CZ280726B6

CZ280726B6 - Pentapeptidické prekurzory biologicky účinných cyklických dipeptidů

Info

Publication number: CZ280726B6
Application number: CZ942827A
Authority: CZ
Inventors: Evžen Ing. Csc. Kasafírek; Antonín Ing. Šturc; Jaroslav Ing. Moural; Pavel Pihera; Karel Rndr. Csc. Dobrovský; Přemysl Prof. Mudr. Drsc. Frič; Evžen Mudr. Csc. Křepela; Aleksi Mudr. Csc. Šedo
Original assignee: Galena, A.S.
Priority date: 1994-11-16
Filing date: 1994-11-16
Publication date: 1996-04-17
Also published as: CZ282794A3

Abstract

Pentapeptidické prekurzory biologicky účinných cyklických dipeptidů se po aplikaci mění v organismu působením endogenních proteináz v cílovém orgánu v terapeuticky účinný derivát 2,5-dioxopiperazinu. Biologicky účinná oblast je centrální nervový systém a proliferace a antiprofilerace buněk.ŕ

Description

Pentapeptidické prekurzory biologicky účinných cyklických dipeptidů.

Oblast techniky

Vynález se týká pentapeptidických prekurzorů biologicky účinných cyklických dipeptidů. Tyto sloučeniny nejsou sice samy o sobě biologicky účinné, ale působením endogenních proteolytických enzymů, například tzv. bázické endopeptidázy, dochází ku štěpení těchto sloučenin a ke vzniku nestálého c-koncového dipeptidesteru; tento intermediát pak spontánně cyklizuje v odpovídající spirocyklický dipeptid, tj. derivát 2,5-dioxopiperazinu, který je biologicky účinný. Zmíněné pentapeptidické prekurzory je pak možno označit jako prekurzory s funkcí prodrugs.

Dosavadní stav techniky

Moderní terapie hledá takovou cílenou aplikaci farmaka, při které by aplikované léčivo nepoškozovalo zdravé buňky, resp. orgány a působilo až v místě určení, tj. v nemocném orgánu či tkáni. Tento základní požadavek splňuje moderní typ léčiva, tzv. prodrugs. Princip tohoto farmaka spočívá v tom, že biologicky neaktivní prekurzor (prodrugs) je v cíleném nemocném orgánu aktivován zpravidla enzymatickou hydrolýzou: selektivní hydrolýzou se generuje účinná látka (léčivo). U peptidických prekurzorů tuto iniciální reakci spouštějí specifické proteolytické enzymy. Zpravidla se jedná o jednostupňovou reakci, kdy se uvolňuje přímo aktivní látka (léčivo).

U látek typu prodrugs se jedná o dvě na sobě závislé reakce, tj. o první enzymatickou (limitující) reakci, která je podřízena selektivnímu proteolytickému enzymu a druhou spontánní reakci (chemickou), tj. kdy vzniklý neúčinný dipeptidester samovolně cyklizuje (konverguje) v odpovídající derivát 2,5-dioxopiperazinu. Tento princip je znám z AO 277 405, EP č. 249 434, Life Sci. 50, 187 (1992), Collect.Czech. Chem. Commun. 57, 179 (1992). V tomto případě se jednalo o kratší peptidy, tj. tri- a tetrapeptidy. Rovněž enzymatická aktivace byla omezena na aminopeptidázy a endogenní monobázický enzym. Princip konverze neúčinného prekurzoru v aktivní komponentu (léčivo) lze vyjádřit schematicky následujícím sledem reakcí:

X - A - B - OR —> A - B - OR -----> cyklo(A - Β), kde X je aminokyselina anebo acylaminokyselina anebo acyl-dipeptid; A a B jsou aminokyselinové zbytky a R je alkyl.

Další velkou předností těchto látek (prekurzorů) je jejich vysoká rozpustnost ve vodě, což představuje řadu výhod při přípravě lékových forem. Je obecně známo, že cílené látky, tj. deriváty 2,5-piperazindionu, jsou velmi špatně rozpustné, např. soubor chráněných derivátů s kyselinou 1-amino-l-cykloalkankarboxylovou [AO č. 231 237, Collect, Czech. Chem. Commun. 58, 2987 (1993), 59, 195 (1994)]. Nízká rozpustnost ve vodě snižuje (ale i často vylučuje) možnost přípravy účinného farmaka ve vyšší koncentraci. Tato skutečnost snižuje potenciální farmakologické spektrum s ohledem na biologickou dostupnost.

-1CZ 280726 B6

Podstata vynálezu

Tyto nevýhody se podařilo odstranit podle vynálezu pentapeptidickými prekurzory biologicky účinných cyklických dipeptidů obecného vzorce I

X-A-B-U-Q-W-OR (I), kde

X = zbytek mastné kyseliny C-^ až C₁₆,

A = zbytek peptidicky vázaného alaninu, fenylalaninu, glycinu, leucinu a tyrosinu,

B - U = zbytek peptidicky vázaného argininu a lysinu anebo jejich vzájemná kombinace,

Q = zbytek peptidicky vázaného alaninu, asparaginu, glycinu, šeřinu anebo W,

W = zbytek peptidicky vázané kyseliny 1-amino-l-cykloalkankarboxylové C₄ až C_gobecného vzorce II kde n = 0 až 5,

(II) , zbytek peptidicky vázaného alaninu, šeřinu nebo substituovaného C ' -dialkylglycinu obecného vzorce III kde

(III),

M = methyl, ethyl anebo propyl, anebo Q,

R = methyl-anebo ethylskupina.

Vynález využívá poznatku, že chemická struktura látek obecného vzorce I, tj. acylovaných pentapeptid-esterů, je charakterizována acylovaným tripeptidem v N-terminální části peptidické sekvence s vestavěným párem bázických aminokyselin, argininu anebo lysinu, a to buď v homogenním sledu, tj. Arg-Arg anebo Lys-Lys, anebo v heterogenním sledu tj. Arg-Lys anebo Lys-Arg; acylový zbytek může zahrnovat řadu mastných kyselin (převážně hydrofobních), včetně hydrofilní formylové skupiny. Funkční složkou je C-terminální dipeptidester, jehož jednu aminokyselinu tvoří cyklická aminokyselina typu 1-amino-l-cykloalkankarboxylové kyseliny (cyklický typ), anebo substituovaný derivát glycinu C , -dialkylglycin (otevřený typ); druhá aminokyselinová komponenta je hydrofobní anebo hydrofilní aminokyselina.

-2CZ 280726 B6

Je známo, že sekvence dibázických aminokyselin, argininu a lysinu, je nejčastěji štěpenou vazbou vysokomolekulárních celků, tzv. pre- pro- hormonů anebo pro-hormonů, tzv. dibázickou endopeptidázou (in Protein Recognition of Immobilized Ligands, str. 133 - 140, 1989, Alan R. Liss, lne., New York, USA. Jedná se o enzym anebo enzymy, které mají nezastupitelnou funkci u mnohých spouštěcích reakcí (aktivaci hormonů). Ve spojitosti s tímto vynálezem je zvláště rozhodující, že tento enzym či enzymy se vyskytují ve zhoubných nádorech, například cysteinová proteináza [(Int.J. Cancer 49, 341-346 (1991)], anebo jako některé serinové proteinázy [Eur. J. Respir. Dis 71, 434 - 443 (1987)]. Z dalších enzymů, preferujících dibázickou sekvenci, je např. kathepsin B, patřící rovněž mezi cysteinové proteinázy. Tento enzym má významnou úlohu v destrukci komponent extracelulární matrice při invazi nádorových buněk. Rovněž je známo, že aktivita kathepsinu B, sdružená s plazmatickou membránou nádorových buněk, koreluje s jejich metastatickým potenciálem [Seminars in Cancer Biology 1, 137-152 (1990)]. Protože je známo, že existují různé bázické endopeptidázy s převažující specificitou k různým aminokyselinovým variantám, např. Arg-Arg [Bioscience Reports 12, 445-451 (1992), anebo v kombinované variantě Arg-Lys, případně v inverzní formě (J. Biochem. 110, 806-811 (1991)], je možné účelnou a racionální kombinací dubletu bázického páru dosáhnout vysokého stupně specificity podle žádaného účelu.

