような塩の例には、酸付加塩および塩基付加塩が含まれる。酸付加塩には、塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、亜リン酸などの非毒性無機酸由来、ならびに脂肪族モノカルボン酸およびジカルボン酸、フェニル置換アルカン酸、ヒドロキシアルカン酸、芳香族酸、脂肪族および芳香族スルホン酸などの非毒性有機酸由来の塩が含まれる。塩基付加塩には、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムなどのアルカリ土類金属由来、ならびにＮ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、プロカインなどの非毒性有機アミン由来の塩が含まれる。
本発明の組成物は、様々な形態にあってよい。これらには、例えば、溶液（例、注射液および注入液）、分散液もしくは懸濁液、錠剤、ピル剤、散剤、リポソームおよび坐剤などの液体、半固体および固体製剤が含まれる。好ましい形態は、所定の投与様式および処置適用に依存する。典型的に好ましい組成物は、ヒトに抗体を投与するために使用されるものに類似する組成物などの注射液もしくは注入液の形状にある。好ましい投与様式は、非経口（例、静脈内、皮下、腹腔内、筋肉内）である。好ましい実施形態では、化合物は、静脈内注入もしくは注射によって投与される。また別の好ましい実施形態では、化合物は、筋肉内もしくは皮下注射によって投与される。
本明細書で使用する語句「非経口投与」および「非経口で投与される」は、通常は注射による経口および局所投与以外の投与様式を意味しており、制限なく、静脈内、筋肉内、動脈内、気管内、嚢内、眼窩内、心内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、クモ膜下、髄腔内、硬膜外および胸骨内注射および注入を含んでいる。
薬学的組成物は、典型的には製造および保管条件下において無菌および安定性でなければならない。薬学的組成物は、投与のための規制標準および工業標準を確実に満たすかどうかについても試験することができる。例えば、調製物中の外毒素レベルは、ＵＳＰ２４／ＮＦ１９法によって、リムルス（Ｌｉｍｕｌｕｓ）アメーバ細胞溶解液アッセイ（例、Ｂｉｏ Ｗｈｉｔｔａｋｅｒ社製キット、ロット番号７Ｌ３７９０、感受性０．１２５ＥＵ／ｍＬを用いる）を使用して試験できる。薬学的組成物の無菌性は、ＵＳＰ２４／ＮＦ１９法によるチオグリコール酸塩培地を用いて決定できる。例えば、調製物はチオグリコール酸塩培地に接種するために使用され、３５℃で１４日間以上にわたりインキュベートされる。微生物の増殖を検出するためには、培地が定期的に検査される。
組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、分散液、リポソーム、またはその他の薬物高濃度に適合する規則的構造として調製できる。無菌注射液は、必要な量の活性化合物を適切な溶媒中に、上記で列挙した成分の１つまたは組み合わせと一緒に組み込み、その後に濾過滅菌することによって調製できる。一般に、分散液は、塩基性分散媒および上記に列挙した成分からの必要な他の成分を含有する無菌ビヒクル中に活性化合物を組み込むことによって調製される。無菌注射液を調製するための無菌粉末の場合は、好ましい調製方法は、有効成分へ事前に無菌濾過したその溶液からの任意の追加の所望の成分を加えたものの粉末を生成する真空乾燥およびフリーズドライ法である。溶液の適正な流動度は、例えばレシチンなどのコーティング剤の使用によって、分散液の場合は必要な粒径の維持によって、そして界面活性剤の使用によって維持することができる。注射用組成物の長期間の吸収は、組成物中に吸収を遅延させる物質、例えばモノステアリン酸塩およびゼラチンを含めることによって発生させることができる。
吸入により送達するための抗体を調製するための代表的方法については以下で説明する。
１つの実施形態では、ｈＫ１結合抗体は、皮下送達のため、例えば皮下注射のために調製される。皮下送達は、本明細書に記載した任意の障害を処置するために使用できる。１つの実施では、抗体は、分散保護剤（例、スクロースもしくはトレハロースなどの糖）を含む安定性凍結乾燥タンパク質調製物として提供される。凍結乾燥調製物は、凍結乾燥前調製物中のタンパク質濃度より有意に（例、約２〜４０倍以上、好ましくは３〜１０倍以上、および最も好ましくは３〜６倍以上）高いタンパク質濃度を有する安定性の再構成調製物を生成するように再構成することができる。詳細には、凍結乾燥前調製物中のタンパク質濃度は５ｍｇ／ｍＬ以下であってよいが、再構成された調製物中のタンパク質濃度は５０ｍｇ／ｍＬ以上であってよい。したがって、この調製物は少なくとも約５０ｍｇ／ｍＬのｈＫ１結合タンパク質を含んでいてよい。そのような再構成された調製物中のタンパク質濃度は、皮下投与のために有用な可能性がある。
再構成調製物は等張性であってよい。再構成調製物は、保存料（静菌性注射用水（ＢＷＦＩ）など）。再構成調製物は、複数回投与用調製物のために使用できる。そのような調製物は、例えば、患者が慢性の医学的状態を処置するためにタンパク質の頻回な皮下投与を必要とする場合に有用である。分散保護剤対タンパク質の比率は、例えば、約１００〜１５００モルのトレハロースもしくはスクロース：１モルの抗体であってよい。凍結乾燥前調製物のｐＨを安定化させる、例えば６〜８の範囲内のｐＨにするためにはバッファーを使用できる。例えば、バッファーは、１つまたは複数のアミノ酸、例えばヒスチジン、または６〜８の範囲内に緩衝する、もしくはそのような範囲内のｐＨを有する他の物質を含んでいてよい。調製物は、界面活性剤（例、ポリソルベート）をさらに含んでいてよい。
本明細書に記載した化合物は、当技術分野において知られている様々な方法によって投与できる。多数の適用について、投与経路／様式は、静脈内注射もしくは注入である。例えば、処置適用のために、化合物は、約１〜１００ｍｇ／ｍ２もしくは７〜２５ｍｇ／ｍ２の用量に達するために３０、２０、１０、５、もしくは１ｍｇ／分未満の速度での静脈内注入によって投与できる。投与経路および／または様式は、所望の結果に依存して変動するであろう。所定の実施形態では、活性化合物は、インプラント、およびマイクロカプセル封入送達系を含む徐放性調製物などの化合物を迅速な放出から保護するであろうキャリアを含めて調製することができる。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ酢酸などの生分解性、生体適合性ポリマーを使用できる。そのような調製物を調製するための多数の方法は特許付与されている、または一般に知られている。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ， Ｊ．Ｒ． Ｒｏｂｉｎｓｏｎ， ｅｄ．， Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ， Ｉｎｃ．， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９７８を参照されたい。薬学的調製物は明確に確立された技術であり、Ｇｅｎｎａｒｏ （ｅｄ．）， Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ， ２０ｔｈ ｅｄ．， Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ， Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ （２０００）（ＩＳＢＮ：０６８３３０６４７２）；Ａｎｓｅｌ ｅｔ ａｌ．， Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ， ７ｔｈ Ｅｄ．．， Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ （１９９９）（ＩＳＢＮ：０６８３３０５７２７）；ａｎｄ Ｋｉｂｂｅ （ｅｄ．）， Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ， ３ｒｄ ｅｄ． （２０００）（ＩＳＢＮ：０９１７３３０９６Ｘ）に詳細に記載されている。
所定の実施形態では、組成物は、例えば不活性希釈剤もしくは同化性食用キャリアと一緒に経口投与することができる。化合物（および所望であれば他の成分）は、硬質もしくは軟質ゼラチンカプセル内に封入する、錠剤に打錠する、または被験体の食事に直接的に組み込むこともできる。経口による処置投与のためには、化合物は賦形剤と一緒に組み込むことができ、摂取可能な錠剤、口腔錠、トローチ剤、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、ウエハー剤などの形状で使用できる。化合物を非経口投与以外で投与するためには、その不活性化を防止する物質で化合物を被覆する、または化合物と同時投与することが必要になることがある。
薬学的組成物は、当技術分野において知られている医療器具を用いて投与できる。例えば、好ましい実施形態では、本発明の薬学的組成物は、例えば米国特許第５，３９９，１６３号、第５，３８３，８５１号、第５，３１２，３３５号、第５，０６４，４１３号、第４，９４１，８８０号、第４，７９０，８２４号、もしくは第４，５９６，５５６号に開示された器具などのニードルレス皮下注射器具を用いて投与できる。本発明において有用なよく知られているインプラントおよびモジュールの例は：制御された速度で医薬品を分注するための植込み型マイクロインフュージョンポンプを開示している米国特許第４，４８７，６０３号；皮膚を通して薬剤を投与するための処置器具を開示している米国特許第４，４８６，１９４号；正確な注入速度で薬剤を送達するための薬剤注入ポンプを開示している米国特許第４，４４７，２３３号；持続的薬物送達のための流量可変式の植込み型注入器具を開示している米国特許第４，４４７，２２４号；マルチチャンバー区画を有する浸透圧薬物送達系を開示している米国特許第４，４３９，１９６号；および浸透圧薬物送達系を開示している米国特許第４，４７５，１９６号が含まれる。当然ながら、多数のそのような他のインプラント、送達系、およびモジュールもまた知られている。
所定の実施形態では、化合物は、インビボでの適正な分布を保証するように調製できる。例えば、血液脳関門（ＢＢＢ）は、多数の親水性化合物を排除する。本発明の処置用化合物が（所望であれば）ＢＢＢを越えることを保証するために、それらは例えばリポソーム中で調製できる。リポソームを製造する方法については、例えば米国特許第４，５２２，８１１号；第５，３７４，５４８号；および第５，３９９，３３１号を参照されたい。リポソームは、特定の細胞もしくは気管内へ選択的に輸送され、したがって標的とされた薬物送達を増強する１つまたは複数の成分を含んでいてよい（例えば、Ｖ．Ｖ． Ｒａｎａｄｅ （１９８９） Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． ２９：６８５を参照）。
本発明の範囲内には、本明細書に記載した組成物（例、ｈＫ１結合タンパク質を含有する化合物である組成物）および例えば処置、予防、もしくは診断使用のような使用するための取扱説明書を含むキットがさらに含まれる。１つの実施形態では、キットは、（ａ）化合物、例えばその化合物を含む組成物、および任意で（ｂ）情報材料を含んでいる。情報材料は、記述的、教育的、マーケティングもしくは本明細書に記載した方法および／または本明細書に記載した方法のための化合物の使用に関連する他の材料であってよい。例えば、情報材料は、ｈＫ１活性を低下させるため、またはｈＫ１関連性障害を処置もしくは予防するために本化合物を投与する方法について記載している。
１つの実施形態では、情報材料は適切な方法で、例えば適切な用量、剤形、または投与様式（例、本明細書に記載した用量、剤形、もしくは投与様式）で化合物を投与するための取扱説明書を含んでいてよい。また別の実施形態では、情報材料は適切な被験体、例えば、ヒト、例えばｈＫ１関連性障害もしくは過剰なｈＫ１活性を特徴とする障害を有する、またはそのリスク状態にあるヒトを同定するための取扱説明書を含んでいてよい。情報材料は、化合物の製造、化合物の分子量、濃度、使用期限、バッチ番号もしくは製造場所に関する情報等々についての情報を含んでいてよい。キットの情報材料は、その形状について限定されない。多くの場合に、情報材料、例えば取扱説明書は、印刷物、例えば印刷文、図面、および／または写真、例えばラベルもしくは印刷用紙で提供される。しかし、情報材料は、例えば点字、コンピューター可読材料、ビデオ録画、もしくは音声録音などの他のフォーマットで提供されてもよい。また別の実施形態では、キットの情報材料は、リンクもしくは連絡情報、例えばキットの使用者が本明細書に記載した本化合物および／または本方法における使用についての実質的情報を入手できる実際の住所、ｅメール住所、ハイパーリンク、ウェブサイト、もしくは電話番号である。当然ながら、情報材料はフォーマットの任意の組み合わせで提供することもできる。
本化合物に加えて、キットの組成物は、溶媒もしくはバッファー、安定剤もしくは保存料、および／または本明細書に記載した状態もしくは障害を処置するための第２物質を含んでいてよい。または、他の成分をキット内に、しかし本化合物とは相違する組成物もしくは容器内に含めることができる。そのような実施形態では、キットは本化合物と他の成分とを混合するため、または化合物を他の成分と一緒に使用するための取扱説明書を含んでいてよい。
本化合物は、任意の形状、例えば液体、乾燥もしくは凍結乾燥形で提供できる。本化合物は実質的に純粋および／または無菌であるのが好ましい。本化合物が溶液で提供される場合は、溶液は好ましくは水溶液であり、無菌水溶液が好ましい。本化合物が乾燥形で提供される場合は、再構成は、適切な溶媒の添加による。溶媒、例えば無菌水もしくはバッファーは、任意でキット内に提供できる。
キットは、本化合物を含有する組成物のための１つまたは複数の容器を含んでいてよい。一部の実施形態では、キットは組成物および情報材料のための個別の容器、仕切もしくは区画を含有する。例えば、組成物は、ボトル、バイアル、もしくはシリンジ内に含有することができる、そして情報材料はプラスチック製スリーブもしくはパケット内に含めることができる。他の実施形態では、キットの個別の要素は、単一の、分割されていない容器内に含有されている。例えば、組成物は、それにラベルの形状にある情報材料が貼付されているボトル、バイアルもしくはシリンジ内に含有される。一部の実施形態では、キットは、各々が本化合物の１つまたは複数の単位剤形（例、本明細書に記載した剤形）を含有する複数（例、パック）の個別容器を含んでいる。例えば、キットは、各々が単位用量の化合物を含有する複数のシリンジ、アンプル、ホイルパケット、もしくはブリスターパックを含んでいる。キットの容器は、気密性、防水性（例、水分もしくは蒸発の変化に不浸透性）、および／または遮光性であってよい。
本化合物がｈＫ１結合タンパク質を含有する１つの実施形態では、診断適用についての取扱説明書はインビトロ、例えばサンプル、例えば本明細書に記載した肺障害もしくは他の障害を有する患者由来の生検もしくは細胞またはインビボでｈＫ１を検出するための化合物の使用を含んでいる。また別の実施形態では、処置適用のための取扱説明書は、肺障害もしくは本明細書に記載した他の障害、例えば、喘息（例、アレルギー性および非アレルギー性喘息）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、多発性硬化症、乾癬、慢性関節リウマチ、変形性関節症、鼻炎、副鼻腔炎、炎症性腸疾患（クローン病および潰瘍性大腸炎など）、免疫媒介性糖尿病、急性膵炎、間質性膀胱炎、および腫瘍性障害（例、転移性膵腺癌もしくは腫瘍性血管新生）を有する患者における提案された用量および／または投与様式を含んでいる。キットは、診断薬もしくは処置薬、例えば本明細書に記載した診断薬もしくは処置薬などの少なくとも１つの追加の試薬、および／または１つまたは複数の個別の薬学的調製物中の適切に調製された障害を処置するための１つまたは複数の追加の物質をさらに含有することができる。
処置
ｈＫ１結合タンパク質は、被験体、例えばヒト被験体へ、望ましくない、もしくは異常なｈＫ１活性を特徴とするｈＫ１関連性障害および疾患などの様々な障害を処置する、予防する、および／または診断するために投与できる。代表的な障害には、喘息（例、アレルギー性および非アレルギー性喘息）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、多発性硬化症、乾癬、慢性関節リウマチ、変形性関節症、鼻炎、副鼻腔炎、クローン病および潰瘍性大腸炎などの炎症性腸疾患、免疫媒介性糖尿病、急性膵炎、間質性膀胱炎、および腫瘍性障害（例、転移性膵腺癌もしくは腫瘍性血管新生）が含まれる。「ｈＫ１関連性障害」は、ｈＫ１が少なくとも一部には媒介する障害であるので、ｈＫ１タンパク質レベルもしくは活性の減少が障害の少なくとも１つの態様、例えば障害の少なくとも１つの症状を改善することができる。
被験体へ投与されることに加えて、本化合物は、培養中の細胞、組織、もしくは器官へ、例えばインビトロもしくはエックスビボで投与することもできる。
本明細書で使用するように用語「処置する」もしくは「処置」は、単独もしくは１つまたは複数の他の物質と組み合わせた、被験体、例えば患者への化合物の適用もしくは投与、または障害、障害の症状もしくは障害に向かう素因を治癒させる、処置する、改善する、軽減する、変化させる、救済する、改良する、または影響を及ぼす目的で、単離された組織もしくは細胞、例えば被験体、例えば障害（例、本明細書で記載した障害）、障害もしくは疾患に向かう素因の症状を有する患者由来の細胞系への本物質の適用もしくは投与であると規定されている。
本明細書で使用する障害を処置するために有効なｈＫ１結合タンパク質の量、または「処置有効量」は、被験体を処置する、例えばそのような処置が不在である場合に予測される程度を越える程度まで被験体における障害の少なくとも１つの症状を治癒させる、緩和する、救済する、もしくは改善する際に被験体へ単回もしくは複数回用量を投与すると有効である化合物の量を意味する。例えば、障害は、肺障害、例えば本明細書に記載した肺障害であってよい。
「局所的有効量」は、組織中、例えばｈＫ１に曝露した肺の領域内で標的タンパク質（例、ｈＫ１）を検出可能に変調する活性で有効である化合物の量（例、濃度）を意味する。変調の証拠は、例えば上昇した量の基質、例えば減少した基質のタンパク質分解を含んでいてよい。
本明細書で使用するように障害を予防するために有効なｈＫ１結合タンパク質の量、またはタンパク質の「予防有効量」は、被験体への単回もしくは複数回用量の投与後に、障害、例えばｈＫ１関連性障害の発現の発生もしくは再発を予防または遅延させることに有効であるｈＫ１結合タンパク質の量を意味する。
用語「誘導する」、「阻害する」、「強化する」、「上昇させる」、「増加させる」、「減少させる」などは、例えば、２つの状態間の識別可能な定性的もしくは定量的差を意味し、そして２つの状態間の例えば統計的有意差（例、Ｐ＜０．０５、０．０２、もしくは０．００５）のような差に関する。
投与レジメンは、最高に望ましい反応（例、処置反応）を提供するように調整される。例えば、単回ボーラスを投与できる、数回に分割した用量を経時的に投与できる、または用量を処置状態の要件によって指示されるように比例的に減量もしくは増量することができる。投与の容易さおよび用量の均一性のために、非経口組成物を用量単位で調製することが特に有益である。本明細書で使用した単位剤形は、処置される被験体のための単一用量として適合する物理的に別々の単位を意味する；各単位は、必要とされる医薬キャリアと関連している所望の処置作用を生成するように計算された規定量の活性化合物を含有する。
本明細書に記載した化合物の処置有効量もしくは予防有効量の非限定的範囲は、０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは１〜１０ｍｇ／ｋｇである。本化合物は、約１〜５０ｍｇ／ｍ２もしくは５〜２０ｍｇ／ｍ２の用量に達するために２０、１０、５、もしくは１ｍｇ／分未満の速度での静脈内注入によって投与できる。用量値は、緩和すべき状態のタイプおよび重症度に伴って変動する可能性があることに留意されたい。任意の特定に被験体については、個々の必要および組成物の投与を監視もしくは監督する者の専門的判断力によって経時的に特定の用量レジメンを調整しなければならないこと、そして本明細書に記載した用量範囲は代表例に過ぎないことをさらに理解されたい。
薬学的組成物は、「処置有効量」もしくは「予防有効量」の本明細書に記載した化合物、例えばｈＫ１に結合および阻害するポリペプチドを含む化合物を含んでいてよい。
本組成物の処置有効量は、固体の疾患の状態、年齢、性別、および体重、ならびに本化合物がその個体における所望の反応を引き出す能力などの因子によって変動する可能性がある。処置有効量は、本組成物の任意の毒性もしくは有害な作用を処置的に有益な作用が上回る量でもある。
本明細書で使用する用語「被験体」は、ヒトおよび非ヒト動物を含むことが意図されている。本発明の用語「非ヒト動物」には、全脊椎動物、例えば非哺乳動物（ニワトリ、両生類、爬虫類）ならびに非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ウシ、ブタなどの哺乳動物が含まれる。
本方法は、培養中、例えばインビトロもしくはエックスビボの細胞上で使用できる。本方法は、インビボ（例、処置もしくは予防）プロトコールの一部として、被験体内に存在する細胞について実施できる。インビボ実施形態のためには、接触させる工程は被験体内で実施され、タンパク質からｈＫ１への両方の結合を許容するために有効な条件下でｈＫ１結合タンパク質を投与する工程を含んでいる。
化合物を投与する方法は、「薬学的組成物」の項に記載されている。使用される化合物の適合する用量は、被験体の年齢および体重ならびに使用される特定の薬物に依存するであろう。本化合物は、例えば天然基質とｈＫ１との間の望ましくない相互作用を阻害する、もしくは減少させるための競合剤として使用できる。
ｈＫ１結合タンパク質は、様々なペイロード、例えば処置薬、放射線を放出する化合物、植物、真菌、もしくは細菌起源の分子、生物学的タンパク質、ならびにそれらの混合物を含む薬物を送達するためにも使用できる。ｈＫ１結合タンパク質は、そこでｈＫ１が局所化される被験体の領域へペイロードをターゲティングすることができる。
酵素的に活性な毒素およびそれらのフラグメントの例は、ジフテリア毒素Ａフラグメント、ジフテリア毒素の非結合活性フラグメント、外毒素Ａ（緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデクシンＡ鎖、α−サクリン、所定のシナアブラギリ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉ）タンパク質、所定のジアンシン（Ｄｉａｎｔｈｉｎ）タンパク質、ヤマゴボウ（Ｐｈｙｔｏｌａｃｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａ）タンパク質（ＰＡＰ、ＰＡＰＩＩおよびＰＡＰ−Ｓ）、モロディカ・カランチア（Ｍｏｒｏｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ）阻害剤、クルシン、クロチン、サボンソウ（Ｓａｐｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、ゲロニン、ミトギリン、レストロオクトシン、フェノマイシン、およびエノマイシンである。抗毒素の酵素活性ポリペプチドを調製する方法は、ＷＯ８４／０３５０８およびＷＯ８５／０３５０８に記載されている。抗体にコンジュゲートできる細胞毒性成分の例には、アドリアマイシン、クロラムブシル、ダウノマイシン、メトトレキサート、ネオカルチノスタチン、および白金が含まれる。
ポリペプチド毒素の場合は、組換え核酸技術を使用すると、ｈＫ１結合タンパク質および転写融合としての細胞毒素（もしくはそのポリペプチド成分）をコードする核酸を構築することができる。組換え核酸は、次に例えば細胞中で発現させられ、コードされた融合ポリペプチドが単離される。融合タンパク質は、例えば半減期をインビボで安定化させ、次に成分（例、ポリマー）へ付着させられる化合物の分子量を増加させる成分と物理的に結び付けることができる。
タンパク質を細胞毒性物質とコンジュゲートさせるための方法については以前に記載されている。クロラムブシルとタンパク質とをコンジュゲートさせることについては、例えば、Ｆｌｅｃｈｎｅｒ （１９７３） Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ， ９：７４１−７４５；Ｇｈｏｓｅ ｅｔ ａｌ． （１９７２） Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ， ３：４９５−４９９；およびＳｚｅｋｅｒｋｅ， ｅｔ ａｌ． （１９７２） Ｎｅｏｐｌａｓｍａ， １９：２１１−２１５を参照。ダウノマイシンおよびアドリアマイシンをタンパク質へコンジュゲートさせることについては、例えば、Ｈｕｒｗｉｔｚ， Ｅ． ｅｔ ａｌ． （１９７５） Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， ３５：１１７５−１１８１ ａｎｄ Ａｒｎｏｎ ｅｔ ａｌ． （１９８２） Ｃａｎｃｅｒ Ｓｕｒｖｅｙｓ， １：４２９−４４９を参照。タンパク質−リシンコンジュゲートを調製することについては、例えば、米国特許第４，４１４，１４８号およびＯｓａｗａ， Ｔ．， ｅｔ ａｌ． （１９８２） Ｃａｎｃｅｒ Ｓｕｒｖｅｙｓ， １：３７３−３８８ならびにその中に引用された参考文献を参照。結合方法は、ＥＰ ２２６ ４１９にも記載されている。
一部の実施形態では、ｈＫ１結合抗体が、例えば全長抗体としての他の成分へコンジュゲーションさせずに使用される。
慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）。ｈＫ１結合タンパク質は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の少なくとも１つの症状を改善するためにも使用できる。肺気腫は、慢性気管支炎とともに、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の一部である。肺気腫は、重篤な肺疾患および進行性であり、通常は高齢患者において発生する。ＣＯＰＤは、肺胞もしくは気嚢として知られる肺内の構造の過剰膨張を誘発する。肺胞の壁は崩壊して、結果として肺の呼吸能力の低下を引き起こす。この疾患を有する患者は、最初に息切れおよび咳を経験する可能性がある。ＣＯＰＤを評価するための１つの臨床指数は、肺胞隔膜損傷および肺気腫の尺度を測定する破壊指数であり、機能的異常、特別には弾性反跳の消失を密接に反映する肺破壊の感受性指数として提案されてきた。例えば、Ａｍ Ｒｅｖ Ｒｅｓｐｉｒ Ｄｉｓ １９９１ Ｊｕｌ；１４４（ｌ）：１５６−９を参照。本化合物は、患者における破壊指数を例えば統計的に有意な量、例えば対応する年齢および性別を適合させた個人の正常値の少なくとも１０、２０、３０、もしくは４０％減少させる、または少なくとも５０、４０、３０、もしくは２０％以内に減少させるために使用できる。
本組成物は、吸入もしくは他の肺送達様式のために調製できる。したがって、本明細書に記載した化合物は、肺組織への吸入によって投与できる。本明細書で使用する用語「肺組織」は気道の任意の組織を意味しており、他に特別に指示する場所を除いて、上気道および下気道の両方を含んでいる。
したがって、ｈＫ１結合タンパク質は、呼吸障害、例えば、喘息（例、アレルギー性および非アレルギー性喘息）；慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）；気道炎症、好酸球増加症、線維症および過剰粘液産生、例えば、嚢胞性線維症および肺線維症を含む状態に関連する１つまたは複数の症状を処置（減少、改善）または予防する方法において投与できる。
喘息。喘息の症状には、例えば、喘鳴、息切れ、気管支収縮、気道過敏性、肺能力の低下、線維症、気道炎症、および粘液産生が含まれる。ｈＫ１結合タンパク質は、喘息の少なくとも１つの症状、例えば上記の１つを改善もしくは予防するために使用できる。ｈＫ１結合タンパク質は、喘息を処置するための他の物質、例えば抗ＩｇＥ抗体、クロモリンナトリウムおよびネドクロミル、吸入ステロイド、ロイコトリエン修飾剤、持効性β−アゴニスト、経口ステロイド、およびテオフィリンと結び付けて投与することもできる。
慢性関節リウマチ（ＲＡ）。この障害は、関節および／または他の内臓器官の裏面における炎症を特徴とする。障害は、典型的には慢性であるが、再発を含むこともある。代表的な症状には、関節の炎症、腫脹、移動困難、疼痛、食欲不振、発熱、エネルギー損失、貧血、特別には圧力を受けるドメイン（例、肘の後側）における皮下のしこり（リウマチ性結節）が含まれる。ｈＫ１結合タンパク質は、慢性関節リウマチの少なくとも１つの症状を改善もしくは予防するために使用できる。
ｈＫ１結合タンパク質は、ＮＳＡＩＤおよびアスピリン、鎮痛剤、およびコルチコステロイドなどの慢性関節リウマチを処置するためのまた別の物質と結び付けて投与することができ、関節痛、強直および腫脹を減少させるのに役立つことができる。代表的な物質には、メトトレキサート、レフルノミド、Ｄ−ペニシラミン、スルファサラジン、金治療、ミノサイクリン、アザチオプリン、ヒドロキシクロロキン（およびその他の抗マラリア薬）、シクロスポリン、Ｐｒｏｓｏｒｂａ治療、および生物学的物質などの疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）が含まれる。
多発性硬化症（ＭＳ）。多発性硬化症は、炎症およびミエリン鞘の消失を特徴とする中枢神経系疾患である。ＭＳもしくは臨床的に推定されるＭＳを有する患者は、ＭＳの診断に関する研究会によって規定された臨床的に確実なＭＳの診断を確定する基準（Ｐｏｓｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｎ． Ｎｅｕｒｏｌ． １３：２２７， １９８３）によって同定することができる。手短には、臨床的に確実なＭＳを有する個体は、２回の発作および２カ所の病変の臨床的証拠または１カ所の病変の臨床的証拠および／または別の離れた病変の基礎臨床的証拠のどちらかを有していた。確実なＭＳは、２回の発作の証拠および脳脊髄液中のＩｇＧのオリゴクローナルバンドの証拠または発作、２カ所の病変の臨床的証拠および脳脊髄液中のＩｇＧのオリゴクローナルバンドの組み合わせによって診断することもできる。
ＭＳもしくは臨床的に推定されるＭＳを有する患者には、ＭＳの少なくとも１つの症状を改善するために、ｈＫ１結合タンパク質、例えばｈＫ１結合抗体を投与することができる。ｈＫ１結合タンパク質は、また別の物質、例えば、ＩＦＮβ−１ａおよびＩＦＮβ−１ｂ；ミエリン塩基性タンパク質を刺激するタンパク質（例えば、合成タンパク質、例えば酢酸グラチラマー（ｇｌａｔｉｒａｍｅｒ ａｃｅｔａｔｅ）、ＣＯＰＡＸＯＮＥ（登録商標））；コルチコステロイド；もしくはミトキサントロンと結び付けて投与することもできる。
多発性硬化症の有効な処置は、数種の様々な方法で試験できる。任意の以下の基準を満たすことは有効な処置であることを証明する。３つの主要な基準が使用されている：ＥＤＳＳ（拡大知能障害状態評価スケール）、増悪の外観またはＭＲＩ（磁気共鳴イメージング）。ＥＤＳＳは、ＭＳに起因する臨床的障害を等級付けするための手段である（Ｋｕｒｔｚｋｅ， Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ３３：１４４４， １９８３）。８つの機能系が神経学的障害のタイプおよび重症度について評価される。手短には、処置前には、患者は以下の系における障害について評価される：錘体、小脳、脳幹、感覚、腸および膀胱、視覚、大脳、およびその他。フォローアップ検査は、規定間隔で実施する。スケールは、０（正常）〜１０（ＭＳに起因する死亡）の範囲に及ぶ。１つの完全ステップの減少は、本発明の状況における有効な処置を規定する（Ｋｕｒｔｚｋｅ， Ａｎｎ． Ｎｅｕｒｏｌ． ３６：５７３−７９， １９９４）。増悪は、ＭＳを原因とし、適切な新規の神経学的異常が付随する新規の症状の出現であると定義されている（ＩＦＮＢ ＭＳ試験グループ、上記）。さらに、増悪は、少なくとも２４時間持続し、少なくとも３０日間の安定性もしくは向上が先行しなければならない。手短には、患者には医師による標準的な神経学的検査が行われる。増悪は、神経学的評価スケール（Ｓｉｐｅ ｅｔ ａｌ．， Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ３４：１３６８， １９８４）における変化によって軽度、中等度、または重度のいずれかである。増悪を示さない患者の年間増悪率および比率が決定される。治療は、これらの測定値のいずれかについて、処置群とプラセボ群との間で増悪を示さない患者の比率における統計的有意差がある場合に有効であると見なされる。さらに、初回増悪までの時間ならびに増悪の持続時間および重症度もまた測定できる。この関連での治療としての有効性の尺度は、対照群と比較した処置群における初回増悪までの時間もしくは期間および重症度における統計的有意差である。ＭＲＩを使用すると、ガドリニウム−ＤＴＰＡ増強イメージング（ＭｃＤｏｎａｌｄ ｅｔ ａｌ． Ａｎｎ． Ｎｅｕｒｏｌ． ３６：１４， １９９４）を用いて活動性病変を、またはＴ２強調技術を用いて病変の場所および程度を測定することができる。
