JPH01121296A - 新規物質ｄｃ−１０５およびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はベンゾジアゼピン骨格を有する新規抗腫瘍抗生
物質ＤＣ−１０５およびその製法に関する。

従来の技術 従来、ベンゾジアゼピン骨格を有する抗腫瘍抗生物質と
してアントラマイシン（ａｎｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、マ
ゼトラマイシン（ｍａｚｅｔｈｒａｍｙｐｉｎ）　、）
メイマイシン（ｔｏｍａｙｍｙｃＩｎ＞、ネオトラマイ
シン（ｎｅｏｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、シビロマイシン（
ｓｙｂｉｒｏｍｙｃｉｎ）　、５ＢＮ−２］５　、シク
ロベニア（ｃｙｃｌｏｐｅｎｉａ）などが知られている
（ＣＲ［：　Ｈａｎｄｂｏｏｋ　ｏｆ　Ａｎｔｉｂｉｏ
ｔｉｃ　Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ、　５　。

１８１、　ＣＲＣＰｒｅｓｓ、　ＩＪ、Ｓ、Ａ、　１９
８１）。

また、本願出願人″は、特願昭６ｌ−２４６２３ｆｌに
おいて同じくベンゾジアゼピン骨格を有する抗腫瘍抗生
物質ＤＣ−，１０２を開示した。

優れた抗生物質、抗腫瘍性化合物は常に求められており
、この目的のために天然界より多くの微生物を人手して
抗生物質の生産性が調べられた。

その結果、山口県都濃郡の土壌から分離した菌株ＣＪＪ
下Ｄ○り１０５株という）を培地中に培養すると培養物
中に抗腫瘍活性も有する新規な抗生物質が生産されるこ
とが見出され、この化合物はＤＣ−１０５と命名された
。

以下本発明の詳細な説明する。

本発明は一般式 で表わされる抗腫瘍作用および抗菌活性を有する新規物
質ＤＣ−１０５に関する。

以下にＤＣ−１０５の理化学的性質を示す。

■　分子量　４５７ ■　分子式　Ｃ２，Ｉ３．Ｎ３０６ ■　質量分析　ＳＩＭＳ　　４５８　（Ｍ＋１）　＋Ｅ
ＩＭＳ　　４５７　（Ｍ）” ４５５　（Ｍ−２）　＋ ■　比旋光度〔α］　”　　＋５６７．５°。

（ｃ＝０．３５　、　　ＣＨＣβ３） ■　紫外線吸収スペクトルはセトニトリル中）第１図に
示す。

■　赤外線吸収スペクトル（［ｔｌ［：ｊ！＋＋中）第
２図に示す。

■　ＰＭＲスペトクル（ＣＤＣＩ２３中、７ＭＳ基準）
化学シフト　　　　　　　　　　　　帰属ｐｍ ■　ＣＭＲスペクトル（Ｃ［ｌｌ　３中、７ＭＳ基準）
化学シフト　　　多重度　　　帰属 ｐｍ １５５、６　　　　　　　ｓ　　　　　　　９１５１、
　ｌ　　　　　　　ｓ　　　　　　　７１２７、１　　
　　　　　ｄ　　　　　　１２１２４、　ＯＳ　　　　
　　　２ １１７、０　　　　　　　ｓ　　　　　　　５ａ７２．
４　　　　　　　ｓ　　　　　　　３　’■　溶解性：
クロロホルム、ＤＭＳＯ，メタノール、酢酸エチルおよ
びアセトンに可溶、水およびｎ−へキサンには難溶。

■　呈色反応：ニンヒドリン、ｐ−アニンジン試薬に陽
性。

■　物質の色、性質：淡黄色の塩基性物質■　薄層クロ
マトグラフィーニジリカゲル薄層（にｉｅｓｅｌｇｅｌ
　６０　Ａｒｔ　５７１５．　Ｂ、Ｍｅｒｃｋ社製）酢
酸エチル：メタノール（１：　１　　ｖ、／ｖ）の展開
溶媒でＲｆｏ、５５゜ 展開後ＤＣ−１０５のスポットは、Ｂａｃｉｌｌｕｓｓ
ｕｌｉｔｉｌｉｓを用いるバイオアッセイ、熱硫酸、ニ
ンヒドリン試薬、エールリッヒ試薬および紫外部吸収に
より検出できる。

