JP3067322B2

JP3067322B2 - 抗かび性抗生物質３′−ヒドロキシベナノマイシンａの製造法

Info

Publication number: JP3067322B2
Application number: JP26042991A
Authority: JP
Inventors: 富雄竹内; 雅濱田; 信一近藤; 大四郎池田; 和道魚谷; 敏今井; 聡宮川; 修一五味
Original assignee: Microbial Chemistry Research Foundation
Current assignee: Microbial Chemistry Research Foundation
Priority date: 1991-09-12
Filing date: 1991-09-12
Publication date: 2000-07-17
Anticipated expiration: 2015-07-17
Also published as: JPH05168492A

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、抗かび性抗生物質３′
−ヒドロキシベナノマイシンＡ（３′−Ｈｙｄｏｒｏｘ
ｙｂｅｎａｎｏｍｉｃｉｎＡ）の醗酵法による製造法
に関する。

【０００２】

【従来の技術】本発明による抗かび性抗生物質３′−ヒ
ドロキシベナノマイシンＡと構造上の特徴が類似する微
生物生産物として、本発明者らの発見したベナノマイシ
ンＡおよびＢ（特開平１−１２１２９３号）、ベナノマ
イシンＣ（特開平２−８３３５１号）、２′−デメチル
ベナノマイシンＡ（特願平２−９６３１７号）、沖俊一
らのＢＵ−３６０８（プラジマイシン）Ａ，Ｂ，Ｃ，
Ｄ，Ｅ（特開昭６３−２７０６９６号、特開平２−３２
０９２号）およびＳＦ２４４６［Ｔａｋｅｄａら：Ｊ．
Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ４１：４１７−４２４（１９
８８）］、ＫＳ−６１９−１［Ｍａｔｓｕｄａら：Ｊ．
Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ４０：１１０４−１１１４
（１９８７）］、Ｇ−２ＮおよびＧ−２Ａ［Ｇｅｒｂｅ
ｒら：Ｃａｎａｄ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．６２：２８１８−２
８２１（１９８４）］などが知られている。さらに、そ
れらの誘導体として本発明者らによるデキシロシルベナ
ノマイシンＡおよびＢ（特開平３−１８７３９１号およ
び特開平１−１６８６９４号）、Ｎ−アセチルベナノマ
イシンＢ（特開平２−１８８５９７号）、ベナノマイシ
ンＡ４″′−Ｏ−硫酸エステル（特願平２−６１２５４
号）などがある。しかし本発明による３′−ヒドロキシ
ベナノマイシンＡはこれらの物質とは理化学的および生
物学的性状が異なり、化学構造によって明確に区別され
る。最近、４″位にメチルアミノ基およびアミノ基を有
するプラジマイシンＦＡ−１およびＦＡ−２［Ｓａｗａ
ｄａら：Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ４３：１２２３
−１２２９（１９９０）］が報告されたが、４″位がヒ
ドロキシル基である３′−ヒドロキシベナノマイシンＡ
とは化学構造上明らかに区別される。

【０００３】最近の公報、特開平３−１７０４９３号
（平成３年７月２４日公開）に、前記のプラジマイシン
ＦＡ−２から化学的に誘導された４′−デアミノ−４′
−ヒドロキシプラジマイシンＦＡ−２について述べられ
ているが、その合成収率はきわめて低く、本発明におけ
る醗酵法による製造法に及ばない。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】従来、微生物が生産す
る種々の抗生物質が知られているが、有効な抗かび性抗
生物質はそれ程多く見出されていないため、かびに起因
する各種感染症の医療分野においては新規な抗かび性抗
生物質の出現が常に要望されている。本発明者らは、特
開平1-121293号公報に記載されるベナノマイシン生産菌
であるアクチノマジュラエスピーMH193-16F4株の培養
液中に既知のベナノマイシン成分のほかに、新規成分と
して抗生物質３′−ヒドロキシベナノマイシンＡが生産
されていることを見出した。そしてこれを分離すること
に成功した。また、この化合物が抗かび活性を有するこ
とを認めて本発明を完成させた。本発明の目的は、醗酵
法による抗かび性抗生物質３′−ヒドロキシベナノマイ
シンＡの製造法を提供することにある。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明で得られた３′−
ヒドロキシベナノマイシンＡの理化学的性状の詳細を列
記すると、次の通りである。

