Patents
Search within
Search within the title, abstract, claims, or full patent document: You can restrict your search to a specific field using field names.
Use TI= to search in the title, AB= for the abstract, CL= for the claims, or TAC= for all three. For example, TI=(safety belt).
Search by Cooperative Patent Classifications (CPCs): These are commonly used to represent ideas in place of keywords, and can also be entered in a search term box. If you're searching forseat belts, you could also search for B60R22/00 to retrieve documents that mention safety belts or body harnesses. CPC=B60R22 will match documents with exactly this CPC, CPC=B60R22/low matches documents with this CPC or a child classification of this CPC.
Learn More
Title
Abstract
Claims
Full Document
Find patents
Keywords and boolean syntax (USPTO or EPO format): seat belt searches these two words, or their plurals and close synonyms. "seat belt" searches this exact phrase, in order. -seat -belt searches for documents not containing either word.
For searches using boolean logic, the default operator is AND with left associativity. Note: this means safety OR seat belt is searched as (safety OR seat) AND belt. Each word automatically includes plurals and close synonyms. Adjacent words that are implicitly ANDed together, such as (safety belt), are treated as a phrase when generating synonyms.
Learn More
Search by
Chemistry searches match terms (trade names, IUPAC names, etc. extracted from the entire document, and processed from .MOL files.)
Substructure (use SSS=) and similarity (use ~) searches are limited to one per search at the top-level AND condition. Exact searches can be used multiple times throughout the search query.
Searching by SMILES or InChi key requires no special syntax. To search by SMARTS, use SMARTS=.
To search for multiple molecules, select "Batch" in the "Type" menu. Enter multiple molecules separated by whitespace or by comma.
Learn More
Patent numbers
Search specific patents by importing a CSV or list of patent publication or application numbers.
Pentapeptidické prekurzory biologicky účinných cyklických dipeptidů
CZ280726B6
Czechia
- Other languages
English - Inventor
Evžen Ing. Csc. Kasafírek Antonín Ing. Šturc Jaroslav Ing. Moural Pavel Pihera Karel Rndr. Csc. Dobrovský Přemysl Prof. Mudr. Drsc. Frič Evžen Mudr. Csc. Křepela Aleksi Mudr. Csc. Šedo
Worldwide applications
1994
CZ
Application CZ942827A events
1994-11-16
1994-11-16
1996-04-17
1996-04-17
Description
translated from
Pentapeptidické prekurzory biologicky účinných cyklických dipeptidů.
Oblast techniky
Vynález se týká pentapeptidických prekurzorů biologicky účinných cyklických dipeptidů. Tyto sloučeniny nejsou sice samy o sobě biologicky účinné, ale působením endogenních proteolytických enzymů, například tzv. bázické endopeptidázy, dochází ku štěpení těchto sloučenin a ke vzniku nestálého c-koncového dipeptidesteru; tento intermediát pak spontánně cyklizuje v odpovídající spirocyklický dipeptid, tj. derivát 2,5-dioxopiperazinu, který je biologicky účinný. Zmíněné pentapeptidické prekurzory je pak možno označit jako prekurzory s funkcí prodrugs.
Dosavadní stav techniky
Moderní terapie hledá takovou cílenou aplikaci farmaka, při které by aplikované léčivo nepoškozovalo zdravé buňky, resp. orgány a působilo až v místě určení, tj. v nemocném orgánu či tkáni. Tento základní požadavek splňuje moderní typ léčiva, tzv. prodrugs. Princip tohoto farmaka spočívá v tom, že biologicky neaktivní prekurzor (prodrugs) je v cíleném nemocném orgánu aktivován zpravidla enzymatickou hydrolýzou: selektivní hydrolýzou se generuje účinná látka (léčivo). U peptidických prekurzorů tuto iniciální reakci spouštějí specifické proteolytické enzymy. Zpravidla se jedná o jednostupňovou reakci, kdy se uvolňuje přímo aktivní látka (léčivo).
U látek typu prodrugs se jedná o dvě na sobě závislé reakce, tj. o první enzymatickou (limitující) reakci, která je podřízena selektivnímu proteolytickému enzymu a druhou spontánní reakci (chemickou), tj. kdy vzniklý neúčinný dipeptidester samovolně cyklizuje (konverguje) v odpovídající derivát 2,5-dioxopiperazinu. Tento princip je znám z AO 277 405, EP č. 249 434, Life Sci. 50, 187 (1992), Collect.Czech. Chem. Commun. 57, 179 (1992). V tomto případě se jednalo o kratší peptidy, tj. tri- a tetrapeptidy. Rovněž enzymatická aktivace byla omezena na aminopeptidázy a endogenní monobázický enzym. Princip konverze neúčinného prekurzoru v aktivní komponentu (léčivo) lze vyjádřit schematicky následujícím sledem reakcí:
X - A - B - OR —> A - B - OR -----> cyklo(A - Β), kde X je aminokyselina anebo acylaminokyselina anebo acyl-dipeptid; A a B jsou aminokyselinové zbytky a R je alkyl.
Další velkou předností těchto látek (prekurzorů) je jejich vysoká rozpustnost ve vodě, což představuje řadu výhod při přípravě lékových forem. Je obecně známo, že cílené látky, tj. deriváty 2,5-piperazindionu, jsou velmi špatně rozpustné, např. soubor chráněných derivátů s kyselinou 1-amino-l-cykloalkankarboxylovou [AO č. 231 237, Collect, Czech. Chem. Commun. 58, 2987 (1993), 59, 195 (1994)]. Nízká rozpustnost ve vodě snižuje (ale i často vylučuje) možnost přípravy účinného farmaka ve vyšší koncentraci. Tato skutečnost snižuje potenciální farmakologické spektrum s ohledem na biologickou dostupnost.
-1CZ 280726 B6
Podstata vynálezu
Tyto nevýhody se podařilo odstranit podle vynálezu pentapeptidickými prekurzory biologicky účinných cyklických dipeptidů obecného vzorce I
X-A-B-U-Q-W-OR (I), kde
X = zbytek mastné kyseliny C-^ až C16,
A = zbytek peptidicky vázaného alaninu, fenylalaninu, glycinu, leucinu a tyrosinu,
B - U = zbytek peptidicky vázaného argininu a lysinu anebo jejich vzájemná kombinace,
Q = zbytek peptidicky vázaného alaninu, asparaginu, glycinu, šeřinu anebo W,
W = zbytek peptidicky vázané kyseliny 1-amino-l-cykloalkankarboxylové C4 až Cg obecného vzorce II kde n = 0 až 5,
(II) , zbytek peptidicky vázaného alaninu, šeřinu nebo substituovaného C ' -dialkylglycinu obecného vzorce III kde
(III),
M = methyl, ethyl anebo propyl, anebo Q,
R = methyl-anebo ethylskupina.
Vynález využívá poznatku, že chemická struktura látek obecného vzorce I, tj. acylovaných pentapeptid-esterů, je charakterizována acylovaným tripeptidem v N-terminální části peptidické sekvence s vestavěným párem bázických aminokyselin, argininu anebo lysinu, a to buď v homogenním sledu, tj. Arg-Arg anebo Lys-Lys, anebo v heterogenním sledu tj. Arg-Lys anebo Lys-Arg; acylový zbytek může zahrnovat řadu mastných kyselin (převážně hydrofobních), včetně hydrofilní formylové skupiny. Funkční složkou je C-terminální dipeptidester, jehož jednu aminokyselinu tvoří cyklická aminokyselina typu 1-amino-l-cykloalkankarboxylové kyseliny (cyklický typ), anebo substituovaný derivát glycinu C , -dialkylglycin (otevřený typ); druhá aminokyselinová komponenta je hydrofobní anebo hydrofilní aminokyselina.
