JPH04279555A - 新規β−グルクロニダーゼ阻害物質７−ヒドロキシベナノマイシノン及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明はβ−グルクロニダーゼ阻
害活性をもつ新規物質である７−ヒドロキシベナノマイ
シノンならびにその製造法に関する。

【０００２】

【従来の技術】本発明によるβ−グルクロニダーゼ阻害
物質である７−ヒドロキシベナノマイシノンと構造上類
似する化合物のうち微生物代謝産物としては、本発明者
らによって発見されたベナノマイシンＡおよびＢ（特開
平１−１２１２９３号）、ベナノマイシンＣ（特開平２
−８３３５１号）、ベナノマイシノン〔「Ｊ．　Ａｎｔ
ｉｂｉｏｔｉｃｓ」４１巻，１０１９頁（１９８８）〕
、デキシロシルベナノマイシンＢ（特開平１−１６８６
９４号）、デキシロシルベナノマイシンＡ（特開平１−
２４８１４３号）、２′−デメチルベナノマイシンＡが
あり、沖らのプラディマイシン群抗生物質〔Ｓａｗａｄ
ａら：「Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ」４３巻，１３６
７頁（１９９０）〕、その他ＳＦ−２４４６〔Ｔａｋｅ
ｄａら：「Ｊ．　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ」４１巻，４
１７頁（１９８８）〕、ＫＳ−６１９−１〔Ｍａｔｓｕ
ｄａ　ら：「Ｊ．　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ」４０巻，
１１０４頁（１９８７）〕、Ｇ−２ＮおよびＧ−２Ａ〔
Ｇｅｒｂｅｒら：「Ｃａｎａｄ．　Ｊ．　Ｃｈｅｍ．」
６２巻，２８１８頁（１９８４）〕などが知られている
。しかし、７−ヒドロキシベナノマイシノンはこれら既
知の物質とは理化学的および生物学的性状が異なり、明
確に区別される。ベナノマイシンＡ、Ｂ、デキシロシル
ベナノマイシンＡ、Ｂおよび２′−デメチルベナノマイ
シンＡは有効な抗かび活性および抗ウイルス活性を示し
、ベナノマイシンＣはα−グルコシターゼを阻害する。 しかし、本発明の７−ヒドロキシベナノマイシンは抗か
び活性およびα−グルコシターゼ阻害活性を示さない。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】β−グルクロニダーゼ
を阻害する物質は抗ウイルス活性、癌転移抑制作用など
を示す可能性があるとして最近注目を集めているところ
であり、新規なβ−グルクロニダーゼ阻害物質の出現が
要望されている。

【０００４】本発明の目的は新規なβ−グルクロニダー
ゼ阻害物質である７−ヒドロキシベナノマイシノンなら
びにその製造法を提供することにある。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、アクチノ
マジュラ・スパジックスＭＨ１９３−１６Ｆ４株の培養
液中にβ−グルクロニダーゼ阻害活性をもつ物質が存在
することを認め、この物質を単離・精製することに成功
した。そして、その物質の化学構造を確定して、この物
質が７−ヒドロキシベナノマイシノンと命名できる新規
な化合物であることを認めた。