Pentapeptidické prekurzory biologicky účinných cyklických dipeptidů obecného vzorce I lze například připravovat tak, že C-terminální ester aminokyseliny se kondenzuje s vhodně aktivovanou předcházející acylaminokyselinou, například metodou směsných anhydridů. Odstraněním chránící skupiny z N-chráněného dipeptidů, například hydrogenolýzou, se získá volný dipeptidester, který se opět kondenzuje s předcházející chráněnou aminokyselinou. Postup se opakuje až do výstavby celé peptidické sekvence, viz schéma 1. Další možný způsob spočívá v tom, že část sekvence, například C-terminální tripeptid, se kondenzuje s N-acylovanou dipeptidkyselinou. Tento způsob syntézy, tzv. fragmentovou kondenzací, je jako jeden ze způsobů vyznačen na schématu 2.

Syntéza pentapeptidických prekurzorů podle vynálezu byla provedena syntézou v roztoku, ale lze jí provést také například syntézou na pevné fázi, anebo enzymatickou syntézou. Syntetické postupy zahrnují takové metody a chránící skupiny, které umožňují průmyslovou výrobu: kondenzační činidla (anhydridová metoda, aktivní ester) a chránící skupiny (benzyloxykarbonyl-, terč, butyloxykarbonyl-, nitroskupina). Deblokace chránící skupiny, například Z-skupiny nebo nitroskupiny, se s výhodou provádí hydrogenolýzou za zvýšeného tlaku a v případě Boc- skupiny acidolýzou roztokem chlorovodíku v kyselině octové. Cílové látky byly izolovány jako diacetáty. Jsou to sloučeniny stálé na vzduchu a velmi dobře rozpustné ve vodě. Tato vlastnost se výhodně uplatňuje při přípravě lékových forem (injekce, infuzní roztoky, spreje nebo kapky). Vzhledem ke své chemické struktuře jsou sloučeniny obecného vzorce I rezistentní vůči digestivním enzymům (C-terminální dipeptid), je možné je účelně aplikovat jako perorálně účinné formy, například tablety, tobolky, dražé, granulát apod., anebo lze tyto sloučeniny upravovat do takových lékových forem, které umožňují topickou aplikaci, jako jsou například masti, kré

-3CZ 280726 B6 my, emulze, gely, nebo formy rektální popřípadě intravaginální, jako jsou čípky, mikroklyzmata anebo globule.

Transformace neúčinného prekurzoru v biologicky aktivní cyklický dipeptid byla sledována in vitro vysokoúčinnou tenkovrstevnou chromatografií (HPTLC) u Ac-Leu-Arg-Arg-Ala-Acp-OEt, Pal-Ala-Arg-Lys-Ala-Acp-OMe a Lau-Ala-Arg-Lys-Ala-Acp-OMe. Během 1 h dochází ke vzniku Ala-Acp-OEt, resp, Ala-Acp-OEt a v druhé hodině již nastává spontánní cyklizace v žádaný produkt, tj. cyklo(Ala-Acp). Jako zdroj enzymu byl použit kathepsin B (cysteinová proteináza), který se významně uplatňuje v proliferaci nádorových buněk a homogenátu alveolárních makrofágů.

Strategie a taktika syntézy pentapeptidických prekurzorů biologicky účinných cyklických dipeptidu je vyznačena schématy 1 a 2 a všechny meziprodukty, včetně konečných látek, jsou zachyceny na schématu la a 2a. Schéma 1, resp. la, představuje postupnou syntézu, tzv. postup step-wise. Soubor dipeptid-esterů II představuje (s výjimkou Z-Gly-Gly(Pr₂)-OEt) nekrystalické látky; tyto sloučeniny byly připraveny známým způsobem [Collect. Czech. Chem. Commun. 57, 179 (1992)]. Soubor sloučenin III (a-q) (chráněné tripeptid-estery) je identifikován v tabulce I a charakterizován v tabulce I a. Soubor sloučenin IV(a-k) (chráněné tetrapeptid-estery) je identifikován v tabulce II a charakterizován v tabulce Ila. Soubor sloučenin V(l-20) (chráněné pentapeptid-estery) je identifikován v tabulce III a charakterizován v tabulce lila.

Schéma 2, resp. 2a představuje fragmentovou kondenzaci. Acylované aminokyseliny Vl(a-i) jsou charakterizovány v tabulce IV, a příslušné dipeptid-estery VII(a-f) v tabulce V a odpovídající dipeptid-kyseliny VlII(a-f) v tabulce VI. Sloučeniny V(21-38) (chráněné pentapeptid-estery) podle schématu 2, resp. 2a jsou identifikovány v tabulce VII a charakterizovány v tabulce Víla.

Konečné látky (sloučeniny obecného vzorce I) jsou identifikovány v tabulce VIII, tj. podle schématu la sloučeniny 1(1-20) a podle schématu 2a sloučeniny 1(21-38) a všechny pak charakterizovány v tabulce Vlila, tj. 1(1-38).

Vynález pentapeptidických prekurzorů biologicky účinných cyklických dipeptidů je blíže ilustrován, ale není nijak omezen, v následujících příkladech provedení. Použité zkratky a symboly mají následující význam:

Ala = alanin, Arg = arginin, Asn = asparagin, Gly = glycin, Leu = leucin, Lys = lysin, Phe = fenylalanin, Ser = serin, Tyr = tyrosin, Apr = kyselina 1-amino-l-cyklopropankarboxylová, Acb = kyselina 1-amino-l-cyklobutankarboxylová, Acp = kyselina 1-amino-l-cyklopentankarboxylová,

-4CZ 280726 B6

Ach = kyselina 1-amino-l-cyklohexankarboxylová,

Achpt = kyselina 1-amino-l-cykloheptankarboxylová,

Gly(Me₂) = C - dimethylglycin,

Gly(Et₂) = C - diethylglycin,

Gly(Pr₂) = C J-/ - dipropylglycin,

Z = benzyloxykarbonyl,

Boc- = terč.-butyloxykarbonyl,

NO₂~ = nitroskupina,

OMe = methoxyskupina,

OEt = ethoxyskupina,

For = formylová skupina,

Ac = acetylová skupina,

Btr = butyrylová skupina,

Kpl = kaproylová skupina,

Lau = laurylová skupina,

Pal = palmitoylová skupina,

AcOH = kyselina octová,

DMFA = dimethylformamid,

AcOEt = octan ethylnatý,

DCCI = N,N'-dicyklohexylkarbodiimid,

HOSuc = N-hydroxysukcinimid,

DCHU = N, N'-dicyklohexylmočovina,

EtO-CO-Cl = chlormravenčan ethylnatý,

Pr = propyl,

Standardní způsob I: Surový reakční produkt se rozpustí v AcOEt a postupné se vytřepe 1M HC1, vodou 5% NaHCO₃, vodou, vysuší bezvodým Na₂SO₄ a odpaří.

Standardní způsob II: Surový reakční produkt se rozpustí v AcOEt a postupně se vytřepe 1% kyselinou citrónovou, vodou, 5% NaHCO₃, vodou, vysuší se bezvodým Na₂SO₄ a odpaří.

Veškerá odpařování se prováděla ve vakuu (20 mm) na rotační vakuové odparce.

Vysvětlení symbolů, používaných v příkladech provedení:

N-Etp = N-ethylpiperidin,

PE = Petrolether.

