PT1311269E

PT1311269E - Método de utilização de dicetopiperazinas e composição que contém as mesmas

Info

Publication number: PT1311269E
Application number: PT01957581T
Authority: PT
Inventors: David Bar-Or; C Gerald Curtis; Nagaraja K R Rao; Greg Thomas
Original assignee: Dmi Biosciences Inc
Priority date: 2000-08-04
Filing date: 2001-08-02
Publication date: 2012-05-10
Also published as: US20130345238A1; US20120022003A1; US8455517B2; CY1112687T1; US10039760B2; CA2417960C; US6555543B2; HK1135333A1; US20150051223A1; EP1311269B1; CN100553636C; CA2774959A1; AU7931301A; EP1311269A4; JP2012176980A; WO2002011676A2; US20120094893A1; BR0112969A; US9561226B2; US8268830B2

Description

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DESCRIÇÃO

"MÉTODO DE UTILIZAÇÃO DE DICETOPIPERAZINAS E COMPOSIÇÃO QUE CONTÉM AS MESMAS"

CAMPO DA INVENÇÃO

Esta invenção refere-se a certas dicetopiperazinas para utilização em métodos de inibição dos efeitos de factor de activação de plaquetas. A invenção também se refere a certas dicetopiperazinas para utilização em métodos de inibição da produção e/ou libertação de interleucina 8 (IL-8). Finalmente, a invenção refere-se a composições farmacêuticas que compreendem as dicetopiperazinas.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO 0 factor de activação de plaquetas (PAF; l-0-alquil-2-acetil-sn-glicerol-3-fosforilcolina) é um potente mediador fosfolipido inflamatório com uma ampla variedade de actividades biológicas. É produzido e libertado por basófilos, monócitos, macrófagos, leucócitos polimorfonucleares, eosinófilos, neutrófilos, linfócitos assassinos naturais, plaquetas e células endoteliais, bem como por tecidos renal e cardíaco sob estimulação imunológica e não imunológica apropriada. Veja-se pedido de patente PCT WO 94/04537. PAF medeia respostas biológicas por meio da ligação a receptores de PAF específicos encontrados numa ampla variedade de células e tecidos. Estudos de estrutura-actividade sobre PAF e os seus análogos indicam que a capacidade de PAF para se ligar a estes receptores é específica da estrutura e estereospecífica. Veja-se documento PCT WO 94/04537.

Enquanto PAF medeia respostas biológicas essenciais, também parece desempenhar um papel em respostas imune patológica e inflamatória. Muitos estudos publicados têm proporcionado evidência do envolvimento de PAF em doenças, 2 incluindo artrite, inflamação aguda, asma, reacções alérgicas, doenças cardiovasculares, doenças neoplásicas, choque endotóxico, dor, psoriase, inflamação oftálmica, isquemia, ulceração gastrointestinal, enfarte do miocárdio, doenças inflamatórias intestinais, e sindrome de dificuldade respiratória aguda. Veja-se pedido de patente PCT WO 94/04537. O envolvimento de PAF em estados imunes e inflamatórios patológicos tem estimulado um esforço de investigação substancial para identificar antagonistas de receptor de PAF, e um número de compostos de diversas estruturas químicas foi identificado como antagonistas de PAF. Veja-se, por exemplo, pedido de patente PCT WO 94/04537 e documento WO 96/00212 (e referências citadas nestes dois pedidos), pedido PCT WO 95/18610 e documento WO 99/49865, Patente US N° 4.940.709, 5.358.938, 5.434.151, 5.463.083, 5.648.486, 5.741.809, 5.792.776, 5.780.503, 5.856.323, pedido de patente japonesa 63 290868, Shimazaki et al., Chem. Pharm. Buli., 35(8), 3527-3530 (1987), Shimazaki et al., J. Med. Chem., 30, 1709-1711 (1987), Yoshida et ai., Prog. Biochem. Pharmacol., 22, 68-80 (1988), Shimazaki et al., Lipids, 26(12), 1175-1178 (1991). Dado o significativo número de respostas inflamatórias e imunes patológicas que são mediadas por PAF, permanece uma necessidade de identificar novos compostos e composições que inibam a actividade de PAF.

Relatou-se que as dicetopiperazinas exibem uma variedade de actividades biológicas. Veja-se, por exemplo, Patente US N° 4.289.759 (agentes imunoreguladores) , 4.331.595 (agentes imunoreguladores), 4.940.709 (antagonistas de PAF), 5.700.804 (inibidores de inibidor de activador de plasminogénio), 5.750.530 (inibidores de inibidor de activador de plasminogénio), 5.990.112 (inibidores de metaloproteases) , pedido PCT WO 97/36888 (inibidores de famesil-proteina transferase) e documento WO 3 99/40931 (tratamento de lesão do sistema nervoso central), pedido EP 43219 (agentes imunoreguladores) , pedido de patente japonesa 63 290868 (antagonistas de PAF), pedido de patente japonesa 31 76478 (agentes imunosuppressores), Shimazaki et al.r Chem. Pharm. Bunll., 35(8), 3527-3530 (1987) (antagonistas de PAF), Shimazaki et ai., J.Med. Chem., 30, 1709-1711 (1987) (antagonistas de PAF), Shimazaki et ai., Lipids, 26(12), 1175-1178 (1991) (antagonistas de PAF), Yoshida et ai., Prog. Biochem. Pharmacol., 22, 68-80 (1988) (antagonistas de PAF), Alvarez et ai., J. Antibiotics, 47(11), 1195-1201 (1994) (inibidores de calpaína) A dicetopiperazina composta de ácido aspártico e alanina (Ácido 3-Metil-2,5-Dicetopiperazina-6-Acético; DA-DKP) é conhecida. Estudos mostram que é formada como um resultado da degradação de albumina humana armazenada acima de 30°C. Chan et ai., Eur. J. Biochem., 227, 524-528 (1995). Não é conhecido que tenha actividade biológica. O documento FR-A-2.717.484 revela pseudo bis-péptidos em formas estereoisomérica e enantiomérica, incluindo misturas, sais, solvatos e seus bioprecursores. O documento US-A-4.331.595 revela compostos de 2,5-dicetopiperazina imunoreguladores que possuem a capacidade de regular o sistema imune de seres humanos e animais.

Chan B. et ai., Eur J Biochem Vol. 227, (1995), pp. 524-528 revelam um dipéptido cíclico formado pela degradação N-terminal.

Kaakkola S, et ai., Brain Research Bulletin Vol 32 (1993) pp. 667-672 revelam o efeito da ciclo(Asp-Phe) dicetopiperazina em níveis extracelulares estriatais de dopamina, ácido dihidroxifenilacético, ácido homovanílico e ácido 5-hidroxiindolacético usando microdiálise in vivo em ratos anestesiados. O documento JP 10-226615 revela composições que contêm dipéptido cíclico que podem melhorar a estabilidade de 4 medicinas, cosméticos, produtos alimentares e similares, particularmente a sua estabilidade a uma temperatura próxima da temperatura corporal por meio da mistura de um composto especifico a estes produtos.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO A invenção proporciona um método de tratamento de uma doença ou condição mediada por factor de activação de plaquetas. 0 método compreende administrar a um animal em necessidade do mesmo uma quantidade eficaz de uma dicetopiperazina da fórmula:

O

em que: R1 é -CH2COR3, ou -CH2CH2COR3; R2 é a cadeia lateral de um aminoácido seleccionado a partir do grupo que consiste em glicina, alanina, valina, leucina, isoleucina, serina, treonina, ácido aspártico, asparagina, ácido glutâmico, glutamina, lisina, hidroxilisina, histidina, arginina, fenilalanina, tirosina, triptofano, tiroxina, cisteína, metionina, norvalina e ornitina; R3 é -OH, -NH2, -0R4, -NHR4, ou -NR4R4; e cada R4 é independentemente um alquilo, arilo, alquilarilo, ou arilalquilo; ou um sal fisiologicamente aceitável do mesmo. A invenção proporciona ainda as dicetopiperazinas reivindicadas para utilização num método de inibição que compreende administrar a um animal em necessidade do mesmo uma quantidade eficaz de um composto de fórmula (1) ou um sal fisiologicamente aceitável do mesmo.

