HU195250B - Process for preparing tricydlic macrolides - Google Patents
Process for preparing tricydlic macrolides Download PDFInfo
- Publication number
- HU195250B HU195250B HU854600A HU460085A HU195250B HU 195250 B HU195250 B HU 195250B HU 854600 A HU854600 A HU 854600A HU 460085 A HU460085 A HU 460085A HU 195250 B HU195250 B HU 195250B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- streptomyces
- strain
- agar
- ethyl acetate
- formula
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
- C07D498/12—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains three hetero rings
- C07D498/18—Bridged systems
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H17/00—Compounds containing heterocyclic radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/01—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing oxygen
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
- C12P17/188—Heterocyclic compound containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen atoms and oxygen atoms as the only ring heteroatoms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/465—Streptomyces
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/465—Streptomyces
- C12R2001/55—Streptomyces hygroscopicus
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/886—Streptomyces
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/886—Streptomyces
- Y10S435/898—Streptomyces hygroscopicus
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
Description
A találmány új, gyógyászati aktivitással rendelkező (1) általános képletű vegyületek előállításával foglalkozik, mely vegyületek gyógyászati hatása főleg immunszupreszszív hatás és antimikrobiális aktivitás.
A találmány tárgya eljárás olyan új vegyületek fermentációs úton történő előállítására, melyek alkalmasak a szervezet átültetéssel szembeni ellenállásának, a csontvelőátültetés kiváltotta „graft-versus-hos“ betegségen, autoimmun betegségeknek, fertőző betegségeknek stb. kezelésére vagy megelőzésére.
A találmány szerinti eljárással új, FR-900506, FR-900520, FR-900523 és FR-900525 jelű anyagokat elsőként izoláltuk tiszta állapotban a Streptomyces nemhez tartozó új törzsek fermentleveiből.
Vizsgálataink során megállapítottuk az FR-900506, FR-900520, FR-900523 és FR-900525 anyagok kémiai szerkezetét, és kidolgoztuk e vegyületek előállítási módját.
A találmány szerinti eljárással előállítható új vegyületek szerkezetét az (I) általános képlettel ábrázoljuk, ahol
R3 jelentése metil-, etil- vagy allilcsoport; n jelentése 1 vagy 2, azzal a feltétellel, hogy R3 jelentése allilcsoport, ha n értéke 1.
Az alábbi négy, (I) általános képletű vegyületről állapítottuk meg, hogy a találmány szerinti fermentációs eljárással előállítható:
1) FR-900506 vegyület, ahol az (I) általános képletben R3 jelentése allilcsoport, n értékí? 2
2) FR-900520 vegyület (más néven WS 7238A anyag), ahol az (I) általános képletben R3 jelentése etilcsoport, n értéke 2,
3) FR-900523 vegyület (más néven WS 7238B anyag), ahol az (I) általános képletben R3 jelentése metilcsoport, n értéke 2,
4) FR-900525 vegyület, ahol (I) általános képletben R3 jelentése allilcsoport, n értéke 1.
Nyilvánvaló, hogy a találmányban szereplő (I) általános képletű vegyületek egy vagy több konformer vagy sztereoizomer pár alakjában létezhetnek; ilyenek az asszimmeíriás szénatom(ok) és kettős kötés(ek) jelenlétéből adódó optikai és geometriai izomerek.
A találmány szerinti eljárás során tehát az (I) általános képletű vegyületeket fermentációs úton, azaz a Streptomyces nemhez tartozó mikroorganizmusok fermentálásával állítjuk elő.
Az alábbiakban részletesen ismertetjük az (I) általános képletű vegyületek előállítását.
A fermentációs eljárás során az FR-900506 FR-900520, FR-900523 és FR-900525 anyagokat olyan, a Streptomyces nemhez tartozó mikroorganizmusokkal történő fermentálással állítjuk elő, melyek FR-900506, FR-900520, FR-900523 és/vagy FR-900525 anyago(ka)t termelnek. Ilyen Streptomyces törzsek 2 a Streptomyces tsukubaensis 9993 és a Streptomyces hygroscopicus subsp. yakushimaensís 7238.
Az FR-900506, FR-900520, FR-900523 és az FR-900525 anyagokat termelő mikroorganizmusokat az alábbiakban részletesen ismertetjük.
A) Az FR-900506, FR-900520 és az FR-900525 anyagok előállítására az FR-900506, FR-900520, és/vagy FR-900525 anyagokat termelő Streptomyces tsukubaensis 9993 törzset használjuk.
A Streptomyces tsukubaensis 9993 törzset újabban izolálták Japánban a Toyosato-chonál, Tsukuba-gun, Ibaraki Prefecture, gyűjtött talajmintából.
Az újonnan izolált Streptomyces tsukubaensis 9993 liofilezett törzs a Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology-nál van letétbe helyezve (No. 1-3, Higashi 1-chome, Yatabemachi Tsukuba-gun, Ibaraki Prefecture, Japán) a FERM P-7886 letétszámon (letétbe helyezés ideje: 1984. október 5.) mely 1985. október 19-én a Budapesti Egyezmény alapján át lett alakítva FERM BP-927 letétszámmá,
A találmány oltalmi köre nem korlátozódik az itt leírt, FR-900506, FR-900520 és/vagy FR-900525 anyagot termelő mikroorganizmusra, melyet csak szemléltető céllal mutatunk be. A találmány oltalmi köre kiterjed mindazokra a mutánsokra is, melyek FR-900506, FR-900520 és/vagy FR-900525 anyag termelésére képesek, beleértve a leírt mikroorganizmus természetes és mesterséges — melyek a szokásos eljárásokkal, például röntgen besugárzással, ultraibolya besugárzással, N-metil-N’-nitro-N-nitrozo-guanidines, 2-amino-purinos kezeléssel, stb. állíthatók elő — mutánsait.
A Streptomyces tsukubaensis 9993 törzset a következők szerint jellemezhetjük:
1. ) Morfológiai leírás. A rendszertani vizsgálatokhoz Shirling, E.B. és Gottlieb D. módszerét alkalmazzuk. („Methods fór characterization of Streptomyces species. International Journal of Systematic Bacteriology, 16, 313-340, (1966)).
A morfológiai vizsgálatokat zablisztes agaron, élesztő és malátakivonatos agaron, szervetlen sókat és keményítőt tartalmazó agaron 30°C-on tenyésztett, 14 napos tenyészeteken végezzük, fény és elektromikroszkóppal. Az érett sporoforok „rectiflexibile típusúak, a spórafiizér 10-50 vagy ennél több spórából áll. A spórák nyújtottak vagy hengeresek, elektronmikroszkóppal meghatározva, méretük 0,5-0,7 x 0,7-0,8 pm. A spórafelszin sima.
2. ) A tenyészet jellemzésére tízfajta táptalajt használunk, melyeket Shirling és Gottlieb (lásd a fent említett cikk), illetve Waksman (Waksman, S.A., „The actinomycetes 2. kötet Classification, Identification and description of genera and species. The Williams and Wilkins Co., Baltimore, 1961.) ismertet.
-2195250
A tenyésztést 30°C hőmérsékleten végezzük 14 napon át. A színek jellemzése a „Guide to color Standard (Nippon Shikisai Kenkyusho kiadás, Tokió) elnevezéseit használjuk. A zablisztes agaron, az élesztő és maláta kivonatos agaron és a szervetlen sókat és keményítőt tartalmazó agaron kinőtt telepek színe a szürke színsorozatba tartozik. Az élesztő és maláta kivonatos agaron termelődik oldható pigment, a többi táptalajon viszont nem.
Az eredményeket az 1. táblázaton foglaljuk össze.
1. Táblázat
A Strepromyces t'sukubaensis 9993 és a Streptomyces misakiensis IFO 12891 tenyészeteinek jellemzői Táptalaj 99y3 IFO 12891
zablisztes agar | N | mérsékelt | mérsékelt |
L | szürke | szürkés fehér | |
F | fakó rózsaszín | színtelen | |
OP | nincs | nincs | |
élesztő- és maláta- | N | mérsékelt | mérsékelt |
kivonatos agar | L | halvány szürke | szürkés fehér |
F | matt vöröses narancs | halvány barna | |
OP | matt vöröses narancs | nincs | |
szervetlen sókat és | N | mérsékelt | mérsékelt |
keményítőt tartalmazó agar | k | fakó sárgás narancstól halvány szürkéig | szürkés fehér |
F | sötét narancs | Fakó sárgás barna | |
OP | nincs | nincs | |
glükózt és aszparagmt | N | gyenge | mérsékelt |
tartalmazó agar | L | f ehér | szürkés fehér |
F | fakó barna | fakó sárgás barna | |
OP | nincs | fakó barna | |
glicerines-aszparaginos | N | mérsékelt | mérsékelt |
agar | L | fakó rózsaszíntől fehérig | szürkéé fehér |
F | fakó rózsaszín | fakó sárgás barna | |
ŰP | nincs | fakó barna | |
Czapek agar' | N | gyenge | erőteljes |
L | nincs | szürkés fehér | |
F | fakóro'zsaszm | sötét narancstól sötét barnáig | |
PO | nincs | nincs | |
tápagar | N | gyenge | gyenge |
L | fehér, gyenge | fehér | |
F | színtelen | színtelen | |
OP | nincs | nincs | |
burgonya dextrózos | N | gyenge | mérsékelt |
agar | L | nincs | sárgás szörke |
F | fakó rózsaszín | barna | |
OP | nincs | nincs | |
tirozinos agar | N | mérsékelt | mérsékelt |
L | fehér | szürkés fehértől halvágy szürkéig | |
F | sötét vöröses narancs | sötét narancstól feketéig | |
OP | nincs | nincs | |
peptont, élesztő | N | gyenge | gyenge |
kivonatot és vasat | L | nincs | nincs |
tartalmazó agar | F | színtelen | színtelen |
N = növekedés L = legmicélium tömegének színe F - fonák oldal színe OP = oldható pigment | OP | nincs | nincs |
A sejtfalanalízist Becker és munkatársai (Becker, B.M.P. Lechevalier, R.E. Gordon és H.A. Lechevalier, „Rapid differentiation between Nocardia and Streptomyces by paper chromatography of whole cell hydrolysates. Appl.Microbiol. 12,421-423, (1964)) és Yamaguchi (Yamaguchí, Τ. „Comparison of the cell wall , composition of morphologically distinct acfinomycetes. J. Bacteriol, 89, 444-453, (1965)) szerint végezzük. A 9993-as törzs teljes sejt hidrolizátumának analízise LL-diamino-pimelinsav jelenlétét bizonyítja. Ezek szerint a törzs sejtfala az I típusba tartozik.
) A fiziológiai és biológiai tulajdonságokat Shirling és Gottlieb fent említett mód55 szerével határozzuk meg. Az eredményeket a 2. táblázatban foglaljuk össze. A növekedés hőmérséklettartományának és az optimális hőmérsékletnek meghatározásához a tenyésztést élesztő, és malátakivonatos agaron végezzük, hőmérsékletgrádiens inkubátort (Tokyo Kagaku Sangy Co. Ltd.) használva. A növekedés hőmérséklettartománya 18°C és 35°C közé esik, az optimális hőmérséklet 28°C. A tej-peptonizációs és a zselatin-elfolyósítási gg próba pozitív. A melanoid pigment termelés negatív.
-3195250
2. táblázat
A 9993-as törzs és a Streptomyces^ misakiensis IFO 12891 fiziológiai tulajdonságai
fiziológiai tulajdonságok | 9993 | IFO |
a növekedés hőmérsékleti tartománya | 18°-35°C | 12°-35°C |
optimális hőmérséklet | 28°C | 28°C |
nitrátredukció | - | - |
keményítohidrolízis | - | + |
tejkoagulacío | - | |
tej-peptonizacio | + | gyengén + |
melaníntermelés | - | - |
zselatinelfolyo'sítas | - | |
H2S termeles | - | - |
NaCl tűrés (2) | 4-3% | 3%/, /5% |
A szénforrás hasznosítást Pridham és Gottlieb (Pridham, T.G. és D, Gottlieb, „The utilization of carbon compounds by somé Actinomyceteles as an aid fór species determination J.Bacteriol, 56, 107-114, (1948)) módszerével állapítottuk meg. A növekedést 14 napos, 30°C hőmérsékleten történő inkubálás után határozzuk meg.
A szénforrások hasznosításának eredményeit a 3. táblázatban foglaljuk össze. A 9993-as törzs hasznosítja a glicerint, maltózt és a nátrium-szulfátot. Kétséges a D-gliikóz, szacharóz, D-mannóz és szalicin hasznosítása.
3. táblázat
A 9993-as törzs és a Streptomyces misakiensis IFO 12891 szénforrás hasznosítása
Szenforras | 9993 | IFO 12891 |
D-Glükoz | + | |
Szacharo'z | - | |
Glicerin | + | - |
D-Xilo'z | - | - |
D-Fruktóz | - | - |
Laktóz | - | - |
Maltóz | + | - |
Ramno'z | - | - |
Raffinóz | - | - |
D-Galaktóz | - | + |
L-Arabinóz | - | - |
D-Mannóz . | + | - |
D-Trehaldz | - | - |
Inozit | - | - |
D-Mannit | - | - |
Inulin | - | - |
Cellulóz | - | - |
Szalicin | + | - |
Kitin | - | + |
Natrium-citrat Nátrium-szűkei- | - | - |
nat | + | - |
Natríum-acetat |
= hasznosít + = a hasznosítás ketseges - = nem hasznosít
A mikroszkópi vizsgálatok és a sejtfalösszetétel analízise bizonyítja, hogy a 9993-as
2Q törzs a Streptomyces (Waksman és Henrici 1943) nemhez tartozik.
A 9993-as törzset különböző Streptomyces fajokkkal hasonlítottuk össze a közölt leírások alapján. (International Journal of Systema25 tic Bacteriology, 18, 69-189, 279-392 (1968) és 19,391-512 (1969), valamint Bergy’s Manual of Determinative Bacteriology, 8. kiadás (1974)).
3q Az összehasonlítások eredményeként megállapíthattuk, hogy a 9993-as törzs a Streptomyces aburaviensis (Nishimura és munkatársai), a Streptomyces avellaneus (Baldacci és Grein), valamint a Streptomyces misakien35 sis (Nakamura) fajokhoz hasonlít, ezért a 9993-as törzs tenyészetének jellemző tulajdonságait összehasonlítottuk a Streptomyces aburaviensis IFO 12830, Streptomyces avellaneus IFO 13451 és a Streptomyces misakien40 sis IFO 12891 törzsekéivel. A 9993 törzs a Streptomyces misakiensis IFO 12891 törzshöz volt a leghasonlóbb, ezért a továbbiakban ezzel hasonlítottuk össze, amint az az
1., 2. és 3. táblázatból is kitűnik. A további ¢5 összehasonlítás során a 9993-as törzset meg lehetett különböztetni a Streptomyces misakiensis IFO 12891-től és új Streptomyces fajként lehetett leírni Streptomyces tsukubaensis sp. nov., elnevezés alatt, mely elnevezés arra utal, hogy a talajmintát, melyből izoláltuk a Tsukuba-gunnál gyűjtötték.
A 9993-as törzs a zablisztes agaron, az élesztő és maláta kivonatos agaron, a glükózos-aszparaginos agaron, a Czapek agaron és a burgonya dextrózos agaron különbözik a Streptomyces misakiansis IFO 12891-tői.
A keményítő-hidrolízis a 9993-as törzs esetében negatív, míg a Streptomyces misakiensis IFO 12891-nél pozitív.
A zselatin-elfolyósítási próba a 9993-as törzsnél pozitív, a Streptomyces misakiensis IFO 12891-nél negatív.
A szénforrások közül a 9993-as törzs hasznosítja a glicerint, maltózt és nátrium-szukθ5 cinátot, a Streptomyces misakiensis IFO 12891 viszont nem. A 9993-as törzzsel ellentétben
-4195250 viszont a Streptomyces misakiensis IFO 12891 képes hasznosítani a D-galaktózt és az inulint.
A továbbiakban ismertetjük az FR-900506, FR-900520 és az FR-900525 anyagok termelésének körülményeit.
Az FR-900506, FR-900520 és/vagy FR-900525 anyagokat termelő törzsek a Streptomyces nemhez tartoznak, (pl. Streptomyces tsukubaensis 9993, FERM BP 927).
Az FR-900506, FR-900520 és FR-900525 anyagokat az FR-900506, FR-900520 és/vagy FR-900525 anyagokat termelő törzsek viz.es táptalajon történő tenyésztésével állítjuk eiő. A táptalaj asszimilálható szén- és nitrogénforrásokat tartalmaz, és a tenyésztést előnyösen aerob körülmények között végezzük (pl. rázott tenyészetben, süllyesztett tenyészetben, stb.).
Előnyös szénforrások a szénhidrátok, például a glükóz, xilóz, galaktóz, glicerin, keményítő, dextrin, stb. Alkalmazható még a maltóz, ramnóz, raffinóz, arabinóz, mannóz, szalicin, nátrium-szukcinát, stb.
Előnyös nitrogénforrás az élesztőkivonat, pepton, sikér, gyapotmagliszt, szójaliszt, kukoricalekvár, szárított élesztő, búzacsíra, toll-liszt, földimogyoróliszt, stb., valamint a szervetlen és szerves nitrogén vegyületek, például az ammóniumsók (ammónium-nitrát, ammónium-szulfát, ammónium-foszfát, stb.) karbamid, amínosavak, stb.
A szén- és nitrogénforrásoknak, noha előnyösen kombinálva használjuk őket, nem szükséges, hogy tiszta állapotban legyenek, minthogy a kevésbé tisztított anyagok nyomnyi mennyiségű növekedési faktorokat, és jelentékeny mennyiségű ásványi tápanyagot tartalmaznak. Ha szükséges ásványi sókat, például nátrium- vagy kalcium-karbonátot nátrium- vagy kálium-foszfátot, nátriumvagy kálium-kloridot, nátrium- vagy kálium-jodidot, magnéziumsókat, rézsókat, kobaltsót, stb., adhatunk a tápközegbe. Ha a tenyészlé erősen habzik, habzásgátlót, pélául folyékony paraffint, növényi olajat, ásványi olajat vagy szilikont adhatunk hozzá.
Az FR-900506, FR-900520 és FR-900525 anyagok nagy mennyiségben való előállításához süllyesztett aerob tenyészet az előnyös. Kis mennyiség termeléséhez rázott vagy felületi tenyészető lombikot vagy edényt használunk.
Ha a tenyésztést nagyméretű fermentorban végezzük, előnyös a termelő tenyészet táptalaját vegetatív állapotban levő oltóanyaggal beoltani, hogy ezáltal elkerüljük a termelőfolyamat „lag“ fázisát. Ezért tehát egy viszonylag kis térfogatú táptalajt a mikroorganizmus spóráival vagy micéliumaival oltunk be. Ezt a tenyészetet hívjuk vegetatív oltóanyagnak. A vegetatív oltóanyagot aztán steril körülmények között átvisszük a nagy fermentorba. A vegetatív oltóanyag táptalaja vagy lényegében ugyanaz a táptalaj, amit az FR-900506, FR-900520 és FR-900525 anyagok termelésére használunk, vagy attól eltérő.
A tenyészlé keverését és levegőztetését különböző módon oldhatjuk meg. A keverést végezhetjük propelleres vagy más hasonló mechanikai keverőberendezéssel, a fermentor forgatásával vagy rázásával, különféle szivattyú berendezésekkel, vagy steril levegőnek a táptalajon történő átvezetésével. A levegőztetést steril levegőnek a táptalajon történő átáramoltatásával végezzük.
A fermentációt általában 20°C és 40°C, előnyösen 25°C—35°C hőmérsékleten végezzük. Az alkalmazott fermentációs körülményektől és a méretektől függően a fermentációs idő 50—150 óra.
A termelt FR-900506, FR-900520 és/vagy FR-900525 anyagokat más bioaktív anyagok kinyerésénél használt ismert eljárások szerint izoláljuk. A keletkezett FR-900506, FR-900520 és FR-900525 anyagok a micélium frakcióban és a szürletben találhatók, és. onnan elkülöníthetők és tisztíthatók. Ehhez a tenyészlevet szűrjük, vagy centrifugáljuk és a kinyeréshez a szokásos eljárásokat alkalmazzuk, azaz a csökkentett nyomáson történő bepárlást, fagyasztva szárítást, alkalmas oldószerrel való extrahálást, pH beállítást, alkalmas gyantával (anion vagy kation cserélő, nem ionos adszorbciós gyanta, stb.) való kezelést, a szokásos adszorbensekkel (aktív szén, szilikasav, szilikagél, cellulóz, alumínium-oxid, stb.) való megkötést, kristályosítást, átkristályosítást, stb.