多発性硬化症に関連する代表的な症状には、視神経炎、複視、眼振、眼ディスメトリア、核間性眼筋麻痺、運動および音響閃光、求心性瞳孔反応欠損、麻痺、単不全麻痺、不全対麻痺、片側不全麻痺、四肢不全麻痺、麻痺、対麻痺、半側麻痺、四肢麻痺、四肢不全麻痺、痙縮、構音障害、筋萎縮症、スパズム、痙攣、低血圧、クローヌス、ミオクローヌス、ミオキミア（筋波動症）、レストレスレッグス症候群、尖足、機能不全性反射、知覚異常症、感覚脱出、神経痛、神経因性および神経原性疼痛、レルミット病、固有受容性機能不全、三叉神経痛、運動失調、企図振戦、ディスメトリア、前庭性失調、眩暈、発語失調、失調症、拮抗運動反復不全、頻尿、膀胱痙縮、弛緩性膀胱、排尿筋−括約筋共同運動障害、勃起障害、無オルガスムス症、不感症、便秘、便意促迫、便失禁、抑うつ、認知機能障害、痴呆、気分変動、情動不安定、多幸症、双極性症候群、不安、失語症、不全失語症、疲労、ｕｈｔｈｏｆｆ症状、胃食道逆流、および睡眠障害が含まれる。
変形性関節症。変形性関節症は、変形性関節疾患である。この疾患は、関節内の軟骨の破壊を特徴とするので、骨が相互に対して摩擦することを引き起こし、疼痛および運動損失を生じさせる。ｈＫ１結合タンパク質は、変形性関節症の少なくとも１つの症状を改善もしくは予防するために使用できる。ｈＫ１結合タンパク質は、例えばコルチコステロイドもしくはＮＳＡＩＤなどの変形性関節症を処置するためのまた別の物質と結び付けて投与することができる。
血管新生関連性および腫瘍性障害
１つの実施形態では、ｈＫ１結合タンパク質は、血管新生または新生物および腫瘍増殖に関連する他のプロセスを変調するために被験体へ投与できる。ｈＫ１結合タンパク質、特別にはｈＫ１酵素活性を阻害するｈＫ１結合タンパク質は、腫瘍血管新生および／または癌細胞侵襲および転移を遮断するために使用できる。ｈＫ１阻害剤抗体は強力かつ選択的阻害剤であり、したがって腫瘍治療にとって理想的な物質である。
例えば、ｈＫ１結合タンパク質は血管新生（例、制御できない、もしくは望ましくない血管新生）−血管奇形および心血管障害（例、アテローム硬化症、再狭窄および動静脈奇形）、慢性炎症性疾患（例、糖尿病、炎症性腸疾患、乾癬および慢性関節リウマチ）、異所性創傷修復（例、エキシマレーザーによる眼手術後に観察される修復）、循環器障害（例、レイノー現象）、クレスト症候群（例、石灰症、食道運動障害）、皮膚障害（例、ポートワイン様斑、動脈性潰瘍、全身性脈管炎および強皮症）、または眼障害（例、血管新生疾患、血管新生緑内障、角膜血管新生、トラコーマ、糖尿病性網膜症および近視性変性によって誘発される失明）などに関連する血管新生を減少させるために使用できる。例えば、Ｃａｒｍｅｌｉｅｔ ａｎｄ Ｊａｉｎ， ２０００， Ｎａｔｕｒｅ， ４０７：２４９−２５７を参照。
詳細には、ｈＫ１結合タンパク質を使用すると、新生物、例えば癌および腫瘍増殖、例えば良性、悪性、もしくは転移性腫瘍の増殖に関連する血管新生を減少させることができる。
癌性障害の例には、充実性腫瘍、軟組織腫瘍、および転移性病変が含まれるが、それらに限定されない。例には、例えば肺、乳房、リンパ節、消化管（例、大腸）、および泌尿生殖管（例、腎、尿路上皮細胞）、咽頭、前立腺、卵巣などの様々な器官系の肉腫、腺癌腫、および癌腫ならびに大多数の大腸癌、直腸癌、腎細胞癌、肝臓癌、肺、咽頭の非小細胞性癌、小腸の癌、食道およびその他の癌などの悪性腫瘍を含む腺癌が含まれる。
処置できる代表的な充実性腫瘍には、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、骨膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、大腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮細胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、肝腫瘍、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胎生期癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、睾丸腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞種、髄芽細胞種、頭蓋咽頭腫、上衣細胞腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、および網膜芽腫が含まれる。
ｈＫ１結合タンパク質は、癌、例えば、呼吸器系癌、消化器系癌、泌尿生殖器系癌、精巣癌、乳癌、前立腺癌、内分泌系癌、および黒色腫を含む上皮もしくは内分泌組織の悪性腫瘍を処置するためにも使用できる。代表的な癌には、子宮頚部、肺、前立腺、乳房、頭頚部、大腸および卵巣の組織の腺癌、癌腫が含まれる。
ｈＫ１結合タンパク質は、例えば間葉起源の悪性腫瘍のような肉腫を処置するためにも使用できる。
本方法は、造血起源、例えば脊髄、リンパ球もしくは赤血球系統から発生する造血／新生細胞、またはそれらの前駆細胞の増殖を阻害するためにも使用できる。例えば、本方法は、急性前骨髄性白血病（ＡＰＭＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）を含む様々な骨髄性障害を処置するために使用できる（Ｖａｉｃｋｕｓ， Ｌ．， １９９１， Ｃｒｉｔ． Ｒｅｖ． ｉｎ Ｏｎｃｏｌ．／Ｈｅｍｏｔｏｌ． １１：２６７−２９７において精査されている）。本方法によって処置できるリンパ球性悪性腫瘍には、Ｂ系統ＡＬＬおよびＴ系統ＡＬＬを含む急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、前リンパ球性白血病（ＰＬＬ）、ヘアリー細胞白血病（ＨＬＬ）およびワルデンシュトレーム（Ｗａｌｄｅｎｓｔｒｏｍ）マクログロブリン血症（ＷＭ）が含まれるが、それらに限定されない。悪性リンパ腫の追加の形態には、非ホジキンリンパ腫およびその変異体、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫（ＡＴＬ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）、大顆粒リンパ球性白血病（ＬＧＦ）およびホジキン病が含まれるが、それらに限定されない。
ｈＫ１結合タンパク質は、腫瘍性／転移性障害を処置するためのまた別の物質と結び付けて投与することができる。そのような他の物質の例には：
（ｉ）他の抗血管新生剤（例えば、ｌｉｎｏｍｉｄｅ、インテグリンαｖβ３機能の阻害剤、アンジオスタチン、ラゾキサン）；
（ｉｉ）抗エストロゲン（例えば、タモキシフェン、トレミフェン、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、ヨードキシフェン）、プロゲストゲン（例えば、酢酸メゲストロール）、アロマターゼ阻害剤（例えば、アナストロゾール、レトロゾール、ボラゾール、エキセメスタン）、抗ホルモン、抗プロゲストゲン、抗アンドロゲン（例えば、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、酢酸シプロテロン）、ＬＨＲＨアゴニストおよびアンタゴニスト（例えば、酢酸ゴセレリン、ロイプロリド）、テストステロン５α−ジヒドロレダクターゼ（例えば、フィナステリド）、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、抗侵襲剤（例えば、マリマスタットのようなメタロプロテイナーゼ阻害剤およびウロキナーゼプラスミノーゲン活性化因子受容体機能の阻害剤）および増殖因子機能の阻害剤（そのような増殖因子には、例えば、ＥＧＦ、ＦＧＦ、血小板由来増殖因子および幹細胞増殖因子が含まれ、そのような阻害剤には増殖因子抗体、ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）（ベバジズマブ）およびＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標）（セツキシマブ）などの増殖因子受容体抗体；チロシンキナーゼ阻害剤およびセリン／トレオニンキナーゼ阻害剤が含まれる）、細胞増殖抑制剤；および
（ｉｉｉ）臨床腫瘍学において使用される、代謝拮抗物質（例えば、メトトレキセートのような抗葉酸薬、５−フルオロウラシル、プリンおよびアデノシンアナログ、シトシンアラビノシドのようなフルオロピリミジン）；挿入抗腫瘍性抗生物質（例えばドキソルビシン、ダウノマイシン、エピルビシンおよびイダルビシンのようなアントラサイクリン、マイトマイシン−Ｃ、ダクチノマイシン、ミトラマイシン）；白金誘導体（例えば、シスプラチン、カルボプラチン）；アルキル化剤（例えば、ナイトロジェンマスタード、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、シクロホスファミド、イフォスファミドニトロソ尿素、チオテパ；抗有糸分裂剤（例えば、ビンクリスチンのようなビンカアルカロイドおよびＴＡＸＯＬ（登録商標）（パクリタキセル）、ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）（ドセタキセル）のようなタキソールおよびエポチロンアナログ、ディスコデルモライドアナログ、およびエポチロン（ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅ）アナログなどの新規の微小管薬）；トポイソメラーゼ阻害薬（例えば、エトポシドおよびテニポシド、アムサクリン、トポテカンのようなエピポドフィロトキシン）；細胞周期阻害剤（例えば、フラボピリドール）；生物学的応答修飾剤およびＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標）（ボルテゾミブ）などのプロテアーゼ阻害剤などの抗増殖／抗腫瘍薬およびそれらの組み合わせが含まれる。
ＶＥＧＦクラスの増殖因子の代表的なモジュレーター
様々な物質を使用すると、例えばＶＥＧＦ活性を変調するために、ＶＥＧＦクラス増殖因子の活性を変調することができる（例えば、タンパク質自体、その受容体、または他のシグナリング成分の活性を変調することによって）。そのような物質は、血管新生を変調し、腫瘍性および／または転移性障害を処置するためにｈＫ１結合タンパク質と組み合わせて投与することができる。
物質は小分子阻害剤（例、ペプチド結合を含んでいない化合物および／または分子量が７００ダルトン未満の化合物）であってよい。その他の物質には、例えばＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ−Ｃ、またはその受容体へ結合する小分子化合物もしくはタンパク質のような化合物が含まれる。さらに他の物質がＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ−Ｃ、もしくはそれらの受容体の発現もしくは活性を変調する。代表的物質には以下のものが含まれる。
ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標））は、ＶＥＧＦへ結合する抗体である。ベバシズマブは、所定の癌の処置について承認されている。ＵＳ２００４−０１３３３５７は、ＶＥＧＦを阻害できる追加の抗体について記載している。
ＵＳ２００３−０１２００３８は、阻害活性を有する可能性がある可溶性ＶＥＧＦ受容体フラグメントについて記載している。２００４−００５４１４３は、阻害活性を有するＶＥＧＦの小ペプチドフラグメントについて記載している。
ＶＥＧＦ活性の多数の小分子阻害剤は知られている。２００４−０１４７４４９は、４−クロロフェニル）［４−（４−ピリジルメチル）−フタラジン−１−イル］コハク酸水素アンモニウムを代表とする１クラスの化合物を含むＶＥＧＦ−Ｒ阻害剤について記載している。
ＳＵ５４１６（セマキサニブ）は、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）受容体２およびＫＩＴ受容体チロシンキナーゼの小分子阻害剤である。例えば、Ｈｅｙｍａｃｈ ｅｔ ａｌ． Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ２００４ Ｓｅｐ １；１０（１７）：５７３２−４０を参照されたい。ＳＵ１１２４８は、また別の代表的な阻害剤である。例えば、Ｍｅｎｄｅｌ （２００３） Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ９（１）：３２７−３７を参照されたい。
４−［４−（１−アミノ−１−メチルエチル）フェニル］−２−［４−（２−モルホリン−４−イル−エチル）フェニルアミノ］ピリミジン−５−カルボニトリル（ＪＮＪ−１７０２９２５９）および５−シアノピリミジンの構造クラス内の関連化合物は、血管内皮増殖因子受容体２（ＶＥＧＦ−Ｒ２）ならびに血小板由来増殖因子受容体、線維芽細胞成長因子受容体、ＶＥＧＦ−Ｒ１、およびＶＥＧＦ−Ｒ３などの血管新生に関係する他のチロシンキナーゼの経口で利用できる、選択的なナノモル阻害剤である。ナノモルレベルで、ＪＮＪ−１７０２９２５９は、血管新生のラット大動脈環モデルにおける増殖／転移、血管新芽形成、および漿尿膜アッセイにおける新規静脈および動脈の発生を阻害することができる。例えば、Ｅｍａｎｕｅｌ ｅｔ ａｌ． （２００４） Ｍｏｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． ２００４ Ｓｅｐ；６６（３）：６３５−４７を参照されたい。
さらにまた別の小分子阻害剤は、ＶＥＧＦ−Ｒ２チロシンキナーゼ活性を阻害するが、他の増殖因子への追加の阻害作用を備えるＺＤ６４７４である。例えば、Ｓａｎｄｓｔｒｏｍ ｅｔ ａｌ． Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ ａｄｖａｎｃｅ ｏｎｌｉｎｅ ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ， １０ Ａｕｇｕｓｔ ２００４；ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓｊ．ｂｊｃ．６６０２１０８ｗｗｗ．ｂｊｃａｎｃｅｒ．ｃｏｍを参照されたい。
ＰＴＫ７８７／ＺＫ２２２５８４は、ＶＥＧＦ受容体チロシンキナーゼ活性のまた別の小分子阻害剤である。（例えば、Ｔｈｏｍａｓ ｅｔ ａｌ． （２００３） Ｓｅｍｉｎ Ｏｎｃｏｌ． ２００３ Ｊｕｎ；３０ （３ Ｓｕｐｐｌ ６）：３２−８を参照されたい）。Ｍｏｈａｍｍａｄｉ ｅｔ ａｌ． （１９９８） ＥＭＢＯ Ｊｏｕｒｎａｌ Ｖｏｌ． １７， ｐｐ．５８９６−５９０４， １９９８は、ＦＧＦおよびＶＥＧＦ受容体のチロシンキナーゼ活性を選択的に阻害するＰＤ１７３０７４と称するピリド［２，３−ｄ］ピリミジンクラスの分子について記載している。マウスにおけるＰＤ１７３０７４の投与は、明白な毒性を伴わずに血管新生を効果的に遮断できる。
ＵＳ２００２−０１６５１７４は、ＶＥＧＦを損害するオリゴヌクレオチドについて記載している。アンチセンスオリゴヌクレオチドを使用すると、ＶＥＧＦおよびＶＥＧＦ−Ｃレベルを低下させることができる。そのようなオリゴヌクレオチドは、癌細胞の増殖、例えば中皮腫細胞増殖を減少させることができる。ＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦＲ−２）およびＶＥＧＦ−Ｃ（ＶＥＧＦＲ−３）もまた癌細胞増殖を緩徐化させることが観察されている。ＵＳ２００４−０１３８１６３は、ＶＥＧＦを阻害できるｓｉＲＮＡについて記載している。アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、およびリボザイムなどの核酸の阻害剤を使用するとＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ−Ｃ、もしくはそれらの受容体の発現を変調することができる。例えば、Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ２００３ Ｍａｙ １；１０４（５）：６０３−１０を参照されたい。
他の方法には、ＶＥＧＦを生成する細胞を殺滅もしくは阻害することが含まれる。ＶＥＧＦを発現する細胞にとって高度に毒性であるジフテリア毒素−ＶＥＧＦ融合タンパク質（ＤＴ−ＶＥＧＦ）は、中皮腫細胞の増殖を阻害した。例えば、Ｂｌｏｏｄ ２００１ Ｓｅｐ １５；９８（６）：１９０４−１３を参照されたい。
ＶＥＧＦクラスの分子の阻害剤についても、例えばＶｅｒｈｅｕｌ ｅｔ ａｌ． （２００３） Ｄｒｕｇｓ Ｔｏｄａｙ （Ｂａｒｃ．）． ２００３；３９ Ｓｕｐｐｌ Ｃ：８１−９３において精査されている。
吸入
ｈＫ１結合活性を含む組成物は、吸入もしくは他の肺送達の様式のために調製できる。したがって、本明細書に記載した化合物は、肺組織へ吸入によって投与できる。本明細書で使用する用語「肺組織」は、気道の任意の組織を意味しており、特別に指示しない限り、上気道および下気道の両方を含んでいる。ｈＫ１結合抗体は、肺疾患を処置するための現行様式の１つまたは複数と組み合わせて投与できる。
１つの実施例では、本化合物はネブライザーのために調製される。１つの実施形態では、本化合物は凍結乾燥形（例、室温で）で貯蔵することができ、吸入前に溶液中で再構成することができる。
医療器具、例えばインヘラーを用いて吸入用の化合物を調製することもまた可能である。例えば、米国特許第６，１０２，０３５号（パウダーインヘラー）および第６，０１２，４５４号（ドライパウダーインヘラー）を参照されたい。インヘラーは、貯蔵のために適合するｐＨにある活性化合物のための個別区画および中和用バッファーのためのまた別の区画ならびに噴霧化の直前に本化合物と中和用バッファーとを結合するための機構を含んでいてよい。１つの実施形態では、インヘラーは計量式インヘラーである。
肺の通気道へ局所的に薬物を送達するために使用される３種の一般的システムには、ドライパウダーインヘラー（ＤＰＩ）、計量式インヘラー（ＭＤＩ）およびネブライザーが含まれる。吸入投与の中で最も人気のある方法であるＭＤＩは、可溶化形または分散液として医薬品を送達するために使用できる。典型的には、ＭＤＩは、器具を作動させると噴霧化された医薬品を軌道内へ推し進めるフレオン（Ｆｒｅｏｎ）または他の相当に高度の蒸気圧噴射剤を含んでいる。ＭＤＩとは相違して、ＤＰＩは、一般にはドライパウダー形にある医薬品を肺の中へ導入するために完全に患者の吸気労作に基づいている。ネブライザーは、溶液にエネルギーを付与することによって吸入される医薬品のエーロゾルを形成する。フルオロケミカル溶媒を用いた液体換気もしくは肺洗浄中の薬物の直接的肺送達もまた検討されてきた。これらやその他の方法を使用すると、ｈＫ１結合抗体を送達することができる。１つの実施形態では、ｈＫ１結合抗体はポリマー、例えば本化合物を安定化させる、または半減期を増加させるポリマーと結び付けられる。
例えば、吸入によって投与するためには、ｈＫ１結合抗体は、加圧式容器または適切な噴射剤を含有するディスペンサーまたはネブライザーからエーロゾルスプレーの形状で送達される。本化合物は、乾燥粒子の形状または液体の形状であってもよい。本化合物を含む粒子は、例えばスプレー乾燥によって、電荷中和剤を備えるｈＫ１結合抗体の水溶液を乾燥させ、次に乾燥粉末から粒子を作製することによって、または有機修飾因子中の水溶液を乾燥させ、次に乾燥粉末から粒子を作製することによって調製することができる。
本化合物は、適切な噴射剤、例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の適切な気体を使用して、便宜的には加圧パックもしくはネブライザーからのエーロゾルスプレーの形状で送達することができる。加圧エーロゾルの場合には、単位用量は、計量した量を送達するための弁を用意することによって決定できる。インヘラーもしくは吸入器に使用するためのカプセルおよびカートリッジは、ｈＫ１結合抗体および粒子が調製された粒子である場合はラクトースもしくはスターチなどの適切なパウダーベースとのパウダーミックスを含有するように調製できる。調製もしくは未調製化合物に加えて、調製もしくは未調製化合物の送達および分散を促進するために、１００％ ＤＰＰＣなどの他の物質もしくは他の界面活性剤をｈＫ１結合抗体と混合することができる。乾燥粒子を調製する方法は、例えばＰＣＴ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ＷＯ０２／３２４０６に記載されている。
ｈＫ１結合抗体は、エーロゾル送達のために、例えば投与されると迅速に吸収され、急速な局所性もしくは全身性処置結果を生じさせることができるように、乾燥エーロゾル粒子として調製することができる。投与は、投与の２分、５分、１時間、または３時間以内に検出可能な活性を提供するように調整することができる。一部の実施形態では、ピーク活性にはいっそうより迅速に、例えば３０分以内または１０分間以内にさえ達成できる。ｈＫ１結合抗体は、生物学的半減期がより長くなるように調製することができ（例えばＰＥＧなどのポリマーと結び付けることによって）、例えば本化合物が肺から循環中に入り、他の器官または特定の標的器官へ分布するように、他の投与様式の代替法として使用できる。
１つの実施形態では、ｈＫ１結合抗体は、ポリペプチドの質量の少なくとも５％が下気道もしくは肺深部へ送達されるような量で送達される。肺深部は、極めて富裕な毛細管網を有している。肺胞気腔から毛細管内腔を分離する呼吸膜は極めて薄く（≦６μｍ）、極めて透過性である。さらに、肺胞表面を内張している液体層は肺界面活性剤が豊富である。他の実施形態では、ｈＫ１結合抗体の組成物の少なくとも２％、３％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、もしくは８０％が下気道または肺深部へ送達される。これらの組織の一方または両方への送達は、本化合物の効率的吸収および高バイオアベイラビリティを生じさせる。１つの実施形態では、本化合物は、例えばインヘラーもしくはネブライザーを用いて、計量された用量で提供される。例えば、本化合物は、少なくとも約０．０２、０．１、０．５、１、１．５、２、５、１０、２０、４０、もしくは５０ｍｇ／回以上の単位用量形で送達される。
バイオアベイラビリティ率は、次のように計算できる：バイオアベイラビリティ率＝（ＡＵＣｎｏｎ−ｉｎｖａｓｉｖｅ／ＡＵＣｉ．ｖ． ｏｒ ｓ．ｃ．）×（ｄｏｓｅｉ．ｖ． ｏｒ ｓ．ｃ．／ｄｏｓｅｎｏｎ−ｉｎｖａｓｉｖｅ）×１００。
必ずしも必要ではないが、界面活性剤などの送達強化剤を使用すると、肺送達をいっそう増強することができる。本明細書で使用する「界面活性剤」は、２つの不混和性層間の界面と相互作用することによって薬物の吸収を促進する親水性および脂肪親和性成分を有する化合物を意味する。界面活性剤は、例えば粒子凝集の減少、マクロファージの食作用の減少などのいくつかの理由から乾燥粒子において有用である。肺界面活性剤と結合すると、ＤＰＰＣなどの界面活性剤は本化合物の核酸を大きく促進するであろうから、本化合物のより効率的吸収を達成できる。界面活性剤は当技術分野においてよく知られており、ホスホグリセリド、例えばホスファチジルコリン、Ｌ−α−ホスファチジルコリンジパルミトイル（ＤＰＰＣ）およびジホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）；ヘキサデカノール；脂肪酸；ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）；ポリオキシエチレン−９−；アウリルエーテル；パルミチン酸；オレイン酸；トリオレイン酸ソルビタン（Ｓｐａｎ ８５）；グリココール酸；サーファクチン；ポロキサマー；ソルビタン脂肪酸エステル；トリオレイン酸ソルビタン；チロキサポール；およびリン脂質が含まれるが、それらに限定されない。
１つの実施形態では、本明細書に提供する濃縮物および希釈組成物を含む本組成物において使用するための界面活性剤は、高ＨＬＢ（親水性―脂肪親和性平衡）界面活性剤である。そのような高ＨＬＢ界面活性剤は、一般に１０より大きなＨＬＢを有する。ＨＬＢは、界面活性剤または界面活性剤の混合物の極性の任意スケール上の尺度である。１つの実施形態では、本明細書に提供する組成物は、重量で約３％〜約８５％の高ＨＬＢ界面活性剤を含有する。１つの実施形態では、高ＨＬＢ界面活性剤は、トコフェリルポリエチレングリコール１０００コハク酸塩（ＴＰＧＳ）などのビタミンＥのエトキシル化誘導体である。ＴＰＧＳは約１５〜１９のＨＬＢを有する。例えば、ＵＳ２００４−００２３９３５を参照されたい。
安定化および貯留
１つの実施形態では、ｈＫ１結合抗体は循環中、例えば血液、血清、リンパ、気管支肺胞洗浄液、またはその他の組織中でのその安定化および／または貯留を例えば少なくとも１．５、２、５、１０、もしくは５０倍改善する成分と物理的に結び付けられている。
例えば、ｈＫ１結合抗体は、ポリマー、例えばポリアルキレンオキシドもしくはポリエチレンオキシドなどの実質的に非抗原性ポリマーと結び付けることができる。適切なポリマーは、重量では実質的に変動するであろう。約２００〜約３５，０００（または約１，０００〜約１５，０００、および約２，０００〜約１２，５００）の範囲内の数平均分子量を有するポリマーを使用できる。
例えば、ｈＫ１結合抗体は、水溶性ポリマー、例えば親水性ポリビニルポリマー、例えばポリビニルアルコールおよびポリビニルピロリドンへコンジュゲートさせることができる。そのようなポリマーの非限定的リストには、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）もしくはポリプロピレングリコール、ポリオキシエチレン化ポリオール、それらのコポリマー、およびブロックコポリマーの水溶性が維持されていることを条件にそれらのブロックコポリマーなどのポリアルキレンオキシドホモポリマーが含まれる。追加の有用なポリマーには、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン、ならびにポリオキシエチレンおよびポリオキシプロピレンのブロックコポリマー（Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ）などのポリオキシアルキレン；ポリメタクリレート；カルボマー；糖単量体であるＤ−マンノース、Ｄ−およびＬ−ガラクトース、フコース、フルクトース、Ｄ−キシロース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−グルクロン酸、シアル酸、Ｄ−ガラクツロン酸、Ｄ−マンヌロン酸（例、ポリマンヌロン酸、もしくはアルギン酸）、Ｄ−グルコサミン、Ｄ−ガラクトサミン、Ｄ−グルコースならびにホモポリ多糖およびラクトース、アミロペクチン、デンプン、ヒドロキシエチルデンプン、アミロース、デキストラン硫酸、デキストラン、デキストリン、グリコーゲン、もしくは酸性ムコ多糖、例えばヒアルロン酸などのヘテロポリ多糖を含むノイラミン酸を含む分枝状もしくは非分枝状多糖類；ポリソルビトールおよびポリマンニトールなどの糖アルコールのポリマー；ヘパリンもしくはヘパランが含まれる。
その他の化合物を、同一ポリマー、例えば細胞毒素、標識、または他のターゲッティング剤、例えばまた別のｈＫ１結合抗体もしくは非関連性リガンドへ結合させることもできる。架橋結合のためには、モノ活性化アルコキシ基末端ポリアルキレンオキシド（ＰＡＯ）、例えば、モノメトキシ基末端ポリエチレングリコール（ｍＰＥＧ）；Ｃ１−４アルキル基末端ポリマー；およびビス活性化ポリエチレンオキシド（グリコール）を使用できる。例えば、米国特許第５，９５１，９７４号を参照されたい。
１つの実施形態では、リガンドへ架橋結合する前のポリマーは、水溶性である必要はないが、水溶性であるのが好ましい。一般に、架橋結合後は、生成物は水溶性であり、例えば少なくとも約０．０１ｍｇ／ｍＬ、およびより好ましくは少なくとも約０．１ｍｇ／ｍＬ、およびさらになおより好ましくは少なくとも約１ｍｇ／ｍＬの水溶性を示す。さらに、ポリマーはコンジュゲート形で高度に免疫原性であってはならず、さらにそのコンジュゲートがそのような経路で投与することを意図されている場合は、静脈内注入、エーロゾル化、または注射と不適合である粘性を有していてはならない。
１つの実施形態では、ポリマーは反応性である単一基しか含有していない。これは、リガンド分子が相互に架橋結合するのを回避するのに役立つ。しかし、リガンド分子間の架橋結合を減少させるために反応条件を最高化する、または、または実質的に均質な誘導体を回収するためにゲル濾過もしくはイオン交換クロマトグラフィーを通して反応生成物を精製することもまた本発明の範囲内に含まれる。他の実施形態では、ポリマーはポリマー骨格へ複数のリガンドを結合させるために２つ以上の反応基を含有している。同様に、ゲル濾過もしくはイオン交換クロマトグラフィーを使用すると、実質的に均質な形態で所望の誘導体を回収することができる。
ポリマーの分子量は、約５００，０００Ｄまでの範囲に及んでよいが、好ましくは少なくとも約２０，０００Ｄ、もしくは少なくとも約３０，０００Ｄ、または少なくとも約４０，０００Ｄである。選択された分子量は、達成すべきコンジュゲートの有効サイズ、ポリマーの性質（例、直鎖状もしくは分枝状などの構造）、および誘導体化度などに依存する可能性がある。
共有結合を使用すると、ｈＫ１結合抗体をポリマーへ結合させる、例えばリガンドのＮ末端アミノ基およびリガンドのリシン残基上で見いだされるεアミノ基、ならびに他のアミノ、イミノ、カルボキシル、スルフヒドリル、ヒドロキシル、もしくは他の親水性基へ架橋結合させることができる。ポリマーは、多官能（通常は二官能）架橋剤を使用せずにｈＫ１結合抗体へ直接的に共有結合させられてよい。アミノ基への共有結合は、塩化シアヌル、カルボニルジイミダゾール、アルデヒド反応基（ＰＥＧアルキコシド＋ブロモアセトアルデヒドのジエチルアセチル；ＰＥＧ＋ＤＭＳＯおよび酢酸無水物、またはＰＥＧ塩化物＋４−ヒドロキシベンズアルデヒドのフェノキシド、活性化スクシンイミジルエステル、活性化ジチオカルボン酸塩ＰＥＧ、２，４，５−トリクロロフェニルクロロフォルメートもしくはＰ−ニトロフェニルクロロフォルメート活性化ＰＥＧ）に基づく知られている化学反応によって遂行される。カルボキシル基は、カルボジイミドを用いてＰＥＧ−アミンを結合させることによって誘導体化できる。スルフヒドリル基は、マレイミド置換ＰＥＧ（例、アルコキシ−ＰＥＧアミン＋スルホスクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート）（ＷＯ９７／１０８４７もしくはＳｈｅａｒｗａｔｅｒ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ社（アラバマ州ハンツヴィルから市販で入手できるＰＥＧ−マレイミド））へ結合させることによって誘導体化することができる。または、リガンド上の遊離アミノ基（例、リシン残基上のεアミノ基）は、例えばＰｅｄｌｅｙ ｅｔ ａｌ．， Ｂｒ． Ｊ． Ｃａｎｃｅｒ， ７０：１１２６−１１３０ （１９９４）に記載されているように、２−イミノ−チオラン（Ｔｒａｕｔ試薬）とチオール化し、次にＰＥＧのマレイミド含有誘導体へ結合させることができる。
ｈＫ１結合抗体へ結合させることのできる官能化ＰＥＧポリマーは、例えば、Ｓｈｅａｒｗａｔｅｒ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ社（アラバマ州ハンツヴィル）から入手できる。そのような市販で入手できるＰＥＧ誘導体には、例えば、アミノ−ＰＥＧ、ＰＥＧアミノ酸エステル、ＰＥＧ−ヒドラジド、ＰＥＧ−チオール、ＰＥＧ−コハク酸塩、カルボキシメチル化ＰＥＧ、ＰＥＧ−プロピオン酸、ＰＥＧアミノ酸、ＰＥＧスクシンイミジルコハク酸塩、ＰＥＧスクシンイミジルプロピオン酸塩、カルボキシメチル化ＰＥＧのスクシンイミジルエステル、ＰＥＧのスクシンイミジル炭酸塩、アミノ酸ＰＥＧのスクシンイミジルエステル、ＰＥＧ−オキシカルボニルイミダゾール、ＰＥＧ−ニトロフェニル炭酸塩、ＰＥＧトレシレート、ＰＥＧ−グリシジルエーテル、ＰＥＧ−アルデヒド、ＰＥＧビニルスルホン、ＰＥＧ−マレイミド、ＰＥＧ−オルソピリジル−ジスルフィド、ヘテロ官能性ＰＥＧ、ＰＥＧビニル誘導体、ＰＥＧシラン、およびＰＥＧホスホリドが含まれる。これらのＰＥＧ誘導体を結合させるための反応条件は、ｈＫ１結合抗体、所望のＰＥＧ化度、および利用されるＰＥＧ誘導体に依存して変動してよい。ＰＥＧ誘導体の選択に含まれる一部の因子には、所望の結合点（リシンもしくはシステインＲ基など）、誘導体の親水性安定性および反応性、結合の安定性、毒性および抗原性、分析のための適合性などが含まれる。任意の特定の誘導体を使用するための特別の取扱説明書は、製造業者から入手できる。
ｈＫ１結合抗体およびポリマーのコンジュゲートは、例えば、ゲル濾過もしくはイオン交換クロマトグラフィー、例えばＨＰＬＣによって未反応出発物質から分離することができる。コンジュゲートの異種は、同一方法で相互から精製される。相違する種（例えば、１つまたは２つのＰＥＧ残基を含有する）の分解もまた、未反応アミノ酸のイオン特性における差のために可能である。例えば、ＷＯ９６／３４０１５を参照されたい。
以下は、ｈＫ１結合タンパク質、特別にはｈＫ１阻害剤を同定するための１つの代表的な戦略である。
１） ＫＬＫ１ ｃＤＮＡ
ＫＬＫ１ ｃＤＮＡを哺乳動物細胞、大腸菌、およびＰ．パストリス中で発現させるために発現ベクター内へサブクローニングした。サブクローニングした物質の配列は、ＤＮＡシーケンシングによって確証した。
２） Ｐ．パストリス中でのタンパク質の発現
上記でサブクローニングしたｃＤＮＡを用いてＰ．パストリスを形質転換させ、タンパク質ゲル電気泳動法および酵素活性測定によって評価してｈＫ１の発現についてクローンを選択した。最適化発現条件を決定し、大容量（２Ｌ）のＰ．パストリス培養中でタンパク質を誘導した。
３）タンパク質の精製
ｈＫ１は、Ｃｈａｎ ｅｔ ａｌ． （１９９８） Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒ Ｐｕｒｉｆ， １２（３）：ｐ．３６１−７０にしたがって精製した。
４）ファージ提示法による選択およびスクリーニング