-2CZ 280726 B6
Je známo, že sekvence dibázických aminokyselin, argininu a lysinu, je nejčastěji štěpenou vazbou vysokomolekulárních celků, tzv. pre- pro- hormonů anebo pro-hormonů, tzv. dibázickou endopeptidázou (in Protein Recognition of Immobilized Ligands, str. 133 - 140, 1989, Alan R. Liss, lne., New York, USA. Jedná se o enzym anebo enzymy, které mají nezastupitelnou funkci u mnohých spouštěcích reakcí (aktivaci hormonů). Ve spojitosti s tímto vynálezem je zvláště rozhodující, že tento enzym či enzymy se vyskytují ve zhoubných nádorech, například cysteinová proteináza [(Int.J. Cancer 49, 341-346 (1991)], anebo jako některé serinové proteinázy [Eur. J. Respir. Dis 71, 434 - 443 (1987)]. Z dalších enzymů, preferujících dibázickou sekvenci, je např. kathepsin B, patřící rovněž mezi cysteinové proteinázy. Tento enzym má významnou úlohu v destrukci komponent extracelulární matrice při invazi nádorových buněk. Rovněž je známo, že aktivita kathepsinu B, sdružená s plazmatickou membránou nádorových buněk, koreluje s jejich metastatickým potenciálem [Seminars in Cancer Biology 1, 137-152 (1990)]. Protože je známo, že existují různé bázické endopeptidázy s převažující specificitou k různým aminokyselinovým variantám, např. Arg-Arg [Bioscience Reports 12, 445-451 (1992), anebo v kombinované variantě Arg-Lys, případně v inverzní formě (J. Biochem. 110, 806-811 (1991)], je možné účelnou a racionální kombinací dubletu bázického páru dosáhnout vysokého stupně specificity podle žádaného účelu.
Pentapeptidické prekurzory biologicky účinných cyklických dipeptidů obecného vzorce I lze například připravovat tak, že C-terminální ester aminokyseliny se kondenzuje s vhodně aktivovanou předcházející acylaminokyselinou, například metodou směsných anhydridů. Odstraněním chránící skupiny z N-chráněného dipeptidů, například hydrogenolýzou, se získá volný dipeptidester, který se opět kondenzuje s předcházející chráněnou aminokyselinou. Postup se opakuje až do výstavby celé peptidické sekvence, viz schéma 1. Další možný způsob spočívá v tom, že část sekvence, například C-terminální tripeptid, se kondenzuje s N-acylovanou dipeptidkyselinou. Tento způsob syntézy, tzv. fragmentovou kondenzací, je jako jeden ze způsobů vyznačen na schématu 2.
Syntéza pentapeptidických prekurzorů podle vynálezu byla provedena syntézou v roztoku, ale lze jí provést také například syntézou na pevné fázi, anebo enzymatickou syntézou. Syntetické postupy zahrnují takové metody a chránící skupiny, které umožňují průmyslovou výrobu: kondenzační činidla (anhydridová metoda, aktivní ester) a chránící skupiny (benzyloxykarbonyl-, terč, butyloxykarbonyl-, nitroskupina). Deblokace chránící skupiny, například Z-skupiny nebo nitroskupiny, se s výhodou provádí hydrogenolýzou za zvýšeného tlaku a v případě Boc- skupiny acidolýzou roztokem chlorovodíku v kyselině octové. Cílové látky byly izolovány jako diacetáty. Jsou to sloučeniny stálé na vzduchu a velmi dobře rozpustné ve vodě. Tato vlastnost se výhodně uplatňuje při přípravě lékových forem (injekce, infuzní roztoky, spreje nebo kapky). Vzhledem ke své chemické struktuře jsou sloučeniny obecného vzorce I rezistentní vůči digestivním enzymům (C-terminální dipeptid), je možné je účelně aplikovat jako perorálně účinné formy, například tablety, tobolky, dražé, granulát apod., anebo lze tyto sloučeniny upravovat do takových lékových forem, které umožňují topickou aplikaci, jako jsou například masti, kré
-3CZ 280726 B6 my, emulze, gely, nebo formy rektální popřípadě intravaginální, jako jsou čípky, mikroklyzmata anebo globule.
Transformace neúčinného prekurzoru v biologicky aktivní cyklický dipeptid byla sledována in vitro vysokoúčinnou tenkovrstevnou chromatografií (HPTLC) u Ac-Leu-Arg-Arg-Ala-Acp-OEt, Pal-Ala-Arg-Lys-Ala-Acp-OMe a Lau-Ala-Arg-Lys-Ala-Acp-OMe. Během 1 h dochází ke vzniku Ala-Acp-OEt, resp, Ala-Acp-OEt a v druhé hodině již nastává spontánní cyklizace v žádaný produkt, tj. cyklo(Ala-Acp). Jako zdroj enzymu byl použit kathepsin B (cysteinová proteináza), který se významně uplatňuje v proliferaci nádorových buněk a homogenátu alveolárních makrofágů.
Strategie a taktika syntézy pentapeptidických prekurzorů biologicky účinných cyklických dipeptidu je vyznačena schématy 1 a 2 a všechny meziprodukty, včetně konečných látek, jsou zachyceny na schématu la a 2a. Schéma 1, resp. la, představuje postupnou syntézu, tzv. postup step-wise. Soubor dipeptid-esterů II představuje (s výjimkou Z-Gly-Gly(Pr2)-OEt) nekrystalické látky; tyto sloučeniny byly připraveny známým způsobem [Collect. Czech. Chem. Commun. 57, 179 (1992)]. Soubor sloučenin III (a-q) (chráněné tripeptid-estery) je identifikován v tabulce I a charakterizován v tabulce I a. Soubor sloučenin IV(a-k) (chráněné tetrapeptid-estery) je identifikován v tabulce II a charakterizován v tabulce Ila. Soubor sloučenin V(l-20) (chráněné pentapeptid-estery) je identifikován v tabulce III a charakterizován v tabulce lila.
Schéma 2, resp. 2a představuje fragmentovou kondenzaci. Acylované aminokyseliny Vl(a-i) jsou charakterizovány v tabulce IV, a příslušné dipeptid-estery VII(a-f) v tabulce V a odpovídající dipeptid-kyseliny VlII(a-f) v tabulce VI. Sloučeniny V(21-38) (chráněné pentapeptid-estery) podle schématu 2, resp. 2a jsou identifikovány v tabulce VII a charakterizovány v tabulce Víla.
Konečné látky (sloučeniny obecného vzorce I) jsou identifikovány v tabulce VIII, tj. podle schématu la sloučeniny 1(1-20) a podle schématu 2a sloučeniny 1(21-38) a všechny pak charakterizovány v tabulce Vlila, tj. 1(1-38).
Vynález pentapeptidických prekurzorů biologicky účinných cyklických dipeptidů je blíže ilustrován, ale není nijak omezen, v následujících příkladech provedení. Použité zkratky a symboly mají následující význam:
Ala = alanin, Arg = arginin, Asn = asparagin, Gly = glycin, Leu = leucin, Lys = lysin, Phe = fenylalanin, Ser = serin, Tyr = tyrosin, Apr = kyselina 1-amino-l-cyklopropankarboxylová, Acb = kyselina 1-amino-l-cyklobutankarboxylová, Acp = kyselina 1-amino-l-cyklopentankarboxylová,
-4CZ 280726 B6
Ach = kyselina 1-amino-l-cyklohexankarboxylová,
Achpt = kyselina 1-amino-l-cykloheptankarboxylová,
Gly(Me2) = C - dimethylglycin,
Gly(Et2) = C - diethylglycin,
Gly(Pr2) = C J-/ - dipropylglycin,
Z = benzyloxykarbonyl,
Boc- = terč.-butyloxykarbonyl,
NO2~ = nitroskupina,
OMe = methoxyskupina,
OEt = ethoxyskupina,
For = formylová skupina,
Ac = acetylová skupina,
Btr = butyrylová skupina,
Kpl = kaproylová skupina,
Lau = laurylová skupina,
Pal = palmitoylová skupina,
AcOH = kyselina octová,
DMFA = dimethylformamid,
AcOEt = octan ethylnatý,
DCCI = N,N'-dicyklohexylkarbodiimid,
HOSuc = N-hydroxysukcinimid,
DCHU = N, N'-dicyklohexylmočovina,
EtO-CO-Cl = chlormravenčan ethylnatý,
Pr = propyl,
Standardní způsob I: Surový reakční produkt se rozpustí v AcOEt a postupné se vytřepe 1M HC1, vodou 5% NaHCO3, vodou, vysuší bezvodým Na2SO4 a odpaří.
