CZ282794A3 - Pentapeptidic precursors of biologically active cyclic dipeptides - Google Patents

Description

Pentapeptidické prekurzory dipeptidů

Oblast techniky biologicky I účinnýcH^^cyklických

- T.J

Vynález se týká pentapeptidických prekurzorů biologicky účinných cyklických dipeptidů. Tyto sloučeniny nejsou sice samy o sobě biologicky účinné, ale působením endogenních proteolytických enzymů, například tzv. bázické endopeptidážy, dochází ku štěpení těchto sloučenin a ke vzniku nestálého C-koncového dipeptidesteru; tento intermediát pak spontánně cyklizuje v odpovídající spirocyklický dipeptid, tj. derivát 2, 5-dioxopiperazinu, který je biologicky účinný. Zmíněné pentapeptidické prekurzory je pak možno označit jako prekurzory s funkcí prodrugs.

Dosavadní stav techniky neaktivní aktivován hydrolýzou prekurzorů

Moderní terapie hledá takovou cílenou aplikaci farmaka, při které by aplikované léčivo nepoškozovalo zdravé buňky, resp. orgány a působilo až v místě určení, tj. v nemocném orgánu či tkáni. Tento základní požadavek splňuje moderní typ léčiva, tzv. prodrugs. Princip tohoto farmaka spočívá v tom, že biologicky prekurzor (prodrugs) je v cíleném nemocném orgánu zpravidla enzymatickou hydrolýzou: selektivní se generuje účinná látka (léčivo). U peptidických tuto iniciální reakci spouštějí specifické proteolytické enzymy. Zpravidla se jedná o jednostupňovou reakci, kdy se uvolňuje přímo aktivní látka (léčivo).

U látek typu prodrugs se jedná o dvě na sobě závislé reakce, tj. o první enzymatickou (limitující) reakci, která je podřízena selektivnímu proteolytickému enzymu a druhou spontánní reakci (chemickou), tj. kdy vzniklý neúčinný dipepti-dester samovolně cyklizuje (konverguje) v odpovídající derivát 2, 5-dioxopiperazinu. Tento princip je znám^AO 277 405, EP č. 249 434, Life Sci. 50, 187 (1992), Collect. Czech. Chem. Commun. 57, 179 (1992).

V tomto případě se jednalo o kratší peptidy, tj. tria tetrapeptidy. Rovněž enzymatická aktivace byla omezena na aminopeptidázy a endogenní monobázický enzym. Princip konverze neúčinného prekurzorů v aktivní komponentu (léčivo) lze vyjádřit

- 2 schematicky následujícím sledem reakcí: X - A- B - OR -> A - B - OR kde X je aminokyselina anebo i- 73 > O co 3 O -< 7).

Ξ ί^Λ >

o ° 0 Ή £ ykie( A acylaminokyselina anebo acyl-dipeptid; A a B jsou aminokyselinové zbytky a R je alkyl.

Další velkou předností těchto látek (prekurzorů) je jejich vysoká rozpustnost ve vodě, což představuje řadu výhod při přípravě lékových forem. Je obecně známo, že cílené látky, tj. deriváty 2, 5-piperazindionu, jsou velmi špatně rozpustné, např. soubor chráněných derivátů s kyselinou i-amino-1-cykloalkankarboxylovou [ AO č. 231 237, Collect. Czech. Chem. Commun. 58, 2987 (1993), 59, 195 (1994)]. Nízká rozpustnost ve vodě snižuje (ale i často vylučuje) přípravy účinného farmaka ve vyšší koncentraci. Tato skutečnost snižuje potenciální farmakologické spektrum s ohledem na biologickou dostupnost.

Podstata vynálezu

Tyto nevýhody se podařilo odstranit podle vynálezu pentapeptidickými prekurzory biologicky účinných cyklických dipeptidů obecného vzorce I

... B. - U - Q -V -OR (I), kde

X = zbytek mastné kyseliny C až C ,

A = zbytek peptidický vázaného alaninu, fenylalaninu, glycinu, leucinu a tyrosinu,

B — U = zbytek peptidický vázaného argininu a lysinu anebo jejich vzájemná kombinace,

Q = zbytek peptidický vázaného alaninu, asparaginu, glycinu, šeřinu anebo V,

V = zbytek peptidický vázané kyseliny

1-amino-1-cykloalkankarboxylové až C obecného vzorce II . '

(Π), kde n = 0 až 5, zbytek peptidický vázaného alaninu, šeřinu nebo substituovaného C^^-dialkylglycinu obecného vzorce lil

COOH kde

M = methyl, ethyl anebo propyl, anebo Q, ‘4

-r atom kyslíku——

R = methyl- anebo ethylskupina.

Vynález využívá poznatku, (ΠΙ), že chemická struktura látek obecného vzorce J, tj. acylovaných pentapeptid-esterů, je charakterizována acylovaným tripeptidem v N-terrainálni Části peptidické sekvence s vestavěným párem bázických aminokyselin, argininu anebo lysinu, a to buď v homogenním sledu, tj. Arg-Arg anebo Lys-Lys, anebo v heterogenním sledu, tj. Ařg-Lys anebo Lys-Arg; acylový zbytek může zahrnovat řadu mastných kyselin (převážně hydrofobních), včetně hydrofílní formylové skupiny. Funkční složkou je C-terminální dipeptidester, jehož jednu aminokyselinu tvoří cyklická aminokyselina typu 1-amino-1-cykloal kankar box yl ové kyseliny (cyklický typ), anebo substituovaný oí oť ^ř derivát glycinu C -dialkylglycin (otevřený typ); druhá aminokyselinová komponenta je hydrofobní anebo hydrofílní aminokyselina.

Je známo, že sekvence dibázických aminokyselin, argininu a lysinu, je nejčastěji štěpenou vazbou vysokomolekulárních celků, tzv. pre-pro-hormonů anebo pro^ hormonů, tzv. dibázickou endopeptidázou (in Protein Recognition of Immobilized Ligands js*r·133-140, 1989, Alan R. Liss, lne., New York, USA Jedná se o enzym anebo enzymy, které mají nezastupitelnou funkci u mnohých spouštěcích reakcí (aktivaci hormonů). Ve spojitosti s tímto vynálezem je zvláště rozhodující, že tento enzym či enzymy se vyskytují ve zhoubných nádorech, například,cysteinová proteináza [ (Int. J. Cancer 49, 341-346 (1991)]j anebo jako některé serinové proteinážy [ Eur. J. Respir. Dis. . 71, 434-443 (1987)]. Z dalších enzymů_t preferujících dibázickou sekvenci, je např. kathepsin B/ patřící rovněž mezi cysteinové proteinážy. Tento enzym má významnou úlohu v destrukci komponent extracelulárni matrire při invazi nádorových buněk. Rovněž je známo, že aktivita kathepsinu B, sdružená s pla>matickou membránou nádorových buněk, koreluje s jejich metastatickým potenciálem [Seminars in Cancer Biology 1, 137-152 (1990)]. Protože je známo, že existují různé bazické endopeptidázy s převažující ,specificitou k různým aminokyselinovým variantám, např. Arg-Arg [ Bioscience Reports 12, 445-451 (1992)], anebo v kombinované variantě Arg-Lys, případně v inverzní formě [ J. Biochem. 110, 806-811 (1991)], je možné účelnou a racionální kombinací dubletu bázického páru dosáhnout vysokého stupně specificity podle žádaného účelu.

Pentapeptidické prekurzory biologicky účinných cyklických dipeptidů obecného vzorce I lze například připravovat tak, že C-terminální ester aminokyseliny se kondenzuje š vhodně aktivovanou předcházející acylaminokyselinou, například metodou směsných anhydridů. Odstraněním chránící' skupiny z N-chráněného dipeptidů, například hydrogenolýzou, se získá volný dipeptidester, který se opět kondenzuje s předcházející chráněnou aminokyselinou. Postup se opakuje až do výstavby celé peptidické sekvence, viz schéma 1, Další možný způsob spočívá v tom, že část sekvence, například C-terminální tripeptid, se kondenzuje s N-acylovanou dipeptid-kyselinou. Tento způsob syntézy, tzv. fragmentovou kondenzací, je jako jeden ze způsobů vyznačen na schématu 2.