【０００６】（１）色および形状：赤褐色粉末（２）分子式：Ｃ_３９Ｈ_４１ＮＯ_２０（３）マススペクトル（FAB-MS、Negative) ：m/z 843
(M⁻) （４）融点：228 〜229 ℃（分解）（５）紫外部及び可視部吸収スペクトル

【０００７】

【０００８】[MeOH]: 220 (sh 523), 238 (sh 503), 28
0 (423), 485 (208) （６）赤外部吸収スペクトル (KBr cm ^−１): 3414, 2984, 2926, 1734, 1630, 1605,
1541, 1508,1489, 1449, 1431, 1391, 1335, 1296, 12
56, 1237,1208, 1163, 1074, 1046, 999, 968, 901, 85
8, 801,748 （７）^１H-NMR スペクトル（400MHz, DMSO-d_６, 40℃) δ(ppm) : 1.13 (3H, d), 2.35 (3H, s), 3.08 (1H, d
d),3.12 (1H, dd), 3.16 (1H, dd), 3.31 (1H, ddd),3.
55 (1H, dd), 3.61 (1H, br q), 3.62 (1H, br s),3.72
(1H, dd), 3.73 (1H, br), 3.75 (1H, dd),3.78 (1H,
dd), 3.95 (3H,s), 4.42 (1H, d),4.49 (1H, dt), 4.53
(1H, d), 4.59 (1H,d),4.65 (1H, d), 6.91 (1H, d),
7.21 (1H, br s),7.28 (1H, d), 8.07 (1H, s), 8.18
(1H, d),8.72 (1H, br), 12.56 (1H, br), 12.80 (1H,
s),13.73 (1H, br) （８）^１３C-NMR スペクトル（100MHz, DMSO-d_６, 40
℃) δ(ppm) : 187.4 s, 185.0 s, 171.7 s, 167.1 s, 166.
0 s, 164.7 s,157.0 s, 151.1 s, 147.7 s, 138.2 s, 1
37.5 s, 134.3 s,131.3 s, 127.0 s, 125.6 s, 118.6
d, 115.5 s, 115.5 d,113.7 s, 110.0 s, 107.6 d, 10
6.8 d, 105.2 d, 104.4 d,83.0 d, 81.5 d, 76.0 d,
73.6 d, 71.9 d, 70.3 d,70.1 d, 70.1 d, 69.4 d,
65.6 t, 61.3 t, 56.4 q,55.0 d, 19.3 q, 16.3
q （９）溶解性：ジメチルスルホキシド、ジメチルホルム
アミド、アルカリ水に溶け、水、メタノール、クロロホ
ルム、酢酸エチル、アセトンに僅かに溶ける。

【０００９】（10）塩基性、酸性、中性の区別：酸性物
質。

【００１０】３′−ヒドロキシベナノマイシンＡの塩と
しては、金属塩、特にナトリウム塩の如きアルカリ金属
塩、カルシウム塩の如きアルカリ土類金属塩があり、更
に後記の如きアミンとの塩等がある。

【００１１】３′−ヒドロキシベナノマイシンＡは次式
（Ｉ）の構造式を有する。

【００１２】

【００１３】３′−ヒドロキシベナノマイシンＡの抗か
び活性は次の通りである。

【００１４】本発明による３′−ヒドロキシベナノマイ
シンＡについて１％グルコース添加栄養寒天培地による
倍数希釈法（２７℃，４２時間）で測定した各種かびに
対する最小発育阻止濃度を第１表に示した。

【００１５】

【００１６】本発明の要旨とするところは、アクチノマ
ジュラ・スパジックスMH193-16F4株（微工研条寄第2051
号として寄託）を培養して、次式(I) で表わされる３′−ヒドロキシベナノマイシンＡを培養
物中で生産、蓄積させ、さらにその培養物から３′−ヒ
ドロキシベナノマイシンＡを採取することを特徴とす
る、抗かび性抗生物質３′−ヒドロキシベナノマイシン
Ａの製造法にある。

