JPH03240791A - 新規免疫抑制抗生物質ｍ１９５１―６２ｆ２物質およびその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、ストレプトミセス属に属する微生物によって
生産され、免疫抑制活性および抗菌活性を有する新規抗
生物質並びにその製造方法に関する。

こ従来の技術： 微生物の生産する免疫抑制活性および抗菌活性を有する
抗生物質としては、シ、クロホスファミド、シクロスポ
リンＡ１シクロへキシミド、アドリアマイシン、マイト
マイシンＣ１ダウノマイシンなど多数の有用な化合物が
知られている。これらは、免疫抑制性、抗菌活性を有す
る新たな類に属するものであるが、生体内の様々な免疫
反応に対して、より低毒性かつ有用な化合物の提供が待
たれてい〔発明が解決しようとする課題及び課題を解決
するための手段〕 本発明者らは、文献未載の新規抗生物質ＭＩ９５１−８
２Ｆ２物質が、実験動物の各種細胞に対してインビトｏ
　（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ）およびインビボ（ｉｎ　ｖｉｖ
ｏ）で強い免疫抑制活性を有し、かつダラム陽性菌の発
育を強く阻止することを見出し、本発明を完成したもの
である。

すなわち、本発明は、式Ｓ１〕　： で表わされる新規抗生物質ＭＩ　９５１−６２Ｆ２物質
およびその塩を提供するものであり、又、本発明はスト
レプトミセス属に属するＭｌ　９５１−６２Ｆ２物質の
生産菌を培養し、その培養物から抗生物質ＭＩ９５１−
６２Ｆ２物質を採取することを特徴とする抗生物質Ｍｒ
９５１−６２Ｆ２物質の製造方法を提供するものである
。ここで、その塩としては２級アミン基における有機酸
、あるいは無機酸との塩が挙げることができ、有機酸と
しては酢酸、酒石酸、リンゴ酸、マロン酸等、無機酸と
しては塩酸、硫酸、リン酸等を例示できる。

抗生物質ＭＩ９５１−６２Ｆ２物質は、以下に示す理化
学的性状および生物学的性質により特徴づけられる。

（Ａ）抗生物質ＭＩ９５１−６２Ｆ２物質の理化学的性
状 （１）元素分析　Ｃ：５７．６２％、Ｈ：　＆　４５％
、Ｎ：１６．０５％、Ｏ：１８．２３％ Ｃ３ｓ　Ｈａ　ｓ　Ｎ　ｓ　Ｏｓとした計算値Ｃ：５７
．６３％、Ｈ：　８．２７％、Ｎ：１５．９２％、Ｏ：
　１８．１８％（２）Ｓ　Ｉ　　ＭＳ　（ｍ／　ｚ）　
　７９２　（ＭＨ）”（３）融　点　　２７２〜２７４
℃（分解）（４）旋光度　　〔αＬ＝−５９．７＠（ｃ
　　１．ＯＭｅＯＨ） 〔５ン溶解性　　メタノール、酢酸エチルまたはアセト
ンに可溶であり、水またはへ キサンに難溶である。