-5CZ 280726 B6

Schéma 1

Obecné schéma syntézy pentapeptidů (step-wise)

3

A B U

OH Η(II)

OEt(OMe)

OEt

X I

X I x

Boc

OH HBoc

Boc /^Y2

---OH H-A₂____ /^γ2 /^γ2 /H⁺ /^γι /^γι /^γι /^γι /^γι /Η⁺ (III) (IV) (V) (I)

OEt

Boc = Terč.-butyloxykarbonyl,

Z = Benzyloxykarbonyl,

Y-^ = Chránící skupina pro Σ - aminoskupinu lysinu (benzyloxykarbonylová skupina),

Y₂ = Chrániči skupina pro N-guanidinovou skupinu argininu (nitroskupina).

Schéma 1 a

Boc

Q + W - OR ----> Z - Q - W - OR ------> (Q - W - OR)

X -6CZ 280726 B6

Tabulka I

Ill(a-q)	u	Q	W	R
a	Lys(Z)	Ala	Apr	Et
b	Arg(NC>2)	Ala	Apr	Et
c	Arg(N0₂)	Ala	Acp	Me
d	Arg(N0₂)	Ala	Acp	Et
e	Lys(Z)	Ala	Acp	Me
f	Arg(No₂	Acp	Ser	Me
g	Lys(Z)	Acp	Ser	Me
h	Lys(Z)	Ala	Acb	Et
i	Lys(Z)	Ala	Ach	Et
j	Arg(N0₂)	Ala	Achpt	Et
k	Arg(N0₂)	Acb	Ser	Me
1	Arg(N0₂)	Gly	Gly(Pr₂)	Et
m	Lys(Z)	Ala	Gly(Me₂)	Et
n	Arg(N0₂)	Gly	Gly(Et₂)	Et
o	Arg(N0₂)	Ala	Gly(Et₂)	Et
P	Lys(Z)	Asn	Acp	Me
q	Arg(N0₂)	Acb	Ala	Et
Tabulka la
			20
Ill(a-q)			[a]_n Sumární vzorec
			mol.	hmotnost

a	Boc-Lys(Z)-Ala-Apr-OEt	-24,7°	^C28^H42^N4°8 (562,7)
b	Boc-Arg(N0₂)-Ala-Apr-OEt	-31,2°	^C20^H35^N7°8
c	Boc-Arg(NO₂)-Ala-Acp-OMe	- 1,4°	(501,6) ^C21^H38^N7°8
d	Boc-Arg(NO₂)-Ala-Acp-OEt	-20,4°	(515,6) ^C22^H39^N7°8
e	Boc-Lys(Z)-Ala-Acp-OMe	-27,9°	(529,6) ^C29^H44^N4°8
f	Boc-Arg(N0₂)-Acp-Ser-OMe	-20,9°	(612,6) ^C21^H37^N7°9
g	Boc-Lys(Z)-Acp-Ser-OMe	-13,4°	(531,6) ^C29^H44^N4°9
h	Boc-Lys(Z)-Ala-Acb-OEt	-10,9°	(592,7) ^C29^H44^N4°8
i	Boc-Lys(Z)-Ala-Ach-OEt	-25,8°	(576,7) ^C31^H48^N4°8
j	Boc-Arg(NO₂)-Ala-Achpt-OEt	-17,0°	(604,7) ^C24^H43^N7°8

(557,6)

-7CZ 280726 B6

Tabulka Ia (pokračování)

Ill(a-q)	t“]_D ²°	Sumární vzorec mol. hmotnost
k	Boc-Arg(NO₂)-Acb-Ser-OMe	-10,0°	^c20^h35ⁿ7°9
1	Boc-Arg(NO₂)-Gly-Gly(Pr₂)-OEt	- 3,95°	(517,6) ^C23^H43^N7°7
m	Boc-Lys(Z)-Ala-Gly(Me₂)-OEt	-28,2°	(545,6) ^C28^H44^N4°8
n	Boc-Arg(NO₂)-Gly-Gly(Et₂)-OEt	- 5,9°	(564,7) ^C21^H39^N7°7
o	Boc-Arg(NO₂)-Ala-Gly(Et₂)-OEt	-24,3°	(517,6) ^C23^H41^N7°7
P	Boc-Lys(Z)-Asn-Acp-OMe	-13,8°	(531,6) ^C30^H45^N5°9
q	Boc-Arg(N0₂)-Acb-Ala-OEt	-29,1’	(619,7) ^C21^H37^N7°8
			(515,6)

Π

Optická rotace [a)_D byla měřena v methanolu; c = 0,2

Tabulka II

IV(a-k)	B	U	Q	w	R
a	Lys(Z)	Lys(Z)	Ala	Apr	Et
b	Arg(NO₂)	Lys(Z)	Ala	Apr	Et
c	Lys(Z)	Arg(NO₂)	Ala	Apr	Et
d	Arg(NO₂)	Arg(NO₂)	Ala	Acp	Et
e	Arg(NO₂)	Lys(Z)	Ala	Acp	Me
f	Lys(Z)	Arg(NO₂)	Ala	Acp	Et
g	Lys(Z)	Lys(Z)	Asn	Acp	Me
h	Lys(Z)	Lys(Z)	Ala	Acp	Me
i	Arg(NO₂)	Arg(NO₂)	Ala	Acp	Me
j	Lys(Z)	Arg(NO₂)	Ala	Acp	Me
k	Arg(NO₂)	Lys(Z)	Asn	Acp	Me
Tabulka	Ha
IV(a-k)			(«In²⁰	Sumární	vzorec

mol. hmotnost

a Boc-Lys(Z)-Ala-Apr-OEt	-11,9’	^C42^H60^N6°ll
		(825,0)
b Boc-Arg(NO₂)-Lys(Z)-Ala-Apr-OEt	-11,7°	^α34^Η53^Ν9θ11
		(763,9)

-8CZ 280726 B6

Tabulka Ha (pokračování)

IV(a-k)

Ω [a]0^U Sumární vzorec mol. hmotnost

Boc-Lys(Z)-Arg(N0₂)-Ala-Apr-OEt	- 9,9’	^C34^H53^N9°11
Boc-Arg(NO₂)-Arg(NO₂)-Ala-Acp-OEt	- 6,9’	(763,9) ^C28^H50^N12°ll
Boc-Arg(NO₂)-Lys(Z)-Ala-Acp-OMe	- 9,6’	(730,8) ^C35^H55^N9°11
Boc-Lys(Z)-Arg(N0₂)-Ala-Acp-OEt	-10,5’	(777,9) ^C36^H57^N9°11
Boc-Lys(Z)-Lys(Z)-Asn-Acp-OMe	- 9,4’	(809,9) ^C44^H63^N7°12
Boc-Lys(Z)-Lys(Z)-Ala-Acp-OMe	-12,6’	(882,0) ^C43^H62^N6°11
Boc-Arg(NO₂)-Arg(NO₂)-Ala-Acp-OMe	- 6,5’	(839,0) ^C27^H48^N12°11
Boc-Lys(Z)-Arg(N0₂)-Ala-Acp-OMe	-10,5’	(716,7) ^C35^H55^N9°11
Boc-Arg(N0₂)-Lys(Z)-Asn-Acp-OMe	+ 3,2’	(777,9) ^C36^H56^N10°12
		(820,9)