組換えｈＫ１に対する結合剤は、Ｆａｂファージ提示ライブラリーから選択されている。
ｈＫ１酵素の活性部位で結合する抗体の選択に有益であるように２つの戦略を使用した（図）。活性部位結合剤は、ｈＫ１への結合について酵素基質と競合し、ｈＫ１タンパク質分解活性を阻害できる。どちらのファージ提示選択戦略もビーズ上に固定化したｈＫ１を使用する方法を用いた。ビーズは、リン酸緩衝食塩液および０．１％ Ｔｗｅｅｎ ２０（ＰＢＳＴ）を含む総量５００μＬ中で５μｇのビオチニル化ｈＫ１と５ｍｇのストレプトアビジン被覆磁気ビーズ（Ｄｙｎａｌ）とを混合し、この混合液を一晩４℃でインキュベートすることによって調製した。この混合液を次にＰＢＳＴで５回洗浄し、１μＭの遊離ビオチンを添加し、再びＰＢＳＴで５回洗浄し、最後にＰＢＳＴ中の２％脱脂粉乳を用いて１時間にわたりブロッキングした。この固定化方法は、ビオチニル化ｈＫ１の完全な捕捉を生じさせ、酵素的に活性な固定化ｈＫ１を産生した。
第１選択戦略では、ファージ（力価＝１×１０１３ｐｆｕ）をＰＢＳＴ中の０．２５ｍＬの固定化ｈＫ１ビーズと一緒に総量１ｍＬで５分間にわたりインキュベートした。固定化ｈＫ１に結合したファージは磁気装置を用いて抽出し、非特異的ファージは自動プレート洗浄装置上でＰＢＳＴを用いる１２回の洗浄サイクルによって溶出させた（第１選択）。次にファージを抽出したビーズから、ｈＫ１の活性部位から溶出したファージを入手するために、ｈＫ１の活性部位阻害剤である２５μＭのアプロチニンとの２時間にわたるインキュベーションによって抽出した。アプロチニンによって溶出したファージおよびビーズ上に残留したファージを標準方法にしたがって増幅させ、各々を１×１０１１ｐｆｕの力価に調整し、この戦略の次および最終ラウンドの選択のためのインプットファージとして個別に使用した（第ＩＩラウンド）。
第ＩＩラウンドでは、２つのファージ集団（２つの「セット」とも呼ばれ、一方はアプロチニンにより溶出され、他方はアプロチニン溶出後に結合したまま残留している）を個別の０．０５ｍＬの固定化ｈＫ１ビーズへ添加し、ＰＢＳＴを用いて総量を１ｍＬとし、５分間にわたりインキュベートし、その後に１２回の洗浄サイクルを実施した。第ＩＩラウンドからの２つの「セット」を、次に２５μＭのアプロチニンによる２時間の溶出を受けさせると、ｈＫ１への結合についてＥＬＩＳＡによってスクリーニングするための計４つのファージ集団（「プール」とも呼ばれる）が産生した。プール１は、第Ｉラウンドのアプロチニン溶出および第ＩＩラウンドのアプロチニン溶出に由来し、プール２は第Ｉラウンドのアプロチニン溶出および第２ラウンドにおけるビーズ上に残留したファージに由来し、プール３は第Ｉラウンドにおいてビーズ上に残留したファージおよび第ＩＩラウンドにおいてアプロチニンにより溶出されたファージに由来し、そしてプール４は第Ｉラウンドにおいてビーズ上に残留したファージおよび第ＩＩラウンドにおいてビーズ上に残留したファージに由来した。
第２選択ではまた別の戦略を想起し、ファージ（力価＝１×１０１３ｐｆｕ）から２５μＭのアプロチニンを０．２５ｍＬの固定化ｈＫ１ビーズへ添加し、ＰＢＳＴを用いて総量１ｍＬにすることによって調製した固定化ｈＫ１−アプロチニン複合体とファージとを１時間にわたり３回インキュベートすることによって、非活性部位ｈＫ１結合剤を最初に枯渇させた。枯渇させたファージは、次に１ｍＬ中の０．２５ｍＬの固定化ｈＫ１ビーズへ５分間にわたり添加し、ＰＢＳＴを用いる１２回の洗浄サイクルを実施した。ビーズ上に残留したファージを次に増幅させ、１×１０１１ｐｆｕの力価へ調整し、第２ラウンドのためのインプットとして使用した。第ＩＩおよびＩＩＩラウンドは、第Ｉラウンドについて記載したように実施したが、各ラウンドはｈＫ１−アプロチニン複合体に対する初期枯渇工程を有しており、その後に０．２５ｍＬの固定化ｈＫ１ビーズに対する選択を実施した。この選択戦略は、１つのファージ集団（プール５）を生成したので、これをｈＫ１に対する結合剤についてＥＬＩＳＡによってスクリーニングした。
上記の５つのプールからのファージを可溶性Ｆａｂ ＥＬＩＳＡによってそれらがｈＫ１へ結合する能力についてアッセイした。このＥＬＩＳＡを実施する前には、遺伝子ＩＩＩ融合を用いずにＦａｂが発現するのを許容するためにファージミドＤＮＡを修飾することが必要であった。このＤＮＡ修飾は、大腸菌ＴＧ１細胞中で５つのプール各々のファージミドＤＮＡを最初に調製し、ＭｌｕＩ制限酵素を用いて二重ＤＮＡ消化を実施することによって実施したが、これは遺伝子ＩＩＩ断端フラグメントをコードするＤＮＡを遊離するであろう。ゲル精製後、ベクターを再ライゲートし（遺伝子ＩＩＩ断端を含まないｐＭＩＤ２１ベクター）、大腸菌ＴＧ１細胞内へエレクトロポレーションした。形質転換体をプレーティングし、コロニーを取り出し、３０℃で約３時間かけて、１００μｇ／ｍＬのアンピシリンおよび０．１％のグルコースを含有する９６ウエルプレート内の１００μＬの２ｘＹＴ中で増殖させた。Ｆａｂは、３０℃で１６時間にわたり１ｍＭのイソプロピルチオ−β−ガラクトシド（ＩＰＴＧ）を添加すると発現した。次にプレートを６００ｇで１０分間にわたり回転させ、ＥＬＩＳＡのためには５０μＬの上清を使用した。
可溶性Ｆａｂ ＥＬＩＳＡは、最初に９６ウエルプレートのウエルを０．１Ｍの重炭酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ９．６）中の２μｇ／ｍＬのストレプトアビジンで被覆し、４℃で一晩おくことによって実施した。ＰＢＳＴを用いて洗浄し１％のウシ血清アルブミンを用いてブロックした後、１０ｎｇのビオチニル化ｈＫ１を加え、室温で１時間インキュベートした。遊離ｈＫ１はＰＢＳＴを用いる５回の洗浄によって除去した。上述したＦａｂ発現からの上清（５０μＬ）をプレート上に固定化されたｈＫ１へ加え、室温で１時間インキュベートした。未結合ＦａｂはＰＢＳＴを用いる７回の洗浄によって除去し、１００μＬのホースラディッシュ・ペルオキシダーゼ抱合抗Ｆａｂ抗体をウエルに添加した。遊離第２抗体は、ＰＢＳＴを用いる７回の洗浄によって除去し、６３０ｎｍでの吸光度の増加によって結合したＦａｂの検出を許容するように１００μＬの比色ペルオキシダーゼ基質（３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン／過酸化水素）を加えた。このＥＬＩＳＡを用いて９６０の発現したＦａｂを５つの選択プール各々について分析したので、分析したＦａｂ総数は４８００となった。
５） ＤＮＡシーケンシング
１１５２種のＥＬＩＳＡ陽性可溶性ＦａｂをＤＮＡシーケンシングにかけると、３３５のＦａｂが別個の重鎖を有していた。
６） Ｆａｂ結合親和性および酵素阻害効力の決定
表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ）によって３３５種のＦａｂを決定した。０．４〜１００ｎＭ超の範囲内の結合定数が得られた（表１）。酵素活性の阻害は、最初に１２０ｎＭの単一Ｆａｂ濃度で全３３５種のＦａｂについてスクリーニングし、次に選択した数のＦａｂについてＩＣ５０値を決定した（表１）。ＩＣ５０が決定されていないＦａｂであるかどうかは、酵素阻害剤であるかどうかに関係する可能性がある。阻害剤は、気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）液中に存在する気管支組織カリクレイン活性を阻害する能力について決定するためにさらに評価できる。
さらに、ｈＫ１を阻害することが見いだされた２４種の最高親和性Ｆａｂをさらに詳細に試験した。表１においてこれらのＦａｂを指示するために星印を使用した。これらのＦａｂは、新規の高スループット法を用いて生成した少量のＦａｂを用いる高スループットＳＰＲ法および酵素阻害スクリーニングの組み合わせを使用して最初に同定した。標準抗体精製法を用いる大量のこれらの２４種のＦａｂの精製は、それらの生化学的特性のより正確かつ詳細な試験を可能にする。定常状態酵素阻害アッセイは、黒色で９６ウエルの丸底マイクロプレート内において、５ｎＭのｈＫ１、様々な濃度のＦａｂおよび１００μＭのＰｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ＡＭＣ基質を含有する総量１００μＬの反応バッファー（２０ｍＭのＴｒｉｓ（ｐＨ７．５）、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＥＤＴＡ、０．１％ ＰＥＧ、０．１％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００）中で実施した。反応を開始させるために基質を添加する前に、ｈＫ１およびＦａｂは３０℃のアッセイプレートのウエル内で、１時間にわたりインキュベートした。基質を加え、反応は、３６０ｎｍの励起波長および４６０ｎｍの発光波長を用いる蛍光プレートリーダー（Ｇｅｍｉｎｉ ＸＳ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ社）を使用して監視した。基質加水分解の初期速度を阻害剤濃度に対してプロットし、ＩＣ５０推定値を提供するために非線形回帰によって酵素阻害について標準双曲線方程式へ当てはめた。
特定の代表的抗体はＭ０１０３−Ａ０１の形で指定されている。全部の名称が「Ｍ０」で始まるので、これらの名称はときどき先頭の「Ｍ０」を外して短縮される。抗体名「１０３−Ａ０１」は、「Ｍ０１０３−Ａ０１」と同一抗体を意味する。Ｍ０１０３−Ａ０１のＨＣはＨＣ−１０３−Ａ０１と称され、ＬＣはＬＣ−１０３−Ａ０１と称される。
７） 気道炎症試験のマウスモデル
Ｆａｂは、例えば、Ｋｉｐｓ ｅｔ ａｌ．， （２００３） “Ｍｕｒｉｎｅ ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ ａｓｔｈｍａ” Ｅｕｒ． Ｒｅｓｐｉｒ． Ｊ． ２２， ３７４−３８２に記載されているように、喘息のマウスモデルにおいて気道炎症を変調する能力について評価できる。Ｆａｂは、さらにまたＩｇＧ分子として再構成して、本明細書に記載した１つまたは複数のアッセイを用いて評価することもできる。
（表１：結合データ）
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 代表的な抗体は、以下の配列を含んでいる：
以下は代表的な軽鎖可変領域のアミノ酸配列である：
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 上記の軽鎖可変ドメインは、以下の軽鎖可変クラスに由来する：
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 以下は代表的な重鎖可変領域のアミノ酸配列である。
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 抗体０９８−Ｅ０９は、ＣＤＲ１で配列ＴＧＴＳＳＤＩＧＡＹＮＹＶＳ（配列番号１）、ＣＤＲ２で配列ＤＶＳＮＲＰＳ（配列番号２）、およびＣＤＲ３で配列ＳＳＹＲＳＳＳＬＭ（配列番号３）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＶＭＳ（配列番号４）、ＣＤＲ２で配列ＹＩＹＰＳＧＧＫＴＨＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５）、およびＣＤＲ３で配列ＶＧＶＷＹＧＭＤＶ（配列番号６）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１３１−Ｆ０７は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮ（配列番号７）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号８）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＳＹＳＴＰＬＴ（配列番号９）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＫＹＫＭＶ（配列番号１０）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＹＰＳＧＧＩＴＡＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１１）、およびＣＤＲ３で配列ＤＩＴＰＧＧＧＳＧＦＲＬＰＫＮＹＹＹＹＧＭＤＶ（配列番号１２）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１３９−Ｆ０４は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＧＩＳＳＷＬＡ（配列番号１３）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＳＬＥＲ（配列番号１４）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＹＨＮＦＰＬＴ（配列番号１５）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＹＹＥＭＥ（配列番号１６）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＲＰＳＧＧＲＴＶＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１７）、およびＣＤＲ３で配列ＧＲＳＮＹＹＧＳＧＳＹＳＰＫＹＦＱＨ（配列番号１８）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１３９−Ｅ１２は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＮＹＬＳ（配列番号１９）、ＣＤＲ２で配列ＧＴＳＮＲＡＳ（配列番号２０）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＹＧＧＡＰＬＦＩ（配列番号２１）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＮＭＮ（配列番号２２）、ＣＤＲ２で配列ＶＩＹＰＳＧＧＱＴＨＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２３）、およびＣＤＲ３で配列ＲＧＩＷＨＳＦＤＩ（配列番号２４）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体０９７−Ｆ０３は、ＣＤＲ１で配列ＳＧＴＮＳＮＩＧＳＮＳＶＦ（配列番号２５）、ＣＤＲ２で配列ＲＮＳＱＲＰＳ（配列番号２６）、およびＣＤＲ３で配列ＡＴＷＤＤＳＬＲＳＰＶ（配列番号２７）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＲＹＳＭＴ（配列番号２８）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＹＰＳＧＧＫＴＴＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２９）、およびＣＤＲ３で配列ＭＶＡＰＹＹＹＤＳＳＧＹＰＰＡＥＹＦＱＨ（配列番号３０）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１０２−Ｇ１２は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮ（配列番号３１）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号３２）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＳＹＳＴＰＲＴ（配列番号３３）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＬＹＦＭＴ（配列番号３４）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＳＳＳＧＧＳＴＫＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３５）、およびＣＤＲ３で配列ＧＧＱＷＬＡＦＤＹ（配列番号３６）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１０２−Ｅ０９は、ＣＤＲ１で配列ＴＧＴＳＳＤＶＧＳＹＫＬＶＳ（配列番号３７）、ＣＤＲ２で配列ＥＧＳＫＲＰＳ（配列番号３８）、およびＣＤＲ３で配列ＣＳＹＡＧＳＳＴＷＶ（配列番号３９）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＡＭＤ（配列番号４０）、ＣＤＲ２で配列ＶＩＹＳＳＧＧＫＴＴＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４１）、およびＣＤＲ３で配列ＶＧＶＷＹＧＭＤＶ（配列番号４２）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１０６−Ｇ１２は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＧＩＳＳＷＬＡ（配列番号４３）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号４４）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＡＮＳＦＰＨＴ（配列番号４５）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＦＹＬＭＦ（配列番号４６）、ＣＤＲ２で配列ＧＩＹＰＳＧＧＱＴＶＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４７）、およびＣＤＲ３で配列ＡＩＧＡＧＳＳＦ（配列番号４８）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１０２−Ｈ１１は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＲＧＩＳＮＷＬＡ（配列番号４９）、ＣＤＲ２で配列ＳＡＳＴＬＨＡ（配列番号５０）、およびＣＤＲ３で配列ＱＥＧＮＳＦＰＹＴ（配列番号５１）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＷＹＳＭＮ（配列番号５２）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＧＰＳＧＧＧＴＫＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５３）、およびＣＤＲ３で配列ＲＧＱＲＫＱＷＬＰＰＮＧＡＦＤＩ（配列番号５４）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１３８−Ｃ０９は、ＣＤＲ１で配列ＷＴＩＹＤＩＳＳＷＬＡ（配列番号５５）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＲＬＡＴ（配列番号５６）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＴＫＤＦＰＬＴ（配列番号５７）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＲＹＧＭＱ（配列番号５８）、ＣＤＲ２で配列ＹＩＹＰＳＧＧＧＴＶＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５９）、およびＣＤＲ３で配列ＲＶＡＶＡＧＳＷＹＹＹＹＹＧＭＤＶ（配列番号６０）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体０９８−Ｇ０５は、ＣＤＲ１で配列ＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＹＶＹ（配列番号６１）、ＣＤＲ２で配列ＲＮＮＱＲＰＳ（配列番号６２）、およびＣＤＲ３で配列ＡＡＷＤＤＳＬＳＧＶＶ（配列番号６３）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＡＹＬＭＡ（配列番号６４）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＲＰＳＧＧＥＴＲＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６５）、およびＣＤＲ３で配列ＤＱＫＧＹＰＤＳＳＳＦＲＲＹＹＹＹＹＧＭＤＶ（配列番号６６）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１３６−Ｅ１０は、ＣＤＲ１で配列ＴＧＴＮＴＤＶＧＧＹＮＬＶＳ（配列番号６７）、ＣＤＲ２で配列ＥＶＳＮＲＰＳ（配列番号６８）、およびＣＤＲ３で配列ＧＳＹＴＳＳＳＴＨＶ（配列番号６９）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＷＹＶＭＴ（配列番号７０）、ＣＤＲ２で配列ＶＩＹＰＳＧＧＡＴＫＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号７１）、およびＣＤＲ３で配列ＲＧＡＧＧＭＤＶ（配列番号７２）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１３６−Ａ０７は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＨＶＩＮＩＤＬＧ（配列番号７３）、ＣＤＲ２で配列ＧＡＳＨＬＱＲ（配列番号７４）、およびＣＤＲ３で配列ＬＱＤＳＦＹＰＲＴ（配列番号７５）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＮＹＳＭＱ（配列番号７６）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＧＰＳＧＧＲＴＷＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号７７）、およびＣＤＲ３で配列ＶＧＶＷＹＧＭＤＶ（配列番号７８）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体０９７−Ｇ０１は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＤＩＡＳＷＬＡ（配列番号７９）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号８０）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＡＮＳＦＰＦＴ（配列番号８１）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＰＹＫＭＧ（配列番号８２）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＹＰＳＧＧＶＴＴＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号８３）、およびＣＤＲ３で配列ＮＩＮＬＲＹＤＩＬＴＧＹＦＤＩ（配列番号８４）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１３８−Ｇ１１は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＧＩＳＳＷＬＶ（配列番号８５）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号８６）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＡＫＴＦＰＬＴ（配列番号８７）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＭＭＨ（配列番号８８）、ＣＤＲ２で配列ＧＩＧＰＳＧＧＫＴＰＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号８９）、およびＣＤＲ３で配列ＶＧＶＷＹＧＭＤＶ（配列番号９０）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１３９−Ａ０９は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ（配列番号９１）、ＣＤＲ２で配列ＤＡＳＮＲＡＴ（配列番号９２）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＲＳＮＷＬＷＴ（配列番号９３）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＶＭＱ（配列番号９４）、ＣＤＲ２で配列ＧＩＧＰＳＧＧＳＴＴＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号９５）、およびＣＤＲ３で配列ＶＧＶＷＹＧＭＤＶ（配列番号９６）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１１４−Ｇ０６は、ＣＤＲ１で配列ＴＧＴＳＳＤＶＧＡＹＮＹＶＳ（配列番号９７）、ＣＤＲ２で配列ＥＶＮＫＲＰＳ（配列番号９８）、およびＣＤＲ３で配列ＮＳＹＡＧＳＮＳＬＩ（配列番号９９）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＳＭＦ（配列番号１００）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＹＰＳＧＧＱＴＤＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１０１）、およびＣＤＲ３で配列ＲＧＬＬＷＳＦＤＳ（配列番号１０２）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１３９−Ｃ０２は、ＣＤＲ１で配列ＴＧＴＳＳＤＶＧＡＹＮＹＶＳ（配列番号１０３）、ＣＤＲ２で配列ＥＶＮＫＲＰＳ（配列番号１０４）、およびＣＤＲ３で配列ＮＳＹＡＧＳＮＳＬＩ（配列番号１０５）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＹＹＱＭＳ（配列番号１０６）、ＣＤＲ２で配列ＲＩＧＰＳＧＧＬＴＳＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１０７）、およびＣＤＲ３で配列ＶＧＶＷＹＧＭＤＶ（配列番号１０８）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体０９３−Ｆ０９は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ（配列番号１０９）、ＣＤＲ２で配列ＤＡＳＮＲＡＴ（配列番号１１０）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＲＳＮＷＰＳＰＩＡ（配列番号１１１）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＶＭＩ（配列番号１１２）、ＣＤＲ２で配列ＷＩＹＰＳＧＧＮＴＩＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１１３）、およびＣＤＲ３で配列ＶＧＶＷＹＧＭＤＶ（配列番号１１４）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１１０−Ｆ０８は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＧ（配列番号１１５）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号１１６）、およびＣＤＲ３で配列ＬＱＤＹＮＹＰＲＴ（配列番号１１７）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＲＹＦＭＩ（配列番号１１８）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＶＰＳＧＧＰＴＲＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１１９）、およびＣＤＲ３で配列ＲＧＰＶＹＹＹＤＳＳＧＳＨＳＡＦＤＩ（配列番号１２０）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１１７−Ｆ０４は、ＣＤＲ１で配列ＳＧＳＮＳＮＩＧＮＮＦＶＹ（配列番号１２１）、ＣＤＲ２で配列ＲＮＮＱＲＰＳ（配列番号１２２）、およびＣＤＲ３で配列ＡＡＷＤＤＳＬＳＧＶＬ（配列番号１２３）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＲＹＨＭＳ（配列番号１２４）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＲＰＳＧＧＳＴＩＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１２５）、およびＣＤＲ３で配列ＥＰＲＲＹＹＹＤＳＳＧＳＹＤＡＦＤＩ（配列番号１２６）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１１１−Ｄ１１は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ（配列番号１２７）、ＣＤＲ２で配列ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号１２８）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＲＧＧＷＰＬＴ（配列番号１２９）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＫＹＰＭＴ（配列番号１３０）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＳＳＳＧＧＫＴＱＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１３１）、およびＣＤＲ３で配列ＧＧＳＳＴＬＹＦＭＤＶ（配列番号１３２）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１１２−Ｄ０７は、ＣＤＲ１で配列ＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＹＶＨ（配列番号１３３）、ＣＤＲ２で配列ＲＮＮＲＲＰＳ（配列番号１３４）、およびＣＤＲ３で配列ＡＡＷＤＤＳＬＳＧＬＶＶ（配列番号１３５）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＰＹＱＭＷ（配列番号１３６）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＳＳＳＧＧＬＴＲＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１３７）、およびＣＤＲ３で配列ＶＫＬＮＹＹＧＳＧＳＹＳＬＤＡＦＤＩ（配列番号１３８）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１３１−Ｂ０５は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮ（配列番号１３９）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号１４０）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＳＹＮＡＰＷＴ（配列番号１４１）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＲＹＶＭＳ（配列番号１４２）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＲＳＳＧＧＲＴＭＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１４３）、およびＣＤＲ３で配列ＶＧＶＷＹＧＭＤＶ（配列番号１４４）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１３１−Ｄ０１は、ＣＤＲ１で配列ＴＧＴＳＳＤＶＧＡＹＮＹＶＳ（配列番号１４５）、ＣＤＲ２で配列ＤＶＳＮＲＰＳ（配列番号１４６）、およびＣＤＲ３で配列ＳＳＦＴＳＲＫＴＷＶ（配列番号１４７）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＦＹＡＭＶ（配列番号１４８）、ＣＤＲ２で配列ＹＩＳＰＳＧＧＡＴＷＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１４９）、およびＣＤＲ３で配列ＰＳＲＰＲＹＹＹＤＳＳＧＹＹＳＳＡＦＤＩ（配列番号１５０）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１３７−Ｅ０１は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号１５１）、ＣＤＲ２で配列ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号１５２）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＹＧＳＳＬＴ（配列番号１５３）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＳＭＴ（配列番号１５４）、ＣＤＲ２で配列ＲＩＹＰＳＧＧＲＴＧＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