（６）赤外線吸収スペクトル ３３２０．２９６０．２９５０． １７４５．１６５０および１５３０ ｃｍ−’に吸収を有する（第１図参照）。

（７）’Ｈ−ＮＭＲスペクトル 重アセトン中、４００ＭＺで測定す ると第２図に示すスペクトルを与 える。

（８）”Ｃ−ＮＭＲスペクトル 重アセトン中、１００Ｍｚで測定し たスペクトルを以下に示す。

１７５．４　ｓ、　１７５．３　ｓ、　１７４．８　ｓ
。

１７１．１ｓ、１６９．３ｓ、１６７．９ｓ。

１６７．４ｓ、１６１．８ｃｉ、７１．４ｄ。

５６．３ｄ、５５．９ｄ、５５．５ｓ。

５３．１ｓ、５１．６ｄ、５１．２ｄ。

４９．６ｄ、４８．Ｏｔ、４７．８ｔ。

４１．４ｔ、　　４１．１ｔ、　　３８．５ｄ。

２９．４ｄ、　　２７．０ｔ、　　２６．８ｄ。

２５．９ｄ、２５．１ｔ、２４．１ｑ。

２３．８ｑ、　　２３．４℃、２３、Ｑｔ。

２１．４ｔ、２１．３ｑ、２０．８Ｑ。

２０．１ｑ、　　１９．９ｑ、　　１４．７ｑ。

１３．９Ｑ、　　１２．ＩＱ （Ｂ）抗生物質ＭＩ９５１−６２Ｆ２物質の生物学的性
状 （１）抗菌スペクトル 抗生物質ＭＩ９５１−６２Ｆ２物質のミニーラーヒント
ン寒天平板上での各種細菌に対する最低発育阻止濃度は
、次の第１表に示す通りである。

第１表 ノ〈シルス・アンスラシス 〉 ０ （２）急性毒性 抗生物質ＭＩ９５１−６２Ｆ２物質のマウスに対する急
性毒性を試験した結果、マウス腹腔内投与の場合１００
■／ｋｇで毒性を示さなかった。

以上の抗生物質ＭＩ９５１−６２Ｆ２物質；ま、本願に
よって開示される第２の発明に従って有利に製造するこ
とができる。

本発明にいう生産菌とは、抗生物質ＭＩ９５１−６２Ｆ
２物質を生産しろる微生物であれば、その属、種を問わ
ないが、具体的には放線菌に属する微生物であって本発
明者が東京都杉並区久我山の土壌より分離した放線菌で
、平成元年１２月６日付けで、通産省工業技術院微生物
工業技術研究所に微工研菌寄第１１１４１号として寄託
した放線菌ＭＩ９５１−６２Ｆ２、または微工研菌寄第
１１１４２号として寄託した放線菌ＭＩ４９８−Ａ７を
有利に用いることができる。

ＭＩ９５１−６２Ｆ２株の菌学的性状は以下の通りであ
る。

（Ａ）形態 顕微鏡下で、分枝した基生菌糸より気菌糸を伸長する。

気菌糸の先端は１〜８回転のらせんを形成し、輪生技お
よび胞子のうは認められない。成熟した胞子鎖は５０個
以上の胞子の連鎖を認め、各胞子の大きさは０．５〜０
．６　Ｘ　０．６〜０．９ミクロン位である。胞子の表
面は平滑である。基生菌糸および気菌糸の分断は認めら
れない。

（Ｂ）各種培地における生育状態 色の記載について〔〕内に示す標準は、コンテイナー・
コーポレーション・オブ・アメリカノカラー・ハーモニ
イ番マニュアル （Ｃｏｎｔａｉｎｅｒ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ　ｏｆ
　Ａｍｅｒｉｃａのｃｏｌｏｒｈａｒｍｏｎｙ　ｍａｎ
ｕａｌ）を用イタ。

（１）シュクロース・硝酸塩寒天培地（２７℃培養）無
色の発育上に、粉状のうす茶二４ｅｃ、　Ｂ１５ｑｕｅ
〜４ｇｃ、　Ｎｕｄｅ　Ｔａｎ　Ｅの気菌糸を着生する
。溶解性色素は認められない。

（２）グルコース・アスパラギン寒天培地（２７℃培養
）うす黄（２ｇｃ、　Ｂａｍｂｏｏ　’４の発育上に、
白〜うす茶〔４ｇｃ、　Ｎｕｄｅ　Ｔａｎ　〕の気菌糸
を着生する。

溶解性色素は認められない。

（３）グリセリン・アスパラギン寒天培地（ＩＳＰ−培
地５．２７℃培養） うす黄〔２ｇＣ１Ｂａ１Ｔｌｂ００〕〜うす茶［：３ｉ
ｃ、　ＬｔＡｍｂｅｒ　：ｌの発育上に、ピンク灰［５
ｅｃ、　ＤｕｓｔｙＰｅａｃｈ　〜５ｉｅ、　Ｃｏｐｐ
ｅｒ　Ｔａｎ〕の気菌糸を着生する。