Syntéza pentapeptidických prekurzorů podle vynálezu byla provedena syntézou v roztoku, ale lze ji provést také například syntézou na pevné fázi, anebo enzymatickou syntézou. Syntetické postupy zahrnují takové metody a chránící skupiny, které umožňují průmyslovou výrobu: kondenzační činidla (anhydridová metoda, aktivní ester) a chránící skupiny (benzyloxykarbonyl-, terč, butyloxykarbonyl-, nitro^skupina). Deblokace chránící skupiny, například Z-skupiny nebo nitro^skupiny, se s výhodou provádí hydrogenolýzou za zvýšeného tlaku a v případě Boc-skupiny acidolýzou roztokem chlorovodíku v kyselině octové. Cílové látky byly izolovány jako diacetáty. Jsou to sloučeniny stálé na vzduchu a velmi dobře rozpustné ve vodě. Tato vlastnost se výhodně uplatňuje při přípravě lékových forem (injekce, infuzní « roztoky, sprg^e nebo kapky). Vzhledem ke své chemické struktuře jsou sloučeniny obecného vzorce I rezistentní vůči digestivním enzymům (C-terminální dipeptid), je možné je účelně aplikovat jako perorálně účinné formy, například tablety, tobolky, dražé, granulát apod. , anebo lze tyto sloučeniny upravovat do takových lékových forem, které umožňují topickou aplikaci, jako jsou například masti, krémy, emulze, gely, nebo formy rektální, popřípadě intravaginální, jako jsou čípky, mikroklysmata anebo globule.

Transformace neúčinného prekurzoru v biologicky aktivní cyklický dipeptid byla sledována in vitro vysokoúčinnou tenkovrstevnou chromatografií (HPTLC) u Ac-Leu-Arg-Arg-Ala- Acp-OEt, Pal- Ala-Arg-Lys-Ala- Acp-OMe a Lau-Ala-Arg-Lys-Ala-Acp-OMe. Během 1 h dochází ke vzniku Ala-Acp-OEt, resp. Ala-Acp-OEt a v druhé hodině již nastává spontánní cyklizace v žádaný produkt, tj. cyklo( Ala-Acp). Jako zdroj enzymu byl použit kathepsin B (cysteinová proteináza), který se významně uplatňuje v proliferaci nádorových buněk a homogenátu alveolárních makrofágů.

Strategie a taktika syntézy pentapeptidických prekurzorů •z biologicky účinných cyklických dipeptidů je vyznačena schématy

I a 2 a všechny meziprodukty, včetně konečných látek, jsou zachyceny na schématu la a 2a . Schéma 1, resp. la, představuje postupnou syntézu, tzv. postup step-vise. Soubor dipeptid-esterů II představuje (s výjimkou Z-dy-Gly(Pr )-OEt) 2 nekrystalické látky; tyto sloučeniny byly připraveny známým způsobem [ Collect. Czech. Chem. Commun. 57, 179 (1992)]. Soubor sloučenin Ill(a-q) (chráněné tri peptid-estery) je identifikován v tabulce I a charakterizován v tabulce la. Soubor sloučenin IV(a-k) (chráněné tetrapeptid-estery) je identifikován v tabulce

II a charakterizován v tabulce Ila. Soubor sloučenin V(l-20) (chráněné pentapeptid-estery) je identifikován v tabulce III a charakterizován v tabulce lila.

Schéma 2, resp. 2á představuje fragmentovou kondenzaci.

'+

Acylované aminokyseliny Vl(a-i) jsou charakterizovány v tabulce IV, a příslušné dipeptid-estery Vll(a-f) v tabulce V a odpovídající dipeptid-kyseliny VlII(.a-f) v tabulce VI. Sloučeniny V( 21-38) (chráněné pentapeptid-estery) podle schématu 2, resp. 2a jsou identifikovány v tabulce VII a charakterizovány v tabulce Vila.

Konečné látky (sloučeniny obecného vzorce I) jsou identifikovány v tabulce VIII, tj. podle schématu Ia sloučeniny 1(1-20) a podle schématu 2a sloučeniny 1(21-38) a všechny pak charakterizovány v tabulce Vlila, tj. 1(1-38).

Vynález pentapeptidických prekurzorů biologicky účinných cyklických dipeptidů je blíže ilustrován, ale není nijak omezen, v následujících příkladech provedení. Použité zkratky a symboly mají následující význam:

Ala = alanin_z Arg = arginin, Asn = asparagin, Gly = glycin

Leu = leucin,

Lys = lysin,

Phe = fenylalaninj , A. ···-·.····

- Ser = serin,

Tyr = tyrosin>

Apr = kyselina 1-amino-1-cyklopropankarboxylováj .Acb..“¹ kyselina 1-amino-1-cyklobutankařboxýlová_T

Acp = kyselina 1-amino-1-cyklopentankarboxylová, Ach = kyselina 1-amino-1-cyklohexankarboxylová, Achpt = kyselina 1-amino-1-cykloheptankarboxylováj Gly(Me ) = C⁴^'^-dimethylglycin,

Gly( Et^) = C⁴^'^ - diethylglycin ,

Gly(Pr^) = -dipropylglycin *

Z = benzyloxykarbonyl,

Boc- = terč. -butyloxykarbonyl_z

NO - = nitroskupina ,

OMe = methoxyskupina,

OEt = ethoxyskupina,

For = forraylová skupina,

Ac = acetylová skupina,

Btr = butyrylová skupina_}

Kpl = kaproylová skupina,

Lau = laurylová skupina _f

-Pal = palmitoylová skupina,

AcOH = kyselina octová ,

DMFA = dimethylformamid,

AcOEt - octan ethylnatý,

DCCI - N, Ν’- dicyklohexylkarbodiimid HOSuc = N-hydroxysukcinimid ,

DCHU = N, Ν’-dicyklohexylmočovina , EtO-CO-Cl = chlormravenčan ethylnatý.

. Pr - propyl.

Ί

Standardní způsob j: Surový reakční produkt se rozpustí v postupně se vytřepe 1M HC1, vodou, 5% NaHCO , vodou, 3 bezvodým Na^SO^ a odpaří.

Standardní způsob & Surový reakční produkt se rozpustí v postupně se vytřepe 1% kyselinou citrónovou, vodou, 5% vodou, vysuší se bezvodým Na^SO^ a odpaří.

Veškerá odpařování se prováděla ve vakuu (20 mm) na vakuové odparce.

AcOEt a vysuší

AcOEt a

NaHCO , 3 rotační

Vysvětlení symbolů, používaných v příkladech provedení: f-í-Etp = N-ethylpiperidin *

PE = Petrolether, ·«

Schéma 1

Obecné schéma syntézy pentapeptidů (step-vise)

-3 * 4

B U Q

X

Boc = Terč. - butyloxykarbonyl,

Z = Benzyloxykarbonyl_T

Y₁ = Chrániči skupina pro -aminoskupinu lysinu (benzyloxykarbonylová skupina);

Y₂ = Chrániči skupina pro . N-guanidinovou skupinu argininu (nitroskupina).

