JPH01112988A - 新規物質ｄｃ―１０７ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、ＤＣ−１０７およびその製法に関する。ＤＣ
−１０７は抗腫瘍作用を有し、抗腫瘍剤として有用であ
る。

従来の技術 従来、抗腫瘍抗生物質としてアンスラサイクリン系化合
物、アンスラキノン系化合物、マイトマイシン系化合物
など多くの化合物が報告されている。

〔シーアールシー　ハンドブック　オブ　アンタイバイ
オティック　コンパウンダ、シーアールシー　プレス（
ＣＲＣｔｌａｎｄｂｏｏｋ　ｏｆ　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉ
ｃＣｏｍｐｏｕｎｄｓ、　ＣＲＣＰｒｅｓｓ）　Ｕ、Ｓ
、Ａ、　　１９８１　）。

しかしながら、ＤＣ−１０７はその物理化学的性質から
上記いづれのグループにも属さない。またＤＣ−１０７
の分子式Ｃ２２Ｈ２ｇＮＣ２２Ｈ２から本物質が新規な
物質であることが明らかになった。

発明が解決しようとする問題点 癌の化学療法に用いられる抗癌抗生物質はマイトマイシ
ンＣ１アドリアマイシン、プレオマイシンなどがあるが
、これらの薬剤が効かない癌、あるいは耐性の問題など
からさらに優れた抗腫瘍作用を有する物質は常に求めら
れている。

問題点を解決するための手段 本発明者は、ストレプトマイセス属に属する菌株の培養
により得られる化合物が優れた抗菌作用および抗腫瘍作
用を有することならびに該化合物が新規化合物であるこ
とを見出し、本発明を完成した。

以下、本発明の詳細な説明する。

本発明は下記理化学的性質を示す新規化合物ＤＣ−１０
７を提供する。

■　分子式　Ｃ２２ＨｌＧ　Ｎ２０６　Ｓ　３■　分子
量　５１０ 高分解能ＰＡＲマススペクトルによる 実測値：　５１１．１０４１ Ｃ２２Ｈ２７Ｎ　２０　ｇ　Ｓ　ｓとしての計算値＝５
１１、１０３１ ■　融点　　１６０℃（分解） ■　　上ヒ旋光度　　　〔α）’、’１４０　°　（ｃ
Ｏ，１，メタノール）■　紫外線吸収スペクトル　　第
２図に示す。

■　赤外線吸収スペクトル　　第３図に示す。

■　溶剤に対する溶解性 メタノール、酢酸エチル、クロロ ホルム、アセトンに可溶 水、ｎ−ヘキサンに不溶 ■　呈色反応　　ニンヒドリン、ｐ−アニシジン、エー
ルリッヒ試薬に陽性 ■　塩基性、酸性、中性の区別　　中性■　物質の色　
　白色 ＤＣ−１０７は下記生物学的性質を有する。

（Ａ）各種細菌に対する最少生育阻止濃度（ＭＩＣ）第
　　　１　　　表 抗菌作用はバクト・トリプトン（Ｄｉｆｃｏ社製）３ｇ
、肉エキス３ｇ、酵母エキス１ｇ１グルコース１ｇ１寒
天１６ｇを１１の水に溶解して作成した培地（ｐＨ７）
を用いて寒天希釈法で測定した。

（Ｂ）急性毒性 マウスに対する腹腔内投与におけるＤＣ−１０７の急性
毒性の値（Ｌ　Ｄｓｏ）は約５ｍｇ／ｋｇであった。

（Ｃ）抗腫瘍作用 （１）　　サルコーマ１８０１１瘍に対する治療効果体
重約２０ｇのｄｄｙ雄マウス１群６匹にサルコーマ１８
０腫瘍細胞５Ｘ１０’個を腋窩部皮下に移植した。移植
後１日目から５日目まで２４時間毎に５回第２表に示す
濃度のＤＣ−１０７を含む燐酸緩衝液生理食塩水（以下
ＰＢＳという）溶液０．２ｍｌ！を腹腔内に投与した。

