KR20060035599A

KR20060035599A - 크립토코커스증 치료용 조성물 및 방법

Info

Publication number: KR20060035599A
Application number: KR1020057021165A
Authority: KR
Inventors: 리이센느 피로프스키; 로버트 더블유. 메이타
Original assignee: 알버트 아인슈타인 컬리지 오브 메디신 오브 예쉬바 유니버시티
Priority date: 2003-05-06
Filing date: 2004-05-06
Publication date: 2006-04-26
Also published as: WO2004099251A2; EP1625162A2; WO2004099251A3; AU2004236263A1

Abstract

본원에 기재한 발명은 크립토코커스 네오포르만스 캡슐형 글루쿠론옥실로만난(GXM)에 특이적으로 결합하는, 비 인간 동물에서 생성된 인간 항체를 제공한다. 본 발명은 또한 비-인간 동물에서 항체를 생성하는 방법 및 하이브리도마 및 재조합 숙주 세포 시스템을 포함하는 세포에서 항체를 발현하는 방법을 제공한다. 본원에 기재한 항체 또는 조성물을 환자에게 투여함으로써 C. 네오포르만스 감염 또는 그런 감염으로 유발된 질환 또는 질병을 진단, 치료, 억제 또는 예방하는 방법에 더하여 항체를 포함하는 키트 및 조성물을 또한 제공한다.

Description

크립토코커스증 치료용 조성물 및 방법 {COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATMENT OF CRYPTOCOCCOSIS}

본 발명은 크립토코커스 네오포르만스(Cryptococcus neoformans) 감염 및 그러한 감염으로 야기되는 질환의 예방 또는 치료를 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다. 본 발명은 C. neoformans 캡슐형 글루쿠론옥실로만난(GXM)에 특이적으로 결합하는 인간 항체 및 항체를 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 C. neoformans GXM에 대한 인간 항체의 단리된 중쇄 및 경쇄 면역글로불린 분자에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 그러한 중쇄 및 경쇄 면역글로불린 분자를 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 키메릭, 이중 특이성, 유도체화된, 단쇄 항체 또는 융합 단백질의 일부인, C. neoformans GXM에 대한 인간 항체를 포함한다. 또한, 본 발명은 C. neoformans 감염의 검출 또는 모니터링 방법에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 비-인간 동물에서의 항체 제조 및 항체를 하이브리도마 및 재조합 숙주 세포 시스템을 포함하는 세포주에서 발현시키는 방법에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 상기 항체를 포함하는 키트 및 약학적 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 본원에 기재된 조성물을 환자에게 투여하여 C. neoformans 감염 및 그러한 감염에 의하여 야기되는 질환을 예방 또는 치료하는 방법에 관한 것이다.

크립토코커스 네오포르만스(Cryptococcus neoformans)는 중요한 인간 병원균으로서, 인간, 특히 면역능이 저하된 인간에서 발병율 및 사망율의 주된 원인이다. C. neoformans에 대하여 활성을 갖는 항진균 제제가 이용가능함에도 불구하고, 크립토코커스증은 면역능이 저하된 환자에서 대부분 치료불가능한데, 이는 이 유기체가 완전히 박멸될 수 없기 때문이다. 따라서, 감염을 제어하기 위하여 치료는 많은 비용을 요구하는 평생의 항진균 예방법 또는 유지 요법을 필요로 할 수 있다.

아졸 예방법을 포함하여 다수의 치료법이 재발 질병의 예방에 이용할 수 있으며, 이는 높은 활성을 갖는 항-레트로바이러스 치료와 함께 선진 세계에서 HIV와 관련된 크립토코커스증의 발생을 감소시켜왔다. 그러나, 크립토코커스증은 다른 면역능이 저하된 환자 집단에서 대두되는 문제이고 개발도상국에서 수막뇌염의 주된 원인으로 남아있다. 또한, 항진균 약물을 사용한 장기간의 유지 요법으로 인하여 내성 균주의 발생이 증가하고 있다. 따라서, 크립토코커스증의 예방 및 치료를 위한 추가적인 방법이 급박하게 요구되고 있다.

발명의 간단한 요약

본 발명은 C. neoformans 캡슐형 글루쿠론옥실로만난(GXM)에 특이적으로 결합하는 단리된 인간 항체를 제공한다. 특히, 본 발명은 C. neoformans GXM을 인식하는 모노클로날 항체 G14F7E5, G15B4G5 및 G19B9G7을 제공한다. 모노클로날 항체 G15B4G5는 수동 면역에서 C. neoformans의 공격에 대항하여 효과적인 보호를 행한다. 또한, 본 발명은 비-인간 동물에서 그리고 하이브리도마 및 재조합 숙주 세포 시스템을 포함한 세포주에서 항체의 발현에 의하여 항체를 제조하는 방법을 제공한다. 또한, 본 발명은 상기 항체를 포함하는 키트 및 약학적 조성물을 제공한다. 더욱이, 본 발명은 본원에 기재된 조성물을 환자에게 투여하여 C. neoformans 감염 및 그러한 감염에 의하여 야기되는 질환을 예방 또는 치료하는 방법을 제공한다.

도 1은 가용성 GXM에 의한 G14F7E5, G15B4G5 및 G19B9G7의 억제 곡선을 도시한다. ELISA에 의한 결합을 도시한다. 판넬 A는 가용성 SB4에 의한 모노클로날 항체들의 24067에 대한 결합 억제를 나타낸다; 판넬 B는 24067에 의한 모노클로날 항체들의 24067에 대한 결합 억제를 나타낸다; 판넬 C는 가용성 SB4에 의한 모노클로날 항체들의 H99에 대한 결합 억제를 나타낸다. x축 상의 표시된 모노클로날 항체의 농도에 대하여 y축 상에 나타낸 405nm에서의 흡광도(Abs)에 의하여 결합을 나타낸다.

도 2는 모노클로날 항체 G14F7E5, G15B4G5 및 G19B9G7를 이용한 수동 면역 실험을 도시한다.

도 3은 C. neoformans GXM에 대한 모노클로날 항체의 CDR1 및 CDR2 일부를 비교하는 표이다. 볼드체로 밑줄친 잔기는 쥐 및 인간 XenoMouse®마우스-유래 모노클로날 항체에 의하여 공유된 것들이다; 볼드체 및 이탤릭체의 잔기는 체세포 돌연변이된 것이다; (볼드체가 아닌) 이탤릭체의 잔기는 항체들 간에 유사하지만 상이한 위치에 있는 잔기들이다; 하부 케이스의 잔기는 감소된 GXM 결합과 관련된다. Hu-인간; Ms-마우스.

발명의 상세한 설명

본 발명은 C. neoformans GXM에 특이적으로 결합하는 완전한 인간 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 제공한다. 일부 구체예에서, 완전한 인간 항체는 모노클로날이다. 다른 구체예들은 항체의 중쇄 및 경쇄의 전부 또는 일부를 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자 및 그러한 뉴클레오티드 서열에 의하여 암호되는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드, 그리고 특히 상보성 결정 영역(CDRs)을 포함하는 서열을 포함한다. 또한, 본원에 개시된 항체와 유사한 결합 특성을 갖는 항체들 및 유사한 기능성을 갖는 항체들(또는 다른 길항제들)을 제공한다. 또한, 그러한 면역글로불린 분자 및 모노클로날 항체를 발현시키는 하이브리도마를 제공한다.

본원에서 달리 정의되지 않으면, 본 발명과 관련하여 사용된 과학적 및 기술적 용어는 당업자가 통상적으로 이해하는 의미를 가질 것이다. 또한, 문맥에 의하여 달리 요구되지 않으면, 단수 용어는 복수를 포함하고 복수 용어는 단수를 포함할 것이다. 일반적으로, 본원에 기재된 세포 및 조직 배양, 분자 생물학, 면역학, 미생물학, 유전학 및 단백질 및 핵산 화학 및 혼성화와 관련하여 사용된 명명법 및 이들의 기법은 당업계에서 잘 알려져 있고 널리 사용되는 것들이다. 달리 지시되지 않으면, 당업계에 잘 알려져 있고, 본 명세서 전체에서 인용되고 논의된 다양한 일반적인 그리고 보다 구체적인 참조 문헌에 기재된 바와 같은 기존의 방법들에 따라서 본 발명의 방법 및 기법을 일반적으로 수행한다. 예컨대, 본원에 참조 문헌 으로 힌용한, Sambrook et al. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.(1989) 및 Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates(1992), 및 Harlow and Lane Antibodies: A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.(1990) 참조. 효소적 반응 및 정제 기법은 당업계에서 통상적으로 수행되거나 본원에 기재된 바와 같이, 제조자의 설명서에 따라서 실행한다. 본원에 기재된 분석 화학, 합성 유기 화학 및 의약 및 약제 화학과 관련하여 사용된 명명법 및 이의 실험실적 과정 및 기법은 당업계에 잘 알려져 있고 널리 사용되는 것들이다. 화학 합성, 화학 분석, 약제학적 조제, 제형화 및 송달 그리고 환자의 치료를 위하여 표준적인 기법을 사용한다.

하기 용어들은 이들이 본원에서 사용될 때 하기의 일반적인 의미를 갖는 것으로 의도된다.

"B 림프구 세포 또는 이의 자손"은 B 림프구 계통의 계통을 잇거나 이로 예정된 임의의 세포를 가리킨다. 예들은 가장 초기의 B 림프구 줄기 세포로부터 출발하여 기억 B 세포, 플라즈마 세포 및 시험관 내에서 생성되는 임의의 하이브리도마에 이르기까지 B 세포 발생 경로에서의 모든 B 림프구를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.

"이중 특이성 항체"는 두개의 별개의 항원에 대한 친화성을 갖는 단일 항체이다. 예컨대, 이중 특이성 항체는 중쇄 및 경쇄의 하나의 조합을 이용하여 C. neoformans GXM을 인식할 수 있고 제1 조합에 결합된 중쇄 및 경쇄의 제2 조합을 이용하여 백혈구 세포 표면 마커를 인식할 수 있다. 예컨대, McCormick et al., J. Immunol. 158:3472-82(1997)을 참조.

"키메릭 항체"는 또다른 단백질의 아미노산 서열을 포함하도록 그들의 원래의 형태로부터 변형된 항체이다. 키메릭 항체는 원래의 항체 아미노산 서열의 적어도 일부, 대개는 항체 결합 영역(Fab)을 포함하는 일부를 보유한다. 키메릭 항체의 예들은 이중 특이성 항체 및 다른 비-면역글로불린 단백질 서열과의 융합물을 포함하지만 이에 한정되지는 않는다.

"사이토카인"은 일반적으로 면역 시스템의 시그널링 분자를 가리킨다. 사이토카인은 인터류킨(IL), 전환 성장 인자(TGF), 종양 괴사 인자(TNF), 림포톡신(LT), 인터페론, 과립구-대식세포 콜로니 자극 인자(GM-CSF), 대식세포 CSF, 과립구 CSF 및 이주 억제 인자를 포함하지만 이에 한정되지는 않는다.

"유도체화"는 비-면역글로불린 제제를 면역글로불린 분자에 결합시키는 과정을 가리킨다. 유도체화 제제의 예들은 독소, 보체, 항생물질, 펩티드, 폴리사카라이드, 지질, 유기 중합체, 방사성표지물 및 무기 화합물을 포함하지만 이에 한정되지는 않는다.

"융합 단백질"은 둘 이상의 상이한 단백질의 아미노산 서열을 포함하는 키메릭 단백질을 가리킨다. 전형적으로, 융합 단백질은 당업계에 널리 알려진 시험관내 재조합 기법으로부터 얻어진다. 그러나, 융합 단백질은 생체내 교차(crossover) 또는 다른 재조합 성과로부터 얻어질 수도 있다.

본원에서 사용되는 용어 "폴리펩티드 단편"은 아미노-말단 및/또는 카르복시 -말단이 결실되었으나, 나머지 아미노산 서열은 자연적으로 존재하는 서열의 대응 위치와 동일한 폴리펩티드를 가리킨다. 단편은 대개 적어도 5, 6, 8, 10개의 아미노산의 길이이며, 예컨대, 적어도 14개의 아미노산 길이, 적어도 20개의 아미노산 길이, 적어도 50개의 아미노산 길이 및 적어도 70개의 아미노산 길이를 포함한다.

항체 또는 면역글로불린 분자의 단편 또는 유사체는 본 명세서의 교시 내용에 따라서 당업자가 용이하게 제조할 수 있다. 일반적으로, 단편 또는 유사체의 아미노- 및 카르복시-말단은 기능성 도메인의 경계 부근에서 나타난다. 공공의 또는 사유의 서열 데이타베이스와 뉴클레오티드 및/또는 아미노산 서열 데이타를 비교함으로써 구조성 및 기능성 도메인을 동정할 수 있다. 예컨대, 컴퓨터화된 비교 방법을 사용하여 공지의 구조 및/또는 기능을 갖는 다른 단백질에서 존재하는 서열 모티프 또는 예측된 단백질 배위 도메인을 동정한다. 공지의 3차원 구조로 접혀진 단백질 서열을 동정하는 방법이 공지되어 있다.(Bowie et al., Science 253: 164(1991)).

바람직한 아미노산 치환은, (1) 단백질 분해에 대한 감수성을 감소시키는 것, (2) 산화에 대한 감수성을 감소시키는 것, (3) 단백질 복합체를 형성하기 위한 결합 친화성을 변화시키는 것 및 (4) 그러한 유사체의 다른 물리화학적 또는 기능적 특성을 부여 또는 변화시키는 것들이다. 유사체는 자연적으로 존재하는 펩티드 서열 이외의 서열의 다양한 뮤테인을 포함할 수 있다. 예컨대, 단일 또는 다중 아미노산 치환(바람직하게는 보존성 아미노산 대치)이 자연적으로 존재하는 서열에서(바람직하게는 분자간 접촉을 형성하는 도메인 외부의 폴리펩티드의 일부에서) 이 루어질 수 있다. 보존성 아미노산 대치는 모 서열의 구조적 특성을 실질적으로 변화시켜서는 안된다(예컨대, 대체 아미노산은 모 서열에 존재하는 헬릭스를 파괴하거나, 모 서열을 특징짓는 2차 구조의 다른 유형들을 붕괴시키려 해서는 안된다). 당업계에 인식되어 있는 폴리펩티드 2차 및 3차 구조의 예들은 문헌[Proteins, Structures and Molecular Principles(Creighton, Ed., W. H. Freeman and Company, New York(1984)); Introduction to Protein Structure(C. Branden and J. Tooze, eds., Garland Publishing, New York, N.Y.(1991)); 및 Thornton et al., Nature 354:105(1991)]에 기재되어 있으며, 이들 각각은 참조 문헌으로 본원에 편입된다.

본원에서 사용될 때, 20개의 전형적인 아미노산 및 이들의 약자는 기존의 사용법을 따른다. 참조 문헌으로 본원에 편입되는 문헌[Immunology - A Synthesis(2nd edition, E.S. Golub and D.R. Gren, Eds., Sinauer Associates, Sunderland, Mass. (1991))]을 참조. 20개의 전형적 아미노산의 입체이성질체(예컨대, D-아미노산), 비자연적 아미노산, 예컨대 α-, α-이치환된 아미노산, N-알킬 아미노산, 락트산 및 다른 비전형적인 아미노산은 또한 본 발명의 폴리펩티드를 위한 적절한 구성성분이 될 수 있다. 비전형적 아미노산의 예들은 4-히드록시프롤린, γ-카르복시글루타메이트, ε-N,N,N-트리메틸리신, ε-N-아세틸리신, O-포스포세린, N-아세틸세린, N-포르밀메티오닌, 3-메틸히스티딘, 5-히드록시리신, s-N-메틸아르기닌 및 다른 유사한 아미노산 및 이미노산(예컨대, 4-히드록시프롤린)을 포함한다. 본원에서 사용된 폴리펩티드 표시법은 표준적인 사용법 및 관례에 따라 서, 좌측 방향이 아미노 말단 방향이고 우측 방향이 카르복시-말단 방향이다.