- 9 Schéma la

V - OR)

V - OR)

Boc

V(l-20)

V

- OR

->U-A-B-U-Q-V-OR

1(1-20)

X 10

Tabulka I

Ill(a-q)	u	Q	V	R
a	Lys( Z)	Ala	Apr	Et
b	Arg( NO )	Ala ’	Apr	Et
c	Arg( NO^)	Ala	Acp	Me
d	Arg(NOp	Ala	Acp	Et
e	Lys( Z)	Ala	Acp	Me
f	Arg( NO^)	Acp	Ser	Me
g ;	Lys(Z)	Acp	Ser	Me
h	Lys( Z)	Ala	Acb	Et
i	Lys( Z)	Ala	Ach	Et
j	.»« -» Arg( NO )	~ Ala ......... T	— Achpt* *	Et
k	Arg( NO )	Acb	Ser	Me
1	Arg( NO^)	• Gly	dy(Pr )	Et
m	Lys( Z)	Ala	Gly(Me )	Et
n	Arg( NO ) 2	Gly.	Gly(Et ) 2	Et
o	Arg(NO ) 2	Ala	Gly(ET )	Et
P	Lys(Z)	Asn	2 Acp	Me
q	Arg( NO^)	Acb	Ala	Et

Tabulka Ia

IlI(a-q)	20
[<>ID	Sumární vzorec mol. hmotnost
a Boc-Lys(Z)-Ala-Apr-OEt	-24. 7”	C H NO 28 42 4 8 (562, 7)
b Boc-Arg(NO ) - Ala-Apr-OEt 2	-31, 2*	C Η N 0 20 35 7 8 (501, 6)
c Boc-Arg(NO ) - Ala- Acp-OMe 2	-	C Η N O 21 38 7 8 (515, 6)
d Boc-Arg(NO )-Ala-Acp-OEt 2 7	-20, 4*	C Η N O . H 0 22 39 7 8 2 (529,6)
e Boc- Lys( Z) - Al a- Acp- OMe	-27, 9°	C Η N O . 2H O 29 44 4 8 2 (612,6)
f Boc-Arg(NO )-Acp-Ser-OMe 2	-20,9’	C Η N O 21 37 7 9 (531,6)
g Boc-Lys( Z)-Acp-Ser-OMe	-13, 4*	C Η N 0 29 44 4 9 (592,7)
h Boc-Lys( Z)-Ala-Acb-OEt	-10, 9“	C Η N O 29 44 4 8 (576, 7)
i Boc- Lys ( Z) - Al a- Ach- OEt	-25,8’	C Η N 0 31 48 4 8 (604, 7)
j Boc- Arg( NO ) - Al a- Achpt- OEt 2	-17, 0’	C H NO 24 43 7 8 (557,6)
k Boc-Arg(NO )-Acb-Ser-OMe 2	-10, 0’	C Η N O 20 35 7 9 (517, 6)

Tabulka la (pokračováni)

20 Ill(a-q) (a)	Sumární vzorec mol. hmotnost
1 Boc-Arg(NO )-Gly-dy(Pr )-OEt - 3,95’ 2 2	C Η N 0 23 43 7 7 (545,6)
m Boc-Lys(.Z) - Ala-Gly( Me^)-OEt -28,2’	C Η N 0 28 44 4 8 (564,7)
n Boc-Arg(NO )-dy-Gly(Et )-OEt -5,9’ 2 2	C Η N 0 21 39 7 7 --( 517,-6)-^ * —
o Boc-Arg(N0 ) - Ala-Gly( Et )-0Ετ -24,3° 2 2	C H NO 23 41 7 7 (531,6)
p Boc-Lys(Z)-Asn-Acp-OMe -13,8’	C Η N 0 30 45 5 9 (619, 7)
q Boc-Arg(NO ) - Acb- Ala-OEt -29, lů 2	C Η N 0 21 37 7 8 (515, 6)
20 4; ' Optická rotace [ a] byla měřena v metanolu;	c = 0, 2

Tabulka II

I V( a- k)	B	u	Q	V	i R.
a	Lys( Z)	Lys( Z)	Ala	Apr	Et
b	Arg( N02)	Lys( Z)	Ala	Apr	Et
c	Lys( Z)	Arg( NO2)	Ala	Apr	Et
d	Arg(NO )	Arg( NO ) 2	Ala	Acp	Et
e	Arg( NO )	Lys( Z)	Ala	Acp	Me
f	Lys( Z)	Arg( NO2)	Ala	Acp	Et
g	Lys(Z)	Lyš( Z)	Asn	Acp	Me
h	Lys( Z)	Lys( Z)	Ala	Acp	Me
i	Arg( NO2)	Arg( N02)	Ala	Acp	Me
j	Lys( Z)	Arg(N02)	Ala	Acp	Me
k	Arg( NO )	Lys( Z)	Asn	Acp	Me

Tabulka Ila

IV(a-k)	20
	Sumární vzorec mol. hmotnost
a Boc- Lys( Z) - Lys( Z) - AI a- Apr- OEt	-11, 9“	C Η N O 42 60 6 11 (825,0)
b Boc- Arg( NQ^) ~ ^ys( Z) - Ala- Apr- OEt	-11, 7’	C Η N 0 34 53 9 11 (763,9)
- * · · c Boc-Lys( Z) -Arg(NO )- Ala-Apr-OEt Z	- 9,9°	-í C H NO 34 53 9 11 ( 763, 9) * -o-.-*·* · -*** - ·'·***
d Boc-Arg(NO )-Arg(NO )-Ala-Acp-OEt Z Z	- 6, 9*	C Η N 0 28 50 12 11 (730, 8)
e Boc- Ar g( NO^) - Lys( Z) - AI a- Acp- OMe	- 9,6*	C Η N 0 35 55 9 11 ( 777, 9)
f Boc-Lys ( Z)-Ar g( NO )-Ala-Acp-OEt 2	-10, 5*	C Η N 0 36 57 9 11 (809, 9)
« g Boc- Lys( Z) - Lys( Z) - Asn- Acp- OMe	- 9,4’	C Η N 0 44 63 7 12 (882, 0)
h Boc- Lys (Z) - Lys( Z) - AI a- Acp- OMe	-12, 6’	C Η N O 43 62 6 11 (839, 0)
i Boc-Arg(NO )-Arg(NO )-Ala-Acp-OMe 2 2	4 - 6,5*	C H N O 27 48 12 11 (716,7)
j Boc- Lys( Z) - Arg( NO ) - Ala- Acp- OMe Z	-10, 5’	C Η N 0 35 55 9 11 (777, 9)
k Boc-Arg(NO )-Lys( £)-Asn-Acp-OMe 2 *	+ 3, 2’	C Η N 0 36 56 10 12 (820,9). .....

, ²θ

Optická rotace [ a] byla měřena v dimethylformamidu; c = 0, 2

Tabulka III

V(l-20)	X	A	B	U	Q	V	R
1.	Pal	Ala	Lys( Z)	Lys( Z)	Ala	Apr	Et
2.	Ac	Leu	Lys( Z)	Lys( Z)	Ala	Apr	Et
3.	Ac	Leu	Arg( NO^)	Lys( Z)	Ala	Apr	Et
4.	Kpl	Leu	Arg( NO )	Lys( Z)	Ala	Apr	Et
5.	Btr	Leu	Lys( Z)	Lys( Z)	Ala	Apr	Et
6.	Btr	Ala	Lys( Z)	Lys( Z)	Ala	Apr	Et
7.	Lau	Ala	Lys( Z)	Lys( Z)	Ala	Apr	Et
8.	For	Phe	Lys( Z)	Lys( Z)	Ala	Apř	Et
9.	Ac	Leu	Lys( Z)	Arg( NO ) 2	Ala	Apr	Et
10.	Kpl	Leu	Lys( Z)	Arg(NO2)	Ala	Apr	Et
11.	Ac	Leu	Arg(N02)	Arg( NO2)	Ala	Acp	Et
12.	Ac	Leu	Lys( Z)	Arg(NO^)	Ala	Acp	Me
13.	Lau	Ala	Arg( NOp	Lys( Z)	Ala	Acp	Me
14.	Pal	Ala	Arg( NO^)	Lys( Z)	Ala	Acp	Me
15,	For	Tyr	Lys( Z)	Lys( Z)	Ala	Acp	Me
16.	Ac	Leu	Lys( Z)	Lys(Z)	Ala	Acp	Me
17.	Btr	Leu	Lys( Z)	Lys( Z)'	Asn	Acp	Me
18.	Kpl	Ala	Lys( Z)	Lys(Z)	Asn	Acp	Me
19.	Kpl	Leu	Arg( NO )	Lys (Z)	Asn	Acp	Me
20.	Kpl	Ala	Arg(NO	Lys( Z)	Asn	Acp	Me

