JPH03294289A - 新規抗かび性抗生物質２′―デメチルベナノマイシンａならびにその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 り策上皇五里公互 本発明は、新規な抗かび性抗生物質２′−デメチルベナ
ノマイシンＡ　（２’　−Ｄｅｍｅｔｈｙｌｂｅｎａｎ
ｏｍｉｃｉｎＡ）またはその塩、ならびにその製造法に
関する。

従来の技術 本発明による抗かび性抗生物質２′−デメチルベナノマ
インンＡと構造上の特徴が類似する微生物生産物として
、本発明者らの発見したベナノマイシンＡおよびＢ（特
開平１−１２１２９３号）、ベナノマイシンＣ（特願昭
６３−２３２１８５号）、沖俊−らのＢＵ−３６０８（
ブラシマイシン）Ａ、Ｂ、Ｃ，Ｄ、Ｅ（特開昭６３−２
７０６９６号、特開平２−３２０９２号）および５Ｆ２
４４６　（Ｔａｋｅｄａら：　Ｊ、Ａｎｔｉｂｉｏｔｉ
ｃｓ　４１　：　　４１７−４２４（１９８８））　、
ＫＳ−６１９−１ＣＭａｔｓｕｄａら：　Ｊ、Ａｎｔｉ
ｂｉｏｔｉｃｓ４０　：　１１０４−１１１４（１９８
７））　、Ｇ−２ＮおよびＧ−２Ａ　［Ｇｅｒｂｅｒら
：　Ｃａｎａｄ、　Ｊ、　Ｃｈｅｍ、　６２　：　２８
１８−２８２１（１９８４））などが知られている。さ
らに、それらの誘導体とし゛本発明者らにより合成され
たデキシロシルベナ。

マイシンＡおよびＢ（特願平１−２４８１４３号および
９開平１−１６８６９４号）、Ｎ−アセチルベナノマイ
シ二Ｂ（特願平１−４７０１号）、ベナノマイシンＡ４
”〇−硫酸エステル（特願平２−６１２５４号、平成２
年３月１４日出願）などがある。しかし２′−デメラル
ベナノマイシンＡはこれらの物質とは理化学印および生
物学的性状が異なり、化学構造も明確収区別される。

発　が解決しようとする課題 従来、微生物が生産する種々の抗生物質が知されている
が、有効な抗かび性抗生物質はそれ程多く見出されてい
ないため、かびに起因する各種鐙染症の医療分野におい
ては新規な抗かび性抗生物質の出現が常に要望されてい
る。本発明者らは、ベナノマイシン生産菌の培養液から
既知のベナノマイシンＡ、ＢおよびＣのほかに微量成分
ながら新規抗かび性抗生物質２′−デメチルベナノマイ
シンＡを分離し、本発明を完成させた。さらに本発明の
目的は、新規な抗かび性抗生物質２′−デメチルベナノ
マイシンＡならびにその製造法を提供することにある。

課題を解決するための手 第１の本発明の要旨とするところは、前記の式で表され
る新規抗生物質２′−デメチルベナノマイシンＡおよび
その塩にある。

１．２′−デメチルベナノマイシンＡの理化学的性状の
詳細を列記すると、次の通りである。

（１）色および形状：赤褐色粉末 （２）分子式：　Ｃ，、Ｈ，、ＮＯ，。

（３）マススペクトル（ＳＪ−ＭＳ）　　：　ｍ／Ｚ　
６８１（Ｍ−ｘｙｌｏｓｅ）　” （４）融　点：＞２００℃（分解） （５）比旋光度：　〔α〕　＝測定不可能（ｃ　Ｏ，０
５、ＤＭＳＯ） （６）紫外部及び可視部吸収スペクトル［ＭｅＯＨ）　
　：　２０６　（５１０）　、　２３０　（４５４）　
。

２７２　（ｓｈ、　　３２８）、２８８（３６０）。

３００（ｓｈ、　２９８）、　４００（ｓｈ、　９０）
。

４７６（１４９） （０，ＩＮ　　ＨＣＩ　−ＭｅＯＩｏ　　　二　２０９
（４６０）、　　２３３（４９０）。

２９５（４３５）、　　４００（ｓｈ、１１５）。

４５８（１７３） ［０，ＩＮ　ＮａＯＨ−ＭｅＯＨ）　　：　２１４（１
１７７）、　２４９（４９１）。

３２０（２２６）、　　４９５（２１４）（７）　　赤
外部吸収スペクトル （ＫＢｒ　ｃｍ−’）　　：　３４００．２９７５．２
９ＩＯ，１７３０，１６３５１６２５、１６１０，１４
４５，１４３０，１３９０゜１３７５、１３３５．１３
００．１２５５．１２４０゜１２１０、１１６０．１１
４０．１０８０．１０５０゜１０３０、１０００．　９
７０．　９００．　８７０゜８３０、　７６０ （８）　　　’ＨＮＭＲｘベクトル（４００Ｍ＆、　Ｄ
ＭＳＯ−ｄａ。

