JPH03201992A - 免疫抑制剤の新規な製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 定１目と生立 本発明はストレプトマイセス・バイグロスコピカス・亜
種・アスコマイセティカス （ＳＬｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　　ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉ
ｃｕｓ　　５ｕｂｓｐ。

ａｓｃｏｍｙｃｅｔｉｃｕｓ）（ＭＡ　６４７５１．Ａ
’ｒＣＣＮｏ、１４８９１の代謝系遮断変異株である新
規な変異株微生物ストレプトマイセス・バイグロスコピ
カス・亜種・アスコマイセｊ−イカス（ＳＬｒｅｐｔ、
ｏｍｙｃｅｓ　ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓｓｕｂｓｐ
、　ａ８ｃｏ＋ｎｙｃｃＬｉｃｕｓ）　（ＭＡ　６６４
６１．ＡＴＣＣＮｏ、５：１８５５を使用する免疫抑制
剤Ｉ、−６８３，７４２の新規な製造ｌｉ法に関する。

この方法は窒素栄養源を含む水性炭水化物培地中で好気
的発酵条件トで新規々微生物を培養することを含む。

！ｊ該　　１升における　−：の　ｉｐな説明１９８３
年、米国ＦＤＡは臓器移植外科領域に革命をもたらした
極めて有効な免疫抑制剤であるシクロスポリンを認可し
た。この薬品Ｇよ体の免疫系が移植物の外米蛋白質を拒
絶するためにその天然の保１剤の巨大な武器庫を動員す
るのを明害することにより作用する。

薬品が移植拒絶との戦いにイ■効であればあるほど、デ
ｆ不全、肝臓損害及び潰瘍を起こす欠点に苦しみ、それ
らは多くの場合極めて重くなる可能性がある。

Ｆｕｊ　ｉｓａｗａの欧州特許出願公開第０１８４１６
２号はシクロスポリンより１００培強力と称せられる新
規なマクロライド免疫抑制剤ＦＫ−５０６を記述してお
り、前記文献は参考例としてここに組み入れる。このマ
クロライドは構造が類似するＦＫ−５２５と同様にスト
レプトマイセス・ツタバエンシス（ＳＬｒｅｐｔｏａ＋
ｙｃｅｓ　ｔ、５ｕｋｕｂａｅｎｓｉｓｌの特別な株の
発酵により生産される。又、ニス・バイグロスコピカス
・亜種・ヤクシマエンシスｆｓ、ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉ
ｃｕｓｓｕｂｓｐ、　ｙａｋｕｓｈｉｓａｅｎｓｉｓｌ
により−［産される密接に関連するマクロライド免疫抑
制剤Ｐ　Ｋ　−５２０及びＦ　Ｋ　−５２３についても
記述している。

Ｔ、Ａｒａｉの米国特許第３．２４４，５９２号は抗カ
ビ物質「アスコマイシン　ｊａｓｃｎｍｙｃｉｎ）　Ｊ
を生産するストレプトマイセス・バイグロスコピカス・
バラエティ・アスコマイセティカスの培養について記述
している。

Ｓ、Ｔ、Ｃｈｅｎ、Ｅ、Ｓ、Ｉｎａｓｉｎｅ、Ｂ、Ｈ，
Ａｒ１５ｏｎ、Ｌ、Ｓ、Ｗｉｃｋｅｒによる米国特許願
第２１３，０２５号（Ｓ件第１７７６７号）　　（Ｍｅ
ｒｃｋ　＆　Ｃｏ、Ｉｎｃ、にｕ４ｍ）はＬ　−６８３
，５９０の存在下で微生物アクチノプラナセート種（Ａ
ｃｔｉｎｏｐｌａｎａｃｅＬｅ　ｓｐ、）（１１＾６５
５９）、＾ＴＣＣ恥５：１７７１を培養してＬ　−６８
３，５９０を生変換させることにより生産されるＬ　−
６８３，５９０（ＰＫ−５２０）のＣ−：ｌＩデメチル
アナログである新規な免疫抑制剤「デメ千ムノマイシン
（ｄｅｓｅｔｈｉｓｓｕｎｏｓｙｃｉｎ）　Ｊ、Ｌ　−
６８：Ｉ、７４２を開示しており、前記文献は参考例と
してここに組み入れる。