【０００６】第１の本発明の要旨とするところは、次式

【０００７】

【０００８】で表わされる新規なβ−グルクロニダーゼ
阻害物質７−ヒドロキシベナノマイシノン及びその塩に
ある。

【０００９】１．７−ヒドロキシベナノマイシノンの理
化学的性状を列記すると次の通りである。

【００１０】 （１）色および形状：暗紫色粉末 （２）分子式：Ｃ２８Ｈ２３ＮＯ１２ （３）マススペクトル（ＦＤ−ＭＳ）：ｍ／ｚ　　５６
５（Ｍ＋　） （４）融点：＞２２０℃ （５）比旋光度：〔α〕　　測定不可能（ｃ　　０．０
５，ＤＭＳＯ） （６）紫外、可視部吸収スペクトル（λｍａｘ　，ｎｍ
（ε）） 〔ＭｅＯＨ〕；２８２（２４４００），　５１７（１４
８００）〔０．１Ｎ　　ＨＣｌ−ＭｅＯＨ〕；２３６（
２８５００），　２８６（２２５００），　５１１（１
４４００） 〔０．１Ｎ　ＮａＯＨ−ＭｅＯＨ〕；２５２（２７００
０），　３２７（７８００），　５６４（１６２００） （７）赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ）（ｃｍ−１）　
：３４２０，　３２６０，　２９５０，　２３２０，　
１７３０，　１６３５，　１６００，　１４５０，　１
３９０，１３２０，　１２４５，　１２０５，　１１７
０，　１１４０，　１０６５，　１０３５，　９９０，
　９６０，　８６５，７８０（８）　１Ｈ　−ＮＭＲス
ペクトル（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６　） δ（ｐｐｍ）　：１．３８（３Ｈ，　ｄ），　２．３３
（３Ｈ，　ｓ），３．９５（３Ｈ，　ｓ），　４．４３
（１Ｈ，　ｄｑ），４．５１（１Ｈ，　ｄ），　５．０
９（１Ｈ，　ｄ），　６．８３（１Ｈ，　ｓ），　６．
９１（１Ｈ，　ｄ），７．３３（１Ｈ，　ｄ），　８．
５０（１Ｈ，　ｄ），　８．７８（１Ｈ，　ｂｒ），　
１２．２２（１Ｈ，　ｓ），１２．７０（１Ｈ，　ｓ）
，　１４．５５（１Ｈ，　ｂｒ）（９）１３Ｃ−ＮＭＲ
スペクトル（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６　） δ（ｐｐｍ）　：１８７．９ｓ，　１８６．２ｓ，　１
７４．０ｓ，　１６７．１ｓ，　１６６．１ｓ，　１６
４．４ｓ，１５５．５ｄ，１５４．３ｓ，１５２．１ｓ
，１３９．９ｓ，　１３８．０ｓ，１３７．６ｓ，１３
４．６ｓ，　１３２．８ｓ，１２７．７ｓ，　１２３．
７ｓ，　１１５．１ｓ，　１１２．４ｓ，　１１０．９
ｓ，　１１０．１ｓ，　１０７．４ｄ，７１．０ｄ，　
６２．８ｄ，　５６．４ｑ，　１８．７ｑ，　１６．９
ｑ （１０）溶解性：水、メタノール、アセトンにわずかに
溶け、ジメチルスルホキシド、アルカリ水に良く溶ける
。 （１１）塩基性、酸性、中性の区別：酸性物質７−ヒド
ロキシベナノマイシノンの塩としては、金属塩特にナト
リウム塩の如きアルカリ金属塩、カルシウム塩の如きア
ルカリ土類金属塩があり、更にアミンとの塩などがある
。

【００１１】２．７−ヒドロキシベナノマイシンのβ−
グルクロニダーゼ阻害活性 後記の試験例１により測定した７−ヒドロキシベナノマ
イシノンのβ−グルクロニダーゼに対する５０％阻害濃
度（ＩＣ５０）は７２μｇ／ｍｌであった。

【００１２】試験例１ 基質としてフェノールフタレインβ−Ｄ−グルクロニド
を用い、β−グルクロニダーゼ（ウシ肝臓、シグマ社製
、米国）に対する阻害活性は下記の測定法により求めた
。

【００１３】β−グルクロニダーゼを１ｍｇ／ｍｌ含有
する０．１Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ５．０）５μｌ，１ｍＭ
フェノールフタレインβ−Ｄ−グルクロニドの同緩衝溶
液９５μｌおよび７−ヒドロキシベナノマイシノンのジ
メチルスルホキシド溶液２μｌを混合し、３７℃で３０
分間反応させた後１Ｍ炭酸ナトリウム水溶液１００μｌ
を加えて反応を停止させた。その後反応液の５４０ｎｍ
における吸光度を測定して阻害率を求めた。また５０％
阻害濃度は７−ヒドロキシベナノマイシノンの濃度を変
えて測定した阻害率より算定した。

【００１４】３．７−ヒドロキシベナノマイシノンの抗
かび活性 本発明による７−ヒドロキシベナノマイシノンの各種か
びに対する最小発育阻止濃度を、下記の試験菌を用いて
１００μｇ／ｍｌの濃度で測定したところ、抗かび活性
を示さなかった。