ＰＢＳの組成はＮａＣ１０，８ｇ／ｄＩｌ、ＫＣｊ！０
．０２ｇ／ｄ１、Ｎａ２ＨＰＯ＊　１．１５ｇ／ａ。

ＫＨ２Ｐ０．０．０２ｇ／ｄ！！、ｐＨ７，２である。

比較例として腫瘍細胞移植後２４時時間和マイトマイシ
ンＣを含むＰ　Ｂ　Ｓ　０．２１１１１！を腹腔内に投
与した群を設けた。

移植１０日後の平均腫瘍体重（ｍｍ３）及びＴ／Ｃ（Ｔ
　：試験例の平均腫瘍体積（ｍｍ’）、Ｃ：対照（ＰＢ
Ｓ溶液０．２−を腹腔内投与したもの）の平均腫瘍体積
（ｍｍ’））を測定した。

その結果を第２表に示す。

第　　　２　　　表 ＤＣ−１０７３，１９６５，８０，４９Ｌ６　１２２８
．３　０．６３ ０　（対照Ｈ９５３，６− （２）　　リンホサイティック・り二つヶミアＰ３８８
腫瘍に対する治療効果 体重約２２ｇのＣＤＦ、　、雄マウス１群５匹に、リン
ホサイティック・リュウヶミア（Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉ
ｃ　ｌｅｕｋｅｍｉａ）　Ｐ　３８８腫瘍細胞ｌＸ１０
６個を腹腔内移植した。移植後１日目から５日目まで２
４時間毎に５回、ＤＣ−１０７を含むＰＢＳ溶液０．２
−を腹腔内に投与した。

比較例として腫瘍細胞移植後２４時時間−マイトマイシ
ンＣを含むＰＢＳ溶液０．２−を腹腔内に投与した群を
設けた。

移植後の平均生存日数及び延命効果（Ｔ／Ｃ）（Ｔ：試
験例の平均生存日数、Ｃ：対照の平均生存日数）を測定
した。その結果を第３表に示す。

第　　　３　　　表 ＤＣ−１０７３，１１７，０１，６７ １，６１５，２１，４９ ０（対照）１０．２　　　　− マイトマイシン　Ｃ４１８，４１，８８ＤＣ−１０７は
、下記のとおりにして製造することができる。

ＤＣ−１０７はストレプトマイセス （Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に馬するＤＣ−１０７
生産菌株を栄養培地に培養し、培養物からＤＣ−１０７
を採取することによって得ることができる。

ＤＣ−１０７生産菌株としてはストレプトマイセス（Ｓ
ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属し、ＤＣ−１０７生産
能を有する菌株であればいずれの菌株でも用いることが
できる。またこれらの菌株の変異誘起剤処理あるいは自
然発生による変異株中にもＤＣ−１，０７を生産するも
のが見い出され、これらの変異株も本発明に用いること
ができる。

代表的菌株として本発明者らが山口系、都°濃郡の土壌
より分離したストレプトマイセス　アトロオリバセウス
（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ａｔｒｏｏｌｉｖａｃｅ
ｕｓ）ＤＯ−１０７株があげられる。