４０℃） δ（ｐｐｍ）　　：　１．１２　　（３Ｈ。

３．０７　　（ＩＩ。

３．１５　　（１）１゜ ３．５４　　（ＩＨ。

３．６１　　（ＩＨ。

３．７１　　（ＩＩ（。

３．９７　　（３１（。

４．５１　　（ＩＨ。

４．６４　　（ＩＨ。

６．９４　　（２１（。

７．３１　　（１）１゜ ８．４８　　（ＩＨ。

１２．８２　　（１８゜ ’ＣＮＭＲスペクト ｄ、、　４００Ｃ） δ（ｐｐｍ）　　：　１８７，５　ｓ。

Ｉ６７．６　ｓ。

１５６．９　ｓ。

１３８．２　ｓ。

１３１．３　ｓ。

ｄ）、　　２．３６　　（３Ｈ，ｓ）。

ｄｄ）、３．１１（１１（、ｄｄ）。

ｄｄ）、３．３１（ＩＨ，ｄｄｄ）。

ｄｄ）、　　３．６０（ＩＨ，ｂｒｑ）。

ｂｒ　　ｓ）、　　３．７１　　（ｌ）ｆ、　　ｄｄ。

ｂｒ）、　　３．９３　　（１）１．　　ｄ）　　。

ｓ）、４．４２　　（ＩＨ，ｄ）。

ｄ）、　　４．６１　　（ＩＨ，ｄ）。

ｄ）、　　６．０６　　（ＩＨ，ｂｒ）　　。

ｄ）、７゜２０　　（ＩＨ，ｂｒ　ｓ）。

ｄ）、　　８．０８　　（１１（、Ｓ）。

ｔ）、　　　１２．５２　　（１１（、ｂｒ）。

ｓ）、ｌ：３．７９　　（ＬＨ，ｂｒ）。

ル（１００ＭＨｚ、　ＤＭＳＯ− １８５、Ｏｓ、　　１７１．０ １６６．０　　ｓ、　　１６４．７ １５１．２ｓ、　　１４７．８ １３７．３　　ｓ、　　１３４．４ １２７、Ｏｓ、　　１２５．６ １１８．５　ｄ、　　１１５．５　ｓ、　　１１５．５
　ｄ。

１１３．６　ｓ、　　１１Ｃ１，ｌ　　ｓ、　　１０７
．６　ｄ。

１０６．９　ｄ、　　１０５．２　ｄ、　　１０４．３
　ｄ。

８３、Ｏｄ、　　８１．３　ｄ、　　７６、Ｏｄ。

７３．６　ｄ、　　７１．８　ｄ、　　７０．３　ｄ。

７０、Ｏｄ、　　７０．Ｏｄ、　　６９．４　ｄ。

６５．６　ｔ、　　５６．４　Ｑ、　　４０．８　ｔ。

！９．２　ｑ、　　　！６．３　ｑ。

（１０）　　溶解性ニジメチルスルホキシド、ジメチル
ホルムアミド、アルカリ水に溶け、水 メタノール、クロロホルム、酢酸エ チル、アセトンに僅かに溶ける。

（１１）塩基性、酸性、中性の区別：酸性物質２′−デ
メチルベナノマイシンＡの塩としては金属塩、特にナト
リウム塩の如きアルカリ金属塩カルシウム塩の如きアル
カリ土類金属塩があり、更に後記の如きアミンとの塩等
がある。

２．２′−デメチルベナノマイシンＡの抗かび活性 本発明による２′−デメチルベナノマイシンＡについて
標準的な倍数希釈法で測定した各種かびに対する最小発
育阻止濃度を第１表に示した。

第 ！ 表 第２の本発明の要旨とするところは、放線菌に属する２
′−デメチルベナノマイシンＡ生産菌を培養し、その培
養物から２′−デメチルベナノマイシンＡを採取するこ
とを特徴とする２′−デメチルベナノマイシンＡの製造
法にある。

本発明の方法で使用できる２′−デメチルベナノマイシ
ンＡ生産菌の一例としては、下記に記載する放線菌ＭＨ
１９３−ｌ６Ｐ４株がある。

（イ）　　ＭＨ１９３−ｌ６Ｐ４株の菌　的　状この生
産菌は昭和５９年３月、微生物化学研究所において当研
究所構内の土壌より分離された放線菌（Ａｃｔｉｎｏｍ
ｙｃｅｔｅ）でＭＨ１９３−１６Ｆ４の菌株番号が付さ
れた。この菌株の菌学的性質は次の通りである。