【００１５】 Ｃａｎｄｉｄａ　ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ　Ｆ−１Ｃａｎ
ｄｉｄａ　ｐｓｅｕｄｏｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ　Ｆ−２
Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ　３１４７Ｃａｎｄ
ｉｄａ　Ｙｕ−１２００ Ｃａｎｄｉｄａ　Ｋｒｕｓｅｉ　Ｆ−５Ｓａｃｃｈａｒ
ｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ　Ｆ−７Ｃｒｙｐ
ｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ　Ｆ−１０Ｃ
ｏｃｈｌｉｏｂｏｌｕｓ　ｍｉｙａｂｅａｎｕｓＰｙｒ
ｉｃｕｌａｒｉａ　ｏｒｙｚａｅＰｅｌｌｉｃｕｌａｒ
ｉａ　ｓａｓａｋｉｉＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｆｕｍ
ｉｇａｔｕｓ　Ｆ−１８１Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｎ
ｉｇｅｒ　Ｆ−１６Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ　ａｓｔ
ｅｒｏｉｄｅｓ　４２９Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ　ｍ
ｅｎｔａｇｒｏｐｈｙｔｅｓ（８８３）。

【００１６】本発明の７−ヒドロキシベナノマイシノン
はβ−グルクロニダーゼ阻害活性をもち、抗ウイルス剤
及び癌転移抑制剤として有用である。

【００１７】第２の本発明の要旨とするところは、放線
菌に属する７−ヒドロキシベナノマイシノン生産菌を培
養し、その培養物から７−ヒドロキシベナノマイシノン
を採取することを特徴とする７−ヒドロキシベナノマイ
シノンの製造法にある。

【００１８】本発明の方法で使用できる７−ヒドロキシ
ベナノマイシノン生産菌の一例としては、下記に記載す
る放線菌ＭＨ１９３−１６Ｆ４株がある。本放線菌は他
の放線菌に属する菌株の場合に見られるように、その性
状が変化しやすく、紫外線、エックス線、ニトロプグア
ニジンなどの変異剤などによる人工的変異手段によって
も変異しうるものであって、いかなる変異株も７−ヒド
ロキシベナノマイシノンの生産能を有する放線菌に属す
る菌株はすべて本発明に使用することができる。

【００１９】（イ）ＭＨ１９３−１６Ｆ４株の菌学的性
状 この生産菌は昭和５９年３月、微生物化学研究所におい
て当研究所構内の土壌より分離された放線菌（Ａｃｔｉ
ｎｏｍｙｃｅｔｅ）でＭＨ１９３−１６Ｆ４の菌株番号
が付された。この菌株の菌学的性質は次の通りである。

【００２０】〔１〕形　　態 ＭＨ１９３−１６Ｆ４株は、顕微鏡下で分枝した基中菌
糸より気菌糸を形成する。基中菌糸の分断は認められな
い。気菌糸の着生はＩＳＰ−培地２、ＩＳＰ−培地３で
見られる程度であり、胞子形成はＩＳＰ−培地３で通常
２７℃で培養後１８日目頃より観察される。気菌糸には
輪生枝、らせん形成及び胞子のう形成は認められず、気
菌糸にほぼ垂直に短い胞子柄を生じ、その先端に通常３
−７個、稀に２個の胞子の連鎖がみられる。なお胞子鎖
がループ状を呈することもある。個々の胞子は円柱状（
０．８×１．０−１．２μｍ）〜球状（０．８−１．２
μｍ）を示し、胞子表面は平滑である。

【００２１】〔２〕各種培地における生育状態色の記載
について〔　　〕内に示す標準は、コンティナー・コー
ポレーション・オブ・アメリカのカラー・ハーモニー・
マニュアル（Ｃｏｎｔａｉｎｅｒ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉ
ｏｎ　ｏｆＡｍｅｒｉｃａの　Ｃｏｌｏｒ　Ｈａｒｍｏ
ｎｙ　Ｍａｎｕａｌ）を用いた。

【００２２】（１）シュクロース・硝酸塩寒天培地（２
７℃培養） 発育は無色、気菌糸は着生せず、溶解性色素も認められ
ない。ビタミンＢ群補強培地では発育は無色〜ピンク灰
〔５ｅｃ，　Ｄｕｓｔｙ　Ｐｅａｃｈ〕、気菌糸は着生
せず、溶解性色素はわずかに赤味をおびる程度である。

【００２３】（２）グルコース・アスパラギン寒天培地
（２７℃培養） 発育は無色、気菌糸は着生せず、溶解性色素も認められ
ない。ビタミンＢ群補強培地では、発育は無色〜うすピ
ンク〔４ｇｃ，Ｎｕｄｅ　Ｔａｎ〕、気菌糸は着生せず
、溶解性色素は赤味をおびる。