１５５）、およびＣＤＲ３で配列ＤＳＧＧＹＹＹＧＭＤＶ（配列番号１５６）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１３２−Ｃ０８は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号１５７）、ＣＤＲ２で配列ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号１５８）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＳＹＲＳＰＹＴ（配列番号１５９）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＶＭＡ（配列番号１６０）、ＣＤＲ２で配列ＲＩＧＰＳＧＧＹＴＭＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１６１）、およびＣＤＲ３で配列ＶＧＶＷＹＧＭＤＶ（配列番号１６２）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１１４−Ｇ０９は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＩＧＡＳＬＮ（配列番号１６３）、ＣＤＲ２で配列ＴＡＳＮＬＱＳ（配列番号１６４）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＮＹＲＧＲＴ（配列番号１６５）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＮＭＧ（配列番号１６６）、ＣＤＲ２で配列ＲＩＧＳＳＧＧＫＴＡＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１６７）、およびＣＤＲ３で配列ＴＮＹＤＦＷＳＧＹＬＰＮＰＮＰＹＰＬＤＹ（配列番号１６８）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１３８−Ａ０３は、ＣＤＲ１で配列ＴＧＴＳＳＤＶＮＹＶＳ（配列番号１６９）、ＣＤＲ２で配列ＡＶＴＫＲＰＳ（配列番号１７０）、およびＣＤＲ３で配列ＳＳＹＡＧＳＮＮＬＶ（配列番号１７１）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＰＭＤ（配列番号１７２）、ＣＤＲ２で配列ＹＩＧＰＳＧＧＳＴＲＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１７３）、およびＣＤＲ３で配列ＨＶＰＰＧＴ（配列番号１７４）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１３５−Ｈ０１は、ＣＤＲ１で配列ＴＧＴＳＳＤＶＧＡＹＮＹＶＳ（配列番号１７５）、ＣＤＲ２で配列ＤＶＳＮＲＰＳ（配列番号１７６）、およびＣＤＲ３で配列ＳＳＹＴＳＳＹＴＷＶ（配列番号１７７）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＨＭＱ（配列番号１７８）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＲＰＳＧＧＥＴＲＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１７９）、およびＣＤＲ３で配列ＥＶＴＭＶＲＧＶＹＹＹＹＹＧＭＤＶ（配列番号１８０）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１０８−Ｄ１１は、ＣＤＲ１で配列ＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＹＶＹ（配列番号１８１）、ＣＤＲ２で配列ＲＮＮＱＲＰＳ（配列番号１８２）、およびＣＤＲ３で配列ＡＡＷＤＤＳＬＳＧＨＡＶ（配列番号１８３）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＱＭＨ（配列番号１８４）、ＣＤＲ２で配列ＲＩＲＳＳＧＧＡＴＳＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１８５）、およびＣＤＲ３で配列ＧＧＧＹＳＹＹＦＤＹ（配列番号１８６）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１３６−Ｅ１２は、ＣＤＲ１で配列ＴＧＴＳＴＤＤＶＧＧＹＮＹＶＳ（配列番号１８７）、ＣＤＲ２で配列ＤＶＩＮＲＰＳ（配列番号１８８）、およびＣＤＲ３で配列ＳＳＹＴＳＲＧＴＲＶ（配列番号１８９）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＤＹＲＭＷ（配列番号１９０）、ＣＤＲ２で配列ＹＩＶＰＳＧＧＱＴＳＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１９１）、およびＣＤＲ３で配列ＧＳＡＹＱＲＲＴＹＳＳＧＷＹＳＡＳＧＲＲＧＴＡＥＹＦＱＨ（配列番号１９２）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１３６−Ｄ０７は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＩＳＮＷＬＡ（配列番号１９３）、ＣＤＲ２で配列ＭＡＳＴＬＥＳ（配列番号１９４）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＹＮＳＹＳＶＴ（配列番号１９５）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＬＭＹ（配列番号１９６）、ＣＤＲ２で配列ＷＩＧＰＳＧＧＨＴＭＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１９７）、およびＣＤＲ３で配列ＬＱＱＧＬＤＹ（配列番号１９８）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１３８−Ｅ０２は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＮＹＬＡ（配列番号１９９）、ＣＤＲ２で配列ＹＧＡＳＹＲＡＴ（配列番号２００）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＳＹＳＴＰＷＴ（配列番号２０１）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＬＭＹ（配列番号２０２）、ＣＤＲ２で配列ＲＩＹＰＳＧＧＡＴＳＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２０３）、およびＣＤＲ３で配列ＳＧＳＷＹＳＦＤＹ（配列番号２０４）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１３１−Ｆ０９は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＧＩＧＮＹＬＶ（配列番号２０５）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＴＬＱＳ（配列番号２０６）、およびＣＤＲ３で配列ＱＫＹＤＧＡＰＦＴ（配列番号２０７）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＰＹＹＭＱ（配列番号２０８）、ＣＤＲ２で配列ＧＩＳＳＳＧＧＳＴＱＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２０９）、およびＣＤＲ３で配列ＳＱＲＲＴＹＹＰＮＦＧＤＡＦＤＩ（配列番号２１０）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１３４−Ｂ０３は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＩＳＳＷＬＡ（配列番号２１１）、ＣＤＲ２で配列ＫＡＳＳＬＥＳ（配列番号２１２）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＹＮＳＹＲＹＴ（配列番号２１３）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＷＭＭ（配列番号２１４）、ＣＤＲ２で配列ＷＩＧＳＳＧＧＦＴＷＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２１５）、およびＣＤＲ３で配列ＧＮＧＧＦＤＳ（配列番号２１６）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１０４−Ｈ１２は、ＣＤＲ１で配列ＳＧＴＬＳＮＩＧＴＮＴＶＳ（配列番号２１７）、ＣＤＲ２で配列ＮＤＨＲＲＰＳ（配列番号２１８）、およびＣＤＲ３で配列ＡＡＷＤＤＳＬＮＧＶＶ（配列番号２１９）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＫＹＫＭＶ（配列番号２２０）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＹＰＳＧＧＩＴＡＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２２１）、およびＣＤＲ３で配列ＤＩＴＰＧＧＧＳＧＦＲＬＰＫＮＹＹＹＹＧＭＤＶ（配列番号２２２）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１３５−Ｆ０３は、ＣＤＲ１で配列ＲＳＳＱＳＬＶＹＳＤＧＮＴＹＬＮ（配列番号２２３）、ＣＤＲ２で配列ＫＶＳＮＲＤＳ（配列番号２２４）、およびＣＤＲ３で配列ＭＱＧＴＨＷＱＲＬＴ（配列番号２２５）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＷＹＦＭＶ（配列番号２２６）、ＣＤＲ２で配列ＧＩＧＰＳＧＧＬＴＴＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２２７）、およびＣＤＲ３で配列ＳＤＷＬＮＹ（配列番号２２８）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１３４−Ｄ０７は、ＣＤＲ１で配列ＴＧＧＲＲＤＩＧＮＹＮＹＶＳ（配列番号２２９）、ＣＤＲ２で配列ＤＶＲＫＲＰＳ（配列番号２３０）、およびＣＤＲ３で配列ＧＳＹＴＧＴＳＮＶ（配列番号２３１）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＶＭＳ（配列番号２３２）、ＣＤＲ２で配列ＲＩＹＰＳＧＧＱＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２３３）、およびＣＤＲ３で配列ＧＡＧＷＦＤＰ（配列番号２３４）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１３５−Ｃ１２は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＶＧＳＤＹＬＡ（配列番号２３５）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＴＲＡＴ（配列番号２３６）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＹＡＳＰＰＲＴ（配列番号２３７）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＷＹＡＭＨ（配列番号２３８）、ＣＤＲ２で配列ＷＩＳＰＳＧＧＱＴＫＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２３９）、およびＣＤＲ３で配列ＡＫＶＬＲＹＦＤＷＬＬＧＧＤＡＦＤＩ（配列番号２４０）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体０９７−Ｆ０４は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＶＳＦＮＬＡ（配列番号２４１）、ＣＤＲ２で配列ＦＤＡＳＮＲＡＴ（配列番号２４２）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＹＧＴＳＰＦＴ（配列番号２４３）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＰＹＦＭＥ（配列番号２４４）、ＣＤＲ２で配列ＧＩＳＳＳＧＧＮＴＬＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２４５）、およびＣＤＲ３で配列ＤＲＦＧＮＹＹＧＳＧＳＫＬＱＨＤＡＦＤＩ（配列番号２４６）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１１１−Ｃ１０は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＴＩＲＴＹＬＮ（配列番号２４７）、ＣＤＲ２で配列ＤＡＳＮＬＱＴ（配列番号２４８）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＳＹＧＧＰＰＴ（配列番号２４９）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＦＹＳＭＳ（配列番号２５０）、ＣＤＲ２で配列ＲＩＲＰＳＧＧＲＴＤＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２５１）、およびＣＤＲ３で配列ＤＲＬＹＹＹＧＳＧＳＹＹＹＧＡＦＤＩ（配列番号２５２）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体０９４−Ｅ０８は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＩＳＴＹＬＮ（配列番号２５３）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号２５４）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＹＮＳＦＰＦＳ（配列番号２５５）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＬＭＤ（配列番号２５６）、ＣＤＲ２で配列ＶＩＹＰＳＧＧＨＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２５７）、およびＣＤＲ３で配列ＶＧＶＷＹＧＭＤＶ（配列番号２５８）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１３８−Ｂ１０は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号２５９）、ＣＤＲ２で配列ＤＡＳＮＲＡＴ（配列番号２６０）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＷＤＴ（配列番号２６１）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＫＭＧ（配列番号２６２）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＲＰＳＧＧＡＴＫＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２６３）、およびＣＤＲ３で配列ＶＧＩＷＤＡＦＤＩ（配列番号２６４）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１３９−Ｆ０９は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮ（配列番号２６５）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号２６６）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＴＹＳＴＬＦＴ（配列番号２６７）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＫＭＥ（配列番号２６８）、ＣＤＲ２で配列ＲＩＲＰＳＧＧＶＴＫＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２６９）、およびＣＤＲ３で配列ＧＧＬＷＤＡＦＤＩ（配列番号２７０）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１０４−Ａ１２は、ＣＤＲ１で配列ＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＩＶＳ（配列番号２７１）、ＣＤＲ２で配列ＳＮＮＲＲＰＳ（配列番号２７２）、およびＣＤＲ３で配列ＡＡＷＤＤＳＬＮＧＨＶ（配列番号２７３）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＷＹＴＭＴ（配列番号２７４）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＹＰＳＧＧＨＴＳＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２７５）、およびＣＤＲ３で配列ＤＴＲＶＧＰＷＬＶＲＡＰＬＤＹ（配列番号２７６）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１３２−Ｄ０２は、ＣＤＲ１で配列ＴＧＴＳＴＤＶＧＧＹＮＹＶＳ（配列番号２７７）、ＣＤＲ２で配列ＤＶＳＮＲＰＳ（配列番号２７８）、およびＣＤＲ３で配列ＳＳＹＴＮＴＩＴＶＶ（配列番号２７９）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＬＭＹ（配列番号２８０）、ＣＤＲ２で配列ＲＩＧＰＳＧＧＷＴＫＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２８１）、およびＣＤＲ３で配列ＶＧＶＷＹＧＭＤＶ（配列番号２８２）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１３８−Ｃ０４は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号２８３）、ＣＤＲ２で配列ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号２８４）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＹＧＳＳＰＦＴ（配列番号２８５）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＬＭＨ（配列番号２８６）、ＣＤＲ２で配列ＶＩＹＰＳＧＧＴＴＫＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２８７）、およびＣＤＲ３で配列ＧＮＳＧＳＨＤＹ（配列番号２８８）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１３２−Ｈ１１は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＧＩＧＮＹＬＡ（配列番号２８９）、ＣＤＲ２で配列ＫＴＳＮＬＱＳ（配列番号２９０）、およびＣＤＲ３で配列ＱＲＹＤＳＹＳＱＹＩ（配列番号２９１）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＭＹＶＭＮ（配列番号２９２）、ＣＤＲ２で配列ＲＩＧＳＳＧＧＧＴＬＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２９３）、およびＣＤＲ３で配列ＶＳＶＹＲＩＲＮＹＹＹＹＡＭＤＶ（配列番号２９４）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１３２−Ｄ０８は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＶＳＧＦＬＡ（配列番号２９５）、ＣＤＲ２で配列ＤＡＳＮＲＡＴ（配列番号２９６）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＹＧＤＳＳＰＩＴ（配列番号２９７）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＭＹＧＭＴ（配列番号２９８）、ＣＤＲ２で配列ＧＩＳＰＳＧＧＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２９９）、およびＣＤＲ３で配列ＨＲＲＤＹＶＷＷＴＹＧＭＤＶ（配列番号３００）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１２１−Ａ０７は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＧＩＳＳＷＬＡ（配列番号３０１）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号３０２）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＡＮＳＦＰＳＬＴ（配列番号３０３）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＮＹＳＭＱ（配列番号３０４）、ＣＤＲ２で配列ＧＩＲＰＳＧＧＳＴＲＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３０５）、およびＣＤＲ３で配列ＳＴＧＧＹＹＹＧＭＤＶ（配列番号３０６）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１２６−Ｆ１１は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ（配列番号３０７）、ＣＤＲ２で配列ＤＡＳＮＲＡＴ（配列番号３０８）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＲＳＮＷＰＰＹＴ（配列番号３０９）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＰＹＭＭＧ（配列番号３１０）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＲＳＳＧＧＡＴＡＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３１１）、およびＣＤＲ３で配列ＶＧＶＷＹＧＭＤＶ（配列番号３１２）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体０９８−Ｇ０１は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＡＩＳＴＮＬＮ（配列番号３１３）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号３１４）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＴＦＳＰＰＨＴ（配列番号３１５）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＲＹＹＭＥ（配列番号３１６）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＳＳＳＧＧＳＴＥＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３１７）、およびＣＤＲ３で配列ＤＩＴＰＧＧＧＳＧＦＲＬＰＫＮＹＹＹＹＧＭＤＶ（配列番号３１８）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体０９３−Ｃ０２は、ＣＤＲ１で配列ＧＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号３１９）、ＣＤＲ２で配列ＤＡＳＳＲＡＴ（配列番号３２０）、およびＣＤＲ３で配列ＬＨＤＹＮＦＰＦＴ（配列番号３２１）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＰＭＩ（配列番号３２２）、ＣＤＲ２で配列ＧＩＹＳＳＧＧＴＴＫＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３２３）、およびＣＤＲ３で配列ＶＧＶＷＹＧＭＤＶ（配列番号３２４）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１１５−Ｇ１２は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＡＩＳＮＹＬＡ（配列番号３２５）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＴＬＱＳ（配列番号３２６）、およびＣＤＲ３で配列ＱＴＹＹＳＶＰＦＴ（配列番号３２７）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＩＹＡＭＩ（配列番号３２８）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＹＳＳＧＧＰＴＱＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３２９）、およびＣＤＲ３で配列ＧＲＲＴＹＹＹＤＳＳＧＹＹＫＹＡＡＦＤＩ（配列番号３３０）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１３５−Ｂ０５は、ＣＤＲ１で配列ＴＧＴＳＳＤＶＧＧＹＮＹＬＳ（配列番号３３１）、ＣＤＲ２で配列ＧＶＳＮＲＰＳ（配列番号３３２）、およびＣＤＲ３で配列ＳＳＹＴＳＴＧＴＲＶ（配列番号３３３）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＮＹＴＭＴ（配列番号３３４）、ＣＤＲ２で配列ＶＩＹＰＳＧＧＨＴＴＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３３５）、およびＣＤＲ３で配列ＧＧＲＷＦＳＬＤＹ（配列番号３３６）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１３６−Ｆ０８は、ＣＤＲ１で配列ＴＧＧＲＲＤＩＧＮＹＮＹＶＳ（配列番号３３７）、ＣＤＲ２で配列ＤＶＲＫＲＰＳ（配列番号３３８）、およびＣＤＲ３で配列ＧＳＹＴＧＴＳＮＶ（配列番号３３９）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＶＭＱ（配列番号３４０）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＹＰＳＧＧＳＴＲＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３４１）、およびＣＤＲ３で配列ＦＮＶＧＦＤＬ（配列番号３４２）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１１０−Ｈ１１は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮ（配列番号３４３）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号３４４）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＳＹＳＴＬＹＴ（配列番号３４５）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＷＹＲＭＳ（配列番号３４６）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＳＰＳＧＧＰＴＫＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３４７）、およびＣＤＲ３で配列ＰＳＧＤＳＳＶＹＲＰＦＡＳ（配列番号３４８）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１１０−Ｄ１１は、ＣＤＲ１で配列ＴＤＴＳＧＮＶＧＳＹＮＬＶＳ（配列番号３４９）、ＣＤＲ２で配列ＥＶＳＲＲＰＳ（配列番号３５０）、およびＣＤＲ３で配列ＣＳＹＡＧＳＮＴＹＶ（配列番号３５１）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＮＹＳＭＶ（配列番号３５２）、ＣＤＲ２で配列ＲＩＹＳＳＧＧＳＴＨＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３５３）、およびＣＤＲ３で配列ＶＧＶＷＹＧＭＤＶ（配列番号３５４）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１１４−Ｈ０７は、ＣＤＲ１で配列ＳＧＧＳＳＮＩＧＳＮＲＶＮ（配列番号３５５）、ＣＤＲ２で配列ＳＮＮＱＲＰＳ（配列番号３５６）、およびＣＤＲ３で配列ＡＡＷＤＤＮＬＩＧＰＶ（配列番号３５７）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＷＹＨＭＹ（配列番号３５８）、ＣＤＲ２で配列ＹＩＲＰＳＧＧＮＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３５９）、およびＣＤＲ３で配列ＤＲＲＧＹＳＳＳＫＧＹＹＹＹＧＭＤＶ（配列番号３６０）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体０９８−Ｅ０１は、ＣＤＲ１で配列ＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＹＶＹ（配列番号３６１）、ＣＤＲ２で配列ＲＮＮＱＲＰＳ（配列番号３６２）、およびＣＤＲ３で配列ＡＡＷＤＤＳＭＳＧＶＶ（配列番号３６３）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＦＭＨ（配列番号３６４）、ＣＤＲ２で配列ＹＩＳＳＳＧＧＬＴＧＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３６５）、およびＣＤＲ３で配列ＲＧＰＶＹＹＹＤＳＳＧＳＨＳＡＦＤＩ（配列番号３６６）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１３５−Ｃ１１は、ＣＤＲ１で配列ＴＧＳＴＳＤＶＧＧＹＴＹＶＳ（配列番号３６７）、ＣＤＲ２で配列ＤＶＳＫＲＰＳ（配列番号３６８）、およびＣＤＲ３で配列ＣＳＹＡＧＳＹＳＹＶ（配列番号３６９）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＮＹＨＭＤ（配列番号３７０）、ＣＤＲ２で配列ＶＩＧＰＳＧＧＦＴＲＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３７１）、およびＣＤＲ３で配列ＡＬＧＧＳＬＤＹ（配列番号３７２）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体０９５−Ａ１１は、ＣＤＲ１で配列ＴＡＴＳＳＤＬＧＳＹＮＦＶＳ（配列番号３７３）、ＣＤＲ２で配列ＥＶＳＲＲＰＳ（配列番号３７４）、およびＣＤＲ３で配列ＣＳＹＡＧＳＮＴＹＶ（配列番号３７５）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＮＹＳＭＭ（配列番号３７６）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＹＰＳＧＧＦＴＫＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３７７）、およびＣＤＲ３で配列ＶＧＦＹＧＧＦＶ（配列番号３７８）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体０９２−Ｆ０８は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＩＳＳＷＬＡ（配列番号３７９）、ＣＤＲ２で配列ＫＡＳＳＬＧＳ（配列番号３８０）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＹＹＳＹＳＱＴ（配列番号３８１）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＮＹＰＭＨ（配列番号３８２）、ＣＤＲ２で配列ＹＩＧＰＳＧＧＷＴＲＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３８３）、およびＣＤＲ３で配列ＡＰＳＧＹ（配列番号３８４）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１０４−Ｂ１２は、ＣＤＲ１で配列ＴＧＴＳＳＤＶＧＬＹＮＦＶＳ（配列番号３８５）、ＣＤＲ２で配列ＤＶＳＲＲＰＳ（配列番号３８６）、およびＣＤＲ３で配列ＳＳＹＡＧＳＮＮＹＶ（配列番号３８７）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＰＹＲＭＳ（配列番号３８８）、ＣＤＲ２で配列ＶＩＳＰＳＧＧＩＴＥＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３８９）、およびＣＤＲ３で配列ＨＥＲＧＳＧＹＹＶＴＰＰＡＧＡＦＤＩ（配列番号３９０）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１０９−Ａ１１は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＩＡＮＹＬＮ（配列番号３９１）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＲＬＨＳ（配列番号３９２）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＳＨＡＳＰＬＴ（配列番号３９３）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＡＭＧ（配列番号３９４）、ＣＤＲ２で配列ＲＩＷＰＳＧＧＨＴＱＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３９５）、およびＣＤＲ３で配列ＧＹＳＳＴＷＧＡＦＤＩ（配列番号３９６）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１３１−Ｇ０３は、ＣＤＲ１で配列ＴＧＴＳＳＤＶＧＧＹＮＹＶＳ（配列番号３９７）、ＣＤＲ２で配列ＥＶＳＮＲＰＳ（配列番号３９８）、およびＣＤＲ３で配列ＳＳＹＫＲＧＧＴＹＶ（配列番号３９９）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＷＹＧＭＧ（配列番号４００）、ＣＤＲ２で配列ＶＩＲＰＳＧＧＴＴＲＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４０１）、およびＣＤＲ３で配列ＧＧＲＹＹＳＬＤＹ（配列番号４０２）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１３５−Ｅ１０は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＶＴＴＦＬＡ（配列番号４０３）、ＣＤＲ２で配列ＧＡＳＳＲＡＡ（配列番号４０４）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＹＲＦＳＰＰＴ（配列番号４０５）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＰＹＮＭＡ（配列番号４０６）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＷＰＳＧＧＲＴＲＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４０７）、およびＣＤＲ３で配列ＧＶＲＳＳＧＬＬＥＲＧＲＶＹＤＡＦＤＩ（配列番号４０８）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１３０−Ｂ０２は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＶＳＧＳＹＬＡ（配列番号４０９）、ＣＤＲ２で配列ＧＡＹＳＲＡＴ（配列番号４１０）、およびＣＤＲ３で配列ＱＨＹＧＳＳＰＲＴ（配列番号４１１）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＱＭＨ（配列番号４１２）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＲＰＳＧＧＲＴＡＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４１３）、およびＣＤＲ３で配列ＶＧＶＷＹＧＭＤＶ（配列番号４１４）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体０９７−Ｄ０４は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＧＱＮＩＹＹＷＬＡ（配列番号４１５）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号４１６）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＡＫＳＦＰＶＴ（配列番号４１７）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＰＹＩＭＳ（配列番号４１８）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＶＳＳＧＧＶＴＬＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４１９）、およびＣＤＲ３で配列ＮＩＮＬＲＹＤＩＬＴＧＹＦＤＩ（配列番号４２０）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体０９３−Ｇ０６は、ＣＤＲ１で配列ＳＧＴＳＳＤＶＧＡＹＹＨＶＳ（配列番号４２１）、ＣＤＲ２で配列ＥＶＴＮＲＰＳ（配列番号４２２）、およびＣＤＲ３で配列ＳＳＹＴＴＳＮＴＬＶ（配列番号４２３）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＷＹＶＭＲ（配列番号４２４）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＹＰＳＧＧＱＴＲＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４２５）、およびＣＤＲ３で配列ＧＹＳＳＴＷＧＡＦＤＩ（配列番号４２６）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１０８−Ｅ１１は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＮＬＡ（配列番号４２７）、ＣＤＲ２で配列ＧＡＳＴＲＡＴ（配列番号４２８）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＮＮＮＷＰＰＳＦＴ（配列番号４２９）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＴＭＬ（配列番号４３０）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＹＳＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４３１）、およびＣＤＲ３で配列ＶＧＶＷＹＧＭＤＶ（配列番号４３２）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１２７−Ｃ０６は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号４３３）、ＣＤＲ２で配列ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号４３４）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＹＧＳＳＲＹＴ（配列番号４３５）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＮＹＴＭＦ（配列番号４３６）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＹＰＳＧＧＩＴＲＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４３７）、およびＣＤＲ３で配列ＶＳＦＷＮＡＦＤＩ（配列番号４３８）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１０５−Ｂ０６は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＴＩＳＳＹＬＮ（配列番号４３９）、ＣＤＲ２で配列ＴＴＳＳＬＱＳ（配列番号４４０）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＳＨＳＳＰＴ（配列番号４４１）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＬＭＹ（配列番号４４２）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＹＰＳＧＧＦＴＡＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４４３）、およびＣＤＲ３で配列ＲＧＶＹＧＴＦＤＩ（配列番号４４４）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１０７−Ｄ０１は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＤＶＲＲＦＬＡ（配列番号４４５）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号４４６）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＡＮＳＦＰＩＴ（配列番号４４７）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＰＭＳ（配列番号４４８）、ＣＤＲ２で配列ＹＩＲＳＧＧＹＴＴＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４４９）、およびＣＤＲ３で配列ＥＲＶＦＣＳＧＧＲＣＧＳＹＦＤＹ（配列番号４５０）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１０７−Ｆ１１は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＶＹＳＳＹＬＡ（配列番号４５１）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＮＲ（配列番号４５２）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＳＹＳＴＰＲ（配列番号４５３）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＲＹＡＭＦ（配列番号４５４）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＳＰＳＧＧＫＴＲＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４５５）、およびＣＤＲ３で配列ＧＧＧＴＡＬＤＹ（配列番号４５６）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１０１−Ｅ０１は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＩＳＳＷＬＡ（配列番号４５７）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＳＬＲＮ（配列番号４５８）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＳＹＳＴＰＰＴ（配列番号４５９）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＲＹＷＭＡ（配列番号４６０）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＧＰＳＧＧＳＴＫＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４６１）、およびＣＤＲ３で配列ＴＡＲＷＬＳＦＤＹ（配列番号４６２）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１３８−Ｅ１２は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＮＹＬＡ（配列番号４６３）、ＣＤＲ２で配列ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号４６４）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＦＧＳＳＬＦＴ（配列番号４６５）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＮＹＹＭＬ（配列番号４６６）、ＣＤＲ２で配列ＹＩＲＳＳＧＧＳＴＲＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４６７）、およびＣＤＲ３で配列ＰＴＶＤＧＡＦＤＹ（配列番号４６８）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１０９−Ｅ０８は、ＣＤＲ１で配列ＡＧＴＳＳＤＬＧＧＹＤＹＶＳ（配列番号４６９）、ＣＤＲ２で配列ＱＶＧＲＲＰＳ（配列番号４７０）、およびＣＤＲ３で配列ＳＳＹＴＳＳＲＴＲＶ（配列番号４７１）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＶＭＤ（配列番号４７２）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＹＰＳＧＧＷＴＲＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４７３）、およびＣＤＲ３で配列ＲＧＱＷＬＶＬＤＹ（配列番号４７４）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１０４−Ｂ０３は、ＣＤＲ１で配列ＴＧＴＳＳＤＶＧＧＦＮＹＶＳ（配列番号４７５）、ＣＤＲ２で配列ＤＶＳＫＲＰＳ（配列番号４７６）、およびＣＤＲ３で配列ＣＳＹＴＧＮＹＴＹＶ（配列番号４７７）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＲＹＡＭＡ（配列番号４７８）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＧＳＳＧＧＶＴＫＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４７９）、およびＣＤＲ３で配列ＰＲＧＲＹＹＹＤＳＳＧＹＹＹＧＧＶＦＤＹ（配列番号４８０）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体０９６−Ｅ１１は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＧＩＳＮＹＬＡ（配列番号４８１）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＴＬＱＳ（配列番号４８２）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＳＹＳＴＰＹＴ（配列番号４８３）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＱＹＬＭＡ（配列番号４８４）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＹＰＳＧＧＮＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４８５）、およびＣＤＲ３で配列ＤＲＳＩＶＰＹＳＳＳＷＹＭＰＲＤＹＹＹＧＭＤＶ（配列番号４８６）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１０３−Ａ０３は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号４８７）、ＣＤＲ２で配列ＧＡＡＳＲＡＴ（配列番号４８８）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＹＧＳＳＰＬＩＴ（配列番号４８９）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＰＭＴ（配列番号４９０）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＲＰＳＧＧＮＴＧＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４９１）、およびＣＤＲ３で配列ＬＴＧＹＳＳＧＷＦＷＡＹＧＭＤＶ（配列番号４９２）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体０９９−Ａ０９は、ＣＤＲ１で配列ＴＧＴＳＳＤＶＧＧＹＮＹＶＳ（配列番号４９３）、ＣＤＲ２で配列ＥＶＳＮＲＡＳ（配列番号４９４）、およびＣＤＲ３で配列ＳＳＹＴＳＳＴＴＬＬ（配列番号４９５）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＲＹＶＭＡ（配列番号４９６）、ＣＤＲ２で配列ＶＩＲＰＳＧＧＫＴＬＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４９７）、およびＣＤＲ３で配列ＶＡＧＲＶＧＶＰＡＴＫＫＮＷＦＤＰ（配列番号４９８）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１０５−Ｆ０２は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＧＩＳＳＷＬＡ（配列番号４９９）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号５００）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＡＮＳＦＰＬＴ（配列番号５０１）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＰＹＴＭＳ（配列番号５０２）、ＣＤＲ２で配列ＧＩＹＰＳＧＧＥＴＷＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５０３）、およびＣＤＲ３で配列ＮＩＮＬＲＹＤＩＬＴＧＹＦＤＦ（配列番号５０４）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１１２−Ｃ０２は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号５０５）、ＣＤＲ２で配列ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号５０６）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＹＧＳＳＧＷＴ（配列番号５０７）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＹＹＲＭＴ（配列番号５０８）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＹＰＳＧＧＹＴＩＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５０９）、およびＣＤＲ３で配列ＬＧＱＷＬＡＬＤＨ（配列番号５１０）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１２５−Ｃ０４は、ＣＤＲ１で配列ＱＧＤＳＬＲＳＹＹＡＳ（配列番号５１１）、ＣＤＲ２で配列ＳＫＳＮＲＰＳ（配列番号５１２）、およびＣＤＲ３で配列ＮＳＲＤＳＳＧＮＨＬＶ（配列番号５１３）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＫＹＷＭＡ（配列番号５１４）、ＣＤＲ２で配列ＶＩＹＰＳＧＧＱＴＫＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５１５）、およびＣＤＲ３で配列ＭＲＹＧＤＲＦＤＹ（配列番号５１６）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１２２−Ｈ０４は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＡ（配列番号５１７）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＴＬＱＳ（配列番号５１８）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＬＮＳＹＰＲＴ（配列番号５１９）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＲＹＷＭＨ（配列番号５２０）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＧＰＳＧＧＶＴＫＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５２１）、およびＣＤＲ３で配列ＨＧＳＷＧＧＭＤＶ（配列番号５２２）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体０９２−Ｂ１２は、ＣＤＲ１で配列ＴＧＴＴＳＤＶＧＧＹＫＹＶＳ（配列番号５２３）、ＣＤＲ２で配列ＥＶＮＨＲＰＳ（配列番号５２４）、およびＣＤＲ３で配列ＹＳＹＴＳＤＳＴＰＹＶ（配列番号５２５）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＲＹＡＭＨ（配列番号５２６）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＷＰＳＧＧＡＴＦＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５２７）、およびＣＤＲ３で配列ＳＰＴＬＮＡＦＨＩ（配列番号５２８）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１３９−Ａ０４は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＩＳＮＷＬＡ（配列番号５２９）、ＣＤＲ２で配列ＫＡＳＴＬＥＳ（配列番号５３０）、およびＣＤＲ３で配列ＱＨＹＮＳＹＳＬ（配列番号５３１）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＴＭＶ（配列番号５３２）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＹＳＳＧＧＲＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５３３）、およびＣＤＲ３で配列ＩＶＶＶＰＳＡＱＦＹＦＹＹＧＭＤＶ（配列番号５３４）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１０８−Ｃ１０は、ＣＤＲ１で配列ＴＧＴＳＮＤＩＧＲＴＮＹＶＳ（配列番号５３５）、ＣＤＲ２で配列ＥＶＳＮＲＰＳ（配列番号５３６）、およびＣＤＲ３で配列ＳＳＣＴＴＡＰＶＣＶ（配列番号５３７）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＬＹＡＭＨ（配列番号５３８）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＲＰＳＧＧＬＴＫＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５３９）、およびＣＤＲ３で配列ＶＧＶＷＹＧＭＤＶ（配列番号５４０）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１３８−Ｂ０６は、ＣＤＲ１で配列ＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＹＶＹ（配列番号５４１）、ＣＤＲ２で配列ＳＮＮＱＲＰＳ（配列番号５４２）、およびＣＤＲ３で配列ＡＴＷＤＮＳＬＳＡＷＶ（配列番号５４３）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＶＭＮ（配列番号５４４）、ＣＤＲ２で配列ＲＩＹＰＳＧＧＶＴＶＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５４５）、およびＣＤＲ３で配列ＧＹＧＭＤＶ（配列番号５４６）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１３７−Ｂ０１は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＶＧＮＳＬＡ（配列番号５４７）、ＣＤＲ２で配列ＧＡＳＴＲＡＳ（配列番号５４８）、およびＣＤＲ３で配列ＱＥＹＮＫＷＰＩＴ（配列番号５４９）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＷＹＷＭＹ（配列番号５５０）、ＣＤＲ２で配列ＶＩＧＳＳＧＧＶＴＫＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５５１）、およびＣＤＲ３で配列ＧＰＹＲＧＹＦＤＹ（配列番号５５２）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１１１−Ｂ０２は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＳ（配列番号５５３）、ＣＤＲ２で配列ＳＡＳＮＬＱＳ（配列番号５５４）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＩＹＲＴＰＬＴ（配列番号５５５）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＷＹＱＭＭ（配列番号５５６）、ＣＤＲ２で配列ＳＹＩＲＳＳＧＧＫＴＤＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５５７）、およびＣＤＲ３で配列ＶＧＶＷＹＧＭＤＶ（配列番号５５８）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１２９−Ｂ０９は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＶＧＳＤＹＬＡ（配列番号５５９）、ＣＤＲ２で配列ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号５６０）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＹＧＳＳＬＹＴ（配列番号５６１）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＮＹＫＭＳ（配列番号５６２）、ＣＤＲ２で配列ＧＩＹＰＳＧＧＬＴＱＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５６３）、およびＣＤＲ３で配列ＶＧＶＷＹＧＭＤＶ（配列番号５６４）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体０９９−Ｃ１２は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＧＱＴＩＮＮＹＬＮ（配列番号５６５）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＮＬＱＳ（配列番号５６６）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＴＹＲＴＰＦＴ（配列番号５６７）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＫＭＨ（配列番号５６８）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＷＰＳＧＧＧＴＦＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５６９）、およびＣＤＲ３で配列ＴＳＧＧＦＧＡＦＤＩ（配列番号５７０）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体０９９−Ｅ１１は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮ（配列番号５７１）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号５７２）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＳＹＳＴＰＲＴ（配列番号５７３）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＹＭＭ（配列番号５７４）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＧＰＳＧＧＭＴＤＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５７５）、およびＣＤＲ３で配列ＧＧＴＡＳＬＤＹ（配列番号５７６）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１０３−Ｆ０７は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号５７７）、ＣＤＲ２で配列ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号５７８）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＹＧＳＳＳＹＴ（配列番号５７９）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＶＭＧ（配列番号５８０）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＹＰＳＧＧＫＴＴＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５８１）、およびＣＤＲ３で配列ＰＳＴＧＳＷＳＡＦＤＩ（配列番号５８２）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１０２−Ａ０４は、ＣＤＲ１で配列ＴＧＴＳＳＤＶＧＧＹＮＹＶＳ（配列番号５８３）、ＣＤＲ２で配列ＤＶＳＫＲＰＳ（配列番号５８４）、およびＣＤＲ３で配列ＳＳＹＴＳＳＩＴＬＶＶ（配列番号５８５）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＷＹＡＭＨ（配列番号５８６）、ＣＤＲ２で配列ＶＩＳＰＳＧＧＡＴＲＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５８７）、およびＣＤＲ３で配列ＡＳＴＶＴＴＬＦＱＨ（配列番号５８８）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１１９−Ｂ０９は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＩＳＳＷＬＡ（配列番号５８９）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＴＬＱＳ（配列番号５９０）、およびＣＤＲ３で配列ＱＫＹＮＳＡＰＬＴ（配列番号５９１）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＮＹＨＭＱ（配列番号５９２）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＹＰＳＧＧＦＴＲＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５９３）、およびＣＤＲ３で配列ＤＧＧＱＧＧ（配列番号５９４）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体０９７−Ｅ０７は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮ（配列番号５９５）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号５９６）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＴＦＳＴＷＴ（配列番号５９７）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＬＭＧ（配列番号５９８）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＷＰＳＧＧＨＴＳＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５９９）、およびＣＤＲ３で配列ＨＹＧＭＤＶ（配列番号６００）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１１７−Ａ１２は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号６０１）、ＣＤＲ２で配列ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号６０２）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＹＮＮＷＰＰＬＴ（配列番号６０３）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＲＹＭＭＹ（配列番号６０４）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＹＰＳＧＧＫＴＬＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６０５）、およびＣＤＲ３で配列ＶＧＶＷＹＧＭＤＶ（配列番号６０６）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１２６−Ｃ１０は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＨＮＩＹＴＳＬＮ（配列番号６０７）、ＣＤＲ２で配列ＧＡＳＴＬＥＮ（配列番号６０８）