しかしながら、Ｌ　−６８：ｌ、５９０出発物質の存在
を必要としないで微生物の発酵により直接免疫抑制御′
ＦｑＬ　−６８３，７４２を生産することについて記載
された文献はない。

これに関する新規な方法の探索がこの分野で絶えず行わ
れている。

主１ｊとに釣 免疫抑制剤Ｌ　−６８３．７４２は、Ｎ−メチル−Ｎ′
−二トローＮ−二トロソグアニジンで変Ｙ４処ｆ’！！
することによって、ＡＴＣＣＮｏ、Ｉ４８９１（ＭＡ　
６４７５１から誘導される。変異株微生物ストレプトマ
イセス・バイグロスコピカス・亜種・アスコマイセティ
カス（ＭＡ　６６４６１　、　ＡＴＣＣＮｏ５：１８５
５の発酵により直接ｅｊられることを発見した。この発
酵は。

１９８８年６月２９日出願され同じ譲受人を持つ特許願
第２１３．０２５号（事件第１７７６７号）に記載され
ているように、マクロライド免疫抑制剤Ｌ　−６８３，
５９０の（７／Ｅを必要とせず、窒素栄養源を含む水性
炭水化物培地中で液中好気的条件下で、８．０以下例え
ば約７のｐＨでＬ　−６８３．５９０　（イムノマイシ
ン）のモノ−Ｃ−：ｌｌデメチル体であるＬ−６８３，
７４２（デメチムノマイシン）を生産するに十分な０間
行うものであり、前記文献はこの特別な目的のために、
９４例としてここに組み入れる。他のＬ　−６８３゜５
９０　型マクロライドのＣ−３１デメチル誘導体もここ
に記述した発明の方法により生産される発Ｍ液中に存在
する６のと当然思われる。

結果として得られるＬ　−６８３，７４２は免疫抑制活
性すなわち、カルシウム・イオン透過担体（イオノマイ
シンｌｉｏｎｏｍｙｙｃｉｎ）　）とフォルボールスデ
ート・アセテート（ＰＭＡ）　との組合せにより誘噂さ
れるＴ細胞刺激検定法によって証明されるようなＴ細胞
活性化の陽性Ｕｔｔ害を；卜し、前記検定法をここでは
「′Ｉ゛細胞増殖検定法Ｊと称する。この検定法の原理
はイオノマイシンとＰＭＡとの組合せにより促進される
マウス′ｒリンパ球の増殖を測定することである。この
検定法で陽性の試料は′１゛細胞の増殖を阻害し、それ
はトリヂウム化チミジン取込みの減少により示される。

この発明により、液中ｈｒ気的発醇条件下窒素栄養源を
含む水性炭水化物培地中でｐＨ１１．（ｌ以下でＣ−；
目デメヂル免疫抑制剤を生産するに十分な時間１．　−
　６８３．５９０型マクロライドのＣ−：１１デメチル
誘導体を産ｔＥするストレプトマイセスの変異株を培養
する工程からなる■、−　６８３．　５９０型マクロラ
イドのＣ−：１１デメヂル誘導体と確認された免疫抑制
剤の新規な製造方法が提供される。

更に、液中好気的発酵条件下窒素栄養源を含む水性炭水
化物培地中でＬ　−　６８３．７４２を産生ずるに゛十
分な時間ストレプトマイセス・ハイクロスコピカス・亜
種・アスコマイセティカス（ＭＡ　６６４６１。