"인간 면역글로불린 분자"는 인간 면역글로불린 유전자 서열에 의하여 암호화된 서열을 갖는 면역글로불린 단백질을 가리킨다. 일부 구체예에서, 단백질은 검-라인 인간 유전자 서열에 의하여 암호화될 수 있고, 다른 구체예에서, 단백질은 인간 배선(germ-line) 서열로부터의 돌연변이를 포함할 수 있다.

"인간 모노클로날 항체"는 동일한 특징을 갖는 인간 항체 집단의 구성원인 항체를 가리킨다. 인간 항체 집단은 하이브리도마 또는 다른 불멸화 세포주 뿐만 아니라, 외인성 인간 항체 유전자 서열을 발현하는 재조합 세포주에서 제조할 수 있다.

"면역능이 저하된 환자"는 예컨대, 질병(예: AIDS), 침습적 수술, 다른 질환의 치료와 관련된 약물 치료(예: 장기 이식 환자) 또는 유전적 결함에 의하여 외래 항원 또는 제제에 대한 면역 반응이 손상된 환자를 지칭한다.

"독소"는 항체가 결합한 세포를 살해하기 위한 목적으로 항체에 결합할 수 있는 단백질 또는 비-단백질 화합물을 가리킨다. 독소의 예들은 보체, 항생물질, 펩티드, 폴리사카라이드, 지질, 유기 중합체, 방사성표지물, 및 무기 화합물을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.

"벡터"는 대상 핵산 서열이 그들의 태생 세포의 외부에서 클로닝, 전파, 재조합, 돌연변이 또는 발현되도록 하는 핵산 분자를 가리킨다. 종종 벡터는 특정 조건 하에 또는 특정 세포에서 유전자 서열의 발현을 제어하도록 하는 서열을 갖는다.

본 발명의 항체 또는 항체의 부분을 발현시키기 위하여, 상기한 바 대로 얻어진 부분 또는 전장 경쇄 및 중쇄를 암호화하는 DNA를 발현 벡터에 삽입하여 유전자가 작동가능하게 전사 및 번역 제어 서열에 결합되도록 한다. 발현 벡터는 플라스미드, 바이러스, 레트로바이러스, 코스미드, YACs, EBV-유래 에피좀 등을 포함한다. 항체 유전자는 벡터 내로 연결(ligate)되어서 벡터 내의 전사 및 번역 제어 서열이 항체 유전자의 전사 및 번역을 조절하는 그들의 의도된 기능을 제공하도록 한다. 발현 벡터 및 발현 제어 서열은 사용된 발현 숙주 세포와 융화성인 것을 선택한다. 항체 경쇄 유전자 및 항체 중쇄 유전자는 별개의 벡터에 삽입할 수 있다.

바람직한 구체예에서, 양 유전자를 동일한 발현 벡터에 삽입한다. 항체 유전자를 표준적인 방법(예컨대, 항체 유전자 단편 및 벡터 상의 상보적 제한 부위의 연결, 또는 제한 부위가 존재하지 않는다면, 둔단 결찰(blunt end ligation))에 의하여 발현 벡터 내로 삽입한다.

편리한 벡터는 엔지니어링된 적절한 제한 부위를 갖고 기능적으로 완전한 인간 C_H 또는 C_L 면역글로불린 서열을 암호화하여, 상기한 바와 같이 임의의 V_H 또는 V_L 서열이 용이하게 삽입되고 발현될 수 있는 것이다. 그러한 벡터에서, 스플라이싱은 대개 삽입된 J 영역의 스플라이스 공여 부위 및 인간 C 도메인을 선행하는 스플라이스 수용 부위 사이 그리고, 또한 인간 C_H 엑손 내에 존재하는 스플라이스 영역에서 일어난다. 폴리아데닐화 및 전사 종결은 암호화 영역 하부의 태생의 염색체 부위에서 일어난다. 또한, 재조합 발현 벡터는 숙주 세포로부터 항체 쇄의 분 비를 촉진시키는 시그널 펩티드를 암호화할 수 있다. 항체 쇄 유전자를 벡터 내로 클로닝하여 시그널 펩티드가 프레임 내에서 면역글로불린 쇄의 아미노 말단에 결합되도록 할 수 있다. 시그널 펩티드는 면역글로불린 시그널 펩티드 또는 이질적인 시그널 펩티드(즉, 비-면역글로불린 단백질로부터의 시그널 펩티드)일 수 있다.

항체 쇄 유전자와 함께, 본 발명의 재조합 발현 벡터는 숙주 세포에서 항체 쇄 유전자의 발현을 제어하는 조절성 서열을 갖는다. 당업자는 조절성 서열의 선택을 비롯한 발현 벡터의 고안이 형질 전환될 숙주 세포의 선택, 원하는 단백질의 발현 정도 등의 인자에 따라 다를 수 있음을 이해할 것이다. 포유 동물 숙주 세포 발현을 위한 예시적인 조절성 서열은 포유 동물 세포에서 높은 수준의 단백질 발현을 이끄는 바이러스 요소, 예컨대 레트로바이러스 LTR, 사이토메갈로바이러스(CMV) (예, CMV 프로모터/인핸서), 시미안 바이러스 40(SV40) (예, SV 40 프로모터/인핸서), 아데노바이러스 (예, 아데노바이러스 주요 후기 프로모터(AdMLP))에서 유래된 프로모터 및/또는 인핸서, 폴리오마 및 강력한 포유동물 프로모터, 예컨대, 태생의 면역글로불린 및 액틴 프로모터를 포함한다. 바이러스 조절성 요소 및 이들의 서열의 추가적 기술을 위하여, Stinski에 의한 미합중국 특허 제5,168,062호, Bell 등에 의한 미합중국 특허 제4,510,245호 및 Schaffner 등에 의한 미합중국 특허 제4,968,615호 참조.

항체 쇄 유전자 및 조절성 서열과 함께, 본 발명의 재조합 발현 벡터는 추가적인 서열, 예컨대, 숙주 세포에서 벡터의 복제를 조절하는 서열(예, 복제 기점) 및 선택성 마커 유전자를 가질 수 있다. 선택성 마커 유전자는 벡터가 도입된 숙 주 세포의 선별을 용이하게 한다 (예컨대, Axel 등에 의한 미합중국 특허들 제4,399,216호, 제4,634,665호 및 제5,179,017호 참조). 예컨대, 전형적인 선택성 마커 유전자는 약물, 예컨대 G418, 히그로마이신 또는 메토트렉세이트에 대한 저항성을 벡터가 도입된 숙주 세포에 부여한다. 예시적인 선택성 마커 유전자는 디히드로폴레이트 리덕타제(DHFR) 유전자(메토트렉세이트 선별/증폭을 이용하여 dhfr- 숙주 세포에서 사용), 네오 유전자(G418 선별용) 및 글루타메이트 신테타제 유전자를 포함한다.

항-GXM 항체를 암호화하는 핵산 분자 및 이 핵산 분자를 포함하는 벡터를 적절한 포유동물 숙주 세포의 형질감염에 사용할 수 있다. 형질전환은 숙주 세포에 폴리뉴클레오티드를 도입시키는 임의의 공지된 방법에 의해 이루어질 수 있다. 이종성 폴리뉴클레오티드를 포유동물 세포에 도입시키는 방법은 당업계에 잘 알려져 있으며, 덱스트란-매개된 형질감염법, 인산칼슘 침전법, 폴리브렌-매개된 형질감염법, 플로토플라스트 융합법, 전기침공법, 리포좀내 폴리뉴클레오티드(들)의 캡슐화법, 및 핵으로 DNA의 직접 주입법이 포함된다. 또한, 핵산 분자는 바이러스 벡터에 의해 포유동물 세포로 도입될 수도 있다. 세포를 형질전환시키는 방법은 당업계에 잘 알려져 있다. 예를 들어, 미국 특허 제4,399,216호, 제4,912,040호, 제4,740,461호 및 제4,959,455호 참고(이들 특허는 본 명세서에 참고문헌으로 포함됨).

발현용 숙주로 이용가능한 포유동물 세포는 당업계에 잘 알려져 있으며, 미국표준균주수집소(American Type Culture Collection, ATCC)에서 얻을 수 있는 불 멸화된 여러 세포주들이 포함된다. 이 중에서도 특히, 중국 햄스터 난소(CHO) 세포, NSO, SP2 세포, HeLa 세포, 새끼 햄스터 신장(BHK) 세포, 원숭이 신장 세포(COS), 인간 간세포 암종 세포(예, Hep G2), A549 세포, 및 기타 여러 세포주가 포함된다. 높은 발현 수치를 가지는 세포주를 결정하는 과정을 통해 선별된 세포주가 특히 바람직하다. 사용할 수 있는 기타 세포주에는 Sf9 세포와 같은 곤충 세포주가 있다. 항체 유전자를 암호화하는 재조합 발현 벡터가 포유동물 숙주 세포에 도입되는 경우, 숙주 세포에서 항체가 발현되기에 충분한 시간동안 숙주 세포를 배양하거나, 또는 바람직하게는 숙주 세포가 성장하는 배양 배지로 항체가 분비되게 숙주 세포를 배양함으로써, 항체를 생산한다. 표준 단백질 정제법을 사용하여 배양 배지로부터 항체를 회수할 수 있다.

추가적으로, 생산 세포주에서 본 발명의 항체 (또는 이의 다른 부분)의 발현은 다수의 공지된 기술을 사용하여 증강될 수 있다. 예를 들어, 글루타민 합성효소 유전자 발현 시스템(GS 시스템)은 특정 조건하에 발현을 증강시키는 통상적인 접근법이다. GS 시스템에 대해서는 유럽 특허 제0 216 846호, 제0 256 055호 및 제0 323 997호와, 유럽 특허 출원 제 89303964.4호에 전체적으로 또는 부분적으로 개시되어 있다.

"작동가능하게 연결된(Operably linked)" 서열에는 흥미있는 유전자와 인접한 발현 제어 서열과, 트랜스로 작용하거나 먼 거리에서 작용하여 흥미있는 유전자를 제어하는 발현 제어 서열 모두가 포함된다. 본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "발현 제어 서열(expression control sequence)"은 특정 조건하에서 또는 특정 세포내에서 유전자 서열의 유도성 발현이나 구조적 발현을 가능하게 하는 서열을 나타낸다. 발현 제어 서열이 조절하는 세포 과정의 예에는, 유전자 전사, 단백질 번역, 메신저 RNA 스플라이싱, 면역글로불린 이소타입 스위칭, 단백질 당화, 단백질 절단, 단백질 분비, 세포내 단백질 위치화, 및 세포외 단백질 귀환이 포함되나, 이로 제한되지 않는다. 발현 제어 서열에는, 적절한 전사 개시, 종료, 프로모터 및 인핸서 서열; 효율적인 RNA 가공 시그날, 예컨대, 스플라이싱 및 폴리아데닐화 시그날; 세포질 mRNA를 안정화시키는 서열; 번역 효율을 증강시키는 서열(즉, Kozak 컨센서스 서열); 단백질 안정성을 증강시키는 서열; 및 소정의 경우, 단백질 분비를 증강시키는 서열이 포함된다. 이러한 제어 서열의 성질은 숙주 개체에 따라 다양하다. 원핵세포에서 이러한 제어 서열에는 일반적으로 프로모터, 리보좀 결합 자리 및 전사 종결 서열이 포함된다. 진핵세포의 경우, 일반적으로 이러한 제어 서열에는 프로모터와 전사 종결 서열이 포함된다. 용어 "제어 서열"은 최소한으로는 발현과 가공에 필수적으로 존재해야 하는 모든 성분들을 포함하며, 또한, 리더 서열 및 융합 파트너 서열과 같이 존재하는 것이 유리한 부가적인 성분들을 포함한다.

본 명세서에 사용한 바와 같은 용어 "재조합 숙주 세포" (또는 간단히 "숙주 세포")는 재조합 발현 벡터가 도입된 세포를 나타낸다. 이러한 용어가 특정 대상 세포뿐만 아니라 이러한 세포의 자손들도 나타냄을 이해해야만 한다. 돌연변이나 환경적 영향으로 인해 이후 세대에 일부 변형이 일어날 수도 있기 때문에, 실제로 이러한 자손들은 부모 세포와 동일하지 않을 수도 있다. 그러나, 이러한 자손들도 여전히 본 명세서에서 사용한 용어 "숙주 세포"의 범위 이내에 포함된다.

"제노마우스(XenoMouse)®" 마우스는 불활성화된 내인성 면역글로불린 유전자좌를 가져, 내인성 쥐과 면역글로불린을 발현할 수 없으나, 인간 면역글로불린 유전자좌의 실질적인 일부분을 가지고 있는 마우스를 나타낸다. 제노마우스®주의 마우스는 인간 면역글로불린 유전자의 체세포 재배열, 인간 면역글로불린 가변성 영역의 과돌연변이, 및 면역글로불린 이소타입 스위칭이 가능하다. 따라서, 제노마우스®주의 마우스는 인간 면역글로불린 유전자 서열을 사용하여, 항원의 도전에 대해 효과적인 체액성 반응을 일으킬 수 있다. 결과 항체들은 완전히 인간과 유사하며, 이러한 항체는 동물 자체로부터, 동물에서 추출된 세포 배양물로부터, 또는 제노마우스® 마우스 B 림프성 세포주 또는 이의 자손으로부터 생성된 하이브리도마로부터 분리할 수 있다. 더욱이, 특이적 항원 도전에 대해 발생된 면역글로불린을 암호화하는 재배열된 인간 유전자 서열은 당업계에 잘 알려진 재조합 방법으로 분리할 수 있다.

항체 구조. 기본적인 항체 구조 단위는 사량체를 포함한다. 각각의 사량체는 2쌍의 폴리펩티드 사슬로 구성되며, 각각의 쌍은 하나의 "경쇄"(약 25 kDa)와 하나의 "중쇄"(약 50-70 kDa)를 가진다. 각각의 사슬의 아미노-말단 부부은 약 100~110 또는 그 이상의 아미노산으로 구성된 가변 영역을 포함하며, 이 영역은 항원 인식을 주로 담당한다. 각각의 사슬의 카르복시-말단 부분은 이펙터 기능을 주로 담당하는 불변 영역으로 정의된다. 인간 경쇄는 카파 및 람다 경쇄로 분류된다. 중쇄는 뮤, 델타, 감마, 알파, 또는 엡실론으로 분류되며, 각각 IgM, IgD, IgG, IgA, 및 IgE의 항체 이소타입으로 정의된다. 경쇄와 중쇄 이내에, 가변 영역과 불변 영역은 약 12개 또는 그 이상의 아미노산으로 된 "J" 영역으로 연결되며, 또한 중쇄의 경우에는 약 10개 또는 그 이상의 아미노산으로 된 "D" 영역을 포함한다. 일반적인 사항에 대해서는, Immunology, Ch.4 (Roitt, I., et al., eds., 6th ed., Harcourt Publishers Ltd., London (2001)) (이의 전체는 참고문헌으로 포함됨)을 참고. 각각의 경쇄/중쇄 쌍의 가변 영역은 항체 결합 자리를 형성한다. 따라서, 손상되지 않은 IgG 항체는 2개의 결합 자리를 가진다. 이중작용성 또는 이중특이적 항체의 경우를 제외하고는, 2개의 결합 자리는 동일하다.