Além disso, a invenção proporciona as dicetopiperazinas reivindicadas para utilização num método 5 de inibição da produção, libertação ou ambas de interleucina 8 pelas células, que compreende as células com uma quantidade eficaz de um composto de fórmula (1) ou um sal fisiologicamente aceitável do mesmo. A invenção proporciona ainda as dicetopiperazinas reivindicadas para utilização num método de inibição dos efeitos de factor de activação de plaquetas (PAF), que compreende contatar o PAF com uma quantidade eficaz de um composto de fórmula (1) ou um sal fisiologicamente aceitável do mesmo.

Finalmente, a invenção proporciona uma composição farmacêutica. A composição compreende um veiculo farmaceuticamente aceitável e um composto de fórmula (1) ou um sal fisiologicamente aceitável do mesmo.

DESCRIÇÃO DETALHADA DAS FORMAS DE REALIZAÇÃO PRESENTEMENTE PREFERIDAS

Entende-se por "cadeia lateral" de um aminoácido essa porção do aminoácido unido á estrutura comum

I nh2-ch-cooh de todos os aminoácidos listados acima. Por exemplo, a cadeia lateral de glicina é -H, a cadeia lateral de alanina é -CH3, e a cadeia lateral de serina, é -CH2OH.

Entende-se por "alquilo" um alquilo de cadeia linear ou cadeia ramificada que contém 1-30 átomos de carbono, preferentemente 1-18 átomos de carbono. "Alquilo de cadeia curta" significa um alquilo de cadeia linear ou cadeia ramificada que contém 1-6 átomos de carbono.

Entende-se por "arilo" um grupo aromático que tem pelo menos um anel aromático (por exemplo, fenilo).

Entende-se por "alquilarilo" um alquilo de cadeia curta que tem um arilo que tem unido ao mesmo (por exemplo, -CH2C6H5 ou -CH3CH (C6H5) ch3) . 6

Entende-se por "arilalquilo" um arilo que tem um alquilo de cadeia curta que tem unido ao mesmo (por exemplo, -C6H4-CH3) . "Inibir" é usado no presente documento para significar reduzir (completamente ou parcialmente) ou prevenir. "Mediado" é usado no presente documento para significar causado por, exacerbado por, ou envolver. "Tratar" é usado no presente documento para significar reduzir (completamente ou parcialmente) os sintomas de uma doença ou condição, incluindo a cura da doença ou condição, ou prevenir a doença ou condição. A presente invenção baseia-se na descoberta de que ácido 3-metil-2,5-dicetopiperazina-6-acético (DA-DKP) inibe a actividade de PAF. Esta inibição parece ser devido à ligação de DA-DKP tanto a PAF como receptores de PAF. Acredita-se que a ligação de DA-DKP a PAF seja devido ao emparelhamento iónico do carboxilo de DA-DKP com N+ na porção colina de PAF. Assim, seria esperado que outras dicetopiperazinas que compreendem um ou mais carboxilos sejam inibidores de PAF eficazes. De facto, é possível que outros compostos não de dicetopiperazina que compreendem carboxilos, tais como ácido poli-aspártico ou ácido poli-glutâmico, também seriam inibidores de PAF eficazes. 0 mecanismo pelo qual DA-DKP se liga a receptores de PAF não é conhecido, mas há a hipótese de que seja devido à estrutura de anel de dicetopiperazina do DA-DKP e/ou a cadeia lateral R2 hidrofóbica de DA-DKP. Métodos de preparação de dicetopiperazinas são conhecidos na técnica, e estes métodos podem possivelmente ser utilizados para sintetizar as dicetopiperazinas de fórmula (1). Veja-se, por exemplo, Patente US N° 4.694.081 e 5.817.751; Smith et ai., Bioorg. Med. Chem. Letters, 8, 2369-2374 (1998). No entanto, dificuldades podem ser encontradas ou resultados insatisfatórios podem ser obtidos ao usar métodos da técnica anterior para sintetizar 7 dicetopiperazinas de fórmula (1) (veja-se pedido provisório co-pendente 60/223.075, depositado em 4 de Agosto de 2000). Consequentemente, é altamente preferível que as dicetopiperazinas de fórmula (1) sejam sintetizadas como foi descrito no pedido provisório co-pendente 60/223.075. A síntese descrita no pedido provisório 60/223.075 utiliza métodos de síntese de péptido de fase sólida ou fase de solução padrão que são bem conhecidos na técnica. Métodos de síntese de péptido de fase sólida são preferidos. A primeira etapa da síntese descrita no pedido provisório 60/223.075 compreende proporcionar um primeiro aminoácido. O primeiro aminoácido é seleccionado a partir do grupo que consiste em glicina, alanina, valina, leucina, isoleucina, serina, treonina, ácido aspártico, asparagina, ácido glutâmico, glutamina, lisina, hidroxilisina, histidina, arginina, fenilalanina, tirosina, triptofano, tiroxina, cisteína, metionina, norvalina e ornitina. Estes aminoácidos, que podem estar na sua forma D- ou L-enantiomérica, estão comercialmente disponíveis ou podem ser feitos pelos métodos bem conhecidos na técnica (veja-se, por exemplo, Williams, Synthesis Of Optically Active α-Aminoacids (Pergammon Press, 1989)). Prefere-se aminoácidos hidrofóbicos tais como glicina, alanina, valina, leucina, isoleucina, e fenilalanina. Particularmente preferido é alanina. O primeiro aminoácido é também protegido preferentemente com um ou mais grupos protectores para prevenir reacções colaterais indesejadas durante a síntese. Tais grupos protectores, e métodos para unir e remover os mesmos, são bem conhecidos na técnica. Veja-se, por exemplo, Green e Wuts, Protective Groups In Organic Chemistry (Wiley 1992) e Grant, Synthetic Peptides: A User's Guide (Freemen 1992). 0 primeiro aminoácido é reagido com um ácido aspártico derivado da seguinte fórmula NH2CH (CH2COOR5) COOH ou um ácido glutâmico derivado da seguinte fórmula NH2CH (CH2CH2COOR5) COOH, em que R5 é um alquilo de cadeia curta ou alquilarilo. Preferentemente R5 é benzilo (-CH2C6H5; Bz). Descobriu-se que o grupo benzilo não somente protege os carboxilos de cadeia lateral destes aminoácidos, mas também facilitam a ciclização do dipéptido. Além disso, o benzilo pode ser retirado do dipéptido sob condições neutras o que previne a racemização do centro quiral (carbonos que possuem os grupos R1 e R2).

Os derivados de ácido aspártico e glutâmico NH2CH(CH2COOR5) COOH e NH2CH (CH2CH2COOR5) COOH estão comercialmente disponíveis ou podem ser preparados por métodos conhecidos (veja-se, por exemplo, Bodansky e Bodansky, The Practice of Peptide Synthesis, páginas 63-66 (2a ed., Springer-Verlag, 1994). 0 grupo amino ou um grupo carboxilo dos derivados de ácido aspártico e glutâmico podem opcionalmente ser bloqueados com um grupo protector padrão (veja-se acima) com a finalidade de prevenir reacções colaterais indesejadas.

