EA013973B1 - Способы лечения кожной волчанки при помощи аминоизоиндолиновых соединений - Google Patents

Abstract

В изобретении раскрываются способы лечения кожной волчанки у человека. Конкретные способы охватывают введение (+)-2-[1-(3-этокси-4-метоксифенил)-2-метилсульфонилэтил]-4-ацетиламиноизоиндолин-1,3-диона, 4-(амино)-2-(2,6-диоксо(3-пиперидил))изоиндолин-1,3-диона (ACTIMID™), 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидроизоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона (REVLIMID®) или циклопропил{2-[(1S)-1-(3-этокси-4-метоксифенил)-2-(метилсульфонил)этил]-3-оксоизоиндолин-4-ил}карбоксамида самих по себе или альтернативно в комбинации со вторым активным агентом.

Description

Это изобретение предоставляет способы лечения, предотвращения и/или контроля кожной волчанки введением (+)-2-[1-(3-этокси-4-метоксифенил)-2-метилсульфонилэтил]-4-ацетиламиноизоиндолин1,3-диона, 4-(амино)-2-(2,6-диоксо(3-пиперидил))изоиндолин-1,3-диона (АСТ1МШ™), 3-(4-амино-1оксо-1,3-дигидроизоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона (КЕУЫМШ®) или циклопропил {2-[(18)-1-(3этокси-4-метоксифенил)-2-(метилсульфонил)этил]-3-оксоизоиндолин-4-ил}карбоксамида, самих по себе или в альтернативном варианте осуществления в комбинации с другими терапевтическими средствами.

Изобретение также предоставляет фармацевтические композиции и лекарственные формы, содержащие (+)-2-[ 1-(3 -этокси-4-метоксифенил)-2-метилсульфонилэтил]-4-ацетиламиноизоиндолин-1,3-дион, 4-(амино)-2-(2,6-диоксо(3 -пиперидил))изоиндолин-1,3-дион, 3-(4-амино-1 -оксо-1,3-дигидроизоиндол-2ил)пиперидин-2, 6-дион или циклопропил {2-[(18)-1-(3-этокси-4-метоксифенил)-2-(метилсульфонил)этил]-3-оксоизоиндолин-4-ил}карбоксамид, сами по себе или в комбинации с другими терапевтическими средствами для применения в способах лечения, предотвращения и/или контроля кожной волчанки.

Уровень техники

Волчанка или красная волчанка представляет собой аутоиммунное расстройство, которое может вызывать хроническое воспаление различных частей организма, особенно кожи, суставов, крови и почек. Иммунная система организма при нормальных условиях вырабатывает белки, называемые антителами, для защиты организма от вирусов, бактерий и других инородных продуктов (т.е. антигенов). При аутоиммунных расстройствах, таких как волчанка, иммунная система теряет способность устанавливать разницу между антигенами и клетками, и тканями собственного организма и может вырабатывать антитела против клеток и тканей собственного организма с образованием иммунных комплексов. Такие иммунные комплексы могут формироваться в тканях и вызывать воспаление, повреждение тканей и/или боль. Три наиболее распространенных типа волчанки включают системную красную волчанку (8ЬЕ), кожную красную волчанку (СЬЕ) и волчанку, обусловленную действием лекарственных средств. Более подробные описания волчанки или красной волчанки можно найти в Зайасе, 2000, Тке Ьирик Воок: А СшДе Гог РаИеи18 апД Ткек РатШек, ОхГогД Ишуегайу Ргекк, РесйеД и ЕхрапДеД ЕДйюп, которое включено сюда в полном объеме в виде ссылки.

Системная красная волчанка (8ЬЕ) представляет собой аутоиммунное заболевание, затрагивающее разнообразные системы органов, которое определяют клинически и связывают с антителами, направленными против клеточного ядра. 8ЬЕ действует на любые системы или органы тела, включая суставы, кожу, легкие, сердце, кровь, почки или нервную систему. Симптомы 8ЬЕ могут варьировать от вызывающих незначительное неудобство до очень серьезных и даже опасных для жизни. Например, пациент с 8ЬЕ может испытывать (а) отсутствие боли или чрезвычайно сильную боль, особенно в суставах; (Ь) отсутствие кожных проявлений или обезображивающую сыпь и/или (с) отсутствие поражения органа или крайнюю степень поражения органа. Как обсуждалось выше, многие клинические проявления 8ЬЕ вызываются действиями иммунных комплексов на различные ткани или компоненты поверхности клеток. Несмотря на это, до сих пор непонятно, существует ли поликлональная активация В-клеток или ответ на специфические антигены. Тем не менее, может существовать генетическая предрасположенность к развитию 8ЬЕ. Более подробные описания 8ЬЕ можно найти в Ьакйа, 1999, 8у51ет1с Ьирик Егу1кета1о8И8, АсаДетю Ргекк, ТЫгД ЕДйюп, которое включено сюда в полном объеме в виде ссылки.

Волчанка, обусловленная действием лекарственных средств, как правило, возникает после применения определенных назначенных лекарств. Симптомы волчанки, обусловленной действием лекарственных средств, являются сходными с симптомами 8ЬЕ. Лекарственные средства, чаще всего связанные с волчанкой, обусловленной действием лекарственных средств, представляют собой гидралазин (применяется для лечения повышенного кровяного давления или артериальной гипертензии) и прокаинамид (применяется для лечения нерегулярных сердечных ритмов). Тем не менее, лишь у крайне незначительного числа тех, кто принимает эти лекарственные средства, может проявиться выраженная волчанка, обусловленная действием лекарственных средств. Симптомы обычно исчезают, когда прием медикаментов прекращается.

Кожная волчанка или кожная красная волчанка действует первоначально на кожу и, как правило, характеризуется воспалением кожи, кожной сыпью и геморрагией на коже. Кожная волчанка также может действовать на волосы и слизистые оболочки, однако, как правило, не затрагивает внутренние органы, как в случае 8ЬЕ. Кожную волчанку можно классифицировать на группы, включающие острую кожную красную волчанку (АСЬЕ), подострую кожную красную волчанку (8СЬЕ), хроническую кожную красную волчанку (ССЬЕ) или дискоидную красную волчанку (ЭБЕ) и красную волчанку новорожденных (ИЪЕ). Более подробные описания кожной волчанки или кожной красной волчанки можно найти в Кики е1 а1., 2004, Си1апеои8 Ьирик Егу1кета1о8И8, 8ргтдег, РЙ81 ЕДйюп которое включено сюда в полном

- 1 013973 объеме в виде ссылки.

ЛСБЕ обычно представляет собой чувствительный к свету дерматоз. Он может проявляться в качестве сглаженных участков покрасневшей кожи, которые напоминают устойчивый загар или проявляются наподобие сыпи. ЛСЬЕ может образовывать сыпь в виде бабочки, расположенной в центральной части лица, и/или в виде распространенной конфигурации, затрагивающей другие области, такие как руки, ноги и тело. Полагают, что этиология ЛСЬЕ является многофакторной, включающей генетические, экологические и гормональные факторы. У пациентов, которые имеют генетическую предрасположенность, ЛСЬЕ может вызываться вирусами (например, ЕВУ) и воздействием ультрафиолетового излучения.

8СБЕ представляет собой нерубцующийся, не вызывающий атрофию чувствительный к свету дерматоз. В некоторых случаях 8СБЕ проявляется как не вызывающее зуд кольцеобразное неводянистое высыпание на верхней части спины и груди часто после воздействия солнечного облучения. 8СБЕ может иметь место у пациентов с системной красной волчанкой, синдромом 8)бдгсп и недостатком второго компонента комплемента (С2б) или может вызываться применением лекарственных средств. Как правило, 8СБЕ имеет место у индивидуумов с генетической предрасположенностью, наиболее часто у пациентов с лейкоцитарным антигеном В8 (НЕЛ-В8) человека, лейкоцитарным антигеном ΌΚ3 (НБЛ-ЭКЗ) человека, лейкоцитарным антигеном ΌΒν52 (НБЛ-ОКда52) человека и лейкоцитарным антигеном БО1 (НБЛ-001) человека. 8СБЕ, по существу, связано с анти-Во (88-Л) аутоантителами. Как правило, 8СЬЕ проявляется после облучения ультрафиолетовым светом, однако могут быть вовлечены также и другие стимулы или стимулирующие факторы.

ССЬЕ или ЭБЕ представляет собой хронический, образующий рубцы и атрофию чувствительный к свету дерматоз. ЭБЕ обычно проявляется в виде красных чешуйчатых очажков, которые оставляют белые шрамы. ЭБЕ действует преимущественно на щеки и нос, однако временами затрагивает верхнюю часть спины, шеи, тыльную сторону кисти, оголенную часть кожи черепа и губ. ОБЕ может иметь место у пациентов с системной красной волчанкой (8ЬЕ). У некоторых пациентов также имеются участки повреждения 8СБЕ и у некоторых может быть высыпание на щеках. Может быть эффективной терапия с кремами или лосьонами от загара, местным применением кортикостероидных гормонов и противомалярийными веществами. ОБЕ имеет место, вероятно, у индивидуумов с генетической предрасположенностью, однако строгая генетическая связь не была установлена. Патофизиология ОБЕ не является достаточно хорошо изученной. Было высказано предположение, что после ультрафиолетового (ИУ) облучения или стресса в кератиноцитах происходит индукция белков теплового шока, и эти белки могут действовать как мишень для цитотоксичности эпидермальных клеток, опосредованной Т-клетками γδ.

Веррукозная ОБЕ, глубокая форма красной волчанки, ОБЕ слизистой, ОБЕ ладоней и ступней и тумидная форма туберкулезной волчанки представляют собой некоторые специфические формы ОБЕ. Веррукозная ОБЕ относится к ОБЕ, имеющей очаг повреждения, который может развиться до очень больших масштабов. Глубокая форма красной волчанки относится к ОБЕ, имеющей очаг повреждения, который может иметь место в связи с плотными вздутиями в подкожной жировой ткани. ОБЕ слизистой относится к повреждениям, которые иногда имеют место на мембранах слизистых рта, носа и глаз. ОБЕ ладоней и ступней относится к повреждениям, которые иногда имеют место на кистях рук и стопах. Тумидная форма туберкулезной волчанки проявляется в виде сглаженных, блестящих, красно-фиолетовых пятен сыпи на голове и шее, которые могут вызывать зуд и обладать небольшим размером. Участки повреждения при тумидной форме туберкулезной волчанки обычно чистые, без рубцевания и могут рецидивировать к их изначальной локализации.

ΝΕΞ представляет собой редкое состояние у детей и проявляется обычно как не образующие рубцов и атрофии повреждения. В некоторых случаях у новорожденных младенцев, рожденных у матерей с 8СБЕ, может развиваться ΝΕΓ с временной кольцеобразной или кольцевидный сыпью. Полагают, что ΝΕΓ имеет отношение к различным факторам, включая генетическую предрасположенность, вирусную инфекцию и другие неизвестные факторы. ΝΕΓ может затрагивать кожу, сердце, печень, кровообразующие элементы или селезенку.

Детская красная волчанка (БЕ) относится к генетическим факторам и, возможно, другим явлениям окружающей среды. БЕ у детей может затрагивать кожу или может проявляться как системная БЕ и действовать на любую систему органов в теле, чаще всего на почки, суставы и кровь.

Кожную волчанку обычно лечат при помощи противомалярийных средств и кортикостероидных гормонов. Однако эти лекарственные средства могут быть неэффективными для лечения некоторых видов кожной волчанки или могут иметь значительные побочные эффекты при продолжительном использовании в течение длительного промежутка времени. В связи с этим возникла потребность в разработке новых терапевтических способов лечения кожной волчанки.

Сущность изобретения

В одном аспекте изобретение предоставляет способы лечения, предотвращения и/или контроля кожной волчанки у людей, в качестве неограничивающих примеров включающей острую кожную красную волчанку (ЛСБЕ), подострую кожную красную волчанку (8СБЕ), красную волчанку новорожденных (ΝΕΓ). детскую красную волчанку и хроническую кожную красную волчанку (ССБЕ) или дискоидную красную волчанку (ОБЕ) (например, веррукозную ОБЕ, глубокую форму красной волчанки, ОБЕ на сли

- 2 013973 зистой, ИЕЕ ладоней и стоп и тумидную форму туберкулезной волчанки). Изобретение предоставляет способы лечения, предотвращения и/или контроля кожной волчанки у людей, без ограничения включая мужчин, женщин и детей.

В одном аспекте способы, включающие введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, предотвращении или контроле, терапевтически или профилактически эффективного количества (+)-2-[1-(3этокси-4-метоксифенил)-2-метилсульфонилэтил]-4-ацетиламиноизоиндолин-1,3-диона или его фармацевтически приемлемых соли или сольвата (например, гидрата), по существу, свободного от (-)энантиомера. В предпочтительном варианте осуществления используют соль или сольват соединения вместо свободного соединения.

В одном аспекте изобретение предоставляет способы, которые включают введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, предотвращении или контроле, терапевтически или профилактически эффективного количества 4-(амино)-2-(2,6-диоксо(3-пиперидил))изоиндолин-1,3-диона или его фармацевтически приемлемых пролекарства, метаболита, полиморфа, соли, сольвата (например, гидрата), стереоизомера или клатрата. В предпочтительном варианте осуществления применяют соль или сольват соединения.

В одном аспекте изобретение предоставляет способы, которые включают введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, предотвращении или контроле, терапевтически или профилактически эффективного количества 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона или его фармацевтически приемлемых пролекарства, метаболита, полиморфа, соли, сольвата (например, гидрата), стереоизомера или клатрата. В предпочтительном варианте осуществления применяют соль или сольват соединения.

В одном аспекте изобретение предоставляет способы лечения, предотвращения и/или контроля кожной волчанки циклопропил {2-[(18)-1-(3-этокси-4-метоксифенил)-2-(метилсульфонил)этил]-3оксоизоиндолин-4-ил}карбоксамидом или его фармацевтически приемлемыми солью или сольватом (например, гидратом), по существу, свободным от (В)-энатиомера. В других вариантах осуществления используют соль или сольват соединения или даже свободное соединение.

В некоторых вариантах осуществления способы дополнительно включают введение терапевтически эффективного количества по меньшей мере второго активного агента, который может быть противовоспалительным средством, таким как нестероидные вещества (например, соли или сложные эфиры салициловой кислоты) или кортикостероидные гормоны (например, дексаметазон), противомалярийным средством, иммунодепрессантом, антибиотиком, антивирусным средством, средством, усиливающим иммунитет, гормоном, РСЕ2 или их комбинацией.

В другом варианте осуществления соединения по изобретению или их фармацевтически приемлемые соль, сольват или стереоизомер, местно вводят в лекарственной форме, которая без ограничения включает мази, кремы, гели, пасты, присыпки, примочки, распыляемые растворы, линименты, припарки, аэрозоли, растворы, эмульсии, суспензии и их комбинации.

В дополнительных вариантах осуществления соединения по изобретению или их фармацевтически приемлемые соль, сольват или стереоизомер, вводят парентерально, или перорально, или способом контролируемого высвобождения.

Краткое описание чертежей

Фиг. 1 иллюстрирует клеточную экспрессию СИ51/61 и 1САМ-1 у НИУЕС в нестимулирующих ус ловиях.

Фиг. 2 иллюстрирует клеточную экспрессию Е-селектина и Р-селектина у НИУЕС в нестимулирующих условиях.

Фиг. 3 иллюстрирует клеточную экспрессию Е-селектина и Р-селектина у НИУЕС при условиях стимулирования ΤΝΕ-α.

Фиг. 4 иллюстрирует клеточную экспрессию УЕ-кадгерина и СИ44 у НИУЕС при условиях стимулирования ΤΝΕ-α.

Фиг. 5 иллюстрирует клеточную экспрессию СИ51/61, 1САМ-1, 1САМ-2, УСАМ-1, Е-селектина, Р-селектина, НЬА класса I и НЬА класса II у НИУЕС при стимулировании ΤΝΕ-α.

Фиг. 6 иллюстрирует клеточную экспрессию Е-селектина у НИУЕС при стимулировании ΤΝΕ-α, где Е-селектин определяли при помощи ЕЬ18А.

Фиг. 7 иллюстрирует исследование ванного ультрафиолетом В.

Фиг. 8 иллюстрирует исследование ванного ультрафиолетом В.

Фиг. 9 иллюстрирует исследование ванного ультрафиолетом В.

продуцирования ΤΝΕ-α продуцирования ΤΝΕ-α продуцирования ΤΝΕ-α кератиноцитами человека, кератиноцитами человека, кератиноцитами человека, индуцироиндуцироиндуцироПодробное описание изобретения

Один аспект изобретения охватывает способы лечения, контроля и/или предотвращения кожной волчанки, которые включают введение пациенту с кожной волчанкой терапевтически или профилактиче- 3 013973 ски эффективного количества (+)-2-[1-(3-этокси-4-метоксифенил)-2-метилсульфонилэтил]-4-ацетиламиноизоиндолин-1,3-диона, по существу, свободного от (-)энантиомера, или его фармацевтически приемлемых соли или сольвата.

Другой аспект изобретения охватывает способы лечения, контроля и/или предотвращения кожной волчанки, которые включают введение пациенту с кожной волчанкой терапевтически или профилактически эффективного количества 4-(амино)-2-(2,6-диоксо(3-пиперидил))изоиндолин-1,3-диона или его фармацевтически приемлемых пролекарства, метаболита, полиморфа, соли, сольвата (например, гидрата), стереоизомера или клатрата.

Другой аспект изобретения охватывает способы лечения, контроля и/или предотвращения кожной волчанки, которые включают введение пациенту с кожной волчанкой терапевтически или профилактически эффективного количества 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидроизоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона или его фармацевтически приемлемых пролекарства, метаболита, полиморфа, соли, сольвата (например, гидрата), стереоизомера или клатрата.

Другой аспект изобретения охватывает способы лечения, контроля и/или предотвращения кожной волчанки, которые включают введение пациенту с кожной волчанкой терапевтически или профилактически эффективного количества циклопропил {2-[(18)-1-(3-этокси-4-метоксифенил)-2-(метилсульфонил)этил]-3-оксоизоиндолин-4-ил}карбоксамида, по существу, свободного от (К)-энантиомера, или его фармацевтически приемлемых соли или сольвата.