Tabulka lila

V(l-20)	20
	Sumární vzorec mol. hmotnost
1. Pal- Ala- Lys( Z) - Lys( Z) - Ala- Apr- OEt	-14, 6°	C Η N 0 56 87 7 11 (1 034, 3)
2. Ac- Leu- Lys( Z) - Lys( Z) - Ala- Apr- OEt	-10, 9’	C Η N O 45 65 7 11 (880, 3)
3. Ac-Leu-Arg( NO ) - Lys( Z) - Ala-Apr-OEt 2	-12, 3°	C Η N 0 37 58 10 11 (818,9)
4; -Kpl-Leu-Arg( NO ) -Lys( Z) - Ála-Apr-OEt Z	-12, 8*	C Η N 0 43 70 10 11 (903,1)
5. Btr- Leu- Lys( Z) - Lys( Z) - Ala- Apr- OEt	-13, 9°	C Η N 0 47 69 7 11 (908, 1)
6. Btr- Ala- Lys( Z) - Lys( Z) - Ala- Apr- OÉt 1	-12, 5’	C Η N O 47 61 7 11 (900, 0)
7. Lau- Ala- Lys( Z) - Lys( Z) - Ala- Apr- OEt	-11, 0’	C Η N 0 52 80 7 11 (979,2)
8. For- Phe- Lys( Z) - Lys( Z) - Ala- Apr- OEt	-4, 6’	C Η N 0 47 61 7 11 (900, 0)
9. Ac-Leu-Lys(Z)-Arg(NO )-Ala-Apr-OEt Z	-12, 3’	C Η N O 37 58 10 11 (818,9)
10. Kpl-Leu-Lys(Z)-Arg(NO )-Ala-Apr-OEt Z	-11, 9	C Η N O 43 70 10 11 (903,1)
11. Ac-Leu-Arg( NO )-Arg(N0 ) - Ala-Acp-OEt Z Z	-13, 1’	C Η N O . Η 1 31 55 13 11 2 (803, 9)

Tabulka lila (pokračováni)

V(l-20)	20 •-'d	Sumární vzorec mol. hmotnost
12.	Ac- Leu- Lys( Z) Arg( NO^) - Ala- Acp- OMe	-11, 1·	♦- C Η N O 39 62 10 11 (847,0)
13.	Lau- Ala- Arg( NO ) - Lys( Z) - Ala- Acp- OMe 2	-11, 6*	C Η N 0 45 75 10 11 (932, 0)
14.	Pal- Ala- Arg( NO^) - Lys( Z) - Ala- Acp- OMe	-10, 4*	C Η N O 49 82 10 11 (987,1)
15.	For- Tyr- Lys( Z) - Lys( Z) - Ala- Acp- OMe	- 5, 3’	C Η N O 48 63 7 12' (930,1)
16.	Ac- Leu- Lys( Z) - Lys( Z) - Ala- Acp- OMe	-11, 6	C Η N O 46 67 7 11 (894, 1)
17.	Btr- Leu- Lys( Z) - Lys( Z) - Asn- Acp- OMe	- 7,3’	C Η N O 47 69 7 12 (908,1)
18.	Kpl- Ala- Lys( Z) - Lys( Z) - Asn- Acp- OMe	-12, 9’	C Η N O 50 75 8 12 (980, 2)
19.	Kpl- Leu- Arg( NO )*Lys(Z)-Asn-Acp*OMe 2	- 5.2’	C Η N 0 45 73 11 12 (960,1)
20..	Kpl- Ala- Arg( NO ) - Lys( Z) - Asn- Acp* OMe 2i	6, 0’	C Η N O 42 68 11 12 (919, 1)

Optická rotace [ a] byla měřena v dimethylformamidu; c

0,2

Schéma 2

Obecné schéma syntézy pentapeptidú (fragmentoyá kondenzace 2+3)

2 3

A B U

V

X

X

	(VIII)	/Y2 u	/Y1
- -		Ull íl /Y2		(V)
	. '	/H+	/H+	(O

- OEt (OMe)

OEt μ

OEt.

Y^ = Chrániči skupina pro £-aminoskupinu lysinu (behzyloxykarbonylová skupina)^ = Chrániči skupina pro N-guanidinovou skupinu argininu ( nitroskupina).

Schéma 2a

t

VI	X	A	VII	X	A	B
a	Ac	Tyr( Ac)	a	Ac	Tyr( Ac)	Lys(Z)
b	Btr	Ala	b	Btr	Ala	Lys( Z)
c	Btr	Leu	c	Kpl	Gly	Arg( NO
d	Kpl	Gly	d	Kpl	Ala	Lys( Z)
e	Kpl	Ala	e	Kpl	Ala	Arg( NO
f	Lau	Ala	f	Pal	Ala	Arg( NO
g	Pal	Ala

VIII	X	A »	B
a	Ac	Tyr	Lys( Z)
b	Btr	Ala	Lys( Z)
c	Kpl	Gly	Arg(NO Ϊ
d	Kpl	Ala	Lys( Z)
e	Kpl	Ala	Arg(N02i
f	Pal	Ala	Arg(NO )

Tabulka IV

Vl(a-i)	Teplota tání ’ C 20 1 D	Sumární vzorec mol, hmotnost
a Ac- Tyr( Ac)	172-175 “C X -46,5”	C H NO 13 15 5 (265, 3)
b Btr-Ala	95-98 C -38, 4’	. C H NO 7 13 3 (159, 2)
c Kpl-Gly	100-103 “C	C H NO 10 19 3 (210; 3)
d Kpl-Ala	62-65 “C -25,0“	C H NO 11 21 3 (215,3)
e Btr-Gly	57-60 “C	C H NO 6 11 3 (145,2)
f Lau- Ala	68-70 C -16,5“	C H NO 15 30 3 (272, 4)
g Pal-Ala	93-95 “C	C H NO 19 37 3 (327.5)
h Btr-Leu	126-129 “C -24,6’ z >	C H NO 10 19 3 (201,3)
i Kpl-Leu	121-124 “C -T9, 5“	C H NO 14 27 3. (257,4)

Optická rotace [ a] byla měřena v methanolu; c vodě; c = 1.

0. 2. ^X Ve

Tabulka V

Vll(a-f)	20
(“]D	Sumární vzorec mol. hmotnost
a Ac- Tyr( Ac) - Lys( Z) - OMe	+5,1’	Č Η N 0 28 35 3 8 (541.6)
b Btr- Ala- Lys( Z) - OMe	-29, 1’	C Η N 0 22 33 3 6 (435,5)
c Kpl-Gly-Ar g( NO )-OMe 2	+5, 7°	C H NO 17 32 6 6 (416, 5)
d Kpl-Ala-Lys(Z)-OMe	-26,6·	C Η N 0 26 41 3 6 (491, 6)
e Kpl-Ala-Arg(NO )-OMe 2	-31, 9’	C Η N 0 18 34 6 6 (430,5)
f Pal- Ala- Arg( NO )-OMe 2	-20, 2’	C Η N 0 26 50 6 6 (542, 7)

Tabulka VI

VIII	20’
D	Sumární vzorec mol. hmotnost
a Ac- Tyr- Lys( Z)	+13, 8’	C Η N 0 25 31 3 7 (485,6)
b Btr- Ala- Lys( Z)	-17,8’	C Η N 0 21 31 3 6 (421,5)
c Kpl - G1 y- Arg( ŇO^)	+2,9*	C H NO 16 30 6 6 (402,5)
d-Kpl-Ala-Lys( Z) ’	-17,8*	C Η N Ó 25 39 3 6 (477,6)
e Kpl-Ala-Arg( NO ) 2	-18,3’	C H NO 17 32 6 6 (416,.5)
f Pal-Ala-Arg( NO^)	-10, 6’	C Η N 0 25 48 6 6 (528, 7)

