JP2716728B2 - 新規微生物並びに９−ケト型１６員環マクロライド抗生物質の製法 - Google Patents
新規微生物並びに９−ケト型１６員環マクロライド抗生物質の製法Info
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- JP2716728B2 JP2716728B2 JP12476188A JP12476188A JP2716728B2 JP 2716728 B2 JP2716728 B2 JP 2716728B2 JP 12476188 A JP12476188 A JP 12476188A JP 12476188 A JP12476188 A JP 12476188A JP 2716728 B2 JP2716728 B2 JP 2716728B2
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- producing
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Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、新規微生物並びに該微生物によって生産す
る医薬、動物飼料添加剤、動物用治療薬、水産用抗生物
質として有用である９−ケト型16員環マクロライド抗生
物質の製法に関するものである。
る医薬、動物飼料添加剤、動物用治療薬、水産用抗生物
質として有用である９−ケト型16員環マクロライド抗生
物質の製法に関するものである。
一般式（１） で表される９−ケト型16員環マクロライド抗生物質のR1
がアセチル基、R2がイソバレリル基であるカルボマイシ
ンＢはタンナー（Tanner）ら〔F.W.Tanner,A.R.Englis
h:Antibiot.and Chemother.,２,441（1952）〕によって
見出されたカルボマイシンＡを生産する菌株ストレプト
ミセス ハルステジイ（Streptomyces halstedii）の培
養液からホッホシュタイン（Hochstein）ら〔F.A.Hochs
tein,P.P.Regna:J.A.C.S.,77,3353（1955）〕によって
見出された。また、上記式（１）のR1が水素原子、R2が
イソバレリル基であるニダマイシン（Niddamycin）はナ
カザワ〔K.Nakazawa.J.Agr.Chem.Soc.Japan,29,647,（1
955）〕によりストレプトミセス ジャカルタエンシス
（Streptomyces djakartaensis）の生産物から見出され
ている。
がアセチル基、R2がイソバレリル基であるカルボマイシ
ンＢはタンナー（Tanner）ら〔F.W.Tanner,A.R.Englis
h:Antibiot.and Chemother.,２,441（1952）〕によって
見出されたカルボマイシンＡを生産する菌株ストレプト
ミセス ハルステジイ（Streptomyces halstedii）の培
養液からホッホシュタイン（Hochstein）ら〔F.A.Hochs
tein,P.P.Regna:J.A.C.S.,77,3353（1955）〕によって
見出された。また、上記式（１）のR1が水素原子、R2が
イソバレリル基であるニダマイシン（Niddamycin）はナ
カザワ〔K.Nakazawa.J.Agr.Chem.Soc.Japan,29,647,（1
955）〕によりストレプトミセス ジャカルタエンシス
（Streptomyces djakartaensis）の生産物から見出され
ている。
しかし、これらの菌株による培養液中の生産量は僅か
であり、生物活性の評価をするための場合でも、充分な
量を確保することは困難であった。従って、これらの抗
生物質は、その誘導体とすることによってより高い効果
を期待できる原料として有望視されているが、その生産
に多大の労力を必要としこの種の抗生物質の開発、研究
の障害になっていた。
であり、生物活性の評価をするための場合でも、充分な
量を確保することは困難であった。従って、これらの抗
生物質は、その誘導体とすることによってより高い効果
を期待できる原料として有望視されているが、その生産
に多大の労力を必要としこの種の抗生物質の開発、研究
の障害になっていた。
本発明は９−ケト型16員環マクロライド抗生物質の生
産量の高い新規微生物並びにその微生物を使用して高収
量で９−ケト型16員環マクロライド抗生物質を製造する
方法を提供することを目的とするものである。
産量の高い新規微生物並びにその微生物を使用して高収
量で９−ケト型16員環マクロライド抗生物質を製造する