溶解性色素は認められない。

（４）スターチ・無機塩寒天培地 （ＩＳＰ−培地４．２７℃培養） うす黄の発育上に、うすピンク［：５ｇｃ、　Ｐｅａｃ
ｈＴａｎ〕〜うす茶１”４ｅｃ、　Ｂ１５ｑｕｅ　〜４
＋ｅ、　Ｃｏｒｋ　Ｔａｎ〕の気菌糸を着生する。溶解
性色素は認められな（５）チロンン寒天培地 （ＩＳＰ−培地７２７℃培養） うす黄茶〔２ｉｅ、　Ｌｔ　Ｍｕｓｔａｒｄ　Ｔａｎ　
〕の発育上に、茶白の気菌糸をうつすらと着生するが、
培養後１４日目頃より、うすビンクロ５ｇｃ、　Ｐｅａ
ｃｈＴａｎ〕〜ピンク灰〔５ｅｃ、　Ｄｕｓｔｙ　Ｐｅ
ａｃｈ：の気菌糸を豊富に着生する。溶解性色素は茶色
味を帯びる程度である。

（６）栄養寒天培地（２７℃培養） うす黄（２ｇｃ、　Ｂａｍｂｏｏ　）〜うす黄茶（２１
ｅ。

Ｍｕｓｔａｒｄ　）の発育上に、白の気菌糸をうつすら
と着生する。溶解性色素は認められない。

（７）イースト・麦芽寒天培地 （ＩＳＰ−培地２．２７℃培養） うす黄（２ｇｃ、　Ｂａｍｂｏｏ　）の発育上に、ピン
ク族（５ｅｃ、　Ｄｕｓｔｙ　Ｐｅａｃｈ　〜５ｉｅ、
　Ｃｏｐｐｅｒ　Ｔａｎ　：］　〜うす茶（４ｉｅ、　
Ｃｏｒｋ　Ｔａｎ　３の気菌糸を着生する。

溶解性色素は認められない。

（８）オートミル寒天培地 （ＩＳＰ−培地３．２７℃培養） 無色〜うす黄の発育上にうすピンク’−Ｊ　ｇ　Ｃ＋Ｐ
ｅａｃｈ　Ｔａｎ　二〜うす茶１：４ｅｃ、　Ｂ１５ｑ
ｕｅ　〜４ｉｅ、　ＣｏｒｋＴａｎ　〕の気菌糸を着生
する。溶解性色素は認められない。

（９）グリセリン・硝酸塩寒天培地（２７℃培養）うす
黄Ｃ２ｇｃ、　Ｂａｍｂｏｏ　〕の発育上に、白の気菌
糸を着生する。溶解性色素は黄色味を帯びる程度である
。

αＯスターチ寒天培地（２７℃培養） 無色〜うす黄の発育上に、ピンク族（５ｅｃ。

Ｄｕｓｔｙ　Ｐｅａｃｈ　コ〜うす茶〔４ｅｃ、　　Ｂ
１５ｑｕｅ　〜４ｉｅ。

Ｃｏｒｋ　Ｔａｎ、ｊの気菌糸を着生する。溶解性色素
は認められない。

卸リンゴ酸石灰寒天培地（２７℃培養）無色〜うす黄の
発育上に、ピンク族（５ｅｃ。

Ｄｕｓｔｙ　ＰｅａＣｈ　）　〜うす茶〔４ｅｃ、　Ｂ
１５ｑｕｅ　〕の気菌糸を着生する。溶解性色素は認め
られない。

回セルロース（ろ紙片添加合成液、２７℃培養）生育し
ない αＪゼラチン穿刺培養 １５％単純ゼラチン培地（２０℃培＃：）で、発育は無
色〜うす黄、白〜うすピンクの気菌糸を着生し、溶解性
色素は黄茶を帯びる。グルコース・ペプトン・ゼラチン
培地（２７℃培養）の場合、発育はうす黄〜うす茶、気
菌糸は着生せず、溶解性色素は黄茶を帯びる。