Az FR-900506, FR-900520 és az FR-900525 anyagok fizikai és kémiai tulajdonságait az alábbiakban adjuk meg:
FR-900506
1. ) Megjelenés és szín: fehér por.
2. ) Elemanalizis:
C: 64,72 H: 8,78 N: 1,59 %,
64,59 8,74 1,62 %.
3. ) Színreakciók:
pozitív: cérium-szulfát reakció, kénsavas reakció, Ehrilich, reakció, Dragendorff reakció és jódgőzös reakció.
negatív: vas (III)-klorid reakció, ninhidrin reakció és Molish reakció
4. ) Oldahtóság:
oldható: metanolban, etanolban, acetonban, etil-acetátban, kloroformban, dietil-éterben és benzolban, mérsékelten oldódik: hexánban, petroléterben.
oldhatatlan: vízben.
5. ) Olvadáspont: 85-90°C
6. ) Fajlagos forgatás: (α)& : —73° (C=0,8, kloroform)
7. ) Ultraibolya elnyelés: végabszorpció
CHCl
8. ) Infravörös spektrum, -y 3 :
max
3680, 3580, 3520, 2930, 2870, 2830, 1745, 1720, 1700, 1645, 1450, 1380,
-5195250
1350, 1330, 1310, 1285, 1170, 1135, 1090, 1050, 1030, 1000, 990, 960 (sh) , 918 cm'1
9.) 13C magmágneses rezonanciaspektrum (1. ábra), S(ppm, CDC13):
/212,59 (s) /196,18 (s) (Ί69,07 (s), /212,45 (s), [192,87 (s),[168,90 (s) , (164,90 (s) Í138,89 (s) /135,73 (d) [166,01 (s), [139,67 (s) /135,60 (d), (132,52 (s) /130,27 (d) /122,87 (d) /131,99 (s), [130,21 (d),/123,01 (d) , /116,57 (t) /97,35 (s), 84,41 (d), /116,56 (t), /98,76 (s), /77,79 (d) /75,54 (d) /73,93 (d) < 78,22 (d), £76,97 (d),j 73,09 (d), /73,72 (d) /70,05 (d) 56,75 (d), /72,57 (d), [69,15 (d),
53,03 | (d), j | '48,85 | (t) | /40,33 | (d) |
53,13 | (d), | 48,62 | (t), | /40,85 | (d), |
39,40 | (t), | ||||
31 , 58 | <t), | 30,79 | (t), | 27,72 | (t) |
26,34 | (t) , | ||||
26,46 | (d), | 24,65 | (t) | 20,45 | (q) |
19,73 | (q), | ||||
14,06 | (q) | 9,69 | (q) | ||
14,23 | (q), | 9,98 | (q), |
10. ) Ή magmágneses rezonanciaspektrum
2. ábra.
11. ) Vékonyréteg-kromatográfia:
adszorbens futtató rendszer Rf érték kloroform/metanol, 10:1 0,58 szilikagél réteg etil-acetát 0,52
12. ) Az anyag jellege: semleges
Az FR-900506 anyag l3C és Ή magmágneses rezonanciaspektrumában a különböző kémiai eltolódások jelei párként jelennek meg
Az FR-900506 anyagot a további tulajdonságokkal is jellemezhetjük:
a. ) A l3C magmágneses rezonanciaspektrum 25°C és 60°C hőmérsékleten való felvételekor az egyes jelpárok intenzitása megváltozik.
b. ) Az FR-900506 anyag a vékonyréteg kromatogramon egy foltként, a nagy nyomású 6 folyadék-kromatográfiánál egy csúcsként jelenik meg.
A fehér por alakjában lévő FR-900506 anyagot acetonitrilből átkristályosítva, kristályos állapotba jut, mely a következő fizikai és kémiai tulajdonságokkal rendelkezik:
1. ) Alak és szín: színtelen prizma
2. ) Elemanalizis:
C: 64,30 H: 8,92 N: 1,77 %,
64,20 8,86 1,72 %.
3. ) Olvadáspont: 127—129°C
4. ) Fajlagos forgatás: '· —84,4° (C=l,02, kloroform).
5. ) 13C magmágneses rezonanciaspektrum (3. abra), (ppm, CDCI3):
211,98 | (s), | 196,28 | (s), | 168,97 | (s), |
211,74 | (s), | 193,56 | (s), | 168,81 | (s), |
164,85 | (s), | 138,76 | (s) , | 135,73 | (d), |
165,97 | (S), | 139,51 | (s) , | 135,63 | (d), |
132,38 | (s) , | 130,39 | (d), | 122,82 | (d), |
131,90 | (s), | 130,17 | (d) , | 122,96 | (d), |
116,43 | (t), | 97,19 | (s) , | 84,29 | (d), |
98,63 | (s), | ||||
77,84 | (d) , | 77,52 | (d), | 69,89 | (d) , |
78,21 | (d), | 76,97 | (d), | 69,00 | (d), |
56,63 | (d), | 52,97 | (d), | 48,76 | (t), |
54,87 | (d), | 52,82 | (d), | 48,31 | (t), |
40,21 | (d), | 31 ,62 | (t), | 30,72 | (t), |
40,54 | (d), | ||||
24,56 | (t), | 21,12 | (t), | 20,33 | (q), |
20,86 | (t), | 19,74 | (q), | ||
16,17 | (q), | 15,88 | (q), | 13,89 | (q), |
16,10 | (.q), | 15,75 | (q), | 14,05 | (q), |
9,64 (q) ,
9,96 (q),
6.) Ή magmágneses rezonanciaspektrum:
4. ábra.
A színtelen prizma alakjában létező FR-900506 anyag többi tulajdonsága (színreakciók, oldhatóság, ultraibolya elnyelési spektrum, infravörös spektrum, vékonyréteg-kromatográfiás viselkedés) azonos körülmények között megegyezik a fehér por tulajdonságaival.
A fenti fizikai és kémiai adatok, valamint a röntgen diffrakciós analízis alapján az FR-900506 vegyület kémiai szerkezet a (II) képlettel ábrázolható. 17-a I Ül -1,14-dihidroxi 12- (2- (4-hidroxi-3-metoxi-ciklohexil) -1 -metil- vinil) -23,25-dimetoxi-13,19,21,27-tetrametil-11,28-dioxa-4-aza-triciklo [24.3.1.O4*3] oktakoz- 18-én-2,3,10,16-tetraon-nak határoztuk meg.
Az FR-900520 anyag fizikai és kémiai tulajdonságait később részletezzük.
FR-.900525
1. ) Alak és szín: fehér por.
2. ) Elemanalízis: C 65,17 H 8,53 N 1,76%.
3. ) Színreakciók:
pozitív: cérium-szulfát reakció, kénsavas reakció, Ehrlieh
-6195250 reakció, Dragendorff reakció és jődgőzös reakció.
negatív: vas (III)-klorid reakció, minhidrid reakció és Molish reakció.
4. ) Oldhatóság:
oldható: metanolban, etanolban, acetonban, etil-acetátban, kloroformban, dietil-éterben és benzolban mérsékelten oldódik: hexánban, petrol éterben, oldhatatlan: vízben.
5. ) Olvadáspont: 85—89°C
6. ) Fajlagos forgatás: (a)®3: —88° (C==l,0 kloroform)
7. ) Ultraibolya elnyelési spektrum:
végabszorpció
8.) Infravörös spektrum,
PHP1
3680, 3580, 3475,
3340, 2940, 2880,
2830, 1755, 1705,
1635, 1455, 1382,
1370, 1330, 1310,
1273, 1170, 1135, . 1093, 1050, 1020,
995, 970, 920,
867 cm1
9.)
Í 212,61
211,87
Pl 63,11 ήΐ61,39 i 3 _ / .
C magmagneses rezonanciaspektrum (ppm, CDCl3 (5. ábra) .
(s), j188,57 (s), $168,76 (s) (s), [191,12 (s), ]1 70,18 (s) (s), fl40,28 (s), fl35,62 (d) (s), [139,37 (s), <135,70 (d)
132,28 (s), 11.31,34 (s), 116,48 (t), |78,60 (d) [79,86 (d), 57,52 (q),
130,09 Cd), 130,00 (d),
99,16 (s) ’ 99,11 (s) [76,73 (d) [77,33 (d)
122,50 (d) ,123,23 (d)
84,42 (d) 84,48 (d)
59,97 (d) 60,45 Cd)
56,56 (q) 56,48 (q) [53,45 (d) [53,26 (d),
44,47 (t) 45,23 (t)
49,15 (t) 49,73 (t)
41.40 (d)
40.40 (d) [56,14 (q) 155,97 (q) /48,46(t) [47,62(t) [35,19 , L35’11 [ 33,10 (d) í32,81 (t) (31, [34,17 (d) [32,29 (t), /31, (d) (d) '31,53 (t) ,33 (t)
[30,80 | (t) | 28,60 | (t) | f 26,03 | (d) | |
[30,66 | (t), | [26,98 | (d) | |||
5 | [25,43 | (t) | Í18,93 | (q) | 714,09 | |
324,40 | (t), | [20,57 | (q) | U3,95 | (q) | |
10 | f 9,85 | (q) | ||||
,10,00 | (q) |
10. ) Ή magmágneses rezonanciaspekt15 rum: 6. ábra.
11. ) Vékonyréteg-kromatográfia: adszorbens futtatórendszer RF érték szilikagél etil-acetát 0,34 20 12.) Az anyag jellege: semleges
Megjegyzendő, hogy az FR-900525 l3C és Ή magmágneses rezonanciaspektrumában különböző eltolódási jelek párként jelennek meg, a vékonyréteg-kromatogramon és a 2® HPLC vizsgálatoknál az anyag foltként, illetve csúcsként jelentkezik.
A fenti fizikai és kémiai tulajdonságok és az FR-900506 vegyület kémiai szerkeze30 tének ismeretében az FR-900525 vegyület kémiai szerkezetét a (III) képlettel ábrázolható
16-allil 1,13-dihidroxi-11 - (2- (4-hidroxi-3-metoxi-ciklohexil) -1 -metil-vinil) -22,24-dimetoxi35 - 12,18,20,26-tetrametil- 10,27,dioxa-4-aza-triciklo (23.3.1.04í)heptakoz-17-én-2,3,9,15-tetraon-nal határoztuk meg.
B.) Az FR-900520 s az FR-900523 anya40 gok előállítására az FR-900520 és/vagy FR-900523 anyagokat termelő Streptomyces hygroscipicus subsp. yakushimensís 7238 törzset használjuk. Ezt a törzset újabban izoláltuk Yakushimánál (Kagoshima prefecture,
Japán) gyűjtött talajmintából.
A Streptomyces hygroscopicus subsp. yakushimaensis 7238 törzs líofilezett mintáját FERM P-8043 szám alatt helyeztük letét50 be (letétbehelyezés időpontja: 1985, január 12) a Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology-nál (No. 1-3, Higashi 1-chome, Yatabemachi, Tsukuba-gun, Ibaraki Prefecture, Jap^n) majd letét számát 1985. október 19-én a Budapesti Egyezmény alapján átváltoztattuk FERM ΒΡ-928-ra
A találmány oltalmi köre nem korlátozódik az itt példaként leírt, FR-900520 és FR-900523 anyagokat termelő mikroorganizθθ musra, melyet csak szemléltető céllal mutatunk be. A találmány oltalmi köre kiterjed mindazokra a mutánsokra is, melyek FR900520 és FR-900523 anyag termelésére képesek, beleértve a leírt mikroorganizmus természetes és mesterséges- melyek a szokásos eljárásokkal, például röntgen besugárzással,
-7195250 ultraibolya besugárzással, N-metil-N’-nitro-N-nitrozoguanidines, 2-amino-purínos kezeléssel, stb. állíthatók elő — mutánsait.
A Streptomyces hygroscopicus subsp. yakushimaensis 7238 törzs morfológiai, biológiai, fiziológiai tulajdonságait, tenyészetének jellemzőit az alábbiakban részletezzük.
1.) Morfológiai leírás. A rendszertani vizsgálatokhoz Shirling és Gottlieb módszerét alkalmazzuk. (Shirling, E.B. és Gottlieb D., „Methods fór characterization of Streptomyces species. International Journal of Systematic Bacteriology, 16, 313—340 (1966)).
A morfológiai vizsgálatokat zablisztes agáron, élesztő- és. malátakivonatos agaron, szervetlen sókat és keményítőt tartalmazó agaron 30°C hőmérsékleten tenyésztett 14 napos tenyészeteken végezzük fény és elektron mikroszkóp segítségével. Az érett sporoforok közepesen rövidek, „retinaculiaperti és „spirales típusúak, az egyes spórafüzérekben kb. 20 spórával. A zablisztes agaron és a szervetlen sókat és keményítőt tartalmazó agaron nőtt tenyészet légmicélíumaiban higroszkópos spóratömeg található. A spórák felszínét vastag és rövid tüskék és szemölcsök teszik egyenetlenné.
2.) A tenyészet jellemzésére tíz fajta táptalajt használunk, melyeket Shirling és Gottlieb (lásd a fent említett cikket).valamint Waksman (Waksman, S.A., „The actinomycetes, 2. kötet. Classification, identification and description of genera and species. The Williams and Vilkins Co., Baltimore, 1961) ismertet.
A telepek kinövesztését 14 napos 30°C hőmérsékleten történő inkubálással végezzük. A színek megállapításához a „Guide to Color Standart“-et (Nippon Shikisai Kenkyusho kiadás, Japán) használjuk. A zablisztes agaron, élesztő- és malátakivonatos agaron, valamint a szervetlen sókat és keményítőt tar20 talmazó agaron nőtt telepek színe a szürke sorozatba tartozik. Az alkalmazott táptalajokon nem figyelhető meg oldható pigment keletkezése. Az eredményeket a 4. táblázatban foglaljuk össze.
4. Táblázat
A 7238-as törzs, a Str. antimycoticus IF0 12839 es a Str. hygroscopicus subsp. glebosus IF0 13786 tenyészetnek: jellemzése
táptalaj | 7238 | IF0 12839 | ' IF0 13786 | |
zablisztes agar | N | gyenge | gyenge f | gyenge |
L | szürkés sár- | szürkés sárgás | szürkés sárgás | |
gas barna | barna | barna | ||
F | fakó sarga | fakó sarga | fakó sarga | |
' U ' Élesztő- es malata- | 0P | nincs | nincs | nincs |
N | mérsékelt | erőteljes | mérsékelt | |
kivonatos agar | L | szürkés fe- | szürke | szürke |
F | hér f f fakó sárgás | fakó sárgás | sötét narancs | |
OP | barna nincs | barna nincs | nincs | |
szervetlen sokét és | N | mersekelt | mérsékelt | mérsékelt |
kemenyítSt tartalmazó | L | szürke-fe- | szürke | halvány szürke |
agar | F | kete fakó sárgás | sárgás szürke | fakó sárgás narancs |
OP | barna nincs | nincs | nincs | |
glükozos-aszparaginos | N | mérsékelt | mérsékelt | mérse'kelt |
agar | L | szürkés fe- | szürke | fehér |
F | hér fakó sárgás | fakó sárgás narancs | fakó sárgés narancs | |
01’ | narancs nincs | nincs | nincs | |
glicerines-aszpara- | N | mérsékelt | mérsékelt | mérsékelt |
ginos agar | L | fehér | szürke | halva'ny S2ürke |
F | sárgás szűr- | sárgás szürke | szürkés sárgás barna | |
OP | ke nincs | nincs | nincs | |
Czapek agar | N | mérsékelt | mérsékelt | mérsekelt |
L | szürkés fe- | szürkés teher | fehér | |
F | hér fakó sárgás | fakó sárgás barna | fakó sárgás barna | |
OP | barna nincs | nincs | nincs | |
tápagar | N | mérsékelt | mérsékelt | mérsékelt |
L | szürkés fe- | szürkés feher | nincs | |
F | fakó sarga | fakó sárga | fakó sargá | |
OP | nincs | nincs | nincs | |
burgonya dextrozós | N | mérsékelt | mérsékelt | mérsékelt |
agar | L | fehér, kevés | fakó vöröses barna | fakó rozsaszin-feher |
F | fakó sárgás | fakó sárgás narancs | fakó sárgás barna | |
0P | narancs nincs | nincs | nincs |
-8195250 16
4. Tablazat (folytatása)
táptalaj | 7238 | IFO 12839 | IFO 13786 | |
tirozinos agar | N | mérsékelt | mérsékelt | me'rsékelt |
L | fehér | szürkés feher | szürke - fekete | |
F | fakó sárgás barna | barna | fakó sárgás barna | |
OP | nincs | barna | nincs | |
péptón, élesztoki- | N | mérsékelt | mérsékelt | mérsékelt |
vonat és vas- | L | nincs | szürkés fehér | nincs |
tartalmú agar | F | fakó sarga | fakó sarga | színtelen |
OP | nincs | nincs | nincs |
N= növekedés, L- legmicelium tömegének színe, F= fonák oldal színe,
0P= oldható pigment
A sejtfal analízisét Becker és munkatársainak (Becker, Β., M.P. Lechevalier, R.E. Gordon és H.A. Lechevalier, „Rapid differentiation between Nocardia and Streptomyces by paper chromatography of whole cell hydrolysates, Appl.Microbiol., 12, 421—423 (1964)) és Yamaguchi T., „Comparison of the cell wall composition of morphologically distinct actinomycetes, J.Bacteriol., 89 444—453 (1965)) módszerével végezzük. A 7238-as törzs teljes sejt hidrolizátumában LL-diamino-pimelinsav mutatható ki. A törzs sejtfala ezek szerint az I. típusba tartozik.
) A 7238-as törzs biológiai és fiziológiai tulajdonságait Shirling és Gottlieb módsze20 révei (1. fent) határozzuk meg. Az eredményeket az 5. táblázatban foglaltuk össze. A növekedés hőmérsékleti tartományát és az optimális hőmérsékletet az élesztő- és malátakivonatot tartalmazó agaron határozzuk meg, 25 hőmérséklet grádiens inkubátort (Toyo Kagaku Sangyo Co., Ltd.) használva. A növekedés hőmérsékleti tartománya 18—36°C optimuma 28°C. A keményítőhidrolízis és a zselatinelfolyósítási próba pozitív. Melanoid pigment nem termelődik.
5. Táblázat
A 7238-as törzs, a Str. antimycoticus IFO 12839 és a Str. hygroscopicus subsp. glebosus IFO 13786 fiziológiai tulajdonságai fiziológiai tulajdonság növekedés h&m. tart.
’ J/ 1 optimális hőmérséklet nitrátredukcio , kemenyítohidrolizis tejkoagulacio tejpeptonizácio melanintermelés , I ' zselatinéifolyósítás Hj, S termeles Ureazaktivitas NaCI tűrés (%)
7238 | IFO 12839 | IFO 13786 |
18-36°C | 18-38°C | 16-35°C |
28°C | 28°C | 27°C |
- | - | - |
+ | + | + |
- | - | - |
- | - | + |
- | - | - |
+ | + | + |
- | - | - |
- | - | - |
7-10% | 7-10% | 5-7% |
A szénforrás-hasznosítás meghatározására Pridham és Gottlieb (Pridham, T.G. és
D.Gottlieb, „The utilization of carbon compounds by somé Actinomycetales as an aid fór species determination**, J. Bacteriol., 56, 107—114 (1948)). A növekedés 14 napon θθ 30°C hőmérsékleten történő inkubáció után határozzuk meg.
A szénforrás hasznosítására kapott eredményeinket a 6. táblázaton mutatjuk be. A 7238-as törzs hasznosítja a D-glükózt, szacharózt, tejcukrot, maltózt, D-trehalózt, 65 inozitot, inulint és szalicint.