Tabulka VII

V(21-38)	X	A	B	U	Q	V	R
21.	Ac	Tyr	Lys( Z)	Lys( Z)	Ala	Gly(Me ]	Et
22.	Ac	Tyr	Lys( Z)	Lys( Z)	Ala	Ach	Et
23.	Btr	Ala	Lys( Z)	Lys( Z)	Ala	Ach	Et
24.	Kpl	Ala	Lys( Z)	Lys(Z)	Ala	Ach	Et
25.	Btr	Ala	Lys( Z)	Arg(N02)	Gly	Gly(Et2)	Et
26.	Btr	Ala	Lys( Z)	Arg(NO2)	Ala	Gly(Et2)	Et
27.	Kpl	Ala	Lys( Z)	Arg(N02)	Gly	Gly(Et2)	Et
28.	Kpl	Ala	Lys(Z)	Arg( N02)	Ala	dy(Et2)	Et
29.	Ac	Tyr	Lys(Z)	Arg( NO )	Gly	Oly(Pr2)	Et
30.	Kpl	Ala	Arg( NO^)	Lys(Z)	Ala	dy(Me )	Et
31.	Pal	Ala	Arg(N0 )	Lys(Z)	Ala	Gly( Mep	Et
32.	Kpl	Gly	Arg(NO^)	Arg( N02)	Ala	Gly(Me2)	Et
33.	Kpl	Cly	Arg(N02)	Arg( N02)	Gly	Gly(Et )	Et
34.	Kpl	Gly	Arg(NOz)	Arg(N02)	Acb	Ala	Et
35.	Kpl	Ala	Arg( NO )	Arg(N02)	Ala	Achpt	Et
36.	Kpl	Ala	Arg( N02)	Arg( N02)	Acb	Ser	Me
37.	Pal	Ala	Arg( NO2)	Arg( N02)	Acp	Ser	Me
38.	Btr	Ala	Lys( Z)	Lys(Z)	Acp	Ser	Me v

Tabulka Vila

V(21-38)	20 [ a] Sum. vzorec D mol. hmot.
5* 21. Ac-Tyr-Lys( Z)-Lys(Z)- Ala-Gly(Me )-ΟΕτ 2	-9, 2° C H NO 48 65 7 12 (932, 1)
22. Ac-Tyr-Lys( Z) - Lys( Z) - Ala-Ach-OEt	-10, 4’ C H NO 51 69 7 12 (990, 1)
23. Btr-Ala-Lys( Z)-Lys( Z)-Ala-Ach-OEt	-18, 7’ C H NO 47 69 7 11 (908,1)
— -t -	--------- — -
24. Kpl- Ala- Lys( Z) - Lys( Z) - Al a- Ach- OEt	-18, 2’ C H NO 51 77 7 11 ¢964,2)
25. Btr-Ala-Lys( Z) - Arg( NO )-Gly-Gly( Et )-OEt 2 2	-10, 8’ C Η N O . 38 62 10 10 (835, 0)
26. Btr-Ala-Lys(Z)-Arg(NO )-Ala-Gly(Et )-OEt 2 2	-19, 7’ C Η N O 37 60 10 10 (820,9)
27. Kpl-Ala-Lys( Z) - Arg( NO )-Gly-Gly(Et )-OEt 2 2	-11,9’ C Η N 0 41 68 10 10 (877,1)
28. Kpl- Ala- Lys( Z) - Arg( NO )-Ala-Gly(Et )-OEt 2 2	-17,8’ C Η N 0 42 70 10 10 (891, 1)
29. Ac-Tyr- Lys( Z) - Arg( NO )-Gly-Gly(Pr )-OEt 2 2 </	- 1, 4 C Η N O 43 64 10 12 (913,1)
30. Kpl-Ala-Arg( NO ) - Lys( Z) - Ala-Gly( Me )-OEt 2 2	-19, 1’ C H N O 40 68 10 10 (863, 0)
31. Pal-Ala-Arg( NO )-Lys( Z) - Ala-Gly(Me )-OEt 2 2	-15,6’ C Η N O 48 82 10 11 (915,3) £

Tabulka Vila (pokračováni)

V(21-38) [ a] Sum. vzorec D mol. hmot.

32, Kpl-Gly-Arg(NO )-Arg(N0 )-Ala-Gly(Et )-OEt -20*7’ C Η N 0

2 ^J 2 33 61 13 10 (815,9)

33.

Kpl-Gly-Ar g( NO )-Arg(NO )-dy-Gly(Et )-OEt -16,1’ 2 2 2

C Η N O 32 59 13 10 (801,9)

34. Kpl-Gly-Ar g( NO )-Arg(NO ) - Acb- Ala-OEt , 2 2

29,4’ C Η N O 32 57 13 11 (799, 9)

35. Kpl-Ala-Arg( NO )-Arg(N0 )-Ala-Achpt-OEt 2 2

-13, 5

C Η N 0 36 65 13 11 (856, 0)

36. Kpl-Ala-Arg( NO )-Arg(NO )-Acb-Ser-OMe 2 2

-18, 4

C Η N O

57 13 12 (815,9)

37. Pal-Ala-Arg( NO )-Arg(NO ) - Acp-Ser-OMe 2 2

-19, 4

C Η N O 41 75 13 12 (942, 1)

38. Btr- Ala- Lys( Z) - Lys( Z) - Acp- Ser- OMe

-17, 3’ C H NO

65 7 12 (896, 0)

Optické rotace [a] byly měřeny v di methyl formami du;

0, 2.

Tabulka VIII

1(1-38)	X	A	B	U	Q	V	R
1.	Pal	Ala	Lys	Lys	Ala	Apr	Et
2.	Ac	Leu	Lys	Lys	Ala	Apr	Et
3.	Ac	Leu	Arg	Lys	Ala	Apr	Et
4.	Kpl	Leu	Arg	Lys	Ala	Apr .	Et
5.	Btr	Leu	Lys	Lys	Ala	Apr	Et
6.	Btr	Ala	Lys	Lys	Ala	Apr	Et
7.	Lau	Ala	Lys	Lys	Ala	Apr	Et
8.	For	Phe	Lys	Lys	Ala	Apr	Et
9.	Ac	Leu	Lys	Arg	Ala	Apr	Et
10. .	Kpl	Leu -	- - Lys	Arg	Ala	Apr	Et
11.	Ac	Leu	Arg	Arg	Ala	Acp	Et
12.	Ac	Leu	Lys	Arg	Ala	’ Acp	Me
13.	Lau	Ala	Arg	Lys	Ala .	Acp	Me
14.	Pal	Ala	Arg	Lys	Ala	Acp	Me
15. - - -	... por	' Tyr	Lys	~~ Lys ' * *	Ala -	r. .fc- 'Wl . s ' Acp	^Mě”
16.	Ac	Leu	Lys	Lys	Ala	Acp	Me
17.	Btr	Leu	Lys	Lys	Asn	Acp	Me
18.	Kpl	Ala	Lys	Lys	Asn	Acp	Me
19.	Kpl	Leu	Arg	Lys	Asn	Acp	Me
20.	Kpl	Ala	Arg	Lys	Asn	Acp	Me
21.	Ac	Tyr	Lys	Lys	Ala	Gly( Me-)	Et
22.	Ac	. Tyr	Lys	Lys	Ala	Ach - 2	Et
23.	Btr	Ala	Lys	Lys	Ala	Ach	Et
24.	Kpl	Ala	Lys	Lys.	Ala	Ach	Et
25.	Btr	Ala	Lys	Arg	Gly	Gly( Et_)	Et
26.	Btr	Ala	Lys	Arg	Ala	Gly(Et2)	Et
27.	Kpl	Ala	Lys	Arg	Gly	Gly( Et*)	Et
28.	Kpl	Ala	Lys	Arg	Ala	Gly(Et2)	Et
29.	Ac	Tyr	Lys	Arg	Gly .	GlyfPr2)	Et
30.	Kpl	Ala	Arg	Lys	Ala	Gly(Meť)	Et
31.	Pal	Ala	Arg	Lys	Ala	Gly(Me;)	Et
32.	Kpl	-Gly	Arg	Arg	Ala	Gly(Ei2)	Et
33.	Kpl	Gly	Arg	Arg	Gly	Gly( Et2)	Et
34.	Kpl	Gly	Arg	Arg	Acb	Ala	Et
35.	Kpl	Ala	Arg	Arg	Ala	Achpt	Et
36.	Kpl	Ala	Arg	Arg	Acb	Ser	Me
37.	Pal	Ala	Arg	Arg	Acp	Ser	Me
38.	Btr	Ala	Lys	Lys	Acp	Ser	Me