Примеры кожной волчанки в объеме настоящего изобретения без ограничения включают острую кожную красную волчанку (АСЬЕ), подострую кожную красную волчанку (8СЬЕ), красную волчанку новорожденных (ΝΕΕ), детскую красную волчанку и дискоидную красную волчанку (ЭЬЕ), включая веррукозную ЭЬЕ, глубокую форму красной волчанки, ЭЬЕ на слизистой, ЭЬЕ ладоней и стоп и тумидную форму туберкулезной волчанки.

Помимо всего прочего, подвергаемые лечению пациенты включают млекопитающих, в частности людей. Детей и взрослых можно лечить раскрытыми здесь способами и композициями. Можно также лечить пациентов с ослабленным иммунитетом. Это изобретение предполагает лечение пациентов, которые не используют другие терапии; пациентов, которые используют другие терапии; и пациентов, которые невосприимчивы к лечениям волчанки, такой как описанная выше кожная волчанка. В некоторых вариантах осуществления пациент является женщиной. В некоторых вариантах осуществления пациент является мужчиной. В дополнительных вариантах осуществления пациент является ребенком.

Определения

Как применяют здесь и если не указано особо, термин соединение по изобретению в качестве неограничивающих примеров включает (+)-2-[1-(3-этокси-4-метоксифенил)-2-метилсульфонилэтил]-4ацетиламиноизоиндолин-1,3-дион, 4-(амино)-2-(2,6-диоксо(3 -пиперидил))изоиндолин-1,3-дион, 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидроизоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион или циклопропил {2-[(18)-1-(3-этокси-4метоксифенил)-2-(метилсульфонил)этил]-3-оксоизоиндолин-4-ил}карбоксамид или их фармацевтически приемлемые пролекарство, метаболит, полиморф, соль, сольват, стереоизомер или клатрат.

Как применяют здесь и если не указано особо, термин фармацевтически приемлемая соль в качестве неограничивающих примеров включает соли кислотообразующих или основных групп, которые могут присутствовать в соединениях, по изобретению. При определенных кислых условиях соединение по изобретению может образовывать множество солей с разнообразными неорганическими и органическими кислотами. Кислоты, которые можно использовать для приготовления фармацевтически приемлемых солей таких основных соединений, представляют собой кислоты, которые образуют соли, содержащие фармацевтически приемлемые анионы, в качестве неограничивающих примеров включающие ацетат, бензолсульфонат, бензоат, бикарбонат, битартрат, бромид, кальциевую соль или эфир этилендиаминтетрауксусной кислоты, камсилат, карбонат, хлорид, бромид, йодид, цитрат, дигидрохлорид, этилендиаминтетраацетат, эдисилат, эстолат, эзилат, фумарат, глуцептат, глюконат, глутамат, глюколлиларсанилат, гексилрезорцинат, гидрабамин, гидроксинафтоат, изетионат, лактат, лактобионат, малат, малеат, манделат, мезилат, метилсульфат, мускат, напсилат, нитрат, пантотенат, фосфат/дифосфат, полигалактуронат, салицилат, стеарат, сукцинат, сульфат, таннат, тартрат, теоклат, триэтиодид и анион памовой кислоты. При определенных кислых условиях соединение по изобретению может образовывать основные соли с множеством фармацевтически приемлемых катионов. Неограничивающие примеры таких солей включают соли щелочных металлов или щелочно-земельных металлов и, в частности, соли кальция, магния, натрия, лития, цинка, калия и железа.

Как применяют здесь и если не указано особо, термин гидрат означает соединение по настоящему изобретению, или его соль, которое дополнительно содержит стехиометрическое или нестехиометрическое количество воды, связанной нековалентными силами межмолекулярного взаимодействия.

Как применяют здесь и если не указано особо, термин сольват означает сольват, образованный присоединением одной или более молекул растворителя к соединению, по настоящему изобретению. Термин сольват включает гидраты (например, моногидраты, дигидраты, тригидраты, тетрагидраты и подобные).

- 4 013973

Как применяют здесь и если не указано особо, термин полиморф означает твердые кристаллические формы соединения по настоящему изобретению или их комплекс. Различные полиморфы одного и того же соединения могут обладать различными физическими, химическими и/или спектроскопическими свойствами.

Как применяют здесь и если не указано особо, термин пролекарство означает производное соединения, которое может подвергаться гидролизу, окислению или иным способам воздействия в биологических условиях (ίη νίίτο или ίη νίνο) для предоставления соединения. Неограничивающие примеры пролекарств включают производные и метаболиты (+)-2-[1-(3-этокси-4-метоксифенил)-2-метилсульфонилэтил]-4ацетиламиноизоиндолин-1,3 -диона, 4-(амино)-2-(2,6-диоксо(3-пиперидил))изоиндолин-1,3 -диона, 3 -(4-амино-1оксо-1,3-дигидроизоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона или циклопропил {2-[(18)-1-(3-этокси-4-метоксифенил)-2(метилсульфонил)этил]-3-оксоизоиндолин-4-ил}карбоксамида, которые включают биогидролизуемые функциональные группы, такие как биогидролизуемые амиды, биогидролизуемые сложные эфиры, биогидролизуемые карбаматы, биогидролизуемые карбонаты, биогидролизуемые уреиды и биогидролизуемые аналоги фосфатов. Как правило, пролекарство можно приготовить при помощи хорошо известных способов, таких как способы, описанные в 1 Витдегк Мебюта1 Сйешкйу апб Отид Океохсгу. 172-178, 949982 (МапГтеб Ε. Αοίί'ί' еб., 5^4Ь сб., 1995).

Как применяют здесь и если не указано особо, термины биогидролизуемый карбамат, биогидролизуемый карбонат, биогидролизуемый уреид и биогидролизуемый фосфат означают, соответственно, карбамат, карбонат, уреид и фосфат соединения, которое либо 1) не препятствует биологической активности соединения, но может придавать соединению полезные свойства ίη νίνο, такие как усвоение, продолжительность действия или включение действия; либо 2) является биологически неактивным, однако преобразовывается ίη νίνο в биологически активное соединение. Неограничивающие примеры биогидролизуемых карбаматов включают низшие алкиламины, замещенные этилендиамины, аминокислоты, гидроксиалкиламины, гетероциклические и гетероароматические амины и полиэфирные амины.

Как применяют здесь и если не указано особо, термин стереоизомер охватывает все энантиомерно/стереоизомерночистые и энантиомерно/стереоизомернообогащенные соединения по этому изобретению.

Как применяют здесь и если не указано особо, термин стереоизомерночистые или энантиомерночистые означает, что соединение содержит один стереоизомер и, по существу, свободно от его контрстереомера или контрэнантиомера. Например, соединение является стереоизомерно- или энантиомерночистым, когда соединение содержит 80, 90 или 95% или более одного стереоизомера и 20, 10 или 5% или менее контрстереоизомера. В некоторых случаях соединение по изобретению рассматривается оптически активным или стереоизомерно/энантиомерночистым (например, по существу, Я-форма или, по существу, 8-форма) по отношению к хиральному центру, когда соединение является приблизительно на 80% ее (энантиомерно избыточно), или более предпочтительно является равным 90% ее или более по отношению к конкретному хиральному центру, и более предпочтительно 95% ее по отношению к конкретному хиральному центру.

Как применяют здесь и если не указано особо, термин по существу, свободный от (Я)-энантиомера применяют здесь для обозначения равного или более чем на 80% очищенного от (8)-энантиомера, исходя из общей массы соединения. В некоторых случаях термин по существу, свободный от (Я)-энантиомера означает равный или более чем на 85, 90, 95 или 99% очищенный от (8)-энантиомера, исходя из общей массы соединения.

Как применяют здесь и если не указано особо, термин по существу, свободный от (-)энантиомера применяют для обозначения равного или более чем на 80% очищенного от (+)энантиомера, исходя из общей массы соединения. В некоторых случаях термин по существу, свободный от (-)энантиомера означает равный или более чем на 85, 90, 95 или 99% очищенный от (+)энантиомера, исходя из общей массы соединения.

Как применяют здесь и если не указано особо, термин стереоизомернообогащенные или энантиомернообогащенные охватывает определенные смеси стереоизомеров соединений по этому изобретению (например, Я/8 = 30/70, 35/65, 65/35 и 70/30).

Как применяют здесь и если не указано особо, термины лечить, лечащий и лечение предполагают действие, совершаемое в отношении пациента, страдающего определенным заболеванием или расстройством, которое уменьшает тяжесть или симптомы заболевания или расстройства или ослабляет или замедляет прогрессирование или симптомы заболевания или расстройства.

Как применяют здесь и если не указано особо, термин терапевтически эффективное количество охватывает описанные выше дозовые количества и режимы периодичности доз. Различные терапевтически эффективные количества могут применяться при различных проявлениях и условиях волчанки, что должно быть хорошо известно любому специалисту в данной области. Аналогично, количества, достаточные для лечения или предотвращения таких расстройств, но недостаточные для вызывания, или достаточные для уменьшения неблагоприятных воздействий, связанных с соединением по изобретению, также охватываются описанными выше дозовыми количествами и режимами периодичности доз.

- 5 013973

Как применяют здесь и если не указано особо, термины предотвращать и предотвращение предполагают действие, совершаемое до того, как пациент начнет страдать определенным заболеванием или расстройством, которое подавляет или уменьшает тяжесть или симптомы заболевания или расстройства.

Как применяют здесь и если не указано особо, термины контроль, контролирующий и контролировать охватывают предотвращение повторения определенного заболевания или расстройства у пациента, который ранее страдал определенным заболеванием или расстройством, и/или увеличение времени, при котором пациент, страдавший определенным заболеванием или расстройством, остается в ремиссии. Термины охватывают регулирование границы, течения и/или продолжительности заболевания или расстройства или изменение пути реагирования пациента на заболевание или расстройство.

Как применяют здесь и если не указано особо, термин усиление или усиливать при использовании в связи с иммунным ответом означает, что при введении антигенного или иммуногенного вещества субъекту, подвергавшемуся или подвергаемому лечением соединениями по изобретению, происходит усиленное образование антител по сравнению с субъектом, которому вводится то же количество антигенного или иммуногенного вещества самого по себе, определяемое при помощи любого традиционного способа определения уровня антител, известного в рассматриваемой области, например нефелометрии, иммуноэлектрофореза, радиоиммунного анализа и ЕЫ8А. В некоторых вариантах осуществления при использовании способов по этому изобретению образование антител возрастает приблизительно на 5, 10, 20, 50 или 100% или более по сравнению с образованием антител в случае, когда такие способы не применяют.

Соединение по изобретению (+)-2-[1-(3-этокси-4-метоксифенил)-2-метилсульфонилэтил]-4ацетиламиноизоиндолин-1,3-дион

Настоящее изобретение предоставляет способы лечения, контроля или предотвращения кожной волчанки, которые включают введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, контроле или предотвращении, эффективного количества (+)энантиомера (+)-2-[1-(3-этокси-4-метоксифенил)-2-метилсульфонилэтил]-4-ацетиламиноизоиндолин-1,3-диона.

Считается, без теоретического ограничения, что (+)энантиомер (+)-2-[1-(3-этокси-4-метоксифенил)-

2-метилсульфонилэтил]-4-ацетиламиноизоиндолин-1,3-диона представляет собой (8)-{2-[1-(3-этокси-4метоксифенил)-2-метилсульфонилэтил]-4-ацетиламиноизоиндолин-1,3-дион} (соединение (I)), которое имеет следующую структуру:

Таким образом, (+)-2-[1-(3-этокси-4-метоксифенил)-2-метилсульфонилэтил]-4-ацетиламиноизоиндолин-1,3-дион используют для описания соединения, обозначенного как соединение (I). Соединение (I) можно получить при помощи способов, раскрытых в патенте И8 6962940, озаглавленном (+)-2-[1-(3Е1йоху-4-те1йохурйепу1)-2-те1йу18и1Гопу1е1йу1]-4-асе1у1атто18отбо1те-1,3-бюпе: МеИобк οί Иапд апб Сотро8Йюп8 ТНегеоГ'. выданном 8 ноября 2005 года, который включен сюда в виде ссылки. В конкретном способе соединение (I) синтезируют из 3-ацетамидофталевого ангидрида и соли хиральной аминокислоты (8)-2-(3-этокси-4-метоксифенил)-1-(метилсулфонил)-эт-2-иламина. Соли хиральной аминокислоты (8)-2-(3-этокси-4-метоксифенил)-1-(метилсулфонил)-эт-2-иламина в качестве неограничивающих примеров включают соли, образуемые с Ь-изомерами аланина, аргинина, аспарагина, аспарагиновой кислоты, цистеина, глутамина, глутаминовой кислоты, глицина, гистидина, изолейцина, лейцина, лизина, метионина, фенилаланина, пролина, серина, треонина, триптофана, тирозина, валина, орнитина, 4-аминомасляной кислоты, 2-аминоизомасляной кислоты, 3-аминопропионовой кислоты, орнитина, норлейцина, норвалина, гидроксипролина, саркозина, цитруллина, цистеиновой кислоты, трет-бутилглицина, трет-бутилаланина, фенилглицина, циклогексилаланина и Ν-ацетил-Ь-лейцина. Конкретной солью хиральной аминокислоты является Ν-ацетил-Ь-лейциновая соль (8)-2-(3-этокси-4-метоксифенил)-1(метилсулфонил)-эт-2-иламина, которую получают из 2-(3-этокси-4-метоксифенил)-1-(метилсулфонил)эт-2-иламина и №ацетил-1-лейцина в метаноле.

Альтернативно, соединение (I) можно выделить из соответствующего рацемического 2-[1-(3-этокси-4-метоксифенил)-2-метилсульфонилэтил]-4-ацетиламиноизоиндолин-1,3-диона при помощи способов разделения, известных в данной области. Рацемическое соединение можно легко получить, используя методику из примера 12 патента И8 6020358, который включен сюда в виде ссылки. Неограничивающие примеры подходящих способов разделения включают образование хиральных солей и применение хиральной или высокоэффективной жидкостной хроматографии ВЭЖХ и образование, и кристаллизацию

- 6 013973 хиральных солей. См., например, 1асцис5. 1. с( а1., Еиаийотетк, ВасстаВк и Вс8о1и1юи8 (XVПсу 1и!сг8С1еисе, №\ν Уогк, 1981); νίΒη, δ.Η. с! а1., Тс1гайсйгои, 33:2725 (1977); Е11с1 Е.Ь., §1сгсосйст181гу о£ СагЬои Сотроиийз (МсСгате Н111, ΝΥ, 1962) и XVПсп δ.Η., ТаЫсз о£ Вс§о1ушд Адси18 и Орйса1 Вс8о1и1юи8, р. 268 (ЕХ. Е11с1, Ей., Ишу. о£ №(гс Иатс Ртс88, №(гс Иатс, ΙΝ, 1972).

4-(Амино)-2-(2,6-диоксо(3-пиперидил))изоиндолин-1,3-дион и 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидроизоиндол-2-ил)-пиперидин-2,6-дион

Настоящее изобретение предоставляет способы лечения, контроля или предотвращения кожной волчанки, которые включают введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, контроле или предотвращении, терапевтически или профилактически эффективного количества 4-(амино)-2-(2,6-диоксо(3пиперидил))изоиндолин-1,3-диона (АСТ1МШ™), имеющего следующую формулу:

о

или 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидроизоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона (ВЕУЫМГО®), имеющего следующую химическую структуру:

О

или их фармацевтически приемлемых пролекарства, метаболита, полиморфа, соли, сольвата, стереоизомера или клатрата.

Соединения доступны от Се1деие Сотрогайои, 8иттй, N1. Соединения можно получить при помощи стандартных способов синтеза (см., например, патент υδ 5635517, включенный сюда в виде ссылки). Конкретные способы получения 4-(амино)-2-(2,6-диоксо(3-пиперидил))изоиндолин-1,3-диона раскрыты в непредварительной патентной заявке ϋδ 11/479823, поданной 29 июня 2006 года, и предварительной патентной заявке ϋδ 60/696224, поданной 30 июня 2005 года, озаглавленной 3-(4-амино-1-оксо-1,3дигидроизоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона Ргосс55С5 £от (Не ртератайои о£ 4-ат1ио-2-(2,6йюхор1репйш-3 -у1)-18ошйо1шс-1,3 -йюис сотроиийк 3 -(4-амино-1-оксо-1,3-дигидроизоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона, каждая из которых включена сюда в виде ссылки.

В одном варианте осуществления 4-(амино)-2-(2,6-диоксо(3-пиперидил))изоиндолин-1,3-дион или

3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидроизоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион является энантиомерночистым. В другом варианте осуществления 4-(амино)-2-(2,6-диоксо(3-пиперидил))изоиндолин-1,3-дион или 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидроизоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион представляет собой В-энантиомер. В следующем варианте осуществления 4-(амино)-2-(2,6-диоксо(3-пиперидил))изоиндолин-1,3-дион или 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидроизоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион представляет собой δ-энантиомер. В следующем варианте осуществления 4-(амино)-2-(2,6-диоксо(3-пиперидил))изоиндолин-1,3-дион или 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидроизоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион представляет собой рацемическую смесь.

В дополнительных вариантах осуществления конкретные соединения, использованные в изобретении, представляют собой полиморфные формы 4-(амино)-2-(2,6-диоксо(3-пиперидил))изоиндолин-1,3диона или 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидроизоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона. Конкретные полиморфные формы 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидроизоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона, такие как формы А, В, С, Ό, Е, Е, С и Н, раскрыты в предварительной заявке υδ 60/499723, поданной 4 сентября 2003 года, и непредварительной заявке υδ 10/934863 (опубликована под № 2005/0096351), поданной 3 сентября 2004 года, которые включены сюда в полном объеме в виде ссылки.