【００２４】（３）グリセリン・アスパラギン寒天培地
（ＩＳＰ−培地５、２７℃培養） 発育は無色、気菌糸は着生せず、溶解性色素も認められ
ない。ビタミンＢ群補強培地では、灰味赤紫〔８ｇ，Ｒ
ｏｓｅ　Ｍａｕｖｅ〕〜にぶ赤紫〔８ｅ，Ｒｏｓｅ　Ｗ
ｉｎｅ　〕の発育上に、わずかにうっすらと白の気菌糸
を着生し、にぶ赤紫〔８ｐｃ，Ｃｒａｎｂｅｒｒｙ　〕
の溶解性色素を生産する。

【００２５】（４）スターチ・無機塩寒天培地（ＩＳＰ
−培地４、２７℃培養） 発育は無色、気菌糸は着生せず、溶解性色素も認められ
ない。ビタミンＢ群補強培地では、溶解性色素がわずか
に赤味をおびる。

【００２６】（５）チロシン寒天培地（ＩＳＰ−培地７
、２７℃培養） 発育は無色〜うす黄茶〔３ｉｃ，Ｌｔ　Ａｍｂｅｒ〕、
気菌糸は着生せず、溶解性色素も認められない。ビタミ
ンＢ群補強培地では、発育は無色〜灰味赤紫、気菌糸は
着生せず、溶解性色素はわずかに赤味をおびる。

【００２７】（６）栄養寒天培地（２７℃培養）発育は
うす黄〔２ｇｃ，Ｂａｍｂｏｏ〕、気菌糸は着生せず、
溶解性色素も認められない。ビタミンＢ群補強培地の場
合も同様の性状を示した。

【００２８】（７）イースト・麦芽寒天培地（ＩＳＰ−
培地２、２７℃培養） うす黄〔２ｅｃ，Ｂｉｓｃｕｉｔ　〕〜暗い赤〔７ｐｉ
，ＤＫ　Ｗｉｎｅ−７１／２　ｐｅ，Ｄｋ　Ｒｅｄ〕〜
灰味赤〔７ｐｇ，Ｗｉｎｅ〕の発育上に、培養後１４日
目頃より灰白の気菌糸を着生する。にぶ赤〔６　１／２
　ｐｅ　，Ｔｏｍａｔｏ　Ｒｅｄ〕の溶解性色素は、培
養初期に発育の周辺のみにみられるが、次第に拡散する
。発育の色素、溶解性色素ともにＨＣｌでだいだいに変
色し、ＮａＯＨでは変化はみられない。ビタミンＢ群補
強培地でも同様の性状である。

【００２９】（８）オートミール寒天培地（ＩＳＰ−培
地３、２７℃培養） うすピンク〔４ｇｃ，Ｎｕｄｅ　Ｔａｎ〕〜灰味赤〔６
ｅ，　Ｃｅｄａｒ　〕〜暗い赤〔７ｐｅ，Ｃｈｅｒｒｙ
　Ｗｉｎｅ　〕〜紫味灰〔８ｉｇ，Ｍａｕｖｅ　Ｇｒａ
ｙ〕の発育上に、培養後１０日目頃よりうっすらと灰白
〔３ｃｄ，Ｓａｎｄ〕の気菌糸を着生する。溶解性色素
は赤味をおびる程度である。発育の色、溶解性色素とも
にＨＣｌでだいだいに変色し、ＮａＯＨでは変化はみら
れない。ビタミンＢ群補強培地でも同様の性状を示した
。

【００３０】（９）グリセリン・硝酸塩寒天培地（２７
℃培養） 発育は無色、気菌糸は着生せず、溶解性色素も認められ
ない。ビタミンＢ群補強培地でも同様の性状である。

【００３１】（１０）スターチ寒天培地（２７℃培養）
発育は無色、気菌糸は着生せず、溶解性色素も認められ
ない。ビタミンＢ群補強培地では、発育は無色、気菌糸
は着生せず、溶解性色素はわずかに赤味をおびる程度で
ある。

【００３２】（１１）リンゴ酸石灰寒天培地（２７℃培
養） 発育は無色、気菌糸は着生せず、溶解性色素はわずかに
赤味をおびる程度である。ビタミンＢ群補強培地では、
発育は無色、気菌糸は着生せず、溶解性色素も認められ
ない。

【００３３】（１２）セルロース（ろ紙片添加合成液、
２７℃培養） 生育は認められない。

【００３４】（１３）ゼラチン穿刺培養１５％単純ゼラ
チン培地（２０℃培養）、グルコース・ペプトン・ゼラ
チン培地（２７℃培養）ともに生育が貧弱で、発育は無
色、気菌糸は着生せず、溶解性色素も認められない。