>

Tabulka Vlila

Přlklad(1-38) Sekvence

1. Pal- Ala-Lys-Lys-Ala- Apr-OEt

2. Ac-Leu-Lys-Lys-Ala- Apr-OEt

3. Ac-Leu-Arg-Lys-Ala-Apr-OEt

4. Kpl-Leu-Arg-Lys-Ala-Apr-OEt

5. Btr-Leu-Lys-Lys-Ala-Apr-OEt

6. Btr-Ala-Lys-Lys-Ala-Apr-OEt

7. Lau-Ala-Lys-Lys-Ala-Apr-OEt

8. For-Phe-Lys-Lys- Ala- Apr-OEt

9. Ac-Leu-Lys-Arg- Ala- Apr-OEt

10. Kpl-Leu-Lys- Arg- Ala- Apr-OEt

11. Ac- Leu- Arg- Arg- Ala- Acp- OEt

12. Ac- Le u- Lys - Arg- Al a- Acp- OMě

13. Lau-Ala-Arg-Lys-Ala-Acp-OMe

14. Pal-Ala-Arg-Lys-Ala-Acp-OMe

15. For-Tyr-Lys-Lys- Ala- Acp-OMe

16. Ac- Leu- Lys - Lys- Ala- Acp- OMe

17. Btr-Leu-Lys-Lys-Asn-Acp-OMe

18. Kpl-Ala-Lys-Lys-Asn-Acp-OMe

19. Kpl- Leu- Arg- Lys- Asn- Acp- OMe

20. Kpl-Ala-Arg-Lys-Asn-Acp-OMe

21. Ac-Tyr-Lys-Lys-Ala-Gly( Me )-OEt

22. Ac-Tyr-Lys-Lys-Ala-Ach-OEt

23. Btr- Ala- Lys- Lys- Ala- Ach- OEt

24. Kpl-Ala-Lys-Lys-Ala-Ach-OEt

25. Btr- Ala-Lys-Arg-Gly-Gly( Et )-OEt

26. Btr-Ala-Lys-Arg-Ala-Gly( Et )-OEt

27. Kpl-Ala-Lys-Arg-Gly-Gly(Et )-OEt

28. Kpl-Ala-Lys-Arg-Ala-Gly(Et )-OEt

29. Ac-Tyr-L.ys-Arg-Gly-Gly(.Pr. )-OEt

30. Kpl-Ala-Arg-Lys-Ala-Gly (Me )-OEt

31. Pal- Ala- Arg-Lys-Ala-Gly( Me )-OEt

32. Kpl-Gly-Arg-Arg-Ala-Gly( Et )-OEt

33. Kpl-Gly-Arg-Arg-Gly-Gly( Et )-OEt

34. Kpl-Gly-Arg-Arg-Acb-Ala-OEt

Sumární vzorec ,	r i 20 laIĎ
C Η N 0 . 2AcOH. H 0 40 75 7 7 2	-28, 9’
C Η N 0 . 2AcOH. 4H 0 29 53 7 7 2	-40, 5’
C H NO. 2AcOH 2H 0 29 53 9 7 2	-33, 7
C Η N 0 . 2AcOK 2H 0 35 65 9 7 2	-33, 0’
C Η N 0.2AcOH. 2H 0 31 57 7 7 2	-40. 5“
C Η N 0 . 2AcOH. 2H 0 28 51 7 7 2	-45, 2’
C Η N 0 . 2AcOH. 2H 0 36 67 7 7 2	-26, 2*
C Η N 0 . 2 AcOH. H 0 31 49 7 7 2	-25, 6’
C Η N 0 . 2AcOH. 2H 0 29 53 9 7 2	-38, 9’
C Η N 0 . 2AcOH 2H 0 35 65 9 7 2	-38, 5°
C Η N 0 . 2AcOH 2H 0 31 57 11 7 2	-30, 3’
C Η N 0 . 2AcOH. 3H 0 30 55 9 7 2	-32, 4’
C H NO. 2AcOH. 2H O 37 69 9 7 2	-34, 2*
C Η N O . 2AcOH. 2H O	-31, 4’
41 77 9 7 2
C Η N O . 2AcOH. 2H O 32 51 7 8 2	-15, 8*
C Η N O . 2AcOH. 2H O 30 55 7 7 2	-33, 2“
C Η N O . 2AcOH. 2H O 33 60 8 8 2	-42, T
C Η N O . 2AcOH 2H O 34 62 8 8 2	-33, 5’
C H NO. 2AcOH. 3H O 37 68 10 8 2	-25, 6’
C Η N O . 2AcOH. 2H O 34 62 10 8 2	-26, 2*
C Η N O . 2AcOH. 2H O 32 53 7 8 2	-21, V
C Η N O . 2AcOH. 2H O 35 57 7 8 2	-19, 1’
C H NO. 2 AcOH. 2H O 31 57 7 7 2	-48, 5“
C Η N O . 2AcOH. 2H O 35 65 7 7 2	-46, 2’
C Η N O . 2AcOH. 2H O	-32, 7“
29 55 9 7 - 2
C Η N O . 2 AcOH. 2H O 30 57 9 7 2	-43, 6’
C Η N O . 2AcOa 2H O 33 63 9 7 2	-34, 3*
C Η N O . 2 AcOH. 2H O 34 65 9 7 2	-43, O*
C H NO. 2AcOH. 2H O 35 59 9 8 2	- 3.9“
C Η N O . 2 AcOH. 2H O 32 61 9 7 2	-41, 4’
C H NO. 2AcOH. 4H O 40 77 9 7 2	-38, 1’
C Η N O . 2AcOH. 2H O 33 63 11 7 2	-24, 6’
C Η N O . 2AcOH. 2H O 32 61 11 7 2	-17, 8“
C Η N O . 2Ac0a 2H O 32 59 11 7 2	-27, 3“

Tabulka Vlila (pokračování)

Fříklad( 1-38) Sekvence Sumární vzorec [a]

-D

35.	Kpl- Ala- Arg- Arg- Ala- Achpt- OEt	C Η N 0 . 2AcOH. 2H 0, 36 67 11 7 2	-33, 4°
36.	Kpl-Ala-Arg-Arg-Acb-Ser-OMe	C Η N 0 . 2AcOH. 2H 0 32 59 11 8 2	-38, 6’
37.	Pal-Ala-Arg-Arg-Acp-Ser-OMe	C Η N 0 . 2Ac0H. 2H 0 41 77 11 8 2	-33,4®
38.	Brr-Ala-Lys-Lys-Acp-Ser-OMe	C H NO. 2Ac0H. 2H 0 29 53 7 8 2	-28, 3®

V.

Kpl-Leu , K roztoku leucinu (26,2 g) v 4M Na OH, ochlazenému ria -10 C, byl během 50 min přidán kaproylchlorid (37,6 ml). Potom byl roztok míchán 40 min při 0 *C a 2 h při teplotě místnosti. Potom byla reakční směs okyselena 10% HCl na pH 2. Vyloučená bílá krystalická látka byla odfiltrována, promyta vodou a vysušena do konst. hmotnosti. Bylo získáno 44,1 g (86 %) surové látky. Krystalizací z AcOEt bylo získáno 35,9 (77 %) produktu o t. t. 121-124 ’C. Obdobným způsobem byly připraveny všechny acylované í

aminokyseliny, uvedené v tabulce IV.