η Ω

Optická rotace [a]p byla merena v dimethylformamidu; c = 0,2

Tabulka III

V(1-20)	X	A	B	U	Q	W	R
1.	Pal	Ala	Lys(Z)	Lys(z)	Ala	Apr	Et
2.	Ac	Leu	Lys(Z)	Lys(z)	Ala	Apr	Et
3 .	Ac	Leu	Arg(NO₂)	Lys(z)	Ala	Apr	Et
4.	Kpl	Leu	Arg(NO₂)	Lys(Z)	Ala	Apr	Et
5.	Btr	Leu	Lys(Z)	Lys(z)	Ala	Apr	Et
6.	Btr	Ala	Lys(Z)	Lys(z)	Ala	Apr	Et
7.	Lau	Ala	Lys(Z)	Lys(Z)	Ala	Apr	Et
8.	For	Phe	Lys(Z)	Lys(z)	Ala	Apr	Et
9.	Ac	Leu	Lys(Z)	Arg(N0₂)	Ala	Apr	Et
10.	Kpl	Leu	Lys(z)	Arg(NO₂)	Ala	Apr	Et
11.	Ac	Leu	Arg(NO₂)	Arg(NO₂)	Ala	Acp	Et
12.	Ac	Leu	Lys(Z)	Arg(NO₂)	Ala	Acp	Me
13 .	Lau	Ala	Arg(NO₂)	Lys(Z)	Ala	Acp	Me
14 .	Pal	Ala	Arg(NO₂)	Lys(Z)	Ala	Acp	Me
15.	For	Tyr	Lys(Z)	Lys(Z)	Ala	Acp	Me
16.	Ac	Leu	Lys(Z)	Lys(Z)	Ala	Acp	Me
17.	Btr	Leu	Lys(Z)	Lys(Z)	Asn	Acp	Me
18.	Kpl	Ala	Lys(Z)	Lys(Z)	Asn	Acp	Me
19 .	Kpl	Leu	Arg(NO₂)	Lys(Z)	Asn	Acp	Me
20.	Kpl	Ala	Arg(NO₂)	Lys(Z)	Asn	Acp	Me

-9CZ 280726 B6

Tabulka lila

V(l-20) (a]_D ²⁰ Sumární vzorec mol. hmotnost

1. Pal-Ala-Lys(Z)-Lys(Z)-Ala-Apr-OEt

2. Ac-Leu-Lys(Z)-Lys(Z)-Ala-Apr-OEt

3. Ac-Leu-Arg(NO₂)-Lys(Z)-Ala-Apr-OEt

4. Kpl-Leu-Arg(NO₂)-Lys(Z)-Ala-Apr-OEt

5. Btr-Leu-Lys(Z)-Lys(Z)-Ala-Apr-OEt

6. Btr-Ala-Lys(Z)-Lys(Z)-Ala-Apr-OEt

7. Lau-Ala-Lys(Z)-Lys(Z)-Ala-Apr-OEt

8. For-Phe-Lys(Z)-Lys(Z)-Ala-Apr-OEt

9. Ac-Leu-Lys(Z)-Arg(NO₂)-Ala-Apr-OEt

10. Kpl-Leu-Lys(Z)-Arg(NO₂)-Ala-Apr-OEt

11. Ac-Leu-Arg(NO₂)-Arg(NO₂)-Ala-Acp-OEt

12. Ac-Leu-Lys(Z)Arg(NO₂)-Ala-Acp-OMe

13. Lau-Ala-Arg(NO₂)-Lys(Z)-Ala-Acp-OMe

14. Pal-Ala-Arg(NO₂)-Lys(Z)-Ala-Acp-OMe

15. For-Tyr-Lys(Z)-Lys(Z)-Ala-Acp-OMe

16. Ac-Leu-Lys(Z)-Lys(Z)-Ala-Acp-OMe

17. Btr-Leu-Lys(Z)-Lys(Z)-Asn-Acp-OMe

18. Kpl-Ala-Lys(Z)-Lys(Z)-Asn-Acp-OMe

19. Kpl-Leu-Arg(N0₂)-Lys(Z)-Asn-Acp-OMe

20. Kpl-Ala-Arg(NO₂)-Lys(Z)-Asn-Acp-OMe

-14,6°	^C56^H87^N7°11 (1 034,3)
-10,9°	^C45^H65^N7°11 (880,3)
-12,3°	^C37^H58^N10°ll (818,9)
-12,8°	^C43^H70^N10°ll (903,1)
-13,9°	^C47^H69^N7°11 (908,1)
-12,5°	^C47^H61^N7°11 (900,0)
-11,0°	^C52^H80^N7°ll (979,2)
- 4,6°	^C47^H61^N7°11 (900,0)
-12,3°	^C37^H58^N10°ll (818,9)
-11,9°	^C43^H70^N10°ll (903,1)
-13,1°	^C31^H55^N13°11 ·^Η2* (803,9)
-11,1°	^C39^H62^N10°ll (847,0)
-11,6°	^C45^H75^N10°ll (932,0)
-10,4°	^C49^H82^N10°ll (987,1)
- 5,3°	^C48^H63^N7°12 (930,1)
-11,6°	^C46^H67^N7°11 (894,1)
- 7,3°	^C47^H69^N7°12 (908,1)
-12,9°	^C50^H75^N8°12 (980,2)
- 5,2°	^C45^H73^N11°12 (960,1)
- 6,0°	^C42^H68^N11°12 (919,1)

Optická rotace [a]_D ²⁰ byla měřena v dimethylformamidu; c = 0,2

-10CZ 280726 B6

Schéma 2

Obecné schéma syntézy pentapeptidů

	(fragmentová	kondenzace 2 + 3)
	1	2	3 4	5
X	A	B	U Q	W

X

(VIII)	/^Y2.....	/^γι
	Ull il /Y₂	/^γι	(V)
	/H⁺	/H⁺	(I)

OEt(OMe)

OEt

Yj = Chránící skupina pro Σ - aminoskupinu lysinu (benzyloxykarbonylová skupina),

Y₂ = Chránící skupina pro N-guanidinovou skupinu argininu (nitroskupina).

Schéma 2a

VI	X	A	VII	X A	B
a	Ac	Tyr(Ac)		a	Ac Tyr(Ac)	Lys(Z)
b	Btr	Ala			b	Btr Ala	Lys(Z)
c	Btr	Leu			c	Kpl Gly	Arg(N0₂)
d	Kpl	Gly			d	Kpl Ala	Lys(Z)
e	Kpl	Ala			e	Kpl Ala	Arg(NO₂)
f	Lau	Ala			f	Pal Ala	Arg(NO₂)
g	Pal	Ala
			VIII	X	A	B
			a	Ac	Tyr	Lys(Z)
			b	Btr	Ala	Lys(Z)
			c	Kpl	Gly	Arg(NO₂)
			d	Kpl	Ala	Lys(Z)
			e	Kpl	Ala	Arg(N0₂)
			f	Pal	Ala	Arg(NO₂)

-11CZ 280726 B6

Tabulka IV

Vl(a-i)	Teplota tání °C	Sumární vzorec
	C<x]_D ²⁰	mol. hmotnost
a AC-Tyr(Ac)	172-175 °C	^C13^H15^N05
	-46,5° ^x	(265,3)
b Btr-Ala	95-98 °C	C7H13NO3
	-38,4°	(159,2)
c Kpl-Gly	100-103 °C	^C10^H19^NO3
	—	(210,3)
d Kpl-Ala	62-65 °C	^C11^H21^NO3
	-25,0°	(215,3)
e Btr-Gly	57-60 °C	^6^11^θ3
	—	(145,2)
f Lau-Ala	68-70 °C	^C15^H30^NO3
	-16,5°	(272,4)
g Pal-Ala	93-95 °C	^C19^H37^NO3
	—	(327,5)
h Btr-Leu	126-129 °C	^C10^H19^NO3
	-24,6°	(201,3)
i Kpl-Leu	121-124 °C	^C14^H27^NO3
	-19,5°	(257,4)

Optická rotace [α]θ²⁰ byla měřena v methanolu; c = 0,2. ^x Ve vodě; c = 1.