以下に分類学的研究に基いたＤＯ−１０７株の菌体成分
、形態、培養性状、および生理学的性質における特徴を
記し、さらに該株の属および種の同定について記述する
。なお、菌株の同定は、国際ストレプトマイセス（Ｓｔ
ｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）プロジェクト（ＩＳＰ）が、ス
トレプトマイセス属の種の同定のために推奨する方法〔
イー・ビー・シェリング（Ｅ、Ｂ、　Ｓｈｉｒｌｉｎｇ
）　右よびデイ−・ゴツトリープ（Ｄ、　Ｇｏｔｔｌｉ
ｅｂ）　、インターナショナル・ジャーナル・システマ
ティック・バクテリオロジ−（Ｉｎｔ、　Ｊ、５ｙｓｔ
、Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ）　１６巻：３１３〜３４０　（
１９６６）　）に従った。全細胞の加水分解物中のジア
ミノピメリン酸の異性体はビー・ベラカー（Ｂ、　Ｂｅ
ｃｋｅｒ）　　らの方式〔アプライド・ミクロバイオロ
ジー（Ａｐｐｌ、　１Ｊｉｃｒｏｂｉｏｌ）１２巻：４
２１〜４２３　（１９６４）　）によって確認した。形
態学的検討は、光学顕微鏡を用い、特に胞子表面の形態
については走査型電子顕微鏡によった。色の名称の割り
当てには、カラー・ハーモニーｅマニ二アル（Ｃｏｌｏ
ｒ　Ｈａｒｍｏｎｙ　Ｍａｎｕａｌ）（コンテナー・コ
ーポレーション・オブ・アメリカ（Ｃｏｎｔａｉｎｅｒ
　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａｍｅｒｉｃａ）、
第４版　１９５８）を使用した。ＤＯ−１０７株の菌学
的性質は次の通りである。

（１）形態 気菌糸：分枝するが、分断はない。

長生菌糸１公技するが、分断はない。

胞子：気菌糸から単純分枝した先端に１０個から３０個
もしくはさらに多数の長い連鎖として着生する。連鎖の
形態は屈曲状もしくはループ状。

胞子の表面：平滑（Ｓｍｏｏｔｈ） 胞子の運動性：なし 胞子の形・大きさ：楕円形（Ｏｏ５〜０．６Ｘ０．７〜
０．９μｍ）なぁ、菌核、胞子のうは観察されない。

（２）色調 気菌糸：灰色もしくは白色 基生菌糸：淡黄色〜黄茶色 可溶性色素：産生しない （３）細胞壁の化学組成 ジアミノピメリン酸の立体型：ＬＬ型 （４）生理的性質 炭素源の同化性 同化するニゲルコース、アラビノース、キシロース、イ
ノシトール、マンニトール、 フラクトース、ラムノース、ラフィノ ース 同化しない：シニクロース メラニン様色素二産生しない ゼラチンの液化：陰性 スターチの加水分解：陽性 脱脂牛乳の凝固、ペプトン化：共に陰性繊維素の分解：
陽性 生育温度範囲：１５〜３３℃（至適２８〜３０℃）なお
、生育温度範囲については２日後、ゼラチン、脱脂牛乳
および繊維素に対する作用については、２８℃、１ケ月
後の結果を、そのほかの性質は２８℃２週間後の結果を
示した。

（５）各種寒天培地における生育状螺 番ａ寒天培地で２８℃、２８日間、Ｄｏ−１０７株を培
養した結果を第４表に示す。

第　　　４　　　表 なお、いずれの培地でも可溶性色素の産生は認められな
かった。略号は次のとおり、Ｇ：生育の程度、へＭ：気
菌糸の着生度および色調、８Ｍ二基生菌糸の色調。

（６）Ｄｏ−１０７株の同定 ＤＯ−１０７株は、ＬＬ型のジ゛ｒミノピメリン酸が検
出されることから、レチェバリエとレチェバリエによる
放線菌の分類（Ｍ、　Ｐ、　Ｌｅｃｈｅｖａ　Ｉ　１ｅ
ｒａｎｄ　ＨｌＡ、　Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒ、インタ
ーナシＢナルージャーナル・システマティフク・バクテ
リオロジー（Ｉｎｔ、　Ｊ、５ｙｓｔ、　Ｂａｃｔｅｒ
ｉｏｌ、）２９巻、４３５−４４３　（１９７０））に
よると細胞壁Ｉ型となる。さらに該菌株の形態学的特徴
を考え合わせると、この菌株を、ストレプトマイセス属
に帰属させるのが適当である。