-9195250
18
6. Tabla'zat
A 7238-as törzs, a Str. antimycoticus IFO 12839 és a Str. hygroscopicus subsp. glebosus IFO 13786 szenforras hasznosítása
r t Szenforras | 7238 | IFO 12839 | IFO 13786 |
D-Glükóz | + | + | + |
Szacharóz | + | + | + |
Glicerin | - | + | + |
D-Xiloz | - | + | + |
D-Fruktóz | - | + | |
Laktóz | + | + | - |
Maitóz | + | - | + |
Raranoz | - | + | - |
Raf f in'oz | - | + | + |
D-Galaktoz | - | •l· | + |
L-Arab inóz | - | + | + |
D-Mannoz | - | •l· | + |
D-Trehaloz | + | + | + |
Inozit | + | + | + |
D-Mannit | - | + | + |
Inul in | + | + | - |
Céllulóz | + | - | - |
Szálicin | + | + | - |
Kitin | - | - | |
Natrium-citrat | - | - | + |
Nátrium-szűke inat | - | + | |
Nátrium-acetát | - | - | - |
, i + = hasznosít + = a hasznosítás ketseges
- = nem hasznosít
A mikroszkópiái vizsgálatok és a sejtfalösszetétel analízise alapján a 7238-as törzs a Streptomyces (Waksman és Henrici 1943) nemhez tartozik.
Ezek alapján a törzset összehasonlítottuk különböző Streptomyces fajok közölt leírásaival (International Journal of Systematic Bacteriology, 18, 69—189, 279—392 (1968) és 19, 391—512 (1969); Bergy’s Manual of Determinative Bacteriology, 8. kiadás (1974)).
Az összehasonlítás eredményeként úgy találtuk, hogy a 7238- törzs a Streptomyces antimycoticus (Waksman 1957) és a Streptomyces hygroscopicus subsp. glebosus (Ohmori és munkatársai 1962.) mikroorganizmusokra emlékeztet. Ezért a 7238-as törzs tenyészetének jellemzőit összehasonlítottuk a Streptomyces antimycoticus IFO 12839 törzzsel és a Streptomyces hygroscopicus subsp. glebosus IFO 13786 törzzsel. Az eredményeket a 4., 5., és 6 táblázatban foglaltuk össze. A további összehasonlítások alapján a következő pontokban lehetett különbséget tenni a 7238-as törzs és a Streptomyces hygroscopicus subsp. glebosus IFO 13786, valamint a Streptomyces antimycoticus IFO 12839 között.
a.) A 7238-as törzs az alábbiakban különbözik a Streptomyces antimycoticus IFO 12839-től:
A tenyészetekben különbségek vannak, ha élesztő- és malátakivonatos agaron, glü45 kózos„aszparaginos agaron, glicerines-aszparaginos agaron, burgonya dexhózos agaroné s tirozinos agaron tenyésztjük őket.
A 7238-as törzs szénforrásként hasznosítja a maltózt, a Streptomyces antimycoticus
IFO 12839 viszont nem. A 7238-as törzs nem képes hasznosítani a glicerint, D-fruktózt, ramnózt, raffinózt, D-galaktózt, D-mannózt, mannitot és nátrium-szukcinátot, a Streptomyces antimycoticus IFO 12839 viszont igen.
b.) A 7238-as törzs az alábbiakban különbözik a Streptomyces hygroscopicus subsp. gelbosus IFO 13786-tól:
A tenyészetben különbség van a megnevezett mikroorganizmusok között, ha élesztőβθ és malátakivonatos agaron, burgonya dextrózos agaron vagy tirozinos agaron növesztjük őket.
A 7238-as törzs tejpeptonizációs próbája negatív, míg a Streptomyces hygroscopicus _ subsp. glebosus IFO 13786 próbája pozitív. A 7238-as törzs képes növekedni 7% feletti
-10195250 nátrium-klorid jelenlétében, míg a Streptomyces hygroscopicus subsp. glebosus IFO 13786 ilyen körülmények között nem növekszik.
A 7238-as törzs szénforrásként hasznosítja a laktózt, inulint és a szalicint, a Strep· tomyces hygroscopicus subsp. glebosus IFO 13786 erre kéj)telen. A 7238-as törzs nem tudja hasznosítani a glicerint, D-xilózt, D-fruktózt, raffinózt, D-galaktózt, D-mannózt mannitot és nátrium-szukcinátot, míg a Streptomyces hygroscopicus subsp glebosus IFO 13786 hasznosítja ezeket.
A 7238-as törzs viszont hasonló a Streptomyces hygroscopicus subsp. glebosus IFO 13786 törzshöz a zablisztes agaron vagy szervetlen sókat és keményítőt tartalmazó agaron tenyésztett telepek légmicéliumaiban levő higroszkópos spóratömeget, valamint más, morfológiai és a tenyészetekre jellemző tulajdonságaikat illetően. Ezek alapján á 7238-as törzs a Streptomyces hygroscopicus fajhoz tartozik, de különbözik a Streptomyces hygroscopicus subsp. glebosus IFO 13786-tól, noha a Streptomyces hygroscopicus fajon belül ehhez a leghasonlóbb. E tényből kiindulva a 7238-as törzset a Streptomyces hygroscopicus egy új törzsének tekintjük, és Streptomyces hygroscopicus subsp. yakushimaensis subsp. nov. elnevezéssel látjuk el, ami.arra utal, hogy a mikroorganizmust Yakushimánál gyűjtött talajmintából izoláltuk.
Az FR-900520 és az FR-900523 anyagokat az FR-900520 és/vagy FR-900523 anyagokat termelő Streptomycesek (például a Streptomyces hygroscopicus subsp. yakushimaensis 7238, FERM BP-928) tenyésztésével állítjuk elő.
Általában, az FR-900520 és/vagy FR-900523 anyagokat termelő törzseket asszimilálható szén- és nitrogénforrásokat tartalmazó vizes táptalajban tenyésztjük, előnyösen aerob körülmények között (például rázott tenyészetben, süllyesztett tenyészetben, stb.)
A táptalaj előnyös szénforrásai a szénhidrátok, például glükóz, szacharóz, laktóz, glicerin, keményítő, dextrin, stb. További szénforrás lehet a maltóz, D-trehalóz, inozit, inulin, szalicin, stb.
Előnyös nitrogénforrás az élesztőkivonat, pepton, sikérliszt, gyapotmagliszt, szójaliszt, kukoricalekvár, száraz élesztő, búzacsíra, toll-liszt, földimogyoró-liszt, stb., valamint a szervetlen és szerves nitrogénvegyületek, úgy mint az ammóniumsók (például ammónium-nitrát, ammónium-szulfát, ammónium-foszfát, stb.), karbamid, aminosavak, stb.
A szén- és nitrogénforrásoknak, noha előnyösen kombinálva használjuk őket, nem szükséges, hogy tiszta állapotban legyenek, minthogy a kevésbé tisztított anyagok nyomokban növekedési faktorokat és kívánt menynyiségű ásványi tápanyagokat is tartalmaznak.
Ha szükséges, ásványi sókat — például nátrium- vagy kalcium-karbonátot, nátrium20 vagy kálium-foszfátot, nátrium- vagy kálium-kloridot, nátrium- vagy kálium-jodidot, magnéziumsókat, rézsókat, kobaltsókat, stb.
— is adhatunk a táptalajhoz. Ha szükséges — különösen, amikor a tenyészet erősen habzik — habzásgátlókat, például folyékony paraffint, növényi olajat, ásványi olajat vagy szilikont adhatunk a tenyészethez.
Az FR-900520 és az FR-900523 nagy menynyiségben való előállításához előnyösen süllyesztett tenyészetet használunk. Kis menynyiség előállításához használhatunk rázott vagy felületi tenyészetet lombikban vagy más edényben. Amennyiben a tenyésztést nagy fermentorokban végezzük, előnyös oltóanyagként vegetatív állapotban levő tenyészetet használni, hogy ezzel elkerüljük az FR-900520 és az FR-900523 anyagok termelésekor a „lag“ fázist. Kívánatos tehát először egy viszonylag kis mennyiségű táptalajt a mikroorganizmus spóráival vagy micéliumaival beoltani és azon tenyészteni, majd az így kapott vegetatív tenyészetet oltóanyagként sterilen átvinni a nagyobb fermentorba. A vegetatív oltóanyag táptalaja megegyezik az FR-900520-at és az FR-900523-at termelő tenyészetnél használt táptalajjal vagy eltérhet attól.
A tenyészet kevertetését és levegőztetését különféle módon oldhatjuk meg. Kevertethefjük a tenyészetet propelleres keverőlapátokkal vagy hasonló mechanikai berendezéssel, a fermentor forgatásával vagy rázatásával, különféle szivattyú berendezésekkel vagy steril levegőnek a táptalajon vaió átáramoltatásával. A levegőztetést steril levegőnek a fermentleven történő átáramoltatásával végezzük.
A fermentálást általában 20 és 40°C között, előnyösen 25-35°C hőmérsékleten végezzük, 50-150 óra alatt, ami a fermentációs körülményektől és a méretektől függően változhat.
Az FR-900520 és/vagy az FR-900523 anyagok fermentléből való kinyerésénél a bioaktív anyagoknál általánosan ismert módszereket alkalmazhatjuk. Az FR-900520 és FR-900523 anyagok főként a mycéliumban találhatók, ezért a szűréssel vagy a fermentlé centrifugálásával elkülönített micéliumból nyerhetjük azokat a szokásos eljárásokkal, mint amilyen a csökkentett nyomáson történő betöményítés, fagyasztva szárítás, megfelelő oldószerrel történő extrahálás, pH beállítás, megfelelő gyantákkal (anion vagy kation cserélő, nem ionos adszorpciós gyanták, stb.) való kezelés, alkalmas adszorbenseken (aktív szén, meta-kovasav, szilikagél, cellulóz, alumínium-oxid, stb.) történő megkötés, kristályosítás, átkristájyosítás, stb.
Az FR--900520 és az FR-900523 anyagok elválaszthatók oly módon, hogy a két vegyületet tartalmazó anyagot megfelelő oldószerrel, például etil-acetáttal, n-hexánnal, stb. extraháljuk, majd a nyert oldatot például szili11
-11195250 kagél oszlopon kromatografáljuk, eluensként megfelelő szerves oldószert, például etil-acetátot, n-hexánt vagy ezek elegyét használva. Az így elválasztott FR-900520 és FR-900523 anyagokat tovább tisztíthatjuk a szokásos módszerekkel, például átkristályosítással, újra kromatografálással, HPLC-vel, stb.
Az FR-900520 fizikai és kémiai tulajdonságai:
1) alak és szín: színtelen lemezek.
2) Elemanalízis: C 64,81, H: 8,82, N 1,55%.
3) Színreakciók: pozitív reakciók: cerium-szulfátos reakció, kénsavas reakció, Ehrlich reakció, Dragendorff reakció, jódgőzös reakció, negatív: vas (111)-klori dos reakció, ninhidrines reakció, Molish reakció.
4) Oldhatóság:
oldható: metanolban, etanolban, acetonban, etil-acetátban, kloroformban, dietil-éterben és benzolban; gyengén oldódik: n-hexánban, petroléterben;
oldhatatlan: vízben.
5) Olvadáspont: Í63—165°C.
6) Fajlagos forgatás: [a]„3 = —84,1° (c=l,0, kloroform).
7) Ultraibolya elnyelési spektrum: végelnyelés.
8) Infravörös elnyélesi spektrum:.
CHC13 : 3680, 3575, 3520, 2940, max 2875, 2825, 1745, 1725,
1700, 1647, 1610, (váll) 1452, 1380, 1350, 1330, 1285, 1170, 1135, 1090, 1030, 1005, 990, 980, (váll), 960 (váll) 913,
908 (váll) cm
9) láC magmágneses rezonanciaspektrum (7. ábra), delta
(ppm | CDC13): | ||||
213,04 | (s), | 196,21 | (s), | 169,07 | (s) |
193,23 | (s), | 168,85 | (s) | ||
164,92 | (s), | 138,67 | (s), | 132,46 | (s) |
165,97 | (s), | 139,53 | (s), | 131,98 | (s) |
130,20 | (d), | 123,42 | (d), | 97,28 | (s) |
130,08 | (d), | 123,59 | (d), | 98,75 | (s) |
84,37 | (d), | 77,80 | (d), | 75,53 | (d) |
78,24 | (d), | 76,98 | (d) | ||
73,92 | (d), | 73,69 | (d), | 73,11 | (d) |
72,72 | (d) | ||||
70,11 | (d), | 57,02 | (q), | 56,60 | (q) |
69,21 | (d), | 57,43 | (q) | ||
56,23 | (q), | 56,72 | (d), | 55,10 | (d) |
55,98 | (q), | 52,91 | (d), | 54,90 | (d) |
48,90 | (t), | 40,19 | (d), | 27,67 | (t) |
48,57 | (t), | 40,63 | (d), | 26,32 | (t) |
26,51 | (d), | 24,60 | (t), | 21,19 | (t) |
22 | |||||
26,44 | (d), | 20,86 | (t) | ||
20,47 | (q), | 16,21 | (q), | 15,83 | (q) |
19,75 | (q), | 15,97 | (q), | 15,94 | (q) |
14,04 | (q), | 11,68 | (q), | 9,64 | (q) |
14,16 | (q), | 9,93 | (q) |
10) Ή magmágneses rezonanciaspektrum:
8. ábra.
11) Vékonyréteg-kromatográfia: adszorbens futtatórendszer R/ szilikagél klorofórm/metanol (20:1) 0,38 szilikagél etil-acetát 0,51
12) Az anyag jellege: semleges.
Az FR-900520 anyaggal kapcsolatban megjegyezzük, hogy a l3C és ‘H magmágneses rezonanciaspektrumában különböző kémiai eltolódású csúcsok párként jelentek meg, de a vékonyréteg-kromatogrammon egy folt, a HPLC vizsgálatában egy csúcs jelenik meg.
A fenti, fizikai és kémiai tulajdonságok alapján, valamint az FR-900506 anyag kémiai szerkezetének ismeretében, az FR-900520 anyag kémiai szerkezete a (IV) képlettel ábrázolható: 17-etil-1,14-dihidroxi-12- [2-(4-hidr-oxi-3-metoxi-ciklohexil)-l-metil-viníl]-23,25- di metoxi-. 13,19,21,27-tetrametil-l 1,28-dioxa-4-azatriciklo [24.3.1.04/9] oktakoz-18-én-2,3,10-16-tetraon.
Az FR-900523 anyag fizikai és kémiai tu-lajdonságai:
1) Alak és szín: színtelen tűk.
2) Elernanalízis: C 64,57, H:8,84, N: 1,81%
3) Színreakciók: pozitív: cérium-szulfátos reakció, kénsavas, Ehrlich reakció,, Dragendorff reakció és jódgőzös reakció.
Negatív: vas(IIl)-kloridos reakció és ninhidrines reakció.
4) Oldhatóság:
oldható: metanolban, etanolban, acetonban, etil-acetátban, kloroformban, dieitl-éterben, benzolban;
5) Olvadáspont: 152—154°C.
6) Fajlagos forgatás: [<x]£3 : —73,0° (c=0,65, kloroform)
7) Ultraibolya elnyelési spektrum: végelnyelés.
8) Infravörös elnyelési spektrum:
) CHC13 .
max
3670, | 3580, 3510, | 2930, | 2875, |
2825, | 1745, 1722, | 1 700, | 1647, |
1450, | 1380, 1350, | 1330, | 1307, |
1285, | 1170, 1135, | 1090, | 1050, |
1030, | 1000, 990, | 978, | 960, |
930, | 915, 888, | 870, | 850 cm] |
-12195250
9) 13C magmagneses rezonanciaspektrum (9. ábra), delta (ppm,
CDCI3): | |||||
213,82 | (s) , | 196,31 | (s), | 168,96 | (s), |
213,32 | (s) , | 193,34 | (s), | 168,85 | (s), |
164,84 | (s), | 137,80 | (s), | 132,89 | (s), |
165,98 | (s), | 138,41 | (s), | 131,96 | (s), |
129,62 | (d), | 124,51 | (d), | 97,13 | (s), |
130,03 | (d), | 124,84 | (d), | 98,67 | (s), |
84,38 | (d), | 76,69 | (d), | 75,45 | (d), |
78,06 | (d), | 76,91 | (d), | ||
73,89 | (d), | 73,70 | (d), | 73,09 | (d), |
73,70 | (d), | 72,84 | (d), | ||
70,40 | (d), | 56,75 | (d), | 56,93 | (τ), |
69,24 | (d), | 52,89 | (d), | 57,43 | (q), |
56,61 | (q), | 56,24 | (q), | 48,58 | (t), |
56,56 | (q), | 55,94 | (q), | 48,32 | (t), |
47,14 | (d), | 40,23 | (d), | 27,85 | (t), |
47,38 | (d), | 40,65 | (d), | 26,32 | (t), |
26,48 | (d), | 24,68 | (t), | 21,33 | (t), |
26,64 | (d), | 20,83 | (t), | ||
20,63 | (q), | 16,24 | (q), | 15,70 | (q), |
19,77 | (q), | 16,34 | (q), | 15,96 | (q), |
15,51 | (q)» | 14,31 | (q), | 9,64 | (q), |
15,96 | (q), | 14,18 | (q), | 10,04 | (q) · |
10) Ή magmágneses rezonanciaspektrum: 10. ábra.
11) Vékonyréteg-kromatográfia:
adszorbens futtató rendszer R, kloroform/metanol (20:1) 0,38 szilikagél etil-acetát 0,51.
12) Az anyag jellege: semleges.
Megjegyezzük, hogy a FR-900523 anyag 13C és 'H magmágneses rezonanciaspktrumában különféle kémiai eltolódású csúcsok párként jelentkeznek, a vékonyréteg-kromatoggrammon viszont egy foltot, a HPLC vizsgálatokban egy csúcsot ad az FR-900523 vegyület.
A fenti fizikai és kémiai tulajdonságok alapján, valamint az FR-900506 vegyület kémiai szerkezetének ismeretében az FR-900523 vegyüfet kémiai szerkezete az (V) képlettel, ábrázolható: 1,14-dihidroxi-12- [2- (4-hidroxi-3-metoxi-ciklohexil) -1 -metil-vi24 nii] -23,25-dimetoxi-13,17,19,21,27-pentametil-l 1,28-dioxa-4-azabiciklo [24.3.104,9[ oktakoz-18-én-2,3,10,16-tetraon.
A találmány (I) általános képletű vegyületei gyógyászati hatással rendelkeznek, amennyiben főleg imunszupresszív és antimikrobiális hatásuk van, és ezáltal alkalmasak az olyan folyamatok, illetve betegsé10 gek leküzdésére és megelőzésére, mint a szervek és szövetek — például szív, vese, máj, csontvelő, bőr, stb. — átültetésével szembeni ellenállás, a csontvelő átültetését követő „graft versus kost“ betegség, az autoimmun betegségek — például rheumatoid arthritis, általános lupus erythermatózus, Hashimoto-féle pajzsmirigy-gyulladás, selerosis multiplex, myasthenia gravis, I. típusú cukorbaj, ureitis, stb. — patogén mikroorganizmusok által okozott fertőző betegségek, stb.
Az alábbiakban néhány példát adunk meg a fenti triciklo-vegyületek gyógyászati hatásának vizsgálatára.
1. próba — az (1) triciklo-vegyületek szup25 resszív hatása in vitro kevert limfocita reakcióban (Mixed Lymphocyte Reaction — MLR).
Az MLR próbát mikrotiter lemezeken végezzük; az egyes tálkák 5 x 105 C57BL/6 reagáló sejtet (H-26), 5 x 105
3θ mitomicin C-vel kezelt (25 pg/ml mitomicin C oldatban 37°C hőmérsékleten 30 percig, majd háromszori mosás RPMI 1640 közeggel) BALB/C stimulátor sejtet (H-2tf) tartalmaznak 0,2 ml RPMI 1640 közegben, mely még 10% borjú embrió szérumot, 2 mM nátrium-hidrogén-karbonátot, 50 egység/ml penicillint és 50 egység/ml sztereptomicint is tartalmaz. A sejteket 37°C hőmérsékleten inkubáljuk nedves, 5% szén-dioxid cs 95% levegő összetételű légtérben 68 órán keresztül, és a sejteket összegyűjtésük előtt 4 órával 3H-timidinneI (0,5 μόί) hozzuk össze. A vizsgálandó vegyületet etanolban oldjuk, RPMI 1640 közeggel hígítjuk, és annyit adunk 4g a tenyészethez, hogy a végkoncentráció 0,1 gg/ml vagy ennél kevesebb legyen.
A kapott eredményeket a 7-10. táblázatban mutatjuk be. A találmányban szereplő triciklo-vegyületek szupresszálták az egér
MLR-t.