Например, форма А 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидроизоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона представляет собой несольватированное кристаллическое вещество, которое можно получить из систем неводного растворителя. Форма А имеет порошковую рентгенограмму, содержащую существенные пики при приблизительно 8, 14,5, 16, 17,5, 20,5, 24 и 26° 2θ, и имеет максимум температуры плавления, полученный при помощи дифференциальной сканирующей калориметрии, приблизительно 270°С. Форма В 3-(4амино-1-оксо-1,3-дигидро-изоиндол-2-ил)-пиперидин-2,6-диона представляет собой полугидратированное, кристаллическое вещество, которое можно получить из различных систем растворителей, без ограничения включая гексан, толуол и воду. Форма В имеет порошковую рентгенограмму, содержащую существенные пики при приблизительно 16, 18, 22 и 27° 2θ, и имеет максимум температуры плавления, полученный при помощи дифференциальной сканирующей калориметрии, приблизительно 268°С.

Циклопропил {2-[(18)-1-(3-этокси-4-метоксифенил)-2-(метилсульфонил)этил]-3оксоизоиндолин-4-ил}карбоксамид

Настоящее изобретение предоставляет способы лечения, контроля или предотвращения кожной волчанки, которые включают введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, контроле или предотвращении, терапевтически или профилактически эффективного количества циклопропил {2-[(1δ)-1-(3

- 7 013973 этокси-4-метоксифенил)-2-(метилсульфонил)этил]-3-оксоизоиндолин-4-ил}карбоксамида или Ν-[2-[(18)1-(3 -этокси-4-метоксифенил)-2-(метилсульфонил)этил]-2,3-дигидро-3 -оксо-1Н-изоиндол-4-ил]циклопропанкарбоксамида.

Циклопропил {2-[(18)-1-(3-этокси-4-метоксифенил)-2-(метилсульфонил)этил]-3-оксоизоиндолин-4ил}карбоксамид или Ν-[2-[( 18)-1 -(3 -этокси-4-метоксифенил)-2-(метилсульфонил)этил]-2,3-дигидро-3 оксо-1Н-изоиндол-4-ил]циклопропанкарбоксамид (а именно соединение (II)) имеет следующую структуру:

Соединение (II) можно получить, исходя из методики получения из примера 57 патента и8 6667316, озаглавленного Рйагтасеийса11у Асйуе [δοίπύοΐίηο ΟοπναΙίνοδ. выданном 23 декабря 2003 года, который включен сюда в полном объеме в виде ссылки. В конкретном варианте осуществления соединение (II) можно получить путем нагрева смеси 7-амино-2-[(18)-1-(3-этокси-4-метоксифенил)-2(метилсульфонил)этил]изоиндолин-1-она и циклопропанкарбонилхлорида в тетрагидрофуране.

Альтернативно, соединение (II) можно выделить из соответствующего рацемического циклопропил {2-[1-(3-этокси-4-метоксифенил)-2-(метилсульфонил)этил]-3 -оксоизоиндолин-4-ил}карбоксамида при помощи способов разделения, известных специалистам в данной области. Рацемическое соединение можно легко получить, исходя из методики получения из примера 55 патента И8 6667316. Неограничивающие примеры подходящих способов разделения включают образование хиральных солей, применение хиральной или высокоэффективной жидкостной хроматографи ВЭЖХ и образование и кристаллизацию хиральных солей. См., например, Вех ^. 8ои!ег, СНготаЮдгарЫс 8ерагайоп5 о£ 81егеойотег8, (СВС Рге§8, Воса Ва!оп, 1985); 1асс.|ие5 I. е1 а1., Епапйотега, Васета!е§ апй ВекоШопк (\УПеу Ыегашепсе, №\ν Уогк, 1981); \Уйеп 8.Н. е! а1., Τеΐ^айей^οη, 33:2725 (1977); Е11е1 Е.Ь., 81егеос11ет1Чгу о£ СагЬоп Сотроипйк (МсСгате НШ, ΝΥ, 1962) и \Уйеп 8.Н., ΤаЬ1е8 о£ ВекоМпд Адеп15 апй Орйса1 ВекоШопк, р. 268 (Е.Ь. Е11е1, Ей., Ищу. о£ Ыо1ге Эате Рге§8, Ыо1ге Эате, ΓΝ, 1972).

Способы лечения и предотвращения

Настоящее изобретение предоставляет способы лечения, предотвращения и/или контроля кожной волчанки. Неограничивающие примеры кожной волчанки в объеме способов по изобретению без ограничения включают кожную красную волчанку (СЬЕ), острую кожную красную волчанку (АСЬЕ), подострую кожную красную волчанку (8СЬЕ), хроническую кожную красную волчанку (ССЬЕ) или дискоидную красную волчанку (ВЬЕ), красную волчанку новорожденных (ИСЕ), веррукозную ВЬЕ, глубокую форму красной волчанки, БЬЕ на слизистой, БЬЕ ладоней и стоп и тумидную форму туберкулезной волчанки.

В нескольких вариантах осуществления настоящее изобретение предоставляет способы лечения АСЬЕ. АСЬЕ обычно представляет собой чувствительный к свету дерматоз. Он может проявляться в виде сглаженных участков покрасневшей кожи, которые напоминают устойчивый загар или проявляются наподобие сыпи. АСЬЕ может образовывать сыпь в виде бабочки, расположенной в центральной части лица, и/или в виде распространенной конфигурации, включая другие области, такие как руки, ноги и тело. Полагают, что этиология АСЬЕ является многофакторной, включающей генетические, экологические и гормональные факторы. Таким образом, изобретение включает лечение пациентов, которые имеют генетическую предрасположенность или подверглись воздействию естественного ультрафиолетового излучения.

В следующих вариантах осуществления настоящее изобретение предоставляет способы лечения 8СЬЕ. 8СЬЕ представляет собой нерубцующийся, не вызывающий атрофию чувствительный к свету дерматоз. В некоторых случаях 8СЬЕ проявляется как не вызывающее зуд кольцеобразное неводянистое высыпание на верхней части спины и груди, часто после воздействия солнечного облучения. 8СЬЕ может иметь место у пациентов с системной красной волчанкой, синдромом 8)одгеп и с недостатком второго компонента комплемента (С2й), или может вызываться применением лекарственных средств. Как правило, 8СЬЕ имеет место у индивидуумов с генетической предрасположенностью, наиболее часто у пациентов с лейкоцитарным антигеном В8 (НЬА-В8) человека, лейкоцитарным антигеном БВ3 (НЬА-ВВ3) человека, лейкоцитарным антигеном БВ^52 (НЬА-ВВ^52) человека и лейкоцитарным антигеном ВО1 (НЬА-Вр1) человека. 8СЬЕ, по существу, связана с анти-Во (88-А) аутоантителами. Таким образом, в конкретном варианте осуществления изобретение включает лечение популяции таких пациентов.

В следующих вариантах осуществления настоящее изобретение предоставляет способы лечения ССЬЕ или ВЬЕ. ССЬЕ или БЬЕ представляет собой хронический, образующий рубцы и атрофию чувствительный к свету дерматоз. БЬЕ обычно проявляется в виде красных чешуйчатых очажков, которые оставляют белые шрамы. БЬЕ действует преимущественно на щеки и нос, однако временами затрагивает верхнюю часть спины, шеи, тыльную сторону кисти, оголенную часть кожи черепа и губ. БЬЕ может

- 8 013973 иметь место у пациентов с системной красной волчанкой (8ЬЕ). У некоторых пациентов также имеются участки повреждения 8СЬЕ и у некоторых может быть высыпание на щеках. ОЬЕ имеет место у индивидуумов с генетической предрасположенностью. Таким образом, в конкретном варианте осуществления изобретение включает лечение популяции таких пациентов.

В следующих вариантах осуществления настоящее изобретение предоставляет способы лечения веррукозной ОЬЕ у человека при помощи перорального или местного введения. Веррукозная ОЬЕ относится к ОЬЕ, имеющей очаг повреждения, который может развиться в очень большом масштабе.

В других вариантах осуществления настоящее изобретение предоставляет способы лечения глубокой формы красной волчанки у человека при помощи перорального или местного введения. Глубокая форма красной волчанки представляет собой специфическую форму ОЬЕ и относится к ОЬЕ, имеющей повреждения, которые могут иметь место в связи с плотными вздутиями в подкожной жировой ткани.

В других вариантах осуществления настоящее изобретение предоставляет способы лечения ЭБЕ слизистой у человека при помощи перорального или местного введения. ЭБЕ слизистой представляет собой специфическую форму ЭБЕ и относится к повреждениям, которые иногда имеют место на мембранах слизистых рта, носа и глаз.

В других вариантах осуществления настоящее изобретение предоставляет способы лечения ЭБЕ ладоней и ступней у человека при помощи перорального или местного введения. ЭБЕ ладоней и ступней представляет собой специфическую форму ЭБЕ и относится к повреждениям, которые иногда имеют место на кистях рук и стопах.

В других вариантах осуществления настоящее изобретение предоставляет способы лечения тумидной формы туберкулезной волчанки у человека при помощи перорального или местного введения. Тумидная форма туберкулезной волчанки представляет собой специфическую форму ЭБЕ и проявляется как сглаженные, блестящие, красно-фиолетовые пятна сыпи на голове и шее, которые могут вызывать зуд и обладать небольшим размером. Повреждения, вызванные тумидной формой туберкулезной волчанки, обычно являются чистыми, без рубцевания и могут рецидивировать в их изначальной локализации.

В других вариантах осуществления настоящее изобретение предоставляет способы лечения ΝΕ-Е. ΝΕ-Е представляет собой редкое состояние у детей и проявляется обычно в виде не образующих рубцов и атрофии повреждений. В конкретных вариантах осуществления способы включают пероральное или местное лечение, или оба эти вида лечения, новорожденных младенцев, рожденных у матерей с 8СЬЕ. Полагают, что ΝΕ-Е имеет отношение к различным факторам, включая генетическую предрасположенность, вирусную инфекцию и другие неизвестные факторы.

В следующих вариантах осуществления настоящее изобретение предоставляет способы лечения красной волчанки (ЬЕ) у детей. В конкретном варианте осуществления красная волчанка (ЬЕ) подвергается лечению у детей, включая детей, предрасположенных к генетическим факторам и, возможно, другим явлениям окружающей среды.

Это изобретение также охватывает применение соединений по изобретению для регулирования иммунной системы с целью удержания ее от нарушения баланса и возникновения у пациента воспалительных и аутоиммунных расстройств наподобие волчанки. В связи с этим, в другом варианте осуществления это изобретение охватывает способы усиления иммунного ответа на иммуноген, включающие введение пациенту, нуждающемуся в таком усилении, терапевтически или профилактически эффективного количества (+)-2-[1-(3-этокси-4-метоксифенил)-2-метилсульфонилэтил]-4-ацетиламиноизоиндолин-1,3-диона,

4-(амино)-2-(2,6-диоксо(3-пиперидил))изоиндолин-1,3-диона, 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидроизоиндол-2ил)-пиперидин-2,6-диона или циклопропил {2-[(18)-1-(3-этокси-4-метоксифенил)-2-(метилсульфонил)этил]-3-оксоизоиндолин-4-ил}карбоксамида или их фармацевтически приемлемых соли, сольвата или стереомера. Соединения могут вводиться перед, во время или после воздействия иммуногена на пациента.

Комбинированная терапия с применением второго активного агента

В конкретных способах, охваченных этим вариантом осуществления, соединение по изобретению вводят в комбинации с другим лекарственным средством (второй активный агент) в способы лечения, контроля и/или предотвращения кожной волчанки. Второй активный агент без ограничения включает противовоспалительные вещества, такие как нестероидные вещества и кортикостероидные гормоны, противомалярийные вещества, иммунодепрессивные средства, антибиотики, противовирусные средства, вещества, усиливающие иммунитет, гормоны, РСЕ2 и их комбинации. Неограничивающие примеры способов или терапий, которые могут применяться в комбинации с введением соединения по изобретению, включают инъекции или вливания антител и трансплантацию стволовых клеток.

Соединение по изобретению можно применять, по меньшей мере, с вторым активным агентом в раскрытых здесь способах по изобретению. Это изобретение охватывает синергетические комбинации для лечения, предотвращения и/или контроля кожной волчанки. Соединение по изобретению может также применяться для уменьшения побочных или неназванных эффектов, связанных с некоторыми вторыми активными агентами, и наоборот, некоторые вторые активные агенты можно использовать для уменьшения побочных или неназванных эффектов, связанных с соединением по изобретению.

В некоторых представляющих интерес вариантах осуществления вторые активные агенты могут в

- 9 013973 качестве неограничивающих примеров включать противовоспалительные вещества, такие как, в качестве неограничивающих примеров, ацетаминофен (например, ΤΥΕΕΝΟΕ®), производные 5-аминосалициловой кислоты, салицилаты, кортикостероидные гормоны и нестероидные противовоспалительные лекарственные средства. Неограничивающим примером производных 5-аминосалициловой кислоты является сульфасалазин (например, ΑΖυΕΕΙΌΙΝΕ®). Неограничивающим примером салицилатов является ацетилсалициловая кислота (например, ΑδΡΙΡΙΝ®).

Неограничивающие примеры кортикостероидных гормонов включают дексаметазон (например, ΑΖΐυΜ® или νΟΡΕΝ®), гидрокортизон (например, СЕТА СОРТ®. ΗΥΤΟΝΕ® или ΝυΤΡΑίΟΡΤ®), беклометазон (например, νΑΝί/ΕΡΙΕ®), будезонид (например, ΡυΕΜΙίΟΡΤ), флутиказон (например, ΕΕΟΝΑδΕ® или ΕΕΟΥΕΝΤ®), метилпреднизолон (например, ΌΕΡΟ-ΜΕΌΡΟΕ®, δΟΕυ-ΜΕΌΡΟΕ® или ΜΕΌΡΟΕ®), мометазона фуроат (например, ΝΑδΟΝΕ® или ΕΕΟίΟΝ®), преднизон (например, ΌΕΕΤΑδΟΝ®, ΟΡΑδΟΝ®, ΡΡΕΌΝΙίΕΝ-Μ® или ΡΡΕΌ®) и триамцинолон (например,

ΑΖΜΑίΟΡΤ®).

Неограничивающие примеры нестероидных противовоспалительных лекарственных средств включают диклофенак (например, ΑΡΤΗΡΟΤΕί®), дифлунисал (например, ΌΟΕΟΒΙΌ®), этодолак (например, ΕΟΌΙΝΕ®), фенопрофен (например, ΝΑΕΕΟΝ®), ибупрофен (например, ΑΌνΐΕ®, ίΗΙΕΌΡΕΝ'δ ΑΌνΙΕ/ΜΟΤΡΙΝ®, ΜΕΌΙΡΡΕΝ®, ΜΟΤΡΙΝ®, ΝυΡΡΙΝ® или ΡΕΌΙΑίΑΡΕ ΕΕνΕΡ®), индометацин (например, ΑΡΤΗΡΕΧΙΝ®), кетопрофен (например, ΟΡυνΑΙΕ®), кеторолак (например, ΤΟΡΑΌΟΕ®), фосфомицин трометамин (например, ΜΟΝυΡΑΕ®), меклофенамат (например, Μес1οтеη®), набуметон (например, ΡΕΕΑΕΕΝ®), напроксен (например, ΑΝΑΡΡΟΧ®, ΑΝΑΡΡΟΧ® Όδ, ЕС-ΝΑΡΡΟδΥΝ®, ΝΑΡΡΕΕΑΝ® или ΝΑΡΡΟδΥΝ®), оксапрозин (например, ΌΑΥΡΡΟ®), пироксикам (например, ΕΕΕΌΕΝΕ®), сулиндак (например, ίΠΝΟΡΙΕ®) и толметин (например, ΤΟΕΕίΤΙΝ® Όδ или ΤΟΕΕίΤΙΝ®).

В других представляющих интерес вариантах осуществления вторые активные агенты могут без ограничения включать противомалярийные вещества, такие как хлорохин (например, ΑΡΑΕΕΝ®) и гидроксихлорохин (например, ΡΕΑρυΕΝΙΕ®); иммунодепрессивные средства, такие как азатиоприн (например, ΙΜυΡΑΝ®^Μ), циклофосфамид (например, ίΥΤΟΧΑΝ®), хлорамбуцил (например, ΕΕυΚΕΡΑΝ®) и мелфалан (например, ΑΕΚΕΡΑΝ®); и иммуномодулирующие соединения, такие как азатиоприн (например, ΙΜυΡΑΝ®), циклофосфамид (например, ίΥΤΟΧΑΝ®), метотрексат (например, ΡΗΕυΜΑΤΡΕΧ®) и циклоспорин (например, ΝΕΟΡΑΕ® или δΑΝΌΙΜΜΗΝΕ®).

В других представляющих интерес вариантах осуществления вторые активные агенты могут без ограничения включать антибиотики (лечебные или профилактические), такие как, в качестве неограничивающих примеров, ампициллин (например, υΝΑδΥΝ®), тетрациклин (например, ΑίΗΡΟΜΥίΙΝ® или δυΜΥίΙΝ®), пенициллин (например, ΑΜΟΧΙΌ®, ΡΟΌΥΜΟΧ®, ΤΡΙΜΟΧ®, δΡΕίΤΡΟΒΙΌ® или ΡΕΟίΙΕΌΙΝ®), цефалоспорин (например, ΟΜΝΙίΕΕ®, δΡΕίΤΡΑίΕΕ®, δυΡΡΑΧ®, νΑΝΤΙΝ®, ίΕΕΖΙΕ® или ίΕΌΑΧ®), стрептомицин (например, ΖΑΝΟδΑΡ®), канамицин (например, ΚΑΝΤΡΕΧ®) и эритромицин (например, Ε.Ε.δ.®, Ε-ΜΥίΙΝ®, ΕΡΥί®, ΕΡΥ-ΤΑΒ®, ΕΡΥΤΗΡΟίΙΝ® или РСЕ®); противовирусные средства, такие как, в качестве неограничивающих примеров, амантадин (например, δΥΜΜΕΤΡΕΕ®), римантадин (например, ΕΕυΜΑΌΙΝΕ®), ацикловир (например, ΖΟνΙΡΑΧ®) и рибавирин (например, νΙΡΑΖΟΕΕ®); иммуноглобулин; вещества, усиливающие иммунитет, такие как, в качестве неограничивающих примеров, левамизол (например, ΕΡΡΑΜΙδΟΌ®) и инозин пранобекс (ΙδΟΡΡΙΝΟδΙΝΕ®); биологические препараты, такие как, в качестве неограничивающих примеров, гаммаглобулин, трансферный фактор, интерлейкины и интерфероны; гормоны, такие как, в качестве неограничивающих примеров, гормоны щитовидной железы; и другие иммунологические вещества, такие как, в качестве неограничивающих примеров, стимуляторы В-клеток (например, ΒΑΕΕ/ΒΙνδ), цитокины (например, ΙΕ-2, ΙΕ-4 и ΙΕ-5), факторы роста (например, ΤΡΕ-β), антитела (например, анти-СЭ40 и Ι§Μ), олигонуклеотиды, содержащие неметилированные СрС мотивы (например, ΤίΡΤίΡΤΤΤΤΡΤίΡΤΤΤΤΡΤίΡΤΤ) и вакцины (например, вирусные и опухолевые пептидные вакцины).