Como foi indicado acima, a síntese das dicetopiperazinas preferentemente utiliza métodos de síntese de péptido de fase sólida. 0 primeiro aminoácido ou o derivado de ácido aspártico ou glutâmico é unido a um suporte sólido através do seu um carboxilo para a síntese em fase sólida. 0 suporte sólido pode ser qualquer suporte sólido que é compatível com síntese de péptido, tais como aqueles descritos em Grant e Atherton, Solid Phase Peptide Synthesis: A Practical Approach (IRL Press 1989). Suportes sólidos adequados estão disponíveis comercialmente ou podem ser preparados por métodos padrão. Veja-se o pedido PCT WO 96/00391. O suporte sólido pode conter moléculas ligantes ou espaçadoras que ancoram o primeiro aminoácido ou o derivado de ácido aspártico ou ácido glutâmico à superfície 9 do suporte. Uma variedade de ligantes com diferentes propriedades é bem conhecida na técnica. Veja-se, por exemplo, Grant, Synthetic Peptides: A User's Guide (Freemen 1992) e pedido PCT WO 96/00391. O ligante incluirá tipicamente um grupo funcional ao qual o primeiro aminoácido ou o derivado de ácido aspártico ou ácido glutâmico é unido.

Preferentemente, o primeiro aminoácido é unido ao suporte sólido e, antes do acoplamento o derivado de ácido aspártico ou ácido glutâmico ao primeiro aminoácido, o grupo protector, se estiver presente, no um grupo amino do primeiro aminoácido ligado é retirado. A remoção do grupo protector de quaisquer grupos amino de cadeia lateral deveria ser evitada, no entanto, assim condições precisam ser escolhidas para desproteger o um grupo amino sem desproteger os grupos amino de cadeia lateral. Condições de desprotecção adequadas são conhecidas na técnica. Por exemplo, a remoção de 9-fluorenilmetiloxicarbonilo pode ser realizada com 20 % a 55 % de uma base amina secundária, tal como piperidina, num solvente polar aprótico, tal como dimetilformamida, cloreto de metileno ou N-metilpirrolidina. Diisopropil silano é preferentemente adicionado para prevenir transesterificação durante a desprotecção, que pode ser pronunciada em preparações a larga escala. A reacção entre o primeiro aminoácido e o derivado de ácido aspártico ou glutâmico ocorre sob condições eficazes para produzir uma ligação de péptido de modo que um dipéptido é formado. Estas condições são bem conhecidas na técnica. Por exemplo, um catalisador de acoplamento (tal como 2-(lH-benzotriazol-l-il)-1,2,3,3-tetrametiluróniotetrafluoroborato, benzotriazol-l-il-oxitris(dimetilamino)fosfónio hexafluorofosfato, 2-(lH-benzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametiluróniohexafosfato, 1-hidroxibenzotriazol, diisopropilamina, 10 diciclohexilcarbodiimida,) pode ser usado para efectuar a formação do dipéptido. Tipicamente, um excesso do catalisador de acoplamento é usado, com quantidades que variam desde 2 até 10 equivalentes ou mais. Com frequência o grau de excesso é determinado com respeito à reactividade das espécies químicas a serem acopladas. Solventes polares apróticos (tais como dimetilformamida, N-metilpirollidina, cloreto de metileno e dimetilsulfóxido) são preferidos. Os tempo de reacção podem variar desde meia hora até durante a noite, e as temperaturas podem variar desde temperatura ambiente até o refluxo.

Em seguida, se o dipéptido for ligado a um suporte sólido, é retirado do suporte sólido usando procedimentos padrão bem conhecidos na técnica. As condições eficazes para retirar o dipéptido do suporte sólido dependerá do suporte sólido e ligante escolhidos. Geralmente, o péptido será retirado pela hidrólise do ácido usando um ácido forte, tal como ácido trifluoroacético. O dipéptido é então ciclizado para formar uma dicetopiperazina; esta dicetopiperazina terá o carboxilo de cadeia lateral do derivado de ácido aspártico ou ácido glutâmico ainda na forma de éster. A ciclização é conseguida por meio do aquecimento do dipéptido sob condições neutras. Tipicamente, o dipéptido será aquecido a desde aproximadamente 80°C até aproximadamente 180°C, preferentemente a aproximadamente 120°C. O solvente será um solvente neutro. Por exemplo, o solvente pode compreender um álcool (tal como butanol, metanol, etanol, e álcoois de cadeia mais longa, mas não fenol) e um co-solvente azeotrópico (tal como tolueno, benzeno, ou xileno). Preferentemente, o álcool é butan-2-ol, e o co-solvente azeotrópico é tolueno. O aquecimento é continuado até a reacção estar completa, e tais tempos podem ser determinados empiricamente. Tipicamente, o dipéptido será ciclizado por meio do refluxo do mesmo durante 11 aproximadamente 8-24 horas, preferentemente aproximadamente 18 horas.

Finalmente, o grupo R5 é retirado da dicetopiperazina pelos métodos bem conhecidos na técnica para remover grupos protectores (veja-se acima). Quando o grupo R5 é benzilo, é preferentemente retirado da dicetopiperazina por meio da hidrogenação usando um catalisador de paládio em carbono (Pd/C). A utilização de ácidos fortes (ácidos minerais, tais como ácidos sulfúrico ou clorídrico), bases fortes (bases alcalinas, tais como hidróxido de potássio ou hidróxido de sódio), e agentes redutores fortes (por exemplo, hidreto de alumínio e lítio) deveriam ser evitados, com a finalidade de manter a quiralidade do composto final.

Uma vez que o grupo R5 tenha sido retirado, o ácido livre pode ser derivatizado, se for desejado, para formar derivados padrão, tais como amidas e ésteres. Métodos que podem ser usados para converter o ácido livre a uma amida ou éster são bem conhecidos na técnica.

Os sais fisiologicamente aceitáveis das dicetopiperazinas de fórmula (1) podem também ser usados na prática da invenção. Sais fisiologicamente aceitáveis incluem sais não tóxicos convencionais, tais como sais derivados de ácidos inorgânicos (tais como clorídrico, bromídrico, sulfúrico, fosfórico, nítrico, e similares), ácidos orgânico (tais como ácido acético, propiónico, succínico, glicólico, esteárico, láctico, málico, tartárico, cítrico, glutâmico, aspártico, benzóico, salicílico, oxálico, ascórbico, e similares) ou bases (tais como o hidróxido, carbonato ou bicarbonato de um catião de metal farmaceuticamente aceitável ou catiões orgânicos derivados de N,N-dibenziletilenodiamina, D-glucosamina, ou etilenodiamina) . Os sais são preparados de uma maneira convencional, por exemplo, por meio da neutralização da forma de base livre do composto com um ácido. 12

Uma dicetopiperazina de fórmula (1), ou um sal fisiologicamente aceitável do mesmo, pode ser usado para tratar uma doença ou condição mediada por PAF. Para fazer isso, uma dicetopiperazina de fórmula (1), ou um sal fisiologicamente aceitável do mesmo, é administrado a um animal em necessidade de tratamento. Preferentemente, o animal é um mamífero, tal como um coelho, cabra, cão, gato, cavalo ou ser humano. Formas farmacêuticas, modos de administração e quantidades de dosagem eficazes para os vários compostos da invenção podem ser determinados empiricamente, e fazer tais determinações está dentro da habilidade do perito na especialidade. É entendido por aqueles peritos na especialidade que a quantidade de dosagem variará com o composto particular utilizado, a doença ou condição a ser tratada, a gravidade da doença ou condição, a(s) via(s) de administração, a taxa de excreção do composto, a duração do tratamento, a identidade de quaisquer outros fármacos a serem administrados ao animal, a idade, tamanho e espécie do animal, e factores similares conhecidos nas técnicas médica e veterinária. Em geral, uma dose diária adequada de um composto da presente invenção será essa quantidade do composto que é a mais baixa dose eficaz para produzir um efeito terapêutico. No entanto, a dosagem diária será determinada por um médico ou veterinário atendente dentro do âmbito do juízo médico sensato. Se for desejado, a dose diária eficaz pode ser administrada como duas, três, quatro, cinco, seis ou mais sub-doses administradas separadamente em intervalos apropriados ao longo do dia. A administração do composto deveria ser continuada até uma resposta aceitável ser alcançada.