〔１〕形態 Ｍ）１１９３−　ｌ６Ｐ４株は、顕微鏡下で分枝した基
中菌糸より気菌糸を形成する。基中菌糸の分断は認めら
れない。気菌糸の着生はｌ５Ｐ−培地２、ｌ５Ｐ−培地
３で見られる程度であり、胞子形成はｌ５Ｐ−培地３で
通常２７℃で培養後１８日目頃より観察される。気菌糸
には輪生技、らせん形成及び胞子のう形成は認められず
、気菌糸にほぼ垂直に短い胞子柄を生し、その先端に通
常３−７個、稀に２個の胞子の連鎖がみられる。なお胞
子鎖がループ状を呈することもある。個々の胞子は円柱
状（０，８ｘ　　１．０−１．２　μｍ）　〜球状（０
，８−１，２ａ　ｍ　）を示し、胞子表面は平滑である
。

〔２〕　種培地における生　態 色ノ記載ニついて〔〕内に示す標準は、コンテイナー・
コーポレーション・オブ・アメリカのカラー・ハーモニ
ー・マニュアル（ＣｏｎｔａｉｎｅｒＣｏｒｐｏｒａｔ
ｉｏｎ　　ｏｆ　　Ａｍｅｒｉｃａの　　Ｃｏ１ｏｒ　
　Ｈａｒｍｏｎｙ　　Ｍａｎｕａｌ）を用いた。

（１）　　シュクロース・硝酸塩寒天培地（２７℃培養
）発育は無色、気菌糸は着生せず、溶解性色素も認めら
れない。ビタミンＢ群補強培地では発育は無色〜ピンク
灰（５ｅｃ、　　Ｄｕｓｔｙ　Ｐｅａｃｈ）　、気菌糸
は着生せず、溶解性色素はわずかに赤味をおびる程度で
ある。

（２＞　　グルコース・アスパラギン寒天培地（２７℃
培養） 発育は無色、気菌糸は着生せず、溶解性色素も認められ
ない。ビタミンＢ群補強培地では、発育は無色〜うすピ
ンクＣ４ｇｅ、　Ｎｕｄｅ　Ｔａｎ）　、気菌糸は着生
せず、溶解性色素は赤味をおびる。

（３）　　グリセリン・アスパラギン寒天培地（ＩｓＰ
−培地５．２７℃培養） 発育は無色、気菌糸は着生せず、溶解性色素も認められ
ない。ビタミンＢ群補強培地では、灰味赤紫［８ｇ、　
Ｒｏｓｅ　Ｍａｕｖｅ）　〜にぶ赤紫〔８ｅ。

Ｒｏｓｅ　Ｗｊｎｅ　］の発育上に、わずかにうつすら
と白の気菌糸を着生し、にぶ赤紫［８ｐｃ、　Ｃｒａｎ
ｂｅｒｒｙ）の溶解性色素を生産する。

（４）　　スターチ・無機塩寒天培地（ＩＳＰ−培地４
．２７℃培養） 発育は無色、気菌糸は着生せず、溶解性色素も認められ
ない。ビタミンＢ群補強培地では、溶解性色素がわずか
に赤味をおびる。

（５）　　チロシン寒天培地（ＩＳＰ−培地７．２７°
Ｃ培養） 発育は無色〜うす黄茶（３ｉｃ、　Ｌｔ　Ａｍｂｅｒ〕
、気菌糸は着生せず、溶解性色素も認められない。ビタ
ミンＢ群補強培地では、発育は無色〜灰味赤紫、気菌糸
は着生せず、溶解性色素はわずかに赤味をおびる。

（６）　　栄養寒天培地（２７℃培養）発育はうす黄［
２ｇｃ、　Ｂａｍｂｏｏ］　、気菌糸は着生せず、溶解
性色素も認められない。ビタミンＢ群補強培地の場合も
同様の性状を示した。

（７）　　イースト・麦芽寒天培地（Ｉ　Ｓ　Ｐ−培地
２．２７℃培養） うす黄Ｃ２ｅｃ、　Ｂ１５ｃｕｉｔｌ　〜暗い赤［７ｐ
ｉ、ＤｋＷｉｎｅ−７％ｐｅ、　Ｄｋ　Ｒｅｄｌ　〜灰
味赤（７ｐｇ、　Ｗｉｎｅ）の発育上に、培養後１４日
目頃より灰白の気菌糸を着生する。にぶ赤［６％ｐｅ、
　Ｔｏｍａｔｏ　Ｒｅｄｌの溶解性色素は、培養初期に
発育の周辺のみにみられるが、次第に拡散する。発育の
色素、溶解性色素ともにＨＣＩでだいだいに変色し、Ｎ
ａＯＨでは変化はみられない。ビタミンＢ群補強培地で
も同様の性状である。

（８）　　オートミール寒天培地（Ｉ　ＳＰ−培地３．
２７℃培養） うすピンク〔４ｇｃ、　Ｎｕｄｅ　Ｔａｎ）　〜灰味赤
〔６ｅ。

Ｃｅｄａｒ）　〜暗い赤（７ｐｅ、　Ｃｈｅｒｒｙ　Ｗ
ｉｎｅ）　〜紫味灰［８ｉｇ、　Ｍａｕｖｅ　Ｇｒａｙ
）の発育上に、培養後１０日目頃よりうつすらと灰白（
３ｃｂ、　５ａｎｄ）の気菌糸を着生する。溶解性色素
は赤味をおびる程度である。