【００１７】本発明方法で３′−ヒドロキシベナノマイ
シンＡ生産菌として用いられるアクチノマジュラsp.MH1
93-16F4株は昭和59年３月、微生物化学研究所において
当研究所構内の土壌より分離された放線菌(Actinomycet
e)で、MH193-16F4の菌株番号を付された菌である。

【００１８】この菌株の菌学的性状は次の通りである。

【００１９】生産菌ＭＨ１９３−１６Ｆ４株の菌学的性
状〔１〕形態ＭＨ１９３−１６Ｆ４株は、顕微鏡下で分枝した基中菌
糸より気菌糸を形成する。基中菌糸の分断は認められな
い。気菌糸の着生はＩＳＰ−培地２、ＩＳＰ−培地３で
見られる程度であり、胞子形成はＩＳＰ−培地３で通常
２７℃で培養後１８日目頃より観察される。気菌糸には
輪生枝、らせん形成及び胞子のう形成は認められず、気
菌糸にほぼ垂直に短い胞子柄を生じ、その先端に通常３
−７個、稀に２個の胞子の連鎖がみられる。なお胞子鎖
がループ状を呈することもある。個々の胞子は円柱状
（０．８×１．０−１．２μｍ）〜球状（０．８−１．
２μｍ）を示し、胞子表面は平滑である。

【００２０】〔２〕各種培地における生育状態色の記載について〔〕内に示す標準は、コンティナー
・コーポレーション・オブ・アメリカのカラー・ハーモ
ニー・マニュアル（Container Corporation ofAmerica
のColor Harmony Manual）を用いた。

【００２１】（１）シュクロース・硝酸塩寒天培地（２
７℃培養）発育は無色、気菌糸は着生せず、溶解性色素も認められ
ない。ビタミンＢ群補強培地では発育は無色〜ピンク灰
〔5ec ，Dusty Peach 〕、気菌糸は着生せず、溶解性色
素はわずかに赤味をおびる程度である。

【００２２】（２）グルコース・アスパラギン寒天培地
（２７℃培養）発育は無色、気菌糸は着生せず、溶解性色素も認められ
ない。ビタミンＢ群補強培地では、発育は無色〜うすピ
ンク〔4gc, Nude Tan 〕、気菌糸は着生せず、溶解性色
素は赤味をおびる。

【００２３】（３）グリセリン・アスパラギン寒天培地
（ＩＳＰ−培地５、２７℃培養）発育は無色、気菌糸は着生せず、溶解性色素も認められ
ない。ビタミンＢ群補強培地では、灰味赤紫〔8lg, Ros
e Mauve 〕〜にぶ赤紫〔8le, Rose Wine〕の発育上に、
わずかにうっすらと白の気菌糸を着生し、にぶ赤紫〔8p
c, Cranberry〕の溶解性色素を生産する。

【００２４】（４）スターチ・無機塩寒天培地（ＩＳＰ
−培地４、２７℃培養）発育は無色、気菌糸は着生せず、溶解性色素も認められ
ない。ビタミンＢ補強培地では、溶解性色素がわずかに
赤味をおびる。

【００２５】（５）チロシン寒天培地（ＩＳＰ−培地
７、２７℃培養）発育は無色〜うす黄茶〔3ic, Lt Amber 〕、気菌糸は着
生せず、溶解性色素も認められない。ビタミンＢ群補強
培地では、発育は無色〜灰味赤紫、気菌糸は着生せず、
溶解性色素はわずかに赤味をおびる。

【００２６】（６）栄養寒天培地（２７℃培養）発育はうす黄〔2gc, Bamboo 〕、気菌糸は着生せず、溶
解性色素も認められない。ビタミンＢ群補強培地の場合
も同様の性状を示した。

【００２７】（７）イースト・麦芽寒天培地（ＩＳＰ−
培地２、２７℃培養）うす黄〔2ec, Biscuit〕〜暗い赤〔7pi, Dk Wine−7 1/
2pe, Dk Red 〕〜灰味赤〔7pg, Wine 〕の発育上に、培
養後14日目頃より灰白の気菌糸を着生する。にぶ赤〔6
1/2pe, Tomato Red 〕の溶解性色素は、培養初期に発育
の周辺のみにみられるが、次第に拡散する。発育の色
素、溶解性色素ともにＨＣｌでだいだいに変色し、Ｎａ
ＯＨでは変化はみられない。ビタミンＢ群補強培地でも
同様の性状である。