Tabulka V

VII(a-f)	[a]_D ²⁰	Sumární vzorec mol. hmotnost
a	Ac-Tyr(Ac)-Lys(Z)-OMe	+ 5,1°	^C28^H35^N3°8
b	Btr-Ala-Lys(Z)-OMe	-29,1°	(541,6) ^C22^H33^N3°6
c	Kpl-Gly-Arg(NO₂)-OMe	+ 5,7’	(435,5) ^C17^H32^N6°6
d	Kpl-Ala-Lys(Z)-OMe	-26,6°	(416,5) ^C26^H41^N3°6
e	Kpl-Ala-Arg(NO₂)-OMe	-31,9°	(491,6) ^C18^H34^N6°6
f	Pal-Ala-Arg(NO₂)-OMe	-20,2°	(430,5) ^C26^H50^N6°6
			(542,7)

-12CZ 280726 B6

Tabulka VI
VIII	[a]_D ²⁰	Sumární vzorec mol. hmotnost

a	Ac-Tyr-Lys(Z)	+13,8°	^C25^H31^N3°7
b	Btr-Ala-Lys(Z)	-17,8°	(485,6) ^C21^H31^N3°6
c	Kpl-Gly-Arg(NO₂)	+ 2,9°	(421,5) ^C16^H30^N6°6
d	Kpl-Ala-Lys(Z)	-17,8°	(402,5) ^C25^H39^N3°6
e	Kpl-Ala-Arg(NO₂)	-18,3°	(477,6) ^C17^H32^N6°6
f	Pal-Ala-Arg(NO₂)	-10,6°	(416,5) ^C25^H48^N6°6
			(528,7)

Tabulka VII

V(21-38)	X	A	B	U	Q	W	R
21.	Ac	Tyr	Lys(Z)	Lys(Z)	Ala	Gly(Me₂)	Et
22.	Ac	Tyr	Lys(Z)	Lys(Z)	Ala	Ach	Et
23 .	Btr	Ala	Lys(Z)	Lys(Z)	Ala	Ach	Et
24.	Kpl	Ala	Lys(Z)	Lys(Z)	Ala	Ach	Et
25.	Btr	Ala	Lys(Z)	Arg(NO₂)	Gly	Gly(Et₂)	Et
26 .	Btr	Ala	Lys(Z)	Arg(NO₂)	Ala	Gly(Et₂)	Et
27.	Kpl	Ala	Lys(Z)	Arg(N0₂)	Gly	Gly(Et₂)	Et
28.	Kpl	Ala	Lys(Z)	Arg(NO₂)	Ala	Gly(Et₂)	Et
29.	Ac	Tyr	Lys(Z)	Arg(NO₂)	Gly	Gly(Pr₂)	Et
30.	Kpl	Ala	Arg(NO₂)	Lys(Z)	Ala	Gly(Me₂)	Et
31.	Pal	Ala	Arg(NO₂)	Lys(Z)	Ala	Gly(Me₂)	Et
32.	Kpl	Gly	Arg(NO₂)	Arg(NO₂)	Ala	Gly(Me₂)	Et
33 .	Kpl	Gly	Arg(NO₂)	Arg(NO₂)	Gly	Gly(Et₂)	Et
34.	Kpl	Gly	Arg(N0₂)	Arg(NO₂)	Acb	Ala	Et
35.	Kpl	Ala	Arg(NO₂)	Arg(NO₂)	Ala	Achpt	Et
36 .	Kpl	Ala	Arg(NO₂)	Arg(NO₂)	Acb	Ser	Me
37.	Pal	Ala	Arg(NO₂)	Arg(NO_?)	Acp	Ser	Me
38 .	Btr	Ala	Lys(Z)	Lys(Z)	Acp	Ser	Me

-13CZ 280726 B6

Tabulka Vila

V(21-38) [a]_D ²⁰ Sum. vzorec mol. hmot.

21.

Ac-Tyr-Lys(Z)-Lys(Z)-Ala-Gly(Me₂)-OEt

22.

Ac-Tyr-Lys(Z)-Lys(Z)-Ala-Ach-OEt .

Btr-Ala-Lys(Z)-Lys(Z)-Ala-Ach-OEt

24.

Kpl-Ala-Lys(Z)-Lys(Z)-Ala-Ach-OEt

25.

Btr-Ala-Lys(Z)-Arg(NO₂)-Gly-Gly(Et₂)-OEt

26.

Btr-Ala-Lys(Z)-Arg(NO₂)-Ala-Gly(Et₂)-OEt

27.

Kpl-Ala-Lys(Z)-Arg(NO₂)-Gly-Gly(Et₂)-OEt .

Kpl-Ala-Lys(Z)-Arg(NO₂)-Ala-Gly(Et₂)-OEt

29.

Ac-Tyr-Lys(Z)-Arg(NO₂)-Gly-Gly(Pr₂)-OEt

30.

31.

Kpl-Ala-Arg(NO₂)-Lys(Z)-Ala-Gly(Me₂)-OEt

Pal-Ala-Arg(NO₂)-Lys(Z)-Ala-Gly(Me₂)-OEt

32.

Kpl-Gly-Arg(No₂)-Arg(No₂)-Ala-Gly(Et₂)33 .

Kpl-Gly-Arg(No₂)-Arg(No₂)-Gly-Gly(Et₂)34.

35.

Kpl-Ala-Arg(NO₂)-Arg(No₂)-Ala-Achpt-OEt .

Kpl-Ala-Arg(N0₂)-Arg(N0₂)-Acb-Ser-OMe .

Pal-Ala-Arg(NO₂)-Arg(NO₂)-Acp-Ser-OMe

38.

Btr-Ala-Lys(Z)-Lys(Z)-Acp-Ser-OMe

- 9,2°	^C48^H65^N7°12 (932,1)
-10,4°	^C51^H69^N7°12 (990,1)
-18,7°	^C47^H69^N7°11 (908,1)
-18,2°	^C51^H77^N7°11 (964,2)
-10,8’	^C38^H62^N10°ll (835,0)
-19,7°	^C37^H60^N10°10 (820,9)
-11,9°	^C41^H68^N10°10 (877,1)
-17,8°	^C42^H70^N10°10 (891,1)
- 1,4’	^C43^H64^N10°12 (913,1)
-19,1°	^C40^68^N10°10 (863,0)
-15,6°	^C48^H82^N10°ll (975,3)
Et-20,7°	^C33^H61^N13°10 (815,9)
Et-16,l°	^C32^H59^N13°10 (801,9)
-29,4 ·	^C32^H57^N13°11 (799,9)
-13,5°	^C36^H65^N13°11 (856,0)
-18,4°	^C32^H57^N13°12 (815,9)
-19,4°	^C41^H75^N13°12 (942,1)
-17,3°	^C45^H65^N7°12 (896,0)

Optické rotace [a)_D ²⁰ byly měřeny v dimethylformamidu c = 0,2.