【００３５】（１４）脱脂牛乳（３７℃培養）生育は極
めて貧弱であり、発育は無色、気菌糸は着生せず、溶解
性色素も認められない。

【００３６】〔３〕生理的性質 （１）生育温度範囲 スターチ・イースト寒天（可溶性でんぷん１．０％、イ
ースト・エキス０．２％、紐寒天３．０％、ｐＨ　７．
０）を用い、２０℃、２４℃、２７℃、３０℃、３７℃
、５０℃の各温度で試験の結果、５０℃を除いてそのい
ずれの温度でも生育したが、最適生育温度は２７℃〜３
７℃付近と思われる。

【００３７】（２）ゼラチンの液化（１５％単純ゼラチ
ン培地、２０℃培養；グルコース・ペプトン・ゼラチン
培地、２７℃培養） 単純ゼラチン培地、グルコース・ペプトン・ゼラチン培
地ともに培養後３カ月間観察したが、液化を認めなかっ
た。

【００３８】（３）スターチの加水分解（スターチ・無
機塩寒天培地およびスターチ寒天培地、いずれも２７℃
培養） スターチ・無機塩寒天培地、スターチ寒天培地ともに水
解性は認められない。 （４）脱脂牛乳の凝固・ペプトン化（脱脂牛乳、３７℃
培養） 生育が貧弱であり、培養後３カ月間の観察では凝固・ペ
プトン化ともに認められなかった。

【００３９】（５）メラニン様色素の生成（トリプトン
・イースト・ブロス、ＩＳＰ−培地１；ペプトン・イー
スト・鉄寒天、ＩＳＰ−培地６；チロシン寒天、ＩＳＰ
−培地７；いずれも２７℃培養） いずれの培地でも陰性であった。

【００４０】（６）炭素源の利用性（プリドハム・ゴト
リーブ寒天培地、ＩＳＰ−培地９、２７℃培養）グルコ
ース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロース、Ｄ−フラク
トース、シュクロース、ラムノース、ラフィノース、Ｄ
−マンニトールを利用して発育し、イノシトールを利用
しない。

【００４１】（７）リンゴ酸石灰の溶解（リンゴ酸石灰
寒天、２７℃培養） 陰性である。

【００４２】（８）硝酸塩の還元反応（０．１％硝酸カ
リウム含有ペプトン水、ＩＳＰ−培地８、２７℃培養）
陽性である。

【００４３】（９）セルロースの分解（ろ紙片添加合成
液、２７℃培養） 生育しない。

【００４４】以上の性状を要約すると、ＭＨ１９３−１
６Ｆ４株は気菌糸の主軸にほぼ垂直に、３−７個（稀に
２個）の胞子からなる胞子連鎖を形成し、輪生枝、らせ
ん形成および胞子のう形成は観察されない。また、基中
菌糸の分断はみられない。胞子表面は平滑である。ＩＳ
Ｐ−培地２、ＩＳＰ−培地３の２種の培地で灰味赤〜暗
い赤の発育上に灰白の気菌糸をうっすらと形成する。な
お、斜面培地（イースト・エキス０．２％、可溶性でん
ぷん１．０％、紐寒天３．０％、ｐＨ７．０）に継代す
ると、わずかなピンクの気菌糸を着生することがある。 また、ＩＳＰ−培地２でにぶ赤の溶解性色素を産生する
。その他種々の培地では発育は無色、気菌糸は着生せず
、溶解性色素もほとんど認められない。しかし、培地に
ビタミンＢ群を添加することにより発育が良好となり、
発育が赤くなる培地がある。発育の色および溶解性色素
ともにＨＣｌで赤からだいだいに変色し、ＮａＯＨでは
変化はみられない。メラニン様色素の生成および蛋白分
解力、スターチの水解性はいずれも陰性であり、硝酸塩
の還元反応は陽性である。また、ビタミンＢ群補強培地
で生育が良好となる場合があり、ビタミン要求性をもつ
ことが考えられる。ところでＭＨ１９３−１６Ｆ４株は
菌体成分として全菌体中にメソ・ジアミノピメリン酸、
および糖成分としてグルコース、リボース、マジュロー
スを含み、リシバリエら（Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒ　ｅ
ｔ　ａｌ，　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎ
ａｌ　ｏｆ　Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　Ｂａｃｔｅｒｉｏ
ｌｏｇｙ，　２０巻，４３５頁，１９７０）の提唱する
細胞壁の主要構成成分のタイプ　ＩＩＩＢを示した。ま
たリン脂質のタイプはＰＩＶ型（ホスファチジル・エタ
ノールアミンおよび未知のグルコサミン含有リン脂質を
含み、ホスファチジル・グリセロールを含まない）、メ
ナキノンの組成はＭＫ−９（Ｈ８　）を主成分とし、Ｍ
Ｋ−９（Ｈ６　），ＭＫ−９（Ｈ４　），ＭＫ−９（Ｈ
２　），ＭＫ−９（Ｈ１０）、ＤＮＡのＧＣ含量は７１
．５％であった。なお、菌体のガスクロマトグラフィー
による分析の結果、イソ分枝脂肪酸（ｉ−１６：０）、
アンテイソ分枝脂肪酸（ａ−１７：０）、１０メチル脂
肪酸（１０Ｍｅ−１７：０）　を特徴的に含むことがわ
かった。