次にＤＣ−１０５の生物活性について説明する。

（Ａ）抗菌作用 各種、細菌に対する最少生育阻止濃度（ＭＩＣ）を寒天
希釈法（ｐＨ７，０）により測定した。その結果を第１
表に示す。

第　　　１　　　表 ＡＴＣＣ６５３８Ｐ バチルス・ズブチリス　　　　　　　１，３Ｎα１０７
０７ ＾ＴＣＣ１００３１ サルモネラ・タイホーサ　　　　　〉１００ＡＴＣＣ９
９９２ エシェリキア・コリ　　　　　　　〉１００ＴＣＣ２６ （Ｂ）急性毒性（ＬＤｓｏ） マウスへの静脈内投与で０．１４７ｍｇ／ｋｇであった
。

（Ｃ）　　リンホサイティック・リューケミアＰ−３８
８腫瘍に対する治療効果 体重的２２ｇのＣＤＦ、雄マウス１群５匹に、リンホサ
イティック・リューケミア（ＬｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃＬ
ｅｕｋｅｍｉａ）　Ｐ−３８８腫瘍細胞ｌＸ１０６個を
腹腔内移植した。移植後２４時間目にＤＣ−１０５のＰ
ＢＳ溶液０．２ｍｌを１回腹腔内に投与した。比較例と
して、腫瘍細胞移植後２４時間目にマイトマイシンＣの
ＰＢＳ溶液０．２ｍｌを腹腔内投与した群を設けた。移
植後の平均生存日数及びＴ／Ｃ（Ｔ：試験例の平均生存
日数、Ｃ：対照の平均生存日数）を第２表に示す。

第　　　２　　　表 ＤＣ−１０５０，０３１２８ ０，０１１２６ マイトマイシン［：　　　　　　　　　　６　　　　　
　　　　　　　　　　１５１次にＤＣ−１０５の製造法
について説明する。

ＤＣ−１０５はストレプトマイセス属に属し、ＤＣ−１
０５を生産する能力を有する微生物を培地に培養し、培
養物中にＤＣ−１０５を蓄積せしめ、該培養物からＤＣ
−１０５を採取することによって得ることができる。

ＤＣ−１０５生産菌株としてはストレプトマイセス属に
属し、ＤＣ−１０５生産能を有する菌株であればいずれ
の菌株でも用いることができる。またこれらの菌株の人
工的変異方法、例えば紫外線照射、Ｘ線照射、変異誘起
剤処理等あるいは自然発生による変異株中にもＤＣ−１
０５を生産するものが見い出され、これらの変異株も本
発明に用いることができる。代表的菌株としてＤＯ−１
０５株があげられる。

ＤＯ−１０５株の菌学的性質について以下に述べるが、
該性質の決定は、国際ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ）プロジェクト（ＩＳＰ）がストレプト
マイセス種の特性決定のために推奨する方法［Ｂ、Ｂ、
シェリング（Ｂ、　Ｂ、５ｈｉｒｌ　ｉｎｇ）およびり
、ゴツトリープ（Ｄ、　Ｇｏｔｔｌｉｅｂ）、インター
・ジャーナル・システマティック・バクテリオロジ−（
Ｉｎｔ、Ｊ、５ｙｓｔ、　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、）　１
６．３１３〜３４０（１９６６））に従った。全細胞の
加水分解物中のジアミノピメリン酸の異性体はビー・ベ
ツカ−（Ｂ、Ｂｅｃｋｅｒ）らの方式〔アプライド・ミ
クロバイオロジー（Ａｐｐ１９Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、）
　　１２巻：４２１〜４２３（１９６４）］によって確
認した。形態学的検討は、光学顕微鏡を用い、特に胞子
表面の形態については走査型電子顕微鏡によった。色の
名称の割当てには、カラー・ハーモニー・マニュアル（
Ｃｏｌｏｒ　Ｈａｒｍｏｎｙ　Ｍａｎｕａｌ）　（：ｌ
ンティナー１コーポレーション・オブ・アメリカ（Ｃｏ
ｎｔａｉｎｅｒＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａｍｅ
ｒｉｃａ）　、第４版　１９５８）を使用した。Ｄｏ−
１０５株の菌学的性質は次の通りである。