사슬들은 모두 CDR이라고 불리우는 3개의 고도 가변성 영역과 결합된 비교적 보존된 프레임워크 영역(FR)의 동일한 일반 구조를 나타낸다. 각각의 쌍의 2개의 사슬의 CDR은 프레임워크 영역에 의해 정렬되어, 특이적 에피토프에 결합할 수 있다. N-말단부터 C-말단까지, 경쇄와 중쇄 모두는 도메인 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4를 포함한다. 각각의 도메인에 대한 아미노산의 정렬은 "the Kabat Database of Sequences of Proteins of Immunological Interest" (Johnson & Wu, Nucl. Acids Res. 29: 205-06 (2001); 또는 Chothia & Lesk, J. Mol. Biol. 196: 901-17 (1987); Chothia et al., Nature 342: 878-83 (1989))의 정의에 따른다.

이중특이적 또는 이중작용성 항체는 2개의 상이한 경쇄/중쇄 쌍과 2개의 상이한 결합 자리를 가지는 인공 하이브리드 항체이다. 이중특이적 항체는 Fab' 단편의 연결 또는 하이브리도마의 융합을 비롯한 다양한 방법들에 의해 생산될 수 있다. 예를 들어, [Songsivilai & Lachmann, Clin. Exp. Immunol. 79: 315-21 (1990); Kostelny et al., J. Immunol. 148: 1547-53 (1992)] 참고. 또한, 이중특이적 항체는 "디아바디(diabodies)"로 (Holliger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90: 6444-48 (1993)); 또는 "자우신스(Janusins)" (Traunecker et al., EMBO J. 10: 3655-59 (1991) 및 Traunecker et al., Intl. J. Cancer Suppl. 7: 51-52 (1992))로 형성될 수도 있다. 이중특이적 항체의 생산은 종래의 항체 생산에 비해 상대적으로 노동 집중적인 과정일 수 있으며, 이중특이적 항체가 수율과 순도 면에서 일반적으로 낮다. 이중특이적 항체는 단일 결합 자리를 가지는 단편들의 형태로는 존재하지 않는다 (예, Fab, Fab', 및 Fv).

비인간 동물 유래의 인간 항체. 쥐과 또는 랫트 가변 영역 및/또는 불변 영역을 가지는 항체는 특정 치료 용도를 위해 인간 항체보다는 덜 유용하다. 이러한 쥐과 또는 랫트 유래의 단백질들의 존재는 항체의 빠른 제거를 초래할 수 있으며, 또는 환자에게 항체에 대한 면역 반응을 생성시킬 수 있다. 쥐과 또는 랫트 유래의 항체와 관련된 이러한 문제점들을 해결하기 위해, 예컨대, 설치류가 완전한 인간 항체를 생산하도록 설치류에 인간 항체 기능을 도입하여 완전한 인간 항체를 생성하거나, 인간화된 항체를 개발할 수 있다.

메가염기 크기의 인간 유전자좌를 YAC에 클로닝하고 재구성하며, 이를 마우스 생식계열로 도입하는 능력은, 매우 크거나 대략적으로 맵핑된 유전자좌의 기능적 성분들을 밝힐 뿐만 아니라, 인간 질병의 유용한 모델을 생성하는데 있어 강력한 접근법을 제공해준다. 더욱이, 마우스 유전자좌를 이들의 인간 등가물로 대체하는 이러한 기술의 유용성은 발생동안의 인간 유전자 산물의 발현 및 조절, 이들의 다른 시스템과의 커뮤니케이션, 및 질병 유도 및 진행에 있어서의 이들의 관여에 대한 특이한 관점을 제공할 수 있다.

이러한 전략의 중요한 실질적 응용이 마우스 체액성 면역 시스템의 "인간화"이다. 내인성 Ig 유전자가 불활성화된 마우스에 인간 면역글로불린(Ig) 유전자좌를 도입하는 것은 항체의 프로그램된 발현과 어셈블리와 연관된 메카니즘은 물론, 이의 B-세포 발생에 있어서의 역할을 연구하는 기회를 제공해준다. 더욱이, 이러한 전략은 인간 질병의 항체 치료법의 가능성을 충족시키는 중요한 이정표인, 완전한 인간 모노클로날 항체(Mab)의 생산을 위한 이상적인 공급원을 제공할 수 있다. 완전한 인간 항체는 마우스 또는 마우스-유래된 Mab에 대한 내재적인 면역원성 반응과 알레르기 반응을 최소화시켜주어, 투여된 항체에 대한 효율과 안전성을 증가시켜 주리라 기대된다. 그러므로, 완전한 인간 항체의 사용은 반복적인 항체의 투여를 요구하는 감염, 자가면역성, 암 및 박테리아 감염과 같은 만성 또는 재발성 인간 질병의 치료에 실질적 이점을 제공하리라 예상할 수 있다.

이러한 목표를 달성하기 위한 하나의 접근법이, 마우스 항체없이 인간 항체의 대형 목록을 생산할 수 있도록 인간 Ig 유전자좌의 다형 단편을 가지는, 마우스 항체 생산에 결핍이 있는 마우스 균주를 제조하는 것이었다. 대형 인간 Ig 단편은 대형 가변 유전자 다양성을 보존할 수 있으며, 항체 생산과 발현의 적절한 조절이 가능하다. 항체 다양성과 선택성에 관여하는 마우스 기구를 이용하고, 인간 단백질에 대한 면역학적 내성을 결여시킴으로써, 이러한 마우스 균주에서 재생된 인간 항체 목록은 인간 항원을 비롯한 흥미있는 임의의 항원에 대해 높은 친화성을 가지는 항체를 생산할 수 있다. 하이브리도마 기술을 사용함으로써, 소정의 특이성을 가지는 항원-특이적 인간 Mab을 용이하게 생산하고 선별할 수 있다.

이러한 일반적인 전략은 첫번째 제노마우스® 동물 균주의 발생과 관련하여 소개되었었다. [Green et al., Nature Genet. 7:13-21 (1994)]을 참고. 제노마우스® 동물 균주는 코어 가변 영역 서열과 불변 영역 서열을 함유하는, 각각 인간 중쇄 유전자좌 및 카파 경쇄 유전자좌의 245 kb- 및 190 kb-크기의 생식세포 구성 단편을 함유하는, 효모 인공 염색체(YAC)로 조작하였다. Id. YAC을 함유하는 인간 Ig는 항체의 재배열용 마우스 시스템 및 발현용 마우스 시스템과 양립가능하며, 불활성화된 마우스 Ig 유전자를 치환시킬 수 있다. B-세포 발생을 유도하고, 성인과 같은 완전한 인간 항체의 인간 목록을 생산하며, 항원-특이적인 인간 모노클로날 항체를 생성하는 이들의 능력에 의해 이는 달성되었다. 이러한 결과들은 또한, 많은 수의 V 유전자, 부가적인 조절 요소들, 및 인간 Ig 불변 영역을 함유하는 인간 Ig 유전자좌의 많은 부분의 도입이, 감염과 면역화에 대한 인간 체액성 반응의 특징인 완전한 목록을 실질적으로 반복시켜줄 수 있음을 제안해준다.

Green et al.의 연구는 최근에 인간 중쇄 유전자좌 및 카파 경쇄 유전자좌의 메가염기 크기의, 생식계열 구성 YAC 단편을 각각 도입시켜, 새로운 제노마우스® 마우스를 제조함으로써, 인간 항체 목록의 약 80% 이상을 도입하는 것으로 발전하였다. 본 명세서에 참고문헌으로 포함된 [Mendez et al., Nature Genet. 15: 146-56 (1997) 및 Green & Jakobovits, J. Exp. Med. 188: 483-95 (1998)] 참고.

이러한 접근법은 미국 특허 제5,916,771호, 제5,939,598호, 제5,985,615호, 제5,998,209호, 제6,075,181호, 제6,091,001호, 제6,114,598호 및 제6,130,364호에 추가로 연구 및 서술되어 있다. 또한, WO 91/10741(1991. 7. 25 공개), WO 94/02602(1994. 2. 3 공개), WO 96/34096 및 WO 96/33735 (둘다 1996. 10. 31 공개), WO 98/16654(1998. 4. 23 공개), WO 98/24893(1998. 6. 11 공개), WO 98/50433(1998. 11. 12 공개), WO 99/45031(1999. 9. 10 공개), WO 99/53049(1999. 10. 21 공개), WO 00/09560(2000. 2. 24 공개) 및 WO 00/037504(2000. 6. 29 공개)를 참고. 상기 언급한 특허, 출원 및 참고문헌의 내용은 전체로 본 명세서에 참고문헌으로 포함된다.

본 발명에 따른 항체는 인간 항체를 생산하는 게놈의 실질적인 일부분을 가지나, 내인성 쥐과 항체의 생산이 결핍된 트랜스제닉 마우스를 사용하여 제조하는 것이 바람직하다. 이때, 이러한 마우스는 인간 면역글로불린 분자 및 항체를 생산할 수 있으며, 쥐과 면역글로불린 분자 및 항체의 생산은 결핍되어 있다. 이러한 것을 달성하기 위해 사용하는 기술들은 상기 언급한 특허, 출원 및 참고문헌에 공개되어 있다.

이러한 기술의 사용을 통해, 크립토코커스 네오포르만스(Cryptococcus neoformans) GXM에 대한 완전한 인간 모노클로날 항체, 또는 이의 항원 결합 부분을 생성하였다. 필수적으로, 본 발명자는 크립토코커스 네오포르만스 GXM로 마우스의 제노마우스®주를 면역화시키고, 크립토코커스 네오포르만스 GXM-특이적 항체를 발현하는 마우스로부터 비장 및 림프절 세포(예, B-세포)를 회수하고, 이러한 회수한 세포들을 비분비성 골수종 세포와 융합시켜 불멸의 하이브리도마 세포주를 제조 한 후, 하이브리도마 세포주를 스크리닝하여 크립토코커스 네오포르만스 GXM에 대해 특이적인 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주를 동정하였다.

본 발명에 따른 항체는 또한 하이브리도마 세포주가 아닌 세포주에서 발현시킬 수도 있다. 특정 항체를 암호화하는 서열을 적합한 숙주 세포를 형질전환시키는데 사용할 수 있다. 형질전환은 폴리뉴클레오티드를 숙주 세포에 도입하는 임의의 공지된 방법, 예를 들어, 폴리뉴클레오티드를 바이러스내에 (또는 바이러스 벡터내에) 패키징하고 이 바이러스 (또는 벡터)를 숙주 세포에 도입시키는 방법, 또는 미국 특허 제4,399,216호, 제4,912,040호, 제4,740,461호 및 제4,959,455호(이 특허들은 본 명세서에 참고문헌으로 포함됨)에 예시된 바와 같은, 당업계에 공지된 형질감염 방법들에 의해 이루어질 수 있다. 주어진 경우에 있어 사용된 형질전환 방법은 형질전환될 숙주에 따라 다르다. 예를 들어, 외인성 폴리뉴클레오티드를 포유동물 세포에 도입시키는 방법은 당업계에 잘 알려져 있으며, 덱스트란-매개된 형질감염, 인산칼슘 침전법, 폴리브렌 매개된 형질감염, 프로토플라스트 융합법, 전기침공법, 리포좀내 폴리뉴클레오티드(들)의 캡슐화법, 및 핵으로 DNA의 직접 미세주입법이 포함된다.

발현용 숙주로 이용가능한 포유동물 세포는 당업계에 잘 알려져 있으며, 중국 햄스터 난소(CHO) 세포, NS/O, HeLa 세포, 새끼 햄스터 신장(BHK) 세포, 원숭이 신장 세포(COS), 인간 간세포 암종 세포(예, Hep G2), 및 기타 여러 세포주를 비롯한, 미국표준균주수집소(ATCC)에서 얻을 수 있는 불멸화된 여러 세포주들이 포함된다. 높은 발현 수치를 가지며, 소정의 크립토코커스 네오포르만스 GXM 결합성을 가 지는 항체를 생산하는 세포주를 결정하는 과정을 통해 선별된 세포주가 특히 바람직하다.

추가적으로, 생산 세포주로부터 본 발명의 항체 (또는 이의 기타 부분)의 발현은 여러 공지된 기술을 사용하여 증강될 수 있다. 예를 들어, 증강된 발현은 디히드로폴레이트 환원효소(DHFR) 또는 글루타민 합성효소 유전자 발현 시스템(GS 시스템)을 사용한 동시증폭 발현 시스템에 의해 수행될 수 있다. 예를 들어, [Kaunnan and Sharp, J. Mol. Biol. 159: 601-21 (1982)]; 유럽 특허 제0 216 846호, 제0 256 055호, 및 제0 323 997호; 및 유럽 특허 출원 제 89303964.4호 참고.

본 발명의 항체는 또한 흥미있는 면역글로불린 중쇄 및 경쇄 서열이 형질전환된 동물 또는 식물을 생성하고, 이로부터 회수가능한 형태의 항체를 생산하게 하여서도 생산할 수 있다. 동물에서의 형질전환된 생산과 관련하여서, 예를 들어, 염소, 소 또는 기타 포유동물의 젖에서 항체를 생산하고 이로부터 회수하는 것이 가능하다. 예를 들어, 미국 특허 제5,827,690호, 제5,756,687호, 제5,750,172호, 및 제5,741,957호 참고.

본 발명은 크립토코커스 네오포르만스 GXM에 특이적으로 결합하는 분리된 인간 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 부분에 관한 것이다. 일부 구체예에서, 분리된 인간 항체 또는 이의 항체-결합 부분은 크립토코커스 네오포르만스 GXM에 결합하여, 피검체의 크립토코커스 네오포르만스에 대한 내성을 증강시켜 준다.

본 발명은 크립토코커스 네오포르만스 GXM에 특이적으로 결합하는 분리된 인간 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 부분에 관한 것으로, 이때, 이 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 크립토코커스 네오포르만스 감염에 의해 초래된 질환이나 장애의 중증도를 감소시켜주거나 예방시켜 준다.

본 발명의 크립토코커스 네오포르만스 GXM에 특이적으로 결합하는 분리된 인간 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 면역글로불린 G(IgG), IgM, IgE, IgA 또는 IgD일 수 있다. 일부 구체예에서, IgA는 IgA1 또는 IgA2 서브타입일 수 있고, IgG는 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 서브타입일 수 있다.

본 발명은 크립토코커스 네오포르만스 GXM에 특이적으로 결합하고 표지되어진, 분리된 인간 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 부분에 관한 것이다. 바람직한 구체예에서, 표지는 방사표지, 효소 표지, 형광성 표지, 독소, 자기화제, 2차 항체, 친화성 표지, 에피토프 태그, 항생물질, 보체 단백질 또는 사이토카인이다.