発育の色、溶解性色素ともにＨＣＩでだいだいに変色し
、ＮａＯＨでは変化はみられない。ビタミンＢ群補強培
地でも同様の性状を示した。

（９）　　グリセリン・硝酸塩寒天培地（２７℃培養）
発育は無色、気菌糸は着生せず、溶解性色素も認められ
ない。ビタミンＢ群補強培地でも同様の性状である。

ａω　スターチ寒天培地（２７℃培養）発育は無色、気
菌糸は着生せず、溶解性色素も認められない。ビタミン
Ｂ群補強培地では、発育は無色、気菌糸は着生せず、溶
解性色素はわずかに赤味をおびる程度である。

０Ｄ　　リンゴ酸石灰寒天培地（２７℃培養）発育は無
色、気菌糸は着生せず、溶解性色素はわずかに赤味をお
びる程度である。ビタミンＢ群補強培地では、発育は無
色、気菌糸は着生せず、溶解性色素も認められない。

（■　セルロース（ろ紙片添加合成液、２７°Ｃ培養生
育は認められない。

（１３）　　セラチン穿刺培養 １５％単純ゼラチン培地（２０℃培養）、グルコース・
ペプトン・ゼラチン培地（２７℃培養）ともに生育が貧
弱で、発育は無色、気菌糸は着生せず、溶解性色素も認
められない。

（（Ｉ４　　脱脂牛乳（３７℃培養） 生育は極めて貧弱であり、発育は無色、気菌糸は着生せ
ず、溶解性色素も認められない。

〔３〕髪里煎並１ （１）　　生育温度範囲 スターチ・イースト寒天（可溶性でんぷん１．０％、イ
ースト・エキス０．２％、紐寒天３．０％、ｐＨ７，０
）を用い、２０℃、２４℃、２７℃、３０℃、３７℃、
５０℃の各温度で試験の結果、５０℃を除いてそのいず
れの温度でも生育したが、最適生育温度は２７°Ｃ〜３
７℃付近と思われる。

（２）　　ゼラチンの液化（１５％単純ゼラチン培地、
２０℃培養；グルコース・ペプトン・ゼラチン培地、２
７℃培養） 単純ゼラチン培地、グルコース・ペプトン・ゼラチン培
地ともに培養後３カ月間観察したが、液化を認めなかっ
た。

（３）　　スターチの加水分解（スターチ・無機塩寒天
培地およびスターチ寒天培地、いずれも２７℃培養） スターチ・無機塩寒天培地、スターチ寒天培地ともに氷
解性は認められない。

（４）脱脂牛乳の凝固・ペプトン化（脱脂牛乳、３７℃
培養） 生育が貧弱であり、培養後３カ月間の観察では凝固・ペ
プトン化ともに認められなかった。

（５）メラニン様色素の生成（トリプトン・イースト・
フロス、■ＳＰ−培地ｌ培地ｌ：シフトンスト・鉄寒天
、ｌ５Ｐ−培地６；チロシン寒天、ｌ５Ｐ−培地７；い
ずれも２７℃培養） いずれの培地でも陰性であった。

（６）炭素源の利用性（プリドハム・ゴトリーブ寒天培
地、ｌ５Ｐ−培地９．２７℃培養）グルコース、Ｌ−ア
ラビノース、Ｄ−キシロース、Ｄ−フラクトース、シュ
クロース、ラムノース、ラフィノース、Ｄ−マンニトー
ルを利用して発育し、イノシトールを利用しない。

（７）　　リンゴ酸石灰の溶解（リンゴ酸石灰寒天、２
７℃培養） 陰性である。

（８）　　硝酸塩の還元反応（０，１％硝酸カリウム含
有ペプトン水、ｌ５Ｐ−培地８．２７℃培養）陽性であ
る。

（９）セルロースの分解（ろ紙片添加合成液、２７℃培
養） 生育しない。

以上の性状を要約すると、ＭＨ１９３−ｌ６Ｐ４株は気
菌糸の主軸にほぼ垂直に、３−７個（稀に２個）の胞子
からなる胞子連鎖を形成し、輪生技、らせん形成および
胞子のう形成は観察されない。また、基中菌糸の分断は
みられない。胞子表面は平滑である。ｌ５Ｐ−培地２、
ｌ５Ｐ−培地３の２種の培地で灰味赤〜暗い赤の発育上
に灰白の気菌糸をうつすらと形成する。なお、斜面培地
（イースト・エキス０．２％、可溶性でんぷん１．０％
、紐寒天３．０％、ｎ）ｌ　７．０）に継代すると、わ
ずかなピンクの気菌糸を着生することがある。また、ｌ
５Ｐ−培地２でにぶ赤の溶解性色素を産生ずる。その他
種々の培地では発育は無色、気菌糸は着生せず、溶解性
色素もほとんど認められない。しかし、培地にビタミン
Ｂ群を添加することにより発育が良好となり、発育が赤
くなる培地がある。発育の色および溶解性色素ともにＨ
ＣＩで赤からだいだいに変色し、ＮａＯＨでは変化はみ
られない。メラニン様色素の生成および蛋白分解力、ス
ターチの氷解性はいずれも陰性であり、硝酸塩の還元反
応は陽性である。また、ビタミンＢ群補強培地で生育が
良好となる場合があり、ビタミン要求性をもつことが考
えられる。