7. Táblázat
Az FR-900506 vegyület hatása ' az MLR-re
FR-900506 koncentráció (ng/ml)
Radioaktivitás (átlagos cpm+S.E.)
Szupresz- IC50 szió (%) , .
(mg/ml)
2,5 | 54+4 | 99,5 |
1,25 | 168+23 | 98,3 |
0,625 | 614+57 | 93,8 |
0,313 | 3880+222 | 60,9 |
0,156 | 5490+431 | 44,7 |
0,078 | 7189+365 | 27,6 |
0 | 9935+428 |
-13195250
8. Táblázat
Az FR-900520 vegyület hatása az MLR-re
FR-900520 koncentráció (ng/ml) | Radioaktivitás (átlagos cpm+S.E.) | Szupreszszió (%) | IC 5 0 (mg/ml) |
100 | 715+16 | 99,2 | |
1 0 | 515+55 | 97,8 | |
1 | 2744±527 | 88,1 | 0,38 |
0,500 | 9434+1546 | 59,2 | |
0,25 | 14987+1786 | 35,1 | |
0 | 23106+1652 | 0 |
cpm = számlálás/perc
SE = standard hiba
IC50 = koncentráció’ (50%-os gátlás)
9. Táblázat
Az FR-900523 vegyület hatása az MLR-re
FR-900523 koncentráció' (ng/ml) | Radioaktivitás (átlagos cpm+S.E.) | Szupreszszio (%) | IC50 (mg/ml) |
100 | 25+12 | 99,9 | |
10 | 156+37 | 99,3 | |
1 | 5600+399 | 75,8 | 0,5 |
0,500 | 11624±395 | 49,7 | |
0,250 | 17721+1083 | 23,3 | |
0 | 23106+1052 | 0 | |
10. Táblázat |
Az FR-900525 vegyület hatása az MLR-re | |||
FR-900525 koncent- Radioaktivitás | Szupreszszió (%) | IC50 (mg/ml) | |
ráció' (ng/ml) | (átlagos cpm+S.E.) | ||
100 | 469+56 | 97,0 | |
10 | 372+32 | 97,6 | |
5 | 828+369 | 94,7 | 1,55 |
2,5 | 3564+512 | 77,4 | |
1,2 | 10103+421 | 35,8 | |
0 | 15741+411 |
-14195250
2. próba — az (I) általános képletű vegyületek antimikrobiális hatása
Az (I) általános képletű triciklo-vegyületek antimikrobiális hatását különféle gombákkal szemben vizsgáljuk Sabouraud agaron 5 az agar hígitásos módszer felhasználásával.
A minimális gátlási koncentrációt (MIC) pg/ml-ben fejezzük ki. Az inkubációt 3Ö°C hőmérsékleten végezzük 24 órán át.
Amint a 11. és 12. táblázatból kitűnik, a találmány (I) általános képletű vegyületek antimikrobiális hatással rendelkeznek a gombákkal, például az Aspergillus fumigatus IFO 5840 és a Fusarium oxysporum IFO 15 5942-vel szemben.
11. Tablazat
Az (i) triciklo-vegyületek MIC érté- 2θ kei (jlig/ml) az Aspergillus fumigatus IFO 5840-nel szemben
Vegyület | MIC ( g/ /ml) |
FR-900506 | 0,025 |
FR-900520 | 0,1 |
FR-900523 | 0,3 |
FR-900525 | 0,5 |
12. Táblázat
Az (I) triciklo-vegyületek MIC értékei (jUg/ml) a Fusarium oxysporummal | |
szemben | |
Vegyület | MIC (jUg/ /ml) |
FR-900506 | 0,05 |
FR-900525 | 1 |
3. próba — az (I) általános képletű triciklo- vegyületek hatása a bőr-allográf túlélésre patkánynál.
Donor patkányokból (Fischer) ventrális allográfokat ültetünk át a recipiens patkányok (WKA) oldalsó, mellkasi területére. A kötést az 5. napon távolítjuk el. Az átültetett szövetet naponként megvizsgáljuk, az el-nem-fogadás kifejeződéséig, aminek ezt az állapotottekintjük, amikor az átültetett epithelium 90%-a nekrotizált.
Az FR-900506 vegyületet olívaolajban oldjuk, és az átültetés napjával kezdődően, 14 napon keresztül, naponként adjuk be intramuszkulárisan az állatoknak. Amint a 13. táblázat adataiból látható, azoknál az állatoknál, melyek 14 napon keresztül csak olívaolajat kaptak intramuszkulárisan, a bőr-allográfokat 8 napon belül visszautasította a szervezet, míg az FR-900506 vegyülettel kezelt állatoknál a bőr-allográfok túlélése határozottan megnyílt.
13. Táblázat
Az FR-900506 vegyület hatása a bor-allografok túlélésére
Dózis Állatok Bor-allográf ok túlélési ideje (nap) (mg/kg) szama kontroll
(olívaolaj) | 1 1 | 7, 7, | 7, 7, | 7, | 7, | 8, 8, | 8, | 8, 8 | |
FR-900506 | 1 | 8 | 19 19, | 19, 20 | 21, | 21, | 22, 22 | ||
3,2 | 6 | 22,23, | 23, 26, | 27, | 35 | ||||
10 | 5 | 56,61, | 82, 85, | 89 |
4. próba — az (I) általános képletű triciklo-vegyületek hatása a II. típusú, kollagénnel kiváltott izületi gyulladásra patkányoknál.
mg/ml koncentrációban kollagént oldunk 0,01 M ecetsavban. Az oldatot azonos térfogatú inkomplet Freund adjuvánsban szuszpendáljuk el. összesen 0,5 ml hideg emulziót fecskendezünk bőr alá a nőstény Lewis patkány hátának pontján és két helyen a farokba. Az FR-900506 vegyületet olívaolajban oldjuk, és szájon át adjuk be. A II. típusú kollagén azonos mennyiségével immunizált kontroll állatok csak olívaolajat kapnak szá55 jón át. Figyeljük az izületi gyulladás megjelenését.
A kapott eredményeket a 14. táblázatban mutatjuk be. Valamennyi kontroll állatnál, mely a kollagénnel történő immunizálást köqq vetően 14 napon keresztül csak olívaolajat kapott, fellépett a poliartritiszes gyulladás. Azoknál az állatoknál, melyek 14 napon át naponként részesültek FR-900506 vegyülettel történő kezelésben, az izületi gyulladás kialakulása teljesen gátolt volt a megfigyelés 65 3. hetén keresztül.
-15195250 '14. Táblázat
Az FR-900506 vegyület hatása a II. tipusu kollagénnel kiváltott izületi gyulladásra patkányoknál
Dózis (mg/ Az artritisz /kg/nap) kialakulása kontroll (olívaolaj) - 5/5
FR-900506 3,2 0/5
5. próba — az (I) általános képletű triciklo-vegyületek hatása experimentális allergiás enkefalomielitiszre (EAE) SJL/J egereknélSJL/J egerekből gerincagy-homogenizátumot készítünk. A gerincagyat befujással távolítjuk el, körülbelül azonos térfogatú vízzel keverjük össze, és 4°C hőmérsékleten homogenizáljuk. A hideg homomgenizátumot (10 mg/ml) azonos térfogatú komplett Freund adjuvánssal (CFA) emulgeáljuk el, ami 0,6 mg/ml Mycobacterium tuberculosis H37RA mikroorganizmust tartalmaz.
Az enkefalomielitisz kiváltásához 0,2 ml gerincvelő-CFA emulziót injektálunk az SJL/J egerekbe a 0. és a 13. napon. Valamennyi egeret naponta értékeljük és pontozzuk az EAE klinikai jelei alapján.
Az EAE súlyosságát a következő ismertetőjelek szerint pontozzuk:
1. fokozat — a farok tónusa csökken;
2. fokozat — bizonytalan járás;
3. fokozat — gyengeség egy vagy több végtagban;
4. fokozat — kétoldali vagy egyoldali bénulás.
Az FR-900506 vegyületet olívaolajban oldjuk, és naponként adjuk be 19 napon át az immunizáció napjától (0. nap) kezdődően. Amint a 15. táblázat adataiból kitűnik, az FR-900506 vegyület határozottan gátolja az EAE klinikai jeleinek kialakulását.
15. Táblázat
Az FR-900506 vegyület hatása az experimentális allergiás enkefalomielitiszre SJL/J egerekne'l
Kezelés Dózis Megbetegedett (mg/kg) állatok száma a 24. napon kontroll (olívaolaj) - 10/10
FR-900506 32 0/5
6. próba — az (I) általános képletű triciklo-vegyületek hatása a helyi „graft-versus-host“ reakcióra (GvHR) egereknél
C57BL donorokból gyűjtött élő lépsejteket (IxlO7 sejt) szubkután fecskendezzük BDF, egér jobb hátsó lábának talpába·, hogy ezzel kiváltsuk a helyi GvHR-t. Az állatokat 7 nappal ezt követően leöljük, és lemérjük mind a jobb (injektált mancs), mind a bal (nem-injektált) láb térdhajlati nyirokcsomóinak tömegét. A GvHR kialakulását a jobb és bal oldali nyirokcsomók tömegei közti különbséggel jellemezzük.
Az FR-900506 vegyületet olívaolajban oldjuk, és szájon keresztül adjuk be 5 napon
Az FR-900506 19 mg/kg ED50-értékkel akadályozva meg a helyi „graft-versus-host“ reakció kialakulását.
7. próba — az (I) általános képletű triciklo-vegyületek akut toxicitása ddY egereknek intraperitoneális injekcióval FR-900506, FR-900520, FR-900523 és FR-900525 vegyületet adva be, egyik esetben sem észleltünk pusztulást 100 mg/kg dózisnál.
A találmány szerinti eljárással előállítható (I) általános képletű vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények használhatók például szilárd, félszilárd vagy folyékony állapotban. A készítmények a hatóanyag mellett szerves vagy szervetlen hordozó és töltelék anyagokat is tartalmaznak, melyek alkalmasak az externális, enterális vagy parenterális alkalmazáshoz. Az aktív hatóanyagot kombinálhatjuk nem toxikus, gyógyászati szempontból alkalmazható hordozoanyagokkal tabletták, pirulák, kapszulák, kúpok, oldatok, emulziók, szuszpenziök és más formátumok kialakításához. A hordozóanyag lehet víz, glükóz, tejcukor, arabmézga, zselatin, mannitol, keményítő paszta, magnézium-triszilikáf, talkum, kukoricakeményítö, keratin, kolloid szilika, burgonyakeményítő, uraeés más anyagok, melyek felhasználhatók a szilárd, félszilárd vagy folyékony készítmények ipari előállítására. Ezenkívül a készítmények tartalmazhatnak még további adalékanyagokat, stabilizáló anyagokat, sűrűsítő anyagokat, színező és szagosító anyagokat is. A készítmények olyan mennyiségben tartalmazzák a hatóanyagokat, mely szükséges ahhoz, hogy a kívánt hatást kifejtsék a folyamatokra vagy a betegség állapotára.
Humán alkalmazásnál a készítményeket előnyösen parenterális vagy enterális adagolással alkalmazzuk. Az (I) általános képletű vegyület gyógyászatilag hatásos mennyisége a beteg állapotától, korától függően változó, napi 0,01 —1000 mg, előnyösen 0,1—500 mg, még előnyösebben 0,5—100 mg, az egyszeri bevitt dózis mennyisége 0,5,1,5, 10 50, 100, 250 és 500 mg.
Az alábbi példáknál — melyek a fentiek szemléltetésére szolgálnak — a végtermékek fizikai-kémiai állandói azonosak a leírás bevezető részében megadott adatokkal.
1. példa
A Streptomyces tsukubaensis 9993 törzset a hígitásos lemez technikával izoláltuk az alábbiak szerint.
-16195250
Egy gramm, a Toyosato-chonál (Tsukuba Gun, Ibaraki prefektdra, Japán) gyűjtött talajhoz steril kémcsőben hozzáadtunk annyi steril vizet, hogy az össztérfogat 5 ml legyen. A kémcső tartalmát 10 másodpercig kevertük vortexszel, majd 10 percre állni hagytuk. A felüluszóból hígítási sort készítettünk az egyes lépések közt 100-szoros hígítással. 0,1 ml hígított felületszót tiamin-hidrokloriddal kiegészített Czapek agarra vittük Petri csészékben (szacharóz 30 g, nátrium-cifrát 3 g, dikálium-hidrogén-foszfát 1 g, magnézium-szulfát 0,5 g, kálcium-klorid 0,5 g vas -(II)-szulfát 0,01 g, tiamin-hidroklorid 0,1 g, agar 20 g, csapvíz 1000 ml, pH-7,2), A 21 nap alatt 30°C hőmérsékleten kinőtt telepeket ferde agarra vittük [élesztő-, malátakivonatos agar (ISP-2 táptalaj), és 10 napon keresztül 30°C hőmérsékleten tenyésztettük. Az így nyert telepek közül izoláltuk a Streptomyces tsukubaensis 9993 törzset.
A fermentációhoz 160 ml, alábbi összetételű táptalajt öntünk 500 ml-es Erlenmeyer lombikba: 1 % glicerin, 1 % oldható keményítő, 0,5 % glükóz, 0,5 % gyapotmagliszí, 0,5 % szárított élesztő, 0,5 % kukorica lekvár és 0,2 % kálcium-karbonát (pH = 6,5 értékre beállítva). A lombikokat )20°C hőmérsékleten sterilezzük 30 percen keresztül. Minden egyes lombikot beoltunk egy kacsnyi Streptomyces tsukubaensis 9993 tenyészettel a ferde agárról, és körkörös rázógépen rázatjuk 4 napon át 30°C hőmérsékleten.
Húsz rázott lombikos tenyészettel beoltunk egy 200 literes fermentorban levő 150 liter táptalajt, melynek az összetétele a következő: 4,5 % oldható keményítő, í % kukoricalekvár, 1 % szárított élesztő, 0,1 % kálcium-karbonát és 0,1 % Adekanol (habzásgátlö, gyártó: Asahi Denka Co.,). A táptalajt előzőleg 120°C hőmérsékleten sterilezzük 20 percen keresztül. A fermentációt 30°C hőmérsékleten végezzük, percenként 250-es fordulatszámmal kevertetve, 150 liter/perc levegőztetés mellet.
Négynapos fermentáció után a tenyészlevet 5 kg diatómaföld segítségével megszűrjük. A kiszűrt micéliumot 50 liter metanollá extraháljuk, a kapott 50 liter extraktumot egyesítjük a fermentlé szűrletével, és 10 liter „Diaion HP-20“ (gyártó: Mitsubishi Chemical Industries Ltd.) nem ionos adszorbens gyantából készült oszlopon engedjük át. Az oszlopot 30 liter vízzel és 30 liter vizes metanollal mossuk, majd az eluálást metanollal végezzük. Az eluált csökkentett nyomáson bepároljuk, 2 liter vizes maradékhoz jutva. A maradékot 2 liter etil-acetáttal extraháljuk. Az etil-acetátos extraktumot csökkentett nyomáson olajos maradékig pároljuk. Az olajos maradékot kétszeres tömeg mennyiségű savas szilikagéllel (speciális szilikagél-12, gyártó: Fuji Devison Co.) keverjük össze, és a keverékből etil-acetáttal pépet készítünk. Az oldószert lepároljuk, a nyert száraz port 800 ml, ugyan32 ilyen szilikagélből készült oszlopra visszük, melyet n-hexánban készítünk el. Az oszlopot liter n-hexánnal, 3 liter n-hexán/etil-acetát 9:1 eleggyel (térf.), 3 liter n-hexán/etil-acetát 4:1 (térf.) eleggyel, végül 3 liter etil-acetáttal eluáljuk. A kívánt vegyületet tartalmazó frakciókat egyesítjük, és csökkentett nyomáson olajos maradékit pároljuk. A maradékot n-hexán/etil-acetát 1:1 (térf.) arányú elegyének 30 milliliterében oldjuk, és 500 ml szilikagélből (Merck Co., Ltd., szita lyukbőség: 0.070 — 0,037 mm) ugyanebben az oidószerelegyben készült oszlopot kromatografáljuk.
Az eluálást 2 liter n-hexán/etil-acetát 1:1 (térf.) és 1,5 liter n-hexán/etil-acetát 1:2 (térf.) eleggyel végezzük. Az FR-900506 vegyületet tartalmazó frakciókat egyesítjük és csökkentett nyomáson bepárolva, sárgás olajat nyerünk. Az olajos maradékot tömegének kétszeres mennyiségű savas szilikagéllel keverjük össze és etil-acetátot adunk hozzá. A nyert pépből az oldószert eltávolítva, a kapott száraz port n-hexánban készült szilikagéloszlopon kromatografáljuk, ugyancsak n-hexánnal eluálva. Az FR-900506 vegyületet tartalmazó frakciókat egyesítjük, csökkentett nyomáson bepároljuk, 1054 mg nyers FR-900506 vegyületet nyerve fehér por alakjában.
100 mg nyers terméket HPLC-vel tisztítunk tovább.
Lichroseorb Sí 60 (rnerck) oszlopot (8x x500 nm) használunk, a mozgó fázis nietilén-klorid/dioxán 85:15 (térf.) arányú elegye; átfolyási sebesség 5 ml/perc; detektálás UV detektorral, 230 nm-en. Az UV pozitív frakciókat egyesítjük és bepároljuk. A HPLC tisztítást megismételve 14 mg tisztított FR-900506 vegyületet kapunk fehér por alakjában. A nyersterméket adó szilikagéloszlopot tovább eluálva 1,5 liter etil-acetáttal és az FR-900525 vegyületet tartalmazó frakciókat egyesítve, majd csökkentett nyomáson bepárolva, 30 mg nyers FR-900525 anyagot nyerünk sárgás olaj alakjában.
2. példa
500 ml-es Erlenmeyer lombikba 100 ml alábbi összetételű táptalajt mérünk: 1% glicerin, 1% kukorica keményítő, 0,5 3 glükóz, 1% gyapottmagliszt, 0,5% kukoricalekvár, 0,5% szárított élesztő, és0,2% káícium-karbonát, pH=6,5. A lombikot 120°C hőmérsékleten sterilizáljuk 30 percig. A táptalajt kacsnyi Streptomyces tsukubaensis 9993 tenyészettel beoltjuk, és 30°C hőmérsékleten tenyésztünk napon át. A nyert tenyészetet 20 liter ugyanilyen táptalajra visszük át, amit egy 30 literes fermentorban sterileztünk előzőleg ki 120°Con 30 percen át. A tenyészetet 2 napig inkubáljuk 30°C hőmérsékleten. 16 liter tenyészettel oltunk be 1600 liter következő összetételű táptalajt: 4,5% oldható keményítő, 1% kukoricalekvár, 1% szárított élesztő, 0,1% kálcium-karbonát és 0,1% Adekanol (habzásgátló; Asahi Denko Co.), pH=6,8. A fer17
-17195250 mentálást kétköbméteres fermentorban végezzük, oltás előtt a táptalajt 120°C-on 30 percig sterilezzük. A fermentálás 4 napon át 30°C hőmérsékleten folytatjuk.
A fermentlevet 25 kg diatómaföld segítségével megszűrjük. A micéliumot 500 liter acetonnal extrahálva 500 liter extraktumhoz jutunk. A micélium extraktumát és a fermentlé 1350 liter térfogatú szűrletét egyesítjük és átvisszük 100 liter, nem ionos adszorbciós Diaion HP-20 (Mitsubishi Chemical Industries Ltd.) gyantából készült oszlopon. Miután az oszlopot 300 liter vízzel és 300 liter 50%-os vízzel acetonnal mostuk, 75% acetonnal eluálunk. Az eluátumot csökkentett nyomáson bepároljuk, amíg 300 liter vizes oldathoz jutunk. Ezt a maradékot háromszor 20 liter etil-acetáttal extraháljuk. Az etil-acetátos extraktumot csökkentett nyomáson olajos maradékig pároljuk. A maradékot kétszeres tömegmennyiségíí savas szilikagéllel keverjük el (speciális szilikagél -12; Fuji Devison Co. készítmény), és a keverékből etil-acetáttal pépet készítünk. Miután az oldószert elpároltuk, a nyert száraz port 8 liter azonos savas szilikagélből készült oszlopra visszük, amit n-hexánban készítünk el. Az oszlopot 30 liter n-hexánnal, 30 liter n-hexán/eti!-acetát 4:1 (térf.) eleggyel és 30 liter etil-acetáttal eluáljuk. A kívánt anyagot tartalmazó frakciókat egyesítjük, és csökkentett nyomáson olajos maradékig pároljuk. Az olajos maradékot kétszeres tömegmennyiségű savas szilikagéllel elkeverjük, és a keverékből etil-acetáttai pépet készítünk. Miután az oldószert elpároltuk, a kapott száraz port újból kromatografáljuk 3,5 liter savas szilikagél n-hexánban készült oszlopán. Az oszlopot 10 liter n-hexánnal, 10 liter n-hexán/etíl-acetát 4:1 (térf.) eleggyel és Í0 liter etil-acetáttal eluáljuk. A kívánt vegyületet tartalmazó frakciókat egyesítjük, és csökkentett nyomáson sárgás olajig pároljuk. Az olajos maradékot n-hexán/etil-acetáí 1:1 (téri.) elegyében oldjuk, és 2 liter szilikagélből (Merck; szita lyukbőség: 0,070—0,037 mm) ugyanezen oldószerelegyben készült oszlopra visszük. Az eluálást 10 liter n-hexán/etil-acetát 1:1 (térf.), 6 liter n-hexán/etil-acetát 1:2 (téri.) eleggyel és 6 liter etil-acetáttal végezzük.