Standardní způsob II: Surový reakční produkt se rozpustí v AcOEt a postupně se vytřepe 1% kyselinou citrónovou, vodou, 5% NaHCO3, vodou, vysuší se bezvodým Na2SO4 a odpaří.
Veškerá odpařování se prováděla ve vakuu (20 mm) na rotační vakuové odparce.
Vysvětlení symbolů, používaných v příkladech provedení:
N-Etp = N-ethylpiperidin,
PE = Petrolether.
-5CZ 280726 B6
Schéma 1
Obecné schéma syntézy pentapeptidů (step-wise)
3
A B U
OH Η(II)
OEt(OMe)
OEt
X I
X I x
Boc
Boc
OH HBoc
Boc /Y2
---OH H-A2____ /γ2 /γ2 /H+ /γι /γι /γι /γι /γι /Η+ (III) (IV) (V) (I)
OEt
OEt
OEt
OEt
OEt
OEt
OEt
Boc = Terč.-butyloxykarbonyl,
Z = Benzyloxykarbonyl,
Y-^ = Chránící skupina pro Σ - aminoskupinu lysinu (benzyloxykarbonylová skupina),
Y2 = Chrániči skupina pro N-guanidinovou skupinu argininu (nitroskupina).
Schéma 1 a
Boc
Boc
Q + W - OR ----> Z - Q - W - OR ------> (Q - W - OR)
X -6CZ 280726 B6
Tabulka I
| Ill(a-q) | u | Q | W | R |
| a | Lys(Z) | Ala | Apr | Et |
| b | Arg(NC>2) | Ala | Apr | Et |
| c | Arg(N02) | Ala | Acp | Me |
| d | Arg(N02) | Ala | Acp | Et |
| e | Lys(Z) | Ala | Acp | Me |
| f | Arg(No2 | Acp | Ser | Me |
| g | Lys(Z) | Acp | Ser | Me |
| h | Lys(Z) | Ala | Acb | Et |
| i | Lys(Z) | Ala | Ach | Et |
| j | Arg(N02) | Ala | Achpt | Et |
| k | Arg(N02) | Acb | Ser | Me |
| 1 | Arg(N02) | Gly | Gly(Pr2) | Et |
| m | Lys(Z) | Ala | Gly(Me2) | Et |
| n | Arg(N02) | Gly | Gly(Et2) | Et |
| o | Arg(N02) | Ala | Gly(Et2) | Et |
| P | Lys(Z) | Asn | Acp | Me |
| q | Arg(N02) | Acb | Ala | Et |
| Tabulka la | ||||
| 20 | ||||
| Ill(a-q) | [a]n Sumární vzorec | |||
| mol. | hmotnost |
| a | Boc-Lys(Z)-Ala-Apr-OEt | -24,7° | C28H42N4°8 (562,7) |
| b | Boc-Arg(N02)-Ala-Apr-OEt | -31,2° | C20H35N7°8 |
| c | Boc-Arg(NO2)-Ala-Acp-OMe | - 1,4° | (501,6) C21H38N7°8 |
| d | Boc-Arg(NO2)-Ala-Acp-OEt | -20,4° | (515,6) C22H39N7°8 |
| e | Boc-Lys(Z)-Ala-Acp-OMe | -27,9° | (529,6) C29H44N4°8 |
| f | Boc-Arg(N02)-Acp-Ser-OMe | -20,9° | (612,6) C21H37N7°9 |
| g | Boc-Lys(Z)-Acp-Ser-OMe | -13,4° | (531,6) C29H44N4°9 |
| h | Boc-Lys(Z)-Ala-Acb-OEt | -10,9° | (592,7) C29H44N4°8 |
| i | Boc-Lys(Z)-Ala-Ach-OEt | -25,8° | (576,7) C31H48N4°8 |
| j | Boc-Arg(NO2)-Ala-Achpt-OEt | -17,0° | (604,7) C24H43N7°8 |
(557,6)
-7CZ 280726 B6
Tabulka Ia (pokračování)
| Ill(a-q) | t“]D 2° | Sumární vzorec mol. hmotnost | |
| k | Boc-Arg(NO2)-Acb-Ser-OMe | -10,0° | c20h35n7°9 |
| 1 | Boc-Arg(NO2)-Gly-Gly(Pr2)-OEt | - 3,95° | (517,6) C23H43N7°7 |
| m | Boc-Lys(Z)-Ala-Gly(Me2)-OEt | -28,2° | (545,6) C28H44N4°8 |
| n | Boc-Arg(NO2)-Gly-Gly(Et2)-OEt | - 5,9° | (564,7) C21H39N7°7 |
| o | Boc-Arg(NO2)-Ala-Gly(Et2)-OEt | -24,3° | (517,6) C23H41N7°7 |
| P | Boc-Lys(Z)-Asn-Acp-OMe | -13,8° | (531,6) C30H45N5°9 |
| q | Boc-Arg(N02)-Acb-Ala-OEt | -29,1’ | (619,7) C21H37N7°8 |
| (515,6) |
Π
Optická rotace [a)D byla měřena v methanolu; c = 0,2
Tabulka II
| IV(a-k) | B | U | Q | w | R |
| a | Lys(Z) | Lys(Z) | Ala | Apr | Et |
| b | Arg(NO2) | Lys(Z) | Ala | Apr | Et |
| c | Lys(Z) | Arg(NO2) | Ala | Apr | Et |
| d | Arg(NO2) | Arg(NO2) | Ala | Acp | Et |
| e | Arg(NO2) | Lys(Z) | Ala | Acp | Me |
| f | Lys(Z) | Arg(NO2) | Ala | Acp | Et |
| g | Lys(Z) | Lys(Z) | Asn | Acp | Me |
| h | Lys(Z) | Lys(Z) | Ala | Acp | Me |
| i | Arg(NO2) | Arg(NO2) | Ala | Acp | Me |
| j | Lys(Z) | Arg(NO2) | Ala | Acp | Me |
| k | Arg(NO2) | Lys(Z) | Asn | Acp | Me |
| Tabulka | Ha | ||||
| IV(a-k) | («In20 | Sumární | vzorec |
mol. hmotnost
| a Boc-Lys(Z)-Ala-Apr-OEt | -11,9’ | C42H60N6°ll |
| (825,0) | ||
| b Boc-Arg(NO2)-Lys(Z)-Ala-Apr-OEt | -11,7° | α34Η53Ν9θ11 |
| (763,9) |
-8CZ 280726 B6
Tabulka Ha (pokračování)
IV(a-k)
Ω [a]0U Sumární vzorec mol. hmotnost
| Boc-Lys(Z)-Arg(N02)-Ala-Apr-OEt | - 9,9’ | C34H53N9°11 |
| Boc-Arg(NO2)-Arg(NO2)-Ala-Acp-OEt | - 6,9’ | (763,9) C28H50N12°ll |
| Boc-Arg(NO2)-Lys(Z)-Ala-Acp-OMe | - 9,6’ | (730,8) C35H55N9°11 |
| Boc-Lys(Z)-Arg(N02)-Ala-Acp-OEt | -10,5’ | (777,9) C36H57N9°11 |
| Boc-Lys(Z)-Lys(Z)-Asn-Acp-OMe | - 9,4’ | (809,9) C44H63N7°12 |
| Boc-Lys(Z)-Lys(Z)-Ala-Acp-OMe | -12,6’ | (882,0) C43H62N6°11 |
| Boc-Arg(NO2)-Arg(NO2)-Ala-Acp-OMe | - 6,5’ | (839,0) C27H48N12°11 |
| Boc-Lys(Z)-Arg(N02)-Ala-Acp-OMe | -10,5’ | (716,7) C35H55N9°11 |
| Boc-Arg(N02)-Lys(Z)-Asn-Acp-OMe | + 3,2’ | (777,9) C36H56N10°12 |
| (820,9) |
η Ω
Optická rotace [a]p byla merena v dimethylformamidu; c = 0,2
Tabulka III
| V(1-20) | X | A | B | U | Q | W | R |