В другом варианте осуществления способы по этому изобретению могут применяться в комбинации с другими способами, используемыми для лечения, предотвращения и/или контроля кожной волчанки. Неограничивающие примеры других способов включают трансплантацию стволовых клеток, лечение при помощи направленного транспорта ферментов, например коньюгата аденозиндезаминазы быка с полиэтиленгликолем (ΡΕΡ-ΑΌΑ), трансплантанта эмбрионального тимуса, культивируемого трансплантанта тимуса новорожденных, трансплантанта эпителиальных клеток тимуса и трансплантанта печени эмбриона.

Конкретные способы по изобретению включают введение (+)-2-[1-(3-этокси-4-метоксифенил)-2метилсульфонилэтил]-4-ацетиламиноизоиндолин-1,3-диона, 4-(амино)-2-(2,6-диоксо(3-пиперидил))изоиндолин1,3-диона, 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидроизоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона или циклопропил {2-[(1δ)1-(3 -этокси-4-метоксифенил)-2-(метилсульфонил)этил]-3 -оксоизоиндолин-4-ил}карбоксамида или их

- 10 013973 фармацевтически приемлемых соли, сольвата или стереоизомера, в комбинации, по меньшей мере, с вторым активным агентом или другой терапией.

Введение соединения по изобретению и, по меньшей мере, второго активного агента пациенту может осуществляться одновременно или последовательно одним и тем же способом или различными способами введения. Пригодность конкретного способа введения, используемого для конкретного второго активного агента, зависит от самого по себе второго активного агента (например, возможно ли его местное или пероральное введение без разложения до попадания в кровяное русло) и подвергаемого лечению заболевания. Конкретным способом введения соединения по изобретению является местное применение. Конкретные способы введения вторых активных агентов или ингредиентов по изобретению известны любому специалисту в рассматриваемой области. См., например, Т11С Мегск Мапиа1, 430-431 (17^4Ь еб., 1999).

Количество второго активного агента для введения можно определить, исходя из применяемых конкретных веществ, типа подвергаемого лечению или контролю заболевания, степени тяжести и стадии заболевания и количеств(ва) соединений по изобретению и любых необязательных дополнительных вторых активных агентов, одновременно вводимых пациенту. Любой специалист в рассматриваемой области может определить конкретные количества на основании общепринятого метода, известного в данной области. В начале можно исходить из количества второго активного агента, который традиционно применяют при лечении, и согласовывать количество на основе описанных выше факторов. См., например, Рйу81С1ап'8 Эехк ВеГегепсе (5б‘^ь еб., 2004). Далее, количества и способы введения вторых активных агентов, раскрытых здесь, для лечения, предотвращения и/или контроля кожной волчанки описаны в литературе, например Рйу81С1ап'8 Эехк КеГегепсе (5б‘^ь еб., 2004), которое включено сюда в виде ссылки.

Циклическая терапия

В некоторых вариантах осуществления соединение по изобретению циклически вводят пациенту. Циклическая терапия подразумевает введение соединения по изобретению в течение периода времени, за которым следует перерыв в течение периода времени и повторение этого непрерывного введения. Циклическая терапия может уменьшить развитие устойчивости к одному или более видам терапии, позволить избежать или уменьшить побочные эффекты одного из видов терапии и/или повысить эффективность лечения.

Соответственно, в одном конкретном варианте осуществления изобретения соединение по изобретению вводят ежедневно в единичных или удвоенных дозах в течение от четырех до шести недель с перерывом приблизительно в неделю или две недели. Изобретение также позволяет увеличивать частоту, число и длительность циклов дозирования. Таким образом, другой конкретный вариант осуществления изобретения охватывает введение соединения по изобретению в течение большего количества циклов, чем принято при введении в течение одного цикла. В еще одном конкретном варианте осуществления изобретения соединение по изобретению вводят в течение большего числа циклов, которые обычно должны вызывать дозо-ограничивающую токсичность у пациента, которому не вводят второй активный ингредиент.

В одном варианте осуществления (+)-2-[1-(3-этокси-4-метоксифенил)-2-метилсульфонилэтил]-4ацетиламиноизоиндолин-1,3-дион вводят ежедневно и непрерывно в течение трех или четырех недель в дозировке от приблизительно 10 до приблизительно 200 мг в день, после чего следует перерыв в течение одной или двух недель. В другом варианте осуществления 4-(амино)-2-(2,б-диоксо(3пиперидил))изоиндолин-1,3-дион вводят ежедневно и непрерывно в течение трех или четырех недель в дозировке от приблизительно 0,1 до 5 мг в день, после чего следует перерыв в течение одной или двух недель. В конкретном варианте осуществления 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидроизоиндол-2-ил)пиперидин2,б-дион вводят в количестве приблизительно 5, 10, 25 или 50 мг/день, предпочтительно в количестве приблизительно 25 мг/день в течение трех или четырех недель, после чего следует перерыв в течение одной или двух недель в четырех или шестинедельном цикле. В другом варианте осуществления циклопропил {2-[(1Б)-1-(3-этокси-4-метоксифенил)-2-(метилсульфонил)этил]-3-оксоизоиндолин-4-ил}карбоксамид вводят ежедневно и непрерывно в течение трех или четырех недель в дозировке от приблизительно 10 до приблизительно 200 мг в день, после чего следует перерыв в течение одной или двух недель.

В другом варианте осуществления изобретения соединение по изобретению и второй активный ингредиент вводят перорально с введением соединения по изобретению, имеющим место от 30 до 60 мин перед вторым активным ингредиентом, в течение цикла продолжительностью от четырех до шести недель. В другом варианте осуществления изобретения комбинацию соединения по изобретению и второго активного ингредиента вводят посредством внутривенного вливания в течение приблизительно 90 мин каждый цикл. В конкретном варианте осуществления один цикл включает введение от приблизительно 0,1 до приблизительно 200 мг/день соединения по изобретению и от приблизительно 50 до приблизительно 200 мг/м²/день второго активного ингредиента ежедневно в течение трех или четырех недель и затем перерыв в одну или две недели. В другом конкретном варианте осуществления каждый цикл включает введение от приблизительно 1 до приблизительно 25 мг/день соединения по изобретению и от приблизительно 50 до приблизительно 200 мг/м²/день второго активного ингредиента в течение трех или четырех недель, и за которыми следует перерыв в одну или две недели. В основном число циклов, в те

- 11 013973 чение которых комбинаторное лечение вводят пациенту, должно составлять от приблизительно одного до приблизительно 24 циклов, более типично от приблизительно двух до приблизительно 16 циклов и даже более типично от приблизительно четырех до приблизительно трех циклов.

Количество фармацевтической композиции, вводимой в соответствии со способами по изобретению, зависит от подвергаемого лечению субъекта, степени тяжести расстройства или симптома расстройства, способа введения, периодичности введения и заключения лечащего врача.

Периодичность введения находится в диапазоне приблизительно от почасовой дозы до помесячной дозы. В конкретных вариантах осуществления введение представляет собой от 8 раз в день до одного через день или от 1 до 3 раз в день. В конкретном варианте осуществления фармацевтическую композицию по изобретению вводят постоянно, например ежедневно.

В некоторых случаях может возникнуть необходимость применения дозировок активного ингредиента за пределами раскрытых здесь диапазонов, что должно быть понятно любому специалисту в данной области. Более того, отмечено, что практикующий врач или лечащий доктор должны знать, как и когда приостановить, скорректировать или прекратить терапию в связи с реакцией каждого конкретного пациента.

Дозы

В одном варианте осуществления изобретения (+)-2-[1-(3-этокси-4-метоксифенил)-2метилсульфонилэтил]-4-ацетиламиноизоиндолин-1,3-дион можно вводить перорально и в единичных или разделенных ежедневных дозах в количестве от приблизительно 1 до приблизительно 1000 мг в день, принимаемого как единичная доза один раз в день, предпочтительно как разделенные дозы через день. Конкретнее, ежедневную дозу (+)-2-[1-(3-этокси-4-метоксифенил)-2-метилсульфонилэтил]-4ацетиламиноизоиндолин-1,3-диона вводят дважды в день в равно разделенных дозах. В частности, диапазон ежедневной дозы (+)-2-[1-(3-этокси-4-метоксифенил)-2-метилсульфонилэтил]-4-ацетиламиноизоиндолин-1,3-диона может составлять от приблизительно 5 до приблизительно 500 мг в день, конкретнее между приблизительно 10 и приблизительно 200 мг в день. В частности, ежедневную дозу (+)-2-[1-(3этокси-4-метоксифенил)-2-метилсульфонилэтил]-4-ацетиламиноизоиндолин-1,3-диона можно вводить в лекарственных формах 5, 10, 15, 20, 25, 50 или 100 мг. При ведении пациента терапию следует начинать при меньших дозах, может быть приблизительно от 1 до приблизительно 25 мг и при необходимости увеличивать до диапазона приблизительно от 200 до приблизительно 1000 мг в день в виде единичной дозы или разделенной дозы, в зависимости от общей реакции пациента. Альтернативно, ежедневная доза составляет от 0,01 до 100 мг/кг.

В одном варианте осуществления 4-(амино)-2-(2,6-диоксо(3-пиперидил))изоиндолин-1,3-дион можно вводить в количестве от приблизительно 0,1 до приблизительно 100 мг. В конкретном варианте осуществления 4-(амино)-2-(2,6-диоксо(3-пиперидил))изоиндолин-1,3-дион можно вводить в количестве от приблизительно 1 до приблизительно 100 мг в день. В конкретном варианте осуществления 4-(амино)-2(2,6-диоксо(3-пиперидил))изоиндолин-1,3-дион можно вводить в количестве от приблизительно 0,1 до приблизительно 2 мг в день или, альтернативно, от приблизительно 0,1 до приблизительно 5 мг через день. В конкретном варианте осуществления 4-(амино)-2-(2,6-диоксо(3-пиперидил))изоиндолин-1,3-дион можно вводить в количестве от приблизительно 0,5 до приблизительно 2 мг в день или, альтернативно, приблизительно 5 мг через день.

В одном варианте осуществления 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидроизоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион можно вводить в количестве от приблизительно 1 до приблизительно 150 мг. В конкретном варианте осуществления, 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидроизоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион можно вводить в количестве от приблизительно 5 до 25 мг в день или, альтернативно, от приблизительно 10 до приблизительно 50 мг через день.

В дополнительном варианте осуществления изобретения циклопропил {2-[(1Б)-1-(3-этокси-4метоксифенил)-2-(метилсульфонил)этил]-3-оксоизоиндолин-4-ил}карбоксамид можно вводить перорально и в единичной или разделенной ежедневной дозе в количестве от приблизительно 1 мг до приблизительно 1000 мг в день, даваемый в качестве единичной дозы один раз в день, предпочтительно в качестве разделенных доз через день. Конкретнее, ежедневную дозу циклопропил {2-[(1Б)-1-(3-этокси-4метоксифенил)-2-(метилсульфонил)этил]-3-оксоизоиндолин-4-ил}карбоксамида вводят дважды в день в качестве разделенных пополам доз. В частности, диапазон ежедневных доз циклопропил {2-[(1Б)-1-(3этокси-4-метоксифенил)-2-(метилсульфонил)этил]-3-оксоизоиндолин-4-ил}карбоксамида может составлять от приблизительно 5 до приблизительно 500 мг в день, конкретнее между приблизительно 10 и приблизительно 200 мг в день. В частности, ежедневную дозу циклопропил {2-[(1Б)-1-(3-этокси-4метоксифенил)-2-(метилсульфонил)этил]-3-оксоизоиндолин-4-ил}карбоксамида можно вводить в лекарственных формах 5, 10, 15, 20, 25, 50 или 100 мг. При ведении пациента терапию следует начинать при меньших дозах, может быть приблизительно от 1 до приблизительно 25 мг и при необходимости увеличивать до диапазона приблизительно от 200 до приблизительно 1000 мг в день в виде единичной дозы или разделенной дозы, в зависимости от общей реакции пациента. Альтернативно, ежедневная доза составляет от 0,01 до 100 мг/кг.

Различные лекарственные формы по изобретению обсуждаются в разделе 5,5 ниже. В одном вари

- 12 013973 анте осуществления типичные лекарственные формы по изобретению включают (+)-2-[1-(3-этокси-4метоксифенил)-2-метилсульфонилэтил]-4-ацетиламиноизоиндолин-1,3-дион или циклопропил {2-[(18)-1(3 -этокси-4-метоксифенил)-2-(метилсульфонил)этил]-3-оксоизоиндолин-4-ил}карбоксамид в количестве от приблизительно 0,10 до приблизительно 1000 мг, от приблизительно 0,10 до приблизительно 800 мг, от приблизительно 0,10 до приблизительно 600 мг, от приблизительно 0,10 до приблизительно 500 мг, от приблизительно 0,10 до приблизительно 400 мг, от приблизительно 0,10 до приблизительно 300 мг, от приблизительно 0,10 до приблизительно 200 мг или от приблизительно 0,10 до приблизительно 100 мг. В одном варианте осуществления типичные лекарственные формы включают соединение в количестве приблизительно 1, 2, 5, 10, 25, 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450 или 500 мг.

В одном варианте осуществления типичные лекарственные формы по изобретению включают 4-(амино)-2-(2,6-диоксо(3-пиперидил))изоиндолин-1,3-дион или 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидроизоиндол2-ил)пиперидин-2,6-дион в количестве от приблизительно 0,1 до приблизительно 150 мг. В конкретном варианте осуществления лекарственная форма включает 4-(амино)-2-(2,6-диоксо(3-пиперидил))изоиндолин-1,3-дион в количестве приблизительно 0,1, 1, 2 или 5 мг. В конкретном варианте осуществления лекарственная форма включает 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидроизоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион в количестве приблизительно 5, 10, 15, 25 или 50 мг.

В одном варианте осуществления типичные лекарственные формы включают второй активный ингредиент в количестве от 1 до приблизительно 1000 мг, от приблизительно 5 до приблизительно 500 мг, от приблизительно 10 до приблизительно 350 мг или от приблизительно 50 до приблизительно 200 мг. Разумеется, конкретное количество агента зависит от используемого специфического агента, типа подвергаемого лечению или ведению заболевания или расстройства и количеств(ва) соединений по изобретению и любых необязательных дополнительных вторых активных агентов, одновременно вводимых пациенту.

Фармацевтические композиции и лекарственные формы

Фармацевтические композиции можно использовать для получения единичных стандартных лекарственных форм. Фармацевтические композиции и лекарственные формы по изобретению могут включать соединения по изобретению или их фармацевтически приемлемые соль, сольват или стереоизомер и необязательно второй активный агент. Примеры необязательных вторых активных агентов раскрыты здесь (см., например, раздел 5.3.1). Фармацевтические композиции и лекарственные формы по изобретению могут дополнительно включать один или более носителей, наполнителей или разбавителей.

Единичные стандартные лекарственные формы по изобретению применимы для перорального, на слизистой (например, сублингвального, назального, вагинального, пузырного, ректального, препуциального, офтальмологического, буккального или ушного), парентерального (например, подкожного, интравенозного, болюсного вливания, внутримышечного или внутриартериального), местного (например, глазные капли или другие офтальмические препараты), трансдермального или чрескожного введения пациенту. Неограничивающие примеры лекарственных форм включают таблетки; таблетки в форме капсулы; капсулы, такие как мягкие эластичные желатиновые капсулы; капсулы для приема лекарств; формованные пастилки; пастилки; дисперсии; суппозитории; порошки; аэрозоли (например, назальные распыляемые растворы или пульверизаторы); гели; жидкие лекарственные формы, пригодные для перорального введения или введения на слизистой пациенту, включая суспензии (например, водные или неводные жидкие суспензии, эмульсии типа масло-в-воде или жидкие эмульсии типа вода-в-масле), растворы и эликсиры; жидкие лекарственные формы, применимые для парентерального введения пациенту; глазные капли или другие офтальмологические препараты, пригодные для местного введения; и стерильные сухие вещества (например, кристаллические или аморфные сухие вещества), которые могут быть растворены для предоставления жидких лекарственных форм, пригодных для парентерального введения пациенту.

Композиции, формы и типы лекарственных форм по изобретению должны, обычно, отличаться в зависимости от их применения. Например, лекарственная форма, применяемая для экстренного лечения заболевания, может содержать большие количества одного или более составляющих ее активных ингредиентов, чем лекарственная форма, применяемая при длительном лечении того же заболевания. Аналогично, лекарственная форма для парентерального применения может содержать меньшие количества одного или более составляющих ее активных ингредиентов, чем лекарственная форма для перорального применения, используемая для лечения того же заболевания. Эти и другие способы, которыми конкретные лекарственные формы, охватываемые данным изобретением, будут отличаться друг от друга, должны быть легко различимы специалистами в данной области. См., например, ИспппдЮпХ РйагтасеиЕса1 8с1епсе8, 18⁴¹¹ ей., Маск РиЬЮЫпд, ЕазЮп РА (1990).