（１）形態 気菌糸二分枝するが、分断はない。

基中菌糸２公技するが、分断はない。

胞子：気菌糸から単純分枝した先端に１０個から３０個
もしくはさらに多数の長い連鎖として着生する。連鎖の
形態は屈曲状もしくはループ状。

胞子の表面：平滑（Ｓｍｏｏｔｈ） 胞子の運動性：なし 胞子の形・大きさ：楕円形（０，５〜０．６Ｘ０．７〜
０．９μｍ）なお、菌核、胞子のうは観察されない。

（２）色調 気菌糸：灰色 基中菌糸：淡黄色〜黄茶色 可溶性色素：茶色もしくは赤茶色 （３）細胞壁の化学組成 ジアミノピメリン酸の立体型：ＬＬ型 （４）生理的性質 炭素源の同化性 同化するニゲルコース、キシロース、イノシトール、マ
ンニトール、フラクトース、 シュクロース 同化しない：アラビノース、ラムノース、ラフィノース メラニン様色素：チロシン寒天培地においては産生ずる
がペプトン・イーストエキ ス・鉄寒天培地では産生しない。

ゼラチンの液化：陰性 スターチの加水分解：陽性 脱脂牛乳の凝固、ペプトン化：共に陰性繊維素の分解：
陽性 生育温度範囲＝１６〜３３℃（至適２８〜３０℃）なお
、生育温度範囲については２日後、ゼラチン、脱脂牛乳
および繊維素に対する作用については、２８℃、１ケ月
後の結果を、そのほかの性質は２８℃２週間後の結果を
示した。

（５）各種寒天培地における生育状態 各種寒天培地で２８℃、２８日間、Ｄ　０−１０５株を
培養した結果を第３表に示す。

第　　　３　　　表 なお、略号は次のとおり、Ｇ：生育の程度、ＡＭ：気菌
糸の着生塵および色調、　ＳＭ：基中菌糸の色調、Ｐ：
可溶性色素の色調。

（６）ＤＯ−１０５株の同定 Ｄｏ−１０５株は、ＬＬ型のジアミノピメリン酸が検出
されることから、エム・ビー・レチェバリエとエイチ・
ニー・レチェバリエによる放線菌の分類［Ｍ、Ｐ、Ｌｅ
ｃｈｅｖａｌｉｅｒ　ａｎｄ　Ｈ，Ａ、　Ｌｅｃｈｅｖ
ａｌｉｅｒ、インターナショナル・ジャーナル・システ
マティック・バクテリオロジ−（Ｉｎｔ、Ｊ。

５ｙｓｔ、　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、）２０巻、４３５−
４４３　　（１９７０）：］によると細胞壁Ｉ型となる
。さらに該菌株の形態学的特徴を組み合わせると、この
菌株を、ストレプトマイセス属に帰属させるのが適当で
ある。

木屑における種の同定においては、細菌学名紙ε忍リス
ト〔ヴイー・ヒ゛−・テ゛イー・スカーマン（Ｖ、Ｂ、
Ｄ、　　Ｓｋｅｒｍａｎ）ら、Ｉｎｔ、　　Ｊ、　　５
ｙｓｔ、　　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ。

３０巻、２２５〜４２０　　（１９８０）　〕で承認さ
れている種名より、該菌株と分類的特徴が類似している
種をＩＳＰの記載［１ｎｔ、　Ｊ、　５ｙｓｔ、　Ｂａ
ｃｔｅｒｉｏｌ。

