DE69013189T2 - Verfahren zur Herstellung einer immunosuppressiven Substanz (demethimmunomycin) durch Verwendung eines Stamm-Mutanten eines Mikroorganismus. - Google Patents
Verfahren zur Herstellung einer immunosuppressiven Substanz (demethimmunomycin) durch Verwendung eines Stamm-Mutanten eines Mikroorganismus.Info
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Description
- Die Erfindung betrifft ein neues Verfahren zur Herstellung des immunsuppressiven Mittels L-683 742 unter Verwendung des neuen mutanten Mikroorganismus Streptomyces hygroscopicus subsp. ascomyceticus (MA 6646), ATCC-Nr. 53855, der eine blockierte Mutante von Streptomyces hygroscopicus subsp. ascomyceticus (MA 6475), ATCC-Nr. 14891, ist. Das Verfahren umfaßt die Kultivierung des neuen Mikroorganismus unter aeroben Fermentationsbedingungen in einem wäßrigen Kohlenhydratmedium, das einen Stickstoff-Nährstoff enthält.
- 1983 ließ die US-FDA Cyclosporin zu, ein extrem wirksames Arzneimittel gegen Abstoßungsreaktionen, das das Gebiet der Organtransplantation revolutionierte. Das Arzneimittel wirkt dadurch, daß das körpereigene Immunsystem daran gehindert wird, sein umfangreiches Arsenal von natürlichen Schutzstoffen zur Abstoßung des Fremdproteins des Transplantats zu mobilisieren.
- So wirksam das Arzneimittel bei der Abwehr der Transplantatabstoßung ist, besitzt es jedoch insofern Nachteile, daß es zu Nierenversagen, Leberschädigung und Ulcera führt, die in vielen Fällen sehr schwerwiegend sein können.
- Die EPO-Veröffentlichung Nr. 0184162 von Fujisawa beschreibt ein neues Makrolid, das Immunsuppressivum FK-506, das hundertmal wirksamer sein soll als Cyclosporin. Das Makrolid sowie das strukturell verwandte FK-525, werden durch Fermentation eines besonderen Stammes von Streptomyces tsukubaensis produziert. Ebenfalls beschrieben werden die eng verwandten Makrolid-Immunsuppressiva FK-520 und FK-523, die von S. hygroscopicus subsp. vakushimaensis produziert werden.
- Die USP 3 244 592 von T. Arai beschreibt die Kultivierung von Streptomyces hygroscopicus var. ascomyceticus zur Produktion des Fungizids "Ascomycin".
- Die U.S.-Anmeldung Seriennummer 213 025 von S.T. Chen, E.S. Inamine, B.H. Arison, L.S. Wicker (eingereicht am 29. Juni 1988, und Merck & Co. Inc. zugesprochen) entsprechend der EP 349061, beschreibt ein neues immunsuppressives Mittel "Demethimmunomycin", L-683 742, ein C-31-demethyliertes Analogon von L-683 590 (FK-520), hergestellt durch Kultivieren des Mikroorganismus Actionplanacete sp. (MA 6559), ATCC-Nr. 53771, in Gegenwart von L-683 590, um eine biologische Transformation von L-683 590 hervorzurufen.
- Jedoch existiert in der Literatur keine Beschreibung der Herstellung des Immunsuppressivums L-683 742 direkt durch Fermentation eines Mikroorganismus, die die Gegenwart des Ausgangsmaterials L-683 590 nicht erfordert.
- Neue Verfahren in dieser Beziehung werden permanent auf dem Gebiet gesucht.