Типичные фармацевтические композиции и лекарственные формы включают один или более наполнителей. Подходящие наполнители хорошо известны специалистам в области фармацевтики, и неограничивающие примеры пригодных наполнителей предоставлены здесь. Пригодность конкретного наполнителя для включения в фармацевтическую композицию или лекарственную форму зависит от множества известных специалистам в области факторов, без ограничения включающих способ, при помощи которого лекарственную форму следует вводить пациенту. Например, лекарственные формы для перо

- 13 013973 рального применения, такие как таблетки, могут содержать наполнители, непригодные для использования в лекарственных формах для парентерального применения. Пригодность конкретного наполнителя также может зависеть от специфических активных ингредиентов в лекарственной форме. Например, разложение некоторых активных ингредиентов может ускоряться за счет некоторых наполнителей, таких как лактоза, или при воздействии воды. Активные ингредиенты, которые включают первичные или вторичные амины, конкретно являются чувствительными к такому ускоренному разложению. Вследствие этого, данное изобретение охватывает фармацевтические композиции и лекарственные формы, которые содержат мало или совсем не содержат лактозу или другие моно- или дисахариды. Как применяют здесь, термин не содержащий лактозы означает, что количество присутствующей лактозы, если она вообще присутствует, является недостаточным для существенного увеличения скорости деградации активного ингредиента.

Не содержащие лактозы композиции по изобретению могут включать наполнители, которые хорошо известны в данной области и перечислены, например, в И.8. Рйагтасоре1а (И8Р) 25-ΝΡ20 (2002). В большинстве случаев не содержащие лактозы композиции включают активные ингредиенты, связующее вещество/наполнитель и смазывающее вещество в фармацевтически совместимых и фармацевтически приемлемых количествах. Конкретные не содержащие лактозы лекарственные формы включают активные ингредиенты, микрокристаллическую целлюлозу, предварительно желатинированный крахмал и стеарат магния.

Данное изобретение дополнительно охватывает не содержащие воды фармацевтические композиции и лекарственные формы, содержащие активные ингредиенты, поскольку вода может способствовать деградации некоторых соединений. Например, добавление воды (например, 5%) широко распространено в фармацевтической области в качестве способа имитации продолжительного хранения для определения таких характеристик, как срок годности или стабильность состава с течением времени. См., например, 1еи8 Т. Саг81еп8еи, Огид 81аЫ1йу: Рг1пс1р1ез & Ргасбсе, 26. еб., Магсе1 Эеккег. ΝΥ, ΝΥ, 1995, р. 379-80. В самом деле, вода и нагрев ускоряют разложение некоторых соединений. Таким образом, действие воды на состав может иметь большое значение, поскольку влажность и/или сырость часто встречаются при производстве, обработке, упаковке, хранении, транспортировке и применении составов.

Не содержащие воды фармацевтические композиции и лекарственные формы по изобретению могут быть получены при помощи не содержащих воды или с низким содержанием воды ингредиентов и в условиях с низкой влажностью или низким влагосодержанием. Фармацевтические композиции и лекарственные формы, которые включают лактозу и по меньшей мере один активный ингредиент, содержащий первичный или вторичный амин, являются предпочтительно безводными, если при производстве, упаковке и/или хранении ожидается значительное контактирование с влажностью и/или сыростью.

Не содержащие воды фармацевтические композиции следует получать и хранить таким образом, чтобы поддерживать их безводную природу. В соответствии с этим не содержащие воды композиции предпочтительно упаковывают при помощи материалов, известных как предохраняющие от воздействия воды, так что их можно включать в соответствующие фармакологические наборы. Неограничивающие примеры пригодной упаковки включают герметические виды фольги, пластические материалы, контейнеры с единичной дозой (например, пузырек), блистерные упаковки и контурные упаковки.

Изобретение дополнительно охватывает фармацевтические композиции и лекарственные формы, которые включают одно или более соединений, уменьшающих скорость, с которой активный ингредиент должен разлагаться. Такие соединения, которые здесь именуются стабилизаторы, в качестве неограничивающих примеров включают антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота, рН буферы или солевые буферы. Подобно количествам и типам наполнителей, количества и конкретные типы активных ингредиентов в лекарственных формах могут различаться в зависимости от факторов, таких как, в качестве неограничивающих примеров, способ, при помощи которого ее следует вводить пациентам.

Лекарственные формы для перорального применения

Фармацевтические композиции по изобретению, которые пригодны для перорального введения, могут быть представлены как состоящие из отдельных элементов лекарственные формы, такие как, в качестве неограничивающих примеров, таблетки (например, жевательные таблетки), таблетки в форме капсулы, капсулы и жидкости (например, ароматизированные сиропы). Такие лекарственные формы содержат предварительно определенные количества активных ингредиентов и могут быть получены при помощи способов фармацевтики, хорошо известных специалистам в рассматриваемой области. См. в большинстве случаев К.еттд1ои'8 Рйагтасеи11са1 8с1еисе5, 18^4Ь еб., Маск РиЫщЫид, Еайои РА (1990).

Типичные пероральные лекарственные формы по изобретению получают путем объединения активных ингредиентов в однородную смесь по меньшей мере с одним наполнителем, в соответствии с общепринятыми фармацевтическими методиками составления смесей. Наполнители могут иметь разнообразные формы, в зависимости от формы получения, необходимой для введения. Неограничивающие примеры формообразующих наполнителей, пригодных для использования в жидких или аэрозольных лекарственных формах для перорального применения, включают воду, гликоли, масла, спирты, вкусовые ароматизирующие вещества, консервирующие вещества и окрашивающие вещества. Неограничивающие

- 14 013973 примеры формообразующих наполнителей, пригодных для использования в твердых лекарственных формах для перорального применения (например, порошки, таблетки, капсулы и таблетки в форме капсулы) включают крахмалы, сахара, микрокристаллическую целлюлозу, разбавители, гранулирующие вещества, смазывающие, связующие вещества и дезинтеграторы (разрыхлители).

Благодаря простоте введения таблетки и капсулы представляют наиболее предпочтительные стандартные лекарственные формы для перорального применения, в чьем случае используются твердые формообразующие наполнители. При необходимости таблетки можно покрывать при помощи стандартных водных или отличных от водных методик. Такие лекарственные формы могут быть получены при помощи любого способа фармацевтики. В большинстве случаев фармацевтические композиции и лекарственные формы получают при помощи равномерного и однородного примешивания активных ингредиентов к жидким носителям, тонко измельченным твердым носителям или и тем, и другим, и затем при необходимости формирования продукта в требуемом представлении.

Например, таблетку можно получить при помощи прессования или формования. Прессованые таблетки можно получать прессованием активных ингредиентов в соответствующей производственной установке в легкосыпучем виде, таком как порошок или гранулы, необязательно смешанных с формообразующим наполнителем. Формованные таблетки можно получать путем формования смеси порошкообразного соединения, смоченного инертным жидким разбавителем, в соответствующей производственной установке.

Неограничивающие примеры формообразующих наполнителей, которые могут использоваться в лекарственных формах для перорального применения по изобретению, включают связующие вещества, наполнители, разрыхлители и смазывающие вещества. Неограничивающие примеры связующих веществ, пригодных для использования в фармацевтических композициях и лекарственных формах, включают кукурузный крахмал, картофельный крахмал или другие крахмалы, желатин, натуральные и синтетические камеди, такие как акация, альгинат натрия, альгиновая кислота, другие альгинаты, порошкообразный трагакант, гуаровую камедь, целлюлозу и ее производные (например, этилцеллюлозу, целлюлозоацетат, кальцийкарбоксиметилцеллюлозу, натрийкарбоксиметилцеллюлозу), поливинилпирролидон, метилцеллюлозу, предварительно желатинированный крахмал, гидроксипропилметилцеллюлозу (например, № 2208, 2906, 2910), микрокристаллическую целлюлозу и их смеси.

Неограничивающие примеры пригодных видов микрокристаллической целлюлозы включают материалы, продаваемые как АУ1СЕБ-РН-101, АУ1СЕБ-РН-103, АУ1СЕБ КС-581, АУ1СЕБ-РН-105 (доступные от РМС Согрогайои, Атепсап У18соке П1У18юи, Ауюе1 8а1ек, Магсик Ноок, РА) и их смеси. Конкретным связующим веществом является смесь микрокристаллической целлюлозы и натрийкарбоксиметилцеллюлозы, продаваемая как АУ1СЕБ КС-581. Пригодные безводные или с низким влагосодержанием наполнители или добавки включают АУ1СЕБ-РН-103™ и крахмал 1500 ЬМ.

Неограничивающие примеры наполнителей, пригодных для использования в раскрытых здесь фармацевтических композициях и лекарственных формах, включают тальк, карбонат кальция (например, гранулы или порошок), микрокристаллическую целлюлозу, порошкообразную целлюлозу, декстраны, каолин, маннит, кремниевую кислоту, сорбит, крахмал, предварительно желатинированный крахмал и их смеси. Связующее вещество или наполнитель в фармацевтических композициях по изобретению присутствует, как правило, в соотношении приблизительно от 50 до приблизительно 99 мас.% фармацевтической композиции или лекарственной формы.

Дезинтеграторы используют в композициях по изобретению для предоставления таблеток, которые распадаются, когда подвергаются воздействию влаги. Таблетки, которые содержат слишком много дезинтегратора, могут распадаться при хранении, в то время как таблетки, содержащие слишком мало дезинтегратора, могут не распадаться с требуемой скоростью или при необходимых условиях. Таким образом, для образования твердых лекарственных форм для перорального применения по изобретению необходимо использовать достаточное количество дезинтегратора, которое не слишком велико и не слишком мало, чтобы нанести ущерб высвобождению активных ингредиентов. Количество используемого дезинтегратора варьирует в зависимости от типа состава и легко различимо специалистом в данной области. Типичные фармацевтические композиции включают от приблизительно 0,5 до приблизительно 15 мас.% дезинтегратора, предпочтительно от приблизительно 1 до приблизительно 5 мас.% дезинтегратора.

Неограничивающие примеры дезинтеграторов, которые могут быть использованы в фармацевтических композициях и лекарственных формах по изобретению, включают агар-агар, альгиновую кислоту, карбонат кальция, микрокристаллическую целлюлозу, натрийкроскармеллозу, кросповидон, калийполакрилин, натрийкрахмал гликолат, картофельный или тапиоковый крахмал, другие крахмалы, предварительно желатинированный крахмал, другие крахмалы, глины, другие альгины, другие целлюлозы, камеди и их смеси.

Неограничивающие примеры смазывающих веществ, которые могут быть использованы в фармацевтических композициях и лекарственных формах по изобретению, включают стеарат кальция, стеарат магния, минеральное масло, легкое минеральное масло, глицерин, сорбит, маннит, полиэтиленгликоль, другие гликоли, стеариновую кислоту, лаурилсульфат натрия, тальк, гидрогенизованное растительное масло (например, арахисовое масло, хлопковое масло, подсолнечное масло, кунжутное масло, оливковое

- 15 013973 масло, кукурузное масло и соевое масло), стеарат цинка, этилолеат, этиллауреат, агар и их смеси. Дополнительные смазывающие вещества включают, например, абиетиновый гель кремниевой кислоты (АЕК.081Ь200, выпускаемый А.К.. Сгасе Со. о! ВаШтоге, ΜΌ), свернутый аэрозоль синтетического диоксида кремния (продаваемый Эеди^а Со. о! йапо, ТХ), САВ-0-81Ь (продукт пирогенного диоксида кремния, продаваемый СаЬо! Со. о! Войоп, МА) и их смеси. Смазывающие вещества, если вообще используются, то обычно используются в количестве менее чем приблизительно 1 мас.% фармацевтической композиции или лекарственной формы, в которые они включены.

Конкретная твердая лекарственная форма для перорального применения по изобретению включает соединение по изобретению (например, (+)-2-[1-(3-этокси-4-метоксифенил)-2-метилсульфонилэтил]-4ацетиламиноизоиндолин-1,3-дион, 4-(амино)-2-(2,6-диоксо(3 -пиперидил))изоиндолин-1,3-дион, 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидроизоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион или циклопропил {2-[(18)-1-(3-этокси-4метоксифенил)-2-(метилсульфонил)этил]-3-оксоизоиндолин-4-ил}карбоксамид, не содержащую воду лактозу, микрокристаллическую целлюлозу, поливинилпирролидон, стеариновую кислоту, коллоидный безводный диоксид кремния и желатин.

Лекарственные формы с отсроченным высвобождением

Активные ингредиенты по изобретению можно вводить при помощи средств контролируемого высвобождения или средств доставки, которые хорошо известны любому специалисту в данной отрасли. Неограничивающие примеры средств контролируемого высвобождения или средств доставки включают средства, описанные в патентах И8 № 3845770, 3916899, 3536809, 3598123 и 4008719, 5674533, 5059595, 5591767, 5120548, 5073543, 5639476, 5354556 и 5733566, каждый из которых приведен здесь в качестве ссылки. Такие лекарственные формы можно использовать для предоставления медленного или контролируемого высвобождения одного или более активных ингредиентов при помощи, например, гидропропилметилцеллюлозы, других полимерных матриксов, гелей, проницаемых мембран, осмотических систем, многослойных покрытий, микрочастиц, липосом, микросфер или их комбинаций для предоставления желательного профиля высвобождения при переменных количественных соотношениях. Пригодные составы для контролируемого высвобождения, известные любому специалисту в рассматриваемой области, включая описанные здесь составы, можно без труда выбрать для применения с активными ингредиентами по изобретению. Изобретение, таким образом, охватывает единичные стандартные лекарственные формы, пригодные для перорального введения, такие как, в качестве неограничивающих примеров, таблетки, капсулы, гелевые капсулы и таблетки в форме капсулы, которые адаптированы для контролируемого высвобождения.

Все фармацевтические продукты для контролируемого высвобождения имеют общее назначение в улучшении терапии лекарственными средствами по сравнению с терапией, достигаемой при помощи их контрагентов с неконтролируемым высвобождением. В идеале применение оптимально скомпанованных препаратов для контролируемого высвобождения в медицинском лечении характеризуется минимальным количеством лекарственного средства, используемого для лечения, или контролем состояния за минимальное количество времени. Преимущества составов для контролируемого высвобождения включают продолжительную активность лекарственного средства, уменьшенную частоту дозирования и упрощение в получении согласия пациента. Кроме того, составы для контролируемого высвобождения можно использовать для воздействия на время начала действия или другие характеристики, такие как уровни лекарственного средства в крови, и таким образом можно воздействовать на появление побочных (например, нежелательных) эффектов.

Большинство составов для контролируемого высвобождения предназначены для высвобождения в начальной стадии количества лекарственного средства (активного ингредиента), которое незамедлительно вызывает ожидаемый терапевтический эффект, и постепенного и непрерывного высвобождения других количеств лекарственного средства для поддержания этого уровня терапевтического или профилактического эффекта в течение продолжительного периода времени. Для поддержания такого постоянного уровня лекарственного средства в организме лекарственное средство должно быть высвобождено из лекарственной формы со скоростью, обеспечивающей замещение количества лекарственного средства, которое подверглось метаболизму и экскретировалось из организма. Контролируемое высвобождение активного ингредиента можно стимулировать различными условиями, включая, в качестве неограничивающих примеров, рН, температуру, ферменты, воду или другие физиологические условия или соединения.

Лекарственные формы для парентерального применения

Лекарственные формы для парентерального применения можно вводить пациентам при помощи различных способов, включая, в качестве неограничивающих примеров, подкожный, интравенозный (включая болюсное вливание), внутримышечный и внутриартериальный. Поскольку при введении такие формы обычно минуют естественные защитные механизмы пациентов от загрязняющих веществ, лекарственные формы для парентерального применения являются предпочтительно стерильными или допускающими стерилизацию перед введением пациенту.

Неограничивающие примеры лекарственных форм для парентерального применения включают готовые для впрыскивания растворы, сухие препараты, готовые для растворения или суспендирования в

- 16 013973 фармацевтически приемлемых средах для впрыскивания, готовые для впрыскивания суспензии и эмульсии.

Пригодные среды, которые можно использовать для предоставления лекарственных форм для парентерального применения по изобретению, хорошо известны специалистам в рассматриваемой области. Неограничивающие примеры пригодных сред включают воду для впрыскивания И8Р; водные среды, такие как, в качестве неограничивающих примеров, хлорид натрия для впрыскивания, Ятдегк для впрыскивания, декстроза для впрыскивания, декстроза и хлорид натрия для впрыскивания и Ятдегк для впрыскивания с лактозой; смешивающиеся с водой среды, такие как, в качестве неограничивающих примеров, этиловый спирт, полиэтиленгликоль и полипропиленгликоль; и не содержащие воды среды, такие как, в качестве неограничивающих примеров, кукурузное масло, хлопковое масло, арахисовое масло, кунжутное масло, этилолеат, изопропилмиристат и бензилбензоат.

Соединения, которые увеличивают растворимость одного или более раскрытых здесь активных ингредиентов, также могут быть включены в лекарственные формы для парентерального применения по изобретению. Например, циклодекстрин и его производные можно использовать для увеличения растворимости соединений по изобретению и их производных.

Лекарственные формы для местного, трансдермального применения и применения на слизистой

Лекарственные средства можно применять локально на коже и смежных органах или множестве слизистых оболочек. Способы введения, которые можно использовать, включают местный, трансдермальный, сублингвальный, назальный, вагинальный, пузырный, ректальный, препуциальный, офтальмологический, буккальный или ушной. Многие лекарственные формы были разработаны для доставки действующего начала лекарственных веществ к участку применения для вызывания локальных эффектов. Лекарственные формы для трансдермального, местного применения и применения на слизистой по изобретению включают в качестве неограничивающих примеров офтальмические растворы, распыляемые растворы, аэрозоли, кремы, примочки, мази, гели, растворы, эмульсия, суспензии или другие формы, известные специалистам в рассматриваемой области. См., например, Яет^ηдΐοη'8 Рйагтаееийеа1 8^1^5, 16'¹' анб 18‘^ь еб5., Маек РцЫкИтд, ΕηδΙοη РА (1980 & 1990) и ΙηΐΓο6ιιαίοη ΐο Рйагтаееийеа1 ^08аде Ротъ, 4'¹' еб., Ьеа & ЕеЫдег, Р1и1абе1р1иа (1985). Лекарственные формы, пригодные для лечения слизистых тканей полости рта, можно сформулировать как жидкость для полоскания рта или гель для полости рта. Далее, лекарственные формы для трансдермального применения включают повязки емкостного типа или матричного типа, которые можно применять на коже и носить в течение определенного периода времени для того, чтобы обеспечить проникновение необходимого количества активных ингредиентов.