ところでＭｌ（１９３−ｌ６Ｐ４株は菌体成分として全
菌体中にメソ・ジアミノピメリン酸、および糖成分とし
てグルコース、リボース、マジュロースを含み、リシバ
リエら（Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒ　ｅｔ　ａｌ、　　Ｉ
ｎｔｅｒｎａｔ−ｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　
Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ、　
２０巻、４３５頁、　１９７０）の提唱する細胞壁の主
要構成成分のタイプＩＩ［Ｂを示した。またリン脂質の
タイプはＰＩＶ型（ホスファチジル・エタノールアミン
および未知のグルコサミン含有リン脂質を含み、ホスフ
ァチジル・グリセロールを含まない）、メナキノンの組
成はＭＫ−９（Ｈａ）を主成分とし、ＭＫ−９（Ｈｓ）
、　ＭＫ−９（Ｈｚ）、　ＭＫ−９（Ｈり、　ＵＫ−９
（Ｈｌ。）、ＤＮＡのＧＤ含量は７１．５％であった。

なお、菌体のガスクロマトグラフィーによる分析の結果
、イソ分枝脂肪酸（ｉ−１６：０）、アンチイソ分枝脂
肪酸（ａ−１７：Ｏ）　　１０メチル脂肪酸（１０Ｍｅ
　−１７：　０　）を特徴的に含むことがわかった。

既知の放線菌で胞子連鎖を有し、細胞壁タイプＩ［［Ｂ
を示すものは、アクチノマジュラ（Ａｃｔ　ｉｎｏｍａ
ｄｕｒａ）、ミクロビスポラ（Ｍｉｃｒｏｂｉｓｐｏｒ
ａ）、ミクロテトラスポラ　（Ｍｉｃｒｏｔｅｔｒａｓ
ｐｏｒａ）の３属である。

Ｕ旧９３−１６Ｆ４株と上記の３ｊｉの特徴を第２表に
示した。表中メナキノンの＊は生成分として含まれるこ
とを示す。

第２表 引用文献は次の通りである。

Ｉ）放線菌の同定実験法１日本放線菌研究会編。

１９８５年 ２）　Ｊ、Ｐｏ５ｃｈｎｅｒら：　　ＤＮＡ−ＤＮＡ　
Ｒｅａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ　ａｎｄＣｈｅｍｏｔａｘ
ｏｎｏｍｉｃ　５ｔｕｄｉｅｓ　ｏｎ　Ａｃｔｉｎｏｍ
ａｄｕｒａ、Ｍｉｃｒｏｂｉｓｐｏｒａ、　Ｍｉｃｒｏ
ｔｅｔｒａｓｐｏｒａ、　Ｍｉｃｒｏｐｏｌｙｓｐｏｒ
ａａｎｄ　Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ、　Ｓｙｓｔｅｍ
ａｔｉｃ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｅ＋ｊＭｉｃｒｏｂｉｏ
ｌｏｇｙ、　　６巻、　２６４−２７０頁、　１９８５
年３）　Ａ、Ｆｉｓｃｈｅｒら：　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
−ｇｅｎｅｔｊｃ　ａｎｄ　Ｃｈｅｍｏｔ−ａｘｏｎｏ
ａｉｉｃ　５ｔｕｄｉｅｓ　ｏｎ　Ａｃｔｉｎｏｍａｄ
ｕｒａ　ａｎｄ　Ｎｏｃａｒ−ｄｆｏｐｓｉｓ、　Ｊｏ
ｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏ
ｌｏｇｙ。

１２９巻、　　３４３３−３４４６頁、　　１９８３年
４）　Ｔｈｆｅｍａｎｎら：　Ａ　Ｎｅｗ　Ｇｅｎｕｓ
　ｏｆ　ｔｈｅ　Ａｃｔｉｎｏｍｙｃ−ｅｔａｌｅｓ　
：　Ｍｉｃｒｏｔｅｔｒａｓｐｏｒａｇｅｎ、ｎｏｖ、
、　Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ　Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｍｉｃｒｏ
ｂｉｏｌｏｇｙ、　　５０巻、　　２９５−３０３頁。