木馬における種の同定においては、細菌学名承認リスト
〔ヴイー・ビー・デイ−・スカーマン（Ｖ、Ｂ、Ｄ、Ｓ
ｋｅｒｍａｎ）ら１．Ｉｎｔ、　　Ｊ、　　５ｙｓｔ、
Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ。

３０巻、２２５〜４２０　（１９８０）で承認されてい
る種名より、該菌株と分類的特徴が類似している種をＩ
ＳＰの記載（［ｎｔ、　Ｊ、　５ｙｓｔ、　Ｂａｃｔｅ
ｒｉｏｌ。

１８巻、６９〜１８９、（１９６８）、同誌、１８巻、
２７９〜３９２、（１９６８）、同誌、１９巻、３９１
〜５１２、（１９６９）および同誌２２巻、２６５〜３
９４　（１９７２））をもとに検索した。

即ち、以下の特徴を鍵とした。灰色系の気菌糸、屈曲状
もしくはループ状の胞子連鎖、平滑な胞子表面、メラニ
ン様色素および可溶性色素ともに非産生、および炭素源
の資化パターン。

検索の結果、ストレプトマイセス・ミラビリス（Ｓｔｒ
ｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｍ１ｒａｂｉｌｉｓ）およびスト
レプトマイセス・アトロオリバセウス（Ｓｔｒｅｐｔｏ
ｍｙｃｅｓａｔｒｏｏｌ　１ｖａｃｅｕｓ）の２種が挙
げられた。

さらに詳細に比較すると、ストレプトマイセス・ミラビ
リスは長生菌糸の色がイースト・麦芽寒天培地において
天資もしくは灰緑を皇する点がＤＯ−１０７株とは著し
く異なる。一方、ストレプトマイセス・アトロオリバセ
ウスは、ｌ５Ｐ９の培地で生育が弱い点がＤＯ−１０７
株と異なるが他の点については概ね両者の分類学的特徴
は一致が見られた。よって、ＤＯ−１０７株をストレプ
トマイセス・アトロオリバセウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙ
ｃｅｓ　ａｔｒｏｏｌｉｖａｃｅｕｓ）　　と同定Ｌ、
Ｓ、アトロオリバセウスＤＯ−１０７と命名し、工業技
術院微生物工業技術研究所（微工研）に昭和６２年７月
４日付でＦＥＲＭ　　ＢＰ−１４０５として寄託されて
いる。

本発明で使用する菌の培養においては通常の培養法が一
般に用いられる。培養培地としては炭素源、窒素源、無
機物などを程よく含有する培地ならばいずれの培地も用
いることができる。

炭素源としてはブドウ糖、澱粉、グリセロール、マンノ
ース、フラクトース、シェークロース、糖蜜などを単独
または組み合わせて用いることができる。さらに菌の資
化能によっては炭化水素、アルコール類、有機酸なども
用いることができる。窒素源としては塩化アンモニウム
、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、硝酸ナトリウ
ム、尿素などの無機もしくは有機の窒素含有化合物、ま
たペプトン、肉エキス、酵母エキス、乾燥酵母、コーン
・スチープ・リカー、大豆粉、カザミノ酸などの天然物
含有窒素源を単独または組み合わせて用いることができ
る。無機物としては食塩、塩化カリウム、硫酸第一鉄、
硫酸亜鉛、硫酸マンガン、硫酸銅、炭酸カルシウム、燐
酸塩などの無機塩類を用いることができる。そのほか必
要に応じてＤＣ−１０７の生産を促進する有機物や無機
物例えばビオチン、ビタミンなどを適当に添加すること
ができる。

培養法としては液体培養法でも個体培養法でもよいが、
通常は液体培養法、とくに深部撹拌培養法が用いられる
。培養温度は２０〜３５℃、特に２３〜２８℃が最適で
、培地のｐＨはアンモニア水や炭酸アンモニウム溶液な
どを添加して、ｐＨ４〜１０、特に５〜７で培養を行う
ことが望ましい。液体培養で通常１〜７日培養を行うと
、目的物質が培養液中に生成蓄積する。