Os compostos da presente invenção (isto é, dicetopiperazinas de fórmula (1) e sais fisiologicamente aceitáveis do mesmo) podem ser administrados a um paciente animal para terapêutica por qualquer via adequada de 13 administração, incluindo oralmente, nasalmente, rectalmente, vaginalmente, parentericamente (por exemplo, intravenosamente, intraspinalmente, intraperitonealmente, subcutaneamente, ou intramuscularmente), intracisternalmente, transdermicamente, intracranialmente, intracerebralmente, e topicamente (incluindo bucalmente e sublingualmente). As vias de administração preferidas são oralmente e intravenosamente.

Enquanto é possivel para um composto da presente invenção ser administrado em separado, é preferível administrar o composto como uma formulação farmacêutica (composição). As composições farmacêuticas da invenção compreendem um composto ou compostos da invenção como um ingrediente activo em mistura com um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis e, opcionalmente, com um ou mais outros compostos, fármacos ou outros materiais. Cada veículo precisa ser "aceitável" no sentido de ser compatível com os outros ingredientes da formulação e não prejudicial ao animal. Os veículos farmaceuticamente aceitáveis são bem conhecidos na técnica. Independente da via de administração seleccionada, os compostos da presente invenção são formulados em formas farmacêuticas farmaceuticamente aceitáveis por métodos convencionais conhecidos aos peritos na especialidade. Veja-se, por exemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences.

As formulações da invenção adequadas para a administração oral podem ser na forma de cápsulas, hóstias, pílulas, comprimidos, pós, grânulos ou como uma solução ou uma suspensão num líquido aquoso ou não aquoso, ou emulsões líquidas óleo-em-água ou água-em-óleo, ou como um elixir ou xarope, ou como pastilhas (usando uma base inerte, tal como gelatina e glicerina, ou sucrose e goma arábica), e similares, cada uma das quais contém uma quantidade predeterminada de um composto ou compostos da presente invenção como um ingrediente activo. Um composto ou 14 compostos da presente invenção podem também ser administrados como bolus, electuário ou pasta.

Em formas farmacêuticas sólidas da invenção para a administração oral (cápsulas, comprimidos, pílulas, drageias, pós, grânulos e similares), o ingrediente activo é misturado com um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis, tais como citrato de sódio ou difosfato de cálcio, e/ou quaisquer dos seguintes: (1) cargas ou extensores, tais como amidos, lactose, sucrose, glucose, manitol, e/ou ácido silícico; (2) aglutinantes, tais como, por exemplo, carboximetilcelulose, alginatos, gelatina, polivinil pirrolidona, sucrose e/ou goma arábica; (3) humectantes, tais como glicerol; (4) agentes desintegrantes, tais como agar- agar, carbonato de cálcio, amido de batata ou tapioca, ácido algínico, certos silicatos, e carbonato de sódio; (5) agentes retardantes de solução, tais como parafina; (6) aceleradores de absorção, tais como compostos de amónio quaternário; (7) agentes humectantes, tais como, por exemplo, álcool cetílico e monoestearato de glicerol; (8) absorventes, tais como caulim e argila bentonita; (9) lubrificantes, tais como talco, estearato de cálcio, estearato de magnésio, polietileno glicóis sólidos, lauril sulfato de sódio, e misturas dos mesmos; e (10) agentes colorantes. No caso de cápsulas, comprimidos e pílulas, as composições farmacêuticas podem também compreender agentes tamponantes. Composições sólidas de um tipo similar podem ser utilizadas como cargas em cápsulas gelatina preenchidas moles e duras usando tais excipientes como lactose ou açúcares do leite, bem como polietileno glicóis de alto peso molecular e similares.

Um comprimido pode ser feito pela compressão ou moldagem opcionalmente com um ou mais ingredientes acessórios. Os comprimidos comprimidos podem ser preparados usando aglutinante (por exemplo, gelatina ou 15 hidroxipropilmetil celulose), lubrificante, diluente inerte, conservante, desintegrante (por exemplo, glicolato de amido de sódio ou carboximetil celulose de sódio reticulado), agente dispersante ou tensioactivo. Comprimidos moldados podem ser feitos por meio da moldagem numa máquina adequada uma mistura do composto em pó humidificado com um diluente líquido inerte.

Os comprimidos, e outras formas farmacêuticas sólidas das composições farmacêuticas da presente invenção, tais como drageias, cápsulas, pílulas e grânulos, podem opcionalmente ser pontuadas ou preparadas com revestimentos e cascas, tais como revestimentos entéricos e outros revestimentos bem conhecidos na especialidade de formulação farmacêutica. Podem também ser formulados de modo a proporcionar libertação lenta ou controlada do ingrediente activo no mesmo usando, por exemplo, hidroxipropilmetil celulose em proporções variadas para proporcionar o perfil de libertação desejado, outras matrizes poliméricas, lipossomas e/ou microesferas. Podem ser esterilizados por, por exemplo, filtração através de um filtro de retenção de bactérias. Estas composições podem também opcionalmente conter agentes opacificantes e podem ser de uma composição que libertam o ingrediente activo somente, ou preferencialmente, numa certa porção do trato gastrointestinal, opcionalmente, de uma maneira retardada. Exemplos de composições de incrustação que podem ser usados incluem substâncias poliméricas e ceras. 0 ingrediente activo pode também estar em forma microencapsulada.

Formas farmacêuticas liquidas para a administração oral dos compostos da invenção incluem emulsões, microemulsões, soluções, suspensões, xaropes e elixires farmaceuticamente aceitáveis. Além do ingrediente activo, as formas farmacêuticas liquidas podem conter diluentes inertes comummente usados na técnica, tais como, por exemplo, água ou outros solventes, agentes solubilizantes e 16 emulsificantes, tais como álcool etílico, álcool isopropílico, carbonato de etilo, acetato de etilo, álcool benzílico, benzoato de benzilo, propileno glicol, 1,3-butileno glicol, óleos (em particular, óleos de semente de algodão, amendoim, milho, germe, oliva, castor e sésamo), glicerol, álcool tetrahidrofurílico, polietileno glicóis e ésteres de ácido gordo de sorbitan, e misturas dos mesmos.

Além de diluentes inertes, as composições orais podem também incluir adjuvantes tais como agentes humectantes, emulsificantes e agentes de suspensão, adoçantes, aromatizantes, corantes, perfume e agentes conservantes.

Suspensões, além dos compostos activos, podem conter agentes de suspensão como, por exemplo, álcoois isostearílicos etoxilados, polioxietileno sorbitol e ésteres de sorbitan, celulose microcristalina, metahidróxido de alumínio, bentonita, agar-agar e tragacanto, e misturas dos mesmos.

Formulações das composições farmacêuticas da invenção para administração rectal ou vaginal podem ser apresentadas como um supositório, que pode ser preparado por meio da mistura de um ou mais compostos da invenção com um ou mais adequada excipientes não irritantes ou veículos que compreendem, por exemplo, manteiga de cacau, polietileno glicol, uma cera para supositório ou salicilato, e que é sólido a temperatura ambiente, mas líquido a temperatura corporal e, portanto, derreterá no recto ou cavidade vaginal e libertará o composto activo. As formulações da presente invenção que são adequadas para administração vaginal também incluem pessários, tampões, cremes, géis, pastas, espumas ou formulações em spray que contêm tais veículos como são conhecidos na técnica como sendo apropriados.

Formas farmacêuticas para administração tópica ou transdérmica de compostos desta invenção incluem pós, sprays, pomadas, pastas, cremes, loções, géis, soluções, 17 pensos transdérmicos, gotas e inalantes. 0 ingrediente activo pode ser misturado sob condições estéreis com um veiculo farmaceuticamente aceitável, e com quaisquer tampões, ou propelentes que podem ser requeridos.