ＡＴＣＣ　　Ｎｏ．５３８８５の一株を培養する工程か
らなるＬ　−　６１１３．７４２と確認された免疫抑制
剤の新規な製造方法が提供される。

又、上述の方法により生産される発酵液が提供される。

更に、新規な変異株微生物ストレプトマイセス・ハイク
ロスコピカス・亜種・アスコマイセティカス、ＡＴＣＣ
　　Ｎｏ．５３８５５が提供される。

発明の詳細な　　と　ましいシ　化 本発明はＬ−６８３，７４２を生産するためのストレプ
トマイセス・バイグロスコピカス・亜種・アスコマイセ
ティカス，　ＡＴＣＣ　　Ｎｏ．５３８５５の発酵を含
む。この微生物は、メリーランド１Ｍａｒｙｌａｎｄｌ
　。

ロックビル（ｌｌｏｃｋｖｉｌｌｅｌ．バークローン・
ドライブ（Ｐａｒｋｌａｗｎ　Ｄｒｉｖｅｌ１２３０１
に存在するアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクシ
ョンｌＡｏ＋ｅｒ　ｉｃａｎＴｙｐｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ
　ＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎｌにＡＴＣＣ　　Ｎｏ　５３８
５５として、及びニュー・シャーシー（Ｎｅｗ　Ｊｅｒ
ｓｅｙｌ．ローウェー　（Ｉｌａｈｗａｙｌに存在する
メルク・カルチャー・コレクション（Ｍｅｒｃｋ　Ｃｕ
ｌｔ．ｕｒｅ　Ｃｏ目ｅｃｔｉｏｎ）にＭＡ６６４６と
して１９８９年１月１２日に提出され、現住制限された
寄託がなされている。生態学的、培養的、生物学的及び
生理学的特徴を含む物理学的特徴及び分領を以下に簡（
トに説明する。

ＭＡ　６６４６株 顕微鏡観察 直経が０．６　ミクロンの分岐した繊維状菌糸。担胞ｒ
一体は短く、緻密な螺旋状外観を呈する。

オートミール寒天 栄養発育：裏面は灰白色 気中増殖二数富でマット状、灰色〜黒色１１ｒ溶性色素
：なし グリセリン−アスパラギン 栄養発育　裏面は灰白色透明，表面は灰白色透明で浸食
された縁辺部 気菌糸：まばらで灰白色、粉状 １４溶性色素：ｔｔシ 無機塩澱粉寒天 栄養発ｆｒ＝裏面はクリーム色 気中増殖二〇富でビロード状、淡灰色〜男色気閑糸：白
色ビロード状 可溶性色素：なし 酵はエキス−　−エキス寒Ｒ 栄養発育：裏面は灰Ａ色 気中増殖：豊富で淡灰〜灰色、マット状、綿状０■溶性
色素：なし 炭水化物１用　パターン ｄ−グルコース　　　　　　　　　＋＋ｄーアラビノー
ス　　　　　　　＋／ ｌーアラビノース　　　　　　　＋／ ｄーフラクトース　　　　　　　＋十 １ーグルコース イノシトール　　　　　　　　　＋／ ｄーマルトース　　　　　　　　＋ （ｊ−マンニトール　　　　　　　＋十ｄ−マンノース
　　　　　　　　＋＋ ｌ−マンノース （」−ラフィノース Ｉ−ラムノース　　　　　　　　＋＋ スクロース ｄ−キシロース　　　　　　　　＋十 １−キシロース ｒｘ　−ｄ−ラクト−又　　　　　　＋＋β−（］−ラ
クトース　　　　　　＋＋Ｌ表で＋＋は相当な発Ｒ１十
は適度な発育。

＋／−は僅か１．（発育、−は発育のないことを小す。

本発明の）Ｊ′ｌ去は変異株ストレプトマイセス・ハイ
グ「１ス：Ｉビカス・亜種・アスコマイセテイカスＯ）
仕、（ユのｒｃ−：ＩＩデメチル」株により実施するこ
とができ、特にＡＴＣＣＮｏ、５３８５５株が好ましい
。