Z-Ala-Apr-OEt

K roztoku Z-Ala (11,2 g; 50 mmol) v methylénchloridu '' (100 ml), ochlazenému na -10 C,byl přidán N-Etp (7 ml) a EtOCO-Cl (5 ml); po 5mín mícháni a chlazeni (-10 ’C) byl k reakční mu | roztoku přidán roztok Apr-OEt v methylénchloridu (70 ml), uvolněný z odpovídajícího hydrochloridu (9,7 g; 50 mmol) N-Etp (7 ml). Po | 30 min mícháni při 0 ’C a 2 h při teplotě místnosti byl reakční ř '* roztok odpařen, odparek rozpuštěn v AcOEt a standardním způsobem

I zpracován. Nekrystalický odparek byl zpracován bez izolace v ; dalším stupni.

Ala-Apr-OEt

K roztoku Z-Ala-Apr-OEt (asi 45 mmol) v methanolu (200 ml) byla přidána suspenze 5% Pd/C (2,5 g) v toluenu (50 ml), a reakční směs byla hydrogenována v autoklávu 10 min při tlaku 2 MPa. Po odfiltrování katalyzátoru byl methanolický roztok co nejrychleji odpařen a zpracován v následujícím stupni.

I

Boc-Lys(Z)-Ala-Apr-OEt (lila)

K roztoku Boc-Lys(Z) (40 mmol) a N-Etp (6,4 ml) v DMFA (80 ml), ochlazenému na -15 *C,byl přidán EtOCO-Cl (4 ml). Po 10 min míchání a chlazení (-10 *C) byl k reakčnímu roztoku přidán roztok Ala-Apr-OEt (připravený v předchozím stupni) v DMFA (50 ml). Po 2 h mícháni při teplotě místnosti byl roztok odpařen a zpracován standardním způsobem II. Odparek byl krystalován z toluenu a bylo získáno 22, 6 g (92 %) produktu o t. t.

142-143 “C; [a] -24,7’ (c = 0,2; methanol). Pro C H NO

D 28 42 4 8 vypočteno; 59, 77 % C, 7, 52 % H, 9, 96 % N; nalezeno; 59, 78 % C, 7, 54 % H, 10, 26 % N.

Obdobně byly připraveny podobné tripeptidy III_} uvedené v tabulce I, resp. Ia.

HC1. Lys( Z) - Ala- Apr- OEt

K roztoku Boc-Lys( Z) - Ala-Apr-OEt (11,2 g; 20 mmol) v led.

kyselině octové (20 ml) byl přidán 2, 1 M roztok HC1 v kyselině octové (30 ml). Po 3 h stání při teplotě místnosti byl hydrochlorid vysrážén etherem. Krystalizací z 2-propanolu a AcOEt bylo získáno 7, 7 g (77%) produktu. Pro C Η N 0 . HC1. XH 0 * 23 35 462 (508,0) vypočteno: 54,38 % C, 7,14 % H, 11,02 % N; nalezeno: 54, 27 % C,.. 7, 02..% H a 10, 51 % N. ~ - ------_>(, ·

Boc- Lys( Z) - Lys( Z) - Ala- Apr- OEt (I Va)

K roztoku Boc-Lys(Z) (7 mmol) a N-Etp (1 ml) v DMFA (30 ml), vychlazenému na -15 *C_/byl přidán EtOCO-Cl (0,7 ml). Po 10 min míchání a chlazení (-10 ° C) byl k reakčnímu roztoku přidán roztok

Lys( Z) - Ala-Apr-OEt v DMFA (25 ml)y uvolněný z odpovídajícího hydrochloridu (3,5 g) N-Etp (1 ml). Po 2 h míchání při teplotě místnosti byl reakční roztok odpařen a nekrystalický odparek rozmíchán přídavkem vody (50 ml). Krystalická objemná sraženina byla odfiltrována, vysušena v exsikátoru a krystalována z kyseliny octové (5 ml) přídavkem 2-propanolu (50 ml). Po 12 h stání v lednici byl krystalický produkt odfiltrován, promyt y 20 etherem. Bylo získáno 4, 5 g (77 %Ju [ a] 11,9 (c = 0, 2;, dimethylformamid).

Obdobně byly připraveny tetrapeptidy IV_? uvedené v tabulce II, resp. II a.

HC1. Lys( Z) - Lys( Z) - Ala- Apr- OEt

K roztoku Boc- Lys( Z) - Lys( Z) - Ala- Apr- OEt ledové kyselině octové (5 ml) byl přidán kyselině octové (7,5 ml). Po 3 h stání hydrochlorid vysrážén etherem. Krystalizací z 2-propanolu bylo získáno 6,4 g (84 %) produktu.

(4, 2 g; 5 mmol) v 2, 1 M roztok HC1 y, prt teplotě (byl kyseliny octové a í

Ac- Leu- Lys( Z) - Lys(Z) - Ala- Apr- OEt ( V2)

K roztoku Ac-Leu (347 mg; 2 mmol) a HOSuc (270 mg) v DMFA (10 ml)^ ochlazenému na 0 ^eC_zbyl přidán DCCI (440 mg). Po 1. h mícháni a chlazení (0’C) byl přidán Lys( Z)-Lys ( Z)-Ala-Acp-OEt v DMFA (10 ml)_z uvolněný z odpovídajícího hydrochloridu (1,55 g; 2 mmol) N-Etp (0,3 ml). Druhý den byla vyloučená DCHA odfiltrována, filtrát zahuštěn a nekrysťalický odparek byl vysrážen 10 Jfb kyselinou citrónovou (20 ml), produkt odfiltrován a zpracován standardním způsobem II; přesrážením z DMFA a vody bylo získáno 560 mg (34 %) produktu o t. t. 253-255 ’ C; [ a] -10, 9 * (c = 0,2; dimethylformamid). Pro C Η N 0 (880,1) vypočteno: 61, 42. % C, 7, 44 % H a 11.14 % N; nalezeno 61, 41 % £ a 11, 17 % N.

Obdobně byly připraveny pentapeptidy (l-20)_? uvedené v tabulce III, resp. lila.

Ac-Leu-Lys-Lys- Ala-Apr-OEt. 2 AcOH. 4H 0 (12)

K roztoku Ac-Leu-Lys (Z)-Lys (Z)-Ala-Apr-OEt (440 mg;

0,5 mmol) v AcOH (30 ml) byl přidán 5% Pd/C (45 mg) a reakční směs byla hydrogenována v autoklávu 1 h při tlaku 2MPa. Potom byl katalyzátor odfiltrován a nekrystalický odparek byl rozmíchán s etherem a vzniklý krystalický produkt byl odfiltrován a vysušen v exsikátoru. Bylo získáno 302 mg (75 %) produktu, [ a]

-40,5’ (c =0,2; methanol). Pro C Η N 0 .2 AcOH. 4 H 0 (73.1,9) 29 53 7 7 2 “ vypočteno: 49,28 % C, 8, 65 % H, 12, 19 % N; nalezeno: 49, 25 % C, 7, 70 % H a 11, 73 % N.

Obdobným způsobem, tj. taktikou a strategií, byly připraveny všechny analogy s vestavěným pouze chráněným Lys(Z), uvedené v tabulce VIII, resp. Vlila.

Příklad 2 „

Boc- Arg( NÓ ).-.L.ys( Z) - Ala- Apr- OEt (IVb)

K roztoku Boc-Arg(N0 ) (2,25 g; 7 mmol) v DMFA (30 ml), vychlazenému na -10 *C_f byl přidán N-Etp (1 ml) a EtOCO-Cl (0,7 ml). Po 10 min mícháni a chlazení (-10 ’C) byl k reakční mu roztoku přidán roztok Lys(Z) - Ala-Apr-OEt v DMFA (25 ml) , uvolněný z odpovídajícího hydrochloridu (3,5 g) N-Etp (1 ml). Další zpracování obdobné Boc-Lys(Z)-Lys(Z)-Ala-Apr-OEt _t uvedeného v příkladě 1. Bylo získáno 5, 8 g (76 %) produktu o t. t. 119-123 ’C (natává 115 ’C).

