JPH0372483A - 免疫抑制剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 この発明は免疫抑制活性を有する新規なトリシクロ化合
物またはその医薬として許容される塩を含有する免疫抑
制剤に関する。

すなわち、この発明の目的は、有効成分としてトリシク
ロ化合物またはその医薬として許容される塩を含有する
免疫抑制剤を提供することである。

この発明の免疫抑制剤は、移植による拒絶反応、骨髄移
植による移植片対宿主病、自己免疫疾患等の治療および
予防に有用である。

この発明は４種の醗酵生産物であるＦＲ−９００５０６
物質、ＦＲ−９００５２０物質、ＦＲ−９００５２３物
質およびＦＲ−９００５２５物質が見い出されたことに
基づくものである。

さらに詳細には、ＦＲ−９００５０６物質、ＦＲ−９０
０５２０物質、ＦＲ−９００５２３物質およびＦＲ−９
００５２５物質は、ストレプトミセス（兆■匹竺Ｂヨ）
風に属する新菌種を醗酵することにより得られる培養プ
ロスから純粋な形で初めて分離されたものである。

そして、ＦＲ−９００５０６物質、ＦＲ−９００５２０
物質、ＦＲ−９００５２３物質およびＦＲ−９００５２
５物質の化学構造を明らかにするため鋭意研究した結果
、この発明の発明者等１よそれらの化学構造を決定し、
それらの化合物の誘導体の合成に成功した。

この発明で使用されるトリシクロ化合物は下記一般式で
示すことができる。

（以下余白） （式中　Ｒ１はヒドロキシ基または保護されたヒドロキ
シ基、Ｒ２は水素、ヒドロキシ基または保護されたヒド
ロキシ基、Ｒはメチル基、ニブル基、プロピル基または
アリル基、ｎは１または２の整数、実線と点線により表
わされる記号εま単結合または二重結合を意味する） 化合物（Ｉ）のうち、下記４種の化合物が醗酵（こより
産生されることが見出された。

（Ｉ）Ｒ１およびＲ２がそれぞれヒドロキシ基、Ｒ３が
アリル基、ｎが整数２、実線と点線により表わされる記
号が単結合を意味する化合物（Ｉ）（ＦＲ−９００５０
６物質と命名） （２）ＲおよびＲ２がそれぞれヒドロキシ基、Ｒ３がエ
チル基、ｎが整数２、実線と点線により表わされる記号
が単結合を意味する化合物（Ｉ）［（ＦＲ−９００５２
０物質と命名（別名、　ＷＳ７２３８Ａ物質）］（３〉
ＲおよびＲ２がそれぞれヒドロキシ基、Ｒ３がメチル基
、ｎが整数２、実線と点線により表わされる記号が単結
合を意味する化合物（Ｉ）［ＦＲ−９００５２３物質と
命名（別名：賀Ｓ７２３ｇＢ物質）］（４）ＲおよびＲ
２がそれぞれヒドロキシ基、Ｒ３がアリル基、ｎが整数
１、実線と点線により表わされる記号が単結合を意味す
る化合物（Ｉ）（ＦＲ−９００５２５物質と命名） この発明の免疫抑制剤に含有されるトリシクロ化合物（
Ｉ）において、フンホーマーあるいは不斉炭素原子およ
び二重結合に起因する光学異性体および幾何異性体のよ
うな１対以上の立体異性体対が存在することがあり、そ
のようなフンホーマーあるいは異性体もこの発明の範囲
内に包含される。

この発明において使用されるトリシクロ化合物（Ｉ）ま
たはその医薬として許容される塩は、下記に示す製造法
により製造することができる。

［１１蚊脛羞 ［１１１企處羞 （ｔ　）　製」Ｅ詰」２（ヒドロキシ保護基の導入）Ｆ
Ｒ−９００５２５物質 （以下余白） １ヒドロキシ保護基の導入 （３〉賢」Ｅ患」−（二重結合の形成）吠へ１ん） （４）　ＩＬ！１１　（ヒドロキシエチレン基の酸化）
（５）１鮭４（ア ノル基の還元） １還 冗 （式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、ｎおよび実線と点線により
表わされる記号はそれぞれ前と同じ意味であり、Ｒ８お
よびＲａはそれぞれ保護されたヒドロキシ基、Ｒ６は脱
離基を意味する） トリシクロ化合物（Ｉ）において用いられている各種定
義の具体例およびその好ましい実施態様を以下詳細に説
明する。

この明細書において使用される「低級」なる語は、特に
指示がなければ、炭素原子１〜６個を意味する。

「保護されたヒドロキシ基」における好適なヒドロキシ
保護基としては、 例えばメチルチオメチル、エチルチオメチル、プロビル
デオメテル、インプロピルチオメチル、プチルチオメデ
ル、インブチルチオメチル、ヘキシルチオメチル等の低
級アルキルチオメチル基のような１−（低級アルキルチ
オ）（低級）アルキル基、さらに好ましいものとしてｃ
　＃ｃ　アル４ キルチオメチル基、最も好ましいものとしてメチルチオ
メチル基； 例えばトリメチルシリル、トリメチルシリル、トリメチ
ルシリル、第三級ブチル−ジメチルシリル、トリ第三級
ブチルシリル等のトリ（低級）アルキルシリル、例えば
メチル−ジフェニルシリル、エチル−ジフェニルシリル
、プロピル−ジフェニルシリル、第三級ブチル−ジフェ
ニルシリル等の低級アルキル−ジアリールシリル等のよ
うなトリ置換シリル基、さらに好ましいものとしてトリ
（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルシリル基およびＣｌ−Ｃ４アル
キル−ジフェニルシリル基、最も好ましいものとして第
三級ブチル−ジメチルシリル基および第三級ブチル−ジ
フェニルシリル基； カルボン酸およびスルホン酸から誘導される脂肪族アシ
ル基、芳香族アシル基および芳香族基で置換された脂肪
族アシル基のようなアシル基；等が挙げられる。

脂肪族アシル基としては、例えばホルミル、アセチル、
プロピオニル、ブチリル、イソブチリル、バレリル、イ
ンバレリル、ピバロイル、ヘキサノイル、カルボキシア
セデル、カルボキシプロビ才二ル、カルボキシブチリル
、カルボキシヘキサノイル等の、カルボキシのような適
当な置換基を１個以上有していてもよい低級アルカノイ
ル基、例えばシクロプロピルオキシアセチル、シクロブ
チル才キシプロピ才二ル、シクロへブチルオキシブチリ
ル、メンチルオキシアセチル、メンデル才キシブ口ピ才
二ル、メンチルオキシブチリル、メンチルオキシペンタ
ノイル、メンチルオキシヘキサノイル等の、低級アルキ
ルのような適当なＩｔ置換基１個以上有していてもよい
シクロ（低級）アルコキシ（低級）アルカノイル基、カ
ンファースルホニル基等が挙げられる。

芳香族アシル基としては、例えばベンゾイル、トルオイ
ル、キシロイル、ナフトイル、ニトロベンゾイル、ジニ
トロベンゾイル、ニトロナフトイル等の、ニトロのよう
な適当な置換基を１個以上有していてもよいアロイル基
、例えばベンゼンスルホニル、トルエンスルホニル、キ
シレンスルホニル、ナフタレンスルホニル、フルオロベ
ンゼンスルホニル、クロロベンゼンスルホニル、ブロモ
ベンゼンスルホニル、ヨードベンゼンスルホニル等の、
ハロゲンのような適当な置換基を１個以上有していても
よいアレーンスルホニル基等が挙げられる。

芳香族基で置換された脂肪族アシル基としては、例えば
フェニルアセデル、フェニルプロピオニル、フェニルブ
チリル、２−トリフルオロメチル−２−メトキシ−２−
フェニルアセチル、２−ニブル−２−トリプルオロメチ
ルー２−フェニルアセチル、２−トリプルオａメチルー
２−プロポキシ−２−フェニルアセデル等の、低級アル
コキシおよびトリハロ（低級）アルキルのような適当な
置換基を１個以上有していてもよいアル（低級）アルカ
ノイル基等が挙げられる。

上記アシル基中、さらに好ましいアシル基としては、カ
ルボキシを有していてもよいＣ１〜ｃ４アルカノイル基
、シクロアルキル部分に（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルを２個
有するシクロ（Ｃ５〜Ｃ，）アルキルオキシ（Ｃ１〜Ｃ
４）アルカノイル基、カンファースルホニル基、ニトロ
を１個または２個有していてもよいベンゾイル基、ハロ
ゲンを有するベンゼンスルホニル基、０１〜Ｃ４アルコ
キシとトリハロ（Ｃ１〜０４）アルキルを有するフェニ
ル（Ｃ１〜Ｃ４）アルカノイル基が挙げられ、それらの
うち、最も好ましいものとしては、アセチル、カルボキ
シプロピ才二ル、メンチルオキシアセチル、カンファー
スルホニル、ベンゾイル、ニトロベンゾイル、ジニトロ
ベンゾイル、ヨードベンゼンスルホニルおよび２−トリ
フルオロメチル−２−メトキシ−２−フェニルアセチル
が挙げられる。

好適な１脱離基、としては、ヒドロキシ基、アシル部分
が上記で例示したようなものであるアシルオキシ基等が
挙げられる。

この発明において使用されるトリシクロ化合物（Ｉ）の
製造法を以下詳細に説明する。

［１１牧匪迭 この発明のＦＲ−９００５０６物質、ＦＲ−９００５２
０物質、ＦＲ−９００５２３物質およびＦＲ−９００５
２５物質は、ストレプトミセス・ツクバエンシス（５ｔ
ｒｅ　ｔｏａ＋　ｃｅｓｔｓｕｋｕｂａｅｎｓｉｓ　）
　＆９９９３およびストレプトミセス・バイグロスコピ
カス・サブスプ・ヤクシマエンンス（５ｔｒｅ　ｔｏＩ
ｌｌａｓｓ　ｈ　　ｒｏｓｃｏ　１ｃｕｓ　Ｓｕｂｓｐ
ａｋｕｓｈｉｍａｅｎｓｉｓ　）　Ｎｏ　７２３８のよ
うなストレプトミセス属に属する、ＦＲ−９００５０６
、ＦＲ−９００５２０、ＦＲ−９００５２３および／ま
たはＦＲ−９００５２５物質−生産菌株を培地中で醗酵
させることにより生産することができる。

ＦＲ−９００５０６物質、ＦＲ−９００５２０物質、Ｆ
Ｒ−９００５２３物質およびＦＲ−９００５２５物質の
醗酵による生産について以下に説明する。

［Ａ］この発明のＦＲ−９００５０６物質、ＦＲ−９０
０５２０物質およびＦＲ−９００５２５物質は、ストレ
プトミセス・ツタバエンシスｒｌ＆１９９９３のような
ストレプトミセス属に属する、ＦＲ−９００５０６、Ｆ
Ｒ−９００５２０および／または皿−９００５２５物質
−生産菌株を培地中で醗酵させることにより生産できる
。

象土紅 ＦＲ−９００５０６物質、ＦＲ−９００５２０物質およ
び／またはＦＲ−９００５２５物質の生産に使用される
菌は、ストレプトミセス属に属するＦＲ−９００５０６
、ＦＲ−９００５２０および／またはＦＲ−９００５２
５物質−生産菌株であり、それらのうちストレプトミセ
ス・ツタバエアシスル９９９３が茨城県筑波郡豊里町で
採取された土壌試料から新たに分離された。

この新たに分離されたストレプトミセス・ツタバエンシ
ス＆９９９３の凍結乾燥標本は、工業技術院微生物工業
技術研究所（茨城県筑波郡矢田部町東１丁目１−３）に
１９８４年ｌＯ月５日付で寄託番号微工研菌寄第７８８
６号として寄託され、次いで１９８５年１０月１９日付
で新しい寄託番号微工研条寄第９２７号として同寄託機
関のブダペスト条約ルートに切り換えられた。

新規なＦＲ−９００５０６物質、ＦＲ−９００５２０物
質および／またはＦＲ−９００５２５物質の生産におい
て、この明細書に記載した菌は単に説明のためにのみ掲
げたものであり、それに限定されるものではない、この
発明にはまた、自然突然変異菌ならびにＸ線照射、紫外
線照射、Ｎ−メチル−Ｎ′−二トローＮ−ニトロソグア
ニジン、２−アミノプリン等による慣用の処理によって
つくられる人工突然変異菌をも含む、　ＦＲ−９００５
０６物質、　ＦＲ−９００５２０物質および／またはＦ
Ｒ−９００５２５物質を産生できるいかなる突然変異菌
を使用する場合も含まれる。

ストレプトミセス・ツクバエンシスＮｃ　９９９３は下
記のような形態学的性質、培養特性、生物学的および生
理学的特徴を有する。

［１１形態学的性質 主に、シャーリング（Ｓｈｉｒｌｉｎｇ）およびゴツト
リーブ（Ｇｏｔｔｌｉｅｂ）に記載の方法［シャーリン
グ・イー・ビーおよびデイ−・ゴットリープ二メソ・ン
ズ・フォー・キャラクテリゼーション・才ブ・ストレプ
トミセス・スペシーズ（インターナショナル・ジャーナ
ル・才ブ・システマチック・バタテノオロジー）　（Ｍ
ｅｔｈｏｄｓ　ｆｏｒ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉ
ｏｎ　ｏｆＳｔｒｅ　ｔｏｅｓ　ｃｅｓ　５ｐｅｃｉｅ
ｓ、　Ｌｎｔａｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌｏ
ｆ　５ｙｓｔｅａ＋ａｔｉｃ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇ
ｙ）第１６巻、第３１３〜３４０頁、１９６６年コを分
類学的検討に用いた。

形態学的観察は、オートミール寒天、イースト・マルト
エキストラクト寒天および無機塩・スターチ寒天上、３
０°Ｃで１４日間生育させた培養物を用い、光学および
電子顕微鏡を用いて行った。

成熟胞子体は各胞子鎖に１０〜５０個または５０個を超
える数の胞子を有する直鎖状または波状（Ｒｅｃｔｉｆ
ｌｅｘｉｂｉｌｅｓ）を形成した。を子顕微鏡での観察
によればこの胞子は楕円形の円筒状で、大きさは０５〜
０．７Ｘ０．７〜０６８−である、胞子表面は滑らかで
あった。

［２コ培養特性 培養特性は上記シャーリングおよびゴツトリープ、なら
びにワクスマン（％／ａｋｓｍａｎ）　［７クスマン・
ニス・エー：ザ・アクチノマイセッツ、第２巻、クラシ
フィケーション・アイデンティフィケーション・アンド
・デスクリプジョン・才ブ・ゼネラ・アンド・スペシー
ズ、ザ・ウィリアムス・アンド・ウィルキンス・カンパ
ニー、バルチモア、１９６１年（Ｗａｋｓｍａｎ、Ｓ、
＾、　４ｈｅ　ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ＋Ｖｏ１．
２　：　Ｃ１ａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ、　１ｄｅｎｔ
ｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　
ｏｆ　ｇｅｎｅｒａ　ａｎｄ　５ｐｅｃｉａｓ、τｈｅ
Ｗｉｌｌｉａｍｓ　ａｎｄ　Ｗｉｌｋｉｎｓ　Ｃｏ、、
　Ｂａ１ｔｉＩＩＩｏｒｅ、１９６１）　］に記載の１
０種類の培地で観察した。

３０”Ｃで１４日間培養した。この研究で使用した色名
は新色名帖（東京、日本色彩研究所の手引書）に基づい
た。オートミール寒天、イースト・マルトエキストラク
ト寒天および無機塩・スターチ寒天上で成育させた場合
、コロニーは灰色系に属していた。可溶性色素はイース
ト・マルトエキストラクト寒天で生成したが、他の培地
では生成しなかった。結果を表１に示す。

表１．菌株Ｎｏ　９９９３およびストレプトミセス・ミ
サキエンシス　ＩＦＯ１２８９１（Ｓｔ■匹竺■懸ｍ１
ｓａｋｉｅｎｓｉｓ　ＩＦＯ１２−８９１）の培養特性
略号：Ｇ−生育、Ａ−気菌糸の色 Ｒ−裏面の色、Ｓ−可溶性色素 細胞壁組成分析を、ベラカー等の方法［ベラカー・ビー
・、エム・ピー・レシウ０アリエル、アール・イー・ゴ
ートンおよびエイチ・ニー・レシウ０アリエル：５ピッ
ド・ディフェレンシエーション・ビトウ゛　イータ・ノ
カルジアおよびストレプトミセス・パイ・ペーパークａ
マトグ２フィー・才プ・ホール・セル◆ヒドロリゼーツ
：アプライド・マイクロバイオロジー（Ｂｅｃｋｅｒ。

Ｂ、、　Ｍ、Ｐ、Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒ、　Ｒ，Ｅ、
Ｇｏｒｄｏｎ　ａｎｄ　Ｈ，Ａ。

Ｌａｃｈｅｖａｌｉｅｒ：Ｒａｐｉｄ　ｄｉｆｆｅｒｅ
ｎｔｉａｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎＮｏｃａｒｄｉａ　
ａｎｄ　５ｔｒａ　ｔｏｗ　ｃｅｓ　ｂｙ　ｐａｐａｒ
ｃｈｒｏａ＋ａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｏｆ　ｗｈｏｌｅ　
ｃｅｌｌ　ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓ：Ａｐｐｌ、Ｍｉ
ｃｒｏｂｉｏｌ、　）第１２巻、第４２１〜４２３頁、
１９６４年］および山口の方法［山口、ティー・：フン
バノゾン・才ブ・ザ・セル◆つオール・コンポジション
・才ブ・モルホロジカリー・デイステインクト・アクチ
ノマイセッツ：ジ〜−ナル・才プ・バクテリオロジー（
Ｙａｎ＋ａｇｕｃｈｉ、　Ｔ、　：Ｃｏｍｐａｒｉｓｏ
ｎ　ｏｆｔｈｅ　ｃｅｌｌ　ｗａｌｌ　ｃｏｍｐｏｓｉ
ｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ＋ｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｌｙｄ
ｉｓｔｉｎｃｔ　ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ：Ｊ、Ｂ
ａｃｔｅｒｉｏｌ、　）第８９巻、第４４４〜４５３頁
、１９６５年］の方法によって行った。

菌株Ｎｏ　９９９３の全細胞加水分解物の分析結果は、
ＬＬ−ジアミノピメリン酸が存在することを示した。従
ってこの菌株の細胞壁はタイプｌに属すると考えられる
。

［３］生物学的および生理学的性質 菌株ＮＱ９９９３の生理学的性質は、前記シャーリング
およびゴツトリープに記載されている方法によって測定
した。その結果を表２に示す、生育温度範囲および生育
至適温度は、イースト・マルトエキストラクト寒天上、
温度勾配培養器（東洋化学産業株式会社製）を使用して
測定した。生育温度範囲は１８〜３５℃で、生育至適温
度は２８℃であった。ミルクのペプトン化およびゼラチ
ン液化は陽性であった。メラニン色素の産出は陰性であ
った。

表２．菌株Ｎｏ　９９９３およびストレプトミセス・ミ
サキエンシスＩＦ０１２８９１の生理学的性質炭素源の
利用性をプリドハムおよびゴツトリープの方法［ブリド
ハム・ティー・ジー・およびデイ−・ゴツトリープ：ザ
・ユーティライゼーション・才プ・カーボン・フンバウ
ンズ・バイ・サム・アクチノマイセッテールズ・アズ・
アン・エイド・フォー・スペシーズ・デターミネーショ
ン：′；ヤーナル・才ブ・バクテリオロジー（Ｐｒｉｄ
ｈａｍ、τ、Ｇ、ａｎｄ　Ｄ、Ｇｏｔｔｌｉｅｂ：τｈ
ｅ　ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｆ　ｃａｒｂｏｎ　ｃｏ
ａ＋ｐｏｕｎｄｓ　ｂｙ　ｓｏｍｅ　Ａｃｔｉｎｏｍｙ
ｃａｔａｌａｓａｓ　ａｎ　ａｉｄ　ｆｏｒ　５ｐｅｃ
ｉｅｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ：Ｊ。

Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、　）第５６巻、第１０７〜１１４
頁、１９４８年］によって試験した。　３０℃で１４日
間培養後に、生育状況を観察した。

この菌株の炭素源の利用性を表３にまとめて示す、グリ
セリン、マルトースおよびコハク酸ナトノウムは菌株Ｎ
Ｑ９９９３により利用された。さらにまた、Ｄ−グルコ
ース、シュークロース、Ｄ−マンノースおよびサリシン
は多少利用する。

（以下余白） 表３．菌株Ｎｏ　９９９３およびストレプトミセス・ミ
サキエンシスＩＦ０１２８９１の炭素源利用性記号　十
：良く利用する 土：多少利用する ｍ：利用しない 菌株ＮＱ　９９９３の顕微鏡学的観察および細ｐＩ！壁
組成分析の結果から、この菌株がワクスマン（Ｗａｋｓ
ｍａｎ　）およびヘンリシ（Ｈｅｎｒｉｃｉ）、１９４
３年、によるストレプトミセス属に属することが明らか
となった。

すなわち、この菌株を公表されている性状［インターナ
ショナル・ジャーナル・才プ・システマティック・バク
テリオロシー（ＩｎｔａｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎ
ａｌ　ｏｆ　Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　Ｂａｃｔａｒｉｏ
ｌｏｇｙ）第１８巻、第６９〜１８９頁、第２７９〜３
９２頁、１９６８年および第１９巻、第３９１〜５１２
頁、１９６９年、ならびにパージエイズ・マニュアル・
才プ・デターミネイティブ◆バクテリオロジ−（Ｂｅｒ
ｇｅｙ’ｓ　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆＤｅｔｅｒｍｉｎａｔ
ｉｖｅ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　）第８版、１９７
４年］に照らして、ストレプトミセス属の種々の種と比
較した。

比較の結果、菌株Ｎｏ　９９９３はストレプトミセス・
アブラウ゛イエンシス・ニジムラ等（Ｓｔｒｅ　ｔｏｗ
　ａｓｓａｂｕｒａｖｉｅｎｓｉｓ　ＮｉｓｈＮ１５ｈ
ｉ　ａｔ、ａｌ、　）、ストレプトミセス・アラ９エラ
ネウス・バルダッシおよびグレイン（５ｔｒｃ　ｔｏｗ
　ａｓｓ　ａｖｅｌｌａｎｅｕｓ　Ｂａ１ｄａｃｃｉ　
ａｎｄＧｒｅｉｎ）およびストレプトミセス・ミサキエ
ンシス・ナカムラに類似していると考えられる。

従って菌株Ｎｕ　９９９３の培養特性を、対応するスト
レプトミセス・アプラウ°イエンシスＩＦＯ１２８３０
、ストレプトミセス・アラ０エラネウスＩＦＯ１３４５
１およびストレプトミセス・ミサキエンシスＩＦＯ１２
８９１と比較した。その結果菌株ｍ９９９３はストレプ
トミセス・ミサキエンシスＩＦ０１２８９１に最も類似
していた。従って菌株＆　９９９３をさらに上記表１．
２および３に示したストレプトミセス・ミサキエンシス
ＩＦ０１２８９１と詳細に比較した。この結果から、菌
株Ｎｏ　９９９３はストレプトミセス・ミサキエンシス
ＩＦ。

１２８９１と下記の点で区別することができ、従って菌
株ｍ、９９９３はストレプトミセスの新種であると考え
られ、この微生物が茨城県筑波郡で採取した土壌にちな
んでストレプトミセス・ツクバエンシス・スブ・ノブ（
５ｔｒｅ　ｔｏｗ　ｃｅｓ　ｔｓｕｋｕｂａｅｎｓｉｓ
　ｓｐ。

ｎｏｖ、　）と命名された。

ストレプトミセス・ミサキエンシスＩＦ０１２８９１と
の垂立 菌株Ｎｃ９９９３の培養特性（文、ストレプトミセス・
ミサキエンシスＩＦ０１２８９１とは、オートミール寒
天、イースト・マルトエキストラクト寒天、グルツース
・アスパラギン寒天、スザペツク寒天およびポテト・デ
キストロース寒天を用いて培養したとき異なる。

菌株ＮＱ９９９３のスターブ加水分解は陰性であるが、
ストレプトミセス・ミサキエンシスＩＦ０１２ａ９１の
場合は陽性である。

菌株Ｎｃｉ　９９９３のゼラチン液化は陽性であるが、
ストレプトミセス・ミサキエンシスＩＦＯ１２１３９１
の場合は陰性である。

炭素源の利用性においては、菌株＆　９９９３はグリセ
リン、マルトースおよびコハク酸ナトリウムを利用する
が、ストレプトミセス・ミサキエンシスＩＦＯ１２８９
１はこれらを利用しない、さらに、菌株ぬ９９９３はＤ
−ガラクトースおよびイヌリンを利用しないが、ストレ
プトミセス・ミサキエンシスＵＦＯ１２８９１はこれら
を利用できる。

この発明の新規なＦＲ−９００５（＋６物質、ＦＲ−９
００５２０物質およびＦＲ−９００５２５物質は、例え
ばストレプトミセス・ツクバエンシスＮｏ９９９３、（
寄託番号：微工研条寄第９２７号）のようなストレプト
ミセス属に属するＦＲ−９００５０６、ＦＲ−９００５
２０および／またはＦＲ−９００５２５物質生産菌株を
培地中で培養することにより産生できる。

般的には、ＦＲ−９００５０６物質、ＦＲ−９００５２
０物質および／またはＦＲ−９００５２５物質は、ＦＲ
−９００５０６、ＦＲ−９００５２０および／またはＦ
Ｒ−９００５２５物質生産菌株を、同化しうる炭＊源お
よび窒素源を含有する水性培地中で、好ましくは例えば
振とう培養、深部＠養等の好気性条件下で培養すること
により産生できる。

培地の好ましい炭素源としては、グルコース、キンロー
ス、ガラクトース、グリセリン、スターチ、デキストリ
ン等のような炭水化物が挙げられる。他の炭素源として
はマルトース、ラムノース、ラフィノース、アラビノー
ス、マンノース、サリシン、コハダ酸ナトリウム等が挙
げられる。

好マしい窒素源としてはイースト・エキストラクト、ペ
プトン、グルテンミール、綿実粉、大豆粉、コーン・ス
テイープ・リカー、乾燥イースト、小麦胚芽、羽毛粉、
落花生粉等、ならびに例えば硝酸アンモニウム、硫酸ア
ンモニウム、燐酸アンモニウム等のアンモニウム塩、尿
素、アミノ＃専のような無機または有機窒素化合物が挙
げられる。

炭素源および窒素源は好ましくはそれらの組合わせで使
用されるが、微量の生育因子および相当量の無機栄養素
を含有していれば純度の低い物質も使用でき、必ずしも
純粋な形で使用する必要はない、所望により培地にａ！
酸ナトリウムまたは炭酸カルシウム、燐酸ナトリウムま
たは燐酸カリウム、塩化ナトリウムまたは塩化カリウム
、沃化ナトリウムまたは沃化カリウム、マグネシウム塩
、銅塩、コバルト塩等の無機塩を添加してもよい。

特に培養培地が著しく発泡する場合には、必要により液
状パラフィン、脂肪油、植物油、鉱油またはシリコンの
ような消泡剤を添加してもよい。

ＦＲ−９００５０６物質、ＦＲ−９００５２０物質およ
びＦＲ−９００５２５物質を大量生産する条件としては
、深部好気培養が好ましい、少量生産にはフラスコまた
はびん中で振とう培養または表面培養が行われる。

さらにまた、大型タンク内で生育を実施する場合には、
ＦＲ−９００５０６物質、ＦＲ−９００５２０物質およ
びＦＲ−９００５２５物質の生産工程における生育遅延
を回避するために、微生物の前培養を用いて生産タンク
中に菌を接種するのが好ましい、すなわち、比較的少量
の培養培地に微生物の胞子または菌糸を接種し、その接
種培地を培養して微生物の前培養接種物をまず生産し、
次いで培養した前培養接種物を無菌的に大型タンクに移
すのが望ましい、この前培養接種物を生産する培地は、
ＦＲ−９００５０６物質、ＦＲ−９００５２０物質およ
びＦＲ−９００５２５物質の生産に使用される培地と実
質的に同じであってもよく、また異なってもよい。

培養混合物の攪拌および通気は種々の方法で行うことが
できる。攪拌はブａペラまたはこれに準する攪拌装置を
用いるか、醗酵器を回転させるかまたは振とうするか、
種々のポンプ装置を用いるか、または培地中に滅菌空気
を通すことによっても行うことができる６通気は滅菌空
気を醗酵混合物中を通過させることにより行ってもよい
。

醗酵は通常、約２０℃〜４０℃の温度範囲、好ましくは
２５〜３５℃で、約５０〜１５０時間行われるが、醗酵
条件および醗酵規模によって適宜変化させればよい。

このようにして生産されたＦＲ−９００５０６物質、Ｆ
Ｒ−９００５２０物質およびＦＲ−９００５２５１＃質
は、他の既如の生物学的活性物質の回収に通常使用され
る慣用の方法で培養培地から回収することができる。生
産されたＦＲ−９００５０６物質、ＦＲ−９００５２０
物質およびＦＲ−９０Ｏ５２５物質は、培養菌糸中およ
び濾液中に見出され、従ってＦＲ−９００５０６物質、
ＦＲ−９００５２０物質およびＦＲ−９００５２５物質
は、培養ブロスの濾過または遠心分離によって得られる
菌糸および濾液から、減圧濃縮、凍結乾燥、常用の溶媒
による抽出、ｐｎ調整、例えば陰イオン交換樹脂または
陽イオン交換樹脂、非イオン性成ｉ樹脂等の常用の樹脂
による処理、例えば活性炭、ケイ酸、シリカゲル、セル
ロース、アルミナ等の常用の吸着剤によるあ理、結晶化
、再結晶化等の慣用の方法によって分離、精製すること
ができる。

上記醗酵法によって生産されたＦＲ−９００５０６物質
、ＦＲ−９００５２０物質およびＦＲ−９００５２５物
質は下記の物理化学的性質を有する。

巴ユ蚊呻紅１ （Ｉ）形状および色ｙ４： 白色粉末 （２〉元素分析値： Ｃ：６４．７２％、）Ｉ：８．７８％、Ｎ：１．５９％
６４５９％　　８．７４％　　１．６２％（３〉呈色反
応： 陽性：硫酸セリウム反応、硫酸反応、エールノッヒ反応
、ドラーゲンドルフ反応、沃素蒸気反応 陰性：塩化第二鉄反応、ニンヒドリン反応、モーリッシ
ュ反応 （４〉溶解性： 可ｍ：メタノール、エタノール、アセトン、酢酸エチル
、クロロホルム、ジエチルエーテル、ベンゼン 難溶：ヘキサン、石油エーテル 不溶：水 （５）融点： ８５〜９０℃ 〈６） （７〉 （８） 比旋光度： ［α　コε３．−７３°Ｃ（Ｃ・０．８．ＣＨＣｌ３）
紫外線吸収スペクトル： 末端吸収 赤外線吸収スペクトルニ ジＣＨＣｌ３．３６８０．３５８０．３５２０゜ａＸ ２９３０、　２８７０゜ １７００、　１６４５゜ １３３０、　１３１０゜ １０９０、　１０５０゜ ９６０　（ｓｈ）。

２ｇ３０．　１７４５．　１？２０゜ １４５０、　１３８０．　１３５０゜ １２８５．１１７０．１１３５゜ １０３０．１０００．９９０゜ ９１８　ｅｌｌ−ｌ （９）　１３Ｃ核磁気共鳴スペクトル：（Ｉ１）薄層ク
ロマトグラフイー二 ８４．４１　　（ｄ）。

３９．４０　　（ｔ）。

３１．５８　（ｔ）。

３０．７９　（ｔ）。

上記スペクトルのチャートを図１に示す。

（Ｉ０）’Ｈ核磁気共鳴スペクトル： 上記スペクトルのチャートを図２に示す。

（Ｉ２〉物質の性質： 中性物質 ＦＲ−９００５０６物質に関して、１３ｃおよび１Ｈ核
磁気共鳴スペクトルの測定の際、この物質は種々の化学
シフトにおいてそれぞれ１対のシグナルを示す。

このような特徴を有するＦＲ−９００５０６物質は、さ
らに下記の性質を有する。

（ｉ＞１３Ｃ核磁気共鳴スペクトルを２５°Ｃおよび６
０°Ｃにおいて測定したところ、それぞれ１対のシグナ
ルの強度比が変化する。

（ｉ）薄１１クロマトグラフィーおよび高速液体クロマ
トグラフィーを測定したところ、ＦＲ−９００５０６物
質はそれぞれ薄層クロマトグラフィーでは単一スポット
として、高速液体クロマトグラフィーでは単一ピークと
して現れる。

ＦＲ−９００５０６物質のこの白色粉末はアセトニトリ
ルから再結晶すると結晶の形状に変化し、この結晶は下
記の物理化学的性質を有する。

（Ｉ）形状および色調： 無色のプリズム状結晶 （２）元素分析値： Ｃ：６４．３０％、Ｈ，８，９２％、Ｎ：１．７７％６
４、２０％、　　　８．８６％、　　　１．７２％（３
）融点； １２７〜１２９℃ （４〉比旋光度： ［ａ１ｇ３ニー８４．４’　（Ｃ＝１．０２．ＣＨＣｌ
３）（５）　１３Ｃ核磁気共鳴スペクトル：上記スペク
トルのチャートを図３に示す。

（６）　１Ｈ核磁気共鳴スペクトル： 上記スペクトルのチャートを図４に示す。

その他の物理化学的性質、すなわちＦＲ−９００５０６
物質の無色のプリズム状結晶の呈色反応、溶解性、紫外
線吸収スペクトル、赤外線吸収スペクトル、薄層クロマ
トグラフィーおよび物性の性質は、白色粉末のそれらと
同じであった。