Пригодные формообразующие наполнители (например, носители и разбавители) и другие материалы, которые можно использовать для предоставления лекарственных форм для трансдермального, местного применения и применения на слизистой, охваченных данным изобретением, хорошо известны специалистам в фармацевтической области и зависят от конкретной ткани, к которой следует применять данную фармацевтическую композицию или лекарственную форму. С учетом этого типичные формообразующие наполнители включают, в качестве неограничивающих примеров, воду, ацетон, этанол, этиленгликоль, пропиленгликоль, бутан 1,3 диол, изопропилмиристат, изопропилпальмитат, минеральное масло и их смеси в виде примочек, настоек, кремов, эмульсий, гелей или мазей, которые не являются токсичными и фармацевтически приемлемыми. Увлажняющие средства, такие как окклюзионные повязки, влагоудерживающие вещества, смягчающие вещества и белковые восстановители при необходимости также могут быть добавлены к фармацевтическим композициям и лекарственным формам. Примеры таких дополнительных ингредиентов хорошо известны в рассматриваемой области. См., например, Яетίη§1οη'5 РНагтаееи11еа1 8е^еηее5. 16'¹' анб 18'¹' еб5., Маек РцЫкИтд, ΕηδΙοη РА (1980 & 1990).

Окклюзионные средства представляют собой вещества, которые физически препятствуют потере воды из роговового слоя. Неограничивающие примеры окклюзионных средств включают вазелиновое масло, ланолин, минеральное масло, силиконы, такие как диметикон, окись цинка и их комбинации. Предпочтительными окклюзионными средствами являются вазелиновое масло и ланолин, более предпочтительным - вазелиновое масло в минимальной концентрации 5%.

Влагоудерживающие вещества представляют собой вещества, которые при применении на коже притягивают воду и теоретически улучшают гидратацию рогового слоя. Впрочем, вода, которую получает кожа, представляет собой воду от других клеток, неатмосферную воду. С этим типом увлажняющих средств испарение с кожи может продолжаться, и сухость может фактически усиливаться. Неограничивающие примеры влагоудерживающих веществ включают глицерин, сорбит, мочевину, α-гидроксикислоты, сахара и их комбинации. Предпочтительными влагоудерживающими веществами являются α-гидроксикислоты, такие как гликолевая кислота, молочная кислота, яблочная кислота, лимонная кислота и винная кислота.

Смягчающие средства представляют собой вещества, которые сглаживают кожу путем заполнения пространств между слоями кожи капельками масла, и, как правило, не являются окклюзивными, несмотря на интенсивное применение. При сочетании с эмульгирующим веществом они могут способствовать

- 17 013973 удержанию жира и воды в роговом слое. Витамин Е представляет собой общепринятую добавку, которая, как выяснилось, не оказывает никакого действия, кроме действия в качестве смягчающего средства. Подобным образом добавляют также и другие витамины, например А и Ό, однако их действие вызывает сомнения. Неограничивающие примеры эмульгирующих веществ включают минеральное масло, ланолин, жирные кислоты, холестерин, сквален, структурные липиды и их комбинации.

Восстановители белков представляют собой вещества, которые восстанавливают кожу путем восстановления свойств существенных белков. Неограничивающие примеры восстановителей белков включают коллаген, кератин, эластин и их комбинации.

В зависимости от конкретной ткани, подвергаемой лечению, перед лечением, совместно с лечением или после лечения активными ингредиентами по изобретению можно применять дополнительные компоненты. Например, вещества, способствующие проникновению, можно использовать для облегчения доставки активных ингредиентов к ткани. Пригодные вещества, способствующие проникновению, в качестве неограничивающих примеров включают: ацетон; различные спирты, такие как этанол, олеил и тетрагидрофуран; алкилсульфоксиды, такие как диметилсульфоксид; диметилацетамид; диметилформамид; полиэтиленгликоль; пирролидоны, такие как поливинилпирролидон; сорта поливинилпирролидона (повидон, поливидон); мочевина и различные водорастворимые или водонерастворимые сложные эфиры сахаров, такие как Т\уссп 80 (полисорбат 80) и Бран 60 (сорбитанмоностеарат).

Для улучшения доставки одного или более активных ингредиентов можно также скорректировать рН фармацевтической композиции или лекарственной формы. Аналогично, для улучшения доставки могут быть скорректированы полярность растворяющего носителя, его ионная сила или концентрация. Например, впитывание через кожу также может быть усилено при помощи окклюзионной повязки, втирания или использования диметилсульфоксида в качестве носителя. Соединения, такие как стеараты металлов (например, стеарат кальция, стеарат цинка, стеарат магния, стеарат натрия, стеарат лития, стеарат калия и т.д.) можно также добавлять к фармацевтическим композициям или лекарственным формам для благоприятного изменения гидрофильности или липофильности одного или более активных ингредиентов, с тем чтобы улучшить доставку. В этом отношении стеараты могут служить в качестве липидного средства доставки для состава, как и эмульгирующее вещество или сурфактант, и как вещество, усиливающее доставку или усиливающее проницаемость. Различные соли, гидраты или сольваты активных ингредиентов можно использовать для дополнительной корректировки свойств получившейся композиции.

Примеры

Некоторые варианты осуществления по изобретению иллюстрируются при помощи следующих неограничивающих примеров. Примеры не следует истолковывать как ограничение объема изобретения. Границы изобретения определяются исключительно приложенной формулой изобретения.

Пример 1. Получение (+)-2-[1-(3-этокси-4-метоксифенил)-2-метилсульфонилэтил]-4-ацетиламиноизоиндолин-1,3-диона (соединение (1)).

Получение 3-аминофталевой кислоты. После того как смесь 10% РД/С (2,5 г), 3-нитрофталевой кислоты (75,0 г, 355 ммоль) и этанола (1,5 л) помещали в 2,5 л аппарат Парра под азотом, в реакционный резервуар подавали водород до 55 рз1 (379 кПа). Смесь встряхивали в течение 13 ч при давлении водорода, поддерживаемом в интервале от 50 рз1 (245 кПа) до 55 рз1 (379 кПа). Водород выпускали и смесь 3 раза продували азотом. Суспензию фильтровали через слой целита и промывали метанолом. Фильтрат концентрировали под вакуумом с получением твердого вещества. Твердое вещество суспендировали в эфире и выделяли путем фильтрации под вакуумом. Твердое вещество высушивали под вакуумом до постоянной массы с образованием 54 г (84% выход) 3-аминофталевой кислоты в виде продукта желтого цвета. Продукт в ДМСО-Д₆ характеризовали при помощи спектра ¹Н ЯМР, демонстрирующего следующие химические сдвиги (δ в м.д.): 3,17 (с, 2Н), 6,67 (д, 1Н), 6,82 (д, 1Н), 7,17 (т, 1Н), 8-10 (ушир.с, 2Н). Продукт в ДМСО-Дб характеризовали при помощи спектра ¹³С-ЯМР, демонстрирующего следующие химические сдвиги (δ в м.д.): 112,00, 115,32, 118,20, 131,28, 135,86, 148,82, 169,15, 170,09.

Получение 3-ацетамидофталевого ангидрида. Смесь 3-аминофталевой кислоты (108 г, 596 ммоль) и уксусного ангидрида (550 мл) помещали в 1-л 3-горлую круглодонную колбу, оборудованную приводной мешалкой, температурным датчиком и холодильником. Реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 3 ч, охлаждали до температуры окружающей среды и выдерживали при 0-5°С в течение еще 1 ч. Кристаллическое твердое вещество собирали при помощи фильтрации под вакуумом и промывали эфиром. Твердый продукт высушивали под вакуумом при температуре окружающей среды до постоянной массы с образованием 75 г (61% выход) 3-ацетамидофталевой кислоты в виде продукта белого цвета. Продукт в СПСС, характеризовали при помощи спектра ¹Н ЯМР, демонстрирующего следующие химические сдвиги (δ в м.д.): 2,21 (с, 3Н), 7,76 (д, 1Н), 7,94 (т, 1Н), 8,42 (д, 1Н), 9,84 (с, 1Н).

Разделение 2-(3-этокси-4-меаюксифенил)-1-(метилсульфонил)-эт-2-иламина. Смесь 2-(3-этокси-4метоксифенил)-1-(метилсульфонил)-эт-2-иламина (137,0 г, 500 ммоль), Ν-ацетил-Ь-лейцина (52 г, 300 ммоль) и метанола (1,0 л) помещали в 1-л 3-горлую круглодонную колбу, оборудованную приводной мешалкой, температурным датчиком и холодильником. После реакции смесь кипятили с обратным холо

- 18 013973 дильником в течение 1 ч, смесь оставляли остывать до температуры окружающей среды и затем перемешивали в течение еще 3 ч при температуре окружающей среды. Суспензию фильтровали и промывали метанолом (250 мл). Твердое вещество высушивали на воздухе и затем высушивали под вакуумом при температуре окружающей среды до постоянной массы с получением 109,5 г (98% выход) неочищенного продукта (85,8% ее). Неочищенное твердое вещество (55,0 г) и метанол (440 мл) кипятили с обратным холодильником в течение 1 ч, охлаждали до комнатной температуры и перемешивали дополнительно в течение 3 ч при температуре окружающей среды. Суспензию фильтровали и фильтровальный осадок промывали метанолом (200 мл). Твердое вещество высушивали на воздухе и затем высушивали под вакуумом при температуре 30°С до постоянной массы, с выходом 49,6 г (90% извлечение) Ν-ацетил-Ьлейциновой соли (8)-2-(3-этокси-4-метоксифенил)-1-(метилсульфонил)-эт-2-иламина (98,4% ее). Хиральная ВЭЖХ (1/99 ЕЮН/20 мМ КН₂РО₄ при рН 7,0, ИНгоп СЫга1 Е8-ОУ8 от Лдбеп! ТесЬпо1од1е8, 150 мм х 4,6 мм, 0,5 мл/мин, при 240 нм): 18,4 мин (8-изомер, 99,2%), 25,5 мин (К-изомер, 0,8%).

Получение (+)-2-[ 1 -(3 -этокси-4-метоксифенил)-2-метилсульфонилэтил]-4-ацетиламиноизоиндолин1,3-диона. 500-мл 3-горлая круглодонная колба была оборудована приводной мешалкой, температурным датчиком и холодильником. Реакционный сосуд заполняли Ν-ацетил-Елейциновой солью (8)-2-(3этокси-4-метоксифенил)-1-(метилсульфонил)-эт-2-иламина (25 г, 56 ммоль, 98% ее), 3-ацетамидофталевым ангидридом (12,1 г, 58,8 ммоль) и ледяной уксусной кислотой (250 мл). Смесь кипятили с обратным холодильником в течение ночи и затем охлаждали до менее 50°С. После удаления растворителя под вакуумом остаток растворяли в этилацетате. Образовавшийся раствор промывали водой (250 мл х 2), насыщенным водным NаНСОз (250 мл х 2) и соляным раствором (250 мл х 2) и затем высушивали над безводным сульфатом натрия. После выпаривания растворителя под вакуумом остаток был перекристаллизован из бинарного растворителя, содержащего смесь этанола (150 мл) и ацетона (75 мл). Твердое вещество было выделено фильтрацией под вакуумом и промыто этанолом (100 мл х 2). Продукт был высушен под вакуумом при 60°С до постоянной массы, с выходом 19,4 г (75% выход) (8)-2-[1-(3-этокси-4метоксифенил)-2-метилсульфонилэтил]-4-иноизоиндолин-1,3-диона с 98% ее. Хиральная ВЭЖХ (15/85 ЕЮН/20 мМ КН₂РО₄ при рН,5, ИНгоп СЫга1 Е8-ОУ8 от Лдбеп! ТесЬпо1оду, 150 мм х 4,6 мм, 0,4 мл/мин, при 240 нм): 25,4 мин (8-изомер, 98,7%), 29,5 мин (К-изомер, 1,2%). Продукт в СЭСР, характеризовали при помощи спектра 'Н ЯМР, демонстрирующего следующие химические сдвиги (δ в м.д.): 1,47 (т, 3Н), 2,26 (с, 3Н), 2,87 (с, 3Н), 3,68-3,75 (дд, 1Н), 3,85 (с, 3Н), 4,07-4,15 (кв, 2Н), 4,51-4,61 (дд, 1Н), 5,84-5,90 (дд, 1Н), 6,82-8,77 (м, 6Н), 9,46 (с, 1Н). Продукт в ДМСО-б₆ характеризовали при помощи спектра ¹³С-ЯМР, демонстрирующего следующие химические сдвиги (δ в м.д.): 14,66, 24,92, 41,61, 48,53, 54,46, 55,91, 64,51, 111,44, 112,40, 115,10, 118,20, 120,28, 124,94, 129,22, 131,02, 136,09, 137,60, 148,62, 149,74, 167,46, 169,14, 169,48.

Пример 2. Получение 4-амино-2-(2,6-диоксо-3-пиперидинил)изоиндол-1,3-диона (соединение (2)).

В круглодонную колбу, оборудованную приводной мешалкой, температурным датчиком, холодильником, впускным клапаном для азота и нагревающим элементом, помещали смесь ацетонитрила (42 л) и №(3-аминофталоил)глутамина (2120 г, 7,28 моль). После перемешивания и нагревания смеси до 40-45°С добавляли 1,1'-карбонилдиимидазол (1290 г, 7,95 моль). Реакционную смесь перемешивали и кипятили с обратным холодильником в течение 4,5 ч. Течение реакции отслеживали при помощи ВЭЖХ, используя колонку С18 \Уа1ег5 Иога-Рак (3,9 х 50 мм, размер частиц = 4 мкм, длина волны УФ = 240 нм, время удерживания = 3,64 мин) и смесь 20/80 по объему ацетонитрила и 0,1% водного Н₃РО₄ в качестве элюента при скорости протекания 1 мл/мин. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь фильтровали с образованием твердого вещества желтого цвета, которое впоследствии промывали ацетонитрилом (6,5 л). Желтое твердое вещество высушивали на воздухе и затем высушивали в вакуумном сушильном шкафу при 60°С и давлении менее 1 мм с выходом 1760 г (88%) продукта. Степень частоты продукта составила 99,57%, что было обнаружено при помощи ВЭЖХ с использованием колонки С18 \Уа1ег5 Иога-Рак (3,9х 150 мм, размер частиц = 4 мкм, длина волны УФ = 240 нм, время удерживания = 3,64 мин) и смесь 20/80 по объему ацетонитрила и 0,1% водного Н₃РО₄ в качестве элюента при скорости протекания 1 мл/мин. Продукт в ДМСО-б₆ характеризовали при помощи спектра ¹Н ЯМР, демонстрирующего следующие химические сдвиги (δ в м.д.): 11,10 (с, 1Н), 7,47 (т, 1=7,9 Гц, 1Н), 7,03-6,99 (дд, 1=4,8 и 8,4 Гц, 2Н), 6,52 (с, 2Н), 5,09-5,02 (дд, 1=5,3 и 12,4 Гц, 1Н), 2,96-2,82 (м, 1Н), 2,62-2,46 (м, 2Н), 2,07-2,00 (м, 1Н); и при помощи спектра ¹³С-ЯМР, демонстрирующего следующие химические сдвиги (δ в м.д.): 172,82, 170,11, 168,57, 167-37, 146,71, 135,46, 131,99, 121,70, 110,97, 108,52, 48,47, 30,97, 22,14. Температура плавления продукта составила 315,5-317,5°С. Элементный анализ дал следующие результаты по массовому процентному содержанию: С, 56,98; Н, 3,86; Ν, 15,35, которые сопоставимы с расчетными значениями для С1₃Н1^₃О₄ по массовому процентному содержанию: 57,14; Н, 4,06; Ν, 15,38.

Пример 3. Получение циклопропил {2-[(18)-1-(3-этокси-4-метоксифенил)-2-(метилсульфонил)этил]- 19 013973

3-оксоизоиндолин-4-ил}карбоксамида.

Циклопропил {2-[(18)-1-(3-этокси-4-метоксифенил)-2-(метилсульфонил)этил]-3-оксоизоиндолин-4ил}карбоксамид получали в соответствии с методикой получения из примера 57 патента И8 6667316. Перемешанную смесь 7-амино-2-[( 18)-1 -(3 -этокси-4-метоксифенил)-2-(метилсульфонил)этил]изоиндолин-1-она (1,7 г, 4,2 ммоль) и циклопропанкарбонилхлорида (0,46 мл, 5,1 ммоль) в тетрагидрофуране (10 мл) нагревали до кипения с обратным холодильником в течение 15 мин. К смеси добавляли метанол (4 мл) при комнатной температуре и смесь перемешивали в течение 10 мин. Растворитель удаляли под вакуумом с образованием масла. Масло было перекристаллизовано при помощи этанола (20 мл) с образованием соединения (1) в виде твердого вещества белого цвета (1,4 г, 71% выход); т.пл. 172-174°С; '|| ЯМР (СБС1₃) δ: 0,86-0,93 (м, 2Н, 2СНН), 1,07-1,14 (м, 2Н, 2СНН), 1,46 (т, 1=69 Гц, 3Н, СН₃), 1,63-1,73 (м, 1Н, СН), 2,95 (с, 3Н, СН₃), 3,68 (дд, 1=4,4, 14,3 Гц, 1Н, СНН), 3,86 (с, 3Н, СН₃), 4,07 (кв, 1=7,1 Гц, 2Н, СН₂), 4,20 (д, 1=16,7 Гц, 1Н, СНН), 4,21 (дд, 1=9,9, 14,3 Гц, 1Н, СНН), 4,44 (д, 1=16,7 Гц, 1Н, СНН), 5,73 (дд, 1=4,3, 9,9 Гц, 1Н, ΝΟΙ), 6,84-7,02 (м, 4Н, Аг), 7,44 (т, 1=7,8 Гц, 1Н, Аг), 8,43 (д, 1=8,3 Гц, 1Н, Аг), 10,46 (с, 1Н, ΝΉ); ¹³С ЯМР (СЦС1₃) δ: 8,24, 14,61, 16,10, 41,43, 47,81, 51,55, 55,75, 55,88, 64,56, 111,46, 112,09, 116,69, 116,99, 117,76, 119,17, 129,27, 133,54, 138,06, 141,22, 148,84, 149,67, 169,96, 172,59; расчетный анализ для С₂₄Н₂₈^О₆8: С, 61,00; Н, 5,97; Ν, 5,93, Обнаружено: С, 60,87; Н, 6,13; Ν, 6,12.