As pomadas, pastas, cremes e géis podem conter, além de um ingrediente activo, excipientes, tais como gorduras animal e vegetal, óleos, ceras, parafinas, amido, tragacanto, derivados de celulose, polietileno glicóis, silicones, bentonitas, ácido silicico, talco e óxido de zinco, ou misturas dos mesmos. Pós e sprays podem conter, além de um ingrediente activo, excipientes tais como lactose, talco, ácido silicico, hidróxido de alumínio, silicatos de cálcio e pó de poliamida ou misturas destas substâncias. Sprays podem adicionalmente conter propelentes de costume tais como clorofluorohidrocarbonetos e hidrocarbonetos não substituídos voláteis, tais como butano e propano.

Pensos transdérmicos têm a vantagem adicional de proporcionar administração controlada de compostos da invenção ao corpo. Tais formas farmacêuticas podem ser feitas por meio da dissolução, dispersão ou de outro modo de incorporação de um ou mais compostos da invenção num meio apropriado, tal como um material de matriz elastomérica. Melhoradores de absorção podem também ser usados para aumentar o fluxo do composto através da pele. A taxa de tal fluxo pode ser controlada por meio da provisão de uma membrana de controlo de taxa ou dispersão do composto numa matriz de polímero ou gel.

As formulações farmacêuticas incluem aquelas adequadas para a administração por meio da inalação ou insuflação ou para administração nasal ou intra-ocular. Para a administração ao tracto respiratório superior (nasal) ou inferior por meio da inalação, os compostos da invenção são de forma conveniente administrados desde um insuflador, nebulizador ou um pacote pressurizado ou outros meios 18 convenientes de administração de um spray aerossol. Pacotes pressurizados podem compreender um propelente adequado tal como diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, dióxido de carbono, ou outro gás adequado. No caso de um aerossol pressurizado, a forma unitária de dosagem pode ser determinada pela provisão de uma válvula para administrar uma quantidade medida.

Alternativamente, para a administração por meio da inalação ou insuflação, a composição pode tomar a forma de um pó seco, por exemplo, uma mistura em pó de um ou mais compostos da invenção e uma base em pó adequada, tal como lactose ou amido. A composição em pó pode ser apresentada em forma farmacêutica unitária em, por exemplo, cápsulas ou cartuchos, ou, por exemplo, gelatina ou pacotes blister dos quais o pó pode ser administrado com a ajuda de um inalador, insuflador ou um inalador de dose medida.

Para administração intranasal, os compostos da invenção podem ser administrados por meio de gotas nasais ou um spray liquido, tal como por meio de um atomizador de garrafa de plástico ou inalador de dose medida. Típico de atomizadores são o Mistometer (Wintrop) e Medihaler (Riker) .

Gotas, tais como gotas oculares ou gotas nasais, podem ser formuladas com uma base aquosa ou não aquosa que compreende também um ou mais agentes de dispersão, agentes solubilizantes ou agentes de suspensão. Sprays líquidos são de forma conveniente administrados desde pacotes pressurizados. As gotas podem ser administradas por meio de uma garrafa tampada com tampa de conta-gotas ocular simples ou por meio de uma garrafa de plástico adaptada para administrar conteúdos líquidos gota a gota por meio de um fecho especialmente moldado.

As composições farmacêuticas desta invenção adequadas para administrações parentéricas compreendem um ou mais compostos da invenção em combinação com uma ou mais 19 soluções aquosas ou não aquosas isotónicas estéreis, dispersões, suspensões ou emulsões farmaceuticamente aceitáveis, ou pós estéreis que podem ser reconstituidos em soluções ou dispersões injectáveis estéreis justo antes da utilização, que podem conter antioxidantes, tampões, solutos que tornam a formulação isotónica com o sangue do receptor pretendido ou agentes de suspensão ou espessantes.

Exemplos de veículos aquosos e não aquosos adequados que podem ser utilizados nas composições farmacêuticas da invenção incluem água, etanol, polióis (tal como glicerol, propileno glicol, polietileno glicol, e similares), e misturas adequadas dos mesmos, óleos vegetais, tais como azeite de oliva, e ésteres orgânicos injectáveis, tais como oleato de etilo. A fluidez apropriada pode ser mantida, por exemplo, pela utilização de materiais de revestimento, tais como lecitina, pela manutenção do tamanho de partícula requerido no caso de dispersões, e pela utilização de tensioactivos.

Estas composições podem também conter adjuvantes tais como agentes humectantes, agentes emulsificantes e agentes de dispersão. Pode também ser desejável incluir agentes isotónicos, tais como açúcares, cloreto de sódio, e similares nas composições. Além disso, a absorção prolongada da forma farmacêutica injectável pode ser ocasionada pela inclusão de agentes que retardam a absorção tal como monoestearato de alumínio e gelatina.

Em alguns casos, com a finalidade de prolongar o efeito de um fármaco, é desejável desacelerar a absorção do fármaco da injecção subcutânea ou intramuscular. Isto pode ser conseguido pela utilização de uma suspensão líquida de material cristalino ou amorfo que tem pobre solubilidade em água. A taxa de absorção do fármaco então depende da sua taxa de dissolução que, por sua vez, pode depender da forma cristalina e tamanho do cristal. Alternativamente, a absorção retardada de um fármaco parentericamente 20 administrado é conseguida por meio da dissolução ou suspensão do fármaco num veiculo oleoso.

Formas depot injectáveis são feitas por meio da formação de matrizes de microencápsulas do fármaco em polímeros biodegradáveis tais como polilactida-poliglicolida. Dependendo da razão de fármaco a polimerizar, e a natureza do polímero particular utilizado, a taxa de libertação de fármaco pode ser controlada. Exemplos de outros polímeros biodegradáveis incluem poli(ortoésteres) e poli(anidridos). Formulações depot injectáveis são também preparadas pelo aprisionamento do fármaco em lipossomas ou microemulsões que são compatíveis com o tecido do corpo. Os materiais injectáveis podem ser esterilizados, por exemplo, pela filtração através de um filtro de retenção bacteriano.

As formulações podem ser apresentadas em recipientes selados de dose unitária ou dose múltipla, por exemplo, ampolas e viais, e podem ser armazenadas numa condição liofilizada que requer somente a adição do veículo líquido estéril, por exemplo, água para injecção, imediatamente antes da utilização. Soluções e suspensões de injecção extemporânea podem ser preparadas a partir de pós estéreis, grânulos e comprimidos do tipo descrito acima.

Como foi indicado acima, relatou-se que PAF desempenha um papel numa variedade de doenças e condições. Estes doenças e condições incluem síndrome de dificuldade respiratória aguda, alergias, artrite, asma, doenças auto-imune, bronquite, doença cardiovascular, doença de Crohn, fibrose cística, enfisema, ulceração gastrointestinal, inflamação, doença inflamatória intestinal, isquemia, síndrome de disfunção multiorgânica, enfarte do miocárdio, doenças neoplásicas, inflamação oftálmica, dor, psoríase, respiratória infecções, sepse, choque, e colite ulcerativa. PAF também medeia agregação de plaquetas. As dicetopiperazinas de fórmula (1) podem ser usadas para 21 tratar quaisquer destas doenças e condições e quaisquer outras doenças e condições em que PAF desempenha um papel. Os compostos da invenção podem ser dados em combinação com outras terapêuticas padrao para uma dada doença ou condição. Relatou-se que PAF induz a produção e secreção de interleucina 8 (IL-8) (veja-se a discussão no Exemplo 3 a seguir). IL-8 é uma citocina pró-inflamatória que se relatou que desempenha um papel na patogénese de um grande número de doenças e condições, incluindo sindrome de dificuldade respiratória aguda, alergias, artrite, asma, doenças auto-imune, bronquite, cancro, doença de Crohn, fibrose cistica, enfisema, endocardite, gastrite, doença inflamatória intestinal, reperfusão de isquemia, sindrome de disfunção multiorgânica, nefrite, pancreatite, respiratória virai infecções, sepse, choque, colite

ulcerativa, e outros distúrbios inflamatórios. Descobriu-se que as dicetopiperazinas de fórmula (1) inibem a produção induzida por PAF e/ou libertação de IL-8. Os dados preliminares indicam que também inibem a produção e/ou libertação de IL-8 na ausência de PAF. Em particular, descobriu-se que a produção induzida por lipopolisacárido (LPS) e/ou libertação de IL-8 por células epiteliais brônquicas humanas normais é inibida (dados não mostrados). Assim, as dicetopiperazinas da invenção parecem actuar por dois diferentes mecanismos e podem ser usadas para tratar doenças ou condições mediadas por IL-8, bem como PAF. EXEMPLOS