본 발명은 C. 네오포르만스 GXM에 특이적으로 결합하며 카파 경쇄를 포함하는 분리된 인간 항체 또는 이의 항원-결합 부분에 관한 것이다. 일부 구체예에서, 카파 경쇄의 가변(V) 영역은 생식선 서열로부터의 5 이하의 돌연변이를 포함하는 인간 V_KIII DPK22/A27 유전자에 의하여 인코딩된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, 카파 경쇄의 연결(J) 영역은 인간 J_K 1 유전자에 의하여 인코딩된 아미노산 서열을 포함한다. 아미노산 서열이 생식선 V_K 및/또는 J_K 서열로부터의 돌연변이를 포함할 경우, 돌연변이는 골격 영역, CDR5 또는 둘다에 있을 수 있다.

본 발명은 표 3에 나타낸 아미노산 서열 (서열 번호 제1번; 서열 번호 제5번; 서열 번호 제9번) 또는 이의 가변 영역을 포함하는 카파 경쇄를 포함하며 C. 네오포르만스 GXM에 특이적으로 결합하는 분리된 인간 항체 또는 이의 항원-결합 부분에 관한 것이다. 본 발명은 또한, 표 3에 Mabs G14F7E5, G15B4G5 및 G19B9G7에 대하여 나타낸 CDR1 및 CDR3 아미노산 서열 (각각 서열 번호 제2번 및 제4번; 서열 번호 제6번 및 제8번; 및 서열 번호 제10번 및 제12번)을 포함하는 카파 경쇄를 포함하며 C. 네오포르만스 GXM에 특이적으로 결합하는 분리된 인간 항체 또는 이의 항원-결합 부분에 관한 것이다. 일부 구체예에서, 항체는 표 3에 나타낸 아미노산 서열(서열 번호 제1번; 서열 번호 제5번; 서열 번호 제9번)의 CDR1의 개시부 내지 CDR3의 종결부로부터의 아미노산 서열을 포함하는 카파 경쇄를 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 서열 번호 제2번 내지 제4번, 제6번 내지 제8번 또는 제10번 내지 제12번에 도시된 아미노산 서열을 포함하는 카파 경쇄를 포함한다. 본 발명은 또한, 서열 번호 제1번, 서열 번호 제5번 또는 서열 번호 제9번 중 임의의 하나에 FR1, FR2, FR3 및/또는 FR4 아미노산 서열을 포함하는 안티 C. 네오포르만스 GXM 항체에 관한 것이다. 본 발명은 또한, 표 2에 나타낸 핵산 서열 (서열 번호 제13번; 서열 번호 제17번; 또는 서열 번호 제21번)에 의하여 인코딩된 아미노산 서열 또는 상기 아미노산 서열의 가변 영역을 포함하는 카파 경쇄를 포함하며 C. 네오포르만스 GXM에 특이적으로 결합하는 분리된 인간 항체 또는 이의 항원-결합 부분에 관한 것이다. 시그널 서열은 본 발명의 임의의 항체 중에 존재하거나 존재하지 않을 수 있다. 본 발명은 또한 C. 네오포르만스 GXM에 특이적으로 결합하며 람다 경쇄를 포함하는 분리된 인간 항체 또는 이의 항원-결합 부분에 관한 것이다.

본 발명은 G14F7E5, G15B4G5 또는 G19B9G7 항체의 가변(V) 영역, 변화(D) 영 역 및 연결(J) 영역으로 구성되는 중쇄를 포함하는 C. 네오포르만스 GXM에 특이적으로 결합된 분리된 인간 항체 또는 이의 항원-결합 부분에 관한 것이다. 본 발명은 G14F7E5, G15B4G5 또는 G19B9G7 항체의 중쇄에서 유래하는 CDR1, CDR2 및 CDR3 영역 중 하나 이상을 포함하고 C. 네오포르만스 GXM에 특이적으로 결합하는 분리된 인간 항체 또는 이의 항원-결합 부분에 관한 것이다.

더 구체적으로, 본 발명은 인간 V_H3족 유전자 또는 인간 V_H6 유전자에 의하여 인코딩되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하고 C. 네오포르만스 GXM에 특이적으로 결합하는 분리된 인간 항체 또는 이의 항원-결합 부분에 관한 것이다. 일부 구체예에서, 인간 유전자는 V_H3-64 또는 V_H6-1 유전자이다. 본 발명은 생식선 서열로부터의 3 이하의 돌연변이를 포함하는 항체를 이용하는 인간 V_H3를 포함하나 V_H3족 유전자를 사용하는 항체에서 중쇄 아미노산 서열은 생식선 V_H3 서열인 것이 바람직하다. 일부 구체예에서, 중쇄는 또한 인간 D3-9 또는 인간 D3-10 유전자에 의하여 인코딩된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, 중쇄는 또한 인간 J_H4b 또는 J_H5b 유전자에 의하여 인코딩된 아미노산 서열 또는 생식선 서열로부터의 1 개의 돌연변이를 포함하는 상기 서열을 포함한다. 인간 V_H6-1 유전자를 이용하는 항체의 경우 항체 서열은 생식선 서열로부터의 0∼6 개의 돌연변이를 가질 수 있다. 상기 아미노산 서열이 생식선 V_H1, D 및/또는 J_H 서열로부터의 돌연변이를 포함할 경우, 돌연변이는 골격 영역, CDR5 또는 둘다에 있을 수 있다.

바람직한 구체예에서, 중쇄 가변 영역은 인간 V_H3-65 유전자, 인간 D3-9 유전자 및 인간 J_H4b 유전자에 의하여 인코딩된 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구체예에서, 중쇄 가변 영역은 인간 V_H64 유전자, 인간 D3-10 유전자 및 인간 J_H5b 유전자에 의하여 인코딩된다.

본 발명은 또한, 서열 번호 제43번 (G14F7E5), 서열 번호 제47번 (G15B4G5) 또는 서열 번호 제51번 (G19B9G7)의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열, 상기 서열 번호 중 임의의 하나의 CDR1 개시부 내지 CDR3 종결부의 아미노산 서열, 또는 상기 서열 번호 중 임의의 하나의 가변 영역의 아미노산 서열을 포함하는 안티-C. 네오포르만스 항체를 제공한다.

본 발명은 또한, C. 네오포르만스 GXM에 특이적으로 결합하며, 서열 번호 제43번, 서열 번호 제47번 또는 서열 번호 제51번 중 임의의 하나의 FR1, F2, F3 및/또는 F4의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항체를 제공한다.

일부 구체예에서, GXM 24067의 aKa로서 표현되는 안티-GXM 항체의 친화도는 1 x 10³ M^_1 이상이다. 일부 구체예에서, aKa는 1.3 x 10³ M^-1 또는 2 x 10³ M^-1 또는 2.1 x 10³ M^-1이다. 본원에서 사용될 때, aKa는 고상 항원에 결합하는 최고 50%의 가용성 GXM 항원 농도의 역수이다.

일부 구체예에서, 본 발명의 안티-GXM 항체는 혈청형 A C. 네오포르만스로부터의 GXM, 예컨대 SB4 및 H99 균주로부터의 GXM에 결합된 가용성 세포 표면에 결합 한다.

일부 구체예에서, 본 발명의 안티-GXM 항체는 C3 보체 부착을 매개한다.

일부 구체예에서, 본 발명의 안티-GXM 항체는 C. 네오포르만스 감염에 대한 보호 작용을 나타낸다.

본 발명은 C. 네오포르만스 GXM에 특이적으로 결합하고 Fab 단편, F (ab') 2 단편 및 Fv 단편으로 이루어지는 리스트에서 선택된 항원 결합 도메인을 포함하는 분리된 인간 항체 또는 이의 항원-결합 부분에 관한 것이다.

본 발명은 C. 네오포르만스 GXM에 특이적으로 결합하는 분리된 인간 항체 또는 이의 항원-결합 부분에 관하며 상기 항체는 단일쇄 항체이다.

본 발명은 C. 네오포르만스 GXM에 특이적으로 결합하는 분리된 인간 항체 또는 이의 항원-결합 부분에 관하며 상기 항체는 키메라 항체이다. 바람직한 구체예에서, 키메라 항체는 상이한 인간 항체로부터의 골격 영역 및 CDR 영역을 포함한다. 더 바람직한 구체예에서, 키메라 항체는 이중특이성이다. 더 바람직한 구체예에서, 키메라 항체는 C. 네오포르만스 GXM 및 방사성 동위원소로 표지된 분자, 효소 표지, 형광 표지, 독소, 자기제, 2차 항체, 친화 표지, 에피토프 태그, 항생제, 보체 단백질 및 시토카인으로 이루어지는 리스트로부터 선택된 표지에 대하여 이중특이성이다.

본 발명은 C. 네오포르만스 GXM에 특이적으로 결합하는 분리된 인간 항체 또는 이의 항원-결합 부분에 관하며 상기 항체 또는 이의 부분은 유도된다. 바람직한 구체예에서, 항체 또는 이의 부분은 폴리에틸렌 글리콜, 하나 이상의 메틸 또는 에 틸기 또는 하나 이상의 탄수화물 부분으로 유도된다.

본 발명의 핵산 분자를 사용하여 당업자에 공지된 기술 및 방법을 사용하여 항체 유도체를 생성시킬 수 있다.

또다른 구체예에서, 핵산 분자, 벡터 및 숙주 세포를 사용하여 돌연변이된 안티-GXM 항체를 만들 수 있다. 항체를 중쇄 및/또는 경쇄의 가변 도메인에서 돌연변이화시켜 항체의 결합 특성을 바꿀 수 있다. 예컨대, 하나 이상의 CDR 영역에서 돌연변이를 일으켜 GXM에 대한 항체의 Kd를 증가 또는 감소, Koff를 증가 또는 감소, 또는 항체의 결합 특이성을 변화시킬 수 있다. 부위-지향 돌연변이화 기술은 업계에 널리 공지되어 있다. 예컨대, Sambrook 등 및 Ausubel 등의 전술 문헌 참조. 항체에 돌연변이를 도입하고자 할 경우, 안티-GXM 항체의 가변 영역에서 생식선에 필적하게 변화되는 것으로 공지된 아미노산 잔기에 돌연변이를 일으키는 것이 바람직하다. 본 발명의 안티-GXM 항체 중 하나의 가변 영역에서 생식선에 필적하게 변화되는 것으로 공지된 아미노산 잔기에 하나 이상의 돌연변이를 일으키는 것이 더 바람직하다. 또다른 구체예에서, 핵산 분자는 하나 이상의 골격 부위에서 돌연변이된다. 골격 영역 또는 불변 도메인에서 돌연변이를 일으켜 안티-GXM 항체의 반감기를 증가시킬 수 있다. 또한, 골격 영역 또는 불변 도메인에서 돌연변이를 일으켜 항체의 면역원성을 변화시키거나, 노출(deanudation) 부위 또는 글리코실화 부위를 제거하여 또다른 분자의 공유 또는 비공유 결합 부위를 제공하거나, 또는 보체 고정과 같은 특성을 변화시킬 수 있다. 단일 돌연변이 항체의 골격 영역, 불변 도메인 및 가변 영역 각각에 돌연변이를 일으킬 수 있다. 대안적으로, 단일 돌연변 이 항체의 골격 영역, 불변 도메인 및 가변 영역 중 하나에만 돌연변이를 일으킬 수 있다.

또다른 구체예에서, 또다른 폴리펩티드에 연결된 안티-GXM 항체의 전부 또는 일부를 포함하는 융합 항체 또는 면역부착소를 제조할 수 있다. 바람직한 구체예에서, 안티-GXM 항체의 가변 영역만이 폴리펩티드에 연결된다. 또다른 바람직한 구체예에서, 안티-GXM 항체의 V_H 도메인은 제1 폴리펩티드에 연결되는 반면 안티-GXM 항체의 V_L 도메인은 상기 제1 폴리펩티드와 회합하는 제2 폴리펩티드에 연결되므로 V_H 및 V_L 도메인이 서로 상호작용하여 항체 결합 부위를 형성할 수 있다. 또다른 바람직한 구체예에서, V_H 및 V_L 도메인이 서로 상호 작용할 수 있도록 V_H 도메인을 링커에 의하여 V_L 도메인으로부터 분리시킨다 (또한 단일쇄 항체 참조). V_H-링커-V_L 항체를 이후 소정 폴리펩티드에 연결시킨다. 융합 항체는 GXM을 검출하는 데 유용하다. 또한, 2 개 (또는 그 이상)의 단일쇄 항체를 서로 연결한 융합 항체를 생성시킬 수 있다. 이것은 단일 폴리펩티드 쇄 상에 2 가 또는 다가 항체를 생성시키거나 이중특이성 항체를 생성시키고자 할 경우 유용하다. 한 구체예에서, 융합 항체 또는 면역부착소는 안티-GXM 항체로부터의 하나 이상의 CDR 영역을 사용하여 제조한다.

본 발명은 약학적 허용 담체 및 C. 네오포르만스 GXM에 특이적으로 결합하는 분리된 인간 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 포함하는 약학 조성물에 관한 것이 다. 본 발명은 또한 항체 또는 이의 항원-결합 부분, 이의 약학적 허용 담체 및 용기를 포함하는 키트에 관한 것이다. 일부 구체예에서, 키트는 또한 사용 지침서를 포함한다.

본 발명은, C. 네오포르만스 감염을 치료 또는 예방 또는 억제하는 방법 또는 이러한 감염에 의하여 야기되는 병태 또는 질환의 중증도를 경감시키는 방법으로서, 본 발명 항체 또는 이의 항원-결합 부분 또는 상기 항체 또는 부분을 포함하는 조성물을 이를 필요로 하는 환자, 예컨대 C. 네오포르만스 감염 위험이 있거나 또는 현재 감염된 환자에게 투여하는 것을 포함하는 방법에 관한 것이다.

일부 구체예에서, 환자는 면역저하(immunocompromised) 환자이다. 면역저하 환자는 연령, 질병 또는 면역억제제 또는 항신생물제 또는 다른 화학요법제를 사용하는 치료를 비롯한 약물 치료에 의하여 면역 반응이 손상된 환자일 수 있다. 일부 구체예에서, 면역저하 환자는 항체 유전자 복구 결함, 특히 인간 V_H3족 유전자가 결함 또는 결핍되어 있다. 본 발명의 안티-GXM Ab를 사용한 치료가 유리할 수 있는 환자는 임의의 연령, 즉 유아 및 어린이에서 노인 환자에 이를 수 있다.

바람직한 구체예에서, 인간 항체는 비인간 동물에서 얻는다. 더 바람직한 구체예에서, 항체는 단클론 항체이다. 또다른 바람직한 구체예에서, 약학 조성물은 주사, 경점막, 경구, 흡인, 경안, 직장, 지속성 매몰제, 리포솜, 에멀젼, 크림, 국소형 또는 서방형 수단을 통하여 투여한다. 또다른 바람직한 구체예에서, 항체는 제2 단백질을 포함하는 융합 항체이다. 더 바람직한 구체예에서, 제2 단백질은 독성 펩티드 부분, 보체 단백질, 방사성 동위원소 표지된 단백질, 시토카인 또는 항 생 물질 단백질로 이루어지는 리스트에서 선택된다. 또다른 바람직한 구체예에서, 항체는 방사성 동위원소 표지, 독소, 보체 단백질, 시토카인 또는 항생 물질로 표지된다. 또다른 바람직한 구체예에서, 약학 조성물은 또한 독소, 보체 단백질, 방사성 동위원소 표지된 단백질, 시토카인, 항생 물질 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.