培養液中の生成量が最大に達したときに培養を停止し、
培養液中より目的物を精製単離する。

培養液からのＤＣ−１０７０単離精製には、微生物代謝
生産物を、その培養液から単離するためにふつう用いら
れる分離、精製の方法が利用される。例えば、まず培養
生産物を培養液体と菌体とにｐ過、遠心分離などによっ
て分離する。菌体はメタノール、アセトンなど本物質溶
解性溶剤で抽出し、抽出液を減圧下に濃縮して溶媒を除
き、ついで水に溶解して水溶液とする。

前述の菌体を除去した液と菌体を処理して得られた液を
非イオン性多孔性樹脂例えばＨＰ　−２０（三菱化成工
業社製）などで処理して、活性成分を吸着させた後、メ
タノール、アセトンなどを用いて溶出させる。この溶出
液を濃縮した後、シリカゲル（Ｗａｋｏｇｅｌ　　Ｃ−
２００、和光純薬社製）などを用いてその精製品を得る
。さらにこれをシリカゲル（Ｌｉｃｈｒｏｐｒｅｐ　５
ｉ６０　Ｍｅｒｃｋ社製）などを用いて精製し次に逆相
系シリカゲル（Ｗａｋｏｇｅｌ−Ｌ、Ｃ−０ＤＳ和光純
薬社製）などを用いて精製しＤＣ−１０７を得る。この
ようにして得られたＤＣ−１０７は、再結晶、高速液体
クロマトグラフィーなどによってさらに純度を高めるこ
とができる。

以下に実施例を示す。

実施例１゜ 種菌としてはストレプトマイセス・アトロオリバセウス
（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ａｔｒｏｏｌ　１ｖａｃ
ｅｕｓ）　Ｄ　Ｏ−１０７株を用いた。該菌株の１白金
耳を３００−容量の三角フラスコ中の下記組成の種培地
５０ｍ１！に植菌し、２８℃で４８時間振とう培養した
。

種培養組成ニゲルコース１０ｇ／ｊ！、可溶性デンプン
１０ｇ／ｊ！、バタトトリプトン５ｇ／Ｃ酵母エキス５
ｇ／ｌ、牛肉エキス３　ｇ／Ｉｌ、炭酸カルシウム２ｇ
／ｌ＜殺菌前ｐ　Ｈ７，２＞種培養液を３０１容量のジ
ャーファーメンタ−中の下記組成の発酵培地１８１に５
％（容量）の割合で移し２５℃で通気撹拌方式（回転数
３５゜ｒ、　ｐ０ｍ１通気量１３１７ｍ１ｎ）　Ｉ：よ
り培養ヲ行ツタ。

発酵培地組成：可溶性デンプン５０ｇ／β、コー７−Ｘ
チーブ・リカー３０ｇ／Ｌ　ＫＨ２Ｐ０．０．５ｇ／ｌ
、Ｍ　ｇ　Ｓ　０４・７Ｈ２００，５ｇ／Ｉ！、炭酸カ
ルシウム５ｇ／ｊ！　（ｐｆ１７．０、殺菌前にＮａＯ
Ｈで調整）。