方法を提供することを目的とするものである。
16員環マクロライド抗生物質の生合成経路はフルマイ
ら〔T.Furumai,K.Takeda,M.Suzuki:J.Antibiotics,28,7
89（1975）〕によって提唱されている如く、16員環マク
ロライド抗生物質のアグリコン部は９位ケト体を出発物
質として還元が起こり９位ヒドロキシ体となる。かくし
て、生物学的活性な最終生産物は９位ヒドロキシ体の16
員環マクロライド系抗生物質である。
ら〔T.Furumai,K.Takeda,M.Suzuki:J.Antibiotics,28,7
89（1975）〕によって提唱されている如く、16員環マク
ロライド抗生物質のアグリコン部は９位ケト体を出発物
質として還元が起こり９位ヒドロキシ体となる。かくし
て、生物学的活性な最終生産物は９位ヒドロキシ体の16
員環マクロライド系抗生物質である。
本発明者らは、16員環マクロライド抗生物質の９位が
ケト型の物質を生産する生産菌で、この抗生物質の生産
量の高い微生物を得べく鋭意研究し、９位がヒドロキシ
体の物質を高収量で生産する菌株を洗濯し、次に人工変
異処理により９位還元酵素欠失株を創成することにより
９位ケト型の16員環マクロライド抗生物質を高収量で生
産する微生物を得ることに成功し、この微生物を栄養培
地に培養し９−ケト型16員環マクロライド抗生物質を高
収量で得る方法を見出し本発明を完成した。
ケト型の物質を生産する生産菌で、この抗生物質の生産
量の高い微生物を得べく鋭意研究し、９位がヒドロキシ
体の物質を高収量で生産する菌株を洗濯し、次に人工変
異処理により９位還元酵素欠失株を創成することにより
９位ケト型の16員環マクロライド抗生物質を高収量で生
産する微生物を得ることに成功し、この微生物を栄養培
地に培養し９−ケト型16員環マクロライド抗生物質を高
収量で得る方法を見出し本発明を完成した。
本発明はストレプトミセス属に属する16員環マクロラ
イド抗生物質生産菌であって、９位還元酵素を欠失した
新規微生物並びに、同微生物を栄養培地に培養して培養
物から式（１） （式中R1は水素原子又はアセチル基、R2は水素原子又は
炭素数２〜６個を有するアルカノイル基を示す）で表さ
れる９−ケト型16員環マクロライド抗生物質を高収量で
得る方法である。
イド抗生物質生産菌であって、９位還元酵素を欠失した
新規微生物並びに、同微生物を栄養培地に培養して培養
物から式（１） （式中R1は水素原子又はアセチル基、R2は水素原子又は
炭素数２〜６個を有するアルカノイル基を示す）で表さ
れる９−ケト型16員環マクロライド抗生物質を高収量で
得る方法である。
本発明のストレプトミセス属に属する16員環マクロラ
イド抗生物質生産菌であって、９位還元酵素の欠失した
微生物は次のようにして検索することができる。
イド抗生物質生産菌であって、９位還元酵素の欠失した
微生物は次のようにして検索することができる。
天然界より採取した土壌を生理食塩水を加え、撹拌後
濾過し、濾液をISP−２培地で培養生育させ、生育した
放射菌を栄養培地に接種培養し、培養液中の活性成分を
分離し９位ヒドロキシ型16員環マクロライド抗生物質を
生産した菌株を検索し、この菌株を培養し、生育した菌
体にＮ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジ
ン処理等の変異処理を施し、この変異処理を施した菌体
を集め培養し、培養液中の活性成分を分離しクロマトス
キャナーにより280nmに吸収を持つ物質を検出した菌株
を選び出したものが本発明の微生物である。
濾過し、濾液をISP−２培地で培養生育させ、生育した
放射菌を栄養培地に接種培養し、培養液中の活性成分を
分離し９位ヒドロキシ型16員環マクロライド抗生物質を
生産した菌株を検索し、この菌株を培養し、生育した菌
体にＮ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジ
ン処理等の変異処理を施し、この変異処理を施した菌体
を集め培養し、培養液中の活性成分を分離しクロマトス
キャナーにより280nmに吸収を持つ物質を検出した菌株
を選び出したものが本発明の微生物である。
この方法により検索された代表的な微生物はストレプ
トミセスNo.7659株（本菌株は微生物工業技術研究所にF
ERM P−9985として寄託されている）である。この菌株
はカルボマイシンＢの生産株として極めて優れたもので
ある。
トミセスNo.7659株（本菌株は微生物工業技術研究所にF
ERM P−9985として寄託されている）である。この菌株
はカルボマイシンＢの生産株として極めて優れたもので
ある。