본 발명은 C. 네오포르만스 GXM에 특이적으로 결합하는 인간 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 생성시키는 분리된 세포에 관한 것이다. 일부 구체예에서, 세포는 박테리아 세포, 효모균 세포, 곤출 세포, 양서류 세포 및 포유동물 세포로 이루어지는 리스트에서 선택된다. 특정 구체예에서, 포유동물 세포는 인간 세포, 마우스 세포, 랫 세포, 개 세포, 원숭이 세포, 염소 세포, 돼지 세포, 소 세포 및 햄스터 세포로 이루어지는 리스트에서 선택에서 선택된다. 다른 특정 구체예에서, 포유동물 세포는 HeLa 세포, NIH 3T3 세포, CHO 세포, BHK 세포, VERO 세포, CV-1 세포, NS/0 세포 및 COS 세포로 이루어지는 리스트에서 선택된다. 다른 구체예에서, 세포주는 하이브리도마이다.

본 발명은, a) 항체가 생성되는 조건하에서 항체를 생성시킬 수 있는 비인간 세포를 배양하는 단계; b) 상기 세포 배양액으로부터 항체를 분리시키는 단계를 포함하는, C. 네오포르만스 GXM에 특이적으로 결합하는 분리된 인간 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 생성시키는 방법에 관한 것이다.

일부 구체예에서, C. 네오포르만스 GXM에 특이적으로 결합하는 분리된 인간 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 생성시키는 방법은 불멸화된 세포주를 이용한다. 일부 구체예에서, 불멸화된 세포주는 하이브리도마이다.

본 발명은, a) C. 네오포르만스 항원 조성물을 포함하는 인간 면역글로부린 위치를 포함하는 비인간 동물을 면역화시키는 단계; b) 비인간 동물에서 항원 조성물에 대한 체액성 반응을 개시시키는 단계; 및 c) 비인간 동물로부터 인간 항체를 분리시키는 단계를 포함하는, C. 네오포르만스 GXM에 특이적으로 결합하는 추가의 인간 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 제조에 관한 것이다.

본 발명은 C. 네오포르만스 GXM에 특이적으로 결합하는 인간 항체 중쇄 또는 이의 부분을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 비인간 동물로부터 분리된 핵산 분자에 관한 것이다. 일부 구체예에서, 핵산 분자는 인간 항체를 생성시키는 하이브리도마로부터 분리시킨다.

본 발명은 G14F7E5, G15B4G5 또는 G19B9G7 Mab의 중쇄를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 인간 항체 중쇄 또는 이의 항원-결합 부분을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 분리된 핵산 분자 또는 이의 단편에 관한 것으로, 상기 인간 항체는 C. 네오포르만스 GXM에 특이적으로 결합한다. 바람직한 구체예에서, 분리된 핵산 분자는 1∼3 개의 인간 항체의 CDR 영역 사이에 인코딩 서열을 포함한다. 본 발명은 또한, G14F7E5, G15B4G5 또는 G19B9G7 Mab의 CDR3 아미노산 서열을 포함하는 인간 항체 중쇄 또는 이의 항원-결합 부분을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 분리된 핵산 분자 또는 이의 단편에 관한 것이며, 상기 항체는 C. 네오포르만스 GXM에 특이적으로 결합한다.

본 발명은 안티-C. 네오포르만스 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 중쇄 및/ 또는 경쇄를 인코딩하는 누클레오티드 서열을 포함하는 분리된 핵산 분자에 관한 것이다.

일부 구체예에서, 핵산은 서열 번호 44번, 45번, 46번, 48번, 49번, 50번, 52번, 53번 또는 54번에서 선택된 하나 이상의 중쇄 또는 경쇄 CDR 아미노산 서열을 인코딩하는 누클레오티드 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, 핵산은 서열 번호 43번, 47번 또는 51번 중 임의의 하나에서 발견되는 CDR1, CDR2 및 CDR3 아미노산 서열을 인코딩하는 누클레오티드 서열을 포함한다.

또 다른 구체예에서, 핵산은 서열 번호 43번, 47번 또는 51번 중 임의의 하나의 아미노산 서열을 인코딩하는 누클레오티드 서열 또는 상기 서열의 가변 영역 부분을 포함한다.

일부 구체예에서, 서열 번호 43번, 47번 또는 51번 중 임의의 하나의 FR1, FR2, FR3 및/또는 FR4의 아미노산 서열을 인코딩하는 누클레오티드 서열을 포함한다.

일부 구체예에서, 핵산 분자는 서열 번호 제31번, 서열 번호 제35번 및 서열 번호 제39번으로 이루어지는 군에서 선택된 누클레오티드 서열, 또는 가변 영역, 하나 이상의 CDR 및/또는 이의 하나 이상의 FR의 누클레오티드을 포함한다.

본 발명은 C. 네오포르만스에 특이적으로 결합하는 인간 항체의 중쇄 또는 이의 항원-결합 부분을 인코딩하는 핵산 분자 또는 이의 단편을 포함하는 벡터에 관한 것이다. 바람직한 구체예에서, 벡터는 또한 핵산에 작동 연결된 발현 조절 서열을 포함한다.

본 발명은, 표 2에 나타낸 바와 같은 누클레오티드 서열 (서열 번호 제13번; 서열 번호 제17번; 서열 번호 제21번) 또는 가변 영역 또는 이의 하나 이상의 FR 영역의 누클레오티드 서열을 포함하고 C. 네오포르만스 GXM에 특이적으로 결합하는 인간 항체 경쇄 또는 이의 항원-결합 부분을 인코딩하는 분리된 핵산 분자 또는 이의 단편에 관한 것이다. 바람직한 구체예에서, 분리된 핵산 분자는 인간 항체의 CDR 영역을 1∼3개 인코딩하는 서열을 포함한다. 본 발명은 또한, 표 3 (서열 번호 제2번 및 제4번; 서열 번호 제6번 및 제8번; 또는 서열 번호 제10번 및 제12번)에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR3 아미노산 서열을 포함하고 C. 네오포르만스 GXM에 특이적으로 결합하는 인간 항체 경쇄 또는 이의 항원-결합 부분을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 분리된 핵산 분자 또는 이의 단편에 관한 것이다. 본 발명은, Mabs G14F7E5, G15B4G5 또는 G19B9G7에 대하여 표 2에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR3 아미노산 서열 (각각 서열 번호 제14번 및 제16번; 서열 번호 제18번 및 제20번; 또는 서열 번호 제22번 및 제24번)을 포함하고 C. 네오포르만스 GXM에 특이적으로 결합하는 인간 항체 경쇄 또는 이의 항원-결합 부분을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 분리된 핵산 분자 또는 이의 단편에 관한 것이다.

본 발명은 C. 네오포르만스에 특이적으로 결합하는 인간 항체 경쇄 또는 이의 항원-결합 부분을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 분리된 핵산 분자 또는 이의 단편을 포함하는 벡터에 관한 것이다. 바람직한 구체예에서, 벡터는 또한 핵산에 작동 연결된 발현 조절 서열을 포함한다.

본 발명은, a) C. 네오포르만스 GXM에 특이적으로 결합하는 인간 항체의 경 쇄 또는 이의 항원-결합 부분을 인코딩하며 비인간 동물로부터 분리된 핵산 분자; 또는 b) 상기 핵산 분자를 포함하는 벡터를 포함하는 분리된 숙주 세포에 관한 것이다.

본 발명은, a) C. 네오포르만스 GXM에 특이적으로 결합하는 인간 항체의 중쇄 또는 이의 항원-결합 부분을 인코딩하며 비인간 동물로부터 분리된 핵산 분자; 또는 b) 상기 헥산 분자를 포함하는 벡터를 포함하는 분리된 숙주 세포에 관한 것이다.

본 발명은, a) C. 네오포르만스 GXM에 특이적으로 결합하는 인간 항체의 경쇄 또는 이의 항원-결합 부분을 인코딩하는 분리된 핵산 분자 및 중쇄 또는 이의 항원-결합 부분을 인코딩하며 비인간 동물로부터 분리된 핵산 분자; 또는 b) 상기 헥산 분자들을 포함하는 벡터(들)를 포함하는 분리된 숙주 세포에 관한 것이다.

본 발명은, 핵산 분자가 발현되는 조건하에서 상기 개시한 숙주 세포를 배양시키는 단계를 포함하는, C. 네오포르만스 GXM에 특이적으로 결합하고 비인간 동물로부터 식별된 인간 항체의 중쇄 또는 이의 항원-결합 부분, 경쇄 또는 이의 항원-결합 부분, 또는 경쇄 및 중쇄 또는 이들의 항원-결합 부분을 재조합 생성시키는 방법에 관한 것이다.

본 발명은 분리된 인간 항체 중쇄 또는 이의 항원-결합 부분에 관한 것이며, 여기서 항체는 상기 개시한 중쇄를 인코딩하는 임의의 핵산 분자에 의하여 인코딩되고 상기 개시한 임의의 숙주 세포로부터 분리된 C. 네오포르만스 GXM에 특이적으로 결합한다.

본 발명은 분리된 인간 항체 경쇄 또는 이의 항원-결합 부분에 관한 것이며, 여기서 항체는 상기 개시한 중쇄를 인코딩하는 임의의 핵산 분자에 의하여 인코딩되고 상기 개시한 임의의 숙주 세포로부터 분리된 C. 네오포르만스 GXM에 특이적으로 결합한다.

본 발명은 상기 개시한 임의의 핵산 분자를 포함하는 비인간 트랜스제닉 동물에 관한 것이다. 바람직한 구체예에서, 비인간 트랜스제닉 동물은 핵산 분자(들)를 발현시킨다. 더 바람직한 구체예에서, 비인간 트랜스제닉 동물은, C. 네오포르만스 GXM에 특이적으로 결합하는 인간 항체의 중쇄 또는 이의 항원-결합 부분을 인코딩하는 분리된 핵산 분자 및 경쇄 또는 이의 항원-결합 부분을 인코딩하는 분리된 핵산 분자를 포함하며 비인간 동물은 양쪽 핵산 분자를 발현시킨다. 더 바람직한 구체예에서, 비인간 동물은 마우스, 랫, 햄스터, 소, 양, 영장류, 말 및 돼지로 이루어지는 리스트에서 선택된다. 더 바람직한 구체예에서, 분리된 핵산 분자 또는 이의 부분의 발현으로 얻어지는 인간 항체는 동물의 B 림프 세포 또는 이의 자손 세포에서 유도된 세포의 표면 상에서 발현된다. 또다른 바람직한 구체예에서, 분리된 핵산 분자 또는 이의 부분의 발현으로 얻어지는 인간 항체는 동물의 림프, 혈액, 젖, 타액 또는 복수로 분비된다.

본 발명은 C. 네오포르만스 GXM 및 제2 폴리펩티드 서열에 특이적으로 결합하는 분리된 인간 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 포함하는 융합 단백질에 관한 것이다. 여러 구체예에서, 제2 폴리펩티드 서열은 에피토프 태그, 친화 태그, 독성 폴리펩티드, 항생 물질, 효소, 제2 항체 서열, 보체 단백질 및 시토카인으로 이루 어지는 리스트에서 선택된다.

본 발명은 C. 네오포르만스 GXM에 특이적으로 결합하는 분리된 인간 항체 또는 이의 항원-결합 부분에 관한 것이며, 여기서 항체의 중쇄 이소타입은 뮤, 감마, 델타, 엡실론 또는 알파이다.

본 발명은 크립토코커스 네오포르만스 GXM에 특이적으로 결합하는 단리된 인간 항체 또는 이의 항원-결합부를 연구한 것이며, 여기서 항체 또는 이의 항원-결합부는 하기 단계를 포함하는 공정에 의해 제조한다:

a) 크립토코커스 네오포르만스 GXM 표본, 독성 크립토코커스 네오포르만스 세포 표본, 약독성 크립토코커스 네오포르만스 세포 표본, 및 사멸한 크립토코커스 네오포르만스 세포 표본으로 이루어진 군으로부터 선택된 항원을 갖는 인간 면역글로불린 부위를 포함하는 비-인간 동물을 면역화시키는 단계;

b) 비-인간 동물에 항원에 대한 면역 반응의 개시를 허용하는 단계; 및

c) 비-인간 동물로부터 항체를 단리하는 단계.

본 발명은 인간 생체 물질, 예컨대 바이러스, 효소, 호르몬, 사이토카인, 수용체, 수용체 리간드, 면역글로불린, 보체, 핵 단백질, 및 세포질 신호 단백질의 오염이 없는 동물 또는 세포로부터 단리된 인간 항체 또는 이의 항원-결합부에 대해 숙고한다. 특히, 본 발명의 인간 항체는 엡스타인-바 바이러스(Epstein-Barr virus) 또는 레트로바이러스를 보유하지 않는다.

약학 조성물은 통상적인 혼합, 용해, 과립화, 당의정 제조, 분말화, 유화, 캡슐화, 포괄 또는 동결 건조 공정을 이용하여 제조될 수 있다.

따라서 본 발명에 따른 사용을 위한 약학 조성물은 활성 화합물을 약학적으로 사용될 수 있는 제제로의 처리를 촉진시키는 부형제 및 보조제를 포함하는 하나 이상의 생리학적으로 허용가능한 담체를 이용한 통상적인 방식으로 제형화할 수 있다. 적당한 제형은 선택되는 투여 경로에 따라 다르다.

주사용으로, 본 발명의 제제는 수용액, 바람직하게는 예컨대 행크액(Hanks' 용액), 링거액, 또는 생리 식염수 버퍼와 같은 생리학적으로 호환가능한 버퍼로 제형화할 수 있다. 점막 투여용으로, 투과할 장벽에 적절한 침투제가 제형으로 사용한다. 이러한 침투제는 일반적으로 당업계에 공지되어 있다. 안구 투여용으로, 적절한 식염수의 현탁액이 당업계에 잘 공지되어 있다.

경구 투여용으로, 활성 화합물을 당업계에 잘 공지된 약학적으로 허용가능한 담체와 조합함으로써 화합물들이 바로 제형화할 수 있다. 이러한 담체들은 치료가 필요한 환자들의 경구 섭취용으로, 본 발명의 화합물이 정제, 환약, 당의정, 캡슐, 액체, 젤, 시럽, 슬러리, 현탁액 등으로 제형화되는 것을 가능하게 해준다. 경구용 약학 제제는 고체 부형제로서 수득할 수 있으며, 선택적으로 생성 혼합물을 마쇄하고, 필요하다면, 적절한 보조제를 첨가한 후 과립의 혼합물을 처리하여 정제 또는 당의정 코어로 수득한다. 적절한 부형제는 락토스, 수크로스, 만니톨, 또는 소르비톨을 포함하는 당과 같은 충전재; 예컨대, 옥수수 전분, 밀 전분, 쌀 전분, 감자 전분, 젤라틴, 트라가칸스 검, 메틸 셀룰로스, 히드록시프로필메틸셀룰로스, 나트륨 카복시메틸셀룰로스, 및/또는 폴리비닐피롤리돈(PVP)과 같은 셀룰로스 제제를 포함한다. 필요하다면, 가교 폴리비닐 피롤리돈, 아가, 또는 알긴산 또는 이의 염 예컨대 나트륨 알기네이트와 같은 붕해제를 첨가할 수 있다.

당의정 코어는 적절한 코팅으로 제공할 수 있다. 이러한 목적을 위해, 농축 당액을 사용할 수 있으며, 이는 임의로 아라비아 검, 탈크, 폴리비닐 피롤리돈, 카보폴 젤, 폴리에틸렌 글리콜, 및/또는 티타늄 디옥시드, 락카액, 및 적절한 유기 용매 또는 용매 혼합물을 포함할 수 있다. 염료 또는 안료를 동정 또는 활성 화합물 용량의 상이한 조합을 특징화하기 위해 정제 또는 당의정 코팅에 첨가할 수 있다.