１８巻、６９〜１８９、（１９６８）、同誌、１８巻、
２７９〜３９２、（１９６８）、同誌、１９巻、３９１
〜５１２、（１９６９）、同誌、２２巻、２６５〜３９
４　　（１９７２）：］およびアール・イー・ブカナン
（Ｒ，Ｅ、　Ｂｕｃｈａｎａｎ）と工ｙ、−イー・ギボ
ンズ（Ｎ、　Ｂ、　Ｇｉｂｂｏｎｓ）編、バーシーズ・
マニュアル・オブ・デターミネイティブ・バクテリオロ
ジイ（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｄｅｔ
ｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ日ａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）第８
版〕をもとに検索した。

即ち、以下の特徴を鍵とした。灰色系の気菌糸、屈曲状
もしくはループ状の胞子連鎖、平滑な胞子表面、メラニ
ン様色素および可溶性色素ともに産生、および炭素源の
資化パターン。

検索の結果、ストレプトマイセス・アナンディ（Ｓｔｒ
ｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ａｎａｎｄｉｅ）およびストレプ
トマイセス・ノボリドエンシス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃ
ｅｓｎｏｂｏｒｉｔｏｅｎｓｉｓ）の２種がＤｏ−１０
５株の近縁の種として挙げられた。

この両種の基準株の特徴とＤｏ−１０５株をさらに詳細
に比較すると、両種はＤｏ−１０５株と異なり、唯一炭
素源としてラフィノースおよびアラビノースを利用する
ことができる。

またストレプトマイセス・アナンディは気菌糸の色調に
赤色を含むことが報告されており、この特徴はＤｏ−１
０５株には観察されない。さらにストレプトマイセス・
ノボリドエンシスでは、コロニー表面にＤｏ−１０５株
にはない赤色系の色調を持つことから、ＤＯ−１０５株
はいずれの種とも明瞭な一致は見られなかった。

よって、ＤＯ−１０５株をストレプトマイセス−ｓ　ｐ
、　（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ、）Ｄｏ　−１
０５と命名した。該菌株は工業技術院微生物工業技術研
究所に微工研条寄第１４９０号として寄託されている（
原寄託日：昭和６２年１０月１日）。

次に培養法について述べる。

本発明の培養においては通常の放線菌の培養法が一般に
用いられる。培地としては資化可能な炭素源、窒素源、
無機物及び必要な生育、生産促進物質を程よく含有する
培地であれば合成培地、天然培地いずれでも使用可能で
ある。

炭素源としてはグルコース、澱粉、デキストリン、マン
ノース、フラクトース、シュクロース、ラクトース、キ
シロース、アラビノース、マンニトール、糖蜜などを単
独または組み合わせて用いられる。さらに、菌の資化能
によっては炭化水素、アルコール類、有機酸なども用い
られる。窒素源としては塩化アンモニウム、硫酸アンモ
ニウム、硝酸アンモニウム、硝酸ナトリウム、尿素、ペ
プトン、肉エキス、酵母エキス、乾燥酵母、コーン・ス
チープ・リカー、大豆粉、カザミノ酸などが単独または
組み合わせて用いられる。そのほか、必要に応じて食塩
、塩化カリウム、硫酸マグネシウム、炭酸カルシウム、
リン酸二水素カリウム、リン酸水素二カリウム、硫酸第
一鉄、塩化カルシウム、硫酸マンガン、硫酸亜鉛、硫酸
銅などの無機塩類を加える。さらに使用菌の生育やＤＣ
−１０５の生産を促進する微量成分を適当に添加するこ
とができる。

培養法としては、液体培養法、とくに深部撹拌培養法が
もっとも適している。培養温度は２５〜４０℃、特に２
８〜３８℃が適当であり、培養中の培地のｐＨはアンモ
ニア水や炭酸アンモニウム溶液などを添加して、４〜１
０、特に６〜８に維持することが望ましい。

液体培養で通常１〜７日培養を行うと、目的物質ＤＣ−
’１０５が培養液中および菌体中に生成蓄積される。

培養物中の生成量が最大に達したときに培養を停止する
。

培養物からＤＣ−１０５の単離精製は、微生物代謝生産
物をその培養物から単離精製するために常用される方法
に従って行われる。例えば培養物をｐ過により培養Ｐ液
と菌体に分け、菌体をクロロホルム、アセトンなどで抽
出する。