| 1. | Pal | Ala | Lys(Z) | Lys(z) | Ala | Apr | Et |
| 2. | Ac | Leu | Lys(Z) | Lys(z) | Ala | Apr | Et |
| 3 . | Ac | Leu | Arg(NO2) | Lys(z) | Ala | Apr | Et |
| 4. | Kpl | Leu | Arg(NO2) | Lys(Z) | Ala | Apr | Et |
| 5. | Btr | Leu | Lys(Z) | Lys(z) | Ala | Apr | Et |
| 6. | Btr | Ala | Lys(Z) | Lys(z) | Ala | Apr | Et |
| 7. | Lau | Ala | Lys(Z) | Lys(Z) | Ala | Apr | Et |
| 8. | For | Phe | Lys(Z) | Lys(z) | Ala | Apr | Et |
| 9. | Ac | Leu | Lys(Z) | Arg(N02) | Ala | Apr | Et |
| 10. | Kpl | Leu | Lys(z) | Arg(NO2) | Ala | Apr | Et |
| 11. | Ac | Leu | Arg(NO2) | Arg(NO2) | Ala | Acp | Et |
| 12. | Ac | Leu | Lys(Z) | Arg(NO2) | Ala | Acp | Me |
| 13 . | Lau | Ala | Arg(NO2) | Lys(Z) | Ala | Acp | Me |
| 14 . | Pal | Ala | Arg(NO2) | Lys(Z) | Ala | Acp | Me |
| 15. | For | Tyr | Lys(Z) | Lys(Z) | Ala | Acp | Me |
| 16. | Ac | Leu | Lys(Z) | Lys(Z) | Ala | Acp | Me |
| 17. | Btr | Leu | Lys(Z) | Lys(Z) | Asn | Acp | Me |
| 18. | Kpl | Ala | Lys(Z) | Lys(Z) | Asn | Acp | Me |
| 19 . | Kpl | Leu | Arg(NO2) | Lys(Z) | Asn | Acp | Me |
| 20. | Kpl | Ala | Arg(NO2) | Lys(Z) | Asn | Acp | Me |
-9CZ 280726 B6
Tabulka lila
V(l-20) (a]D 20 Sumární vzorec mol. hmotnost
1. Pal-Ala-Lys(Z)-Lys(Z)-Ala-Apr-OEt
2. Ac-Leu-Lys(Z)-Lys(Z)-Ala-Apr-OEt
3. Ac-Leu-Arg(NO2)-Lys(Z)-Ala-Apr-OEt
4. Kpl-Leu-Arg(NO2)-Lys(Z)-Ala-Apr-OEt
5. Btr-Leu-Lys(Z)-Lys(Z)-Ala-Apr-OEt
6. Btr-Ala-Lys(Z)-Lys(Z)-Ala-Apr-OEt
7. Lau-Ala-Lys(Z)-Lys(Z)-Ala-Apr-OEt
8. For-Phe-Lys(Z)-Lys(Z)-Ala-Apr-OEt
9. Ac-Leu-Lys(Z)-Arg(NO2)-Ala-Apr-OEt
10. Kpl-Leu-Lys(Z)-Arg(NO2)-Ala-Apr-OEt
11. Ac-Leu-Arg(NO2)-Arg(NO2)-Ala-Acp-OEt
12. Ac-Leu-Lys(Z)Arg(NO2)-Ala-Acp-OMe
13. Lau-Ala-Arg(NO2)-Lys(Z)-Ala-Acp-OMe
14. Pal-Ala-Arg(NO2)-Lys(Z)-Ala-Acp-OMe
15. For-Tyr-Lys(Z)-Lys(Z)-Ala-Acp-OMe
16. Ac-Leu-Lys(Z)-Lys(Z)-Ala-Acp-OMe
17. Btr-Leu-Lys(Z)-Lys(Z)-Asn-Acp-OMe
18. Kpl-Ala-Lys(Z)-Lys(Z)-Asn-Acp-OMe
19. Kpl-Leu-Arg(N02)-Lys(Z)-Asn-Acp-OMe
20. Kpl-Ala-Arg(NO2)-Lys(Z)-Asn-Acp-OMe
| -14,6° | C56H87N7°11 (1 034,3) |
| -10,9° | C45H65N7°11 (880,3) |
| -12,3° | C37H58N10°ll (818,9) |
| -12,8° | C43H70N10°ll (903,1) |
| -13,9° | C47H69N7°11 (908,1) |
| -12,5° | C47H61N7°11 (900,0) |
| -11,0° | C52H80N7°ll (979,2) |
| - 4,6° | C47H61N7°11 (900,0) |
| -12,3° | C37H58N10°ll (818,9) |
| -11,9° | C43H70N10°ll (903,1) |
| -13,1° | C31H55N13°11 ·Η2* (803,9) |
| -11,1° | C39H62N10°ll (847,0) |
| -11,6° | C45H75N10°ll (932,0) |
| -10,4° | C49H82N10°ll (987,1) |
| - 5,3° | C48H63N7°12 (930,1) |
| -11,6° | C46H67N7°11 (894,1) |
| - 7,3° | C47H69N7°12 (908,1) |
| -12,9° | C50H75N8°12 (980,2) |
| - 5,2° | C45H73N11°12 (960,1) |
| - 6,0° | C42H68N11°12 (919,1) |
Optická rotace [a]D 20 byla měřena v dimethylformamidu; c = 0,2
-10CZ 280726 B6
Schéma 2
Obecné schéma syntézy pentapeptidů
| (fragmentová | kondenzace 2 + 3) | |||
| 1 | 2 | 3 4 | 5 | |
| X | A | B | U Q | W |
X
X
X
| (VIII) | /Y2..... | /γι | |||
| Ull il /Y2 | /γι | (V) | |||
| /H+ | /H+ | (I) |
OEt(OMe)
OEt
OEt
Yj = Chránící skupina pro Σ - aminoskupinu lysinu (benzyloxykarbonylová skupina),
Y2 = Chránící skupina pro N-guanidinovou skupinu argininu (nitroskupina).
Schéma 2a
| VI | X | A | VII | X A | B | ||
| a | Ac | Tyr(Ac) | a | Ac Tyr(Ac) | Lys(Z) | ||
| b | Btr | Ala | b | Btr Ala | Lys(Z) | ||
| c | Btr | Leu | c | Kpl Gly | Arg(N02) | ||
| d | Kpl | Gly | d | Kpl Ala | Lys(Z) | ||
| e | Kpl | Ala | e | Kpl Ala | Arg(NO2) | ||
| f | Lau | Ala | f | Pal Ala | Arg(NO2) | ||
| g | Pal | Ala | |||||
| VIII | X | A | B | ||||
| a | Ac | Tyr | Lys(Z) | ||||
| b | Btr | Ala | Lys(Z) | ||||
| c | Kpl | Gly | Arg(NO2) | ||||
| d | Kpl | Ala | Lys(Z) | ||||
| e | Kpl | Ala | Arg(N02) | ||||
| f | Pal | Ala | Arg(NO2) |
-11CZ 280726 B6
Tabulka IV
| Vl(a-i) | Teplota tání °C | Sumární vzorec |
| C<x]D 20 | mol. hmotnost | |
| a AC-Tyr(Ac) | 172-175 °C | C13H15N05 |
| -46,5° x | (265,3) | |
| b Btr-Ala | 95-98 °C | C7H13NO3 |
| -38,4° | (159,2) | |
| c Kpl-Gly | 100-103 °C | C10H19NO3 |
| — | (210,3) | |
| d Kpl-Ala | 62-65 °C | C11H21NO3 |
| -25,0° | (215,3) | |
| e Btr-Gly | 57-60 °C | ^6^11^θ3 |
| — | (145,2) | |
| f Lau-Ala | 68-70 °C | C15H30NO3 |
| -16,5° | (272,4) | |
| g Pal-Ala | 93-95 °C | C19H37NO3 |
| — | (327,5) | |
| h Btr-Leu | 126-129 °C | C10H19NO3 |
| -24,6° | (201,3) | |
| i Kpl-Leu | 121-124 °C | C14H27NO3 |
| -19,5° | (257,4) |
Optická rotace [α]θ20 byla měřena v methanolu; c = 0,2. x Ve vodě; c = 1.