【００２８】（８）オートミール寒天培地（ＩＳＰ−培
地３、２７℃培養）うすピンク〔4gc, Nude Tan 〕〜灰味赤〔6le, Cedar〕
〜暗い赤〔7pe, Cherry Wine〕〜紫味灰〔8ig, Mauve G
ray 〕の発育上に、培養後１０日目頃よりうっすらと灰
白〔3cb, Sand 〕の気菌糸を着生する。溶解性色素は赤
味をおびる程度である。発育の色、溶解性色素ともにＨ
Ｃｌでだいだいに変色し、ＮａＯＨでは変化はみられな
い。ビタミンＢ群補強培地でも同様の性状を示した。

【００２９】（９）グリセリン・硝酸塩寒天培地（２７
℃培養）発育は無色、気菌糸は着生せず、溶解性色素も認められ
ない。ビタミンＢ群補強培地でも同様の性状である。

【００３０】（10）スターチ寒天培地（２７℃培養）発育は無色、気菌糸は着生せず、溶解性色素も認められ
ない。ビタミンＢ群補強培地では、発育は無色、気菌糸
は着生せず、溶解性色素はわずかに赤味をおびる程度で
ある。

【００３１】（11）リンゴ酸石灰寒天培地（２７℃培
養）発育は無色、気菌糸は着生せず、溶解性色素はわずかに
赤味をおびる程度である。ビタミンＢ群補強培地では、
発育は無色、気菌糸は着生せず、溶解性色素も認められ
ない。

【００３２】（12）セルロース（ろ紙片添加合成液、２
７℃培養）生育は認められない。

【００３３】（13）ゼラチン穿刺培養１５％単純ゼラチン培地（２０℃培養）、グルコース・
ペプトン・ゼラチン培地（２７℃培養）ともに生育が貧
弱で、発育は無色、気菌糸は着生せず、溶解性色素も認
められない。

【００３４】（14）脱脂牛乳（３７℃培養）生育は極めて貧弱であり、発育は無色、気菌糸は着生せ
ず、溶解性色素も認められない。

【００３５】〔３〕生理的性質（１）生育温度範囲スターチ・イースト寒天（可溶性でんぷん１．０％、
イースト・エキス０．２％、紐寒天３．０％、ｐＨ
７．０）を用い、２０℃、２４℃、２７℃、３０℃、３
７℃、５０℃の各温度で試験の結果、５０℃を除いてそ
のいずれの温度でも生育したが、最適生育温度は２７℃
〜３７℃付近と思われる。

【００３６】（２）ゼラチンの液化（１５％単純ゼラチ
ン培地、２０℃培養；グルコース・ペプトン・ゼラチン
培地、２７℃培養）単純ゼラチン培地、グルコース・ペプトン・ゼラチン培
地ともに培養後３カ月間観察したが、液化を認めなかっ
た。

【００３７】（３）スターチの加水分解（スターチ・無
機塩寒天培地およびスターチ寒天培地、いずれも２７℃
培養）スターチ・無機塩寒天培地、スターチ寒天培地ともに弱
い水解性を認める。

【００３８】（４）脱脂牛乳の凝固・ペプトン化（脱脂
牛乳、３７℃培養）生育が貧弱であり、培養後３カ月間の観察では凝固・ペ
プトン化ともに認められなかった。なお、接種菌量を多
くして試験した場合も生育は貧弱であるが、培養後７日
目には牛乳は凝固状を呈する。また、極めて弱いペプト
ン化を観察した。

【００３９】（５）メラニン様色素の生成（トリプトン
・イースト・ブロス、ＩＳＰ−培地１；ペプトン・イー
スト・鉄寒天、ＩＳＰ−培地６；チロシン寒天、ＩＳＰ
−培地７；いずれも２７℃培養）いずれの培地でも陰性であった。