上記物理化学的性質およびＸ線解析から、ＦＲ−９００
５０６物質は下記の化学構造を有することがわかった。

１７−アリル−１，１４−ジヒドロキシ−１２−［２−
（４−ヒドロキシ−３−メトキシシクロヘキシル）−１
−メチルビニル］−２３，２５−ジメトキシ−１３，１
９，２１，２７−テトラメチル−ＬＬ、２８−ジオキサ
−４−アザトリシクロ［２２，３、１，０４，９］オク
タコス−１８−エン−２．３，１０゜１６−テトラオン 堕ユ吋呟出ス この化合物の物理化学的性質は後に述べる。

■二昶旦鴎空１！ （Ｉ）形状および色ｗＲ： 白色粉末 （２）元素分析値： Ｃ：６５．１７％、Ｈ：８．５３％、Ｎ：１．７６％（
３〉呈色反応： 陽性：硫酸セリウム反応、硫酸反応、エールリッヒ反応
、ドラーゲンドルフ反応、沃素蒸気反応 艙性：塩化第二鉄反応、ニンヒドリン反応、モーリッシ
ュ反応 （４）溶解性： 可溶：メタノール、エタノール、アセトン、酢酸エチル
、クロロホルム、ジエチルエーテル、ベンゼン １１ｉ１：ヘキサン、石油エーテル 不ｍ：水 （５）融点： ８５〜８９℃ （６〉比旋光度： ［α］２３　、−ａｓｏ　（Ｃ＝１．Ｏ，ＣＨＣｌ３）
紫外線吸収スペクトル： 末端吸収 赤外線吸収スペクトル： Ｃ）ＩＣＩ ν　　３：　３６８０．３５８０．３４７５．３３４０
゜ａｘ ２８８０、２８３０．１？５５．１７０５゜１４５５、
１３８２．１３７０．１３３Ｇ。

１２７３、１１７０．１１３５．１０９３゜１０２０、
９９５．９７０．９２０．８６７（９）　１３Ｃ核磁気
共鳴スペクトル：（８） （７） ２９４０゜ １６３５゜ １３１０゜ １０５０゜ １１ 上記スペクトルのチャートを図５に示す。

（ｌＯ）ＩＨ核磁気共鳴スペクトル： 上記スペクトルのチャートを図６に示す。

（以下余白） （Ｉ１）薄層クロマトグラフィー： （Ｉ２〉物質の性質： 中性物質 ＦＲ−９００５２５物質に関して、１３ＣおよびＩＨ核
磁気共鳴スペクトルの測定の際、この物質は種々の化学
シフトにおいてそれぞれ１対のシグナルを示したが、薄
層クロマトグラフィーおよび高速液体クロマトグラフィ
ーを測定したところ、ＦＲ−９００５２５物質はそれぞ
れ薄層クロマトグラフィーで単一スポット、高速液体ク
ロマトグラフィーでは単一ピークを示した。

上記物理化学的性質およびＦＲ−９００５０６物質の化
学構造が決定されたことにより、ＦＲ−９００５２５物
質は下記の化学構造を有することが判明した。

１６−アリル−１，１３−ジヒドロキシ−１１−［２−
（４−ヒドロキシ−３−メトキシシクロヘキシル）−１
−メチルビニル］−２２，２４−ジメトキシ−１２，１
８，２０，２６−テトラメチル−１０，２７−ジオキサ
−４−アザトリシクロ［２１，３，１，０”８］ペプタ
コス−１７−エン−２、３、９，１５−テトラオン ［Ｂ］この発明のＦＲ−９００５２０物質およびＦＲ−
９００５２３物質は、ストレプトミセス・ハイグロスフ
ピカス・サプスプ・ヤクシマエンシスＮｃ　７２３８の
ようなストレプトミセス属に属するＦＲ−９００５２０
および／またはＦＲ−９００５２３物質−生産菌株を、
培地中で醗酵させることにより生産できる。

象圭１ ＦＲ−９００５２０物質および／またはＦＲ−９００５
２３物質の生産に使用される菌は、ストレプトミセス属
に属するＦＲ−９００５２０および／また仕ＦＲ−９０
０５２３物質−生産菌株であり、それらのうちストレプ
トミセス・バイグロスコピカス・サプスプ・ヤクシマエ
ンシスＮｏ　７２３Ｂが鹿児島県屋久島で採取された土
壌試料から新たに分離された。

この新たに分離されたストレプトミセス・バイグロスコ
ピカス・サプスプ・ヤクシマエンシス賜７２３８の凍結
乾燥標本は、工業技術院微生物工業技術研究所に寄託番
号微工研菌寄第８０４３号として、１９８５年１月１２
日付で寄託され、次いで１９８５年１０月１９日ｆ寸で
新しい寄託番号微工研条寄第９２８号として同寄託機関
のブダペスト条約ルートに切り換えられた。

新規なＦＲ−９００５２０物質およびＦＲ−９００５２
３物質の生産において、この明細書に記載した菌は車に
説明のためにのみ掲げたものであって、それに限定され
るものではない、この発明にはまた、自然突然変異菌な
らびにＸ線照射、紫外線照射、Ｎ−メチル−Ｎ’−ニト
ロ−Ｎ−ニトロソグアニジン、２−アミノプリンあ理等
のような慣用の処理によってつくられる人工突然変異菌
をも含む、ＦＲ−９００５２０物質および／またはＦＲ
−９００５２３物質を産生できるいかなる突然変異菌を
使用する場合も含まれる。

ストレプトミセス・バイグロスコピカス・サプスブ・ヤ
クシマエンシスＮｕ　７２３８は下記のような形態学的
性質、培養特性、生物学的および生理学的特徴を有する
。

［１］形態学的特徴 前述のシャーリングおよびゴツトリープによって記載さ
れている方法を主としてこの分類学上の研究に用いた。

形態学的観察は、オートミール寒天、イースト・マルト
エキストラクト寒天および無機塩・スターチ寒天上、３
０’Ｃで１４日間生育させた培養物を用い、光学および
電子顕微鏡により行った。成熟胞子体は幾分短かく、そ
れぞれの鎖に約２０個の胞子を有する錐状（蝕■肚田旦
Ｕ肛見）およびら旋状（ａ紅烈朋）を形成していた。吸
湿性の胞子塊がオートミール寒天および無機塩・スター
チ寒天上の気菌糸に見られた。胞子表面の不揃いの凹凸
は非常に短くて太い鯨といぼとの間の中間の形状であっ
た。

［２］′＠養特性 培養特性は、上記シャーリングおよびゴツトリープ、な
らびに前述の７クスマンに記載の１０種類の培地上で観
察した。

３０°Ｃで！４日間培養した。この研究で使用した色名
は前記新色名帖に基づいた。

オートミール寒天、イースト・マルトエキストラクト寒
天および無機塩・スターチ寒天上で生育させた場合、コ
ロニーは灰色系に属していた。可溶性色素は試論した培
地中では産生されなかった。結果を表４に示す。

表４．菌株Ｎｏ　７２３８、ストレプトミセス・アンチ
マイフテイクス（Ｓｔｒｅ　ｔｏｎ　ａｓｓ　ａｎｔｉ
ｍｉｃｏｔｉｃｕｓ）ＩＦＯ１２８３９およびストレプ
トミセス・バイグロスコピカス・サプスブ・グレボスス
（Ｓｔｒｅ　ｔｏｗ　ｃｅｓｈ　　ｒｏｓｃｏ　１ｃｕ
ｓ　５ｕｂｓｐ、４）ＩＦ０１３７８６の培養特性 略号二〇−生育　　Ａ−気菌糸の色、 Ｒ−裏面の色、　Ｓ−可溶性色素、 細胞壁分析を前述のベラカー等および山口の方法によっ
て行った。　＠１ａＮａ７２３Ｂの全ｍ胞加水分解物の
分析結果は、　ＬＬ−ジアミノピメリン酸の存在を示し
ていた。従ってこの菌株の細胞壁はタイプＩに属すると
考えられる。

［３］生物学的および生理学的性質 菌株Ｎｏ　７２３８の生理学的性質は、前記シケーリン
グおよびゴントリーブ記載の方法に従って測定した。そ
の結果を表５に示す、生育温度範囲および生育至適温度
は、イースト・マルトエキストラクト寒天上、温度勾配
培養器（東洋化学産業株式会社製）を使用して測定した
。生育温度範囲４１１８〜３６℃で、至適温度は２８℃
であった。スターブ加水分解およびゼラチン液化は陽性
であった。メラニン色素は産生されなかった。

表５　、１１株Ｎｏ７２３８．ストレプトミセス・アン
チマイコティクスＩＦＯ１２８３９およびストレプトミ
セス・バイグロスコピカス・サプスプ・グレボススＩＦ
Ｏ１３７８６の生理学的性質炭素源の利用性を前述のプ
リドハムおよびゴツトリープの方法によって試験した。

生育状態を３０℃で１４日間培養した後観察した。

この菌株の炭素源利用性を表６にまとめて示す。

Ｄ−グルコース、シュークロース、ラクトース、マルト
ース、Ｄ−トレハロース、イノシトール、イヌリンおよ
びサリシンが菌株＆　７２３ｇにより利用された。

表６．ＩＩ株１に７２３ｇ、ストレプトミセス・アンチ
マイフティクスＩＦＯ１２８３９およびストレプトミセ
ス・バイグロスコピカス・サブスブ・グレボススＩＦ０
１３７８６の炭素源利用性記号 十二良く利用する ±：多少利用する 一：利用しない 菌株へ７２３８のＷＡ微鏡学的観察および細胞壁組成分
析結果から、この菌株が７クスマンおよびヘンリシ、１
９４３年によるストレプトミセス属に属することが明ら
かとなった。

従って、この菌株を公表された性状［インターナショナ
ル・ジャーナル・才プ・システ７ティγり−ｙ＜クテリ
オロジー　（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎ
ａｌｏｆ　Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ
ｏｇｙ）　　第１８巻、６９〜１８９頁、２７９〜３９
２頁、１９６８年および第１９巻、３９１〜５１２頁、
　１９６９年ならびにパージエイズ・マニュアル・才ブ
・デターミネーティプ・バクテリオロノー第８版、■９
７４年（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆＤｅｔ
ｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　８
ｔｈ　Ｅｄｉｔｉｏｎ。

１９７４）］に照らして種々のストレプトミセス属に属
する種と比較した。

比較の結果、菌株Ｎｃｉ　７２３８はストレプトミセス
・アンチマイコティクス・７クスマン１９５７およびス
トレプトミセス・バイグロスコピカス・サブスプ・ダレ
ボススオオモリ等にＭ似していると考えられる。従って
菌株＆　７２３８の培養特性を、さらに対応するストレ
プトミセス・アンチマイコティクスＩＦＯ１２８３９お
よびストレプトミセス・バイグロスコピカス・サプスプ
・グレボススＩＦ０１３７８６と、表４．５および６に
示したように比較した。この詳細比較の結果から、菌株
＆　７２３ｇはストレプトミセス・アンプマイコティク
スＩＦＯ１２８３９およびストレプトミセス・バイグロ
スコピカス・サブスブ・グレボススＩＦ０１３７８６と
は下記の点で区別することができた。

１１ｉ　株ＮＱ　７２３ｇの培養特性は、ストレプトミ
セス・アンチマイコティクスＩＦＯ１２８３９とは、イ
ースト・マルトエキストラクト寒天、グルコース・アス
パラギン寒天、グリセリンアスパラギン寒天、ポテト・
デキストロース寒天およびチロシン寒天を用いて培養し
たとき異なる。

炭素源の利用性では、菌株＆　７２３ｇはマルトースを
利用するが、ストレプトミセス・アンチマイフティクス
ＩＦ０１２８３９は利用しない、さらに、菌株歯７２３
８はグリセリン、Ｄ−フルクトース、ラムノース、ラフ
ィノース、Ｄ−ガラクトース、Ｄ−マンノース、マンニ
トールおよびコハク酸ナトリウムを利用しないが、スト
レプトミセス・アンチマイフテイクスＩＦＯ１２８３９
は利用する。

菌株Ｎｏ７２３ｇの培養特性壮、ストレプトミセス・バ
イグロスコピカス・サプスブ・グレボススＩＦＯ１３７
８６とは、イースト・マルトエキストラクト寒天、ポテ
ト・デキストロース寒天およびチロシン寒天を用いて培
養したとき異なる。

菌株Ｎｃ　７２３８のミルクペプトン化は陰性であるが
、ストレプトミセス・バイグロスコピカス・サプスプ・
グレポススＩＦ０１３７８６は陽性である。菌株１１＆
ｉ　７２３８は７％ＮａＣ１の存在下に生育しうるが、
ストレプトミセス・バイグロスコピカス・サブスプ・グ
レボススＩＦＯ１３７８６は同条件下には生育しない。

炭素源の利用性では、菌株＆　７２３８はラクトース、
イヌリンおよびサリシンを利用しろるが、ストレプトミ
セス・ハイグロスフピヵ・ス・サブスプ・グレボススＩ
Ｆ０１３７８６はそれらを利用しない、また、菌株Ｎｏ
　７２３８はグリセリン、Ｄ−キシロース、Ｄ−フルク
トース、ラフィノース、Ｄ−ガラクトース、Ｄ−マンノ
ース、マンニトールおよびコハク酸ナトリウムを利用し
ないが、ストレプトミセス・バイグロスコピカス・サブ
スブ・グレボススＩＦ０１３７８６はそれらを利用する
。

しかしながら、菌株ＮＱ　７２３８はオートミール寒天
および無機塩スターチ寒天で気菌糸に吸湿性胞子塊を形
成し、さらに菌株Ｎｏ　７２３Ｂの形態学的特徴および
培養特性はストレプトミセス・バイグロスコピカス・サ
ブスブ・グレポススＩＦＯ１３７８６に類似している。

従って菌株Ｎｃｔ７２３ｇはストレプトミセス・バイグ
ロスコピカスに属し、この公知の菌株がストレプトミセ
ス・バイグロスコピカスの亜種中では菌株Ｎ１１７２３
ｇに最もＭ似しているけれども、菌株＆　７２３ｇはス
トレプトミセス・バイグロスコピカス・サブスプ・グレ
ボススＩＦ０１３７８６とは異なる。

以上の事実から菌株Ｎｏ、７２３８は、ストレプトミセ
ス・バイグロスコピカスの新亜種であると考えられ、微
生物が屋久島の土壌から分離されたことにちなんで、ス
トレプトミセス・バイグロスコピカス・サブスプ・ヤク
シマエンシス（塾二鮭聾□！ｈ　　ｒｏｓｃｏ　１ｃｕ
ｓ　５ｕｂｓｐ、　ａｋｕｓｈｔｍａｅｏｓｉｓ）と命
名された。

ＦＲ−９００５２０およびＦＲ−９００５２３の　生こ
の発明の新規なＦＲ−９００５２０物質および／または
ＦＲ−９００５２３物質は、例えばストレプトミセス・
バイグロスコピカス・サブスブ・ヤケシマエンシスＮ０
フ２３８　（寄託番号：微工研条寄第９２８号）のよう
なストレプトミセス属に属するＦＲ−９００５２０およ
び／またはＦＲ−９００５２３物質生産菌株を培地で培
養することにより産生できる。

一般的には、ＦＲ−９００５２０物質および／またはＦ
Ｒ−９００５２３物質は、ＦＲ−９００５２０および／
またはＦＲ−９００５２３物質生産菌株を同化しうる炭
素源および窒素源を含む水性栄養培地中、好ましくは例
えば振とう培養、深部培養等の好気性条件下に培養する
ことによって産生できる。

培地中の好ましい炭素源としては、グルコース、シュー
クロース、ラクトース、グリセリン、スターチ、デキス
トリン等のような炭水化物が挙げられる。その他端地中
に含まれていてもよい炭素源トしては、マルトース、Ｄ
−トレハロース、イノシトール、イヌリン、サリシン等
が挙げられる。

好ましい窒素源としてはイースト・エキストラクト、ペ
プトン、グルテンミール、綿実粉、大豆粉、コーン・ス
テイープ・リカー、乾燥イースト、小麦胚芽、羽毛粉、
落花生粉等、ならびに例えば硝酸アンモニウム、硫酸ア
ンモニウム、燐酸アンモニウム等のアンモニウム塩、尿
素、アミノ酸等のような無機または有機窒素化合物が挙
げられる。

炭素源および窒素源は好ましくはそれらの組合わせで使
用されるが、微量の生育因子および相当量の無機栄養素
を含有していれば純度の低い物質も使用でき、必ずしも
純粋な形で使用する必要はない、所望により培地に炭酸
ナトリウムまたは炭酸力ルンウム、燐酸ナトリウムまた
は燐酸カリウム、塩化ナトリウムまたは塩化カリウム、
沃化ナトリウムまたは沃化カリウム、マグネシウム塩、
銅塩、コバルト塩等の無機塩を添加してもよい。