Az FR-900506 vegyületet tartalmazó frakciókat egyesítjük, és csökkentett nyomáson bepárolva, 34 g FR-900506 vegyületet nyerünk fehér por alakjában. Ezt a fehér port acetonitrilben oldjuk, és csökkentett nyomáson betöményítjük. A betöményített oldatot egy éjszakán át 5°C hőmérsékleten tartjuk,
22,7 g prizmás kristályokat nyerve. Az anyagot acetonitrilben átkristáiyosítva 13,6 tisztított FR-900506 vegyületet kapunk színtelen prizmák alakjában.
Az FR-900525 vegyületet tartalmazó frakciókat ugyancsak egyesítve, és csökkentett nyomáson bepárolva, 314 mg FR-900525 anyagot kapunk sárgás por alakjában.
3. példa
500 ml Erlenmeyer lombikok mindegyike 160 ml alábbi összetételű táptalajt öntünk: 1% glicerin, 1% kukoricakeményítő, 0,5% glükóz, 1% gyapottmagliszt, 0,5% szárított élesztő, 0,5% kukorica lekvár és 0,2% kálcium-karbonát, pH=6,5-re beállítva. 120°C hőmérsékleten sterilizálunk 30 percen át. Az egyes lombikokat kacsnyi Streptomyces tsukubaensis 9993 törzzsel oltjuk be ferde agaros tenyészetről. 30°C hőmérsékleten tenyésztünk 4 napon át körkörös rázógépen. Tíz lombik tartalmával oltunk be 150 liter alábbi összetételű, 200 literes fermentorban levő táptalajt: 5%oldható keményítő, 0,5% föidimogyoróiiszt 0,5% szárított élesztő, 0,5% sikérlíszt, 0,1% kálcium-karbonát és 0,1% Adekanol (habzágátló; Asasi Denka Co.). A táptalajt előzőleg 120°C hőmérsékleten sterilizáljuk 20 percen át. A fermentálást 30°C hőmérsékleten végezzük 4 napon keresztül, a tenyészetet percenként 250 fordulatszámmal keverve, és levegőztetéshez percenként 150 liter levegőt használva.
A kapott fermentlevet 5 kg diatömafölddel leszűrjük. A kiszűrt micéliumot 50 liter acetonnal extraháljuk. Az 50 liter acetonos extraktumot a fermentlé leszűrésénél kapott 135 liter szűrlettel egyesítjük és 10 liter, nem ionos Diaion HP-20 (Mitsubishi Chemical Industries Ltd.) adszorpciós gyantából készült oszlopon engedjük át. Az oszlopot 30 liter vízzel, 30 liter 50%-os vizes acetonnal mossuk és 75%os vizes acetonnal eluálunk. A 30 liter eluátumot csökkentett nyomáson 2 liter vizes maradékig pároljuk. A vizes maradékot háromszor 2 liter etil-acetáttal extraháljuk. Az etií-aeetátos extraktumot csökkentett nyomáson olajos maradékig pároljuk. A maradékot kétszeres tömegmennyiségű savas szilikagéllel (speciális szilikagél-12; Fuji Devison Co. gyártmány) elkeverjük és a keverékből etil-acetátban pépet készítünk. Az oldószert elpárolva, a nyert száraz port 800 ml, ugyanilyen savas szilikagélből n-hexánban készült oszlopra visszük. Az oszlopot 3 liter n-hexánnal, 3 liter n-hexán/etil-acetát 4:1 (térf.) eleggyel és 3 liter etil-acetáttal eluáljuk. A kívánt anyagot tartalmazó frakciókat egyesítjük, és csökkentett nyomáson olajos maradékig pároljuk. Az olajos maradékot 30 ml n-hexán/etil-acetát 1:1 elegyben oldjuk, és szilikagélen (Merck, szita lyukbőség 0,070— 0,037 mm) kromatografáljuk. Az oszlopot ugyanebben az oldószerelegyben készítjük el 500 ml szilikagélből. Az eluálást 2 liter n-hexán/etil-acetát 1:1 (térf.) eleggyel, 1,5 liter n-hexán/etil-acetát 1:2 eleggyel és 1,5 liter etil-acetáttal végezzük.
Az FR-900506 vegyületet tartalmazó frakciókat egyesítjük, és csökkentett nyomáson bepárolva, 3 g FR-900506 vegyületet nyerünk sárgás por alakjában.
Az FR-900525 vegyületet tartalmazó frakciókat egyesítjük, és csökkentett nyomáson olajos maradékig pároljuk. Az olajos mara-18195250 dékot újra kromatografáljuk szilikagélen, sárga olajat kapva. Az olajos maradékot kétszeres tömegmennyiségű savas szilikagéllen keverjük össze, a keverékből etil-acetáttal pépet készítünk. Az oldószert elpárolva, száraz port kapunk, amit 100 ml savas szilikagélből n-hexánban készült oszlopra viszünk és ugyancsak n-hexánnal eluálunk. A kívánt anyagot tartalmazó frakciókat egyesítjük, és csökkentett nyomáson bepároljuk, 380 mg FR-900525 vegyülethez jutva. A sárgás port 5 ml n-hexán/etil-acetát 1:2 (térf.) elegyben oldjuk, és ugyanebben az oldószerelegyben 100 ml savas szilikagélből (speciális szilikagél-922; Fuji Devison Co. készítmény) készült oszlopra visszük. Az eluálást etil-acetáttal végezzük. Az aktív frakciókat egyesítjük, csökkentett nyomáson bepároljuk, 230 mg tisztított FR-900525 vegyületet nyerve fehér por alakjában.
4. példa
A Streptomyces hygroscopicus subsp. yakushimaensis 7238 törzs izolálásakor kb. 1 g Yakushimanál — Kagoshima prefektúra, Japán — gyűjtött talajmintát steril vízzel 5 ml össztérfogatra töltöttünk fel. A keveréket 10 másodpercig keverjük, majd 10 percig állni hagytuk. A felüluszóból hígítási sort készítettünk, az egyes fokozatok közt 100szoros hígítást alkalmazva. A hígított felüluszóból 0,1 ml-t tiamin-hidrokloriddal kiegészített Czapek agaron (30 g szacharóz, 3 g nátrium-nitrát, 1 g dikálium-hidrogén-foszfát, 0,5 g magnézium-szulfát, 0,5 g kálium-klorid. 0,01 g vas(II)-szulfát, 0,1 g tiamin-hidroklorid, 20 g agar, 1000 ml csapvíz, pH—7,2) szélesztetünk Petri csészében. A 21 napos 30°C hőmérsékleten történő tenyésztés után a telepeket ferde agarra vittük (élesztő- és malátakivonatos agar, ISP-2), és 30°C hőmérsékleten tenyésztettünk ki 10 napon keresztül. Az izolált telepek között találtuk a Streptomyces hygroscopicus subsp. yukashimaensis 7238 törzset.
500 ml-es Erlenmeyer lombikok mendegyikébe 160 ml alábbi összetételű táptalaj! öntünk: 1% glicerin, 1% oldaható keményítő, 0,5% glükóz, 0,5% gyapotmagliszt, 0,5% szárított élesztő, 0,5% kukoricalekvár és 0,2% kálcium-karbonát; pH=6,5 értékre beállítva. A táptalajokat 120°C hőmérsékleten 30 percen át sterilezzük. Az egyes lombikokat kacsnyi Streptomyces hygroscopicus szubsp. yakushimaensis .7238 tenyészettel beoltjuk és körkörös rázógépen 30°C hőmérskéleten tenyésztjük 4 napon át. 20 lombik tenyészetével 150 liter alábbi összetételű táptalajt oltunk be: 4,5% glükóz, 1% kukoricalekvár, szárított élesztő, 1 % sikérliszt, 0,5% búzacsíra, 0,1% kálcium-karbonát 0,1% Adekanol (habzásgátló, Asahi Denka Co. készítmény). A táptalajt 200 literes fermentorban sterilezzük 120°C hőmérsékleten 20 percen át. A fermentációt 30°C hőmérsékleten végezzük 4 napon keresztül. A tenyészlevet percen36 ként 250-es fordulatszámmal kevertetjük, 150 liter/perc levegőztetés mellett.
A kapott fermentlevet 5 kg diatómafölddel leszűrjük, a kiszűrt micéliumot 50 liter acetonnal extraháljuk. Az 50 liter acetonos extraktumot a fermentlé szűrésekor kapott 135 liter szurlettel egyesítjük, és 10 liter, nem ionos Diaion HP-20 (Mitsubshi Chemical Industies Ltd.) adszorbens gyantábó.l készült oszlopon engedjük át. 30 liter vízzel és 30 liter acetonnal való mosás után, az oszlopot acetonnal eluáljuk. Az eluátumot csökkentett nyomáson 2 liter vizes maradékig pároljuk. A vizes maradékot 4 liter etil-acetáttal extraháljuk. Az etil-acetátos extraktumot csökkentett nyomáson olajos maradékig pároljuk. A maradékot kétszeres tömegmennyiségű savas szilikagéllel )speciális szilikagél-12, Fuji Devison Co. készítmény) keverjük el, és a keverékből etil-acetáttal pépet készítünk. Az oldószert elpárolva, száraz port kapunk, amit 800 ml azonos savas szilikagélből n-hexánban készült oszlopra viszünk. Az oszlopot 3 liter n-hexánnal, 3-liter n-hexán/ /etil-acetát 4:1 (térf.) eleggyel és 3 liter etilacetáttal fejlesztjük ki. Az FR-900520 és az FR-900523 vegyületet tartalmazó frakciókat egyesítjük, és csökkentett nyomáson olajos maradékig pároljuk. A maradékot n-hexán/ /etil-acetát 1:1 (térf.) elegyben oldjuk, és 1000 ml szilikagélből (Merck, szita lyukbőség: 0,200—0,070 mm) azonos oldószerelegyben készült oszlopra visszük. A kromatografálást 3 liter n-hexán/etil-acetát 1:1,3 liter n-hexán/ /etil-acetát 1:2 (térf.) eleggyel és 3 liter etil-acetáttal végezzük. A kívánt anyagokat tartalmazó frakciókat egyesítjük, csökkenteti nyomáson bepároljuk, 4,5 g sárgás port nyerve. A port 20 ml metanolban oldjuk és az oldathoz 10 ml vizet keverünk. Az oldatot 500 ml fordított fázisú „YMC“ gélből (60— 200 mesh, Yamamura Chemical Institute) metanol/víz 4:1 (térf.) elegyében készült oszlopon kromatografáljuk.
Az FR-900520 vegyületet tartalmazó frakciókat egyesítjük, csökkentett nyomáson bepároljuk, 1,8 g nyers FR-900520 terméket nyerünk sárgás por alakjában. A port kis menynyiségű dietil-éterben oldjuk. Miután egy éjszakán állni hagytuk, a kivált kristályokat szűréssel összegyűjtjük, dietil-éterrel mossuk, majd csökkentett nyomáson szárítjuk. Dietiléterben átkristályosítva az anyagot, 600 mg tisztított FR-900520 vegyületet kapunk színtelen lapok alakjában.
A fordított fázisú szilikagélen való kromatografálást ugyanezzel az oldószerrendszerrel végezzük, és az FR-900523 vegyületet tartalmazó frakciókat egyesítjük, csökkentett nyomáson bepároljuk 0,51 g nyers FR-900523 terméket nyerve sárgás por alakjában. A nyersterméket 3 ml acetonitrilben oldjuk és az oldatot 70 ml, fordított fázisú „YMC“ szilikagélből acetonitril (tetrahidrofurán) 50 mM foszfát puffer (pH= 2,0) 3:2:5 (térf.) elegyben készült oszlopra visszük és ugyan19
-19195250 ezzel az oldószereleggyel eluálunk. A kívánt anyagot tartalmazó frakciókat egyesítjük, és etil-acetáttal extraháljuk. Az extraktumot csökkentett nyomáson bepárolva, 190 mg sárgás fehér porhoz jutunk. Á sárgás fehér port ismét kromatografáljuk fordított fázisú „YMC“ szilikagélen, 80 mg fehér port kapva. Ezt kevés dietil-éterben oldjuk, egy éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk és így 56 mg kristályos anyagot nyerünk. Dietil-éterben történő -átkristályosítás után 34 mg FR-900523 anyagot kapunk színtelen tűk alakjában.
5. példa g, az 1. példában kapott nyers FR-900506 anyagot (fehér por) 5 ml acetonitrilben oldjuk, és nagynyomású folyadékkromatografálásnak (HPLC) vetjük alá, shimazu LC4A-t (Shimazu Seisaku-sho) használva. YMC-S343 (CDS) (Shimakyu Co., Ltd.) gyantával acéloszlopot (25 mm belső átmérő, 250 mm hosszúság) alkalmazunk 12 ml/perc átfolyási sebességgel. A mozgófázis: 28% acetonitril, 10% n-butanol, 0,075% foszforsav, 3,75 mM nátrium-dodecil-szulfát (SDS) vizes elegye. A detektálást Hitachi UV-detektorral végezzük 210 nm-en. Egy alkalommal 100 μΐ mintát injektálunk, és a kromatografálást ötvenszer megismételjük, azaz az egész anyagunkat rávisszük az oszlopra. A 85-90 perc retenciós idejű eluátumokat összegyűjtjük, és azonos térfogatú (3,6 liter) etil-acetáttal extraháljuk. Az etil-acetátos fázist elválasztjuk. 2 liter 1 %-os nátrium-hidrogén-karbonát vizes oldattal mossuk, és csökkentett nyomáson kis térfogatra pároljuk. A betöményített oldatból kikristályosodó SDS-t szűréssel eltávolítjuk. A bepárlás után kapott port 100 mg/ml koncentrációban acetonitrilben oldjuk, és újabb HPLC tisztításnak vetjük alá. A mozgó fázis: 12,5% acetonitril, 9,75% n-butanol, 0,075% foszforsav, 3,75 mM SDS vizes elegye. Az átfolyási sebesség 10 ml/perc. A 131 —143 perc retenciós idejű frakciókat egyesítjük, és azonos térfogatú etil-acetáttal extraháljuk. A szerves fázist elválasztjuk, %-os nátrium-hidrogén-karbonát vizes oldattal mossuk és csökkentett nyomáson kis térfogatra pároljuk. A kikristályosodott SDS-t szűréssel eltávolítjuk.
A bepárlási maradékként kapott nyers port kis térfogatú etil-acetátban oldjuk, 10 ml szilikagélből (Kiesel gél, 230—400 mesh, Merck. Co., Ltd.) készült oszlopra visszük. Az oszlopot 30 ml n-hexán/etil-acetát, 1:1 eleggyel és 60 ml n-hexán/etil-acetát, 1:2 arányú eleggyel mossuk. Az elúciót etil-acetáttal végezzük, 3 ml-es frakciókat gyűjtve. A 18—24. frakciókat egyesítjük, csökkentett nyomáson szárazra párolva, 24 mg FR-900520 vegyülethez jutunk.
Claims (6)
1. Eljárás (I) általános képletű vegyületek előállítására — ahol a képletben 20
R3 jelentése metil-, etil- vagy allilcsoport; n jelentése 1 vagy 2, azzal a feltétellel, hogy R3 jelentése allilcsoport, ha n értéke 1, azzal jellemezve, hogy
a) olyan (I) általános képletű vegyületek előállítására, ahol R3 allilcsoport és π értéke 2 (FR-900506), ahol R3 etilcsoport és n értéke 2 (FR-900520), és/vagy ahol R3 allilcsoport és n értéke 1 (FR-900525), a Streptomyces tsukubaensis FERM-BP-927 törzset, ennek az FR-900506, FR-900520 és/vagy FR-900525 anyagokat termelő valamely mutánsát vagy variánsát táptalajon tenyésztjük, és a termékeket a tenyészléből ismert módon kinyerjük; vagy
b) olyan (I) általános képletű vegyületek előállítására, ahol R3 etilcsoport és n értéke 2 (FR-900520), és/vagy ahol R3 metilcsoport és n értéke 2 (FR-900523), a Streptomyces hygroscopicus, subsp. yakushimaensis FERMBP-928 törzset, ennek FR-900520 és/vagy FR-900523 anyagokat termelő valamely mutánsát vagy variánsát táptalajon tenyésztjük, és a termékeket a tenyészléből ismert módon kirtyerjük.
(Elsőbbsége: 1985.12.02.)
2. Az 1. igénypont szerinti eljárás (I) általános képletű vegyületek előállítására — ahol a képletben
R3 jelentése metil-, vagy allilcsoport; n jelentése 1 vagy 2, azzal a feltétellel, hogy R3 jelentése allilcsoport, ha n értéke 1, azzal jellemezve, hogy
a) olyan (1) általános képletű vegyületek előállítására, ahol R3 allilcsoport és n értéke 2 (FR-900506), és/vagy ahol R3 allilcsoport és n értéke 1 (FR-900525), a Streptomyces tsukubaensis FERM-BP-927 törzset, ennek az FR-900506 és/vagy FR900525 anyagokat termelő valamely mutánsát vagy variánsát táptalajon tenyésztjük, és a termékeket a tenyészléből ismert módon kinyerjük; vagy
b) olyan (I) általános képletű vegyület előállítására, ahol R3 metilcsoport, n értéke 2 (FR-900523), a Streptomyces hygroscopicus, subsp. yakushimaensis FERM-BP-928 törzset, ennek FR-900523 anyagot termelő valamely mutánsát vagy variánsát táptalajon tenyésztjük, és a terméket a tenyészléből ismert módon kinyerjük.
(Elsőbbsége: 1985.12.02.)
3. A 2. igénypont szerinti eljárás olyan (I) általános képletű vegyület előállítására, ahol R3 allilcsoport és n értéke 2 (FR-900506), azzal jellemezve, hogy a Streptomyces tsukubaensis FERM BP-927 törzset, ennek FR-900506 anyagot termelő mutánsát vagy variánsát táptalajon tenyésztjük, és a terméket tenyészléből ismert módon kinyerjük.
(Elsőbbsége: 1984.12.03.)
-20195250
4. Az 1. igénypont szerinti eljárás olyan (I) általános képletű vegyület előállítására, ahol R3 etilcsoport és n értéke 2 (FR-900520), és ahol R3 metilcsoport és n értéke 2 (FR-900523), azzal jellemezve, hogy a Streptomyces hygroscopicus subsp. yakushimaensis FERM BP-928 törzset, ennek FR-900520 és/vagy FR-900523 anyagot termelő mutánsát vagy variánsát táptalajon tenyésztjük, és a terméket a tenyészléből ismert módon kinyerjük.
(Elsőbbsége: 1985.02.05.)