【００４０】（６）炭素源の利用性（プリドハム・ゴト
リーブ寒天培地、ＩＳＰ−培地９、２７℃培養）グルコース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロース、Ｄ−
フラクトース、シュクロース、ラムノース、ラフィノー
ス、Ｄ−マンニトールを利用して発育し、イノシトール
は利用したり、しなかったりで判然としない。

【００４１】（７）リンゴ酸石灰の溶解（リンゴ酸石灰
寒天、２７℃培養）陰性である。

【００４２】（８）硝酸塩の還元反応（０．１％硝酸カ
リウム含有ペプトン水、ＩＳＰ−培地８、２７℃培養）陽性である。

【００４３】（９）セルロースの分解（ろ紙片添加合成
液、２７℃培養）生育しない。

【００４４】以上の性状を要約すると、ＭＨ１９３−１
６Ｆ４株は気菌糸の主軸にほぼ垂直に、３−７個（稀に
２個）の胞子からなる胞子連鎖を形成し、輪生枝、らせ
ん形成および胞子のう形成は観察されない。また、基中
菌糸の分断はみられない。胞子表面は平滑である。ＩＳ
Ｐ−培地２、ＩＳＰ−培地３の２種の培地で灰味赤〜暗
い赤の発育上に灰白の気菌糸をうっすらと形成する。な
お、斜面培地（イースト・エキス０．２％、可溶性で
んぷん１．０％、紐寒天３．０％、ｐＨ７．０）に
継代すると、わずかなピンクの気菌糸を着生することが
ある。また、ＩＳＰ−培地２でにぶ赤の溶解性色素を産
生する。その他種々の培地では発育は無色、気菌糸は着
生せず、溶解性色素もほとんど認められない。しかし、
培地にビタミンＢ群を添加することにより発育が良好と
なり、発育が赤くなる培地がある。発育の色および溶解
性色素ともにＨＣｌで赤からだいだいに変色し、ＮａＯ
Ｈでは変化はみられない。メラニン様色素の生成は陰
性、蛋白分解力、スターチの水解性はともに弱く、硝酸
塩の還元反応は陽性である。また、ビタミンＢ群補強培
地で生育が良好となる場合があり、ビタミン要求性をも
つことが考えられる。

【００４５】ところで、ＭＨ１９３−１６Ｆ４株は菌体
成分として全菌体中にメソ・ジアミノピメリン酸、およ
び糖成分としてグルコース、マジュロースを含み、リシ
バリエら（Lechevalier et al, International Journal
of Systematic Bacteriology 20巻、435 頁、1970）の
提唱する細胞壁の主要構成成分のタイプIII Ｂを示し
た。またリン脂質のタイプはＰＩ型、ミコール酸を含有
せず、メナキノンの組成はＭＫ−９（Ｈ_８）、ＭＫ−９
（Ｈ_６）を主成分とし、ＤＮＡのＧ＋Ｃ含量は６９．３
％であった。なお、菌体のガスクロマトグラフィーによ
る分析の結果、イソ分枝脂肪酸（ｉ−１６：０）、アン
テイソ分枝脂肪酸（ａ−１７：０）を特徴的に含むこと
がわかった。

【００４６】以上の性状から、ＭＨ１９３−１６Ｆ４株
はアクチノマジュラ（Actinomadura）属のアクチノマジ
ュラ・マジュレー（Actinomadura madurae）グループに
属すると考えられ、脂肪酸の特徴から近縁の種としてア
クチノマジュラ・スパジックス（Actinomadura spadix
）があげられた。両者の形態、培養、生理生化学的性
状および菌体成分の比較試験では、色調およびベナノマ
イシン生産能を除き、良く一致した成績を示す（後記の
第２表）。さらにＭＨ１９３−１６Ｆ４株とアクチノマ
ジュラ・スパジックスのＤＮＡを調製し、ニックトラン
スレーションでラベルしたＭＨ１９３−１６Ｆ４株のＤ
ＮＡをプローブとしてサザーンハイブリダイゼーション
を行った結果、ＭＨ１９３−１６Ｆ４株とアクチノマジ
ュラ・スパジックスのＤＮＡは高い相同性が認められ
た。