- Es wurde gefunden, daß das Immunsuppressivum L-683 742 direkt durch Fermentation des Mutantenstammes Streptomyces hygroscopicus subsp. ascomyceticus (MA 6646), ATCC-Nr. 53855, abstammend von ATCC-Nr. 14891 (MA 6475), durch eine Mutagenbehandlung mit N-Methyl-N'-nitro-N- nitrosoguanidin erhalten werden kann. Die Fermentation erfordert nicht die Gegenwart des Makrolid-Immunsuppressivums L-683 590 und wird unter submersen aeroben Bedingungen in einem wäßrigen Kohlenhydratmedium durchgeführt, das einen Stickstoffnährstoff enthält, wobei die genannten Bedingungen bei einem pH-Wert unter 8,0, z.B. von etwa 7, lange genug durchgeführt werden, so daß L-683 742 (Demethimmunomycin), die mono-C-31-demethylierte Version von L-683 590 (Immunomycin) produziert wird, wie in der vorstehend erwähnten U.S.-Anmeldung, Seriennummer 213 025, beschrieben. Von weiteren C-31-demethylierten Derivaten von Makroliden des Typs L-683 590 wird ebenfalls sehr wohl angenommen, daß sie in dem Nährmedium vorhanden sind, das durch das hier beschriebene erfindungsgemäße Verfahren erzeugt wird.
- Das resultierende L-683 742 zeigt immunsuppressive Aktivität, d.h. eine positive Hemmung der T-Zellen-Aktivierung, was durch einen Test der T-Zellen-Stimulierung durch den Calciumionophor (Ionomycin) plus Phorbolmyristatacetat (PMA) gezeigt wird, der hier auch als "T-Zellen-Proliferationstest" bezeichnet wird. Das Prinzip dieses Tests besteht darin, die Proliferation von Maus-T-Lymphocyten zu messen, die mit der Kombination aus Ionomycin plus PMA stimuliert worden sind. Eine positive Probe bei diesem Test hemmt die T-Zellen-Proliferation, was durch eine verringerte Aufnahme von tritiiertem Thymidin angezeigt wird.
- Erfindungsgemäß wird ein neues Verfahren zur Herstellung eines Immunsuppressivums bereitgestellt, welches als C-31-demethyliertes Derivat eines Makrolids von L-683 590 identifiziert ist, umfassend die Stufe der Kultivierung eines Mutantenstammes von Streptomyces, der das genannte C-31-demethylierte Derivat unter submersen aeroben Fermentationsbedingungen, ausreichend lange bei einem pH-Wert unter 8,0, in einem wäßrigen Kohlenhydratmedium, das einen Stickstoffnährstoff enthält, produziert, um das C-31-demethylierte Immunsuppressivum zu erzeugen.
- Außerdem wird ein neues Verfahren bereitgestellt zur Herstellung des Immunsuppressivums, identifiziert als L-683 742, das hergestellt wird, indem ein Stamm von Streptomyces hygroscopicus subsp. ascomyceticus (MA 6646), ATCC-Nr. 53855, unter submersen aeroben Fermentationsbedingungen in einem wäßrigen Kohlenhydratmedium, das einen Stickstoffnährstoff enthält, lange genug kultiviert wird, um das Produkt L-683 742 zu erzeugen.
- Ferner wird die gemäß dem obigen Verfahren hergestellte Nährlösung bereitgestellt.
- Außerdem wird ein neuer Mutantenstamm Streptomyces hygroscopicus subsp. ascomyceticus, ATCC-Nr. 53855, bereitgestellt.
- Die Erfindung umfaßt die Fermentation von Streptomyces hygroscopicus subsp. ascomyceticus, ATCC-Nr. 53855, um L-683 742 zu erzeugen. Der Mikroorganismus ist derzeit bei der American Type Culture Collection, 12301 Parklawn Drive in Rockville, Maryland, unter der ATCC-Nr. 53855, eingereicht am 12. Januar 1989, und in der Merck-Kultursammlung in Rahway, New Jersey, als MA 6646 hinterlegt. Die physikalischen Eigenschaften und die Taxonimie einschließlich der morphologischen, züchterischen, biologischen und physiologischen Eigenschaften werden im folgenden kurz beschrieben.
- Mikroskopische Beobachtungen - verzweigtes filamentöses Mycel, 0,6 um im Durchmesser. Sporophoren treten als kurze kompakte Spiralen auf.