αり脱脂牛乳（３７℃培養） 発育はうす黄、気菌糸は着生せず、溶解性色素も認めら
れない。

（Ｃ）生理的性質 （１〕生生育度範囲 イースト・スターチ寒天（可溶性デンプン１．０％、イ
ースト・エキス０．２％、ひも寒天３．０％、ｆ）Ｂ７
．Ｏ）を用い、１４℃、２０℃、２４℃、２７℃、３０
℃、３７℃、５０℃の各温度で試験の結果、５０℃を除
き、そのいずれの温度でも生育したが、生育至適温度は
２７〜３０℃付近と思われる。

（２）ゼラチンの液化（１５％単純ゼラチン培地、２０
℃培養；グルコース・ペプトン・ゼラチン培地、２７℃
培養） 単純ゼラチン培地では、２１日間の観察でゼラチンの液
化は認められなかった。グルコース・ペプトン・ゼラチ
ン培地の場合、培養後、１８日目頃より液化が認められ
るが、その作用は弱い。

（３）スターチの加水分解（スターチ・無機塩寒天培地
、ｌ５Ｐ−培地４、およびスターチ寒天培地、いずれも
２７℃培養） いずれの培地においても氷解性が認められ、その作用は
中等度である。

（４）脱脂牛乳の凝固・ペプトン化 （脱脂牛乳、３７℃培養） 培養後１６日目頃凝固状態を呈し、直ちに完了後、ペプ
トン化が始まるが、その進行は極めて遅い。

（５′Ｊメラニン様色素の生成（トリプトン・イースト
・ブロス、ｌ５Ｐ−培地ｌ；ヘプトン・イースト・鉄寒
天培地、ｌ５Ｐ−培地６；チロシン寒天培地、ｌ５Ｐ−
培地７；いずれも２７℃培養）トリプトン・イースト・
ブロスおよびチロシン寒天培地で陰性、ペプトン・イー
スト・鉄寒天培地では、おそらく陽性である。

（６）炭素源の利用性（ブリドハム・ゴトＩＪ−ブ寒天
培地、ｌ５Ｐ−培地９．２７℃培養） Ｄ−グルコースを利用して発育し、シ；クロース、イノ
シトール、Ｄ−マンニトール、ラクトースは利用しない
。Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロースはおそらく利用し
ていると思われるが、Ｄ−フラクトース、ラムノース、
ラフィノースについては利用していないと判定した。

（７）リンゴ酸石灰の溶解 （リンゴ酸石灰寒天培地、２７℃培養）培養後７日目頃
より、リンゴ酸石灰の溶解が認められる。その作用は中
等度である。

（８）硝酸塩の還元反応（０，１％硝酸カリウム含有ペ
プトン水、ｌ５Ｐ−培地８．２７℃培養）陽性である。

（９）セルロースの分解 （ろ紙片添加合成液、２７℃培養） 生育しな、ハ。

以上の性状を要約すると、ＭＩ９５１−６２Ｆ２株は、
分岐した基生菌糸より、らせん形成を有する気菌糸を伸
長する。胞子の連鎖は５０個以上を数え、その表面は平
滑である。輪生波、胞子のうおよび菌糸の分断は認める
れない。種々の培地で、うす黄の発育上にピンク灰〜う
す茶の気菌糸を着生し、溶解性色素は認められない。メ
ラニン様色素の生成は陰性、蛋白分解力は弱い方、スタ
ーチの氷解性は中等度、硝酸塩の還元反応は陽性であっ
た。

なお、細胞壁に含まれる２、６−ジアミノピメリン酸は
ＬＬ−型を示す。これらの性状より、ＭＩ９５１−６２
Ｆ２株は、ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｒｎｙｃ
ｅｓ　）に属する放線菌と考えられる。