【００４７】ＭＨ１９３−１６Ｆ４株はアクチノマジュ
ラ・スパジックスに極めて近縁の種と考えられる。そこ
で、ＭＨ１９３−１６Ｆ４株をアクチノマジュラ・スパ
ジックス（Actinomadura spadix ）ＭＨ１９３−１６Ｆ
４と同定した。なお、ＭＨ１９３−１６Ｆ４株を工業技
術院微生物工業技術研究所に寄託申請し、昭和６２年８
月２１日に微工研菌寄第９５２９号として、昭和６３年
（１９８８）９月１３日にはブダペスト条約国際寄託に
移管し、微工研条寄第２０５１号として受託された。

【００４８】

【００４９】引用文献 1) 放線菌の同定実験法、日本放線菌研究会編、1985年 2) J.Poschnerら：DNA-DNA Reassociation and Chemot
axonomic Studies on Actinomadura, Microbispora, Mi
cotetraspora, Micropolyspora and Nocardiopsis, Sys
tematic and Applied Microbiology, 6巻、264~270頁、
1985年 3) A.Fischerら：Molecular-genetic and Chemotaxono
mic Studies on Actionomadura and Nocardiopsis. Jou
rnal of General Microbiology、129巻、3433~3446頁、
1983年 4) Thiemannら：A New Genus of the Actinomycetale
s: Microtetraspora gen.nov., Journal of General Mi
crobiology、50巻、295~303頁、1968年 5) 野々村ら：土壌中における放線菌の分布（第11報）
Actinomadura Lechevalier et al.属の数新種。発酵工
学会誌49巻、904~912頁、1971年 6) M. Goodfellow: Maduromycetes: Bergey's Manual
of Systematic Bacteriology、4巻、250~252頁、1989年

【００５０】３′−ヒドロキシベナノマイシンＡの製造
では、アクチノマジュラ・スパジックスMH193-16F4株
（以下では、単に３′−ヒドロキシベナノマイシンＡ生
産菌と称することがある）を、通常の微生物が利用し得
る栄養源含有培地に接種して好気的条件下に発育させる
ことによって、主に培養液中に３′−ヒドロキシベナノ
マイシンＡを生産、蓄積させて、更にその培養物、特に
培養液から目的物を分離する。用いる培地中の栄養源と
しては、放線菌の栄養源として用いられる公知のものが
使用できる。例えば市販されている大豆粉、エスサンミ
ート、ペプトン、肉エキス、コーン・スティープ・リカ
ー、綿実油、落花生粉、乾燥酵母、酵母エキス、ＮＺア
ミン、カゼイン、硝酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、
硝酸アンモニウムなどの窒素源、およびグリセリン、し
ょ糖、でん粉、グルコース、ガラクトース、マルトー
ス、デキストリン、乳糖、糖みつ、大豆油、脂肪、アミ
ノ酸などの炭素源、および食塩、燐酸塩、炭酸カルシウ
ム、硫酸マグネシウム、塩化コバルト、塩化マンガンな
どの無機塩を使用できる。その他必要に応じて微量の金
属塩、消泡剤として動、植、鉱物油などを添加すること
ができる。これらのものは生産菌が利用し、３′−ヒド
ロキシベナノマイシンＡの生産に役立つものであれば良
く、公知の放線菌の培養材料はすべて用いることができ
る。さらに、ＤＬ−セリンを培地に培養初期から添加す
ることによって、目的の３′−ヒドロキシベナノマイシ
ンＡの生産を増加せしめることができる。添加濃度は0.
1〜2%の範囲で使用される。３′−ヒドロキシベナノマ
イシンＡの大量生産には液体培養が好ましく、培養温度
は３′−ヒドロキシベナノマイシンＡ生産菌が発育し
３′−ヒドロキシベナノマイシンＡを生産する範囲で適
用でき、通常20〜40℃、好ましくは25〜37℃である。培
養は以上述べた条件を適宜選択して行うことができる。

【００５１】３′−ヒドロキシベナノマイシンＡの採取
と精製は次のように行いうる。

【００５２】本発明によって得られる３′−ヒドロキシ
ベナノマイシンＡの培養物からの採取に当たっては、そ
の性状を利用した通常の分離手段、例えば、溶剤抽出
法、イオン交換樹脂法、吸着または分配カラムクロマト
法、ゲルろ過法、透析法、沈澱法等を単独でまたは適宜
組み合わせて抽出精製することができる。例えば、３′
−ヒドロキシベナノマイシンＡは、培養菌体中からはア
ルカリ水、アセトン−水またはメタノール−水で抽出さ
れる。培養液中に蓄積された３′−ヒドロキシベナノマ
イシンＡは、合成吸着剤であるダイヤイオンＨＰ−２０
（三菱化成社製）等に吸着される。