般に、ｌ、−６８３．７４２株は上述の変異株を、同化
性炭素源及び窒素源を含む水性栄養培地中で、叶ましく
は液中好気的条件（例えば娠且培養、液中１ｉ’？　ａ
など）Ｆで培ａ（発酵）することにより生産することが
できる。水性培地は発酵の開始期と終！す１（収穫）に
おいては約７のｐＨに維持するのが好ましい。これより
、αいｐＨは生成物の相当な及び／叉は金部の喪失につ
ながる。望ましいｐＨはモルホリノエタンスルホン酸Ｉ
ＭＥｓＩ　、モルホリノプロパンスルポン酸（ＭＯＰＳ
Ｉなどのような緩衝剤を使用するか、又は以下に記述す
る（を産培地のような本来緩衝性を持つ栄養源材料を選
択することにより維持することができる。

栄養培地中の好ましい炭素源はグルコース、キシロース
、ガラクトース、グリセリン、澱粉、デキストリンなど
のような炭水化物である。含イ■させることができる他
の炭素源にはマルトース、ラムノース、ラフィノース、
アラビノ−又、マンノース、サリシン、コハク酸ナトリ
ウムなどが含まれる。

好ましい窒素源は酵１）エキス、肉エキス、ペプトン、
グルテンミール、綿実ミール、大（Ｌミル及び他の植物
性ミール（部分脱脂又は完全脱脂）、カゼイン加水分解
物、大豆加水分解物及び階ｈＬ加水分解物、コーンステ
イープリカー、乾燥酵１１、小麦胚芽、フェザ−ミール
、落花生粉、蒸渭器可溶分（ｄｉｓｔｉｌｌｅｒｓ　５
ｏｌｕｂｌｃｓ）など、並びにアンモニウム１１！（例
えば硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、リン酸アン
モニウムなど）、尿素、アミノ酸などのような無機及び
有機窒素化合物である。

炭素源と窒ｓＩＱは糾み合わせて好便に使用されるか、
それらは純粋な形体で使用する必要はなく、なんとなれ
ば微縫の成長因子及び相当量の鉱物質栄養源を含む、よ
り純度の低い材料も使用に適しているからである。所９
＃により、炭酸ナトリウム又はカルシウム、リン酸ナト
リウム又はカリウム、塩化ナトリウム又はカリウム、ヨ
ウ化ナトリウムまたはカリウム、マグネシウム１ム、銅
塩、コバルト塩などのような鉱物質塩を培地に添加する
ことかできる。必要により、特に培地か著しく泡ケつ場
合は流動パラフィン、動物油、植物油、鉱物抽又はシリ
コンのような消泡剤を添加することかできる。

１−６８３．７４２を大量にｉＬ産する条件としては液
中好気的培養条件が奸ましい。少晴の生産にはフラスコ
、び／υ又は培養皿による振磯又は表面培養を用いる。

四に大型槽で増殖を行う場合、■、＝６８３、７４２の
生産工程における発育の遅延を避けるため微生物の栄養
形態を生産槽への植菌に他用するのが望ましい。従って
、「斜面」中に生産された微生物の胞子又は菌糸を比較
的少電の培地に植菌し、前記植菌した培地（これを「種
菌培地」と称することもある）を培養し、次いで培養し
た栄養種菌を黒画的に大型槽に移植することにより微生
物の宋ａ１４閑をｔ［産することが第一に望ましいこと
である。種菌が生産される発Ｍ培地はＬ１ｉ８３．７４
２の生産に使用する培地と実質的に同一か叉は相違し、
一般に植菌前培地を殺菌するためオートクレーブで加熱
する。培地のｐｌ＋は、一般ｔこオートクレーブ殺菌面
、＃又は塩基を好ましくは緩衝油の形態で適当に添加す
ることにより約７．０に調節する。