- vegetatives Wachstum: revers: gräulich-weiß
- überirdische Masse: reichlich, matt, grau bis schwarz
- lösliches Pigment: keines
- vegetatives Wachstum: revers: nicht ganz weiß, durchscheinend
- obvers: nicht ganz weiß, durchscheinend, ausgefranster Rand
- überirdisches Mycel: schwach ausgeprägt, nicht ganz weiß, pulverig
- lösliches Pigment: keines
- vegetatives Wachstum: revers: cremfarben-gelb
- überirdische Masse: reichlich, samtig, hellgrau bis schwarz
- überiridsches Mycel: weiß, samtig
- lösliches Pigment: keines
- vegetatives Wachstum: revers: gräulich-gelb
- überirdische Masse: reichlich, hell bis mittelgrau, matt, baumwollartig
- lösliches Pigment: keines
- d-Glucose ++ d-Maltose + Saccharose -
- d-Arabinose +/- D-Mannit ++ d-Xylose ++
- l-Arabinose +/- d-Mannose ++ l-Xylose
- d-Fructose ++ l-Mannose - alpha-d-Lactose ++
- l-Glucose - d-Raffinose - beta-d-Lactose ++
- Inosit +/- l-Rhamnose ++
- wobei ++ ein wesentliches Wachstum andeutet, + ein mäßiges Wachstum, +/- ein Wachstum in Spuren andeutet, und - kein Wachstum andeutet.
- Das erfindungsgemäße Verfahren kann mit irgendeinem "C-31-demethylierenden" Stamm der Mutante Streptomyces hygroscopicus subsp. ascomyceticus durchgeführt werden, besonders bevorzugt wird der Stamm der ATCC-Nr. 53855.
- Im allgemeinen kann L-683 742 durch Kultivieren (Fermentation) des oben beschriebenen Mutantenstammes in einem wäßrigen Nährmedium, das Quellen von assimilierbarem Kohlenstoff und Stickstoff enthält, vorzugsweise unter submersen aeroben Bedingungen (z.B. Schüttelkultur, submerse Kultur etc.) produziert werden. Das wäßrige Medium wird vorzugsweise bei einem pH-Wert von etwa 7 zu Beginn und Ende (Erntezeitpunkt des Fermentationsverfahrens) gehalten. Ein höherer pH-Wert führt zu einem wesentlichen und/oder vollständigen Verlust an Produkt. Der gewünschte pH-Wert kann durch Verwendung eines Puffers, wie Morpholinoethansulfonsäure (MES), Morpholinopropansulfonsäure (MOPS) und dergleichen, oder durch Wahl der Nährmaterialien, die natürlicherweise Puffereigenschaften besitzen, wie die im folgenden beschriebenen Produktionsmedien, eingehalten werden.
- Die bevorzugten Quellen für Kohlenstoff in dem Nährmedium sind Kohlenhydrate, wie Glucose, Xylose, Galactose, Glycerin, Stärke, Dextrin und dergleichen. Weitere Quellen, die eingeschlossen sein können, sind Maltose, Rhamnose, Raffinose, Arabinose, Mannose, Salicin, Natriumsuccinat und dergleichen.
- Die bevorzugten Quellen für Stickstoff sind Hefeextrakt, Fleischextrakt, Pepton, Glutenmehl, Baumwollmehl, Sojabohnenmehl und weitere Gemüsemehle (teilweise oder vollständig entfettet), Caseinhydrolysate, Sojabohnenhydrolysate und Hefehydrolysate, Getreideeinweichwasser, Trockenhefe, Weizenkeime, Federmehl, Erdnußpulver, lösliche Destillationsrückstände etc. sowie anorganische und organische Stickstoffverbindungen, wie Ammoniumsalze (z.B. Ammoniumnitrat, Ammoniumsulfat, Ammoniumphosphat etc.), Harnstoff, Aminosäure und dergleichen.