１９６８年 ５）野々村ら：土壌中における放線菌の分布（第１１報
）　Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ　Ｌｅｃｈｅｖａｌｆｅ
ｒ　ｅｔ　ａｌ、属の数新種。発酵工学会誌４９巻、　
　９０４−９１２頁、　１９７１午 第２表に示されるように、Ｍ旧９３−１６Ｆ４株がすん
なりと該当する属は見当たらない。これらの属は極めて
微妙に変遷しており、バージイズ・マニュアル（Ｂｅｒ
ｇｅｙ’ｓ　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａ
ｔｉｖｅＢａｃｔｅｒｉｏＩｏｇｙ）の改版にどのよう
に掲載されるかが期待されている。ただしアクチノマジ
ュラ属には多くの種が記載されており、性状にも広い幅
があるが、その中のアクチノマジュラ・スパジックス（
Ａｃｔｊｎｏｍａｄｕｒａ　５ｐａｄｊｘ）とは形態、
菌体の脂肪酸組成およびメナキノン組成にがなりの類似
点が見いだされる（前記１）、　３）、　５）の文献）
。

なお、ＭＨ１９３−１６Ｆ４株は工業技術院微生物工業
技術研究所に寄託申請し、昭和６２年８月２１日に微工
研条寄第９５２９号として受託された。さらに、昭和６
３年（１９８８年）９月１３日ブダペスト条約の規約に
より国際寄託され微工研条寄第２０５１号（ＦＥＲＭ　
ＢＰ−２０５１）の受託番号が付された。

（Ｇ）　　Ｍ旧９３−１６Ｆ４株の培養法放線菌に属す
る２′−デメチルベナノマイシンＡ生産菌を、通常の微
生物が利用し得る栄養源含有培地に接種して好気的条件
下に発育させることによって、培養液中に２７−ゾメチ
ルベナノマイシンＡを生産蓄積させ、更に培養物から目
的物を分離する。用いる培地中の栄養源としては、放線
菌の栄養源として用いられる公知のものが使用できる。

例えば市販されている大豆粉、ニスサンミート、ペプト
ン、肉エキス、コーン・ステイープ・リカー、綿実粉、
落花生粉、乾燥酵母、酵母エキス、ＮＺアミン、カゼイ
ン、硝酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニ
ウムなどの窒素源、およびグリセリン、しよ糖、でん粉
、グルコース、ガラクトース、マルトース、デキストリ
ン、乳糖、糖みつ、大豆油、脂肪、アミノ酸などの炭素
源、および食塩、燐酸塩、炭酸カルシウム、硫酸マグネ
シウム、塩化コバルト、塩化マンガンなどの無機塩を使
用できる。その他必要に応じて微量の金属塩、消泡剤と
して動、植、鉱物油などを添加することができる。これ
らのものは生産菌が利用し、２′−デメチルベナノマイ
シンＡの生産に役立つものであれば良く、公知の放線菌
の培養材料はすべて用いることができる。２′−デメチ
ルベナノマイシンＡの大量生産には液体培養が好ましく
、培養温度は生産菌が発育し２′−デメチルベナノマイ
シンＡを生産する範囲で適用でき、通常２０−４０℃、
好ましくは２５−３７℃である。培養は以上述べた条件
を２′−デメチルベナノマイシンＡ生産菌の性質に応じ
て適宜選択して行うことができる。

（ハ）　２′−デメチルベナノマイシンＡの精製性本発
明によって得られる２′−デメチルベナノマイシンＡの
培養物からの採取に当たっては、その性状を利用した通
常の分離手段、例えば、溶剤抽出法、イオン交換樹脂法
、吸着または分配カラムクロマト法、ゲルろ適法、透析
法、沈澱法等を単独でまたは適宜組み合わせて抽出精製
することができる。例えば、２′−デメチルベナノマイ
シンＡは、培養菌体中からはアセトン−水またはメタノ
ール−水で抽出される。培養液中に蓄積された２′−デ
メチルベナノマイシンＡは、合成吸着剤であるダイヤイ
オンＨＰ−２０（三菱化成社製）等に吸着される。２′
−デメチルベナノマイシンＡをさらに精製するには、シ
リカゲル（ワコーゲルＣ−３００、和光純薬工業社製等
）、アルミナ等の吸ｆＦ　剤やセファデックスＬＨ−２
０（ファルマシア社製）等を用いるクロマトグラフィー
を行うとよい。

このようにして培養物中に生産された２′−デメチルベ
ナノマイシンＡは遊離の形、すなわち２′−デメチルベ
ナノマイシンＡそれ自体として分離することができ、ま
た２′−デメチルベナノマイシンＡを含有する溶液また
はその濃縮液を塩基、すなわち例えば水酸化ナトリウム
、水酸化カリウム等のアルカリ金属化合物、水酸化カル
シウム、水酸化マグネシウム等のアルカリ土類金属化合
物、アンモニウム塩等のような無機塩基、エタノールア
ミン、トリエチルアミン、ジシクロヘキシルアミン等の
有機塩基により、各工程の操作中例えば抽出、分離また
は精製の各工程の操作中に処理した場合、２′−デメチ
ルベナノマイシンＡは対応するその塩類の形に変化し、
分離される。また別にこのようにして製造された２′−
デメチルベナノマイシンＡの塩類は、常法により遊離の
形、２′デメチルベナノマイシンＡそれ自体に変化させ
ることかできる。さらに遊離の形で得られた２′−デメ
チルベナノマイシンＡを前記塩基により常法で対応する
その塩類に変化させてもよい。従って２′−デメチルベ
ナノマイシンＡと同様に前記のようなその塩類も、この
発明の範囲内に包含されるものとする。