培養混合物の攪拌と通気は神々なｈ法で達成することか
できる。攪拌はプロペラ又は類似の機械的攪拌装置によ
り、発酵槽を回転又は＆頒することにより、神々なポン
プ装置により、又は培地に無菌空気を通過させることに
より行うことができる。通気は発酵混合物に無菌空気を
通過させることにより行うことができる。

発酵は通常的２０℃と４０℃の間の温度好ましくは２５
〜：）５”Ｃで約４８０間〜９６時間行うが、この条件
は発酵の条件とスケールにより変動させることができる
。好ましくは、生産培養は２２０ｒｐｍで稼働する１０
１転振国機上で２７℃で約９６Ｂ、’ｊ間定潟保持し、
この場合発酵培地のｐＨは終期まで７．０に維持する。

発酵を行うための４Ｆましい培ａ　／　ＩＩＥ産培地は
１表の通りである６ 社畳四Ｉ肛込　　　　　　　　　　　　　ｇ／ｇグルコ
ース　　　　　　　　　　　２０．０Ｄｉｒｃｏ酵１」
エキス　　　　　　　　２０．０１１ｙｃａｓｅ　　Ｓ
Ｆ　　　　　　　　　　　　２０．０ＫＮ０．　　　　
　　　　　　　　　　２．０ＦｃＳＯ，７Ｉｔ２０　　
　　　　　　　　　０．０２５ａＣＩ ＭｇＳ（＋４・７１１□（） ＭｎＳ０４・７１１２０ １ｎｓＯ，・７１１ｇ０ ＣａＣ１２’　２１１．０ 上Ｂ」す此且 グルコース グリセリン コーンステイープリカー 旧ｆｃｎ酵Ｆ１エキス 乳酸 Ｌ−ヂロシン ０ＰＳ ＣａＣＯ。

ｐＨ６，８に調節 生産されたＬ　−（１８：１．７４２は他の既知の生物
学的活性物質の回収に一般に使用される通常のｌｊ法に
より培地から回収することができる。生産されたＬ−６
８３．７４２物質は培養菌体と濾液中に佇７Ｉ：、シ従
って、培Ｍ液を濾過又は遠心分離して（１１られる０、
５ ０．５ ０．１Ｊｌ）５ ０、　Ｉ）　１ ０．０２ ｇ／Ｑ ２ ５ ０ ５ ０ １１．２５ 菌体と′ａ液から、減圧下での濃縮、凍結乾燥、メタノ
ールなどのような通常の溶媒による抽出、ｒｏ１１調節
、通常の樹脂（例えばアニオン又はカチオン交換樹脂、
非イオン性吸着樹脂など）による処理１通常の吸着剤（
例えば活性炭、ケイ酸、シリカゲル、セルロース、アル
ミナなど）による処理、結晶化、再結晶化などの通常の
方法により分離し梢製することができる。好ましいノミ
法は溶媒抽出であり、特にメタノールを使用するのが好
ましい。