- Die Kohlenstoff- und Stickstoffquellen, obwohl zweckmäßigerweise in Kombination eingesetzt, brauchen nicht in ihrer reinen Form verwendet zu werden, da weniger reine Materialien, die Spuren von Wachstumsfaktoren und beträchtliche Mengen an mineralischen Nährstoffen enthalten, ebenfalls zur Verwendung geeignet sind. Wenn gewünscht, können sie zu den Mineralsalzen im Medium, wie Natrium- oder Calciumcarbonat, Natrium- oder Kaliumphosphat, Natrium- oder Kaliumchlorid, Natrium- oder Kaliumiodid, Magnesiumsalze, Kupfersalze, Kobaltsalze und dergleichen, hinzugegeben werden. Falls notwendig, insbesondere wenn das Kulturmedium stark schäumt, kann ein Entschäumungsmittel wie flüssiges Paraffin, Fettöl, Pflanzenöl, Mineralöl oder Silicon hinzugegeben werden.
- Was die Bedingungen der Produktion von L-683 742 in großen Mengen betrifft, so werden dafür submerse aerobe Kulturbedingungen bevorzugt. Zur Produktion in kleinen Mengen wird eine Schüttel- oder oberflächenkultur in einem Kolben, einer Flasche oder einer Kulturschale eingesetzt. Außerdem wird die Verwendung der vegetativen Form des Organismus zum Animpfen der Produktionstanks bevorzugt, wenn das Wachstum in großen Tanks durchgeführt wird, so daß eine Wachstumsverzögerung bei dem Produktionsverfahren von L-683 742 vermieden wird. Demgemäß ist es wünschenswert, zuerst ein vegetatives Inokulum des Organismus herzustellen, indem eine relativ kleine Menge des Kulturmediums mit Sporen oder Mycelien des Organismus angeimpft wird, der in einer "Schrägkultur" hergestellt worden ist, und indem das genannte angeimpfte Medium, das auch Stammedium genannt wird, sodann aseptisch in große Tanks übergeführt wird. Das Fermentationsmedium, in dem das Inokulum hergestellt wird, ist im wesentlichen dasselbe, wie das Medium, das zur Produktion von L-683 742 verwendet wird, oder es unterscheidet sich davon und wird im allgemeinen zur Sterilisierung des Mediums vor dem Animpfen autoklaviert. Der pH-Wert des Mediums wird im allgemeinen vor der Autoklavierungsstufe durch geeignete Zugabe einer Säure oder Base, vorzugsweise in Form einer Pufferlösung, auf etwa 7,0 eingestellt.
- Bewegen und Belüften des Kulturgemisches können auf einer Reihe von Wegen erreicht werden. Schütteln kann durch eine Propeller- oder gleichartige mechanische Schüttelapparatur durch Umrühren oder Schütteln des Fermenters, durch verschiedene Pumpapparaturen oder durch Hindurchleiten von steriler Luft durch das Medium bereitgestellt werden. Eine Belüftung kann erreicht werden, indem sterile Luft durch das Fermentationsgemisch geschickt wird.
- Die Fermentation wird im allgemeinen bei einer Temperatur zwischen etwa 20 ºC und 40 ºC, vorzugsweise 25 -35 ºC, für die Zeitdauer von etwa 48 bis 96 Stunden je nach Fermentationsbedingungen und Maßstäben, die variiert werden können, durchgeführt. Vorzugsweise werden die Produktionskulturen etwa 96 Stunden lang bei 27 ºC auf einem Rotationsschüttler, der bei 220 upm arbeitet, inkubiert, wobei der pH-Wert des Fermentationsmediums zur Ernte bei 7,0 gehalten wird.