Exemplo 1: Preparação_de_Ácido_3-Metil-2,5-

Dicetopiperazina-6-Acético (5) A resina de Wang que tem alanina protegida por 9-fluorenilmetiloxicarbonilo (Ala-Fmoc) unida à mesma (3 gramas (g) , 2,52 mmol, 1 equivalente, NovaBiochem) foi transferida a um balão limpo de fundo redondo de 100 ml, e uma solução de piperidina (12 ml) em dimetilformamida (DMF; 22 18 ml) foi adicionado à resina no balão. A solução foi redemoinhada durante 1 hora, e a resina foi isolada num funil de vidro sinterizado. A resina foi lavada com DMF (3 x 30 ml) seguido por diclorometano (DCM; 3 x 30 ml) e deixada secar sob vácuo durante 5 minutos. A resina parcialmente seca foi transferida num balão limpo de fundo redondo de 100 ml, e DMF (10 ml) foi adicionado. Então, Boc-Asp(OBz)OH (3,25 g, 10,07 mmol, 4 equivalentes) foi adicionado, seguido por diisopropilamina (2,83 ml, 2,04 g, 20,19 mmol, 8 equivalentes) e 2-(lH-benzotriazol-l-il)-l,2,3,3- tetrametiluróniotetrafluoroborato (TBTU; 3,24 g, 10,09 mmol, 4 equivalentes, Acros). A suspensão foi deixada reagir sob condições anaeróbicas por mais de 12 horas. No final deste tempo, a resina mostrou um teste de ninidrina negativo, o que indica o término da reacção de acoplamento. A resina foi filtrada a vácuo e lavada com DMF (3 x 30 ml) seguido por DCM (3 x 30 ml) . A resina foi deixada secar a temperatura ambiente sob vácuo durante 10 minutos antes de transferir-se num balão limpo de fundo redondo de 100 ml. Ácido trifluoroacético (TFA; 16,5 ml) foi adicionado à resina seca e, após a sua adição, a resina tornou-se vermelha. Após redemoinhar a resina durante uns 30 minutos adicionais, TFA foi retirado por filtração, e a resina foi lavada com DCM (4 x 20 ml) . Os componentes da camada orgânica foram agrupados, e tolueno (20 ml) foi adicionado. Os materiais orgânicos combinados foram evaporados à secura sob vácuo. Traços de TFA foram retirados pela adição de tolueno e evaporação. O processo foi repetido até todo o TFA ter sido retirado. Este procedimento resultou num produto como um óleo amarelo pálido cujos dados de RMN e de espectrometria de massa eram consistentes com o éster benzílico de dipéptido esperado cuja estrutura (3) é mostrada a seguir. 23 0 dipéptido 3 foi dissolvido em butan-2-ol (40 ml) e diluído com tolueno (60 ml). Permitiu-se o refluxo desta solução durante 24 horas. No final deste período, a solução foi deixada arrefecer até temperatura ambiente. Foi então concentrada num evaporador giratório, ao mesmo tempo em que se mantinha a temperatura a 50°C. Após a concentração, um sólido branco precipitou, e o precipitado foi retirado pela filtração. O precipitado foi lavado com tolueno (10 ml) e seco. O resíduo (0,650 g) deu um teste de ninidrina negativo. Foi, então, cristalizado a partir de metanol quente. Os resultados analíticos e espectroscópicos para o produto cristalizado confirmaram a sua estrutura como sendo o composto desejado - éster benzílico de dicetopiperazina Asp-Ala mostrado a seguir (4).

Este composto (400 mg) foi dissolvido em metanol (250 ml), e catalisador de paládio em carbono (Pd/C; 10 %, 0,4 g) foi adicionado cuidadosamente. 0 balão foi purgado com hidrogénio e mantido a uma pressão de hidrogénio positiva. A solução foi mantida nesta atmosfera durante pelo menos 4 horas. O catalisador foi retirado com um auxiliar de filtração (celite) e lavado com metanol. As lavagens com metanol foram combinadas, e o solvente foi retirado (rendimento 200 mg). A análise de espectrometria de massa e RMN mostrou que o ácido livre Asp-Ala dicetopiperazina (ácido 3-metil-2,5- dicetopiperazina-6-acético, 5) foi formado sem qualquer contaminação cruzada. 24 Ο h3c

Ο h3c

"A h2coobz

(3) o h3c

COOH o (5)

Exemplo 2; Preparaçao De Asp-Ala Dicetopiperazina Amida (6)

O

O A uma solução de ácido 3-metil-2,5- dicetopiperazina-6-acético (0,151 g, 0,81 mmol, 1 equivalente, preparação descrita no Exemplo 1, 5) em DMF (2,5 ml) foi adicionado carbonil diimidazol (0,26 g, 1,60 mmol, 2 equivalentes, Aldich). Após a agitação a temperatura ambiente durante 1 hora, acetato de amónio sólido (0,63 g, 8,17 mmol, 10 equivalentes, Aldrich) foi adicionado. A agitação a temperatura ambiente continuou durante a noite, em cujo tempo a reacção foi dividida em compartimentos entre água (20 ml) e acetato de etilo (10 ml) . A camada aquosa foi lavada com uma segunda alíquota de acetato de etilo (10 ml) e então evaporada à secura sob pressão reduzida (61°C).

Traços de DMF foram retirados pelas co-evaporações posteriores com água e, a seguir, tolueno para dar um sólido branco (362 mg) . Isto foi incorporado num volume mínimo de metanol em DCM (20:80 v/v). O solvente eluído foi fraccionado, e as fracções apropriadas foram agrupadas e 25 evaporadas sob pressão reduzida (40°C) para dar um sólido branco. 0 produto foi então recristalizado a partir de metanol para dar o produto desejado (0,116 g, 76 % de rendimento, 6).

Exemplo 3: Inibição de Libertação de IL-8

Interleucina 8 (IL-8) é uma citocina pró-inflamatória e um potente quimioatractivo e activador de neutrófilos. Estudos mostram que também que é um quimioatractivo e activador de linfócitos T e eosinófilos. IL-8 é produzida pelas células imunes (incluindo linfócitos, neutrófilos, monócitos e macrófagos), fibroblastos e células epiteliais. Os estudos indicam um importante papel para IL-8 na patogénese de infecções respiratórias virais, asma, bronquite, enfisema, fibrose cística, síndrome de dificuldade respiratória aguda, sepse, síndrome de disfunção multiorgânica, e outros distúrbios inflamatórios.