発酵からの生産物Ｌ　−６８３，７４２は、「Ｔ細胞増
闇検定法」で陽性の免疫抑制活性を石し、これに１Ｊ　
−ｉ　（イイ用性をｈつ。

次の実施例は本発Ｈ月を例証するために示すのであり１
本発明の箱間又は忠恕を限定するためのものと解すべき
ではない。

ＭＡ　６４７５の胞子をベネットｆｒｌｅｎｎｅｔｔｌ
寒天（Ｄｉｒｃｏ　Ｍ　ＩＩ！エキス１ン、１％、肉エ
キス０．１％、Ｎ　−Ｚ　Ａｍ１ｎｅ　ＬｙｐｅＡ　０
．２％、クルコース１％、寒天１．５％〉から調製し、
ＴＪＩ衝液（０，０５Ｍ　Ｔｒｉｓ、０．０５Ｍマレイ
ン酸、Ｎａ０１１でｐ１１９に調節）中２　ｍｇｌ■Ｉ
の濃度にしたＮ−メチル−Ｎ′−二トローＮニトロソク
アニジンて、室温でおたやかに撹拌しながら３０分間処
理した。処理した胞子をベネット寒天上で単一コロニー
に平板培養した。これらのコロニーの発酵液のメタノー
ル抽出液について、変異株のフェノタイプを薄層クロマ
トクラフィー（ＴＬＬ：）で試験した。主題の変異株Ｍ
Ａ　Ｂ６４６をクロロホルムニメタノール（９：ｌ）の
溶媒系て士安親化合物（Ｌ−５８：ｌ、５９０）よりも
極性の強いＬ費成分を生産する分離株として確認した。

ＩＩ　Ｐ　１．Ｃプロフィールは、親培養にあるＦＫ−
５２３に相当するピークはなく、親培養にある主要なＦ
Ｋ−５２０ピークに相当するピークは僅かに認められ、
又（ＦＫ−５２１１及びＦに−５２３より）早いリテン
ションタイムの２つの新しいピークか現れることを示し
た。

元の変異株「断片（ｐａｔｃｈ）Ｊの１２の再分離株の
発酵、抽出及びＴ１．ＣとＨＰ　Ｌ　Ｃ分析により変異
株のフェノタイプの確認を行った。この発酵はにＮＯ。

０．２％、１Ｉｙｃａｓｅ　ＳＦ２％、　Ｄｉｒｃｏ酵
母エキス２％、グルコース２％、Ｆｅ５０．　・７　Ｈ
□００．０２５％、Ｎａｃ　１（１，０５％、ＭｇＳＯ
４・７１１ａ００．０５％、Ｍｎ５Ｏ−・７１１２００
．０１１０５％、ＺｎＳＯ４・７１１２００．００１％
、及びＣａＣｌ　Ｋ２１１□００．００２％から成り、
蒸溜水で調製し、第１・クレープ殺菌した種菌培地の４
４ｍ１を含む２５０ｍ１邪魔板付きエルレンマイヤーフ
ラスコへの植菌を含む。種菌培地はベネット培地からの
胞子を植菌し、２２０ｒｐｍで稼働する回転振田機上で
、２７℃で４２〜４８１１？間定温保持した。（１られ
る種菌培養の１．１ｌＩｔｌｌ　を、グリセリン２．５
％、グルコース２．２％、コーンステイープリカー１５
％、　Ｄｉｒｃｏ酵母エキス１．５％、　１Ｌ酸０．２
％（ｖ／ｖ）、Ｌ−ヂロシン（」４％、ＭＯＰＳＩ％、
及びＣａＣ０，０，０２５％から成り、蒸溜水で調製し
、オートクレーブ殺菌前Ｎａ０１１でｐ１１６．８に調
節した生産培地を含む２５０ａ＋１の邪魔板のないエル
レンマイヤーフラスコに植菌するのに用いた。＋１産培
養は２２０ｒｐｍで稼働する回転振ｃＭ機上で２７℃で
９６時間定温保持した。培養液に等薯のメタノールを添
加し、Ｅｂｅｒｂａｃｈ往復振爆機上で高速で２０分間
攪拌し、次いで遠心分離することによりメタノール抽出
を行った。水性メタノール抽出ｉｉをＴ１．ＣとＩＩＰ
Ｌｃにより分析した。

逆相１１ＴＬＣ（ＷｈａＬｍａｎ　ＰａｒＬｉｓｉｌ　
５０ＤＳ　−３、０，１％ＩＩ　、Ｉ）０．水溶液：　
Ｃ１１，ＣＮ（４０：６０）、　　１　ｗ＋１／分）に
よると、すべての分離株の主要成分のリテンションタイ
ムはＦに−５２０の７，９７分に対して５．９７分であ
った。