特に培養＠地が著しく発泡する場合には、必要により液
状パラフィン、脂肪油、植物油、鉱油またはシリコンの
ような消泡剤を添加してもよい。

ＦＲ−９００５２０物質およびＦＲ−９００５２３物質
を大量生産する条件としては、深部好気培養が好ましい
、少量生産ムこ（よフラスコまたはびん中で振とう培養
または表面培養が行われる。さらにまた、大型タンク内
で生育を実施する場合には、ＦＲ−９００５２０物質お
よびＦＲ−９００５２３物質の生産工程における生育遅
延を回避するために、微生物の前培養を用いて生産タン
ク中に菌を接種するのが好ましい、すなわら、比較的少
量の培養培地に微生物の胞子または菌糸を接種し、その
接種培地を培養して微生物の前培養接種物をまず生産し
、次いで培養した前培養接種物を無菌的に大型タンクに
移すのが望ましい、この前培養接種物を生産する培地は
、ＦＲ−９００５２０物質およびＦＲ−９００５２３物
質の生産に使用される培地と実質的に同しであってもよ
く、また異なってもよい。

培養混合物の攪拌および通気は種々の方法で行うことが
できる。攪拌はプロペラまたはこれに準する攪拌装置を
用いるか、醗酵器を回転させるかまたは振とうするか、
種々のポンプ装置を用いるか、または培地中に滅菌空気
を通すことによっても行うことがアきる０通気は滅菌空
気を醗酵混合物中を通過させることにより行ってもよい
。

醗酵は通常、約２０’Ｃ〜４０”Ｃの温度範囲、好まし
くは２５〜３５℃で、約５０〜１５０時間行われるが、
醗酵条件および醗酵規模によって適宜変化させればよい
。

このようにして生産されたＦＲ−９００５２０物質およ
びＦＲ−９００５２３物質は、他の既知の生物学的活性
物質の回収に通常使用される慣用の方法で培養培地から
回収することができる。生産されたＦＲ−９００５２０
物質およびＦＲ−９００５２５物質は、培養菌糸中およ
び濾液中に見出され、従ってＦＲ−９００５２０物質お
よびＦＲ−９００５２３物質は、培養プロスの濾過また
は遠心分離によって得られる菌糸および濾液から、減圧
濃縮、凍結乾燥、常用の溶媒による抽出、ｐＨ調整、例
えば陰イオン交換樹脂または陽イオン交換樹脂、非イオ
ン性吸着樹脂等の常用の樹脂による処理、例えば活性炭
、ケイ酸、シリカゲル、セルロース、アルミナ等の常用
の吸着剤による舛理、結晶化、再結晶化等の慣用の方法
によって分離、精製することができる。

特に、ＦＲ−９００５２０物質およびＦＲ−９００５２
３物質は、醗酵によって産生された両生酸物を含む物質
を、酢酸エチル、ｎ−ヘキサン等のような適切な溶媒に
溶解し、次いでその溶液をクロマトグラフィー、例えば
、シリカゲルを使用するカラムクロマトグラフィーに付
し、酢酸エチルおよびｎ　−ヘキサン、またはそれらの
混合物のような適切な溶媒で溶出することにより分離す
ることができる。また、このようにして分離されたＦＲ
−９００５２０物質およびＦＲ−９００５２３物質はそ
れぞれ、例えば再結晶、再クロマトグラフィー、高速液
体クロマトグラフィー等の常法によってさらに精製する
ことができる。

（Ｉ〉形状および色ｌｌ： 無色の板状結晶 （２）元素分析値： Ｃ：　　６４．８１％、　Ｈ：　８．８２％、　Ｎ　：
　１．５５％（３）呈色反応： 陽性：硫酸セリウム反応、硫酸反応、エールリッヒ反応
、ドラーゲンドルフ反応、沃素蒸気反応 陰性：塩化第二鉄反応、ニンヒドリン反応、モーリッシ
ュ反応 （４）溶解性： 可溶：メタノール、エタノール、アセトン、酢酸エチル
、クロロホルム、ジエチルエーテル、ベンゼン ！ｌ溶：ｎ−ヘキサン、石油エーテル 不溶二本 （５）融点： １６３〜１６５℃ （６〉比旋光度： ２３　　。

［α］　　　、−８４，１，。（Ｃ＝　１．０．　ＣＨ
Ｃｌ３）（７）紫外線吸収スペクトル： 末端吸収 （８）赤外線吸収スペクトル： し”Ｃ１３：　３６８０．　３５７５．　３５２０．　
２９４０．　２８７５゜ａｘ ２８２５、１７４５．１７２５．１７００．１６４７゜
１６１０（ｓｈ）、　１４５２．１３８０．１３５０゜
１３３０、１２ｇ５．１１７０．１１３５．１０９０゜
１０３０、１００５．９９０．　９８０（ｓｈ）。

（９）１３Ｃ核磁気共鳴スペクトル： 上記スペクトルのチャートを図７に示す。

（Ｉ０）１Ｈ核磁気共鳴スペクトル： 上記スペクトルのチャートを１５０８に示す。

（Ｉ１）薄層クロマトグラフィー： 〈１２）物質の性質： 中性物質 ＦＲ−９００５２０物質に関して、１３Ｃおよび１Ｈ核
磁気共鳴スペクトルの測定の際、この物質は種々の化学
シフトにそれぞれ１対のシグナルを示すが、薄層クロマ
トグラフィーおよび高速液体クロマトグラフィーを測定
したところ、ＰＲ−９００５２０物質は薄層クロマトグ
ラフィーで単一スポットを高速液体クロマトグラフィー
で単一ピークをそれぞれ示した。

上記物理化学的性質およびＦＲ−９００５０６物質の化
学構造が決定されたことにより、ＦＲ−９００５２０物
質は下記の化学構造を有することが判明した。

１７−エチル−１，１４−ジヒドロキシ−１２−　［２
−（４−ヒドロキシ−３−メトキシシクロヘキシル）−
１−メチルビニル］−２３，２５−ジメトキシ−１３，
１９，２１，２７−テトラメチル−１１゜２８−ジオキ
サ−４−アザトリシクロ［２２，３１，０４°９］才ク
タコス−１８−エン−２，３゜１０、１６−テトラオン 堕−９０（世鑓立１ （Ｉ）形状および色調二 無色の針状結晶 〈２）元素分析値： Ｃ：６４．５７％、Ｉ（：８．８４％、Ｎ：１．８１％
（３）呈色反応： 陽性：硫酸セリウム反応、硫酸反応、エールノンヒ反応
、ドラーゲンドルフ反応、沃素蒸気反応 陰性二酸化第二鉄反応、ニンヒドリン反応（０溶解性： 可溶：メタノール、エタノール、アセトン、酢酸エチル
、クロロホルム、ジエチルエーテル、ヘンゼン （５） 〈６〉 （７） ！ｌｌ溶質ｎ−ヘキサン石油エーテル 不溶三水 融点： １５２〜１５１Ｃ 比旋光度： ［α］”３ニー７３．０’　　（Ｃ＝０．６５．　ＣＨ
Ｃｌ３）紫外線吸収スペクトル： 末端吸収 （８）赤外線吸収スペクトルニ ジ”Ｃ１３：　３６７０．３５８０．３５１０．２９３
０．２８７５゜ＩＩａｘ ２８２５、　１７４５．　１７２２．　１７００．　１
６４７゜１４５０．１３８０．１３５Ｇ、１３３０．１
３０７゜１２ｇ５．１１７０．１１３５．１０９０．１
０５０゜１０３０、　１００Ｇ、　　９９０，９７８，
９６０゜９３０、９１５．８８８．８７０．８５０　ｃ
ｍ−’（９）１３ｃ核磁気共鳴スペクトル： （Ｉ１）薄層クロマトグラフィー： 上記スペクトルのチャートを図９に示す。

（Ｉ０）’Ｈ核磁気共鳴スペクトル： 上記スペクトルのチャートを図１０に示す。

（以下余白） 〈１２）物質の性質： 中性物質 ＦＲ−９００５２３物質に関して、１３Ｃおよび１Ｈ核
磁気共鳴スペクトルの測定の際に、この物質は種々の化
学シフトにそれぞれ１対のシグナルを示すが、薄層クロ
マトグラフィーおよび高速液体クロマトグラフィーの測
定の場合には、　ＦＲ−９００５２３物質はそれぞれ薄
層クロマトグラフィーで単一スポ・ントを、高速液体ク
ロマトグラフィーで単一ピークを示した。

上部物理化学的性質およびＦＲ−９００５０６物質の化
学構造が決定されたことにより、ＦＲ−９００５２３物
質は下記の化学構造を有することが判明した。

１．１４−ジヒドロキシ−１２−［２−（４−ヒドロキ
シ−３−メトキシシクロヘキシル）＝１−メチルビニル
］−２３，２５−ジメトキシ−１３，１７，１９，２１
，２７−ペンタメチル−１１，２８−ジオキサ−４−ア
ザトリシクロ［２２，３、１。

０４°９］オクタコス−１８−エン−２，３，１０゜１
６−テトラオン ［１］企災迭： （Ｉ）製造法ｌ：（ヒドロキシ保護基の導入）化合物（
Ｉｂ）またはその塩は、化合物（Ｉａ）またはその塩に
ヒドロキシ保護基を導入することによって製造できる。

この反応において使われるヒドロキシ保護基の導入剤と
しては慣用のもの、例えばジメチルスルホキシド、エチ
ルメチルスルホキシド、プロピルメチルスルホキシド、
イソプロピルメチルスルホキシド、ブチルメチルスルホ
キシド、インブチルメチルスルホキシド、ヘキシルメチ
ルスルホキシド等の低級アルキルメチルスルホキシドの
ようなジ（低級）アルキルスルホキシド；例えば塩化ト
リメチルシリル、臭化トリメチルシリル、塩化トリメチ
ルシリル、塩化ｔ−ブチルジメチルシリル等のトリ（低
級）アルキルシリルハロゲン化物、例えば塩化メゾルー
ジフェニルシリル、臭化ニブル−ジフェニルシリル、塩
化プロピル−ジトリルシリル、塩化ｔ−ブチル−ジフェ
ニルシリル等の低級アルキル−ジアリールシリルハロゲ
ン化物のような三置換シリル化合物；前記アシル基を導
入することのできるカルボン酸、スルホン酸および、例
えば酸ハロゲン化物、酸無水物、活性アミド、活性エス
テルなどのこれらの反応性誘導体のようなアシル化剤等
を挙げることができる。このような反応性誘導体の適切
な例としては、酸塩化物、酸臭化物、例えばジアルキル
燐酸、フェニル燐酸、ジフェニル燐酸、ジベンジル燐酸
、ハロゲン化燐酸等の置換燐酸、ジアルキル亜燐酸、亜
硫酸、チオ硫酸、硫酸、例えば炭酸メチル、炭酸エチル
、炭酸プロピル等のアルキル炭酸エステル、例えばピバ
リン酸、ペンタン酸、イソペンタン酸、２−エチルブチ
ル酸、トリクロロ酢酸、トリフルオロ酢酸等の脂肪族カ
ルボン酸、例えば安息香＃専の芳香族カルボン酸のよう
な酸との混合酸無水物、対称型酸無水物、イミダゾール
、４−置換イミダゾール、ジメチルピラゾール、トリア
ゾール、テトラゾールのようなイミノ基を含有する複素
環式化合物との活性酸アミド、例えばｐ−二トロ７ｚニ
ルエステル、　　２．４−ジニトロフェニルエステル、
トリクロロフェニルエステル、ペンタクロロフェニルエ
ステル、メシルフェニルエステル、フェニルアゾフェニ
ルエステル、フェニルチオエステル、ｐ−ニトロフェニ
ルチオエステル、ｐ−タレジルチオエステル、カルポキ
シメチルチオエステル、ピリジルエステル、ピペリジル
エステル、８−キノリルチオエステルまたはＮ。

Ｎ−ジメチルヒドロキシルアミン、！−ヒドロキシー２
−（ＩＨ）−ピリドン、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド
、Ｎ−ヒドロキシフタルイミド、１−ヒドロキシベンゾ
トリアゾール、１−ヒドロキシ−６−クロロベンゾトリ
アゾールのようなＮ−ヒドロキシ化合物とのエステル等
の活性エステル等が挙げられる。

この反応において、ジ（低級）アルキルスルホキシドが
ヒドロキシ保護基の導入剤として使用される場合、反応
は、通常無水酢酸のような無水低級アルカン酸の存在下
に行われる。

さらに、三置換シリル化合物がヒドロキシ保護基の導入
剤として使用される場合、反応は、イミダソール等のよ
うな慣用の縮合剤の存在下に行うことが好ましい。

さらには、アシル化剤がヒドロキシ保護基の導入剤とし
て使用される場合、反応は、例えばリチウム、ナトリウ
ム、カリウム等のアルカリ金属、例えばカルシウム等の
アルカリ土金属、例えば水素化ナトリウム等のアルカリ
金属水素化物、例えば水素化力ルンウム等のアルカリ土
金属水素化物、例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウ
ム等のアルカリ金属水酸化物、例えば炭酸ナトリウム、
炭酸カリウム等のアルカリ金属炭酸塩、例えば炭酸水素
ナトリウム、炭酸水素カリウム等のアルカリ金属炭酸水
素塩、例えばナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキ
シド、カリウムｔ−ブトキシド等のアルカリ金属アルコ
キシド、例えば酢酸ナトリウム等のアルカリ金属アルカ
ン酸、例えばトリエチルアミン等のトリアルキルアミン
、例えばピリジン、ルチジン、ビフリン、４−Ｎ、Ｎ−
ジメチルアミノピリジン等のピリジン化合物、キノリン
のような有機または無機塩基の存在下に行うのが好まし
い。

この反応において、アシル化剤が遊離の酸またはその塩
の形で使用する場合、反応は、例えばＮ、Ｎ’−ジシク
ロヘキシルカルボジイミド−シクロへキシル−Ｎ’−（
４−ジエチルアミノシクロヘキシル）カルボジイミド、
Ｎ，Ｎ’　−４；エチルカルボジイミド、Ｎ．Ｎ’　−
ジイソブロビルカルホシイミド、Ｎ−エチル−Ｎ’−（
３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド等のカル
ボジイミド化合物、例えばＮ．Ｎ’　−カルボニルビス
（２−メチルイミダゾール）、ペンタメチレンケテン−
Ｎ−シクロヘキシルイミン、ジフェニルケテン−Ｎ−シ
クロヘキシルイミン等のケテンイミン化合物、例えばエ
トキシアセチレン、β−シクロビニルエチルエーテル等
のすレフインまたはアセチレン系エーテル化合物、例え
ば！−（４−クロロベンゼンスルホニルオキシ）−６−
クロロ−ＩＨ−ベンゾトリアゾール等のＮ−ヒドロキシ
ベンゾトリアゾール誘導体のスルホン酸エステル等の慣
用の縮合剤の存在下に行うことが好ましい。

反応は５通常、水、アセトン、ジクロロメタン、例えば
メタノール、エタノール等のアルコール、テトラヒドロ
フラン、ピリジン、　Ｎ．Ｎ−ジメデルホルムアミド等
またはこれらの混合溶媒のようなこの反応に悪影響を与
えない慣用の溶媒中で行われ、さらに、塩基またはヒド
ロキシ保護基の導入剤が液体の場合は、これらも溶媒と
して使用することができる。

反応温度は特に限定されず、通常冷却下ないし加熱下で
行われる。

この反応において、化合物（Ｉ１）のＲ２で示されるヒ
ドロキシ基が保護されたヒドロキシ基に転換することも
あり、このような場合もこの製造法に包含される。

さらに、この反応において、無水低級アルカン酸の存在
下ジ（低級）アルキルスルホキシドをヒドロキシ保護基
導入剤として使用する際、ある）で示される部分構造を
有する化合物（Ｉａ）ドロキシである）で示される部分
構造を有する目的化合物（Ｉｂ）を得ることがあり、こ
のような場合も、この製造法の範囲に包含される。

（２）製造法２：（ヒドロキシ保護基の導入）化合物＜
Ｉｄ）またはその塩は、化合物（Ｉｃ）またはその塩に
ヒドロキシ保護基を導入することによって製造できる。

この反応は、製造法１と実質的に同様の方法で行うこと
ができ、従って、例えば塩基、縮合剤、溶媒、反応温度
等の反応条件は、製造法１を援用できる。

この反応において、化合物（Ｉｃ）のＲ１におけるヒド
ロキシ基が目的化合物（Ｉｄ）では対応する保護された
ヒドロキシ基へ転換することがあり、このような場合も
、この製造法の範囲に包含される。

（３）製造法３：（二重結合の形成） 化合物＜Ｉｆ）またはその塩は、化合物（Ｉ　ｅ）また
はその塩に塩基を反応させることによって製造できる。

この反応で使用される塩基としては、製造法１で例示し
た塩基をそのまま挙げることができる。

この反応は、また、Ｒ２がヒドロキシである化合物（Ｉ
ｓ）またはその塩に、塩基の存在下アシル化剤と反応さ
せることによっても製造できる。

この反応は、水、アセトン、ジクロロメタン、例えばメ
タノール、エタノール、フロパノール等のアルコール、
テトラヒドロフラン、ピリジン、Ｎ、Ｎ−ジメチルホル
ムアミド等またはその混合溶媒のようなこの反応に悪影
響を与えない慣用の溶媒中で行われ、さらに、塩基が液
体である場合には、これらも溶媒として使用することが
できる。