Tabulka V
| VII(a-f) | [a]D 20 | Sumární vzorec mol. hmotnost | |
| a | Ac-Tyr(Ac)-Lys(Z)-OMe | + 5,1° | C28H35N3°8 |
| b | Btr-Ala-Lys(Z)-OMe | -29,1° | (541,6) C22H33N3°6 |
| c | Kpl-Gly-Arg(NO2)-OMe | + 5,7’ | (435,5) C17H32N6°6 |
| d | Kpl-Ala-Lys(Z)-OMe | -26,6° | (416,5) C26H41N3°6 |
| e | Kpl-Ala-Arg(NO2)-OMe | -31,9° | (491,6) C18H34N6°6 |
| f | Pal-Ala-Arg(NO2)-OMe | -20,2° | (430,5) C26H50N6°6 |
| (542,7) |
-12CZ 280726 B6
| Tabulka VI | ||
| VIII | [a]D 20 | Sumární vzorec mol. hmotnost |
| a | Ac-Tyr-Lys(Z) | +13,8° | C25H31N3°7 |
| b | Btr-Ala-Lys(Z) | -17,8° | (485,6) C21H31N3°6 |
| c | Kpl-Gly-Arg(NO2) | + 2,9° | (421,5) C16H30N6°6 |
| d | Kpl-Ala-Lys(Z) | -17,8° | (402,5) C25H39N3°6 |
| e | Kpl-Ala-Arg(NO2) | -18,3° | (477,6) C17H32N6°6 |
| f | Pal-Ala-Arg(NO2) | -10,6° | (416,5) C25H48N6°6 |
| (528,7) |
Tabulka VII
| V(21-38) | X | A | B | U | Q | W | R |
| 21. | Ac | Tyr | Lys(Z) | Lys(Z) | Ala | Gly(Me2) | Et |
| 22. | Ac | Tyr | Lys(Z) | Lys(Z) | Ala | Ach | Et |
| 23 . | Btr | Ala | Lys(Z) | Lys(Z) | Ala | Ach | Et |
| 24. | Kpl | Ala | Lys(Z) | Lys(Z) | Ala | Ach | Et |
| 25. | Btr | Ala | Lys(Z) | Arg(NO2) | Gly | Gly(Et2) | Et |
| 26 . | Btr | Ala | Lys(Z) | Arg(NO2) | Ala | Gly(Et2) | Et |
| 27. | Kpl | Ala | Lys(Z) | Arg(N02) | Gly | Gly(Et2) | Et |
| 28. | Kpl | Ala | Lys(Z) | Arg(NO2) | Ala | Gly(Et2) | Et |
| 29. | Ac | Tyr | Lys(Z) | Arg(NO2) | Gly | Gly(Pr2) | Et |
| 30. | Kpl | Ala | Arg(NO2) | Lys(Z) | Ala | Gly(Me2) | Et |
| 31. | Pal | Ala | Arg(NO2) | Lys(Z) | Ala | Gly(Me2) | Et |
| 32. | Kpl | Gly | Arg(NO2) | Arg(NO2) | Ala | Gly(Me2) | Et |
| 33 . | Kpl | Gly | Arg(NO2) | Arg(NO2) | Gly | Gly(Et2) | Et |
| 34. | Kpl | Gly | Arg(N02) | Arg(NO2) | Acb | Ala | Et |
| 35. | Kpl | Ala | Arg(NO2) | Arg(NO2) | Ala | Achpt | Et |
| 36 . | Kpl | Ala | Arg(NO2) | Arg(NO2) | Acb | Ser | Me |
| 37. | Pal | Ala | Arg(NO2) | Arg(NO?) | Acp | Ser | Me |
| 38 . | Btr | Ala | Lys(Z) | Lys(Z) | Acp | Ser | Me |
-13CZ 280726 B6
Tabulka Vila
V(21-38) [a]D 20 Sum. vzorec mol. hmot.
21.
Ac-Tyr-Lys(Z)-Lys(Z)-Ala-Gly(Me2)-OEt
22.
Ac-Tyr-Lys(Z)-Lys(Z)-Ala-Ach-OEt .
Btr-Ala-Lys(Z)-Lys(Z)-Ala-Ach-OEt
24.
Kpl-Ala-Lys(Z)-Lys(Z)-Ala-Ach-OEt
25.
Btr-Ala-Lys(Z)-Arg(NO2)-Gly-Gly(Et2)-OEt
26.
Btr-Ala-Lys(Z)-Arg(NO2)-Ala-Gly(Et2)-OEt
27.
Kpl-Ala-Lys(Z)-Arg(NO2)-Gly-Gly(Et2)-OEt .
Kpl-Ala-Lys(Z)-Arg(NO2)-Ala-Gly(Et2)-OEt
29.
Ac-Tyr-Lys(Z)-Arg(NO2)-Gly-Gly(Pr2)-OEt
30.
31.
Kpl-Ala-Arg(NO2)-Lys(Z)-Ala-Gly(Me2)-OEt
Pal-Ala-Arg(NO2)-Lys(Z)-Ala-Gly(Me2)-OEt
32.
Kpl-Gly-Arg(No2)-Arg(No2)-Ala-Gly(Et2)33 .
Kpl-Gly-Arg(No2)-Arg(No2)-Gly-Gly(Et2)34.
35.
Kpl-Ala-Arg(NO2)-Arg(No2)-Ala-Achpt-OEt .
Kpl-Ala-Arg(N02)-Arg(N02)-Acb-Ser-OMe .
Pal-Ala-Arg(NO2)-Arg(NO2)-Acp-Ser-OMe
38.
Btr-Ala-Lys(Z)-Lys(Z)-Acp-Ser-OMe
| - 9,2° | C48H65N7°12 (932,1) |
| -10,4° | C51H69N7°12 (990,1) |
| -18,7° | C47H69N7°11 (908,1) |
| -18,2° | C51H77N7°11 (964,2) |
| -10,8’ | C38H62N10°ll (835,0) |
| -19,7° | C37H60N10°10 (820,9) |
| -11,9° | C41H68N10°10 (877,1) |
| -17,8° | C42H70N10°10 (891,1) |
| - 1,4’ | C43H64N10°12 (913,1) |
| -19,1° | C40^68N10°10 (863,0) |
| -15,6° | C48H82N10°ll (975,3) |
| Et-20,7° | C33H61N13°10 (815,9) |
| Et-16,l° | C32H59N13°10 (801,9) |
| -29,4 · | C32H57N13°11 (799,9) |
| -13,5° | C36H65N13°11 (856,0) |
| -18,4° | C32H57N13°12 (815,9) |
| -19,4° | C41H75N13°12 (942,1) |
| -17,3° | C45H65N7°12 (896,0) |
Optické rotace [a)D 20 byly měřeny v dimethylformamidu c = 0,2.