【００５３】また、弱酸性（ｐＨ３）にして３′−ヒド
ロキシベナノマイシンＡを沈澱化することができる。
３′−ヒドロキシベナノマイシンＡをさらに精製するに
は、シリカゲル（ワコーゲルＣ−３００、和光純薬工業
社製等）、アルミナ等の吸着剤やセファデックスＬＨ−
２０（ファルマシア社製）等を用いるクロマトグラフィ
ーを行うとよい。シリカゲルの細孔内部をオクタデシル
基で疎水性とした逆相充填剤を用いるクロマトグラフィ
ーも有効である。

【００５４】このようにして培養物中に生産された３′
−ヒドロキシベナノマイシンＡは遊離の形、すなわち
３′−ヒドロキシベナノマイシンＡそれ自体として分離
することができ、また３′−ヒドロキシベナノマイシン
Ａを含有する溶液またはその濃縮液を塩基、例えば水酸
化ナトリウム、水酸化カリウム等のアルカリ金属化合
物、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム等のアルカ
リ土類金属化合物、アンモニウム塩等のような無機塩
基、あるいはアミン例えばエタノールアミン、トリエチ
ルアミン、ジシクロヘキシルアミン等の有機塩基によ
り、各工程の操作中例えば抽出、分離または精製の各工
程の操作中に処理した場合、３′−ヒドロキシベナノマ
イシンＡは対応するその塩類の形に変化し、分離され
る。また別にこのようにして製造された３′−ヒドロキ
シベナノマイシンＡの塩類は、常法により遊離の形、
３′−ヒドロキシベナノマイシンＡそれ自体に変化させ
ることができる。さらに遊離の形で得られた３′−ヒド
ロキシベナノマイシンＡを前記塩基により常法で対応す
るその塩類に変化させてもよい。従って３′−ヒドロキ
シベナノマイシンＡと同様に前記のようなその塩類も、
この発明の範囲内に包含されるものとする。さらに特徴
的なことは３′−ヒドロキシベナノマイシンＡの塩、例
えばナトリウム塩の水溶解度が１０％におよぶことであ
る。

【００５５】以下に本発明の実施例を示すが、３′−ヒ
ドロキシベナノマイシンＡの性状が本発明によって明ら
かにされたので、それらの性状にもとずき３′−ヒドロ
キシベナノマイシンＡの製造法を種々考案することがで
きる。

【００５６】従って本発明は下記の実施例に限定される
ものではなく、実施例の修飾手段は勿論、本発明によっ
て明らかにされた３′−ヒドロキシベナノマイシンＡの
性状にもとずいて公知の手段を施して３′−ヒドロキシ
ベナノマイシンＡを生産および採取する方法をすべて包
括する。

【００５７】

【実施例】斜面寒天培地に培養したActinomadure sp.
ＭＨ１９３−１６Ｆ４株( 微工研条寄第２０５１号）を
前培養培地（可溶性澱粉２．０％、ポリペプトン
１．０％、肉エキス０．３％、Ｋ_２ＨＰＯ_４０．０５
％、ｐＨ７．０）に接種した。これを２８℃で２４時間
振とう培養し、更に可溶性澱粉１．０％、大豆粉３．
０％（ｐＨ６．２）からなる前培養培地８０ｍｌに継代
して２８℃で４８時間培養したものをジャーファーメン
ター（明治エンジニアリング社製，３．０リットル容
量，２．０リットル仕込み）の種母とした。