- Bevorzugte Kultur/Produktionsmedien zur Durchführung der Fermentation umfassen folgendes: Stammedium A Glucose Difco -Hefeextrakt Hycase SF Produktionsmedium B Glucose Glycerin Getreideeinweichwasser Difco -Hefeextrakt Milchsäure L-Tyrosin pH-Einstellung auf 6,8
- Das hergestellte L-683 742 kann aus dem Kulturmedium durch herkömmliche Mittel gewonnen werden, die im allgemeinen zur Gewinnung anderer bekannter biologisch aktiver Substanzen verwendet werden. Die produzierte Substanz L-683 742 wird in dem kultivierten Mycel und im Filtrat gefunden und kann demgemäß aus dem Mycel und Filtrat isoliert und gereinigt werden, die durch Filtrieren oder Zentrifugieren der Kulturlösung durch ein herkömmliches Verfahren, wie Konzentrieren unter reduziertem Druck, Lyophilisieren, Extrahieren mit einem herkömmlichen Lösungsmittel, wie Methanol und dergleichen, pH-Einstellung, Behandeln mit einem herkömmlichen Harz (z.B. Anionen- oder Kationenaustauscherharz, nichtionisches Absorptionsharz etc.), Behandlung mit einem herkömmlichen Adsorbens (z.B. Aktivkohle, Kieselsäure, Kieselgel, Cellulose, Aluminiumoxdid etc.), Kristallisation, Rekristallisation und dergleichen, erhalten werden. Ein bevorzugtes Verfahren ist die Lösungsmittelextraktion, insbesondere unter Verwendung von Methanol.
- Das Produkt L-683 742 aus der Fermentation zeigt eine positive immunsuppressive Aktivität im "T-Zellen-Proliferationstest" und besitzt auf dieser Grundlage Anwendung.
- Die folgenden Beispiele sind zum Zwecke der Erläuterung der Erfindung angegeben.
- Sporen von MA 6475 wurden auf Bennett's Agar (Difco Hefeextrakt, 0,1 %, Rinderextrakt, 0,1 %, N-Z-Amin Typ A, 0,2 %, Glucose, 1 %, und Agar, 1,5 %) hergestellt und 30 Minuten lang mit N-Methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidin bei einer Konzentration von 2 mg/ml von TM-Puffer (0,05 M Tris, 0,05 M Maleinsäure, eingestellt auf einen pH-Wert von 9 mit NaOH), bei Raumtemperatur unter sanftem Rühren behandelt. Die behandelten Sporen wurden für Einzelkolonien auf Bennett's Agar ausplattiert. Methanolextrakte der Fermentationen dieser Kolonien wurden durch Dünnschichtchromatographie (TLC) auf mutante Phänotypen getestet. Die betreffende Mutante MA 6646 wurde als Isolat identifiziert, die eine Hauptkomponente produzierte, die polarer war als die Haupt-Stammverbindung (L-683 590) in dem Lösungsmittelsystem Chloroform:Methanol (9:1). Ein HPLC- Profil zeigte, daß der Peak, der FK-523 entspricht, in der Stammkultur fehlte, daß der Peak, der dem Hauptpeak von FK-520 in der Stammkultur entspricht kaum nachweisbar war und daß zwei neue Peaks mit früheren Retentionszeiten (als FK-520 und FK-523) aufgetreten waren.