【００４５】既知の放線菌で胞子連鎖を有し、細胞壁タ
イプ　ＩＩＩＢを示すものは、アクチノマジュラ（Ａｃ
ｔｉｎｏｍａｄｕｒａ）、ミクロビスポラ（Ｍｉｃｒｏ
ｂｉｓｐｏｒａ）、ミクロテトラスポラ（Ｍｉｃｒｏｔ
ｅｔｒａｓｐｏｒａ）の３属である。ＭＨ１９３−１６
Ｆ４株と上記の３属の特徴を表１及び表１（続）に示し
た。表中メナキノンの＊は主成分として含まれることを
示す。

【００４６】

【表１】

【００４７】〔表１〕（続）

【００４８】

【００４９】引用文献は次の通りである。

【００５０】１）放線菌の同定実験法，日本放線菌研究
会編，１９８５年 ２）　Ｊ．　Ｐｏｓｃｈｎｅｒら：　ＤＮＡ−ＤＮＡ　
Ｒｅａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｃｈｅｍｏｔａ
ｘｏｎｏｍｉｃ　Ｓｔｕｄｉｅｓｏｎ　Ａｃｔｉｎｏｍ
ａｄｕｒａ，　Ｍｉｃｒｏｂｉｓｐｏｒａ，　Ｍｉｃｒ
ｏｔｅｔｒａｓｐｏｒａ，　Ｍｉｃｒｏｐｏｌｙｓｐｏ
ｒａａｎｄ　Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ．　Ｓｙｓｔｅ
ｍａｔｉｃ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｅｄ　　Ｍｉｃｒｏｂ
ｉｏｌｏｇｙ，　６巻，２６４−２７０頁，１９８５年 ３）Ａ．　Ｆｉｓｃｈｅｒら：　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ−
ｇｅｎｅｔｉｃ　ａｎｄ　Ｃｈｅｍｏｔａｘｏｎｏｍｉ
ｃ　Ｓｔｕｄｉｅｓ　ｏｎＡｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ　
ａｎｄ　Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ．　Ｊｏｕｒｎａｌ
　ｏｆ　Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，
　１２９巻，３４３３−３４４６頁，１９８３年 ４）Ｔｈｉｅｍａｎｎら：Ａ　Ｎｅｗ　Ｇｅｎｕｓ　ｏ
ｆ　ｔｈｅ　Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔａｌｅｓ：Ｍｉｃ
ｒｏｔｅｔｒａｓｐｏｒａ　ｇｅｎ．ｎｏｖ．．　Ｊｏ
ｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏ
ｌｏｇｙ，５０巻，２９５−３０３頁，１９６８年５）
野々村ら：土壌中における放線菌の分布（第１１報）Ａ
ｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ　Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒ　ｅ
ｔ　ａｌ．　属の数新種。発酵工学会誌４９巻，　９０
４−９１２頁，１９７１年。

【００５１】表１に示されるように、ＭＨ１９３−１６
Ｆ４株がすんなりと該当する属は見当たらない。これら
の属は極めて微妙に変遷しており、バージイズ・マニュ
アル（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｄｅｔ
ｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）　
の次版にどのように掲載されるかが期待されている。た
だしアクチノマジュラ属には多くの種が記載されており
、性状にも広い幅があるが、その中のアクチノマジュラ
・スパジックス　（Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ　ｓｐａ
ｄｉｘ）とは形態、菌体の脂肪酸組成およびメナキノン
組成にかなりの類似点が見いだされる（前記１），３）
，５）の文献）。更に、比較検討したところ、このＭＨ
１９３−１６Ｆ４株は、アクチノマジュラ・スパジック
スの一菌株であると認められた。