反応温度は特に限定されず、通常冷却下ないし加熱下で
行われる。

（４〉製造ｍ＜　：　（ヒドロキシエチレン基の酸化）
化合物（Ｉｈ）またはその塩は、化合物（Ｉｇ）または
その塩を酸化することによって製造できる。

この反応で使用される酸化剤としては、製造法１で示し
たようなジ（低級）アルキルスルホキシドを挙げること
ができる。

この反応は、通常無水酢酸のような無水低級アルカン酸
の存在下に、アセトン、ジクロロメタン、酢酸エチル、
テトラヒドロフラン、ピリジン、Ｎ、Ｎ−ジメチルホル
ムアミド等またはその混合溶媒のようなこの反応に悪影
響を与えない慣用の溶媒中で行われ、さらに、無水低級
アルカン酸が液体の場合には、これらも溶媒として使用
することができる。

反応温度は特に限定されず、通常冷却下ないし加熱下で
行われる。

この製造法は、反応の途中で、原料化合物（Ｉｇ）のＲ
１で示されるヒドロキシ基が目的化合物（Ｉｈ）におい
て１−（低級アルキルチオ）（低級）アルコキシ基へ転
換することがあり、このような場合もこの製造法の範囲
内に包含される。

〈５）製造法５：（アリル基の還元） 化合物（Ｉｊ）またはその塩は、化合物（Ｉｉ）または
その塩を還元することによって製造できる。

この製造法における還元は、接触還元等のようなアリル
基をプロビル基に還元できる常法によって行うことがで
きる。

接触還元で使用される触媒としては、例えば白金板、白
金海綿、白金黒、コロイド白金、酸化白金、白金線等の
白金触媒、例えばパラジウム海綿、パラジウム黒、酸化
パラジウム、パラジウム・炭素、コロイドパラジウム、
パラジウム・硫酸バリウム、パラジウム・炭酸バリウム
等ノパ２ジウム触媒、例えば還元ニッケル、酸化ニッケ
ル、ラネーニッケル等のニッケル触媒、例えば還元コバ
ルト、ラネーコバルト等のコバルト触媒、例えば還元鉄
、ラネー鉄等の鉄触媒、例えば還元ｇ４５　ラネー銅、
ウルマン鋼等の銅触媒等のような慣用のものが挙げられ
る。

この還元は、通常、水、メタノール、エタノール、プロ
パノール、ピリジン、酢酸エチル、Ｎ。

Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジクロロエタンまたはその
混合溶媒のようなこの反応に悪影響を与えない慣用の溶
媒中で行われる。

この還元の反応温度は特に限定されず、通常冷却下ない
し加温下の範囲で行われる。

上記に説明した製造法１〜５によって得られるトリシク
ロ化合物（Ｉ）は、例えば抽出、沈澱、分別結晶化、再
結晶化、クロマトグラフィ等の常法にまり単離、精製で
きる。

化合物（Ｉ）および（Ｉａ）〜（Ｉｊ）における塩とし
ては、無毒の、医薬として許容される慣用の塩であり、
例えばナトリウム塩、カリウム塩、等のアルカリ金属塩
、例えばカルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土
金属塩、アンモニウム塩、例えばトリエチルアミン塩、
Ｎ−ベンジル−Ｎ−メチルアミン塩等のアミン塩のよう
な無機または有機塩基との塩が挙げられる。

前記の製造法１〜５の反応またはその反応混合物の後処
理中において、出発化合物および目的化合物のコンホー
マーおよび不斉炭素原子または二重結合による立体異性
体が、他のフンホーマーおよび立体異性体に転換される
ことがあり、このような場合もこの発明の範囲に包含さ
れる。

この発明で使用されるトリシクロ化合物（Ｉ）は、免疫
抑制作用を有し、従って、本発明の免疫抑制剤は心臓、
腎臓、肝臓、骨髄、皮膚等の臓器あるいは組織の移植に
対する拒絶反応、骨髄移植によって起る移植片対宿主反
応、慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、橋本
甲状腺炎、多発性硬化症、重症筋無力症、Ｉ型糖尿病、
ブドウＭ炎等の自己免疫疾患等の治療および予防に有用
である。

本免疫抑制剤の有用性を示すため、以下に、薬理試験デ
ータを示す。

隻慧ユ 試験管内混合リンパ球反応（ＭＬＲ）におけるトリシク
ロ化合物（Ｉ）の抑制効果 各ウェルにＣ５７ＢＬ／６応答細Ｎ！（Ｈ−２ｂ）　５
　Ｘ　１０５個と、マイトマイシンＣ処理（マイトマシ
シンＣ２５ＭＥ／　ｍＱ　テ３７”Ｃテ３０分間Ｍ理Ｌ
　ＲＰＭ１１６４０培地テ３　ＤＯｉ浄する）したＢＡ
ＬＢ／Ｃ刺激細胞（Ｈ−２ｄ）　５　Ｘ　１０５個を０
．２ｍｌの１０％牛脂仔血清加ＲＰＭＩ１６４０培地［
炭酸水素ナトリウム２咄、ペニシリン（５０単位／ｍ１
ｌ）およびストレプトマイシン（５０に／１ｕｌｌ）を
添加］に加えたマイクロタイタープレート中でＭＬＲ試
験を行う、湿度１００％、二酸化炭ｌ＃５％、空気９５
％に保った培養器内で、３７”Ｃで、６８時間、細胞を
培養し、４時間３Ｈ−チミジン（０，５μＣｉ）でパル
スして、ａｍを集める。この発明の目的化合物をエタノ
ールに溶解し、ＲＰＭ１１６４０培地に希釈し、培養物
に添加し最終濃度を０．１ｘ／ｍＱ以下になるようにす
る。

結果を表７〜１０に示す、この発明のトリシクロ化合物
は、マウスＭＬＲを抑制した。

（以内余白） 表７　：　ＦＲ−９００５０６物質のＭＬＲに対する効
果衣９　、　ＦＲ−９００５２３物質のＭＬＲに対する
効果衣１０　：　ＦＲ−９００５２５物質のＭＬＲに対
する効果攻隻１ ラットにおける同種皮膚移植片生存に対するトノシクロ
化合物（Ｉ）の効果 ドナー（フィッシャー）ラットの腹部皮膚移植片を、レ
シピエンド（ＷＫＡ）ラットの外側胸部に移植する。５
８目に包帯を除去する。移植片上皮の９０％以上が壊死
する拒絶反応があるまで、移植片を毎日検査する。

ＦＲ−９００５０６物質をオリーブ油に溶解し、移植日
より毎日１４日間連続筋肉内投与する。

表１１に示すように、オリーブ油を１４日間連続筋肉内
投与したう／トにおいて、皮膚同種移植片は８日以内に
すべて拒絶されるが、ＦＲ−９００５０６物質で毎日処
置したものは、皮膚同種移植片生存が明らかに延長した
。

（以下余白） 表１１　：　ＦＲ−９００５０６物質の同種皮膚移植片
生存に対する効果 ラットにお１する■型コラーゲン誘発関節炎に対するト
リシクロ化合物（Ｉ）の効果 フラーゲンを２ｍｇ／ＩＱの濃度になるよう冷０．０１
Ｍ酢酸に溶解する。溶液を等容量の不完全フロインドア
ジュバント中で乳化する。総量０．５−のこの乳化物を
雌性ルイス系ラットの背中の数ケ所と尾の１．２ケ所に
皮肉注射する。　ＦＲ−９００５０６物質をオリーブ油
に溶解し、経口投与する。同量のＩ型コラーゲンで免疫
した対照ラットには、オリーブ油のみを経口投与する。

関節炎の発現率を観察する。

試験結果を表１２に示す、ＩＩ型フラーゲン免疫化と同
じ日から１４日間オリーブ油で娼理したラット全てに、
関節炎が誘発された。

ＦＲ−９００５０６物質を１４日間毎日投与すると、３
週間の観察期間中、関節炎の誘発を完全に抑制した。

表１２二ラットにおけるコラーゲン誘発間ｌｌ１１炎に
対するＦＲ−９００５０６物質の効果 ＳＪＬ／ＪＭマウスにおける実験的アレルギー性脳をｉ
ｉｔ炎（ＥＡＥ）に対するトリシクロ化合物（Ｉ）の効
果 ＳＪＬ／Ｊ系マウスよりを髄ホモジネートを調整する。

を髄を通気法で取り出し、約等容量の水と混合し、４℃
でホモジネートする０等容量のこの冷ホモジネート（Ｉ
０ｍｇ／ｍＱ　）をマイコバクテリウム・ツベルクロー
シスＨ３７ＲＡ　０．６ｍｇ／１１１１を含有する完全
フロインドアジュバント（ＣＦＡ）で乳化する。　ＳＪ
Ｌ／Ｊ系マウスに、を髄−ＣＦＡエマルジョン０．２＋
ａＲを、Ｏ日日と１３日日の二回注入し、ＥＡＥを誘発
させる。この試験に使用した全マウスについて、ＥＡＥ
の臨床的徴候を毎日評価、判定する。

ＥＡＥの程度は、下記の判定基準によった。グレード１
：尾緊張低下、グレード２：ぎこちない歩行、グレード
３：１本以上の四肢の脱力、グレード４：対麻痺または
片麻痺。

ＦＲ−９００５０６物質をオリーブ油に溶解し、０８目
（初回免疫の日）より１９日間経口投与する６表１３に
示すように、ＦＲ−９００５０６物質は、ＥＡＥの徴候
の出現を明らかに阻止した。

（以下余白） 表１３　：　ＳＪＬ／Ｊ’４．７ウスにおける実験的ア
レルギー性脳を髄炎に対するＦＲ−９００５０６物質の
効果隻狭亙 マウスにおける局所的移植片対宿主反応（ＧｖＨＲ）に
対するトリシクロ化合物（Ｉ）の効果Ｃ５７ＢＬ／６ド
ナーより得た生牌細胞（Ｉ×１０７個）を、ＢＤＦ１系
マウスの右後肢足蹟に皮下注射する。

７日後にマウスを層殺し、右（注射した足）および左（
注射していない足）両方のＨ窩すンパ節（ＰＬＮ）の重
量を測る。　ＧｖＨＲを左右ＰＬＮの重量差で表わす。

ＦＲ−９００５０６物質をオリーブ油に溶解し、愚作日
より５日間経口投与する。

ＦＲ−９００５０６物質の局所的移植片対宿主反応抑制
のＥＤＳｏ値は、１９ａ＋ｇ／ｋｇである。

攻慧１ トリシクロ化合物（Ｉ）の急性毒性 ｄｄｙマウスにおける腹腔的投与によ６ＦＲ−９００５
０６、ＦＲ−９００５２０、ＦＲ−９００５２３、ＦＲ
−９００５２５物質の急性毒性に関する試験を行い、い
ずれの場合にも投与量１００ｍｇ／ｋｇで死亡は観察さ
れなかった。

この発明の免疫抑制剤は、トリシクロ化合物（Ｉ）を有
効成分として含有し、外用、内服または非経口投与に適
した有機または無機の担体もしくは賦形剤と混合して、
例えば固体状、半固体状もしくは液状の医薬製剤の形で
使用することができる。有効成分は、錠剤、ペレット剤
、カプセル剤、坐剤、液剤、エマルジョン、懸濁液およ
びその他の適切な形で使用でき、例えば、通常の無毒で
、医薬として許容される担体と混合してもよい、使用し
得る担体は、水、グルコース、ラクトース、アカシアゴ
ム、ゼラチン、マンニトール、でん粉ペースト、三ケイ
酸マグネシウム、タルク、コーンスターチ、ケラチン、
コロイドシリカ、バレイショでん粉、尿素、および他の
固体状、半固体状または液状の製剤を製造するのに適し
た担体であり、さらに、賦形剤、安定化剤、粘稠化剤、
着色剤、香料を使用してもよい。

目的化合物は、疾患の経過または状態により、所望の効
果を発揮するのに十分な量が医薬製剤中に含有される。

この免疫抑制剤をヒトに用いる場合は、非経口投与ある
いは内服で使用することが好ましい。

トリシクロ化合物（Ｉ）の治療有効量は、治療する患者
個々の年鮪および疾病の程度により変化するが１通常、
有効成分１日約０，０１〜１０００ｍｇ、好ましくは０
．１〜５００ｍｇ、さらに好ましくは０．５〜１００ｍ
ｇが疾患の治療に用いられ、一般に１回平均約０．５＋
ａｇ。

１　ｍｇ、　５　ｍｇ、　ＬｏａＢ、　５０ａａｇ％Ｉ
ＱＯｍｇ、２５０ｒａｇ、　５００ｍ＠が投与される。

以下、この発明の免疫抑制剤に含有されるトリシクロ化
合物（Ｉ）の製造例を示す。

以下に示す平板希釈法を用いてストレプトミセス・ツク
バエンシスＮｏ　９９９３を分１ｕた。

茨城県筑波郡豊里町で採取した約１グラムの土壌を無菌
試験管に入れ、滅菌水を加え、容量５　ｍｌｌとする。

混合物をチューブブザーで１０秒間混合し、１０分間放
置する。上澄液を滅菌水で順次１００倍希釈する。希釈
液（０，１１１１）を塩酸チアミン添加スザベツク寒天
（サッカａ−ス３０ｇ、硝酸ナトリウム３ｇ、リン酸二
カリウム１１硫酸マグネシウム０．５ｇ、塩化カリウム
０．５ｇ、硫酸第１鉄ｏ、　ｏｔ　ｇ、塩酸チアミン０
．１ｇ、寒天２０ｇ、水道水１０００ｄ　；　ｐＨ７，
２）を含有するペトリ皿上に広げる。３０℃で２１日間
インキュベートし、プレート上に生育させたコロニーを
斜面培地［酵母−麦芽ヱキス寒天（ＩＳＰ培地２）］に
移し、３０℃で１０日間培養する０分離したコロニーの
中にストレブトミセス−ツクバエンシス＆９９９３を見
い出した。

敷薯 グリセリン（Ｉ％）、可溶性でん粉（Ｉ％）、グルコー
ス（０，５％）、綿実粉（０，５％）、乾燥酵母（０，
５％）、コーンスターブリカー（０，５％）、炭酸カル
シウム（０，２％）を含有する培地（Ｉ６０＋＋１！　
）　（りＨ６，ｓに！ｊ１整）を、各々５００１１１Ｑ
のエルレンマイヤーフラスコ２０個に入れ、１２０”Ｃ
で３０分間滅菌する。ストレプトミセス　ツクバエンシ
スＮＱ９９９３（寄託番号：微工研条寄第９２７号）の
斜面培養物の１白金耳を各培地に接種し、回転振ｔａ機
上、３０°Ｃで４日間培養する。得られる培養物を、あ
らかしめ１２０℃で２０分間滅菌した２００リツトルの
ジケーファーメンターに入れた可溶性でん粉（４，５％
）、フーンスデープリ力−（Ｉ％）、乾燥酵母（Ｉ％）
、炭酸カルシウム（０，１％〉、アデカノール（消泡剤
、商品名、旭電化製）（０，１％）を含有する培地（Ｉ
５０リツトル）に接種し、３０℃で、通気（Ｉ５０）／
トル／分）、攪拌（２５０ｒｐａ＋　）下に４日間培養
する。

皇（」ｂＵと抜盈 このようにして得られる培養プロスをケイソウ上（５叱
）を用いて濾過する。＊糸体の塊をメタノール（５０リ
ツトル）で抽出し、抽出液５０リツトルを得る。菌糸体
より得られるメタノール抽出液と濾液とを合わせ、非イ
オン性吸着樹脂「ダイアイオンＨＰ−２０」（商品名、
三菱化成社製）（Ｉ０リツトル）のカラムに通す、水（
３０リツトル）および水性メタノール（３０リツトル）
で洗浄した後、メタノールで溶出する。溶出液を減圧下
に蒸発させ、残量を２リツトルとする。これを酢酸エチ
ル（２リツトル５で抽出する。酢酸エチル抽出液を減圧
濃縮し、油性残留物を得る。油性残留物を二倍重量の酸
性シリカゲル（特殊シリカゲル、グレード：１２、富士
デビソン製）と混合し、この混合物を酢酸エチル中でス
ラリー化する。溶媒を留去後、得られる乾燥粉末を、ｎ
−へキサンで上記と同じ酸性シリカゲル（８００１１Ｑ
　）を充填したカラムを用いるクロマトグラフィに付す
、カラムをｎ−ヘキサン（３’）　ｙ　トル）、ｎ−ヘ
キサンと酢酸エチルの混合物（９：１ｖ／ｖ、３リット
ル；４：１ｖ／ν、３リツトル）および酢酸エチル（３
すｙトル）で展開する。目的化合物を含む画分を集め、
減圧濃縮して、油性残留物を得る。油性残留物をｎ−へ
キサンと酢酸エチルとの混合物（Ｉ：１ｖ／ｖ、３ＱＩ
Ｑ）に溶解し、同じ溶媒；ｔ’［”／ＩＪ力ゲル（２３
０〜４００メツシユ、メルク社製）（ＳＯＯｍｍ）を充
填したカラムを用いるクロマトグラフィに付す。