경구적으로 사용될 수 있는 약학 제제는 젤라틴으로 제조된 푸쉬-핏(push-fit) 캡슐 뿐 아니라, 젤라틴 및 가소화제, 예컨대 글리세롤 또는 소르비톨로 제조된 연질의, 봉인 캡슐을 포함한다. 푸쉬-핏 캡슐은 락토스와 같은 충전재, 전분과 같은 결합제, 및/또는 탈크 또는 마그네슘 스테아레이트와 같은 윤활제 및, 임의로는 안정제와의 혼합물로 활성 성분을 포함할 수 있다. 연질 캡슐에서, 활성 화합물은 적절한 액체, 예컨대 지방유, 액체 파라핀, 또는 액체 폴리에틸렌 글리콜에 용해 또는 현탁시킬 수 있다. 추가로, 안정제를 첨가할 수 있다. 경구 투여용의 모든 제형은 이러한 투여를 위해 적절한 용량이어야 한다.

구강 투여용으로, 조성물은 통상적인 방식으로 제형화된 정제 또는 마름모꼴 정제의 형태를 취할 수 있다.

흡입에 의한 투여로, 본 발명에 따른 사용을 위한 화합물은 적절한 추진제, 예를 들어, 디클로로디플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄, 이산화탄소 또는 다른 적절한 가스를 사용한, 가압식 팩 또는 흡입기로 부터의 에어로졸 스프레이의 형태로 적절히 전달된다. 가압 에어로졸의 경우 투여량은 밸브로 계량된 양을 전달함으로써 결정할 수 있다. 흡입기 또는 취입기에서의 사용을 위한, 예를 들어, 젤라틴의 캡슐 및 카트리지는 화합물과 락토스 또는 전분과 같은 적절한 분말 기재의 분말 믹스를 포함하도록 제형화시킬 수 있다.

상기 화합물은 주입, 예를 들어, 정맥 주사 또는 연속 주입의 비경구 투여용으로 제형화할 수 있다. 주사 제형은 보존제를 첨가한, 단위 용량 형태, 예를 들어, 앰플 또는 다용량 용기로 주어질 수 있다. 조성물은 유성 또는 수성 비히클의 현탁액, 용액 또는 에멀젼의 형태를 취할 수 있으며, 현탁제, 안정제, 및/또는 분산제의 제형제를 포함할 수 있다.

비경구 투여용 약학 제형은 수용성 형태인 활성 화합물의 수용액을 포함한다. 추가로, 활성 화합물의 현탁액은 적절한 유성 현탁 주사액으로 제조할 수 있다. 적절한 친유성 용매 또는 비히클은 지방유 예컨대 참깨 오일, 또는 합성 지방산 에스테르, 예컨대 에틸 올레이트 또는 트리클리세라이드, 또는 리포좀을 포함한다. 수성 현탁 주사액은 현탁액의 점도를 증가시키는 물질, 예컨대 나트륨 카복시메틸 셀룰로스, 소르비톨, 또는 덱스트란을 포함할 수 있다. 임의로는, 현탁액은 또한 적절한 안정제 또는 화합물의 고농축액의 제제를 허용하기 위해 용해도를 증가시키는 제제를 포함할 수 있다.

대안적으로, 활성 성분은 사용 전, 적절한 비히클, 예컨대 무균 비-발열원성 물(sterile pyrogen-free water)과 조합된 분말 형태일 수 있다.

화합물은 또한 직장 투여용 조성물 예를 들어, 통상적인 좌제 기재 예컨대 코코아 버터 또는 다른 글리세라이드를 포함하는 예컨대 좌제 또는 관장제로 제형화할 수 있다.

상기 기술된 제형 이외에, 화합물은 저장형 제제로서 또한 제형화할 수 있다. 이러한 장기간 작용하는 제형들은 피하 주입(예를 들어 피하 또는 근육) 또는 근육 주사로 투여할 수 있다. 따라서, 예를 들어, 화합물은 중합성 또는 소수성 물질 (예를 들어 수용가능한 오일 형태의 에멀젼으로서) 또는 이온 교환 수지, 또는 난용성 유도체, 예를 들어, 난용성 염으로서 제형화될 수 있다.

본 발명의 소수성 화합물에 대한 약학적 담체는 벤질 알콜, 비극성 계면활성제, 수혼화성 유기 중합체, 및 수성상을 포함하는 공용매계이다. 공용매계는 VPD 공용매계일 수 있다. VPD는 무수 에탄올의 부피에 근접하는, 3% w/v 벤질 알콜, 8% w/v 비극성 계면활성제 폴리소르베이트 80, 및 65% w/v 폴리에틸렌 글리콜 300의 용액이다. VPD 공용매계 (VPD:5W)는 수용액 중 5%의 덱스트로스로 1:1 희석된 VPD로 이루어진다. 상기 공용매계는 소수성 화합물을 용해시키며, 그 자체가 전신 투여에 대해 낮은 독성을 발휘한다. 당연히, 공용매계의 비율은 이의 가용성 및 독성 특성을 파괴하지 않으면서 상당히 다양할 수 있다. 또한, 공용매 성분들의 동정은 다양할 수 있다: 예를 들어, 다른 저독성 비극성 계면활성제가 폴리소르베이트 80 대신에 사용될 수 있으며; 폴리에틸렌 글리콜의 분획 크기는 다양할 수 있고; 다른 생혼화성(biocompatible) 중합체는 폴리에틸렌 글리콜, 예를 들어, 폴리비닐 피롤리돈을 대체할 수 있으며; 다른 당 또는 다당류는 덱스트로스를 대체할 수 있다.

대안적으로, 소수성 약학 화합물에 대한 다른 전달 시스템을 사용할 수 있 다. 리포좀 및 에멀젼은 소수성 약물에 대한 전달 비히클 또는 담체의 잘 공지된 예이다. 특정 유기 용매 예컨대 디메틸설폭시드를 또한 사용할 수 있지만, 더 큰 독성을 수반한다.

추가로, 화합물은 치료제를 포함하는 고체 소수성 중합체의 반투과성 매트릭스와 같은, 서방형 시스템을 사용하여 전달할 수 있다. 다양한 서방형 물질이 제조되어 당업계에 잘 공지되어 있다. 서방형 캡슐은, 이들의 화학적 성질에 따라, 화합물을 몇 주 내지 100일 이상 동안 방출한다.

치료 시약의 화학적 성질 및 생물학적 안정성에 따라, 단백질 안정화에 대한추가 전략이 사용될 수 있다.

약학 조성물은 또한 적절한 고체 또는 젤상 담체 또는 부형제를 포함할 수 있다. 이러한 담체 또는 부형제의 예로서 이에 제한되지는 않지만 탄산칼슘, 인산칼슘, 다양한 당, 전분, 셀룰로스 유도체, 젤라틴, 및 중합체 예컨대 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다.

본 발명의 크립토코커스 네오포르만스 GXM에 특이적으로 결합하는 단리된 인간 항체 또는 이의 항원-결합부는 약학적으로 호환가능한 상대이온과의 염으로서 제공할 수 있다. 약학적으로 호환가능한 염은 이에 제한되지는 않지만, 염산, 황산, 아세트산, 락트산, 타르타르산, 사과산, 숙신산 등을 포함하는 다양한 산과의염으로 형성할 수 있다. 염은 수성 또는 상응하는 자유 염기 형태인 다른 양성자성 용매에서 보다 가용성인 경향이 있다.

본 발명의 키트는 크립토코커스 네오포르만스 감염 또는 이러한 감염으로 발 생하는 질환 또는 장애의 억제, 예방 또는 치료용의 본 발명의 조성물을 이용하는 지시들을 포함한다. 키트 상에 인쇄된 지시들은 당업자로 하여금 본 발명의 방법을 실시하기 위해 키트를 이용할 수 있게 해 준다.

하기 실시예는 예시로서만 제공한다. 이들은 본원에 개시된 발명의 범위를 제한하려는 의도는 아니다.

실시예 1 - 크립토코커스 네오포르만스 캡슐형 폴리사카리드 글루쿠론옥실로만난 (GXM)에 대한 모노클로날 항체의 생성

발명자들은 IgG2-카파 인간 면역글로불린 트랜스제닉 마우스 (XenoMouse® mice; Mendez et al., Nat. Genet. 15, pp.146-56 (1997))를 디프테리아 톡소이드에 컨쥬게이트된 크립토코커스 네오포르만스 혈청형 D (균주 24067, ATCC)의 글루쿠론옥실로만난(GXM-DT)으로 백신 접종하였다. 백신 접종은 꼬리의 기저에서 피하로 수행하였다. 50 ㎕ Alhydrogel 및 10 ㎕ CpG와 10 ㎍의 GXM-DT 100㎕ 주사를 각 마우스에 3회 투여하였다: 0일, 14일 및 28일째. 비장세포를 42일째 마우스로부터 단리하고 융합세포를 당업계에 잘 공지된 기술 (Pirofski et al., Infect. Immun. 63:3005-14, 1995; Chang et al., Infect Immun. 70:4977-86, 2002)에 따른 마우스 골수종 세포주 NSO와 비장세포의 융합에 의해 제조하였다. 융합세포를 연질 아가에 클로닝시키고 부유 융합세포 매질을 이용하여 증식시켰다.

500개 이상의 융합세포 세포주가 GXM 24067 과 반응한 항체의 분비에 대해 스크리닝되었다. 성장을 보인 세포의 상청액을 10 g/ml의 GXM 24067로 코팅된 폴리 스티렌 ELISA 플레이트(Corning^TM Glass Works, Corning, NY)로 37℃에서 1시간 동안 배양하고; 플레이트를 세척하고 알칼리성 포스파타아제(AP) 콘쥬게이트된 IgG, IgM, 카파 경쇄에 대한 염소 항-인간 시약, 그리고 람다 경쇄에 특이적인 염소 항마우스 시약으로 37℃에서 1시간 동안 배양하였다 (FisherBiotech

, FisherScientific™, Pittsburgh, PA). 플레이트를 세척하고 결합을 p-니트로페닐 포스페이트 기질(Sigma, St. Louis, MO)로 검출하였다. 광학 밀도를 405 nm에서 MRX Microplate Reader(Dynatech Laboratories, Chantilly, VA)로 측정하였다. 음성 대조군은 IgM 골수종 항체 (Calbiochem

, San Francisco, CA)였다. GXM-결합 융합세포를 문헌 [Zhang et al., Infect. Immun. 65 1158-64, 1997 및 Fleuridor, et al., J Infect. Dis. 180:1526-35 (1999)]에 기술된 바와 같은 GXM-미모토프(P13), 포도상구균 단백질 A (SPA;Sigma), DT 및 BSA 를 포함하는 다양한 항원에 대한 결합을, 문헌[Russell et al., Infect. Immun. 68: 1820-26, 2000, Pirofski et al., Infect. Immun. 63: 3005-14, 1995 및 Chang et al., Infect. Immun. 68: 1820-26, 2002)]에 기술된 바와 같은 표준 기술을 이용하여 시험하였다.

실시예 2 - 크립토코커스 GXM에 대한 MAbs의 특징화

특이성 시험에 대한 반복적 스크리닝 후, 3개의 융합세포 세포주가 GXM과 가장 높은 반응성을 지니고 GXM에 대해서만 반응성인 것을 발견하였다. 이러한 융합세포로 제조된 3개의 인간 MAbs인, G14F7E5, G15B4G5 및 G19B9G7를 추가로 연구하였다. 모든 3개의 항체들은 IgM이고 GXM 24067과 반응하지만, 및 직접 ELISA에 의 해 DT, BSA 또는 GXM 미모토프 P13에 대한 현저한 결합(상기 배경기술)을 나타내지는 않았다. 균주 24067의 크립토코커스 네오포르만스 세포 상에서 GXM에 결합된 모든 3개의 MAbs는 면역형광 염색법에 기초한다.

3개의 융합세포는 2003년 5월 1일자로 미국 10801 University Blvd., Manassas, VA 20110-2209에 위치한, 미국 표준 균주 은행(American Type Culture Collection, ATCC)에, 특허 절차에 관한 미생물의 국제 기탁의 부다페스트 조약 아래 기탁되었다. 하기 ATCC 엑세스 번호가 지정되었다:

G14F7E5 PTA-5170

G15B4G5 PTA-5171

G19B9G7 PTA-5172

크립토코커스 네오포르만스 혈청형 A 에 대한 MAbs의 특이성 또한 측정하였다. 혈청형 A는 북아메리카에서 크립토코커스의 가장 흔한 원인인 한편; 혈청형 D 는 북아메리카에서 두번째로 흔한 혈청형이며 유럽에서 질병의 흔한 원인이다. 혈청형 특이성 연구는 하기와 같은 정제된 GXM 및 전세포 ELISA를 이용하여 수행하였다.

정제된 GXM ELISA: 순차적으로 희석된 각각의 MAbs (10 ㎍/ml에서 시작)를 10 ㎍/ml의 크립토코커스 네오포르만스 균주 24067의 GXM, 혈청형 A 균주 SB4 및 H99 (Dr. Arturo Casadevall, Albert Einstein College of Medicine 에 의해 제공됨) 또는 PBS 중 P13-덱스트란으로 코팅된 ELISA 플레이트로 배양하고; 플레이트를 세척하고 염소 항인간 IgM-AP (Fisher)로 1시간 동안 배양하고, 세척하고 상기와 같이 현상시켰다. MAbs G14F7E5 및 G19B9G7는 모두 혈청형 A 균주와 반응하는 반면, G15B4G5는 혈청형 A 균주에 실제적인 결합을 하지 않아 MAbs이 상이한 균주 특이성을 가진다는 것을 나타낸다. 상기 실험의 결과를 표 1 에 나타내었다.

표 1: MAbs G14F7E5, G15B4G5 및 G19B9G7의 가용성 GXM과의 반응성에 대한 균주 특이성

C. 네오포르만스 균주	G14F7E5	G15B4G5	G19B9G7
24067(혈청형 D)	+++	+++	+++
SB4(혈청형 A)	+++	-	+++
H99(혈청형 A)	+++	-	+++

전세포 ELISA: 크립토코커스 네오포르만스 균주 24067, SB4 및 H99를 Saboraud 덱스트로스 배양액 (Becton Dickinson, Sparks MD)에서 2일간 성장시키고, 상기 세포들을 PBS 로 세척한 후, 카운팅하고 68℃에서 2시간 동안 가열 살생하였다. Saboraud 덱스트로스 배양액에서 가열 살생 세포들을 밤새 31℃에서 배양하여 세포 사멸을 확인하였다. 세포를 PBS로 희석하고, ELISA 플레이트에 1×10⁷ cfu/ml(50㎕/웰)에서 플레이팅하고, 상기 플레이트를 4℃에서 밤새 배양하였다. 대조군으로서 골수종 IgM (Calbiochem) 및 항-PPS8 모노클로날 IgM, D11를 사용하였다. 비결합 세포를 제거하였고 결합된 세포를 150 ㎕/웰의 메탄올로 30분간 배양함으로써 플레이트에 고정시켰다. 플레이트를 세척하고 1% BSA/PBS로 37℃에서 1시간 동안 블록킹하였다. 세척 후, MAbs 또는 대조군 골수종 IgM(Calbiochem, San Diego, CA)를 10 ㎍/ml의 초기 농도에서 플레이트에 첨가하고, 1:3 희석하고 이들을 37℃에서 1시간 동안 배양하였다. 세척후, 플레이트를 1:1000 희석 (0.1% BSA/PBS 중)의 염소 항인간 IgM AP-컨쥬게이트로 37℃에서 1시간 동안 배양하였다. 플레이트를 상기와 같이 현상시키고 405 nm의 파장에서 읽었다.