-14CZ 280726 B6

Tabulka VIII

1(1-38)	X	A	B	U	Q	W	R
1.	Pal	Ala	Lys	Lys	Ala	Apr	Et
2.	Ac	Leu	Lys	Lys	Ala	Apr	Et
3 .	Ac	Leu	Arg	Lys	Ala	Apr	Et
4.	Kpl	Leu	Arg	Lys	Ala	Apr	Et
5.	Btr	Leu	Lys	Lys	Ala	Apr	Et
6.	Btr	Ala	Lys	Lys	Ala	Apr	Et
7.	Lau	Ala	Lys	Lys	Ala	Apr	Et
8.	For	Phe	Lys	Lys	Ala	Apr	Et
9.	Ac	Leu	Lys	Arg	Ala	Apr	Et
10.	Kpl	Leu	Lys	Arg	Ala	Apr	Et
11.	Ac	Leu	Arg	Arg	Ala	Acp	Et
12.	Ac	Leu	Lys	Arg	Ala	Acp	Me
13.	Lau	Ala	Arg	Lys	Ala	Acp	Me
14.	Pal	Ala	Arg	Lys	Ala	Acp	Me
15.	For	Tyr	Lys	Lys	Ala	Acp	Me
16.	Ac	Leu	Lys	Lys	Ala	Acp	Me
17.	Btr	Leu	Lys	Lys	Asn	Acp	Me
18.	Kpl	Ala	Lys	Lys	Asn	Acp	Me
19.	Kpl	Leu	Arg	Lys	Asn	Acp	Me
20.	Kpl	Ala	Arg	Lys	Asn	Acp	Me
21.	Ac	Tyr	Lys	Lys	Ala	Gly(Me₂)	Et
22.	Ac	Tyr	Lys	Lys	Ala	Ach	Et
23 .	Btr	Ala	Lys	Lys	Ala	Ach	Et
24.	Kpl	Ala	Lys	Lys	Ala	Ach	Et
25.	Btr	Ala	Lys	Arg	Gly	Gly(Et₂)	Et
26.	Btr	Ala	Lys	Arg	Ala	Gly(Et₂)	Et
27.	Kpl	Ala	Lys	Arg	Gly	Gly(Et₂)	Et
28.	Kpl	Ala	Lys	Arg	Ala	Gly(Et₂)	Et
29.	Ac	Tyr	Lys	Arg	Gly	Gly(Pr₂)	Et
30.	Kpl	Ala	Arg	Lys	Ala	Gly(Me₂)	Et
31.	Pal	Ala	Arg	Lys	Ala	Gly(Me₂)	Et
32.	Kpl	Gly	Arg	Arg	Ala	Gly(Et₂)	Et
33 .	Kpl	Gly	Arg	Arg	Gly	Gly(Et₂)	Et
34.	Kpl	Gly	Arg	Arg	Acb	Ala	Et
35.	Kpl	Ala	Arg	Arg	Ala	Achpt	Et
36.	Kpl	Ala	Arg	Arg	Acb	Ser	Me
37.	Pal	Ala	Arg	Arg	Acp	Ser	Me
38.	Btr	Ala	Lys	Lys	Acp	Ser	Me
Tabulka Vlila
Příklad(1-	38) Sekvence			Sumární vzorec	[«1_D ²⁰
1. Pal-Ala-Lys-Lys-Ala	-Apr-OEt	^c40	H75N7O7.	2AcOH.H₂O	-28,9°
2. Ac-Leu	-Lys-Lys·	-Ala-	Apr-OEt	^C29	^h53ⁿ7°7·	2AcOH.4H₂O	-40,5°
3. Ac-Leu	-Arg-Lys·	-Ala-	Apr-OEt	^C29	H53N9O7.	2AcOH.2H₂O	-33,7°
4. Kpl-Leu-Arg-Lys-Ala	-Apr-OEt	^C35	^H65^N9°7 *	2AcOH.2H₂O	-33,0’

-15CZ 280726 B6

Tabulka Vlila (pokračování)

Příklad(1-38) Sekvence

Sumární vzorec [a]_D ²⁰

5. Btr-Leu-Lys-Lys-Ala-Apr-OEt

6. Btr-Ala-Lys-Lys-Ala-Apr-OEt

7. Lau-Ala-Lys-Lys-Ala-Apr-OEt

8. For-Phe-Lys-Lys-Ala-Apr-OEt

9. Ac-Leu-Lys-Arg-Ala-Apr-OEt

10. Kpl-Leu-Lys-Arg-Ala-Apr-OEt

11. Ac-Leu-Arg-Arg-Ala-Acp-OEt

12. Ac-Leu-Lys-Arg-Ala-Acp-OMe

13. Lau-Ala-Arg-Lys-Ala-Acp-OMe

14. Pal-Ala-Arg-Lys-Ala-Acp-OMe

15. For-Tyr-Lys-Lys-Ala-Acp-OMe

16. Ac-Leu-Lys-Lys-Ala-Acp-OMe ^C31^H57^N7°7 ^C28^H51^N7°7 ^C36^H67^N7°7

C31H49N7O7 ^C29^H53^N9°7 ^C35^H65^N9°7 ^C31^H57^N11°7 ^C30^H55^N9°7 ^C37^H69^N9°7 ^C41^H77^N9°7 ^C32^H51^N7°8 ^C30^H55^N7°7

2AcOH.2H₂O

2ACOH.2H₂O

2AcOH.2H₂O

2AcOH.H₂O

2ACOH.2H₂O

2AcOH.2H₂O

2ACOH.2H₂O

2AcOH.3H₂O

2ACOH.2H₂O

2AcOH.2H₂O

17. Btr-Leu-Lys-Lys-Asn-Acp-OMe

18. Kpl-Ala-Lys-Lys-Asn-Acp-OMe

19. Kpl-Leu-Arg-Lys-Asn-Acp-OMe ^C33^H60^N8°8’^2Ac0H·^2H2° ^C34^H62^N8°8’^2Ac0H·^2H2°

C^yHggNfθθθ·lAcOH·3H₂O

20.

21.

Kpl-Ala-Arg-Lys-Asn-Acp-OMe

Ac-Tyr-Lys-Lys-Ala-Gly(Me₂)-OEt ^32^53^7θ8* ²AcOH·2H₂O

22.

.

24.

25.

.

27.

28.

29.

30.

Ac-Tyr-Lys-Lys-Ala-Ach-OEt

Btr-Ala-Lys-Lys-Ala-Ach-OEt

Kpl-Ala-Lys-Lys-Ala-Ach-OEt ^C35^H57^N7°8‘^2Ac0H·^2H2° ^C31^H57^N7°7.2AcOH.2H₂O ^C35^H65^N7°7·^2Ac0H·^2H2°

Btr-Ala-Lys-Arg-Gly-Gly(Et₂)-OEt ^C29^H55^N9°7.2AcOH.2H₂O

Btr-Ala-Lys-Arg-Ala-Gly(Et₂)-OEt ^c3o^H57^N9°7.2AcOH.2H₂O

Kpl-Ala-Lys-Arg-Gly-Gly(Et₂)-OEt C₃₃H₆₃N_gO₇.2AcOH.2H₂O

Kpl-Ala-Lys-Arg-Ala-Gly(Et₂)-OEt

Ac-Tyr-Lys-Arg-Gly-Gly-(Pr₂)-OEt

Kpl-Ala-Arg-Lys-Ala-Gly(Me₂)-OEt ^C34^H65^N9°7’^2Ac0H·^2H2° ^C3 5^H59^N9°8 * ^2Ac0H·^2H2° ^32^61^9θ7 * ²AcOH.2H₂O

31. Pal-Ala-Arg-Lys-Ala-Gly(Me₂)-OEt C_4QH₇₇N_gO₇.2AcOH.4H₂O .Kpl-Gly-Arg-Arg-Ala-Gly (Et₂ ) -OEt C₃₃H₆₃N-_L1O₇.2AcOH. 2H₂O .Kpl-Gly-Arg-Arg-Gly-Gly (Et₂ ) -OEt ^C32^H61^N11°7.2AcOH. 2H₂O ,5’ ,2“ ,2’ ,9° ,5° ,3” ,4’ ,2“ ,4’ ,8’ ,2’ ,7° ,5“ ,6’ ,2° ,7° ,1° ,5’ ,2“ ,7° ,6° ,3“ ,0° ,9° ,1’ ,6’

34. Kpl-Gly-Arg-Arg-Acb-Ala-OEt

35. Kpl-Ala-Arg-Arg-Ala-Achpt-OEt

36. Kpl-Ala-Arg-Arg-Acb-Ser-OMe

37. Pal-Ala-Arg-Arg-Acp-Ser-OMe

38. Btr-Ala-Lys-Lys-Acp-Ser-OMe ^C32^H59^Nii⁰7·^2Ac°H.^2H2° -27,3° ^C36^H67^Nii°7·^2Ac0H·^2H2° 33,4° ^<232^R59^R11®8 * ²AcOH.2H₂O —38,6° ^C41^h77^NH°8 · ^2Ac0H· ^2H2° “³³,⁴° ^C29^H53^N7°8-^2A-^cOH,2H2^O ~²⁸'³’

-16CZ 280726 B6

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Kpl-Leu

K roztoku leucinu (26,2 g) v 4M NaOH, ochlazenému na -10 °C, byl během 50 min přidán kaproylchlorid (37,6 ml). Potom byl roztok míchán 40 min. při 0 °C a 2 h při teplotě místnosti. Potom byla reakční směs okyselena 10% HC1 na pH 2. Vyloučená bílá krystalická látka byla odfiltrována, promyta vodou a vysušena do konst. hmotnosti. Bylo získáno 44,1 g (86 %) surové látky. Krystalizací z AcOEt bylo získáno 35,9 (77 %) produktu o t. t. 121-124 °C. Obdobným způsobem byly připraveny všechny acylované aminokyseliny, uvedené v tabulce IV.