そこで、ストレプトミセス属の既知菌種より、ＭＩ９５
１−６２Ｆ２株に類似の種を検索し、次の３種があげち
れた。すなわち、ストレプトミセス−フラジｘ　（Ｓｔ
ｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　　ｆｒａｄｉａｅ　、文献１、
Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　
ＳｙｓｔｅｍａｔｉｃＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ、　　
１８巻、１１８頁、１９６８年；文献２　、Ｓ、　Ａ、
Ｗａｋｓｍａｎ著、Ｔｈｅ　Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅ
ｓ、　２巻、２１１頁、１９６１年；文献３、Ｂｅｒｇ
ｅｙ　ｓＭａｎｕａｌ　ｏｆ　ｓｙｓｔｅｍａｔｌｃ　
Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ、　４巻、２４８０頁、１９
８９年）、ストレプトミセス・ロゼオフラプス（Ｓｔｒ
ｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　　ｒｏｓｅｏｆｌａｖｕｓ　、文
献１、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊｃｕｒｎａｌ　
ｏｆ　ＳｙｓｔｅｍａｔｉｃＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ
、　　２２巻、３４６頁、１９７２年；文献２、Ｓ、Ａ
、　Ｗａｋｓｍａｎ著、Ｔｈｅ　Ａｃｔｔｎｏｍｙｃｅ
ｔｅｓ、　２巻、２６９頁、１９６１年；文献３、Ｂｅ
ｒｇｅｙ’　ｓＭａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｓｙｓｔｅｍａｔ
ｉｃ　８ａｃｔｅｒｉＯ１ｏｇｙ、　４巻、２４９０頁
、１９８９年）右よびストレプトミセス・ラベンドフォ
リｘ　（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　　１ａｖｅｎｄｏ
ｆｏｌｉａｅ　。

文献１、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ
　ｏｆ　ＳｙｓｔｅｍａｔｉｃＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇ
ｙ、　　Ｌ　８巻、３３９頁、１９６８年−文献２、同
上３０巻、３９０頁、１９８０年；文献３、Ｂｅｒｇｅ
ｙ’ｓ　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　ＳｙｓｔｅｍａｔｉｃＢ
ａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ、　　４巻、２４９０頁、１９
８９年）である。現在、Ｍｌ　９５１’−６２Ｆ　２株
と上記３種の微生物化学研究所保存菌株とを実地に比較
検討中である。ついては、ＭＩ９５１−６２Ｆ２株をス
トレプトミセス轡ニスビー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ
ｓｐ、）ＭＩ９５１−６２Ｆ２と同定した。

又、本物質の生産菌として青森県むつ市の土壌より分離
した放線菌ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏ−ｍｙｃ
ｅｓ）　Ｍ　Ｉ　４９８−Ａ　７株がある。ＭＩ４９８
−Ａ７株は、ＭＩ９５１−６２Ｆ２株によく一致した性
状を示すが、生育温度範囲およびＬ−アラビノースの利
用性が異なる。

その栄養源としては、放線菌の栄養源として通常使用さ
れるもの、例えば炭水化物、窒素源、無機塩などの同化
できる源を使用できる。具体的には、葡萄糖、グリセリ
ン、麦芽糖、蔗糖、糖蜜、デキストリン、澱粉などの炭
水化物や、大豆油、落花生油などの油脂のごとき炭素源
、ペプトン、肉エキス、綿実粉、大豆粉、酵母エキス、
カゼイン、コーン・ステイープリカー、硫酸アンモニウ
ム、硝酸アンモニウム、塩化アンモニウムなどの窒素源
、燐酸二カリウム、燐酸ナトリウム、食塩、炭酸カルシ
ウム、硫酸マグネシウム、塩化マンガンなどの無機塩が
使用出来、必要により微量金属、例えばコバルト、鉄な
どを添加することができる。