ついで、抽出液と培養Ｐ液とを合わせて、ポリスチレン
系吸着剤例えばダイヤイオンＨＰ２０（三菱化成工業社
製）などに通塔して活性成分を吸着させ、ついでメタノ
ール、アセトンなどで溶出する。溶出液を濃縮し、濃縮
物に水を加えて希釈し、陽イオン交換樹脂例えばダイヤ
イオン５Ｋ１０４　　（三菱化成工業社製）のアンモニ
ア型のカラムに通塔して活性成分を吸着させ、塩を含む
溶液で溶出する。溶出された活性成分はさらにＨＰ　２
０への吸着、シリカゲルによるカラムクロマトグラフィ
ーなどにより精製し、ＤＣ−１０５の白色粉末を得る。

なお、培養、精製操作中のＤＣ−１０５の動向はバチル
ス・ズブチリスＮｏ、１０７０７を用いるバイオアッセ
イ、又は薄層クロマトグラフィーによるＤＣ−１０５の
紫外部吸収を目安として追跡することができる。

ＤＣ−１０５は必要に応じ、少なくとも１種の製剤上の
希釈剤、補助剤または担体と共に抗腫瘍剤として用いる
ことができる。例えば哺乳動物特に人に対しＤＣ−１０
５は０．００１〜０、８８　ｍｇ／ｋｇの投与量で、生
理食塩水、ブドウ糖、ラクトース、マンニット注射液に
溶解して注射剤として通常、静脈内に投与する。さらに
、同様の投与量で動脈内投与、腹腔内投与、胸腔内投与
も可能である。また日本薬局方に基づいて凍結乾燥して
もよいし、塩化ナトリウムを加えた粉末注射剤としても
よい。さらに医薬品的用途を満たした塩類のような、よ
く知られた薬学的に許容されている希釈剤、補助剤およ
び／または担体を含んでもよい。注射剤として使用する
場合には溶解度を高めるための助剤を併用するのが好ま
しい場合もある。投与量は年齢や症状により適宜増減で
きる。投与スケジュールは症状や投与量によって変える
ことができ、たとえば週１回あるいは３週間に１回など
の間歇投与を行う。また同様の投与量、投与方法で経口
投与、直腸投与も可能である。経口投与に際しては適当
な補助剤と共に、錠剤、粉剤、粒剤、シロップ剤、坐剤
として投与できる。

上記抗腫瘍剤は慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病
、乳癌、胃癌、肝癌、結腸癌、直腸癌、肺癌、膵癌、子
宮癌、頭頚部腫瘍などの治療への使用が期待される。該
抗腫瘍剤中のＤＣ−１０５の含量は注射として用いる場
合は２０〜５０ｍ１に０．００２〜２ｍｇが適当であり
、錠剤、カプセル剤、粉剤、顆粒剤、坐剤として用いる
場合は０．０’０１〜８５重量％が適当である。

以下に本発明の実施例及び参考例を示す。

実施例１ 種菌としてストレプトマイセス・ｓｐ、Ｄ。

−１０５を用いる。該菌株を２１容量の三角フラスコ中
のバクト・トリプトン（Ｄｉｆｃｏ社製）５ｇ／β、酵
母エキス５ｇ／ｌ、肉エキス３ピ／ｌ、可溶性澱粉１０
ｇ／β、グルコース１０ｇ　／　Ｒ、炭酸カルシウム５
ｇ／Ｒの組成を有する種培地（殺菌前ｐＨ７，２）　３
００ｍｌに植菌し、３０℃で４８時間振盪（’２００’
ｒｐｍ）培養した。