この成分は３１−デスメチル−Ｌ、　−６８３．５９０
　（Ｌ　−ｊｉ８：１．７４２）とｌｌ　Ｐ　Ｌ　Ｃの
リテンションタイム及びＴＬＣの１（、が同一であった
。

構造決定のため、化合物を半調測用逆相オクタデシルＣ
、、ＨＰＬＣカラム（Ｗｈａｔｍａｎ　Ｍａｇｎｕｍ　
９　。

ＰａｒＬｉｓｉｌ　１００ＤＳ　−３）でｌｉｔ離した
。変異株の４つの飯田フラスコ培養を等徹のメタノール
で抽出し、遠心分離し、上ＩＧ浦を蒸発してメタノール
を除いた。得られた水層を二塩化メヂレンで２　［ｎｌ
抽出し、窒素気流下で蒸発乾燥した。残留物をメタノー
ルにｉＴＦ懸濁し、その１ｍｌを半調製用カラムに注入
した。溶媒系は１１□０：ＣＩｌ、ＣＮ（４０：６０１
であり、流速は３　ｍ１７分であった。９．４分と１２
分の間にｔ８１ｉｉｆする幅広いピークを集め、窒素気
流下で蒸発し、１ｍｌのメタノールに再懸濁した。試料
の濃度を分析用＋１１１１．Ｃで１！＋１１定すると約
４．５ｍｇ／ｍｌであった。この試料の渭釈液を１１−
２検定に当てた。その結果希釈した試料は陽性の免疫抑
制活性を示した。ＮＭＲ分析は変な一株により生産され
る化合物がＬ−６８：ｌ。

７４２と同一であることを決定した。

Ｃ−：１ＩＯ−メチルトランスフェラーゼ遺伝ｒの変〃
：がイムノマイシンＣ−３１０−メチルトランスフェラ
ーゼを不活性化し、その結果Ｌ　−６８３゜７４２の曲
率的な生産につながると考えることば合理的である。史
に、この変異はＣ−１３とＣ−１５の０−メチル化に影
響せず、このことは異なる蛋白質又は複数の蛋白質がＬ
　−６８３，７４２とＬ　−６８３゜５９０のこれらの
位置のＯ−メチル化に対応することを示していることに
江意すべきである。

〃ｃｃ　１２　Ｐ　　１７／１８ Ｃ１２Ｒ１：４６５） ０発 明 者 スーイン　ジエー ダ ニス アメリカ合衆国、　０７４３６　　ニュージャーシイ。

ド、ヒアワサ　ブールヴアード　７３ オークラン

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、Ｌ−６８３．５９０型マクロライドのＣ−３１デメ
   チル誘導体を生産するストレプトマイセスの変異株を８
   ．０以下のｐＨで窒素栄養源を含む水性炭水化物培地中
   で液中好気的発酵条件下でＣ−３１デメチル免疫抑制剤
   を生産するに十分な時間培養する工程からなるＬ−６８
   ３．５９０型マクロライドのＣ−３１デメチル誘導体と
   確認された免疫抑制剤の製造方法。 ２、Ｌ−６８３．７４２生産ストレプトマイセス・ハイ
   グロスコピカス・バラエティ・アスコマイセティカスの
   変異株の一株を８．０以下のｐＨで窒素栄養源を含む水
   性炭水化物培地中で液中好気的発酵条件下でＬ−６８３
   ．７４２を生産するに十分な時間培養する工程からなる
   Ｌ−６８３．７４２と確認された免疫抑制剤の製造方法
   。 ３、変異株微生物はＡＴＣＣＮｏ．５３８５５である請
   求項２記載の製造方法。 ４、Ｔ細胞活性化の陽性阻害を示す請求項２記載の製造
   方法で製造される発酵液。 ５、ストレプトマイセス・ハイグロスコピカス・バラエ
   ティ・アスコマイセティカス、 ＡＴＣＣＮｏ．５３８５５である変異株微生物。 ６、生物学的に純粋な形態である請求項５記載の変異株
   微生物。