栄養源としては、このほか、抗生物質Ｍ　Ｉ　９５１−
６２Ｆ２物質の生産菌が利用してこの抗生物質を生産し
つるものであればいずれの公知の栄養源でも使用できる
。

上記のごとき栄養源の配合割合：ま、特に制約されるも
のではなく、広範囲にわたって変えることができ、使用
する抗生物質ＭＩ９５１−６２Ｆ２物質の生産菌にとっ
て最適な栄養源の組成は、当業者であれば容易に決定で
きる。

また、上記の栄養源からなる栄養培地は、培養に先だち
殺菌することができ、この殺菌前または後で、培地のｐ
Ｈを６〜８の範囲、特にｐＨ６，５〜７．５の範囲に調
節するのが有利である。

かかる栄養培地の抗生物質ＭＩ９５１−６２Ｆ２物質生
産菌の培養は、一般の放線菌による抗生物質の製造にお
いて通常使用されている方法に準じて行なうことができ
る。通常、好気的条件下に培養するのが好適であり、撹
拌しながらおよび／または通気しながら行なうことがで
きる。また、培養方法としては、静置培養、振盪培養、
通気撹拌をともなう液内培養が可能であるが、抗生物質
Ｍ■９５１−６２Ｆ２物質の大量生産には液体培養が適
している。

使用しうる培養温度は抗生物質Ｍｒ９５１−６２Ｆ２物
質生産菌の発育が実質的に阻害されず、該抗生物質を生
産しろる範囲であれば、特に制約されるものではなく、
使用する生産菌に応じて選択できるが、特に好ましいの
は２５〜３０℃の範囲内の温度を挙げることが出来る。

培養時間は、通常、抗生物質ＭＩ９５１−６２Ｆ２物質
が十分に蓄積するまで継続することができ、使用生産菌
や培地組成、培養温度により異なるが、通常４８〜９６
時間の培養で目的の抗生物質を得ることができる。

培養中の抗生物質ＭＩ９５１−６２Ｆ２物質の蓄積量は
ミクロコツカス・ルテウス　ＦＤＡ１６株を使用して、
通常の抗生物質の定量に用いられる円筒平板法により定
量することができる。

かくして、培養物中に蓄積された抗生物質ＭＩ９５１−
６２Ｆ２物質は、培養後必要により、濾過、遠心分離な
どのそれ自体公知の分離方法によって菌体を除去し、そ
の濾液上澄から適当な有機溶媒を用いた溶媒抽出法や、
吸着やイオン交換能を利用したクロマトグラフィーを単
独でまたは、組み合わせて使用することにより単離精製
して採取することができる。ここに用いられる有機溶媒
としては、クロロホルム、酢酸エチルなど、抗生物質Ｍ
Ｉ９５１−６２Ｆ２物質を溶解でき、水に実質的に不溶
なものを挙げることができる。また、吸着やイオン交換
能を有するクロマトグラフィー担体としては、活性炭、
シリカゲル、多孔性ポリスチレン−ジビニルベンゼン樹
脂もしくは各種イオン交換樹脂を用い・ることができる
。

また、分離した菌体からは、適当な有機溶媒を用いた溶
媒抽出法や囲体破砕による溶出法により菌体から抽出し
上記と同様に単離、精製して採取することができる。こ
こに用いられる有機溶媒としては、メタノーノベアセト
ンなど抗生物質Ｍ１９５１−６２Ｆ２物質を溶解でき、
菌体を破壊できるものを挙げることができ、菌体破砕法
としでは各種ホモジナイザーを用いることができる。