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＳＹＴＳＶＴ（配列番号６０９）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＦＹＳＭＭ（配列番号６１０）、ＣＤＲ２で配列ＧＩＳＳＳＧＧＴＴＫＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６１１）、およびＣＤＲ３で配列ＧＧＴＮＹＤＹＶＷＧＳＹＲＳＨＹＹＹＹＧＭＤＶ（配列番号６１２）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１２７−Ｄ０５は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＩＳＳＷＬＡ（配列番号６１３）、ＣＤＲ２で配列ＴＡＳＳＬＥＳ（配列番号６１４）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＹＮＳＹＳＬＴ（配列番号６１５）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＮＹＫＭＱ（配列番号６１６）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＹＳＳＧＧＫＴＶＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６１７）、およびＣＤＲ３で配列ＴＰＧＹＮＹＦＤＹ（配列番号６１８）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１２６−Ｂ１２は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＴＦＮＮＹＬＮ（配列番号６１９）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＴＬＱＳ（配列番号６２０）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＡＮＳＦＰＦＴ（配列番号６２１）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＬＭＦ（配列番号６２２）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＷＰＳＧＧＮＴＫＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６２３）、およびＣＤＲ３で配列ＰＡＹＹＹＡＭＤＶ（配列番号６２４）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１２２−Ｇ０６は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＴＶＧＧＳＹＬＡ（配列番号６２５）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＮＲＡＰ（配列番号６２６）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＹＧＳＳＭＹＴ（配列番号６２７）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＷＹＱＭＳ（配列番号６２８）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＹＰＳＧＧＡＴＫＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６２９）、およびＣＤＲ３で配列ＭＧＬＨＨＳＦＤＹ（配列番号６３０）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１０７−Ｄ０５は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＧＩＳＳＷＬＡ（配列番号６３１）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号６３２）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＡＮＳＦＰＬＴ（配列番号６３３）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＷＭＲ（配列番号６３４）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＧＳＳＧＧＭＴＫＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６３５）、およびＣＤＲ３で配列ＡＬＲＷＲＡＦＤＩ（配列番号６３６）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１２７−Ｈ０５は、ＣＤＲ１で配列ＴＧＴＮＴＤＶＧＧＹＮＹＶＳ（配列番号６３７）、ＣＤＲ２で配列ＥＶＮＨＲＰＳ（配列番号６３８）、およびＣＤＲ３で配列ＳＳＹＴＹＲＮＴＹＶ（配列番号６３９）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＷＹＴＭＧ（配列番号６４０）、ＣＤＲ２で配列ＶＩＹＰＳＧＧＭＴＫＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６４１）、およびＣＤＲ３で配列ＴＳＧＧＴＰＷＧＦ（配列番号６４２）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１１２−Ｃ１２は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＴＶＳＳＮＹＬＡ（配列番号６４３）、ＣＤＲ２で配列ＧＶＳＮＲＡＡ（配列番号６４４）、およびＣＤＲ３で配列ＱＨＹＧＳＳＡＦＴ（配列番号６４５）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＮＹＩＭＳ（配列番号６４６）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＷＰＳＧＧＨＴＲＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６４７）、およびＣＤＲ３で配列ＡＧＳＹＹＡＧＤＹ（配列番号６４８）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体０９８−Ｃ１０は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＤＶＬＶＳＦＡ（配列番号６４９）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＨＬＨＰ（配列番号６５０）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＡＲＳＦＰＨＴ（配列番号６５１）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＷＹＳＭＴ（配列番号６５２）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＳＰＳＧＧＡＴＫＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６５３）、およびＣＤＲ３で配列ＧＧＡＡＳＬＰＦＤＹ（配列番号６５４）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体０９５−Ｈ１０は、ＣＤＲ１で配列ＦＧＤＫＬＧＤＫＹＧＳ（配列番号６５５）、ＣＤＲ２で配列ＱＹＷＫＲＰＳ（配列番号６５６）、およびＣＤＲ３で配列ＱＡＷＤＳＮＴＶＶ（配列番号６５７）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＮＹＫＭＨ（配列番号６５８）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＹＰＳＧＧＷＴＶＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６５９）、およびＣＤＲ３で配列ＧＹＳＳＴＷＧＡＦＤＩ（配列番号６６０）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１１７−Ｃ０４は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＹＩＳＴＹＬＡ（配列番号６６１）、ＣＤＲ２で配列ＫＡＳＤＬＥＳ（配列番号６６２）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＹＮＴＹＷＴ（配列番号６６３）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＦＹＶＭＧ（配列番号６６４）、ＣＤＲ２で配列ＷＩＧＰＳＧＧＲＴＷＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６６５）、およびＣＤＲ３で配列ＤＲＧＷＹＧＩＤＶ（配列番号６６６）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体０９４−Ｆ０３は、ＣＤＲ１で配列ＳＧＮＩＬＤＮＳＹＡＳ（配列番号６６７）、ＣＤＲ２で配列ＲＤＮＫＲＰＳ（配列番号６６８）、およびＣＤＲ３で配列ＱＡＷＤＲＴＴＧＶ（配列番号６６９）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＷＹＮＭＹ（配列番号６７０）、ＣＤＲ２で配列ＹＩＶＰＳＧＧＡＴＨＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６７１）、およびＣＤＲ３で配列ＡＬＲＧＹＳＹＧＰＲＧＹＹＹＹＧＭＤＶ（配列番号６７２）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１２４−Ｇ１２は、ＣＤＲ１で配列ＳＰＳＧＧＧＬＲＮＫＹＶＳ（配列番号６７３）、ＣＤＲ２で配列ＫＤＡＥＲＰＳ（配列番号６７４）、およびＣＤＲ３で配列ＬＡＷＤＳＴＴＲＶ（配列番号６７５）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＫＭＮ（配列番号６７６）、ＣＤＲ２で配列ＹＩＧＳＳＧＧＫＴＧＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６７７）、およびＣＤＲ３で配列ＶＧＶＷＹＧＭＤＶ（配列番号６７８）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１３１−Ａ０３は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＩＳＮＷＬＡ（配列番号６７９）、ＣＤＲ２で配列ＫＡＳＴＬＱＴ（配列番号６８０）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＴＹＳＡＰＦＮ（配列番号６８１）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＮＹＮＭＨ（配列番号６８２）、ＣＤＲ２で配列ＶＩＹＰＳＧＧＹＴＶＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６８３）、およびＣＤＲ３で配列ＲＧＮＷＧＧＩＤＹ（配列番号６８４）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体０９９−Ｄ０５は、ＣＤＲ１で配列ＲＴＳＱＴＶＳＴＦＬＮ（配列番号６８５）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＲＬＱＳ（配列番号６８６）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＳＦＴＳＰＲＴ（配列番号６８７）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＲＹＶＭＨ（配列番号６８８）、ＣＤＲ２で配列ＹＩＳＰＳＧＧＶＴＫＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６８９）、およびＣＤＲ３で配列ＡＬＹＰＧＭＧＹＹＹＧＭＤＶ（配列番号６９０）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１３１−Ｃ０８は、ＣＤＲ１で配列ＲＰＳＱＳＶＹＳＮＹＬＡ（配列番号６９１）、ＣＤＲ２で配列ＧＡＳＴＲＡＴ（配列番号６９２）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＹＧＮＳＹＴ（配列番号６９３）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＮＭＴ（配列番号６９４）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＷＰＳＧＧＡＴＲＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６９５）、およびＣＤＲ３で配列ＴＳＲＦＹＧＭＤＶ（配列番号６９６）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１１６−Ｃ０９は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＶＮＩＤＶＧ（配列番号６９７）、ＣＤＲ２で配列ＤＡＳＫＲＡＴ（配列番号６９８）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＲＡＲＷＬＴ（配列番号６９９）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＮＹＦＭＮ（配列番号７００）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＧＳＳＧＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号７０１）、およびＣＤＲ３で配列ＶＧＶＷＹＧＭＤＶ（配列番号７０２）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１２８−Ｆ１１は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＤＩＲＴＷＬＡ（配列番号７０３）、ＣＤＲ２で配列ＳＳＳＳＬＱＳ（配列番号７０４）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＡＴＴＦＰＷＴ（配列番号７０５）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＩＭＨ（配列番号７０６）、ＣＤＲ２で配列ＧＩＹＰＳＧＧＳＴＫＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号７０７）、およびＣＤＲ３で配列ＡＬＶＧＡＬＤＹ（配列番号７０８）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１３１−Ｄ１２は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＧＩＳＮＹＬＡ（配列番号７０９）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＴＬＱＳ（配列番号７１０）、およびＣＤＲ３で配列ＥＱＬＮＳＦＰＨＡ（配列番号７１１）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＲＹＴＭＥ（配列番号７１２）、ＣＤＲ２で配列ＶＩＲＰＳＧＧＴＴＭＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号７１３）、およびＣＤＲ３で配列ＶＧＶＷＹＧＭＤＶ（配列番号７１４）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１２８−Ａ０６は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＶＳＲＷＬＡ（配列番号７１５）、ＣＤＲ２で配列ＫＡＳＴＬＥＳ（配列番号７１６）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＹＧＡ（配列番号７１７）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＴＭＱ（配列番号７１８）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＹＰＳＧＧＡＴＫＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号７１９）、およびＣＤＲ３で配列ＳＧＹＹＹＧＬＤＶ（配列番号７２０）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体０９５−Ｇ０９は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ（配列番号７２１）、ＣＤＲ２で配列ＤＡＳＮＲＡＴ（配列番号７２２）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＲＳＮ（配列番号７２３）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＴＭＷ（配列番号７２４）、ＣＤＲ２で配列ＲＩＷＰＳＧＧＴＴＲＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号７２５）、およびＣＤＲ３で配列ＧＧＳＹＬＡＦＤＩ（配列番号７２６）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１３７−Ｇ１０は、ＣＤＲ１で配列ＱＧＤＳＬＲＮＹＨＰＳ（配列番号７２７）、ＣＤＲ２で配列ＦＧＲＮＮＲＰＳ（配列番号７２８）、およびＣＤＲ３で配列ＳＳＲＤＧＳＧＮＦＬ（配列番号７２９）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＮＹＴＭＭ（配列番号７３０）、ＣＤＲ２で配列ＧＩＹＰＳＧＧＱＴＡＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号７３１）、およびＣＤＲ３で配列ＧＧＳＷＹＡＦＤＩ（配列番号７３２）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１０６−Ｅ１２は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＩＳＳＦＬＮ（配列番号７３３）、ＣＤＲ２で配列ＹＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号７３４）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＳＹＳＴＰＹＴ（配列番号７３５）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＷＹＳＭＴ（配列番号７３６）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＳＰＳＧＧＡＴＫＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号７３７）、およびＣＤＲ３で配列ＧＧＡＡＳＬＰＦＤＹ（配列番号７３８）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１２４−Ｈ１０は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＶＧＧＹＬＡ（配列番号７３９）、ＣＤＲ２で配列ＤＡＳＫＲＡＴ（配列番号７４０）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＲＳＫＷＰＰＹＴ（配列番号７４１）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＫＭＭ（配列番号７４２）、ＣＤＲ２で配列ＹＩＹＰＳＧＧＷＴＧＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号７４３）、およびＣＤＲ３で配列ＶＧＰＷＤＡＦＤＩ（配列番号７４４）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１２２−Ｄ０１は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＥＳＶＳＳＳＹＦＡ（配列番号７４５）、ＣＤＲ２で配列ＧＡＳＲＲＶＴ（配列番号７４６）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＹＧＧＳＰＲＳ（配列番号７４７）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＲＹＭＭＥ（配列番号７４８）、ＣＤＲ２で配列ＧＩＳＰＳＧＧＴＴＫＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号７４９）、およびＣＤＲ３で配列ＧＧＹＮＮＹＹＹＡＬＤＶ（配列番号７５０）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体０９３−Ｃ１０は、ＣＤＲ１で配列ＴＧＴＧＳＮＩＤＧＹＮＹＶＳ（配列番号７５１）、ＣＤＲ２で配列ＤＶＧＫＲＰＳ（配列番号７５２）、およびＣＤＲ３で配列ＣＳＹＡＧＳＹＳＹＶ（配列番号７５３）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＲＹＬＭＷ（配列番号７５４）、ＣＤＲ２で配列ＶＩＧＰＳＧＧＷＴＲＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号７５５）、およびＣＤＲ３で配列ＨＰＧＤＹ（配列番号７５６）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１０６−Ｃ０６は、ＣＤＲ１で配列ＳＧＴＳＳＤＶＧＡＹＹＨＶＳ（配列番号７５７）、ＣＤＲ２で配列ＤＶＳＮＲＰＳ（配列番号７５８）、およびＣＤＲ３で配列ＳＬＹＩＧＴＳＴＰＷＶ（配列番号７５９）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＲＭＤ（配列番号７６０）、ＣＤＲ２で配列ＧＩＹＰＳＧＧＨＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号７６１）、およびＣＤＲ３で配列ＤＲＧＷＹＧＡＤＹ（配列番号７６２）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１１７−Ｂ０７は、ＣＤＲ１で配列ＴＧＴＴＲＤＶＧＡＹＫＹＶＳ（配列番号７６３）、ＣＤＲ２で配列ＤＶＳＫＲＰＳ（配列番号７６４）、およびＣＤＲ３で配列ＣＳＦＡＧＳＹＴＷＩ（配列番号７６５）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＷＭＶ（配列番号７６６）、ＣＤＲ２で配列ＷＩＧＰＳＧＧＧＴＶＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号７６７）、およびＣＤＲ３で配列ＧＮＧＧＦＤＳ（配列番号７６８）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１２６−Ｈ０９は、ＣＤＲ１で配列ＳＧＳＲＳＮＩＧＴＮＰＶＮ（配列番号７６９）、ＣＤＲ２で配列ＶＮＮＱＲＰＳ（配列番号７７０）、およびＣＤＲ３で配列ＡＴＷＤＧＳＬＮＧＰＶ（配列番号７７１）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＳＹＡＭＴ（配列番号７７２）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＳＳＳＧＧＤＴＡＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号７７３）、およびＣＤＲ３で配列ＥＲＨＹＩＷＧＳＹＲＹＳＷＦＤＰ（配列番号７７４）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体０９３−Ｇ０９は、ＣＤＲ１で配列ＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＮＶＮ（配列番号７７５）、ＣＤＲ２で配列ＳＮＤＱＲＰＳ（配列番号７７６）、およびＣＤＲ３で配列ＡＡＷＤＤＳＬＮＧＰＶ（配列番号７７７）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＬＭＶ（配列番号７７８）、ＣＤＲ２で配列ＧＩＶＰＳＧＧＹＴＭＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号７７９）、およびＣＤＲ３で配列ＡＳＹＳＳＦＧＬＤＹ（配列番号７８０）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１１４−Ｅ０２は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＩＳＳＷＬＡ（配列番号７８１）、ＣＤＲ２で配列ＫＡＳＳＬＥＳ（配列番号７８２）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＹＮＳＹＰＶＴ（配列番号７８３）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＦＹＰＭＳ（配列番号７８４）、ＣＤＲ２で配列ＹＩＷＰＳＧＧＡＴＲＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号７８５）、およびＣＤＲ３で配列ＧＮＧＧＦＤＳ（配列番号７８６）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１０２−Ｇ１１は、ＣＤＲ１で配列ＴＧＴＳＳＤＩＧＡＹＰＦＶＳ（配列番号７８７）、ＣＤＲ２で配列ＧＶＴＴＲＰＦ（配列番号７８８）、およびＣＤＲ３で配列ＳＳＹＡＧＧＲＮＬＰＹＶ（配列番号７８９）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＹＭＡ（配列番号７９０）、ＣＤＲ２で配列ＹＩＳＰＳＧＧＳＴＫＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号７９１）、およびＣＤＲ３で配列ＧＧＧＴＧＴＦＤＩ（配列番号７９２）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１３２−Ｃ０１は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＩＳＲＷＬＡ（配列番号７９３）、ＣＤＲ２で配列ＥＡＳＴＬＥＳ（配列番号７９４）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＹＮＳＹＰＬＴ（配列番号７９５）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＰＭＨ（配列番号７９６）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＷＰＳＧＧＨＴＳＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号７９７）、およびＣＤＲ３で配列ＬＳＱＰＩ（配列番号７９８）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１２３−Ｅ０２は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＶＳＮＦＬＡ（配列番号７９９）、ＣＤＲ２で配列ＧＡＳＮＲＡＴ（配列番号８００）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＡＮＳＦＰＬＴ（配列番号８０１）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＭＹＲＭＦ（配列番号８０２）、ＣＤＲ２で配列ＶＩＧＰＳＧＧＱＴＡＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号８０３）、およびＣＤＲ３で配列ＶＧＶＷＹＧＭＤＶ（配列番号８０４）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体０９６−Ｄ０３は、ＣＤＲ１で配列ＴＧＴＳＧＥＶＡＮＹＮＹＶＳ（配列番号８０５）、ＣＤＲ２で配列ＤＶＳＲＲＰＳ（配列番号８０６）、およびＣＤＲ３で配列ＡＳＹＶＧＮＤＫＬＶ（配列番号８０７）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＧＭＮ（配列番号８０８）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＷＳＳＧＧＹＴＴＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号８０９）、およびＣＤＲ３で配列ＶＧＩＷＹＳＭＤＶ（配列番号８１０）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１３１−Ｇ０６は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＩＮＳＹＬＮ（配列番号８１１）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＳＬＱＮ（配列番号８１２）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＳＹＳＴＰＬＴ（配列番号８１３）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＲＹＴＭＦ（配列番号８１４）、ＣＤＲ２で配列ＧＩＹＰＳＧＧＫＴＩＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号８１５）、およびＣＤＲ３で配列ＧＧＶＦＧＶＶＤＹ（配列番号８１６）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体０９４−Ｄ０８は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＧＩＳＮＹＬＡ（配列番号８１７）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＴＬＱＳ（配列番号８１８）、およびＣＤＲ３で配列ＱＫＹＮＳＡＰＬＴ（配列番号８１９）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＰＭＤ（配列番号８２０）、ＣＤＲ２で配列ＲＩＹＰＳＧＧＡＴＫＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号８２１）、およびＣＤＲ３で配列ＧＧＧＡＦＤＩ（配列番号８２２）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１２８−Ｅ０７は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ（配列番号８２３）、ＣＤＲ２で配列ＤＡＳＮＲＡＴ（配列番号８２４）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＲＳＮＷＬＴ（配列番号８２５）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＥＭＡ（配列番号８２６）、ＣＤＲ２で配列ＳＶＩＹＰＳＧＧＡＴＲＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号８２７）、およびＣＤＲ３で配列ＶＡＱＹＹＧＭＤＶ（配列番号８２８）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１１４−Ｆ０４は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＮＹＬＡ（配列番号８２９）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号８３０）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＲＷＴ（配列番号８３１）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＷＹＴＭＱ（配列番号８３２）、ＣＤＲ２で配列ＲＩＹＳＳＧＧＧＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号８３３）、およびＣＤＲ３で配列ＶＧＰＷＧＡＦＤＩ（配列番号８３４）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１２２−Ａ０５は、ＣＤＲ１で配列ＴＧＴＳＳＤＶＧＧＹＮＹＶＳ（配列番号８３５）、ＣＤＲ２で配列ＥＶＳＮＲＰＳ（配列番号８３６）、およびＣＤＲ３で配列ＳＳＹＴＳＳＳＴＷＶ（配列番号８３７）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＶＭＶ（配列番号８３８）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＹＰＳＧＧＭＴＶＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号８３９）、およびＣＤＲ３で配列ＲＧＩＡＮＳＦＮＩ（配列番号８４０）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１０２−Ｈ０２は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＩＳＲＹＬＮ（配列番号８４１）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＮＬＱＳ（配列番号８４２）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＳＹＳＴＰＷＴ（配列番号８４３）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＫＹＹＭＶ（配列番号８４４）、ＣＤＲ２で配列ＶＩＧＰＳＧＧＷＴＴＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号８４５）、およびＣＤＲ３で配列ＶＤＹＳＮＹＦＤＹ（配列番号８４６）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体０９２−Ｇ０６は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮ（配列番号８４７）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号８４８）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＳＹＳＴＰＷＴ（配列番号８４９）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＳＹＩＭＩ（配列番号８５０）、ＣＤＲ２で配列ＹＩＲＰＳＧＧＹＴＫＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号８５１）、およびＣＤＲ３で配列ＶＩＮＡＧＰＧＲＧＹＹＷＲＧＹＳＹＳＤＡＦＤＩ（配列番号８５２）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１１３−Ｅ０３は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＧＩＧＴＨＬＮ（配列番号８５３）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＧＬＱＳ（配列番号８５４）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＳＹＳＶＰＲＴ（配列番号８５５）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＮＹＰＭＶ（配列番号８５６）、ＣＤＲ２で配列ＶＩＧＰＳＧＧＫＴＫＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号８５７）、およびＣＤＲ３で配列ＶＧＶＷＹＧＭＤＶ（配列番号８５８）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１１８−Ｅ０７ は、ＣＤＲ１で配列ＴＧＴＳＳＤＶＧＡＹＮＹＶＳ（配列番号８５９）、ＣＤＲ２で配列ＥＶＳＮＲＰＳ（配列番号８６０）、およびＣＤＲ３で配列ＮＳＹＴＴＳＡＴＬＶ（配列番号８６１）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＬＭＭ（配列番号８６２）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＲＳＳＧＧＩＴＲＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号８６３）、およびＣＤＲ３で配列ＶＧＹＹＹＧＭＤＶ（配列番号８６４）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体０９３−Ｅ１１は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＩＴＧＹＬＮ（配列番号８６５）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号８６６）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＳＹＳＴＰＹＴ（配列番号８６７）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＮＹＰＭＹ（配列番号８６８）、ＣＤＲ２で配列ＲＩＧＰＳＧＧＨＴＤＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号８６９）、およびＣＤＲ３で配列ＡＧＶＷＳＧＬＤＹ（配列番号８７０）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１２４−Ｃ１２は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＧＩＳＮＹＬＡ（配列番号８７１）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＴＬＱＳ（配列番号８７２）、およびＣＤＲ３で配列ＱＫＹＮＳＡＰＷＴ（配列番号８７３）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＬＭＧ（配列番号８７４）、ＣＤＲ２で配列ＶＩＷＰＳＧＧＩＴＫＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号８７５）、およびＣＤＲ３で配列ＧＮＧＧＦＤＳ（配列番号８７６）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１１５−Ｆ０８は、ＣＤＲ１で配列ＴＧＴＮＴＤＶＧＧＹＮＦＶＳ（配列番号８７７）、ＣＤＲ２で配列ＤＶＴＮＲＰＳ（配列番号８７８）、およびＣＤＲ３で配列ＳＳＹＴＳＳＳＴＷＶ（配列番号８７９）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＳＭＬ（配列番号８８０）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＲＰＳＧＧＦＴＫＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号８８１）、およびＣＤＲ３で配列ＲＧＶＷＤＡＦＤＩ（配列番号８８２）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１２１−Ｈ０７は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮ（配列番号８８３）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号８８４）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＳＹＳＴＰＲＴ（配列番号８８５）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＲＹＡＭＧ（配列番号８８６）、ＣＤＲ２で配列ＹＩＧＰＳＧＧＮＴＴＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号８８７）、およびＣＤＲ３で配列ＤＶＧＧＳＧＳＹＹＭＬＳＹＹＹＹＧＭＤＶ（配列番号８８８）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１３６−Ｂ０６は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号８８９）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＴＲＡＴ（配列番号８９０）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＳＹＳＴＰＷＴ（配列番号８９１）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＲＹＰＭＧ（配列番号８９２）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＹＰＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号８９３）、およびＣＤＲ３で配列ＶＧＶＷＹＧＭＤＶ（配列番号８９４）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体０９７−Ｆ０８は、ＣＤＲ１で配列ＳＧＤＤＬＧＧＲＨＶＳ（配列番号８９５）、ＣＤＲ２で配列ＱＤＤＫＲＰＳ（配列番号８９６）、およびＣＤＲ３で配列ＬＡＷＨＮＹＫＹＶ（配列番号８９７）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＮＹＬＭＧ（配列番号８９８）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＧＰＳＧＧＹＴＫＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号８９９）、およびＣＤＲ３で配列ＧＴＧＴＴＦＦ（配列番号９００）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１０７−Ｂ０５は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮ（配列番号９０１）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号９０２）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＳＹＳＴＬＶＴ（配列番号９０３）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＭＭＱ（配列番号９０４）、ＣＤＲ２で配列ＧＩＧＰＳＧＧＷＴＫＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号９０５）、およびＣＤＲ３で配列ＬＮＹＧＤＹＶ（配列番号９０６）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１２４−Ａ０１は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＧＩＳＳＳＬＡ（配列番号９０７）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＴＬＱＳ（配列番号９０８）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＳＹＳＴＰＷＴ（配列番号９０９）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＬＭＨ（配列番号９１０）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＹＰＳＧＧＫＴＱＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号９１１）、およびＣＤＲ３で配列ＶＦＧＹＹＤＦＷＳＧＹＰＧＡＦＤＹ（配列番号９１２）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１０２−Ｃ１２は、ＣＤＲ１で配列ＧＧＮＮＩＧＳＫＮＶＨ（配列番号９１３）、ＣＤＲ２で配列ＲＤＳＮＲＰＳ（配列番号９１４）、およびＣＤＲ３で配列ＱＶＷＤＳＳＴＶ（配列番号９１５）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＶＭＶ（配列番号９１６）、ＣＤＲ２で配列ＧＩＲＳＳＧＧＶＴＡＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号９１７）、およびＣＤＲ３で配列ＶＧＶＷＹＧＭＤＶ（配列番号９１８）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１０３−Ｅ０９は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＴＶＳＳＴＹＬＡ（配列番号９１９）、ＣＤＲ２で配列ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号９２０）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＹＧＳＳＰＰＲＹＴ（配列番号９２１）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＲＹＲＭＶ（配列番号９２２）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＹＰＳＧＧＹＴＫＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号９２３）、およびＣＤＲ３で配列ＶＩＴＹＮＮＦＤＳ（配列番号９２４）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１３１−Ｆ１２は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＬＳＶＳＧＹＬＮ（配列番号９２５）、ＣＤＲ２で配列ＡＴＳＳＬＱＳ（配列番号９２６）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＳＹＳＳＰＹＴ（配列番号９２７）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＡＭＦ（配列番号９２８）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＷＰＳＧＧＫＴＭＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号９２９）、およびＣＤＲ３で配列ＧＧＳＹＬＡＦＤＩ（配列番号９３０）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体０９３−Ｃ０８は、ＣＤＲ１で配列ＬＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮ（配列番号９３１）、ＣＤＲ２で配列ＤＡＳＳＬＥＳ（配列番号９３２）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＦＮＧＹＰＰＩＴ（配列番号９３３）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＲＹＰＭＩ（配列番号９３４）、ＣＤＲ２で配列ＶＩＹＰＳＧＧＭＴＫＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号９３５）、およびＣＤＲ３で配列ＶＧＳＹＧＳＬＧＹ（配列番号９３６）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１１５−Ｆ０４は、ＣＤＲ１で配列ＧＡＳＱＳＶＳＴＴＹＩＡ（配列番号９３７）、ＣＤＲ２で配列ＧＡＳＮＲＡＴ（配列番号９３８）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＹＧＳＳＰＹＴ（配列番号９３９）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＲＹＷＭＷ（配列番号９４０）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＧＰＳＧＧＡＴＲＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号９４１）、およびＣＤＲ３で配列ＧＳＡＧＮ（配列番号９４２）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１１３−Ｇ１１は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＩＤＴＹＬＮ（配列番号９４３）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＫＬＥＤ（配列番号９４４）、およびＣＤＲ３で配列ＱＰＹＮＴＹＰＩＴ（配列番号９４５）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＧＭＹ（配列番号９４６）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＹＰＳＧＧＷＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号９４７）、およびＣＤＲ３で配列ＲＧＳＷＧＡＦＤＩ（配列番号９４８）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１０２−Ｃ０２は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＶＳＮＳＹＬＡ（配列番号９４９）、ＣＤＲ２で配列ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号９５０）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＦＧＳＳＴＧＹＴ（配列番号９５１）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＹＹＭＭＧ（配列番号９５２）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＹＴＳＧＧＹＴＫＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号９５３）、およびＣＤＲ３で配列ＡＳＩＹＹＧＭＤＶ（配列番号９５４）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１１２−Ｄ０４は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＧＩＳＳＷＬＡ（配列番号９５５）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号９５６）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＡＮＳＦＰＹＴ（配列番号９５７）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＹＹＬＭＧ（配列番号９５８）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＧＰＳＧＧＴＴＫＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号９５９）、およびＣＤＲ３で配列ＲＧＬＧＡＡＦＤＹ（配列番号９６０）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１０８−Ｅ１０は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号９６１）、ＣＤＲ２で配列ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号９６２）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＹＧＳＳＳＦＴ（配列番号９６３）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＨＹＩＭＭ（配列番号９６４）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＹＰＳＧＧＳＴＩＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号９６５）、およびＣＤＲ３で配列ＡＴＥＧＹＹＹＧＭＤＶ（配列番号９６６）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１０４−Ｄ１２は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＧＩＲＳＷＬＡ（配列番号９６７）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号９６８）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＳＹＳＴＰＷＴ（配列番号９６９）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＷＹＲＭＡ（配列番号９７０）、ＣＤＲ２で配列ＹＩＧＰＳＧＧＳＴＳＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号９７１）、およびＣＤＲ３で配列ＶＧＴＦＹＧＭＤＶ（配列番号９７２）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１１６−Ｅ０８は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＴＩＳＳＹＬＮ（配列番号９７３）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号９７４）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＳＹＳＴＰＭＹＴ（配列番号９７５）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＷＹＬＭＧ（配列番号９７６）、ＣＤＲ２で配列ＶＩＧＰＳＧＧＬＴＫＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号９７７）、およびＣＤＲ３で配列ＦＲＧＹＹＧＭＤＶ（配列番号９７８）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１０２−Ｄ０７は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＶＲＫＮＶＡ（配列番号９７９）、ＣＤＲ２で配列ＧＡＳＴＲＡＴ（配列番号９８０）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＹＳＳＷＰＡ（配列番号９８１）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＮＹＬＭＹ（配列番号９８２）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＲＰＳＧＧＮＴＬＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号９８３）、およびＣＤＲ３で配列ＧＲＧＩＬＴＧＹＹＷＧＹＹＹＹＭＤＶ（配列番号９８４）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１０３−Ｈ０７は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＩＳＳＳＹＬＡ（配列番号９８５）、ＣＤＲ２で配列ＨＡＳＳＲＡＴ（配列番号９８６）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＲＮＮＷＰＰＳＦＴ（配列番号９８７）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＬＹＬＭＥ（配列番号９８８）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＧＳＳＧＧＡＴＷＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号９８９）、およびＣＤＲ３で配列ＤＴＳＲＶＡＧＴＲＬＲＮＹＹＹＹＹＧＭＤＶ（配列番号９９０）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１１６−Ａ０８は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＩＧＴＬＬＮ（配列番号９９１）、ＣＤＲ２で配列ＧＡＳＮＬＲＧ（配列番号９９２）、およびＣＤＲ３で配列ＱＨＤＴ（配列番号９９３）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＷＹＲＭＨ（配列番号９９４）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＷＰＳＧＧＫＴＨＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号９９５）、およびＣＤＲ３で配列ＡＬＱＹＧＳＧＳＹＦＹＡＰＫＳＹＹＹＹＧＭＤＶ（配列番号９９６）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１０６−Ｄ０６は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＴＩＳＲＹＬＮ（配列番号９９７）、ＣＤＲ２で配列ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号９９８）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＳＹＳＡＰＲＴ（配列番号９９９）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＫＹＫＭＧ（配列番号１０００）、ＣＤＲ２で配列ＹＩＲＰＳＧＧＭＴＦＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１００１）、およびＣＤＲ３で配列ＥＨＹＱＡＳＹＳＳＳＡＷＦＲＭＶＰＡＧＡＦＤＩ（配列番号１００２）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１１３−Ｄ０５は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＧＩＲＲＡＬＡ（配列番号１００３）、ＣＤＲ２で配列ＤＡＳＳＬＥＳ（配列番号１００４）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＳＹＳＴＰＰＷＴ（配列番号１００５）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＹＹＫＭＨ（配列番号１００６）、ＣＤＲ２で配列ＶＩＹＰＳＧＧＫＴＴＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１００７）、およびＣＤＲ３で配列ＥＨＹＱＡＳＹＳＳＳＡＷＦＲＭＶＰＡＧＡＦＤＩ（配列番号１００８）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１１０−Ｄ０６は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＳＶＶＳＮＦＬＡ（配列番号１００９）、ＣＤＲ２で配列ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号１０１０）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＹＧＳＳＰＹＳ（配列番号１０１１）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＮＹＶＭＹ（配列番号１０１２）、ＣＤＲ２で配列ＧＩＧＰＳＧＧＦＴＴＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１０１３）、およびＣＤＲ３で配列ＤＲＹＦＧＳＧＹＹＭＡＡＹＹＹＹＧＭＤＶ（配列番号１０１４）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体１２４−Ｃ０４は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＲＶＳＳＴＦＬＡ（配列番号１０１５）、ＣＤＲ２で配列ＧＴＳＳＲＡＴ（配列番号１０１６）、およびＣＤＲ３で配列ＨＱＹＧＳＳＰＲＴ（配列番号１０１７）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＷＹＡＭＭ（配列番号１０１８）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＷＰＳＧＧＨＴＫＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１０１９）、およびＣＤＲ３で配列ＤＱＧＹＦ（配列番号１０２０）を含むＨＣ可変ドメインを有する。
抗体０９７−Ｂ１２は、ＣＤＲ１で配列ＲＡＳＱＰＩＳＴＳＬＡ（配列番号１３８０）、ＣＤＲ２で配列ＫＡＳＩＬＥＴ（配列番号１３８１）、およびＣＤＲ３で配列ＱＱＹＡＳＰＳＹＴ（配列番号１３８２）を含むＬＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ＣＤＲ１で配列ＫＹＶＭＷ（配列番号１３８３）、ＣＤＲ２で配列ＳＩＶＳＳＧＧＲＴＳＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１３８４）、およびＣＤＲ３で配列ＡＹＤＹＶＷＧＳＹＲＹＫＧＲＰＶＧＡＦＤＩ（配列番号１３８５）を含むＨＣ可変ドメインを有する。この抗体は、ｍＫ１およびｈＫ１の両方を阻害することが見いだされた。
本明細書に記載した代表的な抗体の一部は配列相互関係を有している。ＬＣ、ＨＣ ＣＤＲ３またはＨＣ ＣＤＲ１およびＨＣ ＣＤＲ２を共有する２つの抗体は、ｈＫ１上のほぼ同一部位へ結合する可能性が高い。共通ＨＣ ＣＤＲ３は、特に共有結合部位の指標である。そこで、上述した配列のドメインを共有する２つの抗体の阻害特性は類似である可能性が高い。詳細には、１つの抗体がｈＫ１の阻害剤である場合は、第１抗体の配列を共有する任意の抗体は阻害剤でもある可能性が高い。例えば：
Ｍ００９８−Ｇ０５およびＭ００９７−Ｇ０７は、同一のＨＣ可変ドメインを有するが、それらのＬＣ可変ドメインは相違する。
Ｍ０１０３−Ａ０１およびＭ００９６−Ｄ０９は、同一のＨＣ可変ドメインを有するが、それらのＬＣ可変ドメインは相違する。
Ｍ０１１４−Ｄ０２およびＭ００９７−Ｇ０１は、同一のＨＣ可変ドメインを有するが、それらのＬＣ可変ドメインは相違する。
Ｍ０１１７−Ｆ０８およびＭ０１０２−Ｇ１２は、同一のＨＣ可変ドメインを有するが、それらのＬＣ可変ドメインは相違する。Ｍ０１０２−Ｇ１２は、ｈＫ１を阻害することが知られている。
Ｍ０１３１−Ｃ０８およびＭ００９３−Ｇ０９は、同一のＨＣ可変ドメインを有するが、それらのＬＣ可変ドメインは相違する。
Ｍ０１３１−Ｃ０９およびＭ００９６−Ｄ０９は、同一のＨＣ可変ドメインを有するが、それらのＬＣ可変ドメインは相違する。
Ｍ０１３１−Ｆ０７およびＭ０１０２−Ｇ１２は、同一のＨＣ可変ドメインを有するが、それらのＬＣ可変ドメインは相違する。Ｍ０１３１−Ｆ０７およびＭ０１０２−Ｇ１２は、ｈＫ１を阻害することが知られている。
Ｍ０１３１−Ｇ０３およびＭ００９８−Ｈ０４は、同一のＬＣ可変ドメインを有する。
Ｍ０１３３−Ｅ０８およびＭ０１０２−Ｇ１２は、同一のＬＣ可変ドメインを有する。Ｍ０１０２−Ｇ１２は、ｈＫ１を阻害することが知られている。
Ｍ０１３６−Ａ０７およびＭ００９６−Ｄ０９は、同一のＨＣ可変ドメインを有するが、それらのＬＣ可変ドメインは相違する。
Ｍ０１３８−Ｂ０４およびＭ０１０２−Ｇ１２は、同一のＨＣ可変ドメインを有するが、それらのＬＣ可変ドメインは相違する。Ｍ０１０２−Ｇ１２は、ｈＫ１を阻害することが知られている。
Ｍ０１３８−Ｇ１１およびＭ０１３３−Ｅ０２は、同一のＬＣ可変ドメインを有する。
以下のＨＣ可変ドメインは、同一のＣＤＲ３配列（ＶＧＶＷＹＧＭＤＶ）を有する：Ｍ００９２−Ｆ０８；Ｍ００９３−Ｃ０８；Ｍ００９３−Ｃ１０；１４（Ｍ００９５−Ａ１１；Ｍ００９７−Ｅ０７；Ｍ００９７−Ｆ０８；Ｍ０１０２−Ｈ０２；Ｍ０１０３−Ｆ０７；Ｍ０１０４−Ｈ１２；Ｍ０１０７−Ｆ１１；Ｍ０１０９−Ｅ０８；Ｍ０１１０−Ｄ１１；ＭＯｌＩｌ−Ｃ１０；Ｍ０１１２−Ｃ１２；Ｍ０１１２−Ｄ０４；Ｍ０１１４−Ｇ０９；Ｍ０１１７−Ａ１２；Ｍ０１２４−Ｈ１０；Ｍ０１２８−Ａ０６；Ｍ０１３０−Ｂ０２；Ｍ０１３１−Ｂ０５；Ｍ０１３１−Ｆ０９；Ｍ０１３５−Ｂ０５；Ｍ０１３５−Ｆ０３；Ｍ０１３６−Ｅ１２；Ｍ０１３８−Ｅ０２；Ｍ０１３９−Ｆ０９）。
Ｍ００９６−Ｄ０３、Ｍ０１０２−Ｃ１２、Ｍ０１２６−Ｆ１１、およびＭ０１２８−Ｅ０７）のＨＣ可変ドメインは、ｃｄｒ３＝ＧＮＧＧＦＤＳを共有する。Ｍ００９７−Ｄ０４およびＭ０１３４−Ｄ０７）のＨＣ可変ドメインは、ｃｄｒ３＝ＲＧＰＶＹＹＹＤＳＳＧＳＨＳＡＦＤＩを共有する。
Ｍ００９７−Ｇ０７およびＭ０１３９−Ｃ０２のＨＣ可変ドメインは、ｃｄｒ３＝ＥＨＹＱＡＳＹＳＳＳＡＷＦＲＭＶＰＡＧＡＦＤＩを共有する。Ｍ０１０１−Ｅ０１および１Ｍ０１３６−Ｄ０７のＨＣ可変ドメインは、ｃｄｒ３＝ＮＩＮＬＲＹＤＩＬＴＧＹＦＤＬを共有する。Ｍ０１０２−Ｇ１２およびＭ０１１０−Ｇ０１のＨＣ可変ドメインは、ｃｄｒ３＝ＤＩＴＰＧＧＧＳＧＦＲＬＰＫＮＹＹＹＹＧＭＤＶを共有する。Ｍ０１０２−Ｇ１２はｈＫ１を阻害する。Ｍ０１０２−Ｇ１２およびＭ０１３３−Ｅ０８のＨＣ可変ドメインは、ｃｄｒ３＝ＤＩＴＰＧＧＧＳＧＦＲＬＰＫＮＹＹＹＹＧＭＤＶを共有する。Ｍ０１０２−Ｇ１２はｈＫ１を阻害する。それらのＬＣ可変ドメインは同一である。Ｍ０１０２−Ｇ１２およびＭ０１３９−Ｆ０４のＨＣ可変ドメインは、ｃｄｒ３＝ＤＩＴＰＧＧＧＳＧＦＲＬＰＫＮＹＹＹＹＧＭＤＶを共有する。Ｍ０１３９−Ｆ０４およびＭ０１０２−Ｇ１２は、ｈＫ１を阻害する。それらのＬＣ可変ドメインは相違する。Ｍ０１０４−Ｄ１２およびＭ０１１７−Ｂ０７のＨＣ可変ドメインは、ｃｄｒ３＝ＧＧＳＹＬＡＦＤＩを共有するが、ＬＣは相違する。Ｍ０１０５−Ｂ０６およびＭ０１１６−Ｃ０９は、ｃｄｒ３＝ＧＹＳＳＴＷＧＡＦＤＩを共有する。Ｍ０１０５−Ｂ０６およびＭ０１３８−Ｅ１２は、ｃｄｒ３＝ＧＹＳＳＴＷＧＡＦＤＩを共有する。Ｍ０１３３−Ｅ０２およびＭ０１３８−Ｇ１１）は、ｃｄｒ３＝ＤＴＲＶＧＰＷＬＶＲＡＰＬＤＹを共有する。