Пример 4.

Таблетки, каждая из которых содержит 50 мг активного ингредиента, можно получить следующим способом:

Композиция (для 1000 таблеток)

активный ингредиент	50,0	граммов
лактоза	50,7	граммов
пшеничный крахмал	7,5	граммов
полиэтиленгликоль 6000	5,0	граммов
тальк	5,0	граммов
стеарат магния	1,8	граммов
деминерализованная вода	в достаточном количестве

Твердые ингредиенты сначала пропускают через сетчатый фильтр с шириной отверстий 0,6 мм. Затем смешивают активный ингредиент, лактозу, тальк, стеарат магния и половину крахмала. Активный ингредиент представляет собой соединение по изобретению или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или стереоизомер. Другую половину крахмала суспендируют в 40 мл воды и эту суспензию добавляют к кипящему раствору полиэтиленгликоля в 100 мл воды. Образующуюся пасту добавляют к порошкообразным веществам и смесь гранулируют, при необходимости добавляя воду. Гранулят высушивают в течение ночи при 35°С, пропускают через сетчатый фильтр с шириной отверстий 1,2 мм и прессуют с образованием таблеток диаметром приблизительно 6 мм, которые вогнуты с обеих сторон.

Пример 5.

Таблетки, каждая из которых содержит 100 мл активного ингредиента, можно получить следующим способом:

Коыпозиция (для 1000 таблеток)

активный ингредиент	100,0 граммов
лактоза	100,0 граммов
пшеничный крахмал	47,0 граммов
стеарат магния	3,0 граммов

Все твердые ингредиенты сначала пропускают через сетчатый фильтр с шириной отверстий 0,6 мм. Затем смешивают активный ингредиент, лактозу, стеарат магния и половину крахмала. Другую половину крахмала суспендируют в 40 мл воды и эту суспензию добавляют к кипящему раствору полиэтиленгликоля в 100 мл воды. Образующуся пасту добавляют к порошкообразным веществам и смесь гранулируют, при необходимости добавляя воду. Гранулят высушивают в течение ночи при 35°С, пропускают через сетчатый фильтр с шириной отверстий 1,2 мм и прессуют с образованием таблеток диаметром приблизительно 6 мм, которые вогнуты с обеих сторон.

- 20 013973

Пример 6.

Таблетки, каждая из которых содержит 75 мл активного ингредиента, можно получить следующим способом:

Композиция (для 1000 таблеток)

активный ингредиент	75,0 граммов
маннит	230,0 граммов
лактоза	150,0 граммов
тальк	21,0 граммов
глицин	12,5 граммов
стеариновая кислота	10,0 граммов
сахарин	1 5 граммов
5% раствор желатина	в достаточном количестве

Все твердые ингредиенты сначала пропускают через сетчатый фильтр с шириной отверстий 0,25 мм. Маннит и лактозу перемешивают, гранулируют с добавлением раствора желатина, пропускают через сетчатый фильтр с шириной отверстий 2 мм, высушивают при 50°С и опять пропускают через сетчатый фильтр с шириной отверстий 1,7 мм. Активный ингредиент, глицин и сахарин с большой осторожностью перемешивают. Добавляют маннит, гранулят лактозы, стеариновую кислоту и тальк и все вместе тщательно перемешивают и прессуют с образованием таблеток диаметром приблизительно 10 мм, которые вогнуты с обеих сторон и имеют насечку для разделения на верхней стороне.

Пример 7.

Таблетки, каждая из которых содержит 10 мл активного ингредиента, можно получить следующим способом:

Композиция (для	1000 таблеток)
активный ингредиент	10,0 граммов
лактоза	328,5 граммов
кукурузный кра хма л	17,5 граммов
полиэтиленгликоль 6000	5,0 граммов
тальк	25,0 граммов
стеарат магния	4,0 граммов
деминерализованная веда	в достаточном количестве

Твердые ингредиенты сначала пропускают через сетчатый фильтр с шириной отверстий 0,6 мм. Затем активный ингредиент, лактозу, тальк, стеарат магния и половину крахмала смешивают до однородности. Другую половину крахмала суспендируют в 65 мл воды и эту суспензию добавляют к кипящему раствору полиэтиленгликоля в 260 мл воды. Образующуюся пасту добавляют к порошкообразным веществам и все вместе перемешивают и гранулируют, при необходимости добавляя воду. Гранулят высушивают в течение ночи при 35°С, пропускают через сетчатый фильтр с шириной отверстий 1,2 мм и прессуют с образованием таблеток диаметром приблизительно 10 мм, которые вогнуты с обеих сторон и имеют насечку для разделения на верхней стороне.

Пример 8.

Желатиновые капсулы сухого наполнения, каждая из которых содержит 10 мл активного ингредиента, можно получить следующим способом:

Композиция (для 1000 таблеток) активный ингредиент

100,0 граммов микрокристаллическая целлюлоза

30,0 граммов лаурилсульфат натрия

2,0 граммов стеарат магния граммов

Лаурилсульфат натрия просевают в активный ингредиент через сетчатый фильтр с шириной отверстий 0,2 мм и два компонента перемешивают до однородного состояния в течение 10 мин. Затем через сетчатый фильтр с шириной отверстий 0,9 мм добавляют микрокристаллическую целлюлозу и два компонента перемешивают до однородного состояния в течение 10 мин. И, наконец, через сетчатый фильтр с шириной отверстий 0,8 мм добавляют стеарат магния и после перемешивания в течение дополнительных

- 21 013973 мин смесь вводят порциями по 140 мл в каждой в желатиновые капсулы сухого наполнения с размером 0 (вытянутые).

Пример 9.

0,2% раствор для впрыскивания или вливания можно получить, например, следующим способом:

Композиция

активный ингредиент	5,0 граммов
хлорид натрий	22,5 граммов
фосфатный буфер рН 7,4	300,00 граммов
деминерализованная вода	до 2500,0 миллилитров

Активный ингредиент растворяют в 1000 мл воды и фильтруют через микрофильтр. Добавляют буферный раствор и все вместе доводят водой до 2500 мл. Для получения стандартной лекарственной формы порции по 1,0 или 2,5 мл в каждой вводят в стеклянные ампулы (каждая содержит, соответственно, 2,0 или 5,0 мг активного ингредиента).

Пример 10.

Мазь для местного применения можно получить, например, следующим способом:

Композиция

активный ингредиент	10 г
вазелиновое масло	80 г
минеральное масло	120 г
2% физиологический раствор	2 л
триамцинолон ацетонид	0,5 г

Вышеприведенные ингредиенты смешивают до однородности для образования мази путем встряхивания или путем ультразвуковой энергии, используя традиционный смеситель или гомогенизатор.

Пример 11.

Гель для местного применения можно получить, например, следующим способом:

Композиция

активный ингредиент	10 г
карбоксиметилцеллюлоза	0,2 г
глицерин	40,0 г
0,4 моль/л цитратный буфер	22,0 г
дистиллированная вода	до 100 г

Вышеприведенные ингредиенты смешивают до однородности для образования геля путем встряхивания или путем ультразвуковой энергии, используя традиционный смеситель или гомогенизатор.

Пример 12.

Пасту для местного применения можно получить, например, следующим способом:

Композиция

активный ингредиент	10	Г
карбоксиметилцеллюлоза	2, 0	г
глицерин	25,0	г
цетанол	2,8	г
глицерилмоностеарат	9,3	г
Твин 80	2,0	г
глюкуроновая кислота	1,0	г
0,4 моль/л цитратный буфер	20, 0	г
дистиллированная вода	до 100 г

Вышеприведенные ингредиенты смешивают до однородности для образования пасты путем встряхивания или путем ультразвуковой энергии, используя традиционный смеситель или гомогенизатор.

- 22 013973

Пример 13.

Жидкую композицию для местного применения можно получить, например, следующим способом:

Композиция

активный ингредиент	10 г
карбоксиметилцеллюлоза	0,1 г
глицерин	15,0 г
0,4 моль/л цитратный буфер (рН 4,5)р	50,0 г
дистиллированная вода	до 100 г

Твердые ингредиенты измельчают/растворяют в жидких ингредиентах до однородности для образования жидкости путем встряхивания или путем ультразвуковой энергии, используя традиционный смеситель или гомогенизатор.

Пример 14.

Распыляемый раствор для местного применения можно получить, например, следующим способом:

Композиция
Жидкая композиция	из Примера 12	100,0 г
Ргеоп 114		100,0 г

Жидкой композицией и тетрафтордихлорэтаном заполняют алюминиевый баллончик с тефлоновым покрытием, предназначенный для распыления жидкости.

Пример 15. Тестирование с использованием эндотелиальных клеток пупочной вены человека.

A. Материалы. Эндотелиальные клетки пупочной вены человека (НиУЕС), полученные из ЬйсВапк, тестировали в экспериментах А-К с несколькими молекулами адгезии. Проверенные молекулы адгезии представляли собой ί.Ό51/ί.Ό61 Е1ТС (полученную от ΒΌ РйагМтдси, δηη Э^до, СА; номер в каталоге 555505), 1САМ-1 РЕ, также известную как СЭ54 (полученную от ΒΌ РйагМшдси, δаи Эидо, СА; номер в каталоге 555511), 1САМ-2, также известную как СЭ 102 (полученную от Ксксагсй Э|адпо5йс§ 1ис., Соисогй, МА; номер в каталоге КО1-СВЬ539ЕТ), УСАМ-1 (полученную от ΒΌ РйагМтдси. δаи Эидо, СА; номер в каталоге 555647), Р-селектин Е1ТС (полученную от Р&Э δу8ΐст8, 1ис., МхилсароЮ, МЦ; номер в каталоге ВВА34), Е-селектин Е1ТС (полученную от Р&Э δу8ΐст8, 1ис., МшпеароШ, МЦ; номер в каталоге ВВА21), НЬА класса I Е1ТС (полученную от ΒΌ РйагМтдси, δаи Эидо, СА; номер в каталоге 555553), НЬА класса II РЕ (полученную от ΒΌ РйагМшдси, δаи Эидо, СА; номер в каталоге 555558), СЭ44 Е1ТС (полученную от ΒΌ РйагМшдси, δаи Эидо, СА; номер в каталоге 347943), СЭ144 (кадгерин УЕ) (полученную от СНЕМ1СОЦ 1и1сгиа0оиа1, 1ис., Тстсси1а, СА; номер в каталоге МАВ 1989), 1дС2а Е1ТС (полученную от ΒΌ РйагМшдси, δаи Эидо, СА; номер в каталоге 556652), М§ 1дС2а (полученную от СНЕМ1СОЦ 1и1сгиа1юиа1, 1ис., Тстсси1а, СА; Са!. № РР 102), 1дС1 Е1ТС (полученную от ΒΌ РйагМшдси, δаи Эидо, СА; Са! № 349041) и 1дС1 РЕ (полученную от ΒΌ РйагМтдси, δаи Эидо, СА; Са!. № 349043).

Соединение (1) ((+)-2-[1-(3-этокси-4-метоксифенил)-2-метилсульфонилэтил]-4-ацетиламиноизоиндолин-1,3-дион) и соединение (2) (4-(амино)-2-(2,6-диоксо(3-пиперидил))изоиндолин-1,3-дион) были получены в соответствии с раскрытыми здесь процедурами получения. 16,16-диметил-РСЕ2 (здесь и далее РСЕ2) получена от ΒΙΟΙΠΟΡ 1и1сгиа1юиа1, Ь.Р. (Р1утои1й Мсейид, РА; номер в каталоге РС-021). ТЦЕ-α получен от Р1сгсс Β^оΐссйио1оду (ВоскЕогй, 1Ь; номер в каталоге ВШЕА10).

B. Способы. НиУЕС засевали в 6-луночные планшеты в концентрации 1х10⁵ клеток/лунку в 3 мл основной среды для эндотелиальных клеток ЕВМ® (полученную от СатЬгсх Согрогайои, ЕаЧ ВиШегЕогй, №\ν 1сг8су; номер в каталоге СС-3121) и отдельных проб (полученную от СатЬгсх Согрогайои, ЕаЧ КиШейогй, №\ν 1сг8су; номер в каталоге СС-4133). Клетки инкубировали в течение ночи при 37°С в 5% СО₂ увлажняющем инкубаторе до прикрепления клеток. Старую среду удаляли на следующий день и заменяли 3 мл свежей основной среды для эндотелиальных клеток ЕВМ®. Затем образцы по 3 мкл 10 мМ соединения (1), соединения (2), РСЕ2 и смеси соединения (1) и РСЕ2 по отдельности добавляли в каждую лунку планшетов в повторностях для получения конечной концентрации 10 мкМ. Нестимулированный ДМСО контроль и ТЦЕ-а-индуцированный контроль также были добавлены в повторностях. Планшеты инкубировали при 37°С в 5% СО₂ увлажняющем инкубаторе в течение 1 ч. ΕΝΕ-α (1 мкг/мл) добавляли к каждой лунке, за исключением лунки с ДМСО контролем, в объеме 3 мкл для получения конечной концентрации 1 мкг/мл. Планшеты инкубировали в течение ночи при 37°С в 5% СО₂ увлажняющем инкубаторе. Клетки также тестировали в отсутствии ТЦЕ-а. Среду удаляли на следующий день и каждую лунку промывали 3 мл забуференного фосфатом физиологического раствора (ΓΒδ). Затем 3 мл РΒδ, содержащего 1 мМ ЕЭТА (этилендиаминтетраацетат), добавляли к каждой лунке для отделения клеток. После того как клетки отделились, их осторожно соскребали и помещали в 4,5 мл пробирки Еа1

- 23 013973 сои. Пробирки затем центрифугировали при 1200 об/мин в течение 8 мин при 4°С. Супернатант с большой осторожностью удаляли. Затем во все пробирки добавляли 50 мкл буфера РВ8-РАС8 (5% эмбриональной телячьей сыворотки (РВ8), 0,02% азида натрия в РВ8) и 20 мкл антител.

Эксперименты А и В

Нестимулированный (ДМСО)	Стимулированный (ΤΝΓ)	Соединение (1) + ΤΝΓ	Ρ6Ε2 + ΤΝΓ	Соединение (2) + ΤΝΓ	РСЕ2 + Соедннеине (1) + ΤΝΓ
1САМ-1 РЕ	СИ51/61 ПТС	СО51/61 НТС	СО51/61 НТС	0051/61 Р1ТС	0051/61 НТС
СИ51/61 ПТС	1САМ-1 РЕ	1САМ-1 РЕ	1САМ-1 РЕ	1САМ-1 РЕ	1САМ-1 РЕ

Эксперименты С, Ό и Е

Нестимулированный (ДМСО)	Стимулированный (ΤΝΡ)	Соединение (1) + ΤΝΕ	РСЕ2 + ΤΝΕ	Соединение (2) + ΤΝΡ	РСЕ2 + Соединение (I)+ ΤΝΓ
1В61 НТС	Е-Селектин НТС	Е-Селектин НТС	Е-Селектин РГТС	Е-Селектин НТС	Е-Селектин НТС
Е-Селектин НТС	Р-Селектин Р1ТС	Р-Селектин НТС	Р-Селектин НТС	Р-Селектин РГГС	Р-Селектин НТС

Эксперименты Р, С и Н

Нестимулированный (ДМСО)	Стимулированный (ΤΝΓ)	Соединение (1) + ΤΝΕ	РСЕ2 + ΤΝΓ	Соединение (2) + ΤΝΤ	РСЕ2 + Соединение (1) + ΤΝΕ
1®01 РЕ	НЬА Класса I РЕ	НЬА Класса I РЕ	НЬА Класса 1 РЕ	НЬА Класса I РЕ	НЬА Класса I РЕ
1802а НТС	НЬА Класса II НТС	НЬА Класса I] НТС	НЬА Класса И НТС	НЬА Класса II НТС	НЬА Класса II НТС

Эксперименты Р и С

Нестимулированный (ДМСО)	Стимулированным (ΤΝΕ)	Соединение (1) + ΤΝΡ	Р6Е2 + ΤΝΕ	Соединение (2) + ΤΝΡ	РСЕ2 + Соединение (1) + ΤΝΕ
1В01 РЕ	УСАМ-! РЕ	УСАМ-1 РЕ	УСАМ-1 РЕ	УСАМ-1 РЕ	УСАМ-1 РЕ

Эксперимент Н

Нестимулированный (ДМСО)	Стимулированный (ΤΝΕ)	Соединение (1) + ΤΝΓ	Ρ6Ε2 + ΤΝΕ	Соединение (2) + ΤΝΓ	РСЕ2 + Соединение (1) + ΤΝΓ
18<31 РЕ	УСАМ-1 РЕ	УСАМ-1 РЕ	УСАМ-1 РЕ	УСАМ-1 РЕ	УСАМ-1 РЕ
УСАМ-1 РЕ	1САМ-2 ПТС	1САМ-2ПТС	1САМ-2 РГГС	1САМ-2 ПТС	1САМ-2 ПТС

Эксперимент Е

Нестимулированный (ДМСО)	Стимулированный (ΤΝΕ)	Соединение (1) + ΤΝΕ	РСЕ2 + ΤΝΡ	Соединение (2) + ΤΝΡ	РСЕ2 + Соедннеиие (1) + ΤΝΕ
1В01 ПТС	Е-Селектин	Е-Селектин	Е-Селектин	Е-Селектин	Е-Селекгин
Е-Селектин ПТС	Р-Селектин	Р-Селектин	Р-Селектин	Р-Селектин	Р-Селектин
Р-Селектин РГГС	СО51/61	СО51/61	С1551/61	СО51/61	СО51/61

Эксперимент I

Нестимулированный (ДМСО)	Стимулированный (ΤΝΓ)	Соединение (1) + ΤΝΓ	РСЕ2 + ΤΝΡ	Соединение (2) + ΤΝΓ	РСЕ2 + Соединение (1) + ΤΝΕ
1862а НТС	НЬА Класса II	НЬА Класса II	НЬА Класса 11	НЬА Класса 11	НЬА Класса II
1»61 РЕ	1САМ-1	1САМ-1	1САМ-1	1САМ-1	1САМ-1
НЬА Класса 11 ПТС	1САМ-2	1САМ-2	1САМ-2	1САМ-2	1САМ-2

Эксперимент I

Нестимулированный (ДМСО)	Стимулированный (ΤΝΓ)	Соединение (1) + ΤΝΡ	РСЕ2 + ΤΝΓ	Соединение (2) + ΤΝΓ	Р6Е2 + Соединение (1)* ΤΝΓ
Мн 1§С2а	1САМ-2 НТС	1САМ-2 ПТС	1САМ-2 ПТС	1САМ-2 ПТС	1САМ-2 НТС
1еО1 НТС	СИ 144	СО144	СО 144	СО 144	СО144
1САМ-2 НТС	СГЯ4	С1.144	СО44	СО44	СО44

- 24 013973

Эксперименты К и Ь

Нестнмулированный (ДМСО)	Стимулированный (ΤΝΓ)	Соединение (1) + ΤΝΓ	РСЕ2 + ΤΝΡ	Соединение (2) + ΤΝΓ	РСЕ2 + Соединение (1) + ΤΝΓ
Мк 1^62а	СИ144	СО 144	СО144	СИ 144	СО 144
1еС1 нтс	СИ44	СО44	СР44	СО44	СО44

После добавления антител пробирки инкубировали на льду в течение 30 мин и закрывали фольгой. Затем пробирки центрифугировали при 1200 об/мин в течение 8 мин при 4°С. Супернатант осторожно удаляли. Клетки повторно суспендировали в 2 мл буфера РВ8-РАС8 и опять центрифугировали, как описано выше. Супернатант снова осторожно удаляли и клетки повторно суспендировали в 500 мкл буфера РВ8-РАС8. Пробирки затем анализировали при помощи проточного цитометра. Каждую молекулу адгезии тестировали два или три раза, каждый раз при помощи различных доноров НИУЕС.