かくして、前記した抗生物質Ｍ　Ｉ　９５１−６２Ｆ２
物質が得られる。

次の実施例により本発明を更に詳しく説明する。

〔実施例〕

実施例　１　抗生物質ＭＩ９５１−６２Ｆ２物質の製造 寒天斜面培地に培養した放′ａ菌Ｍｌ　９５１−６２Ｆ
２株（微工研菌寄第１１１４１号）をバタトソイトン１
．０％、−ガラクトース２．０％、コーンステイープ・
リカー０．５％、デキストリン２．０％、硫酸アンモニ
ウム０．２％、炭酸カルシウム０．２％を含む液体培地
（ｐＨ７，４に調整）を三角フラスコ（５００ｍｆ容）
に１１０＋１ずつ分注し、常法により１２０℃で２０分
間滅菌し、これに接種した後、２７℃で４８時間回転振
盪培養（毎分１８０回転）した。

この種母培養液を同様に三角フラスコに分注、滅菌した
ポテト・スターチ３．０％、グルコース２、０％、ソイ
ビーン・ミール２．０％、イースト・エクストラクト０
．５％、食塩０．２５％、炭酸カルシウム０．３％、硫
酸銅５水塩０．００５％、塩化マンガン４水塩０．００
５％、硫酸亜鉛７水塩０．０５％を含む液体培地６Ｌに
３％接種し、２７℃で４８時間回転振盪培養した。

このようにして得られた培養液を遠心分離器にかけ菌体
を分離し、この菌体にメタノール１．５Ｌを加え、撹拌
し、濾過した。この濾液はメタノールを減圧下に濃縮し
た後、先の遠心上澄液と合わせ、酢酸ブチル６、ＯＬで
ＭＩ９５１−６２Ｆ２物質を抽出した。この抽出液を減
圧下に濃縮し、得られた残渣４５０■をシリカゲルカラ
ム（２５ｇ）にかけて、トルエン−アセトン（混合比２
：１）で溶出展開した。この溶出活性分画を集め、減圧
下に濃縮して得られた粗粉末１８１ｍｇを次に、セフ７
デツクスＬＨ−２０カラム（２００ｍｌ）にかけてメタ
ノールで展開して精製した。この活性分画を集め減圧下
に濃縮し、少量のアセトンに溶かし、ヘキサンを加える
と結晶化した。このように析出した結晶をろ別して抗生
物質Ｍ　Ｉ　９５１−６２Ｆ２物質の無色結晶１７０．
５ｍｇを得た。

実施例２　抗生物質ＭＩ９５１−６２Ｆ２物質の免疫担
当細胞および免疫応答に対する 影響 （１）マウス牌細胞のレクチンによる芽球化反応に対す
る影響 ＣＤＦ、マウス（１０週令、難件）の肺細胞を常法に従
って採取し、１％牛脂児血清加ＲＰＭ１１６４０培地で
コンカナバリンＡ（Ｃｏｎｃａｎａｖａｌｉｎ　Ａ　、
　Ｃａｎ　Ａ、　　Ｑ、　５　ｐ　ｇ　／ｍｌ）あるい
はりポポリサッカライド（Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈ
ａｒｉｄｅ。

（ＬＰＳ、　　２μｇ　／ｍｌ）および抗生物質ＭＩ９
５１−６２Ｆ２物質とともに７２時間培養し、培養・ｍ
７前、１６時間に３Ｈ−チミジンＣＨ−Ｔｈｙｍｉｄｉ
ｎｅ）を加え、培養細胞中への３Ｈ−チミジンの取り込
みを測定して各レクチンの作用に対するＭＩ９５１−６
２Ｆ２物質の影響を調べた。

その結果抗生物質ＭＩ９５１−６２Ｆ２物質は［”ｏｎ
　Ａによる芽球化反応に対しては１００μｇ／ｍｌｌで
影響を示さなかったが、ＬＰＳの作用を〉２５μｇ／ｍ
ｌで５０％以上阻害した。