以下ストレプトミセスNo.7659株について、本発明の
微生物を検索する具体的方法を示す。
微生物を検索する具体的方法を示す。
検索法 （マクロライド生産菌の検索） 自然界より採取した土壌1gに生理食塩水10ml（界面活
性剤ツイーン80 0.01％添加）を加え、激しく撹拌した
後、東洋濾紙No.2で濾過し濾液を10倍宛段階的に滅菌生
理食塩水で希釈する。この液0.1mlをISP−２培地（酵母
エキス0.4％，麦芽エキス1.0％，グルコース0.4％，寒
天1.5％,pH7.3）上に塗り拡げ28℃で７日間培養する。
生育した放線菌をP22M培地（脱脂大豆粉２％，グルコー
ス２％，肉エキス0.2％,K2HPO40.1％,MgSO4・7H2O 0.05
％）30mlを入れた250ml容三角フラスコに接種し、２日
間28℃で振盪培養する。この培養液0.2mlをML−19培地
（グリセリン4.0％，ペプトン0.5％，グルコース0.2
％，可溶性澱粉0.2％，脱脂大豆粉0.5％，ドライイース
ト0.5％,NaCl 0.5％,CaCO3 0.2％,pH6.4）30mlを入れた
250ml容三角フラスコに接種し、28℃、４日間振盪培養
する。培養液を遠心分離（1,500×g,15min）し、上澄液
1mlを小遠心管にとり、K2HPO4 100mg,酢酸エチル1mlを
加え、ゴム栓をして激しく撹拌後、1000×g,10minで遠
心分離した。２層に別れた上層の液をシリカゲル薄層プ
レート（メルク社製No.5715）に10μ宛スポットし展
開溶媒（酢酸エチル：アセトン＝9:1）にて60分間展開
する。
性剤ツイーン80 0.01％添加）を加え、激しく撹拌した
後、東洋濾紙No.2で濾過し濾液を10倍宛段階的に滅菌生
理食塩水で希釈する。この液0.1mlをISP−２培地（酵母
エキス0.4％，麦芽エキス1.0％，グルコース0.4％，寒
天1.5％,pH7.3）上に塗り拡げ28℃で７日間培養する。
生育した放線菌をP22M培地（脱脂大豆粉２％，グルコー
ス２％，肉エキス0.2％,K2HPO40.1％,MgSO4・7H2O 0.05
％）30mlを入れた250ml容三角フラスコに接種し、２日
間28℃で振盪培養する。この培養液0.2mlをML−19培地
（グリセリン4.0％，ペプトン0.5％，グルコース0.2
％，可溶性澱粉0.2％，脱脂大豆粉0.5％，ドライイース
ト0.5％,NaCl 0.5％,CaCO3 0.2％,pH6.4）30mlを入れた
250ml容三角フラスコに接種し、28℃、４日間振盪培養
する。培養液を遠心分離（1,500×g,15min）し、上澄液
1mlを小遠心管にとり、K2HPO4 100mg,酢酸エチル1mlを
加え、ゴム栓をして激しく撹拌後、1000×g,10minで遠
心分離した。２層に別れた上層の液をシリカゲル薄層プ
レート（メルク社製No.5715）に10μ宛スポットし展
開溶媒（酢酸エチル：アセトン＝9:1）にて60分間展開
する。
このプレートをドラフト内で乾燥後10％（W/W）H2SO4
を噴霧し105℃オーブン内で５分間加熱する。マクロラ
イド抗生物質は茶褐色に発色し、標準品のロイコマイシ
ンと比較した。かくしてロイコマイシン生産菌株を検索
しその一株としてP4259株が得られた。
を噴霧し105℃オーブン内で５分間加熱する。マクロラ
イド抗生物質は茶褐色に発色し、標準品のロイコマイシ
ンと比較した。かくしてロイコマイシン生産菌株を検索
しその一株としてP4259株が得られた。
（変異処理） ISP−２培地上で28℃、14日間培養したP4259株の表面
から菌糸をかきとり、ジオクチルスルホサクシネート0.
005％を含むpH8.5の0.1Mリン酸ナトリウム緩衝液10mlに
懸濁し、ミリポアフィルター（孔径10μm,LCWP）で濾過
し、濾液0.5mlをP22M培地（30ml/250ml三角フラスコ）
に接種し30℃,48時間振盪培養する。この培養液0.2mlを
Ｓ培地〔グルコース１％，ペプトン0.4％，酵母エキス
0.4％,MgSO4・7H2O 0.05％,KH2PO4 0.2％,K2HPO40.4％
（25ml/250ml容三角フラスコ）〕に接種し24時間振盪培
養する。これを3,000r.p.m 10分間遠心分離して菌体を
集め、20mlの0.05Mトリスーマレイン酸バッファー（pH
8.5）に懸濁し、ワーリングブレンダーにて菌糸を切断
する。これに1mg/mlのＮ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−
ニトロソグアニジンを0.2ml添加し30℃で60分間緩やか
に振盪する。
から菌糸をかきとり、ジオクチルスルホサクシネート0.