以下に本発明の実施例を示すが、２′−デメチルベナノ
マイシンＡの性状が本発明によって明らかにされたので
、それらの性状にもとずき２′デメチルベナノマイシン
Ａの製造法を種々考案することができる。従って本発明
は実施例に限定されるものではな（、実施例の修飾手段
は勿論、本発明によって明らかにされた２′−デメチル
ベナノマイシンＡの性状にもとずいて公知の手段を施し
て２′−デメチルベナノマイシンＡを生産、濃縮、抽出
、精製する方法をすべて包括する。

寒爽亘 （ａ）　　寒天斜面培地に培養したＡｃｔｉｎｏｍｙｃ
ｅｔｅ　ｓｐ。

ＭＨ１９３−１６Ｆ４株（微工研条寄第２０５１号）を
スターチ１．０％、大豆粉３．０％、ＫＭ７２　０．０
１％、アデカノール０．０１％を含む液体培地（５００
１ｎｌ容坂ロフラスコ中８０−１殺菌前ｐＨ７，０）に
接種し、２８℃で３日間振盪培養（１３５ｒｐｍ）シて
第１種培養を得た。

この種培養各３−を上記と同様の培地に接種し、同様の
条件で３日間振盪培養して第２種培養を得た。この種培
養２Ｌを１２０℃で１５分間殺菌した上記組成の培地５
０Ｌを含む１００Ｌ容培養槽に接種し２８℃で２日間、
通気量５０Ｌ／分、２０Ｏｒｐｍで通気攪拌培養して第
３種培養を得た。予め１２５℃で３（分間殺菌したグリ
セリン２．０％、ニスサンミート１．５％、Ｋ！）ｆＰ
Ｏ４０，０２５％、ＫＨ２ＰＯ，０−１１２５％、ＣＯ
Ｃｌ！　’　６８！ＯＯ，０００５％、ＫＭ７２０．０
３％、アデカノール０．Ｏ１％（殺菌前ｐｆ（６，２）
からなる３００　Ｌの生産培地を含む５７０Ｌ容培養槽
に前記第３種培養１２Ｌを接種し、２８℃で７日間、培
養初期２４時間の通気量１５０Ｌ／分、２４時間以降３
００Ｌ／分、３００ｒｐｍで通気攪拌培養した。培養終
了後、濾過助剤として珪藻土を加えて濾過し、培養濾液
２５０　Ｌ（ｐＨ６，０）を得た。

ｆｂ）　　この培養濾液中の活性物質は吸着性樹脂ダイ
ヤイオンＨＰ−２０（１５Ｌ　）に吸着させ、水（１０
０Ｌ　）および５０％メタノール（４５Ｌ）で洗浄後、
７０％メタノール（４５Ｌ）、次いでメタノール（９０
Ｌ）で溶出して第１分画（５３Ｌ）、第２分画（３８Ｌ
）および第３分画（２７Ｌ）を得た。ベナノマイシンＡ
を含む第１分画を減圧下濃縮して３Ｌとし、ｌＮ塩酸を
用いてｐＨ３，５に調整すると赤色沈澱が得られた。こ
の沈澱を濾取し、減圧下乾燥すると、主としてベナノマ
イシンＡを含む褐色粗粉末（１５２ｇ）が得られた占こ
の粗粉末（１５０ｇ）をジメチルホルムアミド（６００
ｄ　）に溶解し、デシケータ−中で室温３日間水蒸気を
飽和させると、結晶性沈澱が析出した。この沈澱を濾取
し減圧下乾燥すると、高速液体クロマトグラフィー分析
（ＨＰＬＣ、プレカラム：　ＣｏｓｍｏｓｉＬｇＣ＋ｇ
　４．６φｘ５０ｍ、カラム：ＣｏｓｍｏｓｉｌａＣ１
ｇ　４．６φＸ　１５０　ｍｍ、ナカライテスク社製、
移動相：０．５％　ＫＨ２ＰＯ４−メタノール〔ｌ：ｌ
〕、流速＝１−／分、４０℃）で約３％の２′−デメチ
ルベナノマインンＡを含んだベナノマイシンＡ・ジメチ
ルホルムアミド・ツルベート（２９ｇ）が得られた。第
２分画も第１分画と同様に処理し、同純度のベナノマイ
シンＡ・ジメチルホルムアミド・ツルベート（１４ｇ）
を得た。

（Ｃ）　　第１分画より得られたベナノマイシンＡ・ジ
メチルホルムアミド・ツルベート（１ｇ）を水（４０，
Ｊ　）に分散し、ＩＮ水酸化ナトリウムを加えてｐＨ７
，５とした。この溶液を、５％メタノール水で充填した
逆相シリカゲルカラム（ＬＬ。