Z-Ala-Apr-OEt

K roztoku Z-Ala (100 ml), ochlazenému a EtOCO-Cl (5 ml); k reakčnímu roztoku (70 ml), uvolněný (11,2 g; 50 mmol) v na -10 °C, byl přidán N-Etp 5min míchání a chlazení (-10 roztok Apr-OEt odpovídáj ícího methylenchloridu (7 ml) °C) byl v methylenchloridu hydrochloridu (9,7 g; při 0 °C a 2 h při teppo přidán z

mmol) N-Etp (7 ml). Po 30 min míchání loté místnosti byl reakční roztok odpařen, odparek rozpuštěn v AcOEt a standardním způsobem I zpracován. Nekrystalický odparek byl zpracován bez izolace v dalším Ala-Apr-OEt stupni.

K roztoku Z-Ala-Apr-OEt (asi 45 mmol) v methanolu (200 ml) byla přidána suspenze 5% Pd/C (2,5 g) v toluenu (50 ml), a reakční směs byla hydrogenována v autoklávu 10 min při tlaku 2 MPa. Po odfiltrování katalyzátoru byl methanolický roztok co nejrychleji odpařen a zpracován v následujícím stupni.

Boc-Lys(Z)-Ala-Apr-OEt (lila)

K roztoku Boc-Lys(Z) (40 mmol) a N-Etp (6,4 ml) v DMFA (80 ml), ochlazenému na -15 ’C, byl přidán EtOCO-Cl (4 ml). Po 10 min míchání a chlazení (-10 °C) byl k reakčnímu roztoku přidán roztok Ala-Apr-OEt (připravený v předchozím stupni) v DMFA (50 ml). Po 2 h míchání při teplotě místnosti byl roztok odpařen a zpracován standardním způsobem II. Odparek byl krystalován z toluenu a bylo získáno 22,6 g (92 %) produktu o t. t. 142-143 ’C; [a]_D ²⁰ -24,7° (c = 0,2; methanol). Pro C₂₈H₄₂N₄O₈vypočteno 59,77 % C, 7,52 % H, 9,96 % N; nalezeno: 59,78 % C, 7,54 % H, 10,26 % N.

Obdobně byly připraveny podobné tripeptidy III, uvedené v tabulce I, resp. Ia.

HC1.Lys(Z)-Ala-Apr-OEt

K roztoku Boc-Lys(Z)-Ala-Apr-OEt (11,2 g; 20 mmol) v led. kyselině octové (20 ml) byl přidán 2,1 M roztok HC1 v kyselině octové (30 ml). Po 3 h stání při teplotě místnosti byl hydrochlo

-17CZ 280726 B6 rid vysrážen etherem. Krystalizaci z 2-propanolu a AcOEt bylo získáno 7,7 g (77 %) produktu. Pro ^C23^H35^N4°6.HC1.1H₂O (508,0) vypočteno 54,38 % C, 7,14 % H, 11,02 % N; nalezeno: 54,27 % C, 7,02 % H a 10,51 % N.

Boc-Lys(Z)-Lys(Z)-Ala-Apr-OEt(IVa)

K roztoku Boc-Lys(Z) (7 mmol) a N-Etp (1 ml) v DMFA (30 ml), vychlazenému na -15 ’C, byl přidán EtOCO-Cl (0,7 ml). Po 10 min míchání a chlazení (10 °C) byl k reakčnímu roztoku přidán roztok Lys(Z)-Ala-Apr-OEt v DMFA (25 ml), uvolněný z odpovídajícího hydrochloridu (3,5 g) N-Etp (1 ml). Po 2 h míchání při teplotě místnosti byl reakční roztok odpařen a nekrystalický odparek rozmíchán přídavkem vody (50 ml). Krystalická objemná sraženina byla odfiltrována, vysušena v exsikátoru a krystalována z kyseliny octové (5 ml) přídavkem 2-propanolu (50 ml). Po 12 h stání v lednici byl krystalický produkt odfiltrován, promyt etherem. Bylo získáno 4,5 g (77 %) produktu; [a]_D ²⁰ 11,9’ (c = 0,2; dimethylformamid).

Obdobně byly připraveny tetrapeptidy IV, uvedené v tabulce II, resp Ha.

HC1.Lys(Z)-Lys(Z)-Ala-Apr-OEt

K roztoku Boc-Lys(Z)-Lys(Z)-Ala-Apr-OEt (4,2 g; 5 mmol) v ledové kyselině octové (5 ml) byl přidán 2,1 M roztok HC1 v kyselině octové (7,5 ml). Po 3 h stání při teplotě místnosti byl hydrochlorid vysrážen etherem. Krystalizaci z kyseliny octové a 2-propanolu bylo získáno 6,4 g (84 %) produktu.

Ac-Leu-Lys(Z)-Lys(Z)-Ala-Apr-OEt(V2)

K roztoku Ac-Leu (347 mg; 2 mmol) a HOSuc (270 mg) v DMFA (10 ml), ochlazenému na 0 ’C, byl přidán DCCI (400 mg). Po 1 h míchání a chlazení (0 °C) byl přidán Lys(Z)-Lys(Z)-Ala-Acp-OEt v DMFA (10 ml), uvolněný z odpovídajícího hydrochloridu (1,55 g; 2 mmol) N-Etp (0,3 ml). Druhý den byla vyloučená DCHA odfiltrována, filtrát zahuštěn a nekrystalický odparek byl vysrážen 10% kyselinou citrónovou (20 ml), produkt odfiltrován a zpracován standardním způsobem II; přesrážením z DMFA a vody bylo získáno 560 mg (34 %) produktu o t.t. 253-255 °C; [a]p²⁰ -10,9’ (c =

0,2; dimethylformamid). Pro ^C45^H65^N7°11 (880,1) vypočteno:

61,42 % C, 7,44 % H a 11,14 % N; nalezeno 61,41 % C a 11,17 % N.

Obdobné byly připraveny pentapeptidy (1-20), uvedené v tabulce III, resp. lila.

Ac-Leu-Lys-Lys-Ala-Apr-OEt.2 AcOH.4H₂O(12)

K roztoku Ac-Leu-Lys(Z)-Lys(Z)-Ala-Apr-OEt (440 mg; 0,5 mmol) v AcOH (30 ml) byl přidán 5% Pd/C (45 mg) a reakční směs byla hydrogenována v autoklávu 1 h při tlaku 2MPa. Potom byl katalyzátor odfiltrován a nekrystalický odparek byl rozmíchán s etherem a vzniklý krystalický produkt byl odfiltrován a vysušen

-18CZ 280726 B6 v exsikátoru. Bylo získáno 302 mg (75 %) produktu [a]_D ²⁰ -40,5° (c = 0,2; methanol). Pro C_2gH₅₃N₇O₇.2 AcOH.4H₂O (731,9) vypočteno 49,28 % C, 8,65 % H, 12,19 % N; nalezeno: 49,25 % C, 7,70 % H a 11,73 % N.

Obdobným způsobem, tj. taktikou a strategií, byly připraveny všechny analogy s vestavěným pouze chráněným Lys(Z), uvedené v tabulce VIII, resp. Vlila.