Estudos indicam que o PAF induz a transcrição e secreção de IL-8 em fibroblastos de pulmão humano. Roth et ai., J. Exp. Med., 184, 191-201 (1996). Também se mostrou que PAF aumenta a produção de IL-8 por células mononucleares humanas em resposta a lipopolissacárido (LPS), mas que PAF em separado somente induz fracamente a produção de IL-8 por estas células. Arbabi et al., Archives Surgery, 134, 1348-1353 (1999). Estes autores propõem a hipótese de que PAF "inicia" o sistema imune inato a produzir quantidades aumentadas de mediadores pró-inflamatórios em resposta a um segundo estímulo inflamatório que de outro modo seria insuficiente para desencadear uma resposta inflamatória. Especulam adicionalmente que se esta iniciação for generalizada, pode tornar-se prejudicial. Em tal caso, o segundo estímulo, que seria considerado menor pelo sistema imune inato não iniciado, induziria uma libertação agressiva, difusa, e não focalizada de mediadores inflamatórios, o que leva possivelmente à síndrome de disfunção multiorgânica. 26 Células epiteliais brônquicas humanas normais NHBE 6122 (Clonetics, San Diego, CA) foram adicionadas a uma placa de cultura de tecido de 24 poços (Falcon, agora BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ) a 20.000 células/poço e deixadas aderirem durante a noite (16-18 horas) em BEGM (meio de crescimento de células epiteliais brônquicas; Clonetics) que contém epinefrina (meio completo) a 37 °C e 5 % de C02. Após a adesão, as células foram lavadas duas vezes com meio BEGM sem epinefrina. Foram então incubadas em meio completo ou em meio completo que contém 20 μΜ de Ácido 3-Metil-2,5-Dicetopiperazina-6-Acético (DA-DKP; preparação descrita no Exemplo 1, 5; solução mãe feita em solução salina tamponada com HEPES (HBSS; Clonetics) a 4 mM durante 20 minutos a 37 °C e 5 % de C02. Factor de activação de plaquetas (PAF; Sigma, St. Louis, MO) dissolvido em dimetilsulfóxido (DMSO; grau de cultura de tecidos; Sigma, St. Louis, MO) foi então adicionado a uma concentração final de 100 nM ou 500 nM, e as células foram incubadas durante umas 6 horas adicionais a 37 °C e 5 % de C02, o meio que contém DMSO e HBSS foi usado como um controlo. A concentração de IL-8 em sobrenadantes de células foi determinada por um ELISA usando anticorpos de par correspondido de IL-8 humana (Endogen, Cambridge, MA) . O ELISA foi realizado usando um kit de ELISA de Endogen, Cambridge, MA de acordo com as instruções do fabricante com as seguintes excepções: (1) anticorpo de revestimento a 1 pg/ml; (2) anticorpo de detecção 30 ng/ml; StrepAvidin HRP diluída 1:32.000.

Os resultados são apresentados nos Quadros 1-3 a seguir. Como pode ser visto, a secreção de IL-8 induzida por PAF em células NHBE 6122 foi inibida pela pré-incubação das células com DA-DKP. Há a hipótese de que DA-DKP se ligue a PAF, o receptor de PAF, ou ambos, bloqueando-se o sinal para produzir (libertar) IL-8. 27 QUADRO 1 IL-8 (pg/ml). SEM DMSO 729,88 8, 46 HBSS 809,62 198,23 DA-DKP (20 μΜ) 803,11 67, 18 PAF (100 nM) 1094,68 103,21 PAF + D A-DKP 714,91 88,95 28 QUADRO 2 IL-8 (pg/ml) SEM DMSO 602,99 73,48 HBSS 581,86 6 4,36 DA-DKP (20 μΜ) 837,84 100,73 PAF (500 nM) 887,87 112,56 PAF + DA-QKP 542,5 37, 17 QUADRO 31 IL-8 (pg/ml) SEM DMSO 209,79 13,24 HBSS 233,08 5, 79 DA-DKP (20 μΜ) 184,86 34, 73 PAF (100 nM) 355,36 11,28 PAF + DA-DKP 201,93 20,64 1

Para o Quadro 3, as células foram divididas para dar 5.000 células/poço quatro dias antes da experiência e foram deixadas crescer até 70 % de confluência. 29

DOCUMENTOS REFERIDOS NA DESCRIÇÃO

Esta lista de documentos referidos pelo autor da presente solicitação de patente foi elaborada apenas para informação do leitor. Não é parte integrante do documento de patente europeia. Não obstante o cuidado na sua elaboração, o IEP não assume qualquer responsabilidade por eventuais erros ou omissões.

Documentos de patente referidos na descrição WO 9404537 A [0002] [0003] [0004] WO 9600212 A [0004] WO 9518610 A [0004] WO 9949865 A [0004] US 4940709 A [0004] [0005] US 5358938 A [0004] US 5434151 A [0004] US 5463083 A [0004] US 5648486 A [0004] US 5741809 A [0004] US 5792776 A [0004] US 5780503 A [0004] US 5856323 A [0004] • JP 63290868 A [0004] • US 4289759 A [0005] • US 4331595 A [0005] [0008] • US 5700804 A [0005] • US 5750530 A [0005] • US 5990112 A [0005] • WO 9736888 A [0005] • WO 9940931 A [0005] • EP 43219 A [0005] • US 63290868 B [0005] • US 3176478 A [0005] • FR 2717484 A [0007] • JP 10226615 A [0011] 30 • US 4694081 A [0025] • US 5817751 A [0025] • US 60223075 B [0025] [0026] [0027] • WO 9600391 A [0031]

Literatura não relacionada com patentes referida na descrição • SHIMAZAKI et al. Chem. Pharm. Buli., 1987, vol. 35 (8), 3527-3530 [0004] SHIMAZAKI et al . J. Med. Chem ., 1987, vol. 30, 1709- 1711 [0004] YOSHIDA et al. Prog. Biochem. Pharmacol., 1988, vol. 22, 68-80 [0004] [0005] SHIMAZAKI et al. Lipids, 1991, vol. 26 (12) , 1175-1178 [0004] [0005] • SHIMAZAKI et al. Chem. Pharm. Bunll., 1987, vol. 35 (8), 3527-3530 [0005] • SHIMAZAKI et al. J.Med. Chem, 1987, vol. 30, 1709-1711 [0005] • ALVAREZ et al. J. Antibiotics, 1994, vol. 47 (11), 1195-1201 [0005] • CHAN et al. Eur. J. Biochem., 1995, vol. 227, 524-528 [0006] • CHAN B. Eur J Biochem, 1995, vol. 227, 524-528 [0009] • KAAKKOLA S. Brain Research Bulletin. 1993, vol. 32, 667-672 [0010] • SMITH et al. Bioorg. Med. Chem. Letters, 1998, vol. 8, 2369-2374 [0025] • WILLIAMS. Synthesis Of Optically Active α-Amino Acids. Pergammon Press, 1989 [0027] • GREEN ; WUTS. Protective Groups In Organic Chemistry. Wiley, 1992 [0028] • GRANT. Synthetic Peptides: A User's Guide. Free-men, 1992 [0028] [0031] 31 • BODANSKY ; BODANSKY. The Practice of Peptide Synthesis. Springer-Verlag, 1994, 63-66 [0030] • GRANT ; ATHERTON. Solid Phase Peptide Synthe-sis: A Practical Approach. IRL Press, 1989 [0031] • ROTH et al. J. Exp. Med., 1996, vol. 184, 191-201 [0074] • ARBABI et al. Archives Surgery, 1999, vol. 134, 1348- 1353 [0074]

Claims

1 REIVINDICAÇÕES 1. Um ingrediente activo para utilização no tratamento da inflamação por meio da inibição da inflamação, em que o ingrediente activo tem a seguinte fórmula: O

O 1 em que: R1 é -CH2COR1, ou -CH2CH2COR1; R2 é a cadeia lateral de um aminoácido seleccionado a partir do grupo que consiste em glicina, alanina, valina, leucina, isoleucina, serina, treonina, ácido aspártico, asparagina, ácido glutâmico, glutamina, hidroxilisina, histidina, arginina, fenilalanina, tirosina, tiroxina e norvalina; R1 é -OH, -NH2, -0R4, -NHR4, ou -NR4R4; e cada R4 é independentemente um alquilo, arilo, alquilarilo, ou arilalquilo; ou um sal fisiologicamente aceitável do mesmo. 2. 0 ingrediente activo para utilização de acordo com a reivindicação 1, onde a utilização é para tratar uma doença ou condição patológica inflamatória.