Ｃｏｓｍｏｓｉｌ　７５Ｃｌ＊　−ＯＰＮ、ナカライテ
スク社製）にかけ、５％メタノール水で展開した。上記
ＨＰＬＣで保持時間約２４．５分を示す分画を濃縮し、
ｌＮ塩酸でｐＨ３，５に調整すると赤褐色沈澱が得られ
た。この沈澱を濾取し、減圧乾燥するとベナノマイシン
Ａの赤褐色粉末（８５０■）が得られた。

同様にＨＰＬＣで保持時間約１７分を示すピークを含む
分画を濃縮乾固すると、暗赤色粉末が得られた。更に、
この粉末を分取用ＨＰＬＣ（カラム：　　ＹＭＣ−Ｐａ
ｃｋ　Ｄ−ＯＤＳ−５、２０φｘ　２５０　ｍ、山村化
学研究新製、移動相：０．５％ＫＨｔＰＯ，−メ’；’
　／　−ル［１：　１３　、流速：　１０ｄ／分、４０
°Ｃ）で精製し、上記の分析用ＨＰＬＣで保持時間約１
７分を示す分画を濃縮した。この濃縮液中の活性物質を
ダイヤイオンＨＰ−２０（１０ｄ）に吸着させ、水洗後
５０％アセトン水で溶出した。溶出液を減圧濃縮後ｌＮ
塩酸でｐＨ３，５に調整すると赤褐色沈澱が得られたう
この沈澱を遠心分離し、減圧乾燥すると２′−デメチル
ベナノマイシンＡの赤褐色粉末（５，３■）が得られた
。

（ｄｌ　　第３分画を減圧下濃縮して１．５Ｌとし、ｌ
Ｎ塩酸を用いてｐＨ５，５に調整すると赤色沈澱が得ら
れた。この沈澱を濾取し、減圧下乾燥するとベナノマイ
シンＢおよびＣを含む褐色粗粉末（９９ｇ）が得られた
。この粗粉末（１ｇ）をジメチルホルムアミド（１０ｍ
７）に加温（４０’Ｃ）溶解し、ジメチルホルムアミド
で充填したセファデックスＬＨ−２０（ＩＬ）のカラム
にかけ、ジメチルホルムアミドで展開した。活性物質を
含む分画Ｎ（Ｌ６４−７２　（１分画６１ｎりを集め、
減圧上濃縮乾固するとベナノマイシンＢ・ジメチルホル
ムアミド・ツルベートおよびベナノマイシンＣψジメチ
ルホルムアミド・ツルベートを含む褐色粗粉末（６５７
■）が得られた。

この粗粉末をメタノール（１００１１１１）に溶解し、
ＩＮ塩酸（１ｍｌ）を加えた後、減圧上濃縮乾固した。

得られた褐色粗粉末をジメチルスルホキシド（３−）に
溶解し、攪拌下クロロホルム（２００ｄ）中に滴下し、
さらに２０分間攪拌すると赤褐色沈澱が析出した。この
沈澱を濾取し、減圧上乾燥して純粋なベナノマイシンＢ
塩酸塩（５６５■）を得た。

濾液は約５−まで減圧濃縮し、セファデックスＬＨ−２
０（６００ｄ）の上部に載せ、メタノールを展開溶媒と
するクロマトグラフィーを行った。ＴＬＣ上で単一の赤
色分画を濃縮乾固すると、ベナノマイシンＣ（３８，５
■）が得られた。

及■旦羞１ 以上詳細に説明したとおり、本発明によると放線菌Ｍ［
（１９３−１６Ｆ４株の培養液から単離することにより
新規抗生物質として抗かび活性を有する有用な２′−デ
メチルベナノマイシンＡが提供された。

【図面の簡単な説明】

第１図＝２′−デメチルベナノマイシンＡのメタノール
中（２０μｇ／ｍｌ、実線で示す）、０．ＩＮ塩酸−メ
タノール中（２０μｇ／ｙｄ、破線で示す）および０．
ＩＮ水酸化ナトリウム−メタノール中（２０μｇ／ｙｄ
、−点鎖線で示す）での紫外部および可視部吸収スペク
トルを示す。 第２図＝２′−デメチルベナノマイシンＡの臭化カリウ
ム錠での光外部吸収スペクトルを示す。 第３図：２′−デメチルベナノマイシンＡの重ジメチル
スルホキシド溶液中での４００　ＭＨｚ水素核核磁気共
鳴スペクトルを示す。 第４図：２′−デメチルベナノマイシンＡの重ジメチル
スルホキシド溶液中での１００　ＭＨｚ炭素核核磁気共
鳴スペクトルを示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、次式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表される抗かび性抗生物質２′−デメチルベナノマイ
   シンＡおよびその塩。 ２、放線菌（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅ）に属する２′
   −デメチルベナノマイシンＡ生産菌を培養し、その培養
   物から２′−デメチルベナノマイシンＡを採取すること
   を特徴とする抗かび性抗生物質２′−デメチルベナノマ
   イシンＡの製造法。