- Die Bestätigung des mutanten Phänotyps wurde durch Fermentation, Extraktion und TLC- und HPLC-Analysen der 12 Reisolate des ursprünglichen Mutanten-"Musters" erhalten. Die Fermentation umfaßte das Animpfen eines ungebaffelten 250-ml-Erlenmeyer-Kolbens, der 44 ml eines autoklavierten Stammediums enthielt, hergestellt mit destilliertem Wasser und bestehend aus KNO&sub3;, 0,2 %, Hycase SF, 2%, Difco-Hefeextrakt, 2 %, Glucose, 2 %, FeSO&sub4; 7H&sub2;O, 0,0025 %, NaCl, 0,05 %, MgSO&sub4; 7H&sub2;O, 0,05 %, MnSO&sub4; 7H&sub2;O, 0,0005 %, ZnSO&sub4; 7H&sub2;O, 0,001 % und CaCl&sub2; 2H&sub2;O, 0,002 %. Das Stammedium wurde mit Sporen aus dem Bennett-Medium angeimpft und 42-48 Stunden lang bei 27 ºC auf einem Rotationsschüttler, der bei 220 upm arbeitete, inkubiert. Ein 1,0-ml-Aliquot der resultierenden Stammkultur wurde zum Animpfen eines ungebaffelten 250-ml-Erlenmeyerkolbens verwendet, der Produktionsmedium enthielt, das mit destilliertem Wasser hergestellt worden war, und aus Glycerin, 2,5 %, Glucose, 2,2 %, Getreideeinweichflüssigkeit, 1,5 %, Difco-Hefeextrakt, 1,5 %, Milchsäure, 0,2 % (v/v), L-Thyrosin, 0,4 %, MOPS, 1 %, und CaCO&sub3;, 0,025 %, bestand, wobei der pH-Wert vor dem Autoklavieren mit NaOH auf pH 6,8 eingestellt wurde. Die Produktionskultur wurde 96 Stunden lang bei 27 ºC auf einem Rotationsschüttler inkubiert, der bei 220 upm arbeitete. Eine Methanolextraktion wurde durch Zugabe eines gleichen Volumens Methanol zu der Nährlösung, Schütteln bei hoher Geschwindigkeit auf einem Eberbach-Umkehrschüttler fuhr 20 Minuten und anschließender Zentrifugation erreicht. Die wäßrigen Methanolextrakte wurden anhand von TLC und HPLC analysiert.
- Durch Reversed-phase-HPLC (Whatman -Partisil 5 ODS-3, 0,1 % wäßrige H&sub3;PO&sub4;:CH&sub3;Cn, 40:60, 1 ml/min.) besaß die Hauptkomponente sämtlicher Isolate eine Retentionszeit von 5,97 Minuten im Vergleich zu 7,97 Minuten für FK-520. Diese Komponente besaß dieselbe Retentionszeit gemäß HPLC und denselben Rf-Wert gemäß TLC wie 31-Desmethyl-L-683 590 (L-683 742)
- Zur Strukturbestimmung wurde die Verbindung auf einer halbpräparativen Reversed-phase-Octadecyl-C&sub1;&sub8;-HPLC-Säule (Whatman -Magnum 9 Partisil 10 ODS-3) isoliert. Vier Schüttelkolbenkulturen der Mutante wurden mit einem gleichen Volumen Methanol extrahiert, zentrifugiert und der Überstand zur Entfernung des Methanols eingedampft. Die resultierende wäßrige Phase wurde zweimal mit Methylenchlorid extrahiert und in einem Stickstoffstrom zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wurde in Methanol resuspendiert, und ein 1-ml-Aliquot wurde auf eine halbpräparative Säule aufgegeben. Das Lösungsmittelsystem bestand aus H&sub2;O:CH&sub3;CN (40:60) mit einer Fließgeschwindigkeit von 3 ml/min. Der breite Peak, der zwischen 9,4 und 12 Minuten eluierte, wurde gesammelt, unter einem Stickstoffstrom eingedampft und in 1 ml Methanol resuspendiert. Die Konzentration der Probe wurde durch analytische HPLC auf etwa 4,5 mg/ml geschätzt. Eine Verdünnung dieser Probe erfolgte für den IL-2-Test. Die Ergebnisse zeigten, daß die verdünnte Probe eine positive immunsuppressive Aktivität zeigte. Die NMR-Analyse bestimmte, daß die durch den Mutantenstamm produzierte Verbindung dieselbe war wie L-683 742.
- Es wird zurecht angenommen, daß eine Mutation in dem C-31-O-Methyltransferasegen die Immunomycin-C-31-O-Methyltransferase inaktiviert hat, was zu der wirksamen Produktion von L-683 742 führte. Außerdem wird bemerkt, daß diese Mutation die O-Methylierung an C-13 und C-15 nicht beeinflußt hat, was anzeigte, daß ein unterschiedliches Protein oder unterschiedliche Proteine für die O-Methylierung an diesen Positionen in L-683 742 und L-683 590 verantwortlich sind.