3. Um ingrediente activo para utilização no tratamento de uma doença auto-imune, em que o ingrediente activo tem a seguinte fórmula: O

O 1 2 em que: R1 é -CH2COR3, ou -CH2CH2COR3; R2 é a cadeia lateral de um aminoácido seleccionado a partir do grupo que consiste em glicina, alanina, valina, leucina, isoleucina, serina, treonina, ácido aspártico, asparagina, ácido glutâmico, glutamina, hidroxilisina, histidina, arginina, fenilalanina, tirosina, tiroxina e norvalina; R3 é -OH, -NH2, -0R4, -NHR4, ou -NR4R4; e cada R4 é independentemente um alquilo, arilo, alquilarilo, ou arilalquilo; ou um sal fisiologicamente aceitável do mesmo.

4. Um ingrediente activo para utilização no tratamento de uma doença neoplásica, em que o ingrediente activo tem a seguinte fórmula: O

4 em que: R1 é -CH2COR3, ou -CH2CH2COR3; R2 é a cadeia lateral de um aminoácido seleccionado a partir do grupo que consiste em glicina, alanina, valina, leucina, isoleucina, serina, treonina, ácido aspártico, asparagina, ácido glutâmico, glutamina, hidroxilisina, histidina, arginina, fenilalanina, tirosina, tiroxina e norvalina; R3 é -OH, -NH2, -0R4, -NHR4, ou -NR4R4; e cada R4 é independentemente um alquilo, arilo, alquilarilo, ou arilalquilo; ou um sal fisiologicamente aceitável do mesmo. 3 5. 0 ingrediente activo para utilização de acordo com a reivindicação 4, em que a doença neoplásica é um cancro.

6. Um ingrediente activo para utilização no tratamento de uma doença ou condição patológica respiratória seleccionada a partir de sindrome de dificuldade respiratória aguda, asma, bronquite, enfisema ou uma infecção respiratória, em que o ingrediente activo tem a seguinte fórmula: O

5 em que: R1 é -CH2COR3, ou -CH2CH2COR3; R2 é a cadeia lateral de um aminoácido seleccionado a partir do grupo que consiste em glicina, alanina, valina, leucina, isoleucina, serina, treonina, ácido aspártico, asparagina, ácido glutâmico, glutamina, hidroxilisina, histidina, arginina, cisteina, metionina, fenilalanina, tirosina, tiroxina e norvalina; R3 é -OH, -NH2, -0R4, -NHR4, ou -NR4R4; e cada R4 é independentemente um alquilo, arilo, alquilarilo, ou arilalquilo; ou um sal fisiologicamente aceitável do mesmo. 7. 0 ingrediente activo para utilização de acordo com a reivindicação 1, em que o tratamento da inflamação inclui tratamento de alergia, artrite, doença cardiovascular, doença de Crohn, fibrose cística, endocardite, gastrite, ulceração gastrointestinal, doença inflamatória intestinal, isquemia, isquemia-reperfusão, sindrome de disfunção multiorgânica, enfarte do miocárdio, nefrite, pancreatite, sepse ou colite ulcerativa. 4 8. 0 ingrediente activo para utilização de acordo com a reivindicação 3, em que o tratamento de uma doença auto-imune inclui tratamento de artrite, doença de Crohn, pancreatite, psoriase ou colite ulcerativa. 9. 0 ingrediente activo para utilização de acordo com a reivindicação 7, em que o tratamento é para a doença de Crohn, gastrite, ulceração gastrointestinal, nefrite, pancreatite ou colite ulcerativa.

10. O ingrediente activo para utilização de acordo com a reivindicação 7, em que o tratamento é para artrite.

11. O ingrediente activo para utilização de acordo com a reivindicação 8, em que o tratamento é para psoriase.

12. O ingrediente activo para utilização de acordo com a reivindicação 7, em que o tratamento é para a doença cardiovascular, isquemia ou isquemia-reperfusão, ou sindrome de disfunção multiorgânica ou sepse.

13. O ingrediente activo para utilização de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, em que R2 é a cadeia lateral de um aminoácido seleccionado a partir do grupo que consiste em glicina, alanina, valina, leucina, isoleucina, serina, treonina, ácido aspártico, asparagina, ácido glutâmico, glutamina, arginina, tirosina, tiroxina e norvalina.

14. O ingrediente activo para utilização de acordo com a reivindicação 13, em que R2 é a cadeia lateral de um aminoácido seleccionado a partir do grupo que consiste em alanina, valina, leucina, isoleucina, serina, treonina, ácido aspártico, asparagina, ácido glutâmico, glutamina, tirosina e norvalina. 5 5 acordo com R3 é -OH ou 15. 0 ingrediente activo para utilização de qualquer uma das reivindicações 1 a 14, em que -0R4. 16. 0 ingrediente activo para utilização de acordo com a reivindicação 15, em que R3 é -OH. 17. 0 ingrediente activo para utilização de acordo com a reivindicação 16, em que R1 é -CH2COOH. 18. 0 ingrediente activo para utilização de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17, em que R2 é a cadeia lateral de alanina.

19. Uma composição farmacêutica que compreende um veiculo farmaceuticamente aceitável e um ingrediente activo que tem a fórmula: O

em que: R1 é -CH2COR3, ou -CH2CH2COR3; R2 é a cadeia lateral de um aminoácido seleccionado a partir do grupo que consiste em alanina, valina, leucina, isoleucina, serina, treonina, ácido aspártico, asparagina, ácido glutâmico, glutamina, hidroxilisina, histidina, tirosina, tiroxina e norvalina; R3 é -OH, -NH2, -0R4, -NHR4, ou -NR4R4; e cada R4 é independentemente um alquilo, arilo, alquilarilo, ou arilalquilo, ou um sal fisiologicamente aceitável do mesmo. 6

20. Composição de acordo com a reivindicação 19, em que R2 é a cadeia lateral de um aminoácido seleccionado a partir do grupo que consiste em alanina, valina, leucina, isoleucina, serina, treonina, ácido aspártico, asparagina, ácido glutâmico, glutamina, tirosina e norvalina.

21. Composição de acordo com a reivindicação 19 ou 20, em que R3 é -OH ou -OR4.

22. Composição de acordo com a reivindicação 21, em que R3 é -OR4 e R4 é um grupo alquilo Ci a C6 de cadeia linear ou ramificada.

23. Composição de acordo com a reivindicação 21, em que R1 é -CH2COOH.

24. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 19 a 23, em que R2 é a cadeia lateral de alanina.

25. Uma composição farmacêutica que compreende um veiculo farmaceuticamente aceitável e um ingrediente activo que tem a fórmula:

em que: R1 é -CH2COR3, ou -CH2CH2COR3; R2 é a cadeia lateral de um aminoácido seleccionado a partir do grupo que consiste em glicina, alanina, valina, leucina, isoleucina, serina, treonina, ácido aspártico, asparagina, ácido glutâmico, glutamina, lisina, 7 hidroxilisina, histidina, tirosina, tiroxina, norvalina e ornitina; R3 é -OH ou -0R4; e cada R4 é independentemente um alquilo, arilo, alquilarilo, ou arilalquilo, ou um sal fisiologicamente aceitável do mesmo.

26. Composição de acordo com a reivindicação 25, em que R2 é a cadeia lateral de um aminoácido seleccionado a partir do grupo que consiste em alanina, valina, leucina, isoleucina, serina, treonina, ácido aspártico, asparagina, ácido glutâmico, glutamina, tirosina e norvalina.

27. Composição de acordo com a reivindicação 25 ou 26, em que R3 é -OH.

28. Composição de acordo com a reivindicação 27, em que R1 é -ch2cooh.

29. Composição de acordo com a reivindicação 25 ou 26, em que R3 é -0R4 e R4 é um grupo alquilo Ci a C6 de cadeia linear ou ramificada.

30. Composição de acordo com a reivindicação 29, em que R4 é metilo.

31. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 25 a 30, em que R2 é a cadeia lateral de alanina.

32. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 19 a 31, em que a composição é formulada para a administração oral.

33. Composição de acordo com qualquer reivindicações 19 a 31, em que a composição para a administração tópica. uma das formulada