Příklad 2

Boc-Arg(NO₂)-Lys(Z)-Ala-Apr-OEt (IVb)

K roztoku Boc-Arg(No₂) (2,25 g; 7 mmol) v DMFA (30 ml), vychlazenému na -10 °C, byl přidán N-Etp (1 ml) a EtOCO-Cl (0,7 ml). Po 10 min míchání a chlazení (-10 °C) byl k reakčnímu roztoku přidán roztok Lys(Z)-Ala-Apr-OEt v DMFA (25 ml), uvolněný z odpovídajícího hydrochloridu (3,5 g) N-Etp (1 ml). Další zpracování obdobné Boc-Lys(Z)-Lys(Z)-Ala-Apr-OEt, uvedeného v příkladě 1. Bylo získáno 5,8 g (76 %) produktu o t.t. 119-123 “C (nastává 115 °C).

HC1.Arg(N0₂)-Lys(Z)-Ala-Apr-OEt

Z výchozího Boc-Arg(N0₂)-Lys(Z)-Ala-Apr-OEt (3,05 g; 4 mmol) bylo podobným způsobem, jako je uvedeno v příkladě 1, získáno 2,88 g (kvant).

Kpl-Leu-Arg(N0₂)-Lys-(Z)-Ala-Apr-OEt (V4)

Z výchozího Kpl-Leu (515 mg; 2 mmol) byl získán podobným způsobem jako odpovídající Ac-Leu-analog, uvedený v příkladě 1 ve výtěžku 1,09 g (60 %) o t.t. 158-161 C.

Kpl-Leu-Arg-Lys-Ala-Apr-OEt. 2 AcOH, 2H₂O (14)

Byl připraven obdobným způsobem jako acetylovaný analog, uvedený v příkladě 1, s tím rozdílem, že tlak při hydrogenolýze byl zvýšen na 5 MPa a doba hydrogenolýzy prodloužena na 5 h; produkt byl získán ve výtěžku 59 %. Obdobným způsobem byly připraveny všechny analogy s vestavěným chráněným Arg(No₂), uvedené v tabulce VIII, resp Vlila.

Příklad 3

Btr-Ala-Lys(Z)-OMe(Vllb)

K roztoku Btr-Ala (4,8 g; 30 mmol) a OHSuc (3,5 g) v DMFA (30 ml), ochlazenému na 0 °C, byl přidán DCCI (6,6 g). Po 1 h míchání a chlazení (0 °C) byl přidán roztok Lys(Z)-OMe V DMFA (30 ml), uvolněného z odpovídajícího hydrochloridu (10 g;30 mmol)

N-Etp (4,4 ml). Po 2 h míchání při teplotě místnosti byl roztok odpařen a zpracován standardním způsobem I. Krystalizaci z AcOEt a PE bylo získáno 10,9 g (83 %) o t.t. 94-96 °C.

-19CZ 280726 B6

Obdobným způsobem byly připraveny N-acylované dipeptidmethylestery, uvedené v tabulce V.

Btr-Ala-Lys(Z) (VlIIb)

K roztoku Btr-Ala-Lys(Z)-OMe (4,4 g; 10 mmol) v methanolu (50 ml) byl přidán M NaOH (15 ml) a reakční roztok byl míchán při teplotě místnosti 1,5 h. Potom bylo pH reakčního roztoku upraveno na 7 4M HC1 a roztok odpařen. Odparek byl 3krát extrahován AcOEt, organické výtřepky vysušeny bezvodým síranem sodným a odpařeny. Krystalizací z AcOEt a PE bylo získáno 4,2 g (kvant.). Pro ^C21^H31^N3°6 (421,5) vypočteno: 59,84 % C, 7,41 % H, 9,97 % N;

nalezeno: 59,71 % C, 7,53 % H a 9,49 % N, t.t. 114-116 ’C.

Obdobným způsobem byly připraveny N-acylované dipeptid-kyseliny, uvedené v tabulce VI.

Z-Gly-Gly(Pr₂)-OEt

Z výchozího Z-Gly (4,2 g; 20 mmol) a Gyl(Pr₂)-OEt.HC1 (5,0 g; 20 mmol) byl DCCI metodou jako sloučenina VlIIb získán produkt ve výtěžku 71 % a t.t. 68-71 °C. Pro C₂₀H₃₀N₂O₄ (378,5) vypočteno: 63,47 % C, 7,99 % H, 7,40 % N; nalezeno: 62,50 % C, 8,07 % H a 7,32 % N. Obdobným způsobem byly připraveny Z-Gly-Gly(Et₂)-OEt, Z-Ala-Gly(Me₂)-OEt a Z-Ala-Gly(Et₂)-OEt jako nekrystalické sloučeniny.

Boc-Arg(N0₂)-Gly-Gly(Et₂)-OEt (Illn)

Byl připraven DCCI(OHSuc metodou z výchozích Boc-Arg(N0₂) a Gly-Gly(Et₂)-OEt, získaného hydrogenolýzou odpovídajícího nekrystalického Z-Gly-Gly(Et₂)-OEt na Pd/C za zvýšeného tlaku 2 MPa ve výtěžku 82 % a t.t. 155-156 ’C. Pro C₂₁H_3gN₇O₇ (517,6) vypočteno: 48,73 % C, 7,60 % H, 18,94 % N; nalezeno: 48,43 % C,

7,58 % H a 18,34 % N.

Obdobným způsobem byly připraveny sloučeniny III(l-o), uvedené v tabulce I, resp la.

Kpl-Ala-Lys(Z)-Arg(NO₂)-Gly-Gly(Et₂)-OEt (V27)

Byl připraven DCCI/OHSuc metodou, jak uvedeno v předchozích příkladech, z výchozího Kpl-Ala-Lys(Z) a HCl.Arg(NO₂)-Gly-Gly-(Et₂)-OEt, připravený acidolýzou odpovídajícího Boc-derivátu roztokem HCl/kyselina octová ve výtěžku 91 %. Pro ^c4i^H68^N10°10 (877,1) vypočteno: 56,15 % C, 7,82 % H, 15,97 % N; nalezeno: 55,97 % C, 7,95 % H a 15,44 % N.

Obdobným způsobem byly připraveny sloučeniny 21 a 25-33, uvedené v tabulce VII, resp. Vila.

Kpl-Ala-Lys-Arg-Ala-Gly(Et₂)-OEt.2 AcOH.2H₂O (127)

-20CZ 280726 B6

Byl připraven obdobným způsobem jako analog v příkladě 1 tlakovou hydrogenolýzou na Pd/C při 5 MPa ve výtěžku 69 %.

Obdobným způsobem byly získány konečné látky podle příkladů 22 až 38, uvedené v tabulce VIII, resp Vlila.

Průmyslová využitelnost

Pentapeptidické prekurzory biologicky účinných cyklických dipeptidů představují nový typ léčiv výhodných vlastností, terapeuticky použitelných v oblasti poruch centrálního nervového systému a metabolismu buněk.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

Pentapeptidické prekurzory biologicky účinných cyklických dipeptidů obecného vzorce I

X-A-B-U-Q-W-OR (I), kde

X = zbytek mastné kyseliny Cf až C^g,

A = zbytek peptidicky vázaného alaninu, fenylalaninu, glycinu, leucinu a tyrosinu,

B - U = zbytek peptidicky vázaného argininu a lysinu anebo jejich vzájemná kombinace,

Q = zbytek peptidicky vázaného alaninu, asparaginu, glycinu, šeřinu anebo W,

W = zbytek peptidicky vázané kyseliny

1-amino-l-cykloalkankarboxylové C₄ až C_g zbytek peptidicky vázaného alaninu, šeřinu nebo substituovaného C -dialkylglycinu obecného vzorce III (III),

-21CZ 280726 B6 kde

M = methyl, ethyl anebo propyl, anebo Q,

R = methyl- anebo ethylskupina.