-14CZ 280726 B6
Tabulka VIII
| 1(1-38) | X | A | B | U | Q | W | R |
| 1. | Pal | Ala | Lys | Lys | Ala | Apr | Et |
| 2. | Ac | Leu | Lys | Lys | Ala | Apr | Et |
| 3 . | Ac | Leu | Arg | Lys | Ala | Apr | Et |
| 4. | Kpl | Leu | Arg | Lys | Ala | Apr | Et |
| 5. | Btr | Leu | Lys | Lys | Ala | Apr | Et |
| 6. | Btr | Ala | Lys | Lys | Ala | Apr | Et |
| 7. | Lau | Ala | Lys | Lys | Ala | Apr | Et |
| 8. | For | Phe | Lys | Lys | Ala | Apr | Et |
| 9. | Ac | Leu | Lys | Arg | Ala | Apr | Et |
| 10. | Kpl | Leu | Lys | Arg | Ala | Apr | Et |
| 11. | Ac | Leu | Arg | Arg | Ala | Acp | Et |
| 12. | Ac | Leu | Lys | Arg | Ala | Acp | Me |
| 13. | Lau | Ala | Arg | Lys | Ala | Acp | Me |
| 14. | Pal | Ala | Arg | Lys | Ala | Acp | Me |
| 15. | For | Tyr | Lys | Lys | Ala | Acp | Me |
| 16. | Ac | Leu | Lys | Lys | Ala | Acp | Me |
| 17. | Btr | Leu | Lys | Lys | Asn | Acp | Me |
| 18. | Kpl | Ala | Lys | Lys | Asn | Acp | Me |
| 19. | Kpl | Leu | Arg | Lys | Asn | Acp | Me |
| 20. | Kpl | Ala | Arg | Lys | Asn | Acp | Me |
| 21. | Ac | Tyr | Lys | Lys | Ala | Gly(Me2) | Et |
| 22. | Ac | Tyr | Lys | Lys | Ala | Ach | Et |
| 23 . | Btr | Ala | Lys | Lys | Ala | Ach | Et |
| 24. | Kpl | Ala | Lys | Lys | Ala | Ach | Et |
| 25. | Btr | Ala | Lys | Arg | Gly | Gly(Et2) | Et |
| 26. | Btr | Ala | Lys | Arg | Ala | Gly(Et2) | Et |
| 27. | Kpl | Ala | Lys | Arg | Gly | Gly(Et2) | Et |
| 28. | Kpl | Ala | Lys | Arg | Ala | Gly(Et2) | Et |
| 29. | Ac | Tyr | Lys | Arg | Gly | Gly(Pr2) | Et |
| 30. | Kpl | Ala | Arg | Lys | Ala | Gly(Me2) | Et |
| 31. | Pal | Ala | Arg | Lys | Ala | Gly(Me2) | Et |
| 32. | Kpl | Gly | Arg | Arg | Ala | Gly(Et2) | Et |
| 33 . | Kpl | Gly | Arg | Arg | Gly | Gly(Et2) | Et |
| 34. | Kpl | Gly | Arg | Arg | Acb | Ala | Et |
| 35. | Kpl | Ala | Arg | Arg | Ala | Achpt | Et |
| 36. | Kpl | Ala | Arg | Arg | Acb | Ser | Me |
| 37. | Pal | Ala | Arg | Arg | Acp | Ser | Me |
| 38. | Btr | Ala | Lys | Lys | Acp | Ser | Me |
| Tabulka Vlila | |||||||
| Příklad(1- | 38) Sekvence | Sumární vzorec | [«1D 20 | ||||
| 1. Pal-Ala-Lys-Lys-Ala | -Apr-OEt | c40 | H75N7O7. | 2AcOH.H2O | -28,9° | ||
| 2. Ac-Leu | -Lys-Lys· | -Ala- | Apr-OEt | C29 | h53n7°7· | 2AcOH.4H2O | -40,5° |
| 3. Ac-Leu | -Arg-Lys· | -Ala- | Apr-OEt | C29 | H53N9O7. | 2AcOH.2H2O | -33,7° |
| 4. Kpl-Leu-Arg-Lys-Ala | -Apr-OEt | C35 | H65N9°7 * | 2AcOH.2H2O | -33,0’ |
-15CZ 280726 B6
Tabulka Vlila (pokračování)
Příklad(1-38) Sekvence
Sumární vzorec [a]D 20
5. Btr-Leu-Lys-Lys-Ala-Apr-OEt
6. Btr-Ala-Lys-Lys-Ala-Apr-OEt
7. Lau-Ala-Lys-Lys-Ala-Apr-OEt
8. For-Phe-Lys-Lys-Ala-Apr-OEt
9. Ac-Leu-Lys-Arg-Ala-Apr-OEt
10. Kpl-Leu-Lys-Arg-Ala-Apr-OEt
11. Ac-Leu-Arg-Arg-Ala-Acp-OEt
12. Ac-Leu-Lys-Arg-Ala-Acp-OMe
13. Lau-Ala-Arg-Lys-Ala-Acp-OMe
14. Pal-Ala-Arg-Lys-Ala-Acp-OMe
15. For-Tyr-Lys-Lys-Ala-Acp-OMe
16. Ac-Leu-Lys-Lys-Ala-Acp-OMe C31H57N7°7 C28H51N7°7 C36H67N7°7
C31H49N7O7 C29H53N9°7 C35H65N9°7 C31H57N11°7 C30H55N9°7 C37H69N9°7 C41H77N9°7 C32H51N7°8 C30H55N7°7
2AcOH.2H2O
2ACOH.2H2O
2AcOH.2H2O
2AcOH.H2O
2ACOH.2H2O
2AcOH.2H2O
2ACOH.2H2O
2AcOH.3H2O
2ACOH.2H2O
2AcOH.2H2O
2AcOH.2H2O
2AcOH.2H2O
17. Btr-Leu-Lys-Lys-Asn-Acp-OMe
18. Kpl-Ala-Lys-Lys-Asn-Acp-OMe
19. Kpl-Leu-Arg-Lys-Asn-Acp-OMe C33H60N8°8’2Ac0H·2H2° C34H62N8°8’2Ac0H·2H2°
C^yHggNfθθθ·lAcOH·3H2O
20.
21.
Kpl-Ala-Arg-Lys-Asn-Acp-OMe
Ac-Tyr-Lys-Lys-Ala-Gly(Me2)-OEt ^32^53^7θ8* 2AcOH·2H2O
22.
.
24.
25.
.
27.
28.
29.
30.
Ac-Tyr-Lys-Lys-Ala-Ach-OEt
Btr-Ala-Lys-Lys-Ala-Ach-OEt
Kpl-Ala-Lys-Lys-Ala-Ach-OEt C35H57N7°8‘2Ac0H·2H2° C31H57N7°7.2AcOH.2H2O C35H65N7°7·2Ac0H·2H2°
Btr-Ala-Lys-Arg-Gly-Gly(Et2)-OEt C29H55N9°7.2AcOH.2H2O
Btr-Ala-Lys-Arg-Ala-Gly(Et2)-OEt c3oH57N9°7.2AcOH.2H2O
Kpl-Ala-Lys-Arg-Gly-Gly(Et2)-OEt C33H63NgO7.2AcOH.2H2O
Kpl-Ala-Lys-Arg-Ala-Gly(Et2)-OEt
Ac-Tyr-Lys-Arg-Gly-Gly-(Pr2)-OEt
Kpl-Ala-Arg-Lys-Ala-Gly(Me2)-OEt C34H65N9°7’2Ac0H·2H2° C3 5H59N9°8 * 2Ac0H·2H2° ^32^61^9θ7 * 2AcOH.2H2O
31. Pal-Ala-Arg-Lys-Ala-Gly(Me2)-OEt C4QH77NgO7.2AcOH.4H2O .Kpl-Gly-Arg-Arg-Ala-Gly (Et2 ) -OEt C33H63N-L1O7.2AcOH. 2H2O .Kpl-Gly-Arg-Arg-Gly-Gly (Et2 ) -OEt C32H61N11°7.2AcOH. 2H2O ,5’ ,2“ ,2’ ,9° ,5° ,3” ,4’ ,2“ ,4’ ,8’ ,2’ ,7° ,5“ ,6’ ,2° ,7° ,1° ,5’ ,2“ ,7° ,6° ,3“ ,0° ,9° ,1’ ,6’
34. Kpl-Gly-Arg-Arg-Acb-Ala-OEt
35. Kpl-Ala-Arg-Arg-Ala-Achpt-OEt
36. Kpl-Ala-Arg-Arg-Acb-Ser-OMe
37. Pal-Ala-Arg-Arg-Acp-Ser-OMe
38. Btr-Ala-Lys-Lys-Acp-Ser-OMe C32H59Nii07·2Ac°H.2H2° -27,3° C36H67Nii°7·2Ac0H·2H2° 33,4° <232R59R11®8 * 2AcOH.2H2O —38,6° C41h77NH°8 · 2Ac0H· 2H2° “33,4° C29H53N7°8-2A-cOH,2H2O ~28'3’
-16CZ 280726 B6
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Kpl-Leu
K roztoku leucinu (26,2 g) v 4M NaOH, ochlazenému na -10 °C, byl během 50 min přidán kaproylchlorid (37,6 ml). Potom byl roztok míchán 40 min. při 0 °C a 2 h při teplotě místnosti. Potom byla reakční směs okyselena 10% HC1 na pH 2. Vyloučená bílá krystalická látka byla odfiltrována, promyta vodou a vysušena do konst. hmotnosti. Bylo získáno 44,1 g (86 %) surové látky. Krystalizací z AcOEt bylo získáno 35,9 (77 %) produktu o t. t. 121-124 °C. Obdobným způsobem byly připraveny všechny acylované aminokyseliny, uvedené v tabulce IV.