ｎ−へキサンと酢酸エチルとの混合物（Ｉ：１ｖ／ｖ、
２リットル；　１　：　２Ｖ／Ｖ、　１．５リツトル）
で溶出する。最初の目的化合物を含む画分を集め、減圧
濃縮し、黄色の油状物を得る。この油性残留物を二倍重
量の酸性シリカゲルと混合し、この混合物を酢酸エチル
中でスラリー化する。溶媒を留去後、得られる乾燥粉末
をｎ−ヘキサンで酸性シＪ力ゲルを充填したカラムにか
け、ｎ−ヘキサンで展開する。目的化合物を含む画分を
集め、減圧濃縮し、粗ＦＲ−９００５０６物質（Ｉ１０
５４ｓｉ　）を白色の粉末として得る。

この粗生成物１００ｏ＋ｇを高速液体クロマトグラフィ
に付す、リクロソルプ（Ｌｉｃｈｒｏｓｏｒｂ　）　Ｓ
Ｉ　　６Ｇ（商品名、メルク社製）を担体とするカラム
（８φＸ　５００ｒＩＢ）を用いて溶出する。このクロ
マトグラフィは、Ｕｖ検出器で波長２３０ｎ鵬にてモニ
ターし、移動相は塩化メチレン−ジオキサンａ液（８５
：　Ｌ５ｖ／ｖ）を流速５Ｉ１１１！／分で用い、活性
画分を集め、蒸発濃縮する。この高速液体クロマトグラ
フィを繰り返して、精製ＦＲ−９００５０６物質１４ｍ
ｇを白色の粉末として得る。

さらに、酢酸エチル（Ｉ，５リツトル）で溶出を続けて
行い、第二の目的化合物を含む両分を集め、減圧濃縮し
て、粗ＦＲ−９００５２５物質（３０ｍｇ）を黄色の油
状物として得る。

艷菫里１ 紋薯 グリセリン（Ｉ％）、フーンスターチ（Ｉ％）、グルコ
ース（０，５％）、綿実粉（Ｉ％）、コーンスチーブリ
力−（０，５％）、乾燥酵母（０，５％）、炭酸カルシ
ウム（０，２％）を含有するｐＨ６，５の前培養培地（
Ｉ００１１１）を５００１１ＩＱのエルレンマイヤーフ
ラスコに入れ、１２０℃で３０分間滅菌する。

ストレプトミセス・ツクバエンシス鬼９９９３の斜面培
養物の１白金耳を培地に接種し、３０℃で４日間培養す
る。得られる培養物を、あらかじめ１２０°Ｃで３０分
間滅菌した３０リツトルのジ勺−フアーメンター中の前
培養培地（２０リツトル）に移す、培養物を３０℃で２
日間インキュベートして、前培養物１６リツトルを、あ
らかじめ１２０℃で３０分間滅菌した２トンタンクに入
れた可溶性でん粉（４，５％）、コーンステープリカー
（Ｉ％）、乾燥酵母（Ｉ％）、炭酸カルシウム（０，１
％）、アデカノール（消泡剤、商品名、旭電化製）（０
，１％）を含有するｐＨ６，８の醗酵培地（Ｉ６００リ
ツトル）に接種し、３０℃で４日間培養する。

４夏１主旦亙皇 このようにして得られる培養プロスを、ケイソウ土（２
５ｋｇ　）を用いて濾過する。菌糸体の塊をアセトン（
５００リツトル）で抽出し、抽出液５００リツトルを得
る。このアセトン抽出液と濾液（Ｉ３５０ノツトル）と
を合わせ、非イオン性吸着樹脂ｒダイアイオン）ＩＰ−
２０Ｊ　（商品名、三菱化成社製）（Ｉ００リツトル）
のカラムに通す、水（３００リツトル）および５０％水
性アセトン（３００リツトル）で洗浄した後、７５％水
性アセトンで溶出する。溶出液を減圧下に蒸発させ、残
量を３００リツトルとする。

これヲ酢酸エチル（２０リツトル）で３回抽出する。酢
酸エチル抽出液を減圧濃縮し、油性残留物を得る。この
油性残留物を二倍重量の酸性シリカゲル（特殊シリカゲ
ル、グレード１２、富士デビソン製）と混合し、この混
合物を酢酸エチル中でスラリー化する。溶媒を蒸発させ
、得られる乾燥粉末を、ｎ−ヘキサンで上記と同じ酸性
シリカゲル（８リツトル）を充填したカラムクロマトグ
ラフィに１寸す、カラムをｎ−ヘキサン（３０リツトル
）、ｎ−ヘキサン−酢酸エチル混液（４：１ｖ／ｖ、　
３０リツトル）、酢酸エチル（３０リツトル）で展開す
る。目的化合物を含む画分を集め、減圧濃縮して油性残
留物を得る。この油性残留物を二倍重量の酸性シリカゲ
ルと混合し、混合物を酢酸エチル中でスラリー化する。

溶媒の留去後、得られる粉末を、ｎ−ヘキサンで充填し
た酸性シリカゲル（３，５リツトル）のカラムを用いる
クロマトグラフィに再度付す、カラムをｎ−ヘキサン（
Ｉ０リツトル）、ｎ−ヘキサン−酢酸エチル混液（４：
１ｖ／ｖ、１０りントル）、酢酸エチル（Ｉ０リツトル
）で展開する。目的化合物を含む画分を集め、減圧濃縮
して、黄色の油状物を得る。この油性残留物をｎ−ヘキ
サン−酢酸エチル混液（Ｉ：１ｖ／ｖ、３００＋１１１
りに溶解し、同じ溶媒系で充填したシノ力ゲル（２３０
〜４００メツシユ、メルク社製）（２リツトル）のカラ
ムを用いるクロマトグラフィに付す。ｎ−ヘキサン−酢
酸ニブル混液（Ｉ：１ｖ／ｖ、１０リットル；　１　：
　２Ｖ／Ｖ、　６リツトル）および酢酸エチル（６リツ
トル）で溶出する。

最初の目的化合物を含む両分を集め、減圧濃縮して、Ｆ
Ｒ−９００５０６物質を白色粉末（３４ｇ）として得る
。この白色粉末をアセトニトリルに溶解し、減圧濃縮す
る。濃縮液を５℃で一夜放置してプリズム状結晶（２２
，７ｇ）を得る。同じ溶媒で再結晶して精製ＦＲ−９０
０５０６物質（Ｉ３，ｆｉｇ）を無色プリズム状結晶と
して得る。

さらに、第二の目的化合物を含む画分を集め、減圧濃縮
して、粗ＦＲ−９００５２５物質（３１４ｍｇ）を黄色
の粉末として得る。

製Ｘ＋１ 蚊園 グリセリン（Ｉ％）、フーンスターデ（Ｉ％）、グルツ
ース（０，５％）、綿実粉（Ｉ％）、乾燥酵母（０，５
％）、コーンステープリカー（０，５％）、炭酸カルシ
ウム（０，２％）を含有する培地（Ｉ６０ｆｆ１Ｍ）（
ｐＨ６，５に調整）を各々５００−のエルレンマイヤー
フラスコｌＯ個に入れ、１２０℃で３０分間滅菌する。

ストレプトミセス・ツクバエンシスＮ１１９９９３の斜
面Ｊ＠養物の１白金耳を各培地に接種し、回転振盪機上
、３０’Ｃで４日間培養する。得られる培養物を、あら
かじめ１２０℃で２０分間滅菌した２００リツトルのジ
ル−ファーメンタ−に入れた可溶性でん粉（５％）、ピ
ーナツ粉（０，５％〉、乾燥酵母（０，５％）、グルテ
ンミール（０，５％）、炭酸カルシウム（０，１％〉、
アデカノール（消泡剤、商品名、旭電化１）（０，ｔ％
）を含有する培地（Ｉ５０リツトル）に接種し、３０℃
で、通気（Ｉ５０リットル／分）、攪拌（２５０ｒｐｍ
　）下に４日間培養する。

至（」らすε抜圭 このようにして得られる培養プロスをケイソウ±（５ｋ
ｇ）を用いて濾過する。菌糸体の塊をアセトン（５０リ
ツトル）で抽出し、抽出液５０リツトルを得る。菌糸体
より得られるアセトン抽出液と濾液（Ｉ３５リツトル）
とを合わせ、ＩＦビイオン吸着樹脂「ダイアイオンＨＰ
−２０，（商品名、三菱化成社製）（Ｉ０リツトル）に
カラムを通す、水（３０リツトル）および５０％水性ア
セトン（３０リツトル）で洗浄し、７５％水性アセトン
で溶出する。溶出液（３０リツトル）を減圧下に蒸発濃
縮し、残量を２リノトルし、酢酸エチル（２リツトル）
で３回抽出する。酢酸エチル抽出液を減圧濃縮し、油性
残留物を得る。この油性残留物を二倍重量の酸性シリカ
ゲル（特殊シリ°カゲル、グレード１２、富士デビンン
製）と混合し、混合物を酢酸エチル中でスラリー化する
。溶媒を留去し、得られる乾燥粉末を、ｎ−へ午サンで
上記と同じ酸性シリカゲル（８ＱＯｄ　）を充填したカ
ラムを用いるクロマトグラフィに１寸す、カラムをｎ−
ヘキサン（３リツト、ル）、ｎ−ヘキサン−酢酸エチル
混液（４：ｌＶ／Ｖ、３リツトル）、酢酸エチル（３リ
ツトル）で展開する。目的化合物を含む画分を集め、減
圧濃縮して、油性残留物を得る。この油性残留物をｎ−
ヘキサン−酢酸ニブル混液（Ｉ：　ｌｖ／ｖ、　３０ｍ
１　）に溶解し、同じ溶媒系で充填したシリカゲル（２
３０〜４００メツシユ、メルク社製）　（ｓｏｏｍｕ　
）のカラムを用いるクロマトグラフィに付す、ｎ−ヘキ
サン−酢酸ニブル混液（Ｉ：　ｌｖ／ｖ、　２リットル
；　１　：　２ｖ／ｖ、　１．５リツトル）および酢酸
エチル（Ｉ，５リツトル）で溶出する。

最初の目的化合物を含む両分を集め、減圧ａ縮して、粗
ＦＲ−９００５０６物質（３ｇ）を黄色の粉末として得
る。

さらに、第二の目的化合物を含む画分を集め、減圧濃縮
して、油性残留物を得る。この油性残留物をシリカゲル
クロマトグラフィに再度付し、黄色の油状物を得る。こ
の油性残留物を二倍重量の酸性シリカゲルと混合し、混
合物を酢酸エチル中でスラリー化する。溶媒を留去して
、得られる乾燥粉末を、ｎ−へキサンで酸性シリカゲル
（Ｉ００ＩＩＩＱ）を充填したカラムを用いるクロマト
グラフィに付し、ｎ−ヘキサンで展開する。目的化合物
を含む両分を集め、減圧濃縮して、ＦＲ−９００５２５
物質を淡黄色の粉末（３８０ｍｇ）として得る。この粉
末をｎ−ヘキサン−酢酸ニブル混液（Ｉ：　Ｑｖ／ｖ、
　５ｍｆ）に溶解し、同じ溶媒系で充填し洗浄した酸性
シリカゲル（特殊シリカゲル、グレード９２２、富士デ
ビソン製）　（ｒｏｏｍａ　）のカラムを用いるクロマ
トグラフィに付す、酢酸エチルで溶出する。活性画分を
集め、減圧下に蒸発させて、精製した第一９００５２５
物質（２３０＋ｎｇ　）を白色粉末として得る。

以下に示す平板希釈法によって、ストレプトミセス・バ
イグロスコピカス・サプスブ・ヤクシマエンシスＮＱ　
７２３８を分離する。

鹿児島県屋久島で採取した土壌約ｌグラムを無菌試験管
に入れ、滅菌水を加えて容量を５−とする、混合物をデ
ユープブザーで１０秒間混合し、１０分間放置する。上
澄液を滅菌水で順次１００倍希釈する。希釈液（Ｑ、１
ｌｌｌｆｆｉ）を塩酸チアミン添加スザペック寒天（サ
ッカロース３０ｇ、硝酸ナトリウム３ｇ、リン酸二カリ
ウム１ｇ、硫酸マグネシウム０．５ｇ、塩化カリウム０
．５ｇ、硫酸第一鉄０．０１　ｇ、塩酸チアミンｏ、　
ｔ　ｇ、寒天２０ｇ１水道水１０００絨：ｐ）１７．２
　）を含有するペトリ皿上に広げる。　３０”Ｃで２１
日間インキュベートし、プレート上に生育させたコロニ
ーを斜面培地［酵母−麦芽エキス寒天（ｌ５Ｐ−培地２
）］に移し、３０℃で１０日間培養する０分離したコロ
ニーの中に、ストレプトミセス・バイグロスコピカス・
サブスプ・ヤクシマエンシス翫７２３８を見い出した。

緻薯 グリセリン（Ｉ％）、可溶性でん粉（Ｉ％）、グルコー
ス（０，５％）、綿実粉（０，５％）、乾燥酵母（０，
５％）、コーンスデーブリカー（０，５％）、炭酸カル
シウム（０，２％）を含有する培地（Ｉ６０１１１）（
ｐＨ６，５に１ｉｌｌ！りを、各々ｓｏｏｍｕのエルレ
ンマイヤーフラスコ２０個に入れ、１２０℃で３０分間
滅菌する。ストレプトミセス・バイグロスコピカス・サ
プスブ・ヤクシマエンシスＮｃｔ７２３８（寄託番号：
微工研条寄第９２８号ンの斜面培養物の１白金耳を各培
地に接種し、回転振ａ機上、３０”Ｃで４日間培養する
。得られる培養物を、グルコース（４，５％）、フーン
スデープリ力−（Ｉ％）、乾燥酵母（Ｉ％）、グルテン
ミール（Ｉ％）、麦芽（０，５％〉、炭酸カルシウム（
０，１％）、アデカノール（消泡剤、商品名、旭電化製
）（０，１％）を含有する、あらかしめ１２０℃で２０
分間滅菌した２００リツトルのジャーファーメンタ−中
の培地（Ｉ５０リツトル）に接種し、３０°Ｃ５通気（
Ｉ５０リットル／分）、攪拌（２５０ｒｐｍ　）下に４
日間培養する。

４匙旦圭ヱ亙皇 このようにして得られる培養ブロスを、ケイソウ±（５
ｋｇ）を用いて濾過する。菌糸体の塊をアセトン（５０
リツトル）で抽出し、抽出液５０リツトルを得る。菌糸
体より得られるアセトン抽出液と濾液（Ｉ３５リツトル
）とを合わせ、非イオン性吸着槙脂１ダイアイオンＨＰ
−２０」（商品名、三菱化成社製）（Ｉ０リツトル）の
カラムに通す、水（３０リンドル）および水性アセトン
（３０リツトル）で洗浄した後、アセトンで溶出する。

ｉｖ出液を減圧下に蒸発濃縮し残量を２リツトルとし、
これを酢酸エチル（４リツトル）で抽出する。酢酸エチ
ル抽出液を減圧濃縮し、油性残留物を得る。この油性残
留物を二倍重量の酸性シリカゲル（特殊シリカゲルグレ
ード１２、富士デビンン架）と混合し、この混合物を酢
酸エチル中でスラリー化する。溶媒を留去した後、得ら
れる乾燥粉末をｎ−ヘキサンで充填した同じ酸性シリカ
ゲル（８００１１ｍ　”）のカラムを用いるクロマトグ
ラフィに付す、カラムをｎ−ヘキサン（３リツトル）、
ｎ−ヘキサン−酢酸エチル混液（４：１ｖ／ｖ、３リツ
トル）、酢酸エチル（３リツトル）で展開する。　ＦＲ
−９００５２０およびＦＲ−９００５２３物質を含む両
分を集め、減圧濃縮して油性残留物を得る。この油性残
留物をｎ−ヘキサン−酢酸ニブル混液（Ｉ：１ｖ／ｖ、
５０１１！　）に溶解し、同じ溶媒系で充填したシリカ
ゲル（７０〜２３０メｙンユ、メルク社製）　（Ｉ００
０１１１１）のカラムを用いるクロマトグラフィに付す
、ｎ−ヘキサン−酢酸エチル混液（Ｉ：１ｖ／ｖ、３リ
ットル；１：２ｖ／ｖ、３リツトル）および酢酸エチル
（３ノツトル）で溶出する。目的化合物を含む両分を集
め、減圧濃縮して、黄色の粉末（４，５ｇ）を得る。こ
の粉末をメタノール（２０ｆｆｉｌｌ　）に溶解し、水
（ｌ０ＩＱ　）と混合する。１１合物をメタノール−水
混液（４：　ｌｖ／ｖ）で充填し、これで展開する逆相
’／　ＩＪ　力ゲルｌ″ＹＭＣＪ　（６０〜２００メツ
’／　ｘ　）　（５００−）（商品名、山村化学研究所
部）のカラムを用いるクロマトグラフィに付す。