MAbs G15B4G5 가 다른 두 MAbs보다 결합 정도가 덜했지만, 모든 3개의 MAbs 가 모두 혈청형 A 균주에 결합하였다.

실시예 3 - 항원 특이성

MAbs의 GXM 특이성을 억제 ELISA로 확인하였다. 대조군으로서, 스트렙토코커스 뉴모니에의 혈청형 8에 대해 IgM 특이적인, 인간 골수종 IgM (상기 참조) 및 D11를 사용하였다 (Zhong et al., Infect. Immun. 67: 4119-27, 1999). 10 ㎍/ml의 GXM (24067 SB4 또는 H99) 또는 10 ㎍/ml의 P13-DEX (이전에 보고된 폴리펩타이드 GXM-미메토프의 덱스트란 컨쥬게이트; Fleuridor et al., J. Immunol. 166: 1087-96(2001); Maitta et al., Infection Immun. 72: 196-208 (2004))로 코팅된 ELISA 플레이트를 실온에서 3시간 동안, 세척하고 1% BSA/PBS로 4℃에서 밤새 블록킹하였다. 플레이트를 순차적으로 희석된 가용성의, MAbs 10 또는 1 ㎍/ml와 혼합된 GXM(100 ㎍/ml으로 시작)으로 배양하였고; 플레이트를 세척하고 염소 항인간 IgM-AP (Fisher)로 37℃ 에서 1시간 동안 배양하고 현상한 후 상기와 같이 읽었다.

도 1에서 보여진 바와 같이, 균주 SB4의 가용성 GXM은 균주 24067의 GXM에 대한 임의의 MAbs의 결합을 억제하지 않았다 (패널 A).

실시예 4 - C. 네오포르만스 GXM 24067에 대한 MAbs의 서열 분석

발명자들은 융합세포의 PCR-증폭 V_L cDNA를 시퀀싱함으로써 MAbs의 경쇄 변이부 (V_L)에 대한 뉴클레오타이드 서열을 수득하였다. 발명자들은 VL 특이적 프라 이머를 이용한 RNA 역전사로 V_L cDNA를 생성하였다: V_K 센스, 5'-GAA(CT)ATC(T)GAGCTCACC(GT)CAGTCTCCA-3'(서열번호: 25; (CT)는 3 위치가 A, C 또는 T 와 동일한 빈도수를 가진다는 것을 가리키고; (T)는 6 위치가 C 또는 T 와 동일한 빈도수를 가진다는 것을 가리키고; (GT)는 15 위치가 C, G 또는 T 와 동일한 빈도수를 가진다는 것을 가리킨다);

V_K 안티센스, 5'-CCTGTTGAAGCTCTTTGTGAC-3'(서열번호: 26). PCR 생성물을 두 독립적인 실험으로부터 시퀀싱하여 동일함을 발견하였다. 변이부 및 G14F7E5, G15B4G5 및 G19B9G7의 CDR을 포함하는 뉴클레오타이드 서열을 하기 표 2 에 나타내었다. 변이부 및 G14F7E5, G15B4G5 및 G19B9G7의 CDR을 포함하는 아미노산 서열을 하기 표 3에 나타내었다. 발명자들은 DNA PLOT (V Base Index; MRC Center for Protein Engineering, Cambridge, United Kingdom; Mukherjee et al., J. Exp. Med. 177: 1105-16(1993))을 이용하여 변이부 서열을 인간 면역글로불린 서열의 데이타베이스와 비교하였다.

표 2: Mabs G14F7E5, G15B4G5 및 G19B9G7의 경쇄 핵산 서열.

표 3: Mabs G14F7E5, G15B4G5 및 G19B9G7의 경쇄 아미노산 서열.

3개 MAbs 모두의 V_L 체인 가변 영역 유전자 전사물은, 인간 V_KA27 (DPK22) 유전자 및 J_K1 경쇄 유전자 성분을 이용한다. 서열 비교는 G15B4G5가 생식계열(germline) A27 서열을 갖는다는 것을 보여준다. 대조적으로, G14F7E5 및 G19B9G7은 둘 다 CDR3 영역에서, G에서 A로 (서열 번호: 13의 위치 257 및 서열 번호: 21 의 위치 248) 동일한 뉴클레오티드 치환을 갖는다. G15B4G5는 이 치환이 결여되어 있다. 이 치환은 아미노산을 세린(S)에서 아스파라긴(N)으로 변화시킨다 (서열 번호:1의 위치 86 및 서열 번호: 9에서 위치 83). 서열 비교는 G14F7E5가 CDR1에서 G에서 T로 단일 뉴클레오티드 치환을 갖는다는 것을 보여준다 (서열 번호: 13의 위치 65). 이 치환은 아미노산을 세린(S)에서 이소류신(I)으로 변화시킨다 (서열 번호: 1의 위치 22). G19B9G7은 CDR1에서 4개의 치환: 서열 번호: 13의 위치 40, 52 및 59에서 G에서 A로, 그리고 서열 번호: 13의 위치 56에서 G에서 C로의 치환을 갖는다. 이들 치환은 아미노산을, 서열 번호: 9의 위치 14에서 알라닌(A)을 트레오닌(T)으로; 서열 번호: 9의 위치 18에서 발린(V)을 이소류신(I)으로; 서열 번호: 9의 위치 19에서 세린(S)을 트레오닌(T)으로; 그리고 서열 번호: 9의 위치 20에서 세린(S)을 아스파라긴(N)으로 변화시킨다.

본 발명자들은, Mabs G14F7E5, G15B4G5 및 G19B9G7을 생성하는 하이브리도마로부터 다음과 같이 PCR-증폭 V_H 유전자 cDNA로부터 V_H 유전자 서열을 결정하였다. 본 발명자들은 V_H 불변 영역 프라이머를 사용하여 RNA의 역전사에 의해 V_H cDNA를 생성시켰다. 이후 사용한 Xenomouse® 마우스의 V_H 유전자 전체를 수집시켜 커버하는 V_H 특이적 프라이머의 혼합물을 사용하여 cDNA로부터 PCR에 의해 V_H 영역을 증폭시켰다:

V_H3-07 센스, 5'-CACCATGGARTTGGGGCTGAGCTGG-3' (서열 번호: 29);

V_H3-09 센스, 5'-CACCATGGAGTTKGGACTGAGCTGG-3' (서열 번호: 55);

V_H3-11 센스, 5'-CACCATGGAGTTTGGGCTKAGCTGG-3' (서열 번호: 56);

V_H3-21 센스, 5'-CACCATGGAACTGGGGCTCCGCTGG-3' (서열 번호: 57);

V_H3-48 센스, 5'-CACCATGGAGTTGGGGCTGTGCTGG-3' (서열 번호: 58);

V_H3-53 센스, 5'-CACCATGGAGTTTTGGCTGAGCTGG-3' (서열 번호: 59);

V_H3-64 센스, 5'-CACCATGACGGAGTTTGGGCTGAGC-3' (서열 번호: 60); 또는

V_H6 센스, 5'-CACCATGTCTGTCTCCTTCCTCATCTT-3' (서열 번호: 61); 및

V_H3 안티-센스-IgM ASO, 5'-GTGCTGCTGATGTCAGAGTTG-3' (서열 번호: 30).

본 발명자들은 제조업자의 지시에 따라, V_H PCR 생성물을 젤 정제하고 TA 클로닝 시스템(Invitrogen^TM, San Diego, CA)의 pCR1000 플라스미드 내에서 클로닝시켰다. Maxi 플라스미드 프로토콜(Qiagen, Inc., Chatsworth, CA)을 사용하여 플라스미드 DNA를 분리하였으며 그리고 ABI-PRISM Big Dye 터미네이터 사이클 시퀀싱 준비 반응 키트(Perkin Elmer, Torrance, CA)를 사용하여 시퀀싱하였다. DNA PLOT (V Base Index; MRC Center for Protein Engineering, Cambridge, United Kingdom; Mukherjee et al., J. Exp. Med. 177: 1105-16 (1993))을 사용하여 가변-영역 서열을 인간 이뮤노글로불린 서열의 데이타베이스에 비교하여 유전자 용도를 결정하고 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 동정하였다.

표 4: Mabs G14F7E5, G15B4G5 및 G19B9G7의 중쇄 핵산 서열.

표 5: Mabs G14F7E5, G15B4G5 및 G19B9G7의 중쇄 아미노산 서열.

볼드체 서열은 시그날 (리더) 서열이다.

중쇄 서열의 분석은 G15B4G5가 인간 V_H 3-64 유전자의 생식세포 서열을 포함한다는 것을 나타낸다. G15B4G5의 가변 도메인은 인간 D3-9 유전자 및 인간 J_H4b 유전자를 더 이용한다. C. 네오포르만스 감염에 대한 보호를 제공하는 G15B4G5의 가변 도메인 서열과 보호를 제공하는 것으로 언급되어 온 다른 인간 안티-C. 네오프로만스 GXM의 비교는, CDR2에서의 잔기가 보존된다는 것을 보여준다. 도 3 참 조.

실시예 5 - 마우스 보호 실험

마우스의 수동적인 보호 실험에서 MAbs의 보호 효능을 평가하였다. 각 MAb 또는 대조군 골수종 IgM을 무균 PBS로 희석하고, 그리고 C. 네오프로만스 스트레인 24067의 5×10⁶ 콜로니-형성-단위(cfu)로 IP 감염 1시간 전에 1000, 100, 50, 5 및 0.5 ㎍ 투여량을 10마리의 6-8 주 암컷 BALB/c 마우스 (NCI로부터 얻음) 각각에 복강내(IP)로 투여하였다. 0.1 ml를 투여하고, PBS로 희석하고, 사보라우드(saboraud) 덱스트로즈 아가 플레이트 (Fisher) 상에 플레이팅함으로써 진균 접종물을 확인하였다. 생존 마우스의 수를 매일 모니터링하였다. 대조군 마우스가 사멸하는 때, 카플란-메이어(Kaplan-Meier) 로그-랭크 생존 테스트로 통계적으로 생존을 평가하였다. 100 ㎍ 투여량의 G15B4G5가 보호성이었다. 다른 투여량이 없거나 또는 MAb 기여 보호는 대조군에 대한 것 이상이다. 모든 농도에서 G19B9G7는 치명성을 향상시켰다 (PBS에 비해 상대적으로). 이 실험의 결과를 도 2에 보였다.

본 명세서 및 청구항을 통해, 단어 "포함하다" 또는 "포함하는"과 같은 변형은 언급한 정수 또는 정수의 군을 포함하지만 임의의 다른 정수 또는 정수의 군을 제외하지 않는 것을 의미하는 것으로 이해하여야 한다.

마치 각 개별 문헌 또는 특허 출원이 구체적으로 그리고 독립적으로 참고문헌으로 인용되었음을 의미하는 바와 같이, 본 명세서에 인용한 모든 문헌 및 특허 출원은 본원에서 참고문헌으로 인용하였다. 이해를 명확하게 하기 위한 목적으로 설명 및 예시의 방식으로 전술한 발명을 어느 정도 상세히 설명하였지만, 첨부된 청구항의 사상 또는 범위로부터 벗어나지 않고 거기에 소정의 변경 및 변형이 이루어질 수 있다는 것이 본 발명의 교시의 관점에서 본 기술 분야에서 통상의 당업자에게 용이하게 드러날 것이다.

[서열 목록]

Claims

크립토코커스 네오포르만스(Cryptococcus neoformans)의 캡슐형 폴리사카리드 글루쿠론옥실로만난(glucuronoxylomannan, GXM)과 특이적으로 결합하는, 모노클로날 항체 또는 그것의 항원-결합 부분으로서, 상기 항체 또는 부분이,

(a) 시그날 서열을 가지거나 또는 가지지 않는, 인간 VH 3-64 유전자 또는 인간 VH-6-1 유전자의 CDR1, CDR2 및 CDR3 아미노 서열을 포함하는 중쇄 아미노산 서열;

(b) 시그날 서열을 가지거나 또는 가지지 않는, 인간 V_K A27 유전자의 CDR1, CDR2 및 CDR3 아미노 서열을 포함하는 경쇄 아미노산 서열; 또는

(c) (a) 및 (b) 모두

를 포함하며, 여기서 상기 아미노산 서열이 생식계열(germline) 유전자 서열로부터 6개 이하의 돌연변이를 포함할 수 있는 것인 모노클로날 항체 또는 그것의 항원-결합 부분.
제1항에 있어서, 아미노산 서열이 생식계열 유전자 서열인 항체 또는 항원-결합 부분.
제1항에 있어서, 항체가

(a) 서열 번호: 43의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 아미노산 서열 및 서열 번호: 1의 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 아미노산 서열;

(b) 서열 번호: 47의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 아미노산 서열 및 서열 번호: 5의 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 아미노산 서열; 및

(c) 서열 번호: 51의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 아미노산 서열 및 서열 번호: 9의 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 아미노산 서열

로 구성되는 군으로부터 선택한 중쇄 및 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 것인 항체 또는 항원-결합 부분.
제1항에 있어서, 항체가 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 그리고 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열을

(a) 시그날 서열을 가지거나 또는 가지지 않는, 항체 G14F7E5의 중쇄 아미노산 서열 및 경쇄 아미노산 서열;

(b) 시그날 서열을 가지거나 또는 가지지 않는, 항체 G15B4G5의 중쇄 아미노산 서열 및 경쇄 아미노산 서열; 및

(c) 시그날 서열을 가지거나 또는 가지지 않는, 항체 G19B9G7의 중쇄 아미노산 서열 및 경쇄 아미노산 서열

로 구성되는 군으로부터 선택하는 것인 항체 또는 항원-결합 부분.
제1항에 있어서, 중쇄 및 경쇄가 각각

(a) 시그날 서열을 가지거나 또는 가지지 않는, 서열 번호: 43의 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 1의 경쇄 가변 도메인;

(b) 시그날 서열을 가지거나 또는 가지지 않는, 서열 번호: 47의 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 5의 경쇄 가변 도메인; 및

(c) 시그날 서열을 가지거나 또는 가지지 않는, 서열 번호: 51의 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 9의 경쇄 가변 도메인

으로 구성되는 군으로부터 선택한 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인을 포함하는 것인 항체 또는 항원-결합 부분.
G14F7E5 (ATCC 기탁 번호 PTA-5170), G15B4G5 (ATCC 기탁 번호 PTA-5171) 또는 G19B9G7 (ATCC 기탁 번호 PTA-5172)로 구성되는 군으로부터 선택한 세포주(cell line).
제6항의 세포주로 제조한 모노클로날 항체.
C. 네오포르만스 GXM과 특이적으로 결합하는 모노클로날 항체로서, 항체가 제7항의 모노클로날 항체의 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 것인 모노클로날 항체.
C. 네오포르만스 GXM과 특이적으로 결합하는 분리 항체로서, 상기 항체의 경쇄가 인간 V_KIII DPK22/A27 유전자를 이용하는 것인 분리 항체.
제6항에 있어서, 경쇄가 인간 J_K1 유전자를 추가로 이용하는 것인 항체.
C. 네오포르만스 GXM과 특이적으로 결합하는 분리 항체로서, 상기 항체의 중쇄가 인간 V_H 3-64 또는 인간 V_H 6-1 유전자를 이용하는 것인 분리 항체.
크립토코커스 네오포르만스의 캡슐형 폴리사카리드 글루쿠론옥실로만난(GXM)과 특이적으로 결합하는 항체 또는 그것의 항원-결합 부분으로서, 상기 항체 또는 부분이 경쇄를 포함하고, 상기 경쇄 아미노산 서열이