5. A 2. igénypont szerinti eljárás olyan (I) általános képletű vegyületek előállítására, ahol R3 allilcsoport és n értéke 2 (FR-900506), és ahol R3 allilcsoport és n értéke 1 (FR5 -900525), azzal jellemezve, hogy a Streptomyces tsukubaensis FERM BP-927 mikroorganizmust, ennek FR-900506 és/vagy FR-900525 anyagot termelő mutánsát vagy
10 variánsát táptalajon tenyésztjük és a termékeket a tenyészléből ismert módon kinyerjük.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB848430455A GB8430455D0 (en) | 1984-12-03 | 1984-12-03 | Fr-900506 substance |
GB858502869A GB8502869D0 (en) | 1985-02-05 | 1985-02-05 | Ws 7238 substances |
GB858508420A GB8508420D0 (en) | 1985-04-01 | 1985-04-01 | Fr-900506 & fr-900525 substances |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
HUT41842A HUT41842A (en) | 1987-05-28 |
HU195250B true HU195250B (en) | 1988-04-28 |
Family
ID=27262535
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
HU854600A HU195250B (en) | 1984-12-03 | 1985-12-02 | Process for preparing tricydlic macrolides |
Country Status (24)
Country | Link |
---|---|
US (15) | US4894366A (hu) |
EP (1) | EP0184162B1 (hu) |
JP (6) | JPH0720970B2 (hu) |
KR (5) | KR930010704B1 (hu) |
CN (1) | CN1013687B (hu) |
AT (1) | ATE104984T1 (hu) |
AU (1) | AU592067B2 (hu) |
CA (1) | CA1338491C (hu) |
CY (1) | CY1912A (hu) |
DE (2) | DE3587806T2 (hu) |
DK (1) | DK169550B1 (hu) |
ES (1) | ES8705038A1 (hu) |
FI (2) | FI87803C (hu) |
GR (1) | GR852904B (hu) |
HK (1) | HK18596A (hu) |
HU (1) | HU195250B (hu) |
IE (1) | IE62865B1 (hu) |
IL (2) | IL77222A (hu) |
LU (1) | LU90317I2 (hu) |
MX (1) | MX9202943A (hu) |
NL (1) | NL960023I2 (hu) |
NO (1) | NO168372C (hu) |
NZ (1) | NZ214407A (hu) |
PT (1) | PT81589B (hu) |
Families Citing this family (312)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4894366A (en) * | 1984-12-03 | 1990-01-16 | Fujisawa Pharmaceutical Company, Ltd. | Tricyclo compounds, a process for their production and a pharmaceutical composition containing the same |
US5254562A (en) * | 1984-12-03 | 1993-10-19 | Fujisawa Pharmaceutical Company, Ltd. | Tricyclo compounds, a process for their production and a pharmaceutical composition containing the same |
US5266692A (en) * | 1984-12-03 | 1993-11-30 | Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. | Tricyclo compounds, a process for their production and a pharmaceutical composition containing the same |
GB8608080D0 (en) * | 1986-04-02 | 1986-05-08 | Fujisawa Pharmaceutical Co | Solid dispersion composition |
ES2060621T3 (es) * | 1987-06-05 | 1994-12-01 | Fujisawa Pharmaceutical Co | Anticuerpos anti-sustancia fr-900506 y metodo de inmunoensayo enzimatico altamente sensible. |
DE3737523A1 (de) * | 1987-11-05 | 1989-05-18 | Bayer Ag | Verwendung von substituierten hydroxypiperidinen als antivirale mittel |
DE3838035C2 (de) * | 1987-11-09 | 1994-03-24 | Sandoz Ag | Neue Verwendung von 11,28-dioxa-4-azatricyclo[22.3.1.O·4··,··9·]octacos-18-en-Derivaten |
AT400808B (de) * | 1987-11-09 | 1996-03-25 | Sandoz Ag | Verwendung von tricyclischen verbindungen zur herstellung von topischen arzneimitteln |
DE3844904C2 (de) * | 1987-11-09 | 1997-01-30 | Sandoz Ag | Neue Verwendung von 11,28-Dioxa-4-azatricyclo-[22.3.1.0·4·,·9·]octacos-18-en-Derivaten |
US5366971A (en) * | 1987-11-09 | 1994-11-22 | Sandoz Ltd. | Use of 11,28-dioxa-4-azatricyclo[22.3.1.04,9 ]octacos-18-ene derivatives and pharmaceutical compositions containing them |
GB2212061B (en) * | 1987-11-09 | 1991-08-28 | Sandoz Ltd | Topical compositions comprising 11,28-dioxa-4-azatricyclo [22.3.1.0(4,9)] octacos-18-ene derivatives |
GB8728820D0 (en) * | 1987-12-09 | 1988-01-27 | Fisons Plc | Compounds |
JP2799208B2 (ja) | 1987-12-09 | 1998-09-17 | フアイソンズ・ピーエルシー | マクロ環状化合物 |
AT407957B (de) * | 1987-12-17 | 2001-07-25 | Novartis Erfind Verwalt Gmbh | Neue verwendung von 11,28-dioxa-4-azatricyclo- (22.3.1.04,9)octacos-18-en-derivaten und sie enthaltende pharmazeutische zubereitungen |
EP0323865A1 (en) * | 1988-01-07 | 1989-07-12 | Merck & Co. Inc. | Novel immunosuppressant agent |
US4981792A (en) * | 1988-06-29 | 1991-01-01 | Merck & Co., Inc. | Immunosuppressant compound |
DE68921934T2 (de) * | 1988-06-29 | 1995-10-19 | Merck & Co Inc | Immunsuppressives Agens. |
US5290772A (en) * | 1988-06-29 | 1994-03-01 | Merck & Co., Inc. | Immunosuppressant agent |
ATE131536T1 (de) * | 1988-08-01 | 1995-12-15 | Fujisawa Pharmaceutical Co | Fr-901154- und fr-901155-derivate, verfahren zu ihrer herstellung |
US5202258A (en) * | 1988-08-05 | 1993-04-13 | Merck & Co., Inc. | Immunosuppressant-producing culture |
EP0356399A3 (en) * | 1988-08-26 | 1991-03-20 | Sandoz Ag | Substituted 4-azatricyclo (22.3.1.04.9) octacos-18-ene derivatives, their preparation and pharmaceutical compositions containing them |
EP0358508A3 (en) * | 1988-09-08 | 1991-03-20 | Merck & Co. Inc. | Novel immunosuppressant compound |
CA1316916C (en) * | 1988-10-12 | 1993-04-27 | David Askin | Hydroxide mediated fk-506 rearrangement product |
DE68904037T2 (de) * | 1988-10-12 | 1993-06-03 | Merck & Co Inc | Verfahren zur umlagerung von fk-506 unter beteiligung von hydroxid. |
US4980466A (en) * | 1988-10-12 | 1990-12-25 | Merck & Co., Inc. | Hydroxide mediated FK-506 rearrangement product |
CH678855A5 (hu) * | 1988-11-29 | 1991-11-15 | Sandoz Ag | |
US5268370A (en) * | 1989-01-13 | 1993-12-07 | Merck & Co., Inc. | Microbial transformation product of L-679,934 |
EP0378320A3 (en) * | 1989-01-13 | 1990-11-28 | Merck & Co. Inc. | Microbial transformation product |
US4975372A (en) * | 1989-01-13 | 1990-12-04 | Merck & Co., Inc. | Microbial transformation product of L-683,590 |
EP0378317A3 (en) * | 1989-01-13 | 1990-11-28 | Merck & Co. Inc. | Microbial transformation product of l-679,934 |
EP0388152B1 (en) * | 1989-03-15 | 1994-10-12 | Merck & Co. Inc. | Process for producing an immunosuppressant agent (demethimmunomycin) using a mutant strain of a microorganism |
US5272068A (en) * | 1989-03-15 | 1993-12-21 | Merck & Co., Inc. | Process for producing immunosuppressant agent L-683942 by fermentation |
DE69015393T2 (de) * | 1989-03-15 | 1995-06-01 | Merck & Co Inc | Immunosuppressives Mittel. |
US5155228A (en) * | 1989-03-23 | 1992-10-13 | Merck & Co., Inc. | FK-506 C10-C18 process intermediates |
US4940797A (en) * | 1989-03-23 | 1990-07-10 | Merck & Co., Inc. | Process for synthesis of FK-506 C10-C18 intermediates |
US5068323A (en) * | 1989-04-21 | 1991-11-26 | Merck & Co., Inc. | Thermally re-arranged FK-506 derivatives having immunosuppressant activity |
CA2014841A1 (en) * | 1989-04-21 | 1990-10-21 | Byron H. Arison | Macrolides having immunosuppressive activity |
US5057608A (en) * | 1989-04-21 | 1991-10-15 | Merck & Co., Inc. | Immunoregulants, immunosuppressants, process to make ring expanded macrolide related to FK-506/FK-520 |
US5270187A (en) * | 1989-05-05 | 1993-12-14 | Merck & Co., Inc. | Microbial transformation product |
JPH0368583A (ja) * | 1989-05-05 | 1991-03-25 | Merck & Co Inc | 新規微生物変換物質 |
US4987139A (en) * | 1989-05-05 | 1991-01-22 | Merck & Co., Inc. | FK-520 microbial transformation product |
IE64214B1 (en) * | 1989-06-06 | 1995-07-26 | Fujisawa Pharmaceutical Co | Macrolides for the treatment of reversible obstructive airways diseases |
CA2018710A1 (en) * | 1989-06-13 | 1990-12-13 | Shieh-Shung T. Chen | L-683,590 microbial transformation product |
US5138052A (en) * | 1989-06-13 | 1992-08-11 | Merck & Co., Inc. | L-683,590 microbial transformation product |
JPH04500372A (ja) * | 1989-06-14 | 1992-01-23 | サンド・リミテッド | 異種原子含有三環式化合物 |
US5235066A (en) * | 1989-06-30 | 1993-08-10 | Merck & Co., Inc. | FK-506 type macrolide intermediate |
US5164525A (en) * | 1989-06-30 | 1992-11-17 | Merck & Co., Inc. | Synthetic process for fk-506 type macrolide intermediates |
EP0413532A3 (en) * | 1989-08-18 | 1991-05-15 | Fisons Plc | Macrocyclic compounds |
WO1991002736A1 (en) * | 1989-08-18 | 1991-03-07 | Fisons Plc | Macrocyclic compounds |
US5011943A (en) * | 1989-08-28 | 1991-04-30 | Merck Frosst Canada, Inc. | FK-506 C10 -C24 process intermediates |
GR1001225B (el) * | 1989-09-14 | 1993-06-30 | Fisons Plc | Νέαι μακροκυκλικαί ενώσεις και νέα μέ?οδος χρήσεως τους. |
US5215995A (en) * | 1989-10-16 | 1993-06-01 | Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. | Hair revitalizing agent |
ES2077663T3 (es) * | 1989-11-09 | 1995-12-01 | Sandoz Ltd | Compuestos triciclicos que contienen heteroatomos. |
US5208228A (en) * | 1989-11-13 | 1993-05-04 | Merck & Co., Inc. | Aminomacrolides and derivatives having immunosuppressive activity |
IE904050A1 (en) * | 1989-11-13 | 1991-05-22 | Merck & Co Inc | Aminomacrolides and derivatives having immunosuppressive¹activity |
GB8925797D0 (en) * | 1989-11-15 | 1990-01-04 | Fisons Plc | Compositions |
EP0444829A3 (en) * | 1990-02-27 | 1992-06-03 | Fisons Plc | Immunosuppressive compounds |
US5260301A (en) * | 1990-03-01 | 1993-11-09 | Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. | Pharmaceutical solution containing FK-506 |
US5064835A (en) * | 1990-03-01 | 1991-11-12 | Merck & Co., Inc. | Hydroxymacrolide derivatives having immunosuppressive activity |
JPH05504956A (ja) * | 1990-03-12 | 1993-07-29 | 藤沢薬品工業株式会社 | トリシクロ化合物 |
US5296489A (en) * | 1990-03-13 | 1994-03-22 | Fisons | Immunosuppressive macrocyclic compounds |
EP0594600A1 (en) * | 1990-03-13 | 1994-05-04 | FISONS plc | Immunosuppressive macrocyclic compounds |
EP0455427A1 (en) * | 1990-04-30 | 1991-11-06 | Merck & Co. Inc. | Deoxymacrolide derivatives having immunosuppressive activity |
WO1991017754A1 (en) * | 1990-05-11 | 1991-11-28 | Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. | Methods for treating and preventing inflammation of mucosa and blood vessels using fk 506 and related compounds |
US5643901A (en) * | 1990-06-11 | 1997-07-01 | Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. | Medicament for treating idiopathic thrombocytopenic purpura |
WO1991019495A1 (en) * | 1990-06-11 | 1991-12-26 | Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. | Use of a macrolide compound such as fk 506 for manufacturing a medicament for treating idiopathic thrombocytopenic purpura and basedow's disease |
US5210030A (en) * | 1990-06-25 | 1993-05-11 | Merck & Co., Inc. | Process for selectively acylating immunomycin |
US5190950A (en) * | 1990-06-25 | 1993-03-02 | Merck & Co., Inc. | Antagonists of immunosuppressive macrolides |
US5342935A (en) * | 1990-06-25 | 1994-08-30 | Merck & Co., Inc. | Antagonists of immunosuppressive macrolides |
CA2044846A1 (en) * | 1990-06-25 | 1991-12-26 | Thomas R. Beattie | Antagonists of immunosuppressive macrolides |
GB9014136D0 (en) * | 1990-06-25 | 1990-08-15 | Fujisawa Pharmaceutical Co | Tricyclo compounds,a process for their production and a pharmaceutical composition containing the same |
MY110418A (en) * | 1990-07-02 | 1998-05-30 | Novartis Ag | Heteroatoms-containing tricyclic compounds. |
GB9014681D0 (en) * | 1990-07-02 | 1990-08-22 | Fujisawa Pharmaceutical Co | Tricyclo compounds,a process for their production and a pharmaceutical composition containing the same |
EP0466365A3 (en) * | 1990-07-03 | 1992-04-15 | Merck & Co. Inc. | Novel immunosuppressant fermentation products of a microorganism |
GB2245891A (en) * | 1990-07-09 | 1992-01-15 | Fujisawa Pharmaceutical Co | Tricyclo compounds |
GB2246350A (en) * | 1990-07-23 | 1992-01-29 | Fujisawa Pharmaceutical Co | Tricyclo compounds |
US5089517A (en) * | 1990-08-03 | 1992-02-18 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Neuroprotection by indolactam v and derivatives thereof |
AU8394291A (en) * | 1990-08-18 | 1992-03-17 | Fisons Plc | Macrocyclic compounds |
GB2247620A (en) * | 1990-09-07 | 1992-03-11 | Fujisawa Pharmaceutical Co | The use of macrolide compounds for cytomegalovirus infection |
CA2051872A1 (en) * | 1990-09-24 | 1992-03-25 | Kevin M. Byrne | Directed biosynthesis process for prolyl-immunomycin |
GB2248184A (en) * | 1990-09-28 | 1992-04-01 | Fujisawa Pharmaceutical Co | New use of macrolide compounds for active oxygen-mediated diseases |
US5143918A (en) * | 1990-10-11 | 1992-09-01 | Merck & Co., Inc. | Halomacrolides and derivatives having immunosuppressive activity |
US5233036A (en) * | 1990-10-16 | 1993-08-03 | American Home Products Corporation | Rapamycin alkoxyesters |
US5348966A (en) * | 1990-10-24 | 1994-09-20 | Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. | Method for treating pyoderma and Sezary's syndrome using FK 506 and related compounds |
CA2054128A1 (en) * | 1990-10-29 | 1992-04-30 | Kevin M. Byrne | Process for the production of analogues of immunomycin |
PH31204A (en) * | 1990-11-02 | 1998-05-05 | Fujisawa Pharmaceutical Co | Pharmaceutical composition. |
CA2054983A1 (en) * | 1990-11-08 | 1992-05-09 | Sotoo Asakura | Suspendible composition and process for preparing the same |
GB2249787A (en) * | 1990-11-19 | 1992-05-20 | Fujisawa Pharmaceutical Co | Lactone compounds |
GB9027471D0 (en) * | 1990-12-19 | 1991-02-06 | Fujisawa Pharmaceutical Co | Novel compound |
US5194378A (en) * | 1991-01-28 | 1993-03-16 | Merck & Co., Inc. | Process for producing fk-506 |
US5116756A (en) * | 1991-01-28 | 1992-05-26 | Merck & Co., Inc. | Process for producing FK-506 |
WO1992013862A1 (en) * | 1991-02-05 | 1992-08-20 | Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. | Lactone compounds |
US5147877A (en) * | 1991-04-18 | 1992-09-15 | Merck & Co. Inc. | Semi-synthetic immunosuppressive macrolides |
WO1992019278A1 (en) * | 1991-04-26 | 1992-11-12 | Kurume University | Use of macrolide compounds for eye diseases |
US5250678A (en) * | 1991-05-13 | 1993-10-05 | Merck & Co., Inc. | O-aryl, O-alkyl, O-alkenyl and O-alkynylmacrolides having immunosuppressive activity |
US5262533A (en) * | 1991-05-13 | 1993-11-16 | Merck & Co., Inc. | Amino O-aryl macrolides having immunosuppressive activity |
US5162334A (en) * | 1991-05-13 | 1992-11-10 | Merck & Co., Inc. | Amino O-alkyl, O-alkenyl and O-alkynlmacrolides having immunosuppressive activity |
US5565560A (en) * | 1991-05-13 | 1996-10-15 | Merck & Co., Inc. | O-Aryl,O-alkyl,O-alkenyl and O-alkynylmacrolides having immunosuppressive activity |
CA2071066A1 (en) * | 1991-06-19 | 1992-12-20 | Ali Shafiee | Fk-900520 enzymatic and/or microbial methylation products |
US5225403A (en) * | 1991-06-25 | 1993-07-06 | Merck & Co., Inc. | C-21 hydroxylated FK-506 antagonist |
US5149701A (en) * | 1991-08-01 | 1992-09-22 | Merck & Co., Inc. | C-31 methylated FR-900520 cyclic hemiketal immunosuppressant agents |
US5273979A (en) * | 1991-08-01 | 1993-12-28 | Merck & Co., Inc. | C-31 desmethyl FR-900520 cyclic hemiketal immunosuppressant agent |
US5198358A (en) * | 1991-08-28 | 1993-03-30 | Merck & Co., Inc. | Microorganism for producing C-31 desmethyl FR-900520 cyclic hemiketal immunosuppressant agent |
US5189042A (en) * | 1991-08-22 | 1993-02-23 | Merck & Co. Inc. | Fluoromacrolides having immunosuppressive activity |
US5708002A (en) * | 1991-09-05 | 1998-01-13 | Abbott Laboratories | Macrocyclic immunomodulators |
AU2580492A (en) * | 1991-09-05 | 1993-04-05 | Abbott Laboratories | Macrocyclic immunomodulators |
US5247076A (en) * | 1991-09-09 | 1993-09-21 | Merck & Co., Inc. | Imidazolidyl macrolides having immunosuppressive activity |
ZA926812B (en) | 1991-09-09 | 1993-04-28 | Merck & Co Inc | O-heteroaryl,o-alkylheteroaryl,o-alkenylheteroaryl and o-alkynylheteroaryl macrolides having immunosupressive activity |
US5252732A (en) * | 1991-09-09 | 1993-10-12 | Merck & Co., Inc. | D-heteroaryl, O-alkylheteroaryl, O-alkenylheteroaryl and O-alkynylheteroarylmacrolides having immunosuppressive activity |
US5208241A (en) * | 1991-09-09 | 1993-05-04 | Merck & Co., Inc. | N-heteroaryl, n-alkylheteroaryl, n-alkenylheteroaryl and n-alkynylheteroarylmacrolides having immunosuppressive activity |
US5164495A (en) * | 1991-09-18 | 1992-11-17 | Abbott Laboratories | Method for preparing a dicarboxylic acid half-acid ester of FK506 |
US5221625A (en) * | 1992-01-10 | 1993-06-22 | Merck & Co., Inc. | Cyclcic FR-900520 microbial biotransformation agent |
AU665052B2 (en) * | 1992-01-28 | 1995-12-14 | Abraham Karpas | The use of a compound for the manufacture of a medicament for the treatment of HIV infection |
JP3140228B2 (ja) * | 1992-02-17 | 2001-03-05 | ファイザー製薬株式会社 | 新規な大環状ラクトンおよびその生産菌 |
ES2108261T3 (es) * | 1992-03-02 | 1997-12-16 | Pfizer | Derivados 2-aminoazucar de macrolidos. |
CA2132457C (en) * | 1992-03-02 | 1998-06-16 | Kevin Koch | Fluorosugar derivatives of macrolides |
DK0629209T3 (da) * | 1992-03-02 | 1997-10-13 | Pfizer | Sukkerderivater af makrolider |
EP0629203B1 (en) * | 1992-03-02 | 2001-09-12 | Pfizer Inc. | Desosamino derivatives of macrolides as immunosuppressants and antifungal agents |