ＦＲ−９００５２０物質を含む画分を集め、減圧濃縮し
て、ＦＲ−９００５２０物質の粗生成物（Ｉ，８ｇ）を
淡黄色の粉末として得る。この粉末を少量のジエチルエ
ーテルに溶解する。−夜装置した後、沈澱する結晶を濾
取し、ジエチルエーテルで洗浄し、減圧乾燥する。ジエ
チルエーテルで再結晶して、精製ＦＲ−９００５２０物
質６００ｍｇを無色の板状晶として得る。

同じ溶媒系を用いる逆相シリカゲルクロマトグラフィを
続けて行い、ＦＲ−９００５２３物質を含む次の画分を
集め、減圧濃縮して、ＦＲ−９００５２３物質の粗生成
物（０，５１ｇ）を淡黄色の粉末として得る。この粗生
成物をアセトニトリル（３−）に溶解し、アセトニトリ
ル−テトラヒドロフラン−５０ＩＩＩＭリン＃緩衝液混
液（ｐＨ２，０）（３：　２　：　５　ｖ／ｖ）で充填
し、これで展開する逆相シリカゲル’　ＹＭＣＪ　（７
０１１１）を用いるクロマトグラフィに付す、目的化合
物を含む両分を酢酸エチルで抽出する。この抽出液を減
圧濃縮して、黄白色の粉末（Ｉ９０ｍｇ）を得る。

この黄白色の粉末を逆相シリカゲル’ＹＭＣＪ上で再び
クロマトグラフィに付し、白色粉末（８０ａｇ）を得る
。この白色粉末を少量のジエチルエーテルに溶解し、室
温で一夜放置して結晶５６ａ＋ｇを得る。

ジエチルエーテルで再結晶して、ＦＲ−９００５２３物
質の無色の針状晶３４ａ＋ｇを得る。

艷盟遭１ ＦＲ−９００５０６物質（Ｉ０，４＋ｍｇ）のジクロロ
メタン（０，２ＩＱ　）中溶液にピリジン（０，１１１
１）および無水酢酸（０，ｏｓＩＩＪｌ）を゛室温で加
え、混合物を５時間攪拌する。溶媒を減圧下に除去する
。残留物をシリカゲル薄層クロマトグラフィ（展開溶媒
ニジエチルエーテル−ジクロロメタン、１　：　２ｖ／
ｖ）に付して、１２−　［２−（４−アセトキシ−３−
メトキシシクロヘキシル）−１−メチルビニル］−１７
−アリルー１．１４−’、；ヒドロキシー２３．２５−
ジメトキシ−１３，１９，２１，２７−テトラメチル−
１１，２Ｊ１−ジオキサ−４−アザトリシクロ［２２，
３，１，０”９コ才クタコス−１８−エン−２，３，１
０，１６−テトラオン（６，Ｏａ＋ｇ）を得る。

ＩＲｖ（ＣＨＣＩ３）　’　３５２０，１７２８．１７
０５（ｓｂ）、　１６４０゜１０９５　ｃｍ”” 艷遺男Ｉ ＦＲ−９００５０６物質（５２，５ｍｇｇ　）のジクロ
ロメタン（Ｉ−）中溶液に、ピリジン（０，５ａｌｌ　
）および無水酢酸（０，３ｄ　）を室温で加え、混合物
を室温で９時間撹拌する。ＷＩ媒を減圧下に除去する。

残渣をシリカゲル薄層クロマトグラフィ（展開溶媒；ジ
エチルエーテル−ヘキサン、３　：　ＩＶ／Ｖ）に付し
て、１４−アセトキシ−１２−［２−（４−アセトキシ
−３−メトキシシクロヘキシル）−１−メチルビニル］
−１７−アリルー１−ヒトａキシ−２３゜２５−ジフト
キン−１３，１９，２１，２フ−テトラメチル−１１，
２８−ジオキサ−４−アザトリシクロ［２２，３１，０
４°９コオクタフス−１８−エン−２，３，１０，１６
−テトラオン（４８，０ｍｇ　）および１２−　［２−
（４−アセトキン−３−メトキシシクロヘキシル）−１
−メチルビニルコー１７−アリルー１−ヒドロキシ−２
３，２５−ジメトキシ−１３，１９，２１，２７−テト
ラメチル−１１，２８−ジオキサ−４−アザトリシクロ
［２２゜３．１．０’°９］オクタコサ−１４，１８−
ジエン−２゜３．１０．１６−テトラオン（５，４ｍｇ
）を得る。

前記化合物 ＩＲｖ（ＣＨＣＩ　）　：　１７３０．１７２０（ｓｈ
）、　１６４０　ａｍ−’後記化合物 ＩＲｖ　（ＣＨＣＩ　　）　　：　　１７３０．　１６
９０．　１６４０．　１６２７　ａｍ−’（以下余白） 製」１１ヱ ＦＲ−９００５０６物質（９，７ｗｒｇ、　）のジクロ
ロメタン（０，２ｍｆｉ）およびピリジン（０，１１Ｑ
　）中溶液に、塩化ベンゾイル（５０ｓｉｌ　）を室温
で加え、混合物を室温で２時間攪拌する。溶媒を減圧下
に除去し、粗油状物を得る。この油状物をシリカゲル薄
層クロマトグラフィ（展開溶媒：ジエデルエーテルーヘ
キサン、２：ＩＶ／Ｖ）で精製して、１７−アリル−１
２−［２−（４−ベンゾイルオキシ−３−メトキンシク
ロヘキシル）−１−メチルビニル］−１，１４−ジヒド
ロキシ−２３，２５−ジメトキシ−１３゜１９．２１．
２７−テトラメチル−１１，２８−ジオキサ−４＝アザ
トリシクロ［２２，３，１，０’°９］才クタコス−１
８−エン−２、３，１０，１６−テトラオン（８，Ｏｎ
＋ｇ）を得る。

ＩＲｖ（ＣＨＣＩ３）　’　３５００，１７３５（ｓｈ
）、　１７１０，１６４０゜１６００　ｃｍ−’ 虹盈値Ｉ ＦＲ−９００５０６物＊　（３０，５ｍｇｇ　）のピリ
ジン（Ｉ−）中溶液に、塩化ｐ−ニトロベンゾイル（約
１００ｍｇ）を加え、混合物を室温で２時間攪拌する１
反応混合物を酢酸エチルで希釈し、飽和炭酸水素ナトリ
ウム水溶液、水、ＩＮ塩酸、水、飽和炭酸水素ナトリウ
ム水溶液、水、塩化ナトリウム水溶液で順次洗浄し、乾
燥する。得られる溶液を減圧濃縮し、残渣をシリカゲル
カラムクロマトグラフィで精製して、１７−アリル−１
，１４−ジヒドロキシ−２３，２５−ジメトキシ−１３
，１９，２１，２７−テトラメチルーｌｚ−［ｚ−［−
（ｐ−ニトロベンゾイルオキシ）−３−メトキシシクロ
へキシル〕−１−メチルビニル］　−１１，２８−ジオ
キサ−４−アザトリシクロ［２２，３、１，０４，９］
オクタコス−１８−エン−　２　、３．１Ｇ、Ｌ６−テ
トラオン（３７，７ｍｇ　）を得る。

ＩＲｖ（ＣＨＣＩ３）　：　１７２０．１６４０．１６
１０゜１５３０−１５２０　ｃｍ” 艷盗薯１ 製造例８の方法に準じて、ＦＲ−９００５０６物質（３
０，６ｍｇ　）と塩化３．５−ジニトロベンゾイル（３
３ｍｇ）とをピリジン（０，５１１Ｉ）中で反応させる
ことによって、１７−アリル−１，１４−ジヒドロキシ
−２３．２５−ジメトキシ−１３，１９，２１，２７−
テトラメチル−１２−［２−［４−（３，５−ジニトロ
ベンゾイルオキシ）−３−メトキシシクロへキシル］−
１−メチルビニル］−ＬＬ、２ｇ−ジオキサ−４−アザ
トリシクロ［２２，３、１，０４，９］オクタコス−１
８−エン−２．３，１０．ＩＳ−テトラオン（３６，０
ｍｇ　）を得る。

ＩＲν（ＣｕＣｌ３）　：　１７３０．１６４０．１６
１０゜１５３０−１５２０　ｃｌ” 製１１１四 製造例８の方法に準じて、ピリジン（０，５１１１１１
）中でＦＲ−９００５０６物質（４８ｍｇ）を塩化２−
１−メンチルオキシアセチル（０，０８１１１１）と反
応させることによって、　１７−アリル−１，１４−ジ
ヒドロキシ−２３、２５−ジメトキシ−１２−［２−［
４−（２１−メンチルオキシアセトキシ）−３−メトキ
シンクロへキシル］−１−メチルビニル］−１３，１９
゜２１．２７−テトラメチル−１１，２８−ジオキサ−
４−アザトリシクロ［２２，３、１，０４，９］オクタ
フスー１８−エン−２．３，１０．１６−テトラオン（
５０，９ｍｇ　）を得る。

ＩＲしくニート）　　：　　３５２０．　１７６０．　
１７４０（ｓｈ）。

１７２０（ｓｈ）、　１６５２　ｃｍ−’製１０艷■ （−）−２−トリフルオロメチル−２−メトキシ−２−
フェニル酢ｍ　（５１ｍｇ　）の酢酸エチル（Ｉ０ｍ　
）中溶液に、室温で、Ｎ、Ｎ’　−ジシクロへキシルカ
ルボジイミド（４７ｍｇ）を加える。室温で１．５時間
攪拌した後、ＦＲ−９００５０６物質（２５，０ｍｇ　
）および４−（Ｎ、Ｎ−ジメデルアミノ）ピリジン（ｌ
１ｍｇ）を加え、室温で３．５時間攪拌する。得られる
溶液を濃縮して残渣を得、これをジエチルエーテルに取
り、次いで、塩酸、炭酸水素ナトリウム水溶液、塩化ナ
トリウム水溶液で順次洗浄する。有機層を硫酸ナトリウ
ムで乾燥し、濃縮して残渣を得、これをシリカゲルクロ
マトグラフィ（展開溶媒ニジクロロメタン−ジエチルエ
ーテル、１０：　ｌｖ／ｖ）に付して、Ｉ７−アリル−
１２−［２−［４−［（−）−２−トリフルオロメチル
−２−メトキシ−２−フェニルアセトキノコ−３−メト
キシシクロへキシル］−１−メチルビニル］−１，１４
−ジヒドロキジー２３．２５−ジメトキシ−１３，１９
，２１，２７−テトラメテルー１１．２８−ジオキサ−
４−アザトリシクロ［２２，３、１，０４，９］オクタ
コス−１８−エン−２．３．１０．１６−テトラオン（
６，５１１１ｇ）および１７−アリル−１４−［（−）
−２−トリフルオロメチル−２−メトキシ−２−フェニ
ルアセトキシ］−１２−［２−［４−［（−）−２−ト
リフルオロメゾルー２−メトキシ−２−フェニルアセト
キノコ−３−メトキシシクロへキシル］−１−メチルビ
ニル］−１−ヒドロキシ−２３，２５−ジメトキシ−１
３，１９，２１，２７−テトラメチル−１１゜２８−ジ
オキサ−４−アザトリシクロ［２２，３、ｉｏ　４９３
オクタコス−１８−エン−２，３，１０，１６−テトラ
オン（２０，２ａ＋ｇ　）を得る。

紅星孟１セ ＩＲν（ニー））　　：　　３５１０．　１７５０．　
１７３０（ｓｈ）、　　１７１０゜１６５２、１５００
　ａｌｌ 東星立遣勿 ＩＲν　（ニー））　　：　　１７５０．　　１７２Ｇ
、　　　１６５２．　　１５００　　ｃｍ−’製１已生
り ＦＲ−９００５０６物質（２４８ｍｇ　）のピリジン（
７ＩＱ）中＃／＆を攪拌しながら、これに無水コハク酸
（Ｉ４５ｍｇ）および４−　ＣＮ、Ｎ−ジメデルアミノ
）ピリジン（７＋＋＋ｇ）を加え、得られる混合物を室
温で１８時間攪拌する０反応混合物を減圧濃縮し、残渣
を酢酸エチルを用いるシリカゲル（２０ｇ）のクロマト
グラフィに付し、１７−アリル−１２−［２−［４−（
３−カルボキシプロピ才二ル才キシ）−３−メトキシシ
クロヘキシル］−１−メチルビニル］−１，１４−ジヒ
ドロキシ−２３，２５−ジメトキシ−１３゜１９．２１
．２７−テトラメチル−１１，２８−ジオキサ−４−ア
ザトリシクロ［２２，３、１，０４，９］オクタフスー
１８−エン−２．３．１０．１６−テトラオン（９０ｍ
ｇ　）を得る。

ＩＲν（ＣｕＣｌ２）　：　３５００．３１００−２３
００．１７２０゜１７０５（ｓｈ）、　　　１６３５　
　ｃ＋ａ−’製１ｕ４す ＦＲ−９００５０６物質（Ｉ００，７ｍｇ　）のピリジ
ン（３ＩＱ）中溶液４：、塩化ｐ−ヨードベンゼンスル
ホニル（５００ｍｇ）を加え、混合物を室温で３６時間
攪拌する。ｆｌ液を酢酸エチルで希釈し、飽和炭酸水素
ナトリウム水溶液、水、塩化ナトリウム水溶液で洗浄す
る。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧濃
縮する。残渣をシリカゲルクロマトグラフィ（展開溶媒
ニジエチルエーテル−ヘキサン、３　：　ｌｖ／ｖ）に
付し、１７−アリル−１，１４−ジヒドロキン−ｒｚ−
［２−［ａ−（ｐ−ヨードベンゼンスルホニルオキシ）
−３−メトキシシクロへキシル］−１−メチルビニル］
−２３，２５−ジメトキ／１３，１９，２１．２７−テ
トラメテルー１１．２８−ジオキサ−４−アザ１リンク
ロ［２２，３、１，０４，９］オクタコス−１８−エン
−２　、３．１０．１６−テトラオン（６１ｍｇ）およ
び１７−アリル−ｌ−ヒドロキシ−１２−［２−［４−
（ｐ−ヨードベンゼンスルホニルオキシ）−３−メトキ
シシクロヘキシル］−１−メチルビニル］−２３，２５
−ジメトキシ−１３，１９，２１゜２７−テトラメチル
−１１，２８−ジオキサ−４−アザトリシクロ［２２，
ｓ　、　１．　ｏ’°９］オクタフサ−１４゜１８−ジ
エン−２、３，１０，１６−テトラオン（Ｉ２ａ＋ｇ）
を得る。

紅星濫塗迦 ＩＲν（ＣＨＣｌ３）　：　３４７０．１７３０．１７
１７．１６９２゜１６３５、　１５６８　　ａｍ−’ ７．６０　（２Ｈ劃）、　７．９０　（２８，＠）製１
ｕ生Ｕ 製造例１３の方法に準じて、ピリジン（０，６１１１）
中でＦＲ−９００５０６物質（２７ｍｍｇ）を塩化ｄ−
カンファースルホニル（９７ｍｇ）と反応させることに
よって、１７−アリル−１２−［２−（４−ｄ−カンフ
ァースルホニルオキシ−３−メトキシシクロヘキシル）
−１−メチルビニル］−１，１４−ジヒドロキシ−２３
，２５−ジメトキシ−１３，１９，２１，２７−テトラ
メチル−１１．２８−ジオキサ−４−アザトリシクロ［
２２，３゜４．９ １．０］オクタコス−１８−エン−２，３，１Ｇ、１６
−テトラオン（３４＋ａｇ）をｆ尋る。

ＩＲν　〈ニー））　　　：　　３５００．　　１７４
７．　　１７２０（ｓｈ）。

１７１０（ｓｈ）、　１６５５　ｃｅｉ−ｌ製１ｕ艷辰 ＦＲ−９００５０６物質（８９，７ｒｍｇ　）のジクロ
ロメタン（３−）中ｒｌｊｌｌＲを攪拌しながら、これ
にイミダゾール（Ｉ１８ｍｇ）および塩化ｔ−ブチル−
ジフェニルシリル（５２，２ｍｇ　）を加える。混合物
を室温で２時間攪拌し、飽和塩化アンモニウム水溶液で
希釈シ、ジエチルエーテルで３回抽出する。抽出液を水
および塩化ナトリウム水＃戒で洗浄し、硫酸ナトリウム
で乾燥し、減圧乾燥する。残渣をシリカゲルカラムクロ
マトグラフィ（展開溶媒：酢酸エチル−ヘキサン、１　
：　３ｖ／ｖ）で精製し、１７−アリル−１２−［２−
（４−ｔ−ブチル−ジフェニルシリルオキシ−３−メト
キシシクロヘキシル）＝１−メチルビニル］　−１，１
４−ジヒドロキシ−２３、２５−ジメトキシ−１３，１
９，２１，２７−テトラメチル−１１，２８−ジオキサ
−４−アザトリシクロ［２２゜３．１．０’°９］オク
タコス−１８−エン−２，３，１０゜１６−テトラオン
（Ｉ０７ｍｇ）を得る。