Ｍ０１０２−Ｇ１２およびＭ０１３３−Ｅ０８は、ＨＣ ＣＤＲ１＝ＫｙＫｍＶ（配列番号１０）およびＨＣ ＣＤＲ２＝ＳｉＹＰｓｇｇＩｔＡｙａｄｓｖｋｇ（配列番号１１）を共有する。Ｍ０１０２−Ｇ１２はｈＫ１を阻害する。Ｍ０１０７−Ｄ１２およびＭ０１１０−Ｇ０１は、ＨＣ ＣＤＲ１＝ＭｙＫｍＧおよびＨＣ ＣＤＲ２＝ＳｉＶＰｓｇｇＫｔＱｙａｄｓｖｋｇを共有する。Ｍ０１３３−Ｅ０２およびＭ０１３８−Ｇ１１は、ＨＣ ＣＤＲ１＝ＷｙＴｍＴおよびＨＣ ＣＤＲ２＝ＳｉＹＰｓｇｇＨｔＳｙａｄｓｖｋｇを共有する。
同定されたｈＫ１阻害剤と共通する少なくとも１つのＣＤＲを有する代表的抗体の配列もまた、阻害剤である可能性が高い。
Ｍ０１０３−Ａ０３は９６位でＣを有していない。
Ｍ０１０７−Ｄ１２は、終止コドンを含有する。
Ｍ０１０７−Ｄ１２は、ＦＲ４の開始部位でＷＧモチーフを有していない。
代表的なＨＣ可変ドメインの配列および例えばＣＨ１の末端に向かって伸びるＣ末端から可変ドメインまでの配列は、以下のとおりである。
Figure 2008515774
 ＶＬ−Ｃｌｉｇｈｔと適正な折り畳みを備える真核細胞、酵母細胞、または細菌細胞中で発現したＶＨ−ＣＨ１との組み合わせは、Ｆａｂを生じさせる。Ｆａｂはモノマー性であり、典型的には約５０ｋＤａの分子量を有する。
以下の配列は、ヒトＩｇＧ１のＣＨｌ、ヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３を通って伸びるＨＣ可変ドメインを例示している：
Figure 2008515774
 Ｖｌｉｇｈｔ：：Ｃｌｉｇｈｔを含むＬＣと一緒にＶＨ：：ＣＨｌ：：Ｈｉｎｇｅ：：ＣＨ２：：ＣＨ３を含むＨＣの発現は、ＩｇＧを生じさせる。本明細書に示した実施例では、ＩｇＧ１が得られるであろう。他のＩｇＧタイプは、ＣＨｌ：：Ｈｉｎｇｅ：：ＣＨ２：：ＣＨ３をコードするＤＮＡを、例えばＩｇＧ４をコードするＤＮＡと置換すること、または修飾されたＦｃ配列を使用することによって入手できる。
代表的なＬＣ可変ドメインの配列および例えばＣκの末端に向かって伸びるＣ末端から可変ドメインまでの配列は、以下のとおりである：
Figure 2008515774
Figure 2008515774
 以下のＬＣ配列はλ１定常領域を有する：
Figure 2008515774
 以下のＬＣ配列はλ２定常領域を有する：
Figure 2008515774
 以下のＬＣ配列はλ７定常領域を有する：
Figure 2008515774
 λ軽鎖には数種のタイプがある：例えば、Ｃλの配列に依存して、λ１、λ２、およびλ７。λＬＣを有する抗体は、以下のように分類できる。
Figure 2008515774
Figure 2008515774
Figure 2008515774
 Ｃλを例えばＣλ１からＣλ２へ変化させることは、発現した抗体の結合特性を重要には変化させないと予想される。そこで、本発明者らは、結合特性（ｈＫ１の阻害など）を変化させずに発現もしくは薬物動態を変化させるためにλ定常領域を変化させることができた。
選択された阻害剤のプロテアーゼ特異性
選択された抗体が他のプロテアーゼを阻害する能力について試験した。表２には、ｈＫ１以外の１３種のセリンプロテアーゼに対する３種の抗体を試験した結果を示した。試験した抗体の最高濃度（１μＭ）で、本発明者らが他のいずれのプロテアーゼの阻害も観察しなかったことは明白である。
方法。アッセイは、総量１００μＬの黒色、丸底の９６ウエルマイクロプレート内で実施した。酵素、基質、バッファーおよび実験条件は、表３および４に列挙した。酵素およびＦａｂ阻害剤は、指示した量の基質を添加する１時間前に室温の暗所でインキュベートした。酵素基質の加水分解速度は、表３に列挙した波長を使用して、Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘ Ｇｅｍｉｎｉ ＸＳ蛍光プレートを用いて監視した。
（表２．ｈＫ１抗体阻害剤の特異性。）
Figure 2008515774
Figure 2008515774
 選択された抗体阻害剤がｈＫ１キニノゲナーゼ活性に及ぼす作用
選択された抗体阻害剤がｈＫ１キニノゲナーゼ活性に及ぼす作用を決定する試験を実施した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥは、試験した全９種の抗体が、高分子量キニノーゲン（ＨＭＷＫ）に対するｈＫ１のキニノゲナーゼ活性を阻害することを証明した。無傷ＨＭＷＫは、１００ｋＤａのタンパク質として移動してｈＫ１によって消化されると、約６０ｋＤａでランするフラグメントを生じさせた（レーン１および２）。試験した全９種のｈＫ１阻害剤（レーン４〜１２）は、ＨＭＷＫの消化を防止した。実験は、１０ｎＭのｈＫ１を１μＭのＡｂと３７℃で３時間インキュベートし、その後に０．１ｍｇ／ｍＬのＨＭＷＫを加えることによって実施した。ＨＭＷＫは、３７℃で３時間にわたりｈＫ１と反応させた。非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル（１０％アクリルアミド）に１μｇのＨＭＷＫを装填し、標準方法にしたがってランさせた。レーン１は未消化ＨＭＷＫを含有し、レーン２は消化ＨＭＷＫを含有し、レーン３はＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製の分子量マーカーを含有し、レーン４はＨＭＷＫ＋ｈＫ１＋ＤＸ−２３００を含有し、レーン５はＨＭＷＫ＋ｈＫ１＋Ｍ０１０６−Ｇ１２を含有し、レーン６はＨＭＷＫ＋ｈＫ１＋Ｍ０１１１−Ｃ１２を含有し、レーン７はＨＭＷＫ＋ｈＫ１＋Ｍ００９８−Ｇ０５を含有し、レーン８はＨＭＷＫ＋ｈＫ１＋Ｍ０１３７−Ｅ０１を含有し、レーン９はＨＭＷＫ＋ｈＫ１＋Ｍ０１１２−Ｄ０３を含有し、レーン１０はＨＭＷＫ＋ｈＫ１＋Ｍ０１０２−Ｈ１１を含有し、レーン１１はＨＭＷＫ＋ｈＫ１＋Ｍ０１１４−Ｇ０６を含有し、レーン１２はＨＭＷＫ＋ｈＫ１＋Ｍ００９８−Ｅ０９を含有していた。
ＬＭＷＫに対しては、全９種のＦａｂが消化範囲を阻害したことは明白である。しかし、ＬＭＷＫ消化を完全に所害したのはＤＸ−２３００（レーン４）およびＭ０１３７−Ｅ０１（レーン８）だけであると思われた。これらの反応はＨＭＷＫについて上述したように実施し、各レーンは、ＬＭＷＫをＨＭＷＫに置換した以外は上記と同一含量を含有していた。
選択されたｈＫ１結合抗体のエピトープ分類
選択された抗体は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アプローチを用いて、ｈＫ１上でＤＸ−２３００と同一のエピトープを認識するかどうかによって分類した（図１、表５）。このタイプの情報は、生物学的サンプル中においてｈＫ１を定量的に測定するために適合する抗体対の発見を導くことができる。この情報は、抗体を主要阻害剤（ＤＸ−２３００）と比較するため、そしてＤＸ−２３００と同一のエピトープもしくは相違するエピトープのいずれかを共有する補助的阻害剤を選択するためにもまた貴重である。図１は、ＤＸ−２３００と同一のエピトープを共有するＦａｂ（Ｍ０１１２−Ｄ０７）（パネルＡ）および相違するエピトープに結合するＦａｂ（パネルＢ）についての２つの代表的なセンサーグラムを示している。Ｆａｂ単独（Ｒ２）のシグナルによって分割したＤＸ−２３００（Ｒ１）の注射後のＦａｂに対するＳＰＲシグナルの比率は、どのＦａｂがＤＸ−２３００と同一のエピトープを共有するのかについての指標を提供する。ＤＸ−２３００の第２回注入は０．１のＲ２／Ｒ１比を生じさせるので、０．１より有意に大きなＲ２／Ｒ１比を示すＦａｂは、ＤＸ−２３００とは相違するエピトープでの結合を表示している。試験した１２種のＦａｂ中で、ＤＸ−２３００と同一のエピトープを共有していなかったのはＭ０１１１−Ｃ１２、Ｍ０１３７−Ｅ０１およびＭ０１３９−Ａ０９だけであった（表５）。所定のＦａｂ（Ｍ０１０９−Ｆ０２およびＭ００９８−Ｅ０９）のエピトープは、中間シグナル反応が観察されたので、部分的にＤＸ−２３００のシグナルと重複する可能性がある（表５）。
（表５．表面プラズモン共鳴によるエピトープの分類）
Figure 2008515774
 ｈＫ１阻害のメカニズムおよび選択された阻害剤についてのＫｉ値の決定
発見された最高の抗体はｈＫ１の密接結合阻害剤であるので、酵素阻害メカニズムを決定するための伝統的なＭｉｃｈａｅｌｉｓ−Ｍｅｎｔｅｎアプローチは適合しない。密接結合阻害剤の阻害メカニズムを決定する方法は、記載されている（Ｒ．Ａ． Ｃｏｐｅｌａｎｄ， “Ｅｎｚｙｍｅｓ”， ２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｗｉｌｅｙ， Ｔｏｒｏｎｔｏ， ２０００）。密接結合阻害剤は、ｈＫ１に対しておよそ１ｎＭである活性を測定するために使用できる最小酵素濃度に近似する阻害定数（Ｋｉ値）を備える阻害剤を意味する。密接結合阻害法は、様々な物質濃度範囲で阻害剤のＩＣ５０を測定する工程を必要とする。これらの条件下では、基質に関して競合的な方法で酵素に結合する阻害剤は、基質濃度に反応してＩＣ５０における線形増加を示すであろう。これとは対照的に、基質濃度に伴って変化しないＩＣ５０値は、基質に関して非競合的である方法で阻害剤が酵素に結合することを示している。非競合的阻害剤の酵素への結合は、物質が酵素に結合する能力を遮断せず、むしろ、おそらくは触媒的に重要なアミノ酸の変形を通して、その後の基質の加水分解工程を防止する。
ＤＸ−２３００は、基質濃度へのＩＣ５０値の線形依存性を示す（図２）。結果として、ＤＸ−２３００は、競合的方法でｈＫ１を阻害する密接結合阻害剤であり、これはｈＫ１へのその結合が基質結合を防止することを示している。阻害メカニズムについての知識は、阻害定数（Ｋｉ）の決定も可能にする。ＤＸ−２３００は、Ｆａｂとしては６０ｐＭおよびＩｇＧとしては約３９ｐＭのＫｉ値を有する。
阻害のメカニズムおよびＫｉ値は、選択された補助的抗体であるＭ００９３−Ｆ０９およびＭ０１３７−Ｅ０１についても決定した。図３Ａに示したように、Ｍ００９３−Ｆ０９は非競合的方法で１．９ｎＭのＫｉでｈＫ１を阻害する。図３Ｂは、補助的抗体阻害剤Ｍ０１３７−Ｅ０１が競合的方法で０．９ｎＭのＫｉでｈＫ１を阻害する。
ＤＸ−２３００の進行曲線阻害分析
ｈＫ１のＤＸ−２３００阻害の時間依存性は、進行曲線法を用いて調査した（Ｒ．Ａ． Ｃｏｐｅｌａｎｄ， “Ｅｎｚｙｍｅｓ”， ２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｗｉｌｅｙ， Ｔｏｒｏｎｔｏ， ２０００）。この方法は、阻害剤と酵素との相互作用を記述する動力学的工程を特性解析するために使用する。図４Ａに示した進行曲線は、ＤＸ−２３００によるｈＫ１の時間依存性阻害を示しており、阻害剤の各濃度について入手したデータを当てはめると、酵素と阻害剤との相互作用の動力学を記述する指数関数的速度定数が生じた。阻害剤濃度に対してプロットしたこれらの速度定数（ｋｏｂｓ値）は双曲的依存性を示しており（図４Ｂ）、これはＤＸ−２３００およびｈＫ１の初期複合体が異性化されていっそう高い親和性を備える新規な複合体を形成することを指示している。
動物の尿中カリクレイン様活性のＤＸ−２３００による阻害
組織カリクレイン（Ｋ１）は、尿中に排泄されることが以前に証明されている。Ｋｉｚｕｋｉ， Ｋ．， ｅｔ ａｌ．， Ａｄｖ Ｅｘｐ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ， １９８６． １９８ Ｐｔ Ａ：３２９−３３７；Ｔａｋａｏｋａ， Ｍ．， ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ， １９８４． １２２（３）：１２８２−１２８８；Ｍｕｒｔｈｙ， Ｋ．Ｋ．， ｅｔ ａｌ．， Ａｒｃｈ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ， １９８６． ２４４（２）：５６３−５７１；Ｓｔｅｌｌａ， Ｒ．Ｃ．， ｅｔ ａｌ．， Ａｄｖ Ｅｘｐ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ， １９８９． ２４７Ｂ：１９５−２００。合成ペプチド基質を用いると、Ｋ１の活性を尿中で測定できる。しばしば排泄されたＫ１の多くは不活性プロフォームであるので、トリプシンもしくはサーモリシンなどのまた別のプロテアーゼを用いてこの酵素を活性化することが不可欠である。尿中のＫ１の活性を測定する前に、活性化酵素は特異的阻害剤を用いてクエンチする（トリプシンのためには大豆トリプシン阻害剤またはサーモリシンのためにはホスホルアミドン）。
図５から、ＤＸ−２３００が、ヒト、ヒツジ、イヌ、サル、ウサギ、およびウシの尿中に存在するカリクレイン様活性を阻害することは明白である。しかし、ＤＸ−２３００は、齧歯類（マウス、ラット、モルモット、もしくはハムスター）またはブタの尿中で観察されるカリクレイン様活性を阻害しない。ヒツジ尿およびヒト尿中でのカリクレイン様活性について測定したＤＸ−２３００ ＩＣ５０値は、各々２．９±１．６ｎＭおよび３．０±０．６ｎＭで匹敵している（図６）。
方法。動物の尿は１／１０容量の１ＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．７）を添加することによって最初に緩衝し、遠心することで固体を除去した。次に３７℃で３０分間、５０μＬのトリプシンアガロース樹脂を加えることによって上清（１ｍＬ）を活性化した。サンプルを遠心してトリプシンアガロースを除去し、樹脂から漏出した可能性がある残留トリプシンは１０μＭの大豆トリプシン阻害剤を用いて不活性化した。活性化した尿（９μＬ）中の合成基質Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ＡＭＣ（１００μＭ［最終］）に向けてのカリクレイン活性を０．５μＭｍのＤＸ−２３００の存在下もしくは不在下で９６ウエルプレートのＫａｌバッファー（表４）ウエル内で測定した。基質を添加する前に、活性化した尿は最初に３７℃で３０分間にわたりＤＸ−２３００と一緒にインキュベートした。
ヒト気管支肺胞洗浄液中のカリクレイン様活性の阻害
組織カリクレイン１（ｈＫ１）は、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬ）中で測定した場合に、健常個体と比較して喘息患者の気道中では上昇することが証明されている。Ｐｒｏｕｄ， Ｄ．ｅｔ ａｌ． Ａｍ ＪＲｅｓｐｉｒ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ， １９９３． ８（１）：１６−１９；Ｃｈｒｉｓｔｉａｎｓｅｎ， Ｓ．Ｃ．， ｅｔ ａｌ．， Ａｍ Ｒｅｖ Ｒｅｓｐｉｒ Ｄｉｓ， １９９２． １４５（４ Ｐｔ １）：９００−９０５；Ｃｈｒｉｓｔｉａｎｓｅｎ， Ｓ．Ｃ．， ｅｔ ａｌ， Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ， １９８７． ７９（１）：１８８−１９７。ＤＸ−２３００は、合成基質Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ＡＭＣを用いて測定した場合に４人の相違する軽症喘息患者由来のＢＡＬ中でカリクレイン様活性を阻害することが見いだされた。（図７を参照）。この合成基質はＢＡＬ中の他のプロテアーゼによっては加水分解されるので、このためキニノゲナーゼ活性の選択的基質ではない。ＤＸ−２３００はＫ１の高度に特異的な阻害剤であることが証明されているので、ＢＡＬ中のこれらの他のプロテアーゼを阻害する可能性は低い。結果として、ＤＸ−２３００は、ＢＡＬ中のプロテアーゼ活性を完全に阻害するとは予想されない。このようなＫ１活性の特異的阻害剤を用いてＢＡＬ内で実質的な量のプロテアーゼ阻害が観察されたことは、Ｋ１活性が喘息患者では上昇することを確証している。
喘息のヒツジモデルにおけるＤＸ−２３００の作用
喘息のヒツジモデルは、潜在的喘息薬の標的の妥当性を確認し、物質を試験するために以前に使用されている。Ｆｏｒｔｅｚａ， Ｒ．， ｅｔ ａｌ．， Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ， １９９６． １５４（ｌ）：３６−４２；Ｒｏｓｅｎ， Ｓ．Ｄ．， ｅｔ ａｌ．， Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ， ２００５． １６６（３）：９３５−９４４；Ｓｃｕｒｉ， Ｍ．， ｅｔ ａｌ．， ＪＡｐｐｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ， ２００２． ９３（６）：１９００−１９０６。このモデルでは、アレルギー性のヒツジにＡｓｃａｒｉｓ ｓｕｕｍ抗原を用いて惹起され、肺抵抗性の測定値は付随する気管支収縮の指標を提供する。図８Ａに示したように、ＤＸ−２３００は初期にはわずかに減少したが、後期には気管支修飾を８０％超まで阻害した。
喘息のヒツジモデルにおける気道高反応性（ＡＨＲ）の測定値は、ヒト患者における有効性も示している。図９Ｂに示したように、ＤＸ−２３００は、アレルゲン惹起に続くＡＨＲを完全に遮断した。ＡＨＲは、気管支収縮をベースライン値の４００％以上に増加させる（ＰＣ４００）ためにコリン作動薬であるカルバコールがどのくらい必要であるのかによって測定する。アレルゲン惹起後には、気道はそのようなアゴニストに対して高反応性となるので、同一レベルの気管支収縮を誘導するために必要な量は減少する。図９Ｂは、惹起後に気管支収縮のＰＣ４００レベルに達するために同量のカルバコールが必要とされたために、ＤＸ−２３００がＡＨＲの発生を遮断したことを証明している。
ヒツジへの吸入によるＫ１基質である高分子量キニノーゲン（ＨＭＷＫ）の投与は、肺抵抗性の増加によって測定されるように、即時の気管支収縮を生じさせる。この増加は、気道キニノゲナーゼによるキニンの生成に起因する。ＤＸ−２３００がＨＭＷＫ誘導性気管支修飾を阻害するという観察（図１０）は、Ｋ１が気道における主要キニノゲナーゼであるという観察を支持している。Ｃｈｒｉｓｔｉａｎｓｅｎ， Ｓ．Ｃ．， ｅｔ ａｌ．， Ａｍ Ｒｅｖ Ｒｅｓｐｉｒ Ｄｉｓ， １９９２． １４５（４ Ｐｔ １）：９００−９０５；Ｌａｕｒｅｄｏ， ＬＴ．， ｅｔ ａｌ．， Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｌｕｎｇ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ， ２００４． ２８６（４）：Ｌ７３４−４０。
ＤＸ−２３００の重鎖および軽鎖をコードするＤＮＡのコドン最適化
ＤＸ−２３００の重鎖および軽鎖をコードするＤＮＡは、どちらも当分野の専門家であるＧＥＮＥＡＲＴが独自仕様のアルゴリズムを用いてチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞内での発現について最適化された。コドンの最適化中には使用をＣｒｉｃｅｔｕｌｕｓ遺伝子のコドンバイアスに適応させた。可能な場合は、高（＞８０％）または低（＜３０％） ＧＣ含量の領域を回避した。さらに、重鎖４ Ｐｒｏｃａｒｙａ阻害モチーフおよび７コンセンサス潜在的スプライスドナー部位は取り除いた。軽鎖については、単一イントロンを取り除いた。
Figure 2008515774
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 当業者は、本明細書に記載した本発明の特定の実施形態の多数の同等物を、日常的実験や実験器具以上のものを使用せずに認識するであろう、または確定できるであろう。そのような同等物は、以下の特許請求の範囲に含まれることが企図されている。
ＳＰＲによるエピトープの分類。ビオチニル化ｈＫ１は、ストレプトアビジンを被覆したチップ上で８８ＲＵの最終リガンド密度で捕捉された。ＤＸ−２３００は、ＰＢＳＴ内でＢｉａｃｏｒｅ ３０００装置を用いて２５℃、流量３０μＬ／分で、５０ｎＭの濃度で固定化ｈＫ１の上方に注入し、次に第２Ｆａｂを５０ｎＭの濃度で注入した。ＤＸ−２３００、次に第２Ｆａｂの注入終了時のシグナルはＲ１である。Ｆａｂ単独の注入終了時のシグナルはＲ２である。パネルＡは、ＤＸ−２３００と同一エピトープへ結合するＦａｂ（Ｍ０１１２−Ｄ０７）についてのセンサーグラムを示している。パネルＢは、ＤＸ−２３００と相違するエピトープへ結合するＦａｂ（Ｍ０１３９−Ａ０９）についてのセンサーグラムを示している。 ＤＸ−２３００（本明細書では「Ｍ０１３１−Ｆ０７」とも呼ぶ）の阻害メカニズム。ＦａｂとしてのＤＸ−２３００の阻害メカニズム（パネルＡ）は、競合的であり、６０±２ｐＭのＫｉを有することが示されている。ＩｇＧとしてのＤＸ−２３００の阻害メカニズム（パネルＢ）は、競合的であり、３９±４ｐＭのＫｉを有することが示されている。 他のｈＫ１阻害剤の阻害メカニズム。ＦａｂとしてのＭ００９３−Ｆ０９の阻害メカニズム（パネルＡ）は、競合的であり、１．９ｎＭのＫｉを有することが示されている。ＦａｂとしてのＭ０１３７−Ｅ０１の阻害メカニズム（パネルＢ）は、競合的であり、０．９ｎＭのＫｉを有することが示されている。 ＤＸ−２３００の進行曲線分析。ｋｏｂｓ値を入手するために、ＤＸ−２３００阻害剤の存在下で量を増加させながらの反応速度進行曲線（パネルＡ）を以下の方程式に当てはめた：Ｆ＝ｖｓ＋（ｖ０−ｖｓ）（１−ｅｘｐ（−ｋｏｂｓ ＊ｔ））／ｋｏｂｓ＋Ｃ（式中、Ｆ＝蛍光、ｖｓ＝最終定常状態速度、ｖ０＝初期定常状態速度、ｋｏｂｓ＝指数関数的阻害定数、ｔ＝秒単位での時間、およびＣはｔ＝０秒での初期バックグラウンド蛍光を説明する定数である）。パネルＢでは、ｋｏｂｓ値を阻害剤濃度に対してプロットし、異性体化工程を用いて緩徐で密な結合剤についての方程式に当てはめた：ｋｏｂｓ＝ｋ６＋（ｋ５ ＊［Ｉ］／（Ｋｉ，ａｐｐ＋［Ｉ］））（式中、ｋ６は酵素−阻害剤異性体化工程についての逆反応速度定数、ｋ５はその工程についての正反応速度定数、Ｋｉ，ａｐｐは初期酵素−阻害剤複合体を形成するための見かけの平衡阻害定数、および［Ｉ］は本アッセイ中に存在する阻害剤の濃度である。 動物の尿中のカリクレイン様活性のＤＸ−２３００による阻害。動物におけるカリクレイン様活性を上述したように測定した。阻害率は、阻害率＝１００−（Ｒ０−Ｒｉｎｈｉｂｉｔｅｄ）／Ｒ０ ＊１００であるように、ＤＸ−２３００（Ｒｉｎｈｉｂｉｔｅｄ）の存在下で観察された初期速度対不在下（Ｒ０）で観察された速度の比率である。 ヒトおよびヒツジの尿中のカリクレイン様活性のＤＸ−２３００ ＩＣ５０の決定。活性化された尿中のカリクレイン活性の測定は、様々な濃度のＤＸ−２３００の存在下または不在下において上述したように実施した。ヒツジ尿およびヒト尿中でのカリクレイン様活性について測定したＤＸ−２３００ ＩＣ５０値は、各々２．９±１．６ｎＭおよび３．０±０．６ｎＭで匹敵している。 ライノウイルス感染後の軽度喘息患者由来のヒトＢＡＬ内でのカリクレイン様活性の阻害。ＢＡＬ中のカリクレイン活性は、０．５μＭのＤＸ−２３００の存在下または不在下で、ＫＡＬバッファー（表４）中の１００μＭのＰｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ＡＭＣ基質を用いて８０μＬのＢＡＬ中で測定した。基質を添加する前に、ＢＡＬは３０℃で３０分間にわたりＤＸ−２３００と一緒にインキュベートした。 ＤＸ−２３００がヒツジにおける抗原誘導性気道反応に及ぼす作用。ヒツジ（ｎ＝２）には、ブタ回虫（Ａｓｃａｒｉｓ ｓｕｕｍ）による惹起の１２時間３０分前に吸入によって１０ｍｇのＤＸ−２３００を投与した。パネルＡは、アレルゲン惹起後の８時間にわたり肺抵抗性を測定することによってＤＸ−２３００処置動物（四角形）と対照群動物（菱形）を比較している。パネルＢは、ＤＸ−２３００処置群動物対対照群動物について観察された惹起２４時間後に投与されたカルバコールへの気道高反応性を比較している。白棒は、アレルゲン投与前のベースライン値を４００％超える気管支収縮を誘導するために必要とされたカルバコールの量を示している。黒棒は、アレルゲン投与２４時間後にベースライン値を４００％超える気管支収縮を誘導するために必要とされたカルバコールの量を示している。 ＤＸ−２３００が喘息のヒツジモデルにおける高分子量キニノーゲン誘導性気管支収縮に及ぼす作用。菱形の記号は、薬物の不在下で吸入されたＨＭＷＫ（１００μｇ）に反応した気管支収縮を示している。四角の記号は、吸入された１ｍｇのＤＸ−２３００の存在下で吸入されたＨＭＷＫ（１００μｇ）に反応した気管支収縮を示している。三角形の記号は、５ｍｇのＤＸ−２３００の存在下で吸入されたＨＭＷＫ（１００μｇ）に反応した気管支収縮を示している。

Claims (33)

  1. 免疫グロブリン重鎖（ＨＣ）可変ドメイン配列および免疫グロブリン軽鎖（ＬＣ）可変ドメイン配列を含むタンパク質であって、該ＨＣ可変ドメイン配列および該ＬＣ可変ドメイン配列がｈＫ１に結合してｈＫ１の酵素活性を阻害する抗原結合部位を形成するタンパク質。
  2. 前記タンパク質がｈＫ１に対して１０ｎＭ未満のＫｉを有する、請求項１に記載のタンパク質。
  3. 前記タンパク質がｈＫ１に対して１ｎＭ未満のＫｉを有する、請求項１に記載のタンパク質。
  4. 前記タンパク質がｈＫ１に対して０．１ｎＭ未満のＫｉを有する、請求項１に記載のタンパク質。
  5. 前記タンパク質が以下の特性：
    （ｉ）
    （ａ）アミノ酸配列：Ｘａａ１−Ｔｙｒ−Ｘａａ２−Ｍｅｔ−Ｘａａ３（式中、Ｘａａ１はＬｙｓおよびＨｉｓから選択される；Ｘａａ２はＬｙｓ、ＶａｌおよびＳｅｒから選択される；Ｘａａ３はＶａｌ、ＩｌｅおよびＴｈｒから選択される）を含むＣＤＲ１と、
    （ｂ）アミノ酸配列：Ｘａａ１−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｘａａ２−Ｔｈｒ−Ｘａａ３−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ（式中、Ｘａａ１はＳｅｒ、ＴｒｐおよびＡｒｇから選択される；Ｘａａ２はＩｌｅ、ＡｓｎおよびＡｒｇから選択される；Ｘａａ３はＡｌａ、ＩｌｅおよびＧｌｙから選択される）を含むＣＤＲ２と、および／または
    （ｃ）ＤＩＴＰＧＧＧＳＧＦＲＬＰＫＮＹＹＹＹＧＭＤＶ（配列番号１２）、ＶＧＶＷＹＧＭＤＶ（配列番号１１４）もしくはＤＳＧＧＹＹＹＧＭＤＶ（配列番号１５６）からの少なくとも８アミノ酸を含むＣＤＲ３と、を含む前記重鎖可変ドメイン配列；
    （ｉｉ）
    （ａ）アミノ酸配列：Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｘａａ１−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５（配列番号１３８０）（式中、Ｘａａ１はＩｌｅおよびＶａｌから選択される；Ｘａａ２はＴｙｒおよびＳｅｒから選択される；Ｘａａ３はＬｅｕおよびＴｙｒから選択される；Ｘａａ４はＡｓｎ、ＡｌａおよびＬｅｕから選択される；およびＸａａ５はＡｌａである、もしくは存在しない）を含むＣＤＲ１と、
    （ｂ）アミノ酸配列Ｘａａ１−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４（式中、Ｘａａ１はＡｌａ、ＡｓｐおよびＧｌｙから選択される；Ｘａａ２はＳｅｒおよびＡｓｎから選択される；Ｘａａ３はＬｅｕおよびＡｒｇから選択される；Ｘａａ４はＧｌnおよびＡｌａから選択される；ならびにＸａａ４はＳｅｒおよびＴｈｒから選択される）を含むＣＤＲ２と、および／または
    （ｃ）ＱＱＳＹＳＴＰＬＴ（配列番号９）、ＱＱＲＳＮＷＰＳＰＩＡ（配列番号１１１）およびＱＱＹＧＳＳＬＴ（配列番号１５３）からの少なくとも５アミノ酸を含むＣＤＲ３と、を含む軽鎖可変ドメイン配列；
    （ｉｉｉ）該重鎖可変ドメイン配列は配列番号１２０６、１２４５もしくは１３５４の重鎖可変ドメイン配列と少なくとも８５％同一の配列を含んでいる；
    （ｉｖ）前記軽鎖可変ドメイン配列は配列番号１０２９、１０７０もしくは１１８３の軽鎖可変ドメイン配列と少なくとも８５％同一の配列を含んでいる；
    （ｖ）該重鎖可変ドメイン配列は配列番号１２０６、１２４５もしくは１３５４の重鎖可変ドメイン配列をコードする配列へストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によってコードされた配列を含んでいる；
    （ｖｉ）該軽鎖可変ドメイン配列は配列番号１０２９、１０７０もしくは１１８３の軽鎖可変ドメイン配列をコードする配列へストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によってコードされた配列を含んでいる；および／または
    （ｖｉｉ）該タンパク質はｈＫ１への結合について抗体ＤＸ−２３００、Ｍ０９３−Ｆ０９もしくはＭ１３７−Ｅ０１と競合する、
    のうちの１つまたは複数を有する、請求項１に記載のタンパク質。
  6. ＤＸ−２３００抗体のＣＤＲ領域を含む請求項１に記載のタンパク質。
  7. Ｍ０９３−Ｆ０９抗体のＣＤＲ領域を含む請求項１に記載のタンパク質。
  8. Ｍ１３７−Ｅ０１抗体のＣＤＲ領域を含む請求項１に記載のタンパク質。
  9. 前記重鎖可変ドメイン配列および前記軽鎖可変ドメイン配列が配列番号１２４５および１０７０の対応する可変ドメイン配列と少なくとも９０％同一である、請求項１に記載のタンパク質。
  10. 前記重鎖可変ドメイン配列および前記軽鎖可変ドメイン配列が配列番号１２０６および１０２９の対応する可変ドメイン配列と少なくとも９０％同一である、請求項１に記載のタンパク質。
  11. 前記重鎖可変ドメイン配列および前記軽鎖可変ドメイン配列が配列番号１１８３および１３５４の対応する可変ドメイン配列と少なくとも９０％同一である、請求項１に記載のタンパク質。
  12. 前記ＦＲ領域の少なくとも８０％がヒト生殖細胞系配列由来のＦＲ配列、またはＤＸ−２３００、Ｍ０９３−Ｆ０９もしくはＭ１３７−Ｅ０１のＦＲ配列と同一である、請求項１に記載のタンパク質。
  13. ヒトにおいて免疫原性ではない、請求項１に記載のタンパク質。
  14. 全長ＩｇＧ抗体である、請求項１に記載のタンパク質。
  15. 抗体の抗原結合フラグメントであってＦｃドメインを含んでいない、請求項１に記載のタンパク質。
  16. 請求項１に記載のタンパク質および薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物。
  17. ｈＫ１関連性障害を処置または予防する方法であって、該ｈＫ１関連性障害を処置または予防するための有効量で被験体へ請求項１に記載のタンパク質を投与する工程を含む方法。
  18. 前記障害が、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、多発性硬化症、乾癬、慢性関節リウマチ、変形性関節症、鼻炎、副鼻腔炎、炎症性腸疾患、免疫媒介性糖尿病、急性膵炎、間質性膀胱炎、腫瘍性障害からなる群から選択される、請求項１７に記載の方法。
  19. 前記障害が喘息であり、該喘息がアレルギー性喘息または非アレルギー性喘息である、請求項１８に記載の方法。
  20. 前記障害が腫瘍性障害であり、前記腫瘍性障害が転移性膵腺癌または腫瘍血管新生である、請求項１８に記載の方法。
  21. 前記薬学的組成物が吸入によって投与される、請求項１９に記載の方法。
  22. 前記薬学的組成物がインヘラーを用いて投与される、請求項２１に記載の方法。
  23. 血管新生を変調する第２物質を投与する工程をさらに含む、請求項２０に記載の方法。
  24. 前記第２物質が抗ＶＥＧＦ抗体もしくはその抗原結合フラグメントである、請求項２３に記載の方法。
  25. ｈＫ１活性を変調する方法であって、該方法は、以下：
    請求項１に記載のｈＫ１結合タンパク質を提供する工程と；および
    ｈＫ１活性を変調するために十分な量で前記タンパク質をｈＫ１へ接触させる工程と、を含む方法。
  26. 前記接触させる工程がインビトロで行なわれる、請求項２５に記載の方法。
  27. 前記接触させる工程がインビボで行なわれる、請求項２５に記載の方法。
  28. ｈＫ１タンパク質の存在をインビトロのサンプル中で検出する方法であって、該方法は、以下：
    （ｉ）該サンプルを請求項１に記載のｈＫ１結合タンパク質と、該ｈＫ１結合タンパク質と該ｈＫ１タンパク質の相互作用を発生させる条件下で接触させる工程と；および
    （ｉｉ）ｈＫ１結合タンパク質と該サンプルとの間の相互作用を検出する工程と、を含む方法。
  29. 前記ｈＫ１結合タンパク質もしくは前記ｈＫ１の少なくとも一方が固定化される、請求項２８に記載の方法。
  30. ｈＫ１の存在をインビボで検出する方法であって、該方法は、以下：
    （ｉ）被験体へ請求項１に記載のｈＫ１結合タンパク質を、該ｈＫ１結合タンパク質と前記ｈＫ１タンパク質の相互作用を発生させる条件下で投与する工程と；および
    （ｉｉ）該被験体内でのｈＫ１結合タンパク質の位置または該被験体内でのｈＫ１結合タンパク質とｈＫ１との間の複合体の形成を検出する工程と、を含む方法。
  31. 前記被験体がヒト被験体である、請求項３０に記載の方法。
  32. 前記検出する工程が前記被験体をイメージングする工程を含む、請求項３１に記載の方法。
  33. 前記ｈＫ１結合タンパク質がＭＲＩで検出可能な標識を用いて標識される、請求項３２に記載の方法。
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