【００５２】なお、ＭＨ１９３−１６Ｆ４株は工業技術
院微生物工業技術研究所に寄託申請し、昭和６２年８月
２１日に微工研条寄第９５２９号として受託された。さ
らに、昭和６３年（１９８８年）９月１３日ブダペスト
条約の規約により国際寄託され微工研条寄第２０５１号
（ＦＥＲＭ　　ＢＰ−２０５１）の受託番号が付された
。 　　（ロ）７−ヒドロキシベナノマイシノン生産菌のア
クチノマジュラ・スパジックスＭＨ１９３−１６Ｆ４株
の培養法 本発明の７−ヒドロキシベナノマイシノンの製造法にお
いては７−ヒドロキシベナノマイシノン生産株を通常の
微生物培養に使用されている栄養物を含有する培地で培
養する。栄養源としては通常の微生物培養に利用されて
いる公知のものが使用できる。例えば炭素源としては、
グルコース、澱粉、グリセリン、シュークロース、水飴
、糖蜜等があげられる。これらは単独あるいは組み合わ
せて用いられる。また窒素源としては、大豆粉、小麦胚
芽、肉エキス、ペプトン、乾燥酵母、コーンスティープ
リカー、硫酸アンモニア、硝酸アンモニアなどが単独あ
るいは組み合わせて用いられる。その他必要に応じて炭
酸ナトリウム、食塩、塩化カリウム、燐酸塩等の無機塩
類を添加することができる。培養法としては液体培養法
、特に深部培養法が最も適している。培養は好気的条件
下で行われ培養に適した温度は２５〜３５℃であるが２
８〜３２℃が更に好ましい。培養日数は４〜９日が適当
であり５〜７日が更に好ましい。

【００５３】（ハ）７−ヒドロキシベナノマイシノンの
精製法 ７−ヒドロキシベナノマイシノンの培養物からの採取に
あたっては、その性状を利用した通常の分離手段、例え
ば溶剤抽出法、イオン交換樹脂法、吸着または分配クロ
マト法、ゲルろ過法、透析法、沈澱法等を単独でまたは
適宜組み合わせて抽出精製することができる。例えば７
−ヒドロキシベナノマイシノンは培養菌体中からはアセ
トン−水またはメタノール−水で抽出される。培養液中
に蓄積された７−ヒドロキシベナノマイシノンは合成吸
着剤であるダイヤイオンＨＰ−２０（三菱化成社製）等
に吸着される。またｐＨを３程度まで下げると７−ヒド
ロキシベナノマイシノンは水溶液から沈澱する。７−ヒ
ドロキシベナノマイシノンを更に精製するにはシリカゲ
ル（ワコーゲルＣ−３００，和光純薬工業社製）、セフ
ァデックスＬＨ−２０（ファルマシア社製）、逆相シリ
カゲル（コスモシール７５Ｃ１８−ＯＰＮ，ナカライテ
スク社製）等を用いるクロマトグラフィーを行うとよい
。

【００５４】このようにして培養物中に生産された７−
ヒドロキシベナノマイシノンは遊離の形、すなわち７−
ヒドロキシベナノマイシノンそれ自体として分離するこ
とができ、また７−ヒドロキシベナノマイシノンを含有
する溶液またはその濃縮液を塩基、例えば水酸化ナトリ
ウム、水酸化カリウム等のアルカリ金属化合物、水酸化
カルシウム、水酸化マグネシウム等のアルカリ土類金属
化合物、アンモニウム塩等のような無機塩基、エタノー
ルアミン、トリエチルアミン、ジシクロヘキシルアミン
等の有機塩基により各工程の操作中例えば抽出、分離ま
たは精製の各工程の操作中に処理した場合、７−ヒドロ
キシベナノマイシノンは対応するその塩類の形に変化し
分離される。また、別に、このようにして製造された７
−ヒドロキシベナノマイシノンの塩類は常法により遊離
の形、７−ヒドロキシベナノマイシノンそれ自体に変化
させることができる。更に遊離の形で得られた７−ヒド
ロキシベナノマイシノンを前記の塩基により常法で対応
するその塩類に変化させてもよい。従って７−ヒドロキ
シベナノマイシノンと同様に前記のようなその塩類も、
この発明の範囲内に包含されるものとする。