【００５８】ジャーファーメンターではグルコース
６．０％、大豆粉３．５％、ＤＬ−セリン１．０
％、ＫＨ_２ＰＯ_４０．１％、Ｋ_２ＰＯ_４０．０２５
％、塩化コバルト０．０００５％（ｐＨ６．８）の組
成からなる生産培地に植菌し３０℃で通気かくはん培養
（通気０．５ｖｖｍ，２４時間後１．０ｖｖｍ、ベラ回
転数６５０ｒｐｍ）を行った。培養中のｐＨは６．０〜
７．０にコントロールした。１５０時間培養後、培養液
を遠心分離して菌体を除去し上清液約１．５５リットル
を得た。

【００５９】この上清液中の活性物質は１Ｎ塩酸を用い
てｐＨ３．０５に調整することにより沈澱物として得
た。この沈澱物をろ取しｐＨ３．５の塩酸水で洗浄した
後に減圧下乾燥すると、主として３′−ヒドロキシベナ
ノマイシンＡをふくむ暗赤色粉末（１０．１ｇ）が得ら
れた。この粗粉末を少量のアルカリ水に溶解し、水で充
填したコスモシール７５Ｃ１８−ＯＰＮ（ナカライテス
ク社製２．０リットル）のカラムにかけ、水洗浄の後メ
タノール濃度を１％から徐々に上げて展開した。３′−
ヒドロキシベナノマイシンＡはメタノール濃度５〜１０
％で溶離された。３′−ヒドロキシベナノマイシンＡの
みをふくむ分画７３６〜８７６（１分画１１０ｍｌ）を
集め、減圧下１０５０ｍｌまで濃縮した。

【００６０】この濃縮液を再度水で充填したコスモシー
ル７５Ｃ１８−ＯＰＮ（１．０リットル）のカラムにか
け、前回と同様の方法で展開した。３′−ヒドロキシベ
ナノマイシンＡを含む分画３３２〜４１１（１分画１１
０ｍｌ）を集め、１Ｎ塩酸を用いてｐＨ３．０に調整す
ることにより沈澱化し、濾取後乾燥する事により純粋の
赤褐色の３′−ヒドロキシベナノマイシンＡの粉末５４
０ｍｇを得た。

【００６１】

【発明の効果】以上詳細に説明したとおり、本発明によ
ると放線菌ＭＨ１９３−１６Ｆ４株の培養により抗かび
活性を有する有用な抗生物質として３′−ヒドロキシベ
ナノマイシンＡが提供された。

【図面の簡単な説明】

【図１】３′−ヒドロキシベナノマイシンＡのメタノー
ル中（３０μｇ／ｍｌ）の紫外部および可視部吸収スペ
クトルを示す。

【図２】３′−ヒドロキシベナノマイシンＡの臭化カリ
ウム錠での赤外部吸収スペクトルを示す。

【図３】３′−ヒドロキシベナノマイシンＡの重ジメチ
ルスルホキシド溶液中での４００ＭＨｚ水素核核磁気共
鳴スペクトルを示す。

【図４】３′−ヒドロキシベナノマイシンＡの重ジメチ
ルスルホキシド溶液中での１００ＭＨｚ炭素核核磁気共
鳴スペクトルを示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩＣ１２Ｒ 1:03） (Ｃ１２Ｐ 19/56 Ｃ１２Ｒ 1:03） (72)発明者池田大四郎東京都渋谷区代々木５−29−８代々木コーポラス107 (72)発明者魚谷和道神奈川県鎌倉市笛田483−７鎌倉山ハイム203 (72)発明者今井敏神奈川県横浜市戸塚区俣野町1403 ドリームハイツ20−312 (72)発明者宮川聡神奈川県小田原市栢山1123 清流荘４− 303 (72)発明者五味修一東京都大田区上池台３−17−17 アイビーハイツ202 (56)参考文献特開平５−227985（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) C12P 19/00 - 19/64 A61P 1/00 - 43/00 C07H 1/00 - 23/00 C12N 1/00 - 1/38 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)

Claims

(57)【特許請求の範囲】

【請求項１】アクチノマジュラ・スパジックスMH193-
16F4株（微工研条寄第2051号として寄託）を培養して次
式(I) で表わされる３′−ヒドロキシベナノマイシンＡを培養
物中で生産、蓄積させ、さらにその培養物から３′−ヒ
ドロキシベナノマイシンＡを採取することを特徴とす
る、抗かび性抗生物質３′−ヒドロキシベナノマイシン
Ａの製造法。