(a) 서열 번호: 13에 기재한 DNA 서열로 암호화된 아미노산 서열;

(b) 서열 번호: 13에 기재한 DNA 서열로 암호화된 아미노산 서열의 잔기 1 내지 99를 포함하는 아미노산 서열;

(c) 서열 번호: 13에 기재한 DNA 서열로 암호화된 아미노산 서열의 잔기 16 내지 89를 포함하는 아미노산 서열; 및

(d) 서열 번호: 14, 15 및 16에 기재한 DNA 서열로 암호화된 CDR1, CDR2 및 CDR3 아미노산 서열

로 구성되는 군으로부터 선택한 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체 또는 그것의 항원-결합 부분.
(a) 서열 번호: 1에 기재한 아미노산 서열;

(b) 서열 번호: 1에 기재한 아미노산 서열의 잔기 1 내지 99를 포함하는 아미노산 서열;

(c) 서열 번호: 1에 기재한 아미노산 서열의 잔기 16 내지 89를 포함하는 아미노산 서열; 및

(d) 서열 번호: 2, 3 및 4에 기재한 CDR1, CDR2 및 CDR3 아미노산 서열

로 구성되는 군으로부터 선택한 아미노산 서열을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자.
(a) 서열 번호: 13에 기재한 DNA 서열로 암호화된 아미노산 서열;

(b) 서열 번호: 13에 기재한 DNA 서열로 암호화된 아미노산 서열의 잔기 1 내지 99를 포함하는 아미노산 서열;

(c) 서열 번호: 13에 기재한 DNA 서열로 암호화된 아미노산 서열의 잔기 16 내지 89를 포함하는 아미노산 서열; 및

(d) 서열 번호: 14, 15 및 16에 기재한 DNA 서열로 암호화된 CDR1, CDR2 및 CDR3 아미노산 서열

로 구성되는 군으로부터 선택한 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드.
(a) 서열 번호: 13에 기재한 서열;

(b) 서열 번호: 13의 위치 1 내지 297의 뉴클레오티드 서열;

(c) 서열 번호: 13의 CDR1-CDR3 암호화 서열; 및

(d) 서열 번호: 14, 15 및 16의 CDR1, CDR2 및 CDR3 암호화 서열

로 구성되는 군으로부터 선택한 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자.
크립토코커스 네오포르만스의 캡슐형 폴리사카리드 글루쿠론옥실로만난(GXM)과 특이적으로 결합하는 항체 또는 그것의 항원-결합 단편으로서, 상기 항체 또는 단편이

(a) 서열 번호: 17에 기재한 DNA 서열로 암호화된 아미노산 서열;

(b) 서열 번호: 17에 기재한 DNA 서열로 암호화된 아미노산 서열의 잔기 1 내지 102를 포함하는 아미노산 서열;

(c) 서열 번호: 17에 기재한 DNA 서열로 암호화된 아미노산 서열의 잔기 19 내지 92를 포함하는 아미노산 서열; 및

(d) 서열 번호: 18, 19 및 20에 기재한 DNA 서열로 암호화된 CDR1, CDR2 및 CDR3 아미노산 서열

로 구성되는 군으로부터 선택한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 것인 항체 또는 그것의 항원-결합 단편.
(a) 서열 번호: 17에 기재한 DNA 서열로 암호화된 아미노산 서열;

(b) 서열 번호: 17에 기재한 DNA 서열로 암호화된 아미노산 서열의 잔기 1 내지 102를 포함하는 아미노산 서열;

(c) 서열 번호: 17에 기재한 DNA 서열로 암호화된 아미노산 서열의 잔기 19 내지 92를 포함하는 아미노산 서열; 및

(d) 서열 번호: 18, 19 및 20에 기재한 DNA 서열로 암호화된 CDR1, CDR2 및 CDR3 아미노산 서열

로 구성되는 군으로부터 선택한 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드.
(a) 서열 번호: 5에 기재한 것으로 암호화된 아미노산 서열;

(b) 서열 번호: 5에 기재한 아미노산 서열의 잔기 1 내지 102를 포함하는 아미노산 서열;

(c) 서열 번호: 5에 기재한 아미노산 서열의 잔기 19 내지 92를 포함하는 아미노산 서열; 및

(d) 서열 번호: 6, 7 및 8에 기재한 CDR1, CDR2 및 CDR3 아미노산 서열

로 구성되는 군으로부터 선택한 아미노산 서열을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자.
(a) 서열 번호: 17에 기재한 DNA 서열;

(b) 서열 번호: 17의 위치 1 내지 306의 뉴클레오티드 서열;

(c) 서열 번호: 17의 CDR1-CDR3 암호화 DNA 서열; 및

(d) 서열 번호: 18, 19 및 20의 CDR1, CDR2 및 CDR3 암호화 DNA 서열

로 구성되는 군으로부터 선택한 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자.
크립토코커스 네오포르만스의 캡슐형 폴리사카리드 글루쿠론옥실로만난(GXM)과 특이적으로 결합하는 항체 또는 그것의 항원-결합 단편으로서, 상기 항체 또는 단편이

(a) 서열 번호: 21에 기재한 DNA 서열로 암호화된 아미노산 서열;

(b) 서열 번호: 21에 기재한 DNA 서열로 암호화된 아미노산 서열의 잔기 1 내지 96을 포함하는 아미노산 서열;

(c) 서열 번호: 21에 기재한 DNA 서열로 암호화된 아미노산 서열의 잔기 13 내지 86을 포함하는 아미노산 서열; 및

(d) 서열 번호: 22, 23 및 24에 기재한 DNA 서열로 암호화된 CDR1, CDR2 및 CDR3 아미노산 서열

로 구성되는 군으로부터 선택한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체 또는 그것의 항원-결합 단편.
(a) 서열 번호: 21에 기재한 DNA 서열로 암호화된 아미노산 서열;

(b) 서열 번호: 21에 기재한 DNA 서열로 암호화된 아미노산 서열의 잔기 1 내지 96을 포함하는 아미노산 서열;

(c) 서열 번호: 21에 기재한 DNA 서열로 암호화된 아미노산 서열의 잔기 13 내지 86을 포함하는 아미노산 서열; 및

(d) 서열 번호: 22, 23 및 24에 기재한 DNA 서열로 암호화된 CDR1, CDR2 및 CDR3 아미노산 서열

로 구성되는 군으로부터 선택한 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드.
(a) 서열 번호: 9에 기재한 아미노산 서열;

(b) 서열 번호: 21에 기재한 아미노산 서열의 잔기 1 내지 96을 포함하는 아미노산 서열;

(c) 서열 번호: 9에 기재한 아미노산 서열의 잔기 13 내지 86을 포함하는 아미노산 서열; 및

(d) 서열 번호: 10, 11 및 12에 기재한 CDR1, CDR2 및 CDR3 아미노산 서열

로 구성되는 군으로부터 선택한 아미노산 서열을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자.
(a) 서열 번호: 21에 기재한 DNA 서열;

(b) 서열 번호: 21의 위치 1 내지 288의 뉴클레오티드 서열;

(c) 서열 번호: 21의 CDR1-CDR3 암호화 DNA 서열; 및

(d) 서열 번호: 22, 23 및 24의 CDR1, CDR2 및 CDR3 암호화 DNA 서열

로 구성되는 군으로부터 선택한 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자.
크립토코커스 네오포르만스의 캡슐형 폴리사카리드 글루쿠론옥실로만난(GXM)과 특이적으로 결합하는 항체 또는 그것의 항원-결합 부분으로서, 상기 항체 또는 부분이 경쇄를 포함하고, 상기 경쇄 아미노산 서열이

(a) 서열 번호: 31, 35 또는 39에 기재한 DNA 서열로 암호화된 아미노산 서열;

(b) 서열 번호: 31에 기재한 DNA 서열로 암호화된 아미노산 서열의 잔기 1 내지 150을 포함하는 아미노산 서열; 서열 번호: 35에 기재한 DNA 서열로 암호화된 아미노산 서열의 잔기 1 내지 136을 포함하는 아미노산 서열; 또는 서열 번호: 39에 기재한 DNA 서열로 암호화된 아미노산 서열의 잔기 1 내지 146을 포함하는 아미노산 서열;

(c) 서열 번호: 31에 기재한 DNA 서열로 암호화된 아미노산 서열의 잔기 50 내지 139를 포함하는 아미노산 서열; 서열 번호: 35에 기재한 DNA 서열로 암호화된 아미노산 서열의 잔기 40 내지 125를 포함하는 아미노산 서열; 또는 서열 번호: 39에 기재한 DNA 서열로 암호화된 아미노산 서열의 잔기 46 내지 135를 포함하는 아미노산 서열; 및

(d) 서열 번호: 32, 33 및 34; 36, 37 및 38 또는 40, 41 및 42에 기재한 DNA 서열로 암호화된 CDR1, CDR2 및 CDR3 아미노산 서열

로 구성되는 군으로부터 선택한 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체 또는 그것의 항원-결합 부분.
(a) 서열 번호: 43, 47 또는 51에 기재한 아미노산 서열;

(b) 서열 번호: 43에 기재한 아미노산 서열의 잔기 1 내지 150을 포함하는 아미노산 서열; 서열 번호: 35에 기재한 DNA 서열로 암호화된 아미노산 서열의 잔기 1 내지 136을 포함하는 아미노산 서열; 또는 서열 번호: 39에 기재한 DNA 서열로 암호화된 아미노산 서열의 잔기 1 내지 146을 포함하는 아미노산 서열;

(c) 서열 번호: 31에 기재한 DNA 서열로 암호화된 아미노산 서열의 잔기 50 내지 139를 포함하는 아미노산 서열; 서열 번호: 35에 기재한 DNA 서열로 암호화된 아미노산 서열의 잔기 40 내지 125를 포함하는 아미노산 서열; 또는 서열 번호: 39에 기재한 DNA 서열로 암호화된 아미노산 서열의 잔기 46 내지 135를 포함하는 아미노산 서열; 및

(d) 서열 번호: 32, 33 및 34; 36, 37 및 38 또는 40, 41 및 42에 기재한 DNA 서열로 암호화된 CDR1, CDR2 및 CDR3 아미노산 서열

로 구성되는 군으로부터 선택한 아미노산 서열을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자.
(a) 서열 번호: 43, 47 또는 51에 기재한 아미노산 서열;

(b) 서열 번호: 43에 기재한 아미노산 서열의 잔기 1 내지 150을 포함하는 아미노산 서열; 서열 번호: 35에 기재한 DNA 서열로 암호화된 아미노산 서열의 잔기 1 내지 136을 포함하는 아미노산 서열; 또는 서열 번호: 39에 기재한 DNA 서열로 암호화된 아미노산 서열의 잔기 1 내지 146을 포함하는 아미노산 서열;

(c) 서열 번호: 31에 기재한 DNA 서열로 암호화된 아미노산 서열의 잔기 50 내지 139를 포함하는 아미노산 서열; 서열 번호: 35에 기재한 DNA 서열로 암호화된 아미노산 서열의 잔기 40 내지 125를 포함하는 아미노산 서열; 또는 서열 번호: 39에 기재한 DNA 서열로 암호화된 아미노산 서열의 잔기 46 내지 135를 포함하는 아미노산 서열; 및

(d) 서열 번호: 32, 33 및 34; 36, 37 및 38 또는 40, 41 및 42에 기재한 DNA 서열로 암호화된 CDR1, CDR2 및 CDR3 아미노산 서열

로 구성되는 군으로부터 선택한 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드.
발현 조절 서열에 작동적으로 연결된 제13항, 제15항, 제18항, 제19항, 제22항, 제23항 및 제25항 중 어느 하나의 항의 핵산 분자.
제27항의 핵산 분자로 형질변환시킨 숙주 세포.
C. 네오포르만스 GXM과 특이적으로 결합하는 항체 또는 그것의 항원 결합 단편을 제조하는 방법으로서, 제28항의 숙주 세포를 배양하는 단계를 포함하는 방법.
제13항, 제15항, 제18항, 제19항, 제22항, 제23항 및 제25항 중 어느 하나의 항의 핵산 분자로 형질변환시킨 숙주 세포.
C. 네오포르만스 GXM과 특이적으로 결합하는 항체 또는 그것의 항원 결합 단편을 제조하는 방법으로서, 제30항의 숙주 세포를 배양하는 단계를 포함하는 방법.
제1항 내지 제5항, 제7항 내지 제12항, 제16항, 제20항 및 제24항 중 어느 하나의 항의 항체 또는 그것의 항원-결합 단편, 및 약학적 허용 담체를 포함하는 조성물.
제32항에 있어서,

(a) 진단제; 및

(b) 치료제

로 구성되는 군으로부터 선택한 성분을 더 포함하는 조성물.
제1항 내지 제5항, 제7항 내지 제12항, 제16항, 제20항 및 제24항 중 어느 하나의 항의 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 포함하는 키트.
C. 네오포르만스 감염으로 유발된 질병 또는 질환의 심각성을 예방하거나 또는 감소시키는 방법으로서, 제1항 내지 제5항, 제7항 내지 제12항, 제16항, 제20항 및 제24항 중 어느 하나의 항의 항체 또는 그것의 항원-결합 단편 또는 제32항 또는 제33항의 조성물의 유효량을 그것이 필요한 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 것인 방법.
C. 네오포르만스 감염 또는 그런 감염으로 유발된 질병 또는 질환에 대한 내 성의 증가가 필요한 대상의 내성을 증가시키는 방법으로서, 제1항 내지 제5항, 제7항 내지 제12항, 제16항, 제20항 및 제24항 중 어느 하나의 항의 항체 또는 그것의 항원-결합 단편 또는 제32항 또는 제33항의 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 방법.
제35항 또는 제36항에 있어서, 대상이 면역저하된(immunocompromised) 것인 방법.
제35항 또는 제36항에 있어서, 대상이 HIV-1으로 감염된 것인 방법.
제35항 또는 제36항에 있어서, 대상이 1 또는 그 이상의 인간 V_H 3 패밀리 유전자가 결핍된 것인 방법.
제35항 내지 제39항 중 어느 하나의 항에 있어서, 안티-C. 네오포르만스 GXM 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 다른 치료제의 투여와 병용하여 투여하는 것인 방법.
C. 네오포르만스 감염을 검출하는 방법으로서, 감염된 것으로 추정되는 대상으로부터의 시료를 제1항 내지 제5항, 제7항 내지 제12항, 제16항, 제20항 및 제24항 중 어느 하나의 항의 항체 또는 항원-결합 단편과 접촉시키는 단계 및 C. 네오 포르만스 GXM에 대한 상기 항체 또는 단편의 결합을 검출하는 단계를 포함하는 방법.
비-인간 트랜스제닉(transgenic) 동물로부터 유도한 것인, 제1항 내지 제5항, 제7항 내지 제12항, 제16항, 제20항 및 제24항 중 어느 하나의 항의 항체 또는 그것의 항원-결합 부분.
제42항에 있어서, 비-인간 유전자 전이 동물이 XenoMouse® 동물인 항체 또는 항원-결합 부분.