Claims (6)
1. Verfahren zur Herstellung eines Immunsuppressivums, das
als demethyliertes C-31-Derivat von einem Makrolid des
Typs L-683 590 identifiziert ist, umfassend die Stufe des
Züchtens eines Mutantenstammes von Streptomyces, welcher
das genannte demethylierte C-31-Derivat unter submersen
aeroben Fermentationsbedingungen in einem wäßrigen
Kohlenhydratmedium, das einen Stickstoffnährstoff
enthält, bei einem pH-Wert unter 8,0 ausreichend lange
produziert, so daß das demethylierte
C-31-Immunsuppressivum produziert wird.
2. Verfahren zur Herstellung eines Immunsuppressivums, das
als L-683 742 (Demethimmunomycin) identifiziert ist,
umfassend die Stufe des Züchtens eines Stammes von
Streptomyces hygroscopicus var. ascomyceticus, der die
Mutante "L-683 742" unter submersen aeroben
Fermentationsbedingungen in einem wäßrigen Kohlenhydratmedium,
das einen Stickstoffnährstoff enthält, bei einem pH-Wert
unter 8,0 ausreichend lange produziert, so daß L-683 742
produziert wird.
3. Verfahren nach Anspruch 2, bei dem der genannte mutante
Stamm die ATCC-Nr. 53855 besitzt.
4. Nährmedium, das durch das Verfahren nach Anspruch 2
hergestellt wird und eine positive Hemmung der T-Zellen-
Aktivierung zeigt.
5. Mutanter Stamm Streptomyces hygroscopicus subsp.
ascomyceticus, ATCC-Nr. 53055.
6. Mutanter Stamm nach Anspruch 5 in biologisch reiner Form.
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| US5565560A (en) * | 1991-05-13 | 1996-10-15 | Merck & Co., Inc. | O-Aryl,O-alkyl,O-alkenyl and O-alkynylmacrolides having immunosuppressive activity |
| US5273979A (en) * | 1991-08-01 | 1993-12-28 | Merck & Co., Inc. | C-31 desmethyl FR-900520 cyclic hemiketal immunosuppressant agent |
| US5189042A (en) * | 1991-08-22 | 1993-02-23 | Merck & Co. Inc. | Fluoromacrolides having immunosuppressive activity |
| US5208241A (en) * | 1991-09-09 | 1993-05-04 | Merck & Co., Inc. | N-heteroaryl, n-alkylheteroaryl, n-alkenylheteroaryl and n-alkynylheteroarylmacrolides having immunosuppressive activity |
| US5221625A (en) * | 1992-01-10 | 1993-06-22 | Merck & Co., Inc. | Cyclcic FR-900520 microbial biotransformation agent |
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| US5284877A (en) * | 1992-06-12 | 1994-02-08 | Merck & Co., Inc. | Alkyl and alkenyl macrolides having immunosuppressive activity |
| US5264355A (en) * | 1992-07-02 | 1993-11-23 | Merck & Co., Inc. | Methlating enzyme from streptomyces MA6858 |
| US5290689A (en) * | 1992-09-28 | 1994-03-01 | Merck & Co., Inc. | New cyclic FR-900520 microbial biotransformation agent |
| US5283183A (en) * | 1992-09-28 | 1994-02-01 | Merck & Co., Inc. | Cyclic FR-900520 microbial biotransformation agent |
| US5268282A (en) * | 1992-09-28 | 1993-12-07 | Merck & Co., Inc. | Cyclic FR-900520 microbial biotransformation agent |
| US5268281A (en) * | 1992-09-28 | 1993-12-07 | Merck & Co., Inc. | Cyclic FR-900520 microbial biotransformation agent |
| US5693648A (en) * | 1994-09-30 | 1997-12-02 | Merck & Co., Inc. | O-aryl, O-alkyl, O-alkenyl and O-alkynyl-macrolides having immunosuppressive activity |
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| DE69013189T2 (de) | Verfahren zur Herstellung einer immunosuppressiven Substanz (demethimmunomycin) durch Verwendung eines Stamm-Mutanten eines Mikroorganismus. | |
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