С. Результаты. Маркеры адгезии СИ51/61, 1САМ-1, Е-селектин и Р-селектин, которые экспрессируются на НИУЕС, проверяли в нестимулирующих условиях и с обработкой соединением (1) (10 мкМ), РСЕ2 (10 мкМ), соединением (2) (10 мкМ) или смесью соединения (1) (10 мкМ) и РСЕ2 (10 мкМ). В нестимулирующих условиях экспрессия СЭ51/61 клеточной поверхности не подверглась влиянию ни соединения (1), ни соединения (2), по сравнению с условиями без обработки. Обработки как РОЕ2, так и смесью соединения (1) и РСЕ2 привели к 20% уменьшению экспрессии СЭ51/61 клеточной поверхности. Экспрессия 1САМ-1 клеточной поверхности продемонстрировала небольшое 10-20% увеличение при обработках как соединением (1), так и соединением (2). Смесь соединения (1) и РСЕ2 усилила экспрессию 1САМ-1 клеточной поверхности на приблизительно 25-30%, хотя усиление было меньшим, чем усиление, которое наблюдалось при одном лишь РСЕ2 (см. фиг. 1).

Уровни экспрессии Е-селектина клеточной поверхности были небольшими, возможно благодаря недостаточной чувствительности. Несмотря на это, соединение (1) и соединение (2) ингибировали экспрессию Е-селектина, а РСЕ2, как оказалось, блокировал вызванное соединением (1) ингибирование, восстанавливая экспрессию Е-селектина до базальной величины. Экспрессия Р-селектина также ингибировалась соединением (1) и соединением (2) приблизительно на 55 и 35% соответственно. РСЕ2 уменьшает уровень ингибирования, вызванный соединением (1), от приблизительно 55 до 27% при использовании в комбинации, однако оставшийся уровень экспрессии был аналогичен уровню для одного лишь РОЕ2 (см. фиг. 2).

Для условий стимулирования ΤΝΕ-α (1 нг/мл) уровни экспрессии молекул адгезии клеточной поверхности были нормализованы как процентное отношение ΤΝΕ-α-индуцированной экспрессии (100%). При этих условиях ΤΝΕ-α-индуцированная экспрессия Е-селектина поверхности клеток не подвергалась влиянию соединения (1), в то время как соединение (2) (10 мкМ) ингибировало ΤΝΕ-α-индуцированную экспрессию Е-селектина на приблизительно 20%. РСЕ2 сам по себе приводил к 50% уменьшению ΤΝΕ-α-индуцированной экспрессии Е-селектина. Добавление соединения (1) уменьшает опосредованное РСЕ2 блокирование Е-селектина (см. фиг. 3). Как соединение (1), так и соединение (2) увеличивает ΤΝΕ-α-индуцированную клеточную экспрессию Р-селектина до 40% и >2-кратно вышеупомянутый базальный уровень соответственно. Смесь соединения (1) и РСЕ2 увеличивает ΤΝΕ-α-индуцированную клеточную экспрессию Р-селектина до уровней, сопоставимых с уровнем для одного лишь РСЕ2 (см. фиг. 3).

ΤΝΕ-α-индуцированная клеточная экспрессия УЕ-кадгерина не подвергалась влиянию соединения (1), соединения (2), РСЕ2 или смеси соединения (1) и РСЕ2 (см. фиг. 4). Тем не менее ΤΝΕ-α-индуцированная экспрессия СЭ44 клеточной поверхности ингибировалась приблизительно на 30% как соединением (1), так и соединением (2). Хотя РСЕ2 сам по себе не обладал детектируемыми эффектами, смесь соединения (1) и РСЕ2 устраняла 30% ингибирование, наблюдаемое с одним только соединением (1), и восстанавливала уровень экспрессии до уровня с одним лишь РОЕ2, которое было сравнимо с базальным уровнем (см. фиг. 4).

Некоторые маркеры адгезии, экспрессируемые на НИУЕС, были исследованы в ΤΝΕ-α-стимулирующих условиях вместе с соединением (1) (10 мкМ), РСЕ2 (10 мкМ), соединением (2) (10 мкМ) или со смесью соединения (1) и РСЕ2. Среди протестированных панелей, у обработанных соединением (1) экспрессия 1САМ-1 и Р-селектина клеточной поверхности увеличилась приблизительно на 35% и уменьшилась экспрессия УСАМ на 30%. Используя те же маркеры тестирования, соединение (2) увеличило экспрессию Р-селектина примерно вдвое. РСЕ2 и смесь соединения (1) и РОЕ2, по существу, уменьшили экспрессию и УСАМ, и Е-селектина клеточной поверхности. Наблюдаемое уменьшение было сравнимо с действием РСЕ2 самого по себе, что позволило предложить механизм, по которому соединение (1) не вовлечено в фосфодиэстеразное ингибирование (см. фиг. 5).

Использование ЕЬ18А для определения экспрессии Е-селектина клеточной поверхности у НИУЕС после ΤΝΕ-α-стимуляции продемонстрировало, что смесь соединения (1) и РСЕ2 (10 мкМ) значительно ингибировала экспрессию при 0,25, 0,5 и 1 нг/мл ΤΝΕ-α по сравнению с каждым веществом по отдельно

- 25 013973 сти. В этом испытании выяснилось, что смесь соединения (1) и РСЕ2 действует синергично. Кроме того, соединение (2) демонстрирует ингибирующий эффект в отношении ΤΝΡ-α-индуцированной экспрессии Е-селектина клеточной поверхности (см. фиг. 6).

Пример 16. Исследование индуцированного ультрафиолетом В продуцирования ΤΝΡ-α кератиноцитами человека.

Пациенты с кожной волчанкой часто переживают обострение болезни после воздействия ультрафиолетового (ИУ) излучения. Полагают, что это происходит благодаря ИУБ-индуцированному продуцированию ΤΝΡ-α кератиноцитами. Было показано, что кератиноциты высвобождают цитокины, включая ΤΝΡ-α, после воздействия низких уровней ИУВ радиации ίη νίΐτο (Така^ита. 1996). Изучение кожной волчанки ίη νίίτο проводили для того, чтобы исследовать, как соединения по изобретению влияют на продуцирование ΤΝΡ-α кератиноцитами.

Эпидермальные кератиноциты (клетки НЕКп) крайней плоти новорожденных человека, полученные от Саксабе ВюкщеЕ выращивали в питательной среде без сыворотки с добавкой факторов роста. Когда клетки достигли 80% слияния, их трипсинизировали и засевали в 6-луночные планшеты с концентрацией 1х10⁵ клеток на лунку. Планшеты инкубировали в течение 24 ч до достижения клеточной адгезии. Для оптимизации условий для высвобождения ΤΝΡ-α клетки подвергали различным уровням экспозиции к ИУВ радиации (1, 4 и 24 ч). Супернатанты затем собирали и тестировали в ЕЬ1§Л для ΤΝΡ-α.

Фиг. 7 демонстрирует, что клетки НЕКп подвергали воздействию 0, 10, 50, 100 или 300 мДж/см² ИУВ излучения. Супернатанты собирали и тестировали ЕЬ1§Л для ΤΝΡ-α через 1 ч (столбцы без рисунка), 4 ч (столбцы в линейку) или 24 ч (столбцы в клетку) после экспозиции. Результаты представляют собой среднее двух экспериментов. Результаты, приведенные на фиг. 7, показывают, что супернатанты, отобранные после 24 ч экспозиции клеток НЕКп к ИУВ, обладали самыми высокими уровнями ΤΝΡ-α. После экспозиции к 10, 50 или 100 мДж/см² клетки остались присоединенными к лункам и никакого повреждения клеток не наблюдалось. Экспозиция в 300 мДж/см² ИУВ была слишком высокой для клеток НЕКп и многие клетки были повреждены и отделялись от дна лунки. На основании этих результатов последующие эксперименты были сосредоточены на тестировании действия соединений по изобретению на уровни ΤΝΡ-α через 24 ч после экспозиции клеток НЕКп при излучении 50 мДж/см².

Клетки обрабатывали в течение 4 ч (+)-2-[1-(3-этокси-4-метоксифенил)-2-метилсульфонилэтил]-4ацетиламиноизоиндолин-1,3-дионом (соединение, названное 10004) или циклопропил {2-[(1 §)-1 -(3этокси-4-метоксифенил)-2-(метилсульфонил)этил]-3-оксоизоиндолин-4-ил}карбоксамидом (соединение, названное 11050) при 0,1, 1 или 10 мкМ. Среду аспирировали, клетки промывали и затем экспонировали при ИУВ излучении 50 мДж/см². Добавляли свежую среду и клетки инкубировали в течение 24 ч. Супернатанты отбирали и тестировали при помощи набора ЕЬ1§Л на ΤΝΡ-α от Р1егсе В^есИшЕ^у. Клетки, обработанные соединениями, продемонстрировали зависимое от дозы уменьшение уровней высвобождения ΤΝΡ-α после ИУВ экспозиции (фиг. 8). (+)-2-[1-(3-Этокси-4-метоксифенил)-2-метилсульфонилэтил]-4-ацетиламиноизоиндолин-1,3-дионом (соединение, названное 10004) оказывает больший эффект на уровни ΤΝΡ-α при обработке 0,1 мкМ, демонстрируя более высокие уровни ΤΝΡ-α, чем клетки, не подвергшиеся действию облучения (фиг. 8).

В других экспериментах клетки обрабатывали в течение 4 ч 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидроизоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дионом (соединение, названное 5013), (+)-2-[1-(3-этокси-4-метоксифенил)2-метилсульфонилэтил]-4-ацетиламиноизоиндолин-1,3-дионом (соединение, названное 10004) или соединением, названным 16057, при 0,1 или 1 мкМ. Клетки, обработанные (+)-2-[1-(3-этокси-4метоксифенил)-2-метилсульфонилэтил]-4-ацетиламиноизоиндолин-1,3-дионом (соединение, названное 10004), продемонстрировали зависимое от дозы уменьшение в уровнях высвобождения ΤΝΡ-α после ИУВ экспозиции (фиг. 9). 3-(4-Амино-1-оксо-1,3-дигидроизоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион (соединение, названное 5013) оказывает больший эффект на уровни ΤΝΡ-α при обработке 0,1 мкМ, демонстрируя более низкие уровни ΤΝΡ-α, чем клетки, не подвергшиеся действию облучения (фиг. 9). Описанные выше варианты осуществления изобретения носят лишь иллюстративный характер, и специалисты в данной области должны распознать и быть способными установить при помощи проведения не более чем стандартных исследований многочисленные эквиваленты конкретных соединений, материалов и процедур. Все эти эквиваленты рассматриваются как попадающие в рамки изобретения и охватываются прилагаемой формулой изобретения.

Claims (35)

1. Способ лечения кожной волчанки у человека, который включает введение пациенту с кожной волчанкой терапевтически эффективного количества (+)-2-[1-(3-этокси-4-метоксифенил)-2метилсульфонилэтил]-4-ацетиламиноизоиндолин-1,3-диона, по существу, свободного от (-)энантиомера, или его фармацевтически приемлемых соли или сольвата.

2. Способ лечения кожной волчанки, который включает введение пациенту с кожной волчанкой терапевтически эффективного количества 4-(амино)-2-(2,6-диоксо(3-пиперидил))изоиндолин-1,3-диона или

- 26 013973 его фармацевтически приемлемых соли, сольвата или стереоизомера.

3. Способ лечения кожной волчанки, который включает введение пациенту с кожной волчанкой терапевтически эффективного количества 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидроизоиндол-2-ил)пиперидин-2,6диона или его фармацевтически приемлемых соли, сольвата или стереоизомера.

4. Способ лечения кожной волчанки у человека, который включает введение пациенту с кожной волчанкой терапевтически эффективного количества циклопропил {2-[(18)-1-(3-этокси-4метоксифенил)-2-(метилсульфонил)этил]-3-оксоизоиндолин-4-ил}карбоксамида, по существу, свободного от К-энантиомера, или его фармацевтически приемлемых соли или сольвата.

5. Способ по пп.1-3 или 4, где соединение вводят в виде фармацевтически приемлемой соли.

6. Способ по пп.1-3 или 4, где соединение вводят в виде фармацевтически приемлемого сольвата.

7. Способ по п.6, где сольват представляет собой гидрат.

8. Способ по п.2 или 3, где соединение представляет собой К-энантиомер.

9. Способ по п.2 или 3, где соединение представляет собой 8-энантиомер.

10. Способ по пп.1-3 или 4, где кожная волчанка представляет собой острую кожную красную волчанку.

11. Способ по пп.1-3 или 4, где кожная волчанка представляет собой подострую кожную красную волчанку.

12. Способ по пп.1-3 или 4, где кожная волчанка представляет собой дискоидную красную волчанку.

13. Способ по пп.1-3 или 4, где кожная волчанка представляет собой красную волчанку новорожденных.

14. Способ по пп.1-3 или 4, где кожная волчанка представляет собой детскую красную волчанку.

15. Способ по пп.1-3 или 4, дополнительно включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества второго активного агента.

16. Способ по п.15, где второй активный агент представляет собой противовоспалительное средство, иммуномодулирующее соединение, противомалярийное средство, иммунодепрессивное средство, антибиотик, противовирусное вещество, иммуноглобулин, усиливающее иммунитет средство, гормон, РСЕ2 или их комбинацию.

17. Способ по п.16, где второй активный агент представляет собой РСЕ2.

18. Способ по пп.1-3 или 4, где соединение или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или стереоизомер вводят перорально.

19. Способ по пп.1-3 или 4, где соединение или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или стереоизомер вводят парентерально.

20. Способ по пп.1-3 или 4, где соединение или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или стереоизомер вводят местно.

21. Способ по п.20, где соединение или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или стереоизомер вводят местно в лекарственной форме в виде мази, крема, геля, пасты, присыпки, примочки, распыляемого раствора, линимента, горячей примочки, аэрозоля, раствора, эмульсии или суспензии.

22. Способ по пп.1-3 или 4, где соединение или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или стереоизомер вводят перорально в лекарственной форме в виде таблетки или капсулы.

23. Способ по п.22, где соединение или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или стереоизомер вводят перорально по 5, 10, 15 или 25 мг в виде таблетки или капсулы.

24. Способ по п.1 или 4, где терапевтически эффективное количество составляет от приблизительно 1 до приблизительно 1000 мг в день.

25. Способ по п.24, где терапевтически эффективное количество составляет от приблизительно 5 до приблизительно 500 мг в день.

26. Способ по п.25, где терапевтически эффективное количество составляет от приблизительно 10 до приблизительно 200 мг в день.

27. Способ по п.2 или 3, где терапевтически эффективное количество составляет от приблизительно 0,1 до приблизительно 150 мг в день.

28. Способ по п.27, где терапевтически эффективное количество составляет от приблизительно 1 до приблизительно 100 мг в день.

29. Способ по п.27, где терапевтически эффективное количество составляет приблизительно 0,1, 1, 2, 5, 10 или 25 мг в день.

30. Способ по п.2, где терапевтически эффективное количество составляет от приблизительно 0,5 до приблизительно 2 мг в день.

31. Способ по п.2, где терапевтически эффективное количество составляет приблизительно 5 мг через день.

32. Способ по п.3, где терапевтически эффективное количество составляет от приблизительно 5 до приблизительно 25 мг в день.

33. Способ по п.3, где терапевтически эффективное количество составляет приблизительно 25 или 50 мг через день.

- 27 013973

34. Способ по пп.1-3 или 4, где соединение или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или стереоизомер вводят один или два раза в день.

35. Способ по пп.1-3 или 4, где соединение или его фармацевтически приемлемые соль, сольват или стереоизомер вводят циклически.