かくして得られた種培養液を３０β容量のジャーファー
メンタ−中の上記組成と同一組成の培地１５Ａ’に５％
（容量）の割合で移し、２８℃で２４時間撹拌方式（回
転数２０Ｏｒｐｍ、通気量１５　（１／ｍ１ｎ）により
培養を行った。かくして得られた培養液を２００１容量
のタンクファーメンタ−中の下記組成の発酵培地１５０
１に１０％（容量）の割合で移し、２８℃で通気撹拌方
式（回転数２０Ｏｒｐｍ、通気量１５１　／ｍ１ｎ）に
より培養を行った。

発酵培地組成：デキス）　ＩＪン３０ｇ／／ｌ。

大豆粉５　ｇ　／　ＩＩ　５ＫＨ２ＰＯ４０，５ｇ　／
　Ａ’、Ｍｇ５Ｏ＜・７Ｈ，００，５ｇ／β、炭酸カル
シウム　５ｇ／＃（殺菌前ｐ　Ｈ７，２、ＮａＯＨで調
整）。

培養中、培地のｐＨは制御しないで、７０時間培養した
。培養物より菌体および沈殿物を戸別し、ｐ液１００β
を得た。

炉液をポリスチレン系吸着剤ダイヤイオンＨＰ２０（三
菱化成工業社製）２１のカラムに通塔して活性物質を吸
着させた。脱イオン水で不純物を溶出後、メタノールで
活性物質を溶出した。活性物質を含む両分を濃縮後、水
を加えて希釈し、陰イオン交換セファデックスであるＤ
ＥＡＥセファデックスＡ、−２５（ファルマシア・ファ
インケミカル社製）のＣβ型２ｊ２のカラムに通塔し、
不純物質を吸着させた。活性のある通過液をＨＰ２０の
カラムに通塔し、メタノールで溶出した。溶出液を濃縮
、乾固すると褐色の粗粉末２ｇが得られた。粗粉末をシ
リカゲル（Ｗａｋｏ　Ｇｅｌ　Ｃ−２００；　　和光純
薬工業社製）のカラムにかけ、酢酸エチルついで酢酸エ
チルとメタノール（７：　３）の混合液で溶出した。

活性物質を含む両分を濃縮し、得られた粉末をシリカゲ
ル（Ｌｉｃｈｒｏｐｒｅｐ　Ｓｉ　６０　：　　メルク
社製）を充填した耐圧カラムにかけ、酢酸エチルついで
酢酸エチルとメタノール（８：２）の混合液で溶出した
。ＤＣ−１０５を含む両分を濃縮し、ｎ−へキサンを加
えて沈殿させ、沈殿を減圧下で乾燥させることにより、
ＤＣ−１０５の白色粉末２８ｍｇが得られた。得られた
ＤＣ−１０５の理化学的性質、抗菌活性、抗腫瘍活性は
前記の通りである。

参考例（注射剤） ＤＣ−１０５１０ｍｇを５０ｍ１の工９）　−ＪＬ／に
溶解し、撹拌した後エタノールを吸引除去する。残渣を
滅菌した生理的食塩人的１０ｍ１に溶解し注射液とする
。

発明の効果 本発明により抗菌、抗腫瘍活性を有する新規発酵生産物
Ｄ（，１０５が提供される。

【図面の簡単な説明】

第１図はＤＣ，−１０５の紫外部吸収スペクトル（Ｃ）
１３０）１溶液）を示す。実線は中性（３３ｎ／ｍｌ）
、点線は塩酸酸性（０，０Ｉ　Ｎ　；　１７　μｇ／ｍ
＋）　、−点鎖線は水酸化ナトリウム水溶液アルカリ性
（０，０１Ｎ　；　１７　ｌ１ｇ／ｍ＋）での測定結果
を示す。 第２図はＤＣ−１０５の赤外部吸収スペクトル（ＣＨＣ
β、）を示す。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）下記の一般式で示される新規物質ＤＣ−１０５。 ▲数式、化学式、表等があります▼
2. （２）ストレプトマイセス属に属し、新規物質ＤＣ−１
   ０５を生産する能力を有する微生物を培地に培養し、培
   養物中にＤＣ−１０５を生成蓄積させ、該生成蓄積した
   ＤＣ−１０５を採取することを特徴とするＤＣ−１０５
   の製造法。