培養中の培地のｐＨは調節しないで７２時間培養した。

培養液１５ｊ２を６Ｎ　　ＨＣｌ１でｐＨ５に調節した
後濾過し、ｐ液と菌体に分けた。菌体にメタノールｌＯ
ｌを加え撹拌し、活性物質を抽出した。

メタノール抽出液１０βとｐ液とを合わせ、ｐＨを４Ｎ
　　ＨＣｊ！で４に調節した後、非イオン性多孔性樹脂
であるダイヤイオンＨＰ−２０（三菱化成工業社製）１
．２ｆに通塔し°た。０６２％酢酸を含む５０％メタノ
ールで不純物を溶出した後、０．２％酢酸を含む１００
％メタノールを通塔し、活性画分を得た。この画分に等
看の脱イオン水を加え、非イオン性多孔性樹脂であるダ
イヤイオンＨＰ−２０３Ｓ　（三菱化成工業社製）に通
塔し、活性物質を吸着させた。０．２％酢酸を含む５０
％メタノールで洗浄後、本溶媒系におけるメタノールの
濃度を段階的に高めながら溶出した。活性物質は約８５
％メタノールを含む両分に溶出された。活性画分を濃縮
し、酢酸エチルで抽出した。抽出液を硫酸ナトリウムで
脱水した後、濃縮した。これをさらにシリカゲルカラム
（ＢＷ３００：富士デヴイソン化学社製）を用い、ｎ−
ヘキサン：酢酸エチル：酢酸＝５：５：０．１）で展開
した。溶出された活性画分を濃　縮すると褐色の粉末約
４００ｍｇを得た。さらに、この粉末をシリカゲルカラ
ム（Ｌｉｃｈｒｏｐｒｅｐ　５ｉ６０　　Ｍｅｒｃｋ社
製〉を用いて、約１０ｋｇ　／　ｃｕｔの圧力をかけな
がらクロロホルム：メタノール（５０：１）で展開した
。溶出された活性画分は濃縮後、逆相系シリカゲルカラ
ム（ＭＭＣゲル：山村化学研究新製）に吸着させた。０
．２％酢酸を含む４０％メタノール溶液のメタノール濃
度を８０％メタノールまで段階的に高めながら濃度勾配
溶出を行った。活性画分を濃縮した後、酢酸エチルで抽
出し、濃縮後、クロロホルムから結晶化を行うと、白色
針状晶のＤＣ−１０７５０ｍｇを得た。

ここで得たＤＣ−１０７は、前記した理化学的性質およ
び生物学的性質を示した。

発明の効果 本発明により抗菌作用および抗腫瘍作用を有する新規物
質ＤＣ−１０７を得ることができる。

【図面の簡単な説明】

第１図はＤＣ−１０７のメタノール中での紫外線吸収ス
ペクトルを示す。 第２図はＤＣ−１０７のＫＢｒ法での赤外拳吸収スペク
トルを示す。 第３図はＤＣ−１０７のＤＭＳＯＬｓ中での４００ＭＨ
ｚの’　ＨＮ　Ｍ　Ｒｘ　ベクトルを示す。 第４図はＤＣ−１０７のＤＭＳＯ−ｄｓ中での１００Ｍ
Ｈｚの１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）次の理化学的性質を有するＤＣ−１０７［１］分
   子式Ｃ＿２＿２Ｈ＿２＿６Ｎ＿２Ｏ＿６Ｓ＿３［２］分
   子量５１０ ［３］融点１６０℃（分解） ［４］比旋光度〔α〕＾２＾５＿■１４０°（ｃ０．１
   ，メタノール）［５］紫外線吸収スペクトル第１図に示
   す ［６］赤外線吸収スペクトル第２図に示す ［７］溶剤に対する溶解性 メタノール、酢酸エチル、クロロ ホルム、アセトンに可溶 水、ｎ−ヘキサンに不溶 ［８］呈色反応　ニンヒドリン、ｐ−アニシジン、エー
   ルリッヒ試薬に陽性 ［９］塩基性、酸性、中性の区別中性 ［１０］物質の色白色 ［１１］＾１Ｈ−ＮＭＲスペクトル：第３図に示す。 ［１２］＾１＾３Ｃ−ＮＭＲスペクトル：第４図に示す
   。
2. （２）ストレプトマイセス属に属しＤＣ−１０７を生産
   する能力を有する微生物を培地に培養し、培養物中にＤ
   Ｃ−１０７を生成蓄積させ、該生成蓄積したＤＣ−１０
   ７を採取することを特徴とするＤＣ−１０７の製造法。