【００５５】以下に本発明の７−ヒドロキシベナノマイ
シノンの製造について実施例を示すが７−ヒドロキシベ
ナノマイシノンの性状が本発明によって明らかにされた
ので、それらの性状に基づき７−ヒドロキシベナノマイ
シノンの製造法を種々考案することができる。従って本
発明は実施例に限定されるものでなく、実施例の修飾手
段は勿論、本発明によって明らかにされた７−ヒドロキ
シベナノマイシノンの性状に基づいて公知の手段を施し
て７−ヒドロキシベナノマイシノンを生産、濃縮、精製
する方法をすべて包括する。

【００５６】実施例１ アクチノマジュラ・スパジックスＭＨ１９３−１６Ｆ４
株（微工研条寄第２０５１号）を前培養培地（可溶性澱
粉２．０％，ポリペプトン１．０％，肉エキス０．３％
，Ｋ２　ＨＰＯ４　０．０５％，ｐＨ７．０）に接種し
た。これを２８℃で２４時間振とう培養し、更に可溶性
澱粉１．０％，大豆粉３．０％（ｐＨ６．２）からなる
培養培地８０ｍｌに継代して２８℃で４８時間培養した
ものをジャーファーメンター（明治エンジニアリング社
製，３．０Ｌ容量，２．０Ｌ仕込み）の種母とした。ジ
ャーファーメンターではグリセリン２．０％，大豆粉１
．５％，ＫＨ２　ＰＯ４　０．１％，Ｋ２　ＨＰＯ４　
０．０２５％，塩化コバルト０．０００５％（ｐＨ６．
８）の組成の生産培地に植菌し３０℃で通気かくはん培
養（通気０．５ｖｖｍ，２４時間後１．０ｖｖｍ，ペラ
回転数６５０ｒｐｍ）を行った。培養中のｐＨ６．０〜
７．０にコントロールするのが望ましい。１５０時間培
養後、培養液を遠心分離して菌体を除去し上清液約１．
５Ｌを得た。

【００５７】この上清液中の活性物質は１Ｎ塩酸を用い
てｐＨ３．０に調整することにより紫色の沈澱として得
られた。この沈澱物をろ取し減圧下乾燥すると、主とし
て７−ヒドロキシベナノマイシノンをふくむ暗紫色粉末
（１３４ｍｇ）が得られた。この粗粉末を少量のアルカ
リ水に溶解し、水で充填したコスモシール７５Ｃ１８−
ＯＰＮ（３５０ｍｌ）のカラムにかけ、メタノールを含
む水で展開した。活性物質のみを含む分画８４〜１７６
（１分画２０ｍｌ）を集め、１Ｎ塩酸でｐＨ３．０に調
整することにより紫色の沈澱を得た。この沈澱物をろ取
し４０℃で減圧下乾燥することにより高純度の７−ヒド
ロキシベナノマイシノンが暗紫色粉末として得られた。

【００５８】β−グルクロニダーゼに対する７−ヒドロ
キシベナノマイシノンの５０％阻害濃度は７２μｇ／ｍ
ｌであった。

【図面の簡単な説明】

【図１】７−ヒドロキシベナノマイシノンのメタノール
中（２０μｇ／ｍｌ，曲線Ａ）、０．１Ｎ塩酸メタノー
ル中（２０μｇ／ｍｌ，曲線Ｂ）および０．１Ｎ水酸化
ナトリウム−メタノール中（２０μｇ／ｍｌ，曲線Ｃ）
での紫外部および可視部吸収スペクトルを示す。

【図２】７−ヒドロキシベナノマイシノンの臭化カリウ
ム錠での赤外部吸収スペクトルを示す。

【図３】７−ヒドロキシベナノマイシノンの重ジメチル
スルホキシド溶液中での４００ＭＨｚ水素核核磁気共鳴
スペクトルを示す。

【図４】７−ヒドロキシベナノマイシノンの重ジメチル
スルホキシド溶液中での１００ＭＨｚ炭素核核磁気共鳴
スペクトルを示す。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　次式（Ｉ） で表わされるβ−グルクロニダーゼ阻害物質７−ヒドロ
   キシベナノマイシノンおよびその塩。
2. 【請求項２】　　放線菌に属する７−ヒドロキシベナノ
   マイシノン生産菌を培養し、その培養物から７−ヒドロ
   キシベナノマイシノンを採取することを特徴とする７−
   ヒドロキシベナノマイシノンの製造法。