Z-Ala-Apr-OEt
K roztoku Z-Ala (100 ml), ochlazenému a EtOCO-Cl (5 ml); k reakčnímu roztoku (70 ml), uvolněný (11,2 g; 50 mmol) v na -10 °C, byl přidán N-Etp 5min míchání a chlazení (-10 roztok Apr-OEt odpovídáj ícího methylenchloridu (7 ml) °C) byl v methylenchloridu hydrochloridu (9,7 g; při 0 °C a 2 h při teppo přidán z
mmol) N-Etp (7 ml). Po 30 min míchání loté místnosti byl reakční roztok odpařen, odparek rozpuštěn v AcOEt a standardním způsobem I zpracován. Nekrystalický odparek byl zpracován bez izolace v dalším Ala-Apr-OEt stupni.
K roztoku Z-Ala-Apr-OEt (asi 45 mmol) v methanolu (200 ml) byla přidána suspenze 5% Pd/C (2,5 g) v toluenu (50 ml), a reakční směs byla hydrogenována v autoklávu 10 min při tlaku 2 MPa. Po odfiltrování katalyzátoru byl methanolický roztok co nejrychleji odpařen a zpracován v následujícím stupni.
Boc-Lys(Z)-Ala-Apr-OEt (lila)
K roztoku Boc-Lys(Z) (40 mmol) a N-Etp (6,4 ml) v DMFA (80 ml), ochlazenému na -15 ’C, byl přidán EtOCO-Cl (4 ml). Po 10 min míchání a chlazení (-10 °C) byl k reakčnímu roztoku přidán roztok Ala-Apr-OEt (připravený v předchozím stupni) v DMFA (50 ml). Po 2 h míchání při teplotě místnosti byl roztok odpařen a zpracován standardním způsobem II. Odparek byl krystalován z toluenu a bylo získáno 22,6 g (92 %) produktu o t. t. 142-143 ’C; [a]D 20 -24,7° (c = 0,2; methanol). Pro C28H42N4O8 vypočteno 59,77 % C, 7,52 % H, 9,96 % N; nalezeno: 59,78 % C, 7,54 % H, 10,26 % N.
Obdobně byly připraveny podobné tripeptidy III, uvedené v tabulce I, resp. Ia.
HC1.Lys(Z)-Ala-Apr-OEt
K roztoku Boc-Lys(Z)-Ala-Apr-OEt (11,2 g; 20 mmol) v led. kyselině octové (20 ml) byl přidán 2,1 M roztok HC1 v kyselině octové (30 ml). Po 3 h stání při teplotě místnosti byl hydrochlo
-17CZ 280726 B6 rid vysrážen etherem. Krystalizaci z 2-propanolu a AcOEt bylo získáno 7,7 g (77 %) produktu. Pro C23H35N4°6.HC1.1H2O (508,0) vypočteno 54,38 % C, 7,14 % H, 11,02 % N; nalezeno: 54,27 % C, 7,02 % H a 10,51 % N.
Boc-Lys(Z)-Lys(Z)-Ala-Apr-OEt(IVa)
K roztoku Boc-Lys(Z) (7 mmol) a N-Etp (1 ml) v DMFA (30 ml), vychlazenému na -15 ’C, byl přidán EtOCO-Cl (0,7 ml). Po 10 min míchání a chlazení (10 °C) byl k reakčnímu roztoku přidán roztok Lys(Z)-Ala-Apr-OEt v DMFA (25 ml), uvolněný z odpovídajícího hydrochloridu (3,5 g) N-Etp (1 ml). Po 2 h míchání při teplotě místnosti byl reakční roztok odpařen a nekrystalický odparek rozmíchán přídavkem vody (50 ml). Krystalická objemná sraženina byla odfiltrována, vysušena v exsikátoru a krystalována z kyseliny octové (5 ml) přídavkem 2-propanolu (50 ml). Po 12 h stání v lednici byl krystalický produkt odfiltrován, promyt etherem. Bylo získáno 4,5 g (77 %) produktu; [a]D 20 11,9’ (c = 0,2; dimethylformamid).
Obdobně byly připraveny tetrapeptidy IV, uvedené v tabulce II, resp Ha.
HC1.Lys(Z)-Lys(Z)-Ala-Apr-OEt
K roztoku Boc-Lys(Z)-Lys(Z)-Ala-Apr-OEt (4,2 g; 5 mmol) v ledové kyselině octové (5 ml) byl přidán 2,1 M roztok HC1 v kyselině octové (7,5 ml). Po 3 h stání při teplotě místnosti byl hydrochlorid vysrážen etherem. Krystalizaci z kyseliny octové a 2-propanolu bylo získáno 6,4 g (84 %) produktu.
Ac-Leu-Lys(Z)-Lys(Z)-Ala-Apr-OEt(V2)
K roztoku Ac-Leu (347 mg; 2 mmol) a HOSuc (270 mg) v DMFA (10 ml), ochlazenému na 0 ’C, byl přidán DCCI (400 mg). Po 1 h míchání a chlazení (0 °C) byl přidán Lys(Z)-Lys(Z)-Ala-Acp-OEt v DMFA (10 ml), uvolněný z odpovídajícího hydrochloridu (1,55 g; 2 mmol) N-Etp (0,3 ml). Druhý den byla vyloučená DCHA odfiltrována, filtrát zahuštěn a nekrystalický odparek byl vysrážen 10% kyselinou citrónovou (20 ml), produkt odfiltrován a zpracován standardním způsobem II; přesrážením z DMFA a vody bylo získáno 560 mg (34 %) produktu o t.t. 253-255 °C; [a]p20 -10,9’ (c =
0,2; dimethylformamid). Pro C45H65N7°11 (880,1) vypočteno:
61,42 % C, 7,44 % H a 11,14 % N; nalezeno 61,41 % C a 11,17 % N.
Obdobné byly připraveny pentapeptidy (1-20), uvedené v tabulce III, resp. lila.
Ac-Leu-Lys-Lys-Ala-Apr-OEt.2 AcOH.4H2O(12)
K roztoku Ac-Leu-Lys(Z)-Lys(Z)-Ala-Apr-OEt (440 mg; 0,5 mmol) v AcOH (30 ml) byl přidán 5% Pd/C (45 mg) a reakční směs byla hydrogenována v autoklávu 1 h při tlaku 2MPa. Potom byl katalyzátor odfiltrován a nekrystalický odparek byl rozmíchán s etherem a vzniklý krystalický produkt byl odfiltrován a vysušen
-18CZ 280726 B6 v exsikátoru. Bylo získáno 302 mg (75 %) produktu [a]D 20 -40,5° (c = 0,2; methanol). Pro C2gH53N7O7.2 AcOH.4H2O (731,9) vypočteno 49,28 % C, 8,65 % H, 12,19 % N; nalezeno: 49,25 % C, 7,70 % H a 11,73 % N.