（２）　Ｉ　Ｌ　２反応に対する影響 ラット牌細胞より常法に従ってＴ細胞（ナイロンウール
通過細胞）を採取し、（：ｏｎ　Ａで４時間処理した後
、α−メチルマンノシド（α−ｍｅｔｈｙ１ｍａｎｎｏ
ｓｉｄｅ）で洗滌して（ｏｎ　Ａを除き、Ｔ芽球として
５％牛脂児血清加ＲＰＭ１１６４０培地中、Ｉ　Ｌ　２
（１０００ｕ／ｍ１）および抗生物質ＭＩ９５１−６２
Ｆ２物質を加え７２時間培養した。培養終了１６時間前
に３Ｈ−チミジンを添加、培養細胞中への３Ｈ−チミジ
ンの取り込みを測定して抗生物質ＭＩ９５１−６２Ｆ２
物質のＩＬ２反応に対する影響を調べた。

その結果、抗生物質ＭＩ９５１−６２Ｆ２物質はＩＬ２
反応を１００ｔ−ｔｇ／　＋＋＋４！で５０％以上阻害
した。

（３）混合リンパ球培養反応に対する影響Ｆ３４４ラッ
ト胛細胞中のＴ細胞を反応細胞とし、マイトマイシンＣ
（ｍｉｔｏｍｙｃｉｎ　Ｃ）で処理したＷＫＹラット牌
細胞を刺激細胞として５％牛脂児血清加ＲＰＭ１１６４
０培地で５日間、抗生物質ＭＩ９５１−６２Ｆ２物質を
添加して混合培養し、培養細胞中への３Ｈ−チミジンの
取り込みを測定して、その影響を調べた。

その結果、抗生物質ＭＩ９５１−６２Ｆ２物質は１，６
μｇ／ｒｎｌ１以上で混合リンパ球培養反応を５０％以
上阻害した。

（４）マウスの羊赤血球に対する遅延型過敏症反応（Ｄ
ＴＨ）に対する影響 ａ）　　ＣＤＦ＋　マウスに１ＯＳ羊赤血球を静注して
免疫を施し、免疫直後より１日１回４日間、抗生物質Ｍ
Ｉ　９５１−６２Ｆ２物質を腹腔内投与し、４日後にマ
ウス足蹟に羊赤血球を接種して反応を誘起して２４時間
後足厘の厚さを測定して影響を調べた。

その結果、抗生物質Ｍｒ９５１−６２Ｆ２物質は、２〜
５００μｇ／マウスの投与で影響を示さなかった。

ｂ）１０’羊赤血球をマウスに静注して、ｆ）ＴＨに対
する抑制細胞を誘起させ、７６後抑制細胞として牌細胞
−を採取し、この１０７個を正常マウスに静注同時に１
０５羊赤血球を静注して免疫を施し、免疫後１６目より
１日１回３日間、抗生物質ＭＩ９５１−６２Ｆ２ｍ質を
腹腔内注射して抑制細胞に対する影響を調べた。

ソノ結果、抗生物質Ｍｒ　９５１−６２Ｆ２物質は、１
６μｇ＝１ｍｇ／マウスの投与で著明に抑制性細胞の作
用を阻害し、ＤＴＥ（反応を増強させた。

以上の結果、抗生物質ＭＩ９５１−６２Ｆ２物質は、混
合リンパ球培養反応を阻害し、ＤＴＨに対する抑制性細
胞の作用を阻害して、その反応を正常に恢復させた。本
物質は免疫調節物質とじて自己免疫病、癌など免疫不全
に起ぼする疾患に応用可能である。

【図面の簡単な説明】

第１図は抗生物質ＭＩ９５１−６２Ｆ２物質の赤外線吸
収スペクトルを示し、第２図は抗生物質ＭＩ９５１−６
２Ｆ２物質の’Ｈ−Ｎ〜ｆＲスペクトルを示す図である
。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）下記の式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表わされる抗生物質ＭＩ９５１−６２Ｆ２物質または
   その塩。
2. （２）ストレプトミセス属に属するＭＩ９５１−６２Ｆ
   ２物質の生産菌を培養し、その培養物から抗生物質ＭＩ
   ９５１−６２Ｆ２物質を採取することを特徴とする抗生
   物質Ｍ１９５１−６２Ｆ２物質の製造方法。