ATE138807T1 (de) | 1992-03-27 | 1996-06-15 | American Home Prod | 29-demethoxyrapamycin zur induktion der immunosuppression |
CA2091194A1 (en) * | 1992-04-08 | 1993-10-09 | Richard D. Connell | 2-oxo-ethyl derivatives as immunosuppressants |
HUT66531A (en) * | 1992-05-07 | 1994-12-28 | Sandoz Ag | Heteroatoms-containing tricyclic compounds, pharmaceutical prepns contg. them and process for producing them |
WO1993025533A1 (en) * | 1992-06-05 | 1993-12-23 | Abbott Laboratories | Methods and reagents for the determination of immunosuppressive agents |
US5284840A (en) * | 1992-06-12 | 1994-02-08 | Merck & Co., Inc. | Alkylidene macrolides having immunosuppressive activity |
US5284877A (en) * | 1992-06-12 | 1994-02-08 | Merck & Co., Inc. | Alkyl and alkenyl macrolides having immunosuppressive activity |
US5264355A (en) * | 1992-07-02 | 1993-11-23 | Merck & Co., Inc. | Methlating enzyme from streptomyces MA6858 |
ZA935112B (en) * | 1992-07-17 | 1994-02-08 | Smithkline Beecham Corp | Rapamycin derivatives |
US5324644A (en) * | 1992-07-28 | 1994-06-28 | Merck & Co., Inc. | Process for producing immunosuppressant agent |
PT672756E (pt) * | 1992-08-12 | 2002-07-31 | Fujisawa Pharmaceutical Co | Anticorpo monoclonal que reconhece a proteina de ligacao a fk506 processo de doseamento do nivel de proteina de ligaca a fk506 e "kit" para doseamento |
US5365948A (en) * | 1992-08-21 | 1994-11-22 | J & W Mcmichael Software Inc. | Method for use in treating a patient with FK 506 to prevent an adverse immune response |
US5283183A (en) * | 1992-09-28 | 1994-02-01 | Merck & Co., Inc. | Cyclic FR-900520 microbial biotransformation agent |
US5268281A (en) * | 1992-09-28 | 1993-12-07 | Merck & Co., Inc. | Cyclic FR-900520 microbial biotransformation agent |
US5268282A (en) * | 1992-09-28 | 1993-12-07 | Merck & Co., Inc. | Cyclic FR-900520 microbial biotransformation agent |
US5290689A (en) * | 1992-09-28 | 1994-03-01 | Merck & Co., Inc. | New cyclic FR-900520 microbial biotransformation agent |
US5318895A (en) * | 1992-10-05 | 1994-06-07 | Merck & Co., Inc. | Aspergillus niger mutants |
GB9227055D0 (en) * | 1992-12-29 | 1993-02-24 | Fujisawa Pharmaceutical Co | New use |
DE4300478C2 (de) * | 1993-01-11 | 1998-05-20 | Eos Electro Optical Syst | Verfahren und Vorrichtung zum Herstellen eines dreidimensionalen Objekts |
CA2156064A1 (en) * | 1993-03-17 | 1994-09-29 | Megumi Kawai | Substituted alicyclic amine-containing macrocyclic immunomodulators |
CH686761A5 (de) * | 1993-05-27 | 1996-06-28 | Sandoz Ag | Galenische Formulierungen. |
MY110603A (en) * | 1993-05-27 | 1998-08-29 | Novartis Ag | Tetrahydropyran derivatives |
AT408520B (de) * | 1993-05-27 | 2001-12-27 | Novartis Erfind Verwalt Gmbh | Galenische formulierungen |
GB2279006A (en) * | 1993-06-03 | 1994-12-21 | Fujisawa Pharmaceutical Co | Treatment of amyotrophic lateral sclerosis |
JPH06345646A (ja) * | 1993-06-08 | 1994-12-20 | Fujisawa Pharmaceut Co Ltd | ローション剤 |
US5352783A (en) * | 1993-06-09 | 1994-10-04 | Merck & Co., Inc. | Microbial transformation product having immunosuppressive activity |
US5359060A (en) * | 1993-07-06 | 1994-10-25 | Pfizer, Inc. | Phosponated derivatives of macrolides |
WO1995004061A1 (en) * | 1993-07-30 | 1995-02-09 | Abbott Laboratories | Activated macrolactams having immunomodulatory activities |
GB2281294A (en) * | 1993-08-23 | 1995-03-01 | Fujisawa Pharmaceutical Co | Process for producing half esters of the macrolide FK506 |
US5616588A (en) | 1993-09-30 | 1997-04-01 | American Home Products Corporation | Rapamycin formulation for IV injection |
UA41884C2 (uk) * | 1993-11-05 | 2001-10-15 | Амерікан Хоум Продактс Корпорейшн | Спосіб відокремлення рапаміцину від кислотних, основних та неполярних нейтральних домішок, присутніх в концентраті екстрактів ферментаційного бульйону або маточних розчинів |
US5898029A (en) * | 1994-04-12 | 1999-04-27 | The John Hopkins University | Direct influences on nerve growth of agents that interact with immunophilins in combination with neurotrophic factors |
US5880280A (en) * | 1994-06-15 | 1999-03-09 | Merck & Co., Inc. | Aryl, alkyl, alkenyl and alkynylmacrolides having immunosuppressive activity |
US5693648A (en) * | 1994-09-30 | 1997-12-02 | Merck & Co., Inc. | O-aryl, O-alkyl, O-alkenyl and O-alkynyl-macrolides having immunosuppressive activity |
EP0786986B1 (en) | 1994-10-26 | 2002-03-20 | Novartis AG | Use of an unsaturated fatty alcohol |
AR004480A1 (es) * | 1995-04-06 | 1998-12-16 | Amico Derin C D | Compuestos de ascomicina que poseen actividad antiinflamatoria, pro cedimiento para prepararlos, uso de dichos compuestos para preparar agentesfarmaceuticos y composiciones farmaceuticas que los incluyen |
US5616595A (en) * | 1995-06-07 | 1997-04-01 | Abbott Laboratories | Process for recovering water insoluble compounds from a fermentation broth |
ATE254450T1 (de) * | 1995-09-19 | 2003-12-15 | Fujisawa Pharmaceutical Co | Aerosolzusammensetzungen |
WO1998004279A1 (en) | 1996-07-30 | 1998-02-05 | Novartis Ag | Pharmaceutical compositions for the treatment of transplant rejection, autoimmune or inflammatory conditions comprising cyclosporin a and 40-0-(2-hydroxiethyl)-rapamycin |
KR100244164B1 (ko) * | 1997-07-15 | 2000-03-02 | 김용옥 | 수용성 고분자-타크로리무스 접합체 화합물 및 그의 제조 방법 |
US6562620B2 (en) * | 1997-09-19 | 2003-05-13 | Mcgill University | Medium to promote islet cell survival |
US20030129215A1 (en) | 1998-09-24 | 2003-07-10 | T-Ram, Inc. | Medical devices containing rapamycin analogs |
US6890546B2 (en) | 1998-09-24 | 2005-05-10 | Abbott Laboratories | Medical devices containing rapamycin analogs |
US7399480B2 (en) | 1997-09-26 | 2008-07-15 | Abbott Laboratories | Methods of administering tetrazole-containing rapamycin analogs with other therapeutic substances using medical devices |
US6015815A (en) * | 1997-09-26 | 2000-01-18 | Abbott Laboratories | Tetrazole-containing rapamycin analogs with shortened half-lives |
US8057816B2 (en) | 1997-09-26 | 2011-11-15 | Abbott Laboratories | Compositions and methods of administering paclitaxel with other drugs using medical devices |
US7357942B2 (en) | 1997-09-26 | 2008-04-15 | Abbott Laboratories | Compositions, systems, and kits for administering zotarolimus and paclitaxel to blood vessel lumens |
US8394398B2 (en) | 1997-09-26 | 2013-03-12 | Abbott Laboratories | Methods of administering rapamycin analogs with anti-inflammatories using medical devices |
US8257725B2 (en) | 1997-09-26 | 2012-09-04 | Abbott Laboratories | Delivery of highly lipophilic agents via medical devices |
US8257726B2 (en) | 1997-09-26 | 2012-09-04 | Abbott Laboratories | Compositions, systems, kits, and methods of administering rapamycin analogs with paclitaxel using medical devices |
DK1056454T3 (da) * | 1998-02-23 | 2003-08-18 | Fujisawa Pharmaceutical Co | Anvendelse af makrolidforbindelser til behandling af glaukom |
AUPP223198A0 (en) * | 1998-03-06 | 1998-04-02 | Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. | New use |
SI1064942T1 (en) | 1998-03-26 | 2004-12-31 | Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. | Sustained release preparation of a macrolide |
DE69917907T2 (de) | 1998-07-17 | 2005-06-30 | Agouron Pharmaceuticals, Inc., La Jolla | Verbindungen und zusammensetzungen um neurales wachstum und streckung zu stimulieren |
US7455853B2 (en) | 1998-09-24 | 2008-11-25 | Abbott Cardiovascular Systems Inc. | Medical devices containing rapamycin analogs |
US7960405B2 (en) | 1998-09-24 | 2011-06-14 | Abbott Laboratories | Compounds and methods for treatment and prevention of diseases |
US8257724B2 (en) | 1998-09-24 | 2012-09-04 | Abbott Laboratories | Delivery of highly lipophilic agents via medical devices |
WO2000020601A2 (en) | 1998-10-02 | 2000-04-13 | Kosan Biosciences, Inc. | Polyketide synthase enzymes and recombinant dna constructs therefor |
DE19853487A1 (de) | 1998-11-19 | 2000-05-25 | Fumapharm Ag Muri | Verwendung von Dialkylfumaraten |
GB9826656D0 (en) | 1998-12-03 | 1999-01-27 | Novartis Ag | Organic compounds |
EP1165575A1 (en) * | 1999-03-31 | 2002-01-02 | Abbott Laboratories | Phosphate containing macrocyclic immunomodulators |
US6121257A (en) * | 1999-03-31 | 2000-09-19 | Abbott Laboratories | Sulfamate containing macrocyclic immunomodulators |
US7063857B1 (en) | 1999-04-30 | 2006-06-20 | Sucampo Ag | Use of macrolide compounds for the treatment of dry eye |
ES2214273T3 (es) * | 1999-04-30 | 2004-09-16 | The Regents Of The University Of Michigan | Utilizacion de benzodiazepinas para el tratamiento de enfermedades autoinmunes inducidas por apoptosis. |
US20040176358A1 (en) * | 1999-04-30 | 2004-09-09 | The Regents Of The University Of Michigan | Compositions and methods relating to novel compounds and targets thereof |
US20060025388A1 (en) * | 1999-04-30 | 2006-02-02 | Glick Gary D | Compositions and methods relating to novel compounds and targets thereof |
US20050113460A1 (en) * | 1999-04-30 | 2005-05-26 | The Regents Of The University Of Michigan | Compositions and methods relating to novel compounds and targets thereof |
US20030119029A1 (en) * | 1999-04-30 | 2003-06-26 | Regents Of The University Of Michigan | Compositions and methods relating to novel benzodiazepine compounds and targets thereof |
US7572788B2 (en) | 1999-04-30 | 2009-08-11 | The Regents Of The University Of Michigan | Compositions and methods relating to novel compounds and targets thereof |
GB9917158D0 (en) * | 1999-07-21 | 1999-09-22 | Fujisawa Pharmaceutical Co | New use |
US20030018044A1 (en) * | 2000-02-18 | 2003-01-23 | Peyman Gholam A. | Treatment of ocular disease |
US7018405B2 (en) | 2000-12-22 | 2006-03-28 | Avantec Vascular Corporation | Intravascular delivery of methylprednisolone |
US6471980B2 (en) | 2000-12-22 | 2002-10-29 | Avantec Vascular Corporation | Intravascular delivery of mycophenolic acid |
AR033151A1 (es) * | 2001-04-12 | 2003-12-03 | Sucampo Pharmaceuticals Inc | Agente para el tratamiento oftalmico topico de las enfermedades inflamatorias oculares |
US6656460B2 (en) | 2001-11-01 | 2003-12-02 | Yissum Research Development | Method and composition for dry eye treatment |
US7452692B2 (en) * | 2002-02-13 | 2008-11-18 | Teva Gyógyszergyár Zártkörüen Müködö Részvénytársaság | Method for extracting a macrolide from biomatter |
PL374059A1 (en) | 2002-02-13 | 2005-09-19 | Teva Gyogyszergyar Reszvenytarsasag | Method for extracting a macrolide from biomatter |
CA2475595C (en) * | 2002-02-22 | 2012-07-10 | 3M Innovative Properties Company | Method of reducing and preventing uvb-induced immunosuppression |
AU2002321821A1 (en) * | 2002-06-28 | 2004-01-19 | Biocon Limited | Solid state fermentation and fed batch for the production of an immunosuppressant |
BR0314013A (pt) | 2002-09-06 | 2005-07-12 | Abbott Lab | Equipamento médico contendo inibidor de hidratação |
ATE457716T1 (de) | 2002-12-30 | 2010-03-15 | Angiotech Int Ag | Wirkstofffreisetzung von schnell gelierender polymerzusammensetzung |
AU2003209664A1 (en) * | 2003-02-10 | 2004-08-30 | Biocon Limited | Solid state fermentation and fed batch for the production of an immunosuppressant |
JP4468943B2 (ja) * | 2003-03-31 | 2010-05-26 | テバ ジョジセルジャール ザ−トケルエン ムケド レ−スベニュタ−ルシャシャ−グ | マクロライド系の結晶化及び精製 |
US20060169199A1 (en) * | 2003-03-31 | 2006-08-03 | Vilmos Keri | Crystallization and purification of macrolides |
KR100486016B1 (ko) * | 2003-07-09 | 2005-04-29 | 주식회사종근당 | 타크로리무스의 속용성 고체분산체 및 이의 제조방법 |
WO2005010015A1 (en) * | 2003-07-24 | 2005-02-03 | Teva Gyogyszergyar Reszvenytarsasag | Method of purifying macrolides |
KR20060052722A (ko) * | 2003-08-05 | 2006-05-19 | 가부시키가이샤 가네카 | 생체유치용 스텐트 |
CN101869561A (zh) | 2003-08-29 | 2010-10-27 | 生命周期药物公司 | 含有他克莫司的改良释放组合物 |
EP1663216B1 (en) | 2003-08-29 | 2011-11-02 | Veloxis Pharmaceuticals A/S | Modified release compositions comprising tacrolimus |
TW200517114A (en) | 2003-10-15 | 2005-06-01 | Combinatorx Inc | Methods and reagents for the treatment of immunoinflammatory disorders |
DE602004018547D1 (de) * | 2003-10-17 | 2009-01-29 | Ranbaxy Lab Ltd | Herstellung von tacrolimus (fk-506) unter verwendung neuer streptomyces-spezies |
EP1689390B1 (en) | 2003-11-21 | 2011-02-09 | Zalicus Inc. | Methods and reagents for the treatment of inflammatory disorders |
WO2005054253A1 (en) * | 2003-12-05 | 2005-06-16 | Biocon Limited | Process for the purification of macrolides |
KR100485877B1 (ko) * | 2003-12-30 | 2005-04-28 | 종근당바이오 주식회사 | 타크롤리무스를 생산하는 미생물 및 이를 이용한타크롤리무스의 대량 생산방법 |
US20050176080A1 (en) * | 2004-02-10 | 2005-08-11 | Vani Bodepudi | Hapten, immunogens and derivatives of ascomycin useful for preparation of antibodies and immunoassays |
WO2005089855A1 (en) | 2004-03-19 | 2005-09-29 | Abbott Laboratories | Multiple drug delivery from a balloon and a prosthesis |
US8431145B2 (en) | 2004-03-19 | 2013-04-30 | Abbott Laboratories | Multiple drug delivery from a balloon and a prosthesis |
EP1756290B1 (en) | 2004-04-12 | 2016-05-04 | Biocon Limited | Streptomyces sp. bicc 7522 and its use for the production of macrolides |
US20050272723A1 (en) * | 2004-04-27 | 2005-12-08 | The Regents Of The University Of Michigan | Methods and compositions for treating diseases and conditions associated with mitochondrial function |
US20090275099A1 (en) * | 2004-04-27 | 2009-11-05 | Regents Of The University Of Michigan | Methods and compositions for treating diseases and conditions associated with mitochondrial function |
JP2006014722A (ja) * | 2004-06-02 | 2006-01-19 | Keio Gijuku | 遺伝子マーカー及びその利用 |
US20110104186A1 (en) | 2004-06-24 | 2011-05-05 | Nicholas Valiante | Small molecule immunopotentiators and assays for their detection |
US7534448B2 (en) * | 2004-07-01 | 2009-05-19 | Yale University | Methods of treatment with drug loaded polymeric materials |
US20060014677A1 (en) * | 2004-07-19 | 2006-01-19 | Isotechnika International Inc. | Method for maximizing efficacy and predicting and minimizing toxicity of calcineurin inhibitor compounds |
US20060052369A1 (en) * | 2004-09-07 | 2006-03-09 | The Regents Of The University Of Michigan | Compositions and methods relating to novel compounds and targets thereof |
BRPI0515695A (pt) * | 2004-09-10 | 2008-03-04 | Ivax Pharmaceuticals Sro | processo para isolamento de tacrolimus cristalino |
US20080269479A1 (en) * | 2004-09-10 | 2008-10-30 | Ivax Pharmaceuticals S.R.O. | Process for Isolation of Macrolide Compounds |
GT200500282A (es) * | 2004-10-12 | 2006-05-04 | Heteroatomos conteniendo compuestos triciclicos. | |
ITMI20042098A1 (it) * | 2004-11-03 | 2005-02-03 | Antibioticos Spa | Processo per la purificazione di tacrolimus |
WO2006060615A1 (en) * | 2004-12-01 | 2006-06-08 | Teva Gyógyszergyár Zàrtköruen Muködo Rèszvènytàrsasàg | Non-hygroscopic and powdery amorphous pimecrolimus |
JP2008524239A (ja) * | 2004-12-15 | 2008-07-10 | エラン ファーマ インターナショナル リミティド | ナノ粒子のタクロリムス製剤 |
EP1828205A1 (en) * | 2004-12-22 | 2007-09-05 | Teva Gyogyszergyár Zártköruen Muködo Részvenytarsaság | Method of purifying tacrolimus |
JP2008528448A (ja) * | 2005-01-03 | 2008-07-31 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ ミシガン | 新規化合物に関連する組成物および方法、ならびにその標的 |
CA2588480A1 (en) * | 2005-01-05 | 2006-08-10 | Teva Gyogyszergyar Zartkoruen Mukodo Reszvenytarsasag | Amorphous tacrolimus and preparation thereof |
US20090162868A1 (en) * | 2005-01-13 | 2009-06-25 | Yusuke Tanigawara | Gene Markers and Utilization of the Same |
US20090216317A1 (en) | 2005-03-23 | 2009-08-27 | Cromack Keith R | Delivery of Highly Lipophilic Agents Via Medical Devices |
EP3138531A1 (en) | 2005-03-23 | 2017-03-08 | Abbott Laboratories | Compositions and methods of administering rapamycin analogs using medical devices for long-term efficacy |
EP1893218A4 (en) | 2005-06-01 | 2011-01-12 | Univ Michigan | NON-SOLVATED BENZODIAZEPINE PREPARATIONS AND METHODS |
CN1876822B (zh) * | 2005-06-06 | 2010-05-12 | 上海市农药研究所 | 他克莫司的产生菌株及生产方法 |
WO2007013017A1 (en) * | 2005-07-29 | 2007-02-01 | Ranbaxy Laboratories Limited | A process for purification of macrolides |
ITMI20051549A1 (it) * | 2005-08-05 | 2007-02-06 | Antibioticos Spa | Purificazione del tacrolimus su supporti dimorigine vegetale |
WO2007029082A2 (en) * | 2005-09-05 | 2007-03-15 | Ranbaxy Laboratories Limited | An improved fermentation process for preparing ascomycin |
US20080318289A1 (en) * | 2005-10-05 | 2008-12-25 | Parveen Kumar | Fermentation Processes for the Preparation of Tacrolimus |
US20070105844A1 (en) * | 2005-10-26 | 2007-05-10 | Regents Of The University Of Michigan | Therapeutic compositions and methods |
US8088759B2 (en) | 2005-11-01 | 2012-01-03 | The Regents Of The University Of Michigan | 1,4-benzodiazepine-2,5-diones with therapeutic properties |
ZA200804550B (en) | 2005-11-09 | 2009-08-26 | Combinatorx Inc | Methods, compositions, and kits for the treatment of medical conditions |