Obdobným způsobem, tj. taktikou a strategií, byly připraveny všechny analogy s vestavěným pouze chráněným Lys(Z), uvedené v tabulce VIII, resp. Vlila.
Příklad 2
Boc-Arg(NO2)-Lys(Z)-Ala-Apr-OEt (IVb)
K roztoku Boc-Arg(No2) (2,25 g; 7 mmol) v DMFA (30 ml), vychlazenému na -10 °C, byl přidán N-Etp (1 ml) a EtOCO-Cl (0,7 ml). Po 10 min míchání a chlazení (-10 °C) byl k reakčnímu roztoku přidán roztok Lys(Z)-Ala-Apr-OEt v DMFA (25 ml), uvolněný z odpovídajícího hydrochloridu (3,5 g) N-Etp (1 ml). Další zpracování obdobné Boc-Lys(Z)-Lys(Z)-Ala-Apr-OEt, uvedeného v příkladě 1. Bylo získáno 5,8 g (76 %) produktu o t.t. 119-123 “C (nastává 115 °C).
HC1.Arg(N02)-Lys(Z)-Ala-Apr-OEt
Z výchozího Boc-Arg(N02)-Lys(Z)-Ala-Apr-OEt (3,05 g; 4 mmol) bylo podobným způsobem, jako je uvedeno v příkladě 1, získáno 2,88 g (kvant).
Kpl-Leu-Arg(N02)-Lys-(Z)-Ala-Apr-OEt (V4)
Z výchozího Kpl-Leu (515 mg; 2 mmol) byl získán podobným způsobem jako odpovídající Ac-Leu-analog, uvedený v příkladě 1 ve výtěžku 1,09 g (60 %) o t.t. 158-161 C.
Kpl-Leu-Arg-Lys-Ala-Apr-OEt. 2 AcOH, 2H2O (14)
Byl připraven obdobným způsobem jako acetylovaný analog, uvedený v příkladě 1, s tím rozdílem, že tlak při hydrogenolýze byl zvýšen na 5 MPa a doba hydrogenolýzy prodloužena na 5 h; produkt byl získán ve výtěžku 59 %. Obdobným způsobem byly připraveny všechny analogy s vestavěným chráněným Arg(No2), uvedené v tabulce VIII, resp Vlila.
Příklad 3
Btr-Ala-Lys(Z)-OMe(Vllb)
K roztoku Btr-Ala (4,8 g; 30 mmol) a OHSuc (3,5 g) v DMFA (30 ml), ochlazenému na 0 °C, byl přidán DCCI (6,6 g). Po 1 h míchání a chlazení (0 °C) byl přidán roztok Lys(Z)-OMe V DMFA (30 ml), uvolněného z odpovídajícího hydrochloridu (10 g;30 mmol)
N-Etp (4,4 ml). Po 2 h míchání při teplotě místnosti byl roztok odpařen a zpracován standardním způsobem I. Krystalizaci z AcOEt a PE bylo získáno 10,9 g (83 %) o t.t. 94-96 °C.
-19CZ 280726 B6
Obdobným způsobem byly připraveny N-acylované dipeptidmethylestery, uvedené v tabulce V.
Btr-Ala-Lys(Z) (VlIIb)
K roztoku Btr-Ala-Lys(Z)-OMe (4,4 g; 10 mmol) v methanolu (50 ml) byl přidán M NaOH (15 ml) a reakční roztok byl míchán při teplotě místnosti 1,5 h. Potom bylo pH reakčního roztoku upraveno na 7 4M HC1 a roztok odpařen. Odparek byl 3krát extrahován AcOEt, organické výtřepky vysušeny bezvodým síranem sodným a odpařeny. Krystalizací z AcOEt a PE bylo získáno 4,2 g (kvant.). Pro C21H31N3°6 (421,5) vypočteno: 59,84 % C, 7,41 % H, 9,97 % N;
nalezeno: 59,71 % C, 7,53 % H a 9,49 % N, t.t. 114-116 ’C.
Obdobným způsobem byly připraveny N-acylované dipeptid-kyseliny, uvedené v tabulce VI.
Z-Gly-Gly(Pr2)-OEt
Z výchozího Z-Gly (4,2 g; 20 mmol) a Gyl(Pr2)-OEt.HC1 (5,0 g; 20 mmol) byl DCCI metodou jako sloučenina VlIIb získán produkt ve výtěžku 71 % a t.t. 68-71 °C. Pro C20H30N2O4 (378,5) vypočteno: 63,47 % C, 7,99 % H, 7,40 % N; nalezeno: 62,50 % C, 8,07 % H a 7,32 % N. Obdobným způsobem byly připraveny Z-Gly-Gly(Et2)-OEt, Z-Ala-Gly(Me2)-OEt a Z-Ala-Gly(Et2)-OEt jako nekrystalické sloučeniny.
Boc-Arg(N02)-Gly-Gly(Et2)-OEt (Illn)
Byl připraven DCCI(OHSuc metodou z výchozích Boc-Arg(N02) a Gly-Gly(Et2)-OEt, získaného hydrogenolýzou odpovídajícího nekrystalického Z-Gly-Gly(Et2)-OEt na Pd/C za zvýšeného tlaku 2 MPa ve výtěžku 82 % a t.t. 155-156 ’C. Pro C21H3gN7O7 (517,6) vypočteno: 48,73 % C, 7,60 % H, 18,94 % N; nalezeno: 48,43 % C,
7,58 % H a 18,34 % N.
Obdobným způsobem byly připraveny sloučeniny III(l-o), uvedené v tabulce I, resp la.
Kpl-Ala-Lys(Z)-Arg(NO2)-Gly-Gly(Et2)-OEt (V27)
Byl připraven DCCI/OHSuc metodou, jak uvedeno v předchozích příkladech, z výchozího Kpl-Ala-Lys(Z) a HCl.Arg(NO2)-Gly-Gly-(Et2)-OEt, připravený acidolýzou odpovídajícího Boc-derivátu roztokem HCl/kyselina octová ve výtěžku 91 %. Pro c4iH68N10°10 (877,1) vypočteno: 56,15 % C, 7,82 % H, 15,97 % N; nalezeno: 55,97 % C, 7,95 % H a 15,44 % N.
Obdobným způsobem byly připraveny sloučeniny 21 a 25-33, uvedené v tabulce VII, resp. Vila.
Kpl-Ala-Lys-Arg-Ala-Gly(Et2)-OEt.2 AcOH.2H2O (127)
-20CZ 280726 B6
Byl připraven obdobným způsobem jako analog v příkladě 1 tlakovou hydrogenolýzou na Pd/C při 5 MPa ve výtěžku 69 %.
Obdobným způsobem byly získány konečné látky podle příkladů 22 až 38, uvedené v tabulce VIII, resp Vlila.
Průmyslová využitelnost
Pentapeptidické prekurzory biologicky účinných cyklických dipeptidů představují nový typ léčiv výhodných vlastností, terapeuticky použitelných v oblasti poruch centrálního nervového systému a metabolismu buněk.
Claims (1)
Hide Dependent
translated from
Claims (1)
Hide Dependent
translated from
- PATENTOVÉ NÁROKYPentapeptidické prekurzory biologicky účinných cyklických dipeptidů obecného vzorce IX-A-B-U-Q-W-OR (I), kdeX = zbytek mastné kyseliny Cf až C^g,A = zbytek peptidicky vázaného alaninu, fenylalaninu, glycinu, leucinu a tyrosinu,B - U = zbytek peptidicky vázaného argininu a lysinu anebo jejich vzájemná kombinace,Q = zbytek peptidicky vázaného alaninu, asparaginu, glycinu, šeřinu anebo W,W = zbytek peptidicky vázané kyseliny1-amino-l-cykloalkankarboxylové C4 až Cg zbytek peptidicky vázaného alaninu, šeřinu nebo substituovaného C -dialkylglycinu obecného vzorce III (III),-21CZ 280726 B6 kdeM = methyl, ethyl anebo propyl, anebo Q,R = methyl- anebo ethylskupina.