HC1. Arg( NO ) - Lys( Z) - Ala-Apr-OEt

Z výchozího Boc-Arg(NO )-Lys(Z)-Ala-Apr-OEt (3,05 g; 4 mmol) 2 bylo podobným způsobem,jako^uvedeno v příkladě 1, získáno 2,88 g (kvant. ), ^J _t

Kpl - Leu- Arg( NO ) - Lys( Z) - Al a- Apr- OEt ( V4)

Z výchozího Kpl-Leu (515 mg; 2 mmol) byl získán podobným způsobem jako odpovídající Ac-Leu-analog_t uvedený v příkladě 1 ve výtěžku 1,09’g (60 96) o t. t. 158-161 'C.

Kpl- Leu- Arg- Lys- Ala- Apr- OEt. 2 AcOH. 2H 0 (14)

- · -Byl připraven obdobným způsobém jako -acetylovaný - analogyuvedený v příkladě 1, s tím rozdílem, že tlak při hydrogenolýze byl zvýšen na 5 MPa a doba hydrogenolýzy prodloužena na 5 h; produkt byl získán ve výtěžku 59 %. Obdobným způsobem byly připraveny všechny analogy uvedené v tabulce VIII^ resp.

s vestavěným chráněným Arg( NO ),

Vlila. ²

Příklad 3

Btr-Ala-Lys( Z) - OMe (Vllb)

K roztoku Btr-Ala (4,8 g; 30 mmol) a OHSuc (3, 5 g) v DMFA (30 ml) _f ochlazenému na 0 °C _f byl přidán DCCI (6, 6 g). Po 1 h míchání a chlazení (0 ’ C) byl přidán roztok Lys(Z)-OMe v DMFA (30 ml) , uvolněného z odpovídajícího hydrochloridu (10 g;

mmol) N-Etp (4,4 ml). Po 2 h míchání při teplotě místnosti byl roztok odpařen a zpracován standardním způsobem I. Krystalizací z AcOEt a PE bylo získáno 10,9 g (83 %) o t. t. 94-96 ’ C.

Obdobným způsobem Byly připraveny N-acylované dipeptid-methylestery,uvedené v tabulce V.

'λ

Btr-Ala-Lys (Z) (VI lib)

K roztoku Btr-Ala-Lys(Z)-OMe (4,4 g; 10 mmol) v methanolu ' (50 ml) byl přidán M NaOH (15 ml) a reakční roztok byl míchán při teplotě místnosti5 h. Potom bylo pH reakčního roztoku upraveno na 7 4M HC1 a roztok odpařen. Odparek byl 3krát extrahován AcOEt, organické výtřepky vysušeny bezvodým síranem sodným a odpařeny. Krystalizaci z AcOEt a PE bylo Získáno 4, 2 g (kvant.). Pro C Η N 0 (421,5) vypočteno: 59,84 % C, 7, 41 % H,

9, 97 % N; nalezeno: 59,71 % C, 7,53 % H a 9, 49 % N, t. t. 114-116 ^eC.

Obdobným způsobem byly připraveny N-acylované dipeptid- kyseliny,uvedené v tabulce VI.

Z-Gly-Gly(Pr )-OEt

Z výchozího Z-Gly (4,2 g; 20 mmol) a Gly(Pr )-OEt. HC1 2 (5,0 g; 20 mmol) byl DCCI metodou jako sloučenina VlIIb získán produkt ve výtěžku 71 % a t. t. 68-71 ’C. Pro C H N O (378,5) / 20 30 2 4 vypočteno 63, 47 % C, 7, 99 % H, 7, 40 % N; nalezeno: 62, 50 % C,

8, 07 % H a 7, 32 % N. Obdobným způsobem byly připraveny

Z-Gly-Gly(Et )-OEt, Z-Ala-Gly(Me )-OEt a Z-Ala-Gly(Et )-OEt jako 2 2 2 nekrystalické sloučeniny.

Boc-Arg(N0 )-Gly-Gly(Ét )-ÓEt (ΪΙΙη)

2

Byl připraven DCCI/OHSuc metodou Z výchozích Boc-ArgfNO^) a Gly-Gly(Et^)-OEt, získaného hydrogenolýzou odpovídajícího nekrystalického Z-Gly-Gly(Et )-0Et na Pd/C za zvýšeného tlaku

MPa ve výtěžku 82 % a t. t. 155-156 * C. Pro C H NO (517,6) 21 39 7 7 vypočteno: 48, 73 % C, 7, 60 % H, 18, 94 % N; nalezeno: 48, 43 % C,

7, 58 % H a 18, 34 % N.

Obdobným způsobem byly připraveny sloučeniny III(l-o), uvedené v tabulce I, resp. Ia.

Kpl-Ala-Lys( Z) - Arg( NO )-Gly-Gly(Et )-OEt ( V27)

2

Byl připraven DCCI/OHSuc metodou,jak uvedeno v předchozích příkladech, z výchozího Kpl-Ala-Lys( Z) a HC1. Arg( NO^) - Gly-Gly(Et^J-OEt, připravený acidolýzou odpovídajícího Boc-derivátu roztokem HCl/kyselina octová ve výtěžku 91 %. Pro C Η N 0

68 10 10 ( 877,1) vypočteno: 56,15 %C, 7,82 % H. 15,97 % N; nalezeno:

55, 97 % C, 7. 95 % H a 15, 44 % N.

Obdobným způsobem byly připraveny sloučeniny 21 a 25-33 j uvedené v tabulce VII, resp. Vila.

Kpl-Ala-Lys-Arg-Ala-Gly( Et )-0Et. 2 AcOH. 2 H 0 (127)

2

Byl připraven obdobným způsobem jako analog v příkladě 1 tlakovou hydrogenolýzou na Pd/C při 5 MPa ve výtěžku 69 %.

Obdobným způsobem byly získány konečné látky podle příkladů 22 až 38,uvedené v tabulce VIII, resp. Vlila.

Průmyslová využitelnost

Pentapeptidické prekurzory biologicky účinných cyklických dipeptidů představují nový typ léčiv výhodných vlastností, * »’· terapeuticky použitelných v oblasti poruch centrálního nervového systému a metabolismu buněk: í·

Claims (1)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   Pentapeptidické prekurzory biologicky účinných cyklických dipeptidů obecného vzorce I

   X - A - B - U,-. Q -V -OR (I).

   kde

   X = zbytek mastné kyseliny C až C ,

   1 16 ,

   A = zbytek peptidický vázaného alaninu, fenylalaninu, glycinu, leucinu a tyrosinu,

   B — U = zbytek peptidický vázaného argininu a lysinu anebo jejich vzájemná kombinace,

   Q zbytek peptidický vázaného alaninu, asparaginu, glycinu, šeřinu anebo V,

   V = zbytek peptidický vázané kyseliny

   1-amino-1-cykloalkankarboxylové až obecného vzorce II kde n = o až 5, zbytek peptidický vázaného alaninu, šeřinu nebo substituovaného cX^-dí a lky lglycí neobecného vzorce III (II).

   í>

   COOH (III).

   kde

   M = methyl, ethyl anebo propyl, anebo Q,

   R = methyl- anebo ethylskupina.

   Anotace (Λ

   -I 7

   NáZfcv XVnálezu^-xPenťap^P^idiqJťŽ \^kdrzhj^v7pí^^ixŽlcV účí>tnýčfí\ ~^kllidkýclk dj^eptkdů/^ \-/ \ ~y

   -Vynález—se—týká ^/entapeptidickýck prekurzor^f biologicky účinných cyklických dipeptidů(p.—způsobu-je j i ch výroby;—Tyto nové/ <·· 1 Z drátky, kto£Ó samy—o aobč—nojaou—aocúóinnó^ se po aplikaci v organismu působením endogenních prpteináz v cílovém orgánu v terapeuticky účinný derivát /2,5-dioxopiperazinu. Biologicky účinná oblast je centrální/ nervový X^ystéra a proliferace a antiproliferace buněk.