US7678901B2 (en) | 2006-02-28 | 2010-03-16 | Wyeth | Rapamycin analogs containing an antioxidant moiety |
US7622477B2 (en) | 2006-02-28 | 2009-11-24 | Cordis Corporation | Isomers and 42-epimers of rapamycin alkyl ether analogs, methods of making and using the same |
TW200815458A (en) * | 2006-03-15 | 2008-04-01 | Teva Gyogyszergyar Zartkoruen Mukodo Reszvenytarsasag | Process for purifying Tacrolimus |
US8022188B2 (en) * | 2006-04-24 | 2011-09-20 | Abbott Laboratories | Immunosuppressant binding antibodies and methods of obtaining and using same |
US7759338B2 (en) * | 2006-04-27 | 2010-07-20 | The Regents Of The University Of Michigan | Soluble 1,4 benzodiazepine compounds and stable salts thereof |
EP2037741B1 (en) | 2006-06-09 | 2013-11-27 | The Regents Of The University Of Michigan | Benzodiazepine derivatives for use in the treatment of immune, inflammatory and proliferative disorders |
EP2457589A1 (en) | 2006-08-31 | 2012-05-30 | Astellas Pharma Inc. | Reverse targeting lipid vesicle |
US20080161324A1 (en) * | 2006-09-14 | 2008-07-03 | Johansen Lisa M | Compositions and methods for treatment of viral diseases |
WO2008057511A2 (en) * | 2006-11-06 | 2008-05-15 | Teva Gyógyszergyár Zártkörüen Müködö Részvénytársaság | Ascomycin and pimecrolimus having reduced levels of desmethylascomycin and 32-deoxy-32-epichloro-desmethylascomycin respectively, and methods for preparation thereof |
ES2435197T3 (es) * | 2007-01-10 | 2013-12-16 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Administración mejorada de composiciones de fármacos inmunosupresores para la administración por vía pulmonar |
US10265407B2 (en) | 2007-02-15 | 2019-04-23 | Yale University | Modular nanodevices for smart adaptable vaccines |
WO2008109347A2 (en) * | 2007-03-02 | 2008-09-12 | Yale University | Methods for ex vivo administration of drugs to grafts using polymeric nanoparticles |
EP2139331B1 (en) * | 2007-03-09 | 2013-02-20 | The Regents of the University of Michigan | Compositions and methods relating to novel compounds and targets thereof |
US12083103B2 (en) | 2007-05-30 | 2024-09-10 | Veloxis Pharmaceuticals, Inc. | Tacrolimus for improved treatment of transplant patients |
HUE033011T2 (hu) | 2007-05-30 | 2017-11-28 | Veloxis Pharmaceuticals As | Takrolimuszt tartalmazó napi egyszeri orális dózisforma |
KR100891313B1 (ko) * | 2007-08-17 | 2009-03-31 | (주) 제노텍 | 담체로 작용하는 흡착성 수지의 제공에 의한 트리사이클로화합물의 생산 및 추출 방법 |
WO2009036175A2 (en) | 2007-09-14 | 2009-03-19 | The Regents Of The University Of Michigan | F1f0-atpase inhibitors and related methods |
AU2008323945B2 (en) | 2007-11-06 | 2013-11-28 | The Regents Of The University Of Michigan | Benzodiazepinone compounds useful in the treatment of skin conditions |
CA2711765A1 (en) * | 2008-01-11 | 2009-07-16 | Massachusetts Eye & Ear Infirmary | Conditional-stop dimerizable caspase transgenic animals |
KR101003042B1 (ko) | 2008-03-17 | 2010-12-21 | 종근당바이오 주식회사 | 고순도 타크로리무스의 정제 방법 |
US20090253174A1 (en) * | 2008-04-08 | 2009-10-08 | Zach Serber | Expression of Heterologous Sequences |
US8173621B2 (en) | 2008-06-11 | 2012-05-08 | Gilead Pharmasset Llc | Nucleoside cyclicphosphates |
US20100092479A1 (en) * | 2008-08-18 | 2010-04-15 | Combinatorx (Singapore) Pte. Ltd. | Compositions and methods for treatment of viral diseases |
EP2352724B1 (en) | 2008-09-11 | 2015-04-22 | The Regents of the University of Michigan | Aryl guanidine f1f0-atpase inhibitors and their medical use |
KR100910165B1 (ko) | 2008-09-18 | 2009-07-30 | (주) 제노텍 | 은 이온 용액 추출을 이용한 불포화 알킬기를 가진 락톤 화합물 정제방법 |
CA2738831C (en) * | 2008-10-08 | 2016-05-24 | Takata Seiyaku Co., Ltd. | Tacrolimus preparation for external applications |
EA201100851A1 (ru) | 2008-12-23 | 2012-04-30 | Фармассет, Инк. | Аналоги нуклеозидов |
EA019295B1 (ru) | 2008-12-23 | 2014-02-28 | Джилид Фармассет, Ллс. | Соединения пуриновых нуклеозидов и способ их получения |
CL2009002207A1 (es) | 2008-12-23 | 2011-02-18 | Gilead Pharmasset Llc | Compuestos derivados de 3-hidroxi-5-(9h-purin-9-il)tetrahidrofuran-2-il, inhibidor de la replicacion de arn viral dependiente de arn; composicion farmaceutica; uso para el tratamiento de hepatitis c. |
WO2010121164A2 (en) | 2009-04-17 | 2010-10-21 | The Regents Of The University Of Michigan | 1,4-benzodiazepinone compounds and their use in treating cancer |
CN101712686B (zh) * | 2009-06-22 | 2012-08-29 | 鲁南制药集团股份有限公司 | 一种发酵液中他克莫司的分离纯化方法 |
EP2272963A1 (en) * | 2009-07-09 | 2011-01-12 | LEK Pharmaceuticals d.d. | Process for Preparation of Tacrolimus |
US8673897B2 (en) | 2009-09-18 | 2014-03-18 | The Regents Of The University Of Michigan | Benzodiazepinone compounds and methods of treatment using same |
CA2915237C (en) | 2009-11-17 | 2017-10-10 | The Regents Of The University Of Michigan | 1,4-benzodiazepine-2,5-diones and related compounds with therapeutic properties |
EP2501695B1 (en) | 2009-11-17 | 2018-08-29 | The Regents Of The University Of Michigan | 1,4-benzodiazepine-2,5-diones and related compounds with therapeutic properties |
US20110130711A1 (en) * | 2009-11-19 | 2011-06-02 | Follica, Inc. | Hair growth treatment |
US8480620B2 (en) | 2009-12-11 | 2013-07-09 | Abbott Cardiovascular Systems Inc. | Coatings with tunable solubility profile for drug-coated balloon |
US8951595B2 (en) | 2009-12-11 | 2015-02-10 | Abbott Cardiovascular Systems Inc. | Coatings with tunable molecular architecture for drug-coated balloon |
EP2575769B1 (en) | 2010-02-17 | 2016-06-15 | Veloxis Pharmaceuticals A/S | Stabilized tacrolimus composition |
UA122959C2 (uk) | 2010-03-31 | 2021-01-27 | Гайлід Фармассет Елелсі | Нуклеозидфосфорамідати |
WO2011163600A2 (en) | 2010-06-25 | 2011-12-29 | Apt Pharmaceuticals, Inc. | Tacrolimus compositions for aerosol administration |
KR101261131B1 (ko) | 2010-08-24 | 2013-05-06 | 이화여자대학교 산학협력단 | 신규 타크롤리무스 유도체, 상기 유도체를 포함하는 신경 보호용 조성물, 상기 유도체를 포함하는 면역 억제용 조성물, 상기 유도체의 생산 방법 및 상기 유도체의 생산 균주 |
WO2012026896A1 (en) | 2010-08-25 | 2012-03-01 | Les Laboratoires Medis Sa | Surface modified micronized tacrolimus crystalline particles and pharmaceutical compositions thereof |
US10117411B2 (en) | 2010-10-06 | 2018-11-06 | Dow Agrosciences Llc | Maize cytoplasmic male sterility (CMS) C-type restorer RF4 gene, molecular markers and their use |
PL2683406T3 (pl) | 2011-03-11 | 2019-11-29 | Beth Israel Deaconess Medical Ct Inc | Przeciwciała anty-cd40 i ich zastosowania |
WO2013163176A1 (en) | 2012-04-23 | 2013-10-31 | Allertein Therapeutics, Llc | Nanoparticles for treatment of allergy |
NZ631337A (en) | 2013-03-14 | 2017-01-27 | Alkermes Pharma Ireland Ltd | Prodrugs of fumarates and their use in treating various diseases |
US8669281B1 (en) | 2013-03-14 | 2014-03-11 | Alkermes Pharma Ireland Limited | Prodrugs of fumarates and their use in treating various diseases |
MX2015013894A (es) | 2013-04-03 | 2015-12-11 | Allertein Therapeutics Llc | Composiciones de nanoparticulas novedosas. |
US9814703B2 (en) | 2013-11-14 | 2017-11-14 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Methods for treating cancer by activation of BMP signaling |
CN104650112B (zh) * | 2013-11-18 | 2018-07-31 | 山东新时代药业有限公司 | 他克莫司8-丙基类似物的制备方法 |
UY35927A (es) | 2013-12-31 | 2015-07-31 | Dow Agrosciences Llc | ?gen restaurador rf3 de tipo s de la esterilidad masculina citoplasmática del maíz (cms), marcadores moleculares y sus usos?. |
EP3094324A4 (en) * | 2014-01-13 | 2017-02-22 | Amplyx Pharmaceuticals, Inc. | Antifungal compounds |
CA2935167C (en) | 2014-01-16 | 2022-02-22 | Musc Foundation For Research Development | Targeted nanocarriers for the administration of immunosuppressive agents |
NZ723269A (en) | 2014-02-24 | 2017-04-28 | Alkermes Pharma Ireland Ltd | Sulfonamide and sulfinamide prodrugs of fumarates and their use in treating various diseases |
KR101694879B1 (ko) * | 2014-08-01 | 2017-01-12 | 주식회사 인트론바이오테크놀로지 | 면역억제활성 없이 신경재생활성이 유지되는 fk506 유도체 및 그의 용도 |
JPWO2016068208A1 (ja) | 2014-10-28 | 2017-08-10 | 晃史 山口 | 妊娠状態を改善するための薬剤及びその利用 |
US20180243224A1 (en) | 2015-08-19 | 2018-08-30 | Vivus, Inc. | Pharmaceutical formulations |
WO2017040932A1 (en) | 2015-09-04 | 2017-03-09 | Primatope Therapeutics Inc. | Humanized anti-cd40 antibodies and uses thereof |
CN106074367A (zh) * | 2016-07-20 | 2016-11-09 | 中山大学中山眼科中心 | 含fk506类化合物/fkbp蛋白二聚体的药物组合物及其制备方法 |
CN108384819B (zh) * | 2017-02-03 | 2021-06-25 | 上海医药工业研究院 | 一种用于发酵他克莫司的培养基以及发酵方法 |
RU2686779C1 (ru) * | 2018-07-26 | 2019-04-30 | Общество с ограниченной ответственностью "Изварино Фарма" | Штамм streptomyces tsukubensis - продуцент такролимуса и способ получения такролимуса |
CA3108863A1 (en) | 2018-08-10 | 2020-02-13 | Koushi Yamaguchi | Therapeutic agent for humoral immunity-related diseases in materno-fetal relationship |
WO2020076738A2 (en) * | 2018-10-12 | 2020-04-16 | Bellicum Pharmaceuticals, Inc | Protein-binding compounds |
WO2020117134A1 (en) | 2018-12-04 | 2020-06-11 | İlko İlaç Sanayi̇ Ve Ti̇caret A.Ş. | Stable tacrolimus ointment formulation for topical treatment of skin conditions |
KR102135527B1 (ko) * | 2018-12-18 | 2020-07-20 | 이문수 | 발가락 습기 제거 양말 |
JPWO2020129348A1 (ja) | 2018-12-18 | 2021-11-04 | 晃史 山口 | 不妊・不育症または妊娠状態を改善するための薬剤 |
GR1009790B (el) | 2019-03-20 | 2020-08-03 | Φαρματεν Α.Β.Ε.Ε. | Σκευασμα παρατεταμενης αποδεσμευσης που περιλαμβανει τακρολιμους |
US20220296572A1 (en) | 2021-03-03 | 2022-09-22 | Sana Biotechnology, Inc. | Immunosuppressive therapies for use with cardiomyocyte cell therapies, and associated methods and compositions |
Family Cites Families (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3244592A (en) * | 1962-06-09 | 1966-04-05 | Arai Tadashi | Ascomycin and process for its production |
JPS54110000A (en) * | 1978-02-17 | 1979-08-29 | Kaken Pharmaceut Co Ltd | Novel streptovaricin c derivative |
US4309504A (en) * | 1980-01-28 | 1982-01-05 | Eli Lilly And Company | Process for preparing narasin |
US4654334A (en) * | 1980-10-08 | 1987-03-31 | International Minerals & Chemical Corp. | Manganese-containing antibiotic agents |
US4390546A (en) * | 1981-12-07 | 1983-06-28 | Merck & Co., Inc. | Antiparasitic macrolide from a strain of Streptomyces hygroscopicus |
US4415669A (en) * | 1981-12-07 | 1983-11-15 | Merck & Co., Inc. | Substance and process for its production |
US4510317A (en) * | 1983-07-28 | 1985-04-09 | Hoffmann-La Roche Inc. | Antibiotic X-14934A |
GB8430455D0 (en) * | 1984-12-03 | 1985-01-09 | Fujisawa Pharmaceutical Co | Fr-900506 substance |
US4894366A (en) | 1984-12-03 | 1990-01-16 | Fujisawa Pharmaceutical Company, Ltd. | Tricyclo compounds, a process for their production and a pharmaceutical composition containing the same |
US5254562A (en) * | 1984-12-03 | 1993-10-19 | Fujisawa Pharmaceutical Company, Ltd. | Tricyclo compounds, a process for their production and a pharmaceutical composition containing the same |
US5266692A (en) * | 1984-12-03 | 1993-11-30 | Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. | Tricyclo compounds, a process for their production and a pharmaceutical composition containing the same |
GB2212061B (en) * | 1987-11-09 | 1991-08-28 | Sandoz Ltd | Topical compositions comprising 11,28-dioxa-4-azatricyclo [22.3.1.0(4,9)] octacos-18-ene derivatives |
US5956352A (en) * | 1992-04-24 | 1999-09-21 | Digital Equipment Corporation | Adjustable filter for error detecting and correcting system |
-
1985
- 1985-11-20 US US06/799,855 patent/US4894366A/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-11-26 IE IE297185A patent/IE62865B1/en not_active IP Right Cessation
- 1985-11-28 CA CA000496479A patent/CA1338491C/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-11-29 DK DK556285A patent/DK169550B1/da not_active IP Right Cessation
- 1985-11-29 AU AU50596/85A patent/AU592067B2/en not_active Expired
- 1985-11-29 FI FI854731A patent/FI87803C/fi not_active IP Right Cessation
- 1985-11-30 CY CY191285A patent/CY1912A/xx unknown
- 1985-11-30 EP EP85115202A patent/EP0184162B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-11-30 DE DE3587806T patent/DE3587806T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1985-11-30 DE DE1995175026 patent/DE19575026I2/de active Active
- 1985-11-30 AT AT8585115202T patent/ATE104984T1/de active
- 1985-12-02 PT PT81589A patent/PT81589B/pt unknown
- 1985-12-02 NO NO85854833A patent/NO168372C/no not_active IP Right Cessation
- 1985-12-02 KR KR1019850009022A patent/KR930010704B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1985-12-02 ES ES549478A patent/ES8705038A1/es not_active Expired
- 1985-12-02 HU HU854600A patent/HU195250B/hu unknown
- 1985-12-02 NZ NZ214407A patent/NZ214407A/xx unknown
- 1985-12-02 GR GR852904A patent/GR852904B/el unknown
- 1985-12-03 CN CN85109492A patent/CN1013687B/zh not_active Expired
- 1985-12-03 IL IL77222A patent/IL77222A/xx not_active IP Right Cessation
- 1985-12-03 IL IL92345A patent/IL92345A/xx not_active IP Right Cessation
-
1986
- 1986-05-30 US US06/868,749 patent/US4929611A/en not_active Expired - Lifetime
- 1986-11-07 FI FI864527A patent/FI85977C/fi not_active IP Right Cessation
-
1989
- 1989-08-17 US US07/395,798 patent/US4956352A/en not_active Expired - Lifetime
-
1990
- 1990-03-09 US US07/491,205 patent/US5110811A/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-07-31 JP JP2204519A patent/JPH0720970B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1990-07-31 JP JP2204518A patent/JPH0372483A/ja active Granted
-
1992
- 1992-06-17 MX MX9202943A patent/MX9202943A/es unknown
-
1993
- 1993-09-01 KR KR1019930017418A patent/KR930010707B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1993-09-01 KR KR1019930017416A patent/KR930010705B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1993-09-01 KR KR1019930017417A patent/KR930010706B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1993-09-01 KR KR1019930017419A patent/KR930010708B1/ko not_active IP Right Cessation
-
1994
- 1994-09-01 JP JP6208445A patent/JP2746134B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1995
- 1995-05-25 US US08/450,639 patent/US5496727A/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-05-25 US US08/450,412 patent/US5624842A/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-10-19 US US08/545,172 patent/US5565559A/en not_active Expired - Fee Related
-
1996
- 1996-02-01 HK HK18596A patent/HK18596A/xx not_active IP Right Cessation
- 1996-10-07 NL NL960023C patent/NL960023I2/nl unknown
- 1996-12-03 US US08/753,950 patent/US5830717A/en not_active Expired - Lifetime
-
1997
- 1997-04-18 JP JP9101673A patent/JP2828091B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
1998
- 1998-05-26 US US09/084,099 patent/US6028097A/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-05-28 JP JP10146822A patent/JP2976966B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1998-11-11 LU LU90317C patent/LU90317I2/xx unknown
-
1999
- 1999-04-14 JP JP10603999A patent/JP3211891B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1999-10-01 US US09/411,630 patent/US6201005B1/en not_active Expired - Fee Related
-
2000
- 2000-11-27 US US09/721,650 patent/US6482845B1/en not_active Expired - Fee Related
-
2002
- 2002-09-20 US US10/247,305 patent/US20030170831A1/en not_active Abandoned
-
2003
- 2003-04-25 US US10/422,901 patent/US20030229115A1/en not_active Abandoned
- 2003-05-01 US US10/426,659 patent/US20040029908A1/en not_active Abandoned
-
2004
- 2004-11-09 US US10/983,710 patent/US20050124646A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
HU195250B (en) | Process for preparing tricydlic macrolides | |
CA1334392C (en) | Immunosuppressant agent | |
CA1334391C (en) | Immunosuppressant compound | |
JPH0338276B2 (hu) | ||
US4987139A (en) | FK-520 microbial transformation product | |
US5254562A (en) | Tricyclo compounds, a process for their production and a pharmaceutical composition containing the same | |
EP0388153A3 (en) | Immunosuppressant agent | |
US4975372A (en) | Microbial transformation product of L-683,590 | |
US5221625A (en) | Cyclcic FR-900520 microbial biotransformation agent | |
US5266692A (en) | Tricyclo compounds, a process for their production and a pharmaceutical composition containing the same | |
IE921143A1 (en) | Novel immunosuppressant agent from streptomyces braegensis | |
US5290772A (en) | Immunosuppressant agent | |
JPH06153975A (ja) | C−31デスメチルfr−900520環式ヘミケタール免疫抑制剤 | |
US5252612A (en) | Microbial immunosoppressant agent | |
US5270187A (en) | Microbial transformation product | |
US5268370A (en) | Microbial transformation product of L-679,934 | |
EP0378317A2 (en) | Microbial transformation product of L-679,934 | |
CA2051872A1 (en) | Directed biosynthesis process for prolyl-immunomycin | |
EP0378320A2 (en) | Microbial transformation product | |
NO176523B (no) | Fremgangsmåte for fremstilling av tricykloforbindelsen FR-900523 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
HU90 | Patent valid on 900628 |