ＩＲν　（ニーｔ）　　：　　３５２０．　１７４２．
　１７０５．　１６５０　　ｃｓｅ−’艷遺斑刊 製造例１５の方法に準じて、イミダゾール（Ｉ５ｍｇ）
の存在下に、Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド（Ｉ−）中
で、ＦＲ−９００５０６物質（８０ｍｇ）を塩化ｔ−ブ
チルージメメチシリル（Ｉ７ｍｇ）と反応させることに
よって、１７−アリル−１２−［２−（４−ｔ−ブチル
−ジメチルシリルオキシ−３−メトキシシクロヘキシル
）−１−メチルビニル］−１，１４−ジヒドロキシ−２
３，２５−ジメトキシ−１３，１９，２１，２７−テト
ラメチル−１１，２８−ジオキサ−４−アザトリシクロ
［２２，３、１，０４，９］オクタフスー１８−エン−
　２　、３．１０．１６−テトラオン（８５ｍｇ）を得
る。

ＩＲしくＣＨＣｌ５）　’　１７３５．１７２０（ｓｈ
）、１７０Ｇ。

１６４０　ａｍ−１ 製」Ｕ生■ ＦＲ−９００５０６物質（Ｉ００■）のジメチルスルホ
キシド（Ｉ，５１１１１）中溶液に、無水酢酸（Ｉ，５
１１）を加え、混合物を室温で１４時間攪拌する０反応
混合物を酢酸エチルで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム
水溶液、水、塩化ナトリウム水溶液で順次洗浄する。有
機層を硫酸ナトリウムで乾燥、濾過し、減圧ＩＩｍする
。残渣をシリカゲルの薄層クロマトグラフィ（展開溶媒
：ジエデルエーテル）に付し、１７−アリル−１，１４
−ジヒドロキシ−２３，２５−ジメトキシ−１３，１９
，２１，２７−テトラメチル−１２−［２−（４−メチ
ルチオメトキシ−３−メトキシシクロヘキシル）−１−
メチルビニル］−１１，２８−ジオキナ−４−アザトリ
シクロ［２２，３，１，０”’コネクタコサ−１４，１
８−ジエン−２、３，１０，１６−テトラオン（５１ｍ
ｇ）、１７−アリル−１−ヒドロキシ−１２−［２−（
４−ヒドロキシ−３−メトキシシクロヘキシル）−１−
メチルビニル］−２３，２５−ジメトキシ−１３，１９
，２１，２７−テトラメチル−１１，２８−ジオキサ−
４−アザトリシクロ［２２，３、１。

０４．９］オクタコサ−１４，１８−ジエン−２、３、
ＩＯ，１６−テトラオン（Ｉ８鋤ｇ）および１７−アリ
ル−１，１４−ジヒドロキシ−２３，２５−ジメトキシ
−１３，１９，２１゜２７−テトラメテルー１２−　［
２−（４−メチルチオメトキシ−３−メトキシシクロヘ
キシル）−１−メチルビニル］−ＬＬ、２８−ジオキサ
−４−アザトノシクロＣｚｚ、３．１．ｏ”コオクタコ
ス−１８−エン−２．３，１０．１６−テトラオン（Ｉ
０ｍｇ）を得る。

二１」しｌＬ生農 ＩＲＶ　（ＣＨＣＩ３）　’　３４７０．１７３０．１
６３５．１６３０（ｓｈ）。

１５８０（ｓｈ）　ａｍ’ ＝１」しｌζ企勿 １ １ＲＶ　（ＣＨＣＩｓ）　’　１７２８．１６４０．１
０９０　ａｍ二１」しＨ【魚豊 ｌ ＩＲＶ　（ＣＨＣＩ３）　’　３４８０．１７３５，１
７１０．１６４０　ａｍ飯１ｕ生り １７−アリル−１２−［２−（４−ｔ−ブチル−ジメチ
ルシリルオキシ−３〜メトキシシクロヘキシル）−１−
メチルビニムコ−１，１４−ジヒドロキシ−２３，２５
−ジ）　ト＋　シー　１３．１９．２１．２７−テトラ
メチル−１１，２８−ジオキサ−４−アザトリシクロ［
２２，３、１，０４，９コオクタフスー１８−エン−２
．３゜ｔｏ、　ｔｓ−テトラオン（３９，９ａ＋ｇ　）
のピリジン（Ｉ，５１１１）中溶液に無水酢酸（０，５
−）を加え、混合物を室温で６時間攪拌する。溶媒を減
圧下に除去して粗油状物を４１　これをシリカゲル薄層
クロマトグラフ　イ（ｊＪＭｍ媒：　’；エチルエーテ
ルーヘキサン、１：１ｖ／ｖ）に付し、１４−アセトキ
シ−１７−アリル−１２−［２−（４−ｔ−ブチル−ジ
メチルシリルオキシ−３−メトキシシクロヘキシル）−
１−メチルビニルゴー１−ヒドロキシ−２３，２５−ジ
メトキシ−１３，１９，２１，２７−テトラメチル−１
１，２８−ジオキサ−４−アザトリシクロ［２２，３，
１，０”’コオクタコス−１８−エン−２．３，１０．
１６−テトラオン（２６，５ｓ＊ｇ　）を得る。

ＩＲν（ＣＨＣＩ　）　：１７２８．１７１５（ｓｈ）
、　１６３５　ａｍ−’艶産亘卦 製造例１８の方法に準じて、ピリジン（０，２１１）中
で１７−アリル−１２−［２−（４−ｔ−ブチル−ジフ
ェニルシリルオキシ−３−メトキシシクロへキシル）−
１−メチルビニル］−１，１４−ジヒドロキシ−２３，
２５−ジメトキシ−”１３．１９．２１．２７−テトラ
メテルー１１．２８−ジオキサ−４−アザトリシクロ［
２２，３、１，０４，］］オクタスス−１８−エン−２
３、１０，１６−テトラオン（Ｉ０，６ｍｇ　）を無水
酢酸（０，１Ｂ）と反応させることによって、１４−ア
セトキシ−１７−アリル−１２−［２−（４−ｔ−ブチ
ル−ジフェニルシリルオキシ−３−メトキシシクロヘキ
シル）−１−メチルビニルゴー１−ヒドロキシ−２３，
２５−ジメトキシ−１３，１９，２１，２７−テトラメ
テルー１１．２８−ジオキサ−４−アザトリシクロ［２
２，３，１，０’°９コ才クタコス−１８−エン−２゜
３、ｌＯ，１６−テトラオン（Ｉ０＋＋＋ｇ）を得る。

ＩＲν（ＣＨＣＩ３）　’　３５００，１７３０．１７
２０（ｓｈ）。

１６６０（ｓｈ）、　１６４０．１６２０（ｓｈ）。

１１００　ａｍ−’ 型Ｅｕ艷坐 １４−アセトキシ−１７−アリル−１２−［２−（４−
ｔ−ブチル−ジフェニルシリルオキシ−３−メトキシシ
クロヘキシル）−１−メチルビニルゴー１−ヒドロキシ
−２３，２５−ジメトキシ−１３，１９，２１゜２７−
テトラメチル−１１，２８−ジオキサ−４−アザトリシ
クロ［ｚｚ、ａ、ｘ、ｏ”］］オクタフスーｔｓ−エン
−２、３．１０．１６−テトラオン（４３，８ｍｇ　）
のテトラヒドロフラン（Ｉ，５ｍＱ）中溶液に、炭酸カ
リウムく約１００ｍｇ＞を室温で加え、混合物を同温で
３時間攪拌する。反応混合物をジエチルエーテルで希釈
し、得られる溶液を飽和塩化アンモニウム水溶液、水、
塩化ナトリウム水溶液で順次洗浄し、硫酸ナトリウムで
乾燥する。得られる溶液を減圧濃縮し、残渣をシリカゲ
ル薄層クロマトグラフィ（展開溶媒二ンエチルエーテル
ーヘキサン、３：２ν／Ｖ）で精製して、１７−アリル
−１２−［２−（４−ｔ−ブチループフェニルシリルオ
キシ−３−メトキシシクロヘキシル）−１−メチルビニ
ル］−１−ヒドロキシー２３．２５−ジメトキシ−１３
，１９，２１゜２７−テトラメチル−１１，２８−ジオ
キサ−４−アザトリシクロ［２２，３，１，０”９］オ
クタコサ−１４，１８−ジエン−２、３，１０，１６−
テトラオン（３０ｍｇ）を得る。

ＩＲＶ　（ＣＨＣＬ３）　：１７３３．１７２０（ｓｈ
）、　１６８５゜１６４０（ｓｈ）、　１６２０　ｃｖ
ａ−’堅」ｌ４鉦 ＦＲ−９００５０６物質（５０ｍｇ）の酢酸エチル（２
１１１１）中溶液を、１０％パラジウム−炭素（Ｉ０ｍ
ｇ）を用いて、大気圧下、室温で、２０分間接触還元す
る０反応混合物を濾過し、濾液を蒸発乾固し、薄層クロ
マトグラフィで精製する。クロロホルム−アセトン混液
（５：　ｌｖ／ｖ）で展開して、１．１４−ジヒドロキ
ジー１２−　［２−（４−ヒドロキシ−３−メトキシン
クロヘキシル）−１−メチルビニル］−２３，２５−ジ
メトキシ−１３，１９，２１，２７−テトラメテルー１
７−ブロビルー１１．２８−ジオキサ−４−アザトノシ
クロ［２２，３、１，０４，９］オクタフスー１８−エ
ン−２　、３．１０．１６−テトラオンｃｓｏ、ｏ謙ｇ
）を得る。

ＩＲν（Ｃ）ｌｃ１３）　’　３４８０．１７３５（ｓ
ｈ）、　１７１７，１７００゜１６５０（ｓｈ）、　１
６２５　ｃ１１製１ｕ生坐 製造例１と同様の醗酵法により得られたＦＲ−９００５
０６物質の粗目色粉末（Ｉｇ）をアセトニトリル（５１
１１）に溶かし、島津ＬＣ４ム（商標、島津製作所社製
）の高速液体クロマトグラフィーに付す。

ＹＭＣ−５３４３（ＯＤＳ　）　（商標、島久薬品株式
会社躯）を充填したスチールカラム（内径２５ＩＩＩ＋
、長さ２５０ｍ）を用い、１２ｆｆＬＱ／分の流速で溶
出する。移動相は２８％アセトニトリル水溶液、ｌＯ％
ｎ−ブタノール、０．０７５％燐酸、３．７５ｍＭドデ
シル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）の混液を用い、ＵＶで２
１０ｎｅａにて検出する。１回につき１００ｍのサンプ
ルを注入し、この高速液体クロ”７トグラフイーを５０
回繰り返し、すべての量のサンプルをクロマトグラフィ
ーに付す、８５分〜９０分の保持時間で溶出される両分
を集め、等容量の酢酸エチル（３，６ｍりで抽出する。

酢酸エチル層を分取し、１％炭酸水素ナトリウム（２１
）で洗浄した後減圧で少量まで濃縮する。

析出するＳＤＳを濾去し、得られる粗粉末を１００ｍｇ
／−の濃度になるようにアセトニトリルに溶かし、さら
に高速液体クロマトグラフィーに付す、移動相として１
２，５％アセトニトリル水溶液、９．７５％ｎ−ブタノ
ール、０．０７５％燐酸、３．７５ｄ　ＳＤＳを用いる
。カラムは１０−７分の流速で溶出する。１３１分〜１
４３分の保持時間で溶出される両分を集め、等容量の酢
酸エチルで抽出する。抽出液を１％炭酸水素ナトリウム
水溶液で洗浄し、減圧下で少量まで濃縮する。ａ縮の際
析出するＳＤＳを濾去する。

得られる粗粉末を少量の酢酸エチルに溶解し、シリカゲ
ル（Ｋｉｅｓｅｌ　ｇｅｌ、２３０−４００メツシユ）
（メルク社製）を用いたカラムクロマトグラフィーに付
す、カラムをｎ−ヘキサンと酢酸エチルの混液（３０ｍ
１１）　（Ｉ：　ｌｖ／ｖ）、次いでｎ−ヘキサンと酢
酸エチルの混液（６０＋ａｌｌ）　（Ｉ：　２Ｖ／Ｖ　
）で洗浄する。さらにカラムを酢酸エチルで溶出し、各
画分を３−づつ集める。１８−２４の画分を合し、減圧
下で濃縮すると、ＦＲ−９００５２０物質（２４ｍｇ）
を得る。

【図面の簡単な説明】

図１はＦＲ−９００５０６物質の白色粉末の１３Ｃ核磁
気共鳴スペクトルを表わす。 ｒｙ：Ｊ２　ハＦＲ−９ｏｏｓｏａｍ質ｔｙ＞白色粉末
ｃｙ＞　’Ｈ核ａ＆気共鳴スペクトルを表わす。 図３はＦＲ〜９００５０６物質の無色のプリズム状結晶
の１３ｃ核磁気共鴨スペクトルを表わす。 図４はＦＲ−９００５０６物質の無色のプリズム状結晶
の１Ｈ核磁気共鳴スペクトルを表わす。 図５はＦＲ−９００５２５物質の１３０核磁気共鳴スペ
クトルを表わす。 図６はＦＲ−９００５２５物質の１Ｈ核磁気共鳴スペク
トルを表わす。 図７はＦＲ−９００５２０物質の１３Ｃ核磁気共鳴スペ
クトルを表わす。 図８はＦＲ−９００５２０物質の１Ｈ核磁気共鳴スペク
トルを表わす。 図９はＦＲ−９００５２３物質の１３Ｃ核磁気共鳴スペ
クトルを表わす。 図１ＯはＦＲ−９００５２３物質の１Ｈ核磁気共鳴スペ
クトルを表わす。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）一般式： ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （式中、Ｒ＾１はヒドロキシ基または保護されたヒドロ
   キシ基、Ｒ＾２は水素、ヒドロキシ基または保護された
   ヒドロキシ基、Ｒ＾３はメチル基、エチル基、プロピル
   基またはアリル基、ｎは１または２の整数、実線と点線
   により表わされる記号は単結合または二重結合を意味す
   る） で示されるトリシクロ化合物またはその医薬として許容
   される塩を含有する免疫抑制剤。２）トリシクロ化合物
   （ I ）が下記式 ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｒ＾１はヒドロキシ基、１−（低級アルキルチ
   オ）（低級）アルコキシ基、トリ（低級）アルキルシリ
   ルオキシ基、低級アルキル−ジアリールシリルオキシ基
   またはアシルオキシ基、Ｒ＾２はは水素、ヒドロキシ基
   またはアシルオキシ基、Ｒ＾３はメチル基、エチル基、
   プロピル基またはアリル基、実線と点線により表わされ
   る記号は単結合または二重結合を意味する］ である特許請求の範囲第１）項記載の免疫抑制剤。 ３）トリシクロ化合物（ I ）が１７−アリル−１，１
   ４−ジヒドロキシ−１２−［２−（４−ヒドロキシ−３
   −メトキシシクロヘキシル）−１−メチルビニル］−２
   ３，２５−ジメトキシ−１３，１９，２１，２７−テト
   ラメチル−１１，２８−ジオキサ−４−アザトリシクロ
   ［２２，３，１，０＾４＾，＾９］オクタコス−１８−
   エン−２，３，１０，１６−テトラオンである特許請求
   の範囲第２）項記載の免疫抑制剤。 ４）トリシクロ化合物（ I ）が１７−エチル−１，１
   ４−ジヒドロキシ−１２−［２−（４−ヒドロキシ−３
   −メトキシシクロヘキシル）−１−メチルビニル）−２
   ３，２５−ジメトキシ−１３，１９，２１，２７−テト
   ラメチル−１１，２８−ジオキサ−４−アザトリシクロ
   ［２２，３，１，０＾４＾，＾９］オクタコス−１８−
   エン−２，３，１０，１６−テトラオンである特許請求
   の範囲第２）項記載の免疫抑制剤。 ５）トリシクロ化合物（ I ）が１，１４−ジヒドロキ
   シ−１２−［２−（４−ヒドロキシ−３−メトキシシク
   ロヘキシル）−１−メチルビニル］−２３，２５−ジメ
   トキシ−１３，１７，１９，２１，２７−ペンタメチル
   −１１，２８−ジオキサ−４−アザトリシクロ［２２，
   ３，１，０＾４＾，＾９］オクタコス−１８−エン−２
   ，３，１０，１６−テトラオンである特許請求の範囲第
   ２）項記載の免疫抑制剤。 ６）トリシクロ化合物（ I ）が１６−アリル−１，１
   ３−ジヒドロキシ−１１−［２−（４−ヒドロキシ−３
   −メトキシシクロヘキシル）−１−メチルビニル］−２
   ２，２４−ジメトキシ−１２，１８，２０，２６−テト
   ラメチル−１０，２７−ジオキサ−４−アザトリシクロ
   ［２１，３，１，０＾４＾，＾８］ヘプタコス−１７−
   エン−２，３，９，１５−テトラオンである特許請求の
   範囲第２）項記載の免疫抑制剤。 ７）移植に対する拒絶反応の治療・予防剤である特許請
   求の範囲第１）項記載の免疫抑制剤。 ８）骨髄移植による移植片対宿主反応の治療・予防剤で
   ある特許請求の範囲第１）項記載の免疫抑制剤。 ９）自己免疫疾患の治療・予防剤である特許請求の範囲
   第１）項記載の免疫抑制剤。