005％を含むpH8.5の0.1Mリン酸ナトリウム緩衝液10mlに
懸濁し、ミリポアフィルター（孔径10μm,LCWP）で濾過
し、濾液0.5mlをP22M培地（30ml/250ml三角フラスコ）
に接種し30℃,48時間振盪培養する。この培養液0.2mlを
Ｓ培地〔グルコース１％，ペプトン0.4％，酵母エキス
0.4％,MgSO4・7H2O 0.05％,KH2PO4 0.2％,K2HPO40.4％
（25ml/250ml容三角フラスコ）〕に接種し24時間振盪培
養する。これを3,000r.p.m 10分間遠心分離して菌体を
集め、20mlの0.05Mトリスーマレイン酸バッファー（pH
8.5）に懸濁し、ワーリングブレンダーにて菌糸を切断
する。これに1mg/mlのＮ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−
ニトロソグアニジンを0.2ml添加し30℃で60分間緩やか
に振盪する。
後3,000r.p.m,10分間遠心分離し菌体を集めＳ培地（2
5ml/250ml容三角フラスコ）に懸濁し30℃、48時間振盪
培養する。この菌体を3,000r.p.mで10分間遠心分離して
菌体を集め、岡西らの方法〔M.Okanishi,K.Suzuki and
H.Umezawa:J.Gen.Microbiol.,80,389（1974）〕によっ
てプロトプラスト化し、再生を行った。再生したコロニ
ーをP22M培地に接種し30℃,48時間培養後、その0.2mlを
NZ培地（グリセリン 2％,NZアミンA 1％，酵母エキス
0.1％,MgSO4・7H2O 0.05％,K2HPO4 0.05％,pH 7.0,25ml
/250ml容三角フラスコ）に接種し30℃,72時間振盪培養
する。培養液1mlを小遠心管にとり、K2HPO4 50mg,酢酸
エチル1mlを加え撹拌抽出する。遠心分離（3,000r.p.m,
10min）後上層の酢酸エチル層10μを薄層クロマトプ
レートにスポットし、酢酸エチル：アセトン＝9:1の溶
媒で展開する。展開後プレートをクロマトスキャナー
（島津製作所CS930型）により280nmに吸収を持つ物質を
生産するNo.7659株をを選び出した。
5ml/250ml容三角フラスコ）に懸濁し30℃、48時間振盪
培養する。この菌体を3,000r.p.mで10分間遠心分離して
菌体を集め、岡西らの方法〔M.Okanishi,K.Suzuki and
H.Umezawa:J.Gen.Microbiol.,80,389（1974）〕によっ
てプロトプラスト化し、再生を行った。再生したコロニ
ーをP22M培地に接種し30℃,48時間培養後、その0.2mlを
NZ培地（グリセリン 2％,NZアミンA 1％，酵母エキス
0.1％,MgSO4・7H2O 0.05％,K2HPO4 0.05％,pH 7.0,25ml
/250ml容三角フラスコ）に接種し30℃,72時間振盪培養
する。培養液1mlを小遠心管にとり、K2HPO4 50mg,酢酸
エチル1mlを加え撹拌抽出する。遠心分離（3,000r.p.m,
10min）後上層の酢酸エチル層10μを薄層クロマトプ
レートにスポットし、酢酸エチル：アセトン＝9:1の溶
媒で展開する。展開後プレートをクロマトスキャナー
（島津製作所CS930型）により280nmに吸収を持つ物質を
生産するNo.7659株をを選び出した。
次にこのNo.7659株の菌学的性状を述べる。
（菌学的性状） ｉ）形態 気菌糸は貧弱で直鎖乃至分岐が認められ、らせんは認
められない。輪生枝も認められない。胞子鎖は普通３〜
10個の胞子を着生するが胞子着生は貧弱である。
められない。輪生枝も認められない。胞子鎖は普通３〜
10個の胞子を着生するが胞子着生は貧弱である。
胞子表面は平滑である。
ii）各種培地における生育状態を第１表に示す。
iii）生理学的性質 （１）生育温度:15〜35℃で生育する。37℃以上では生
育できない。
育できない。
（２）ゼラチンの液化：陽性 （３）スターチの加水分解：陽性 （４）ミルクの凝固：陰性 （５）メラニン様色素の生成：チロシン寒天培地で陽性 iv）炭素源の利用性（プリーダム・ゴトリーブ寒天培地
で試験） グルコース，フラクトース，イノシトール：陽性 アラビノース，キシロース，シュークロース，ラムノ
ース，ラフィノース，マンノース，セルロース：陰性 次に本発明のストレプトミセス属に属し16員環マクロ
ライド抗生物質生産菌であって、９位還元酵素の欠失し
た微生物を培養し、９−ケト型16員環マクロライド抗生
物質を得る方法について説明する。
で試験） グルコース，フラクトース，イノシトール：陽性 アラビノース，キシロース，シュークロース，ラムノ
ース，ラフィノース，マンノース，セルロース：陰性 次に本発明のストレプトミセス属に属し16員環マクロ
ライド抗生物質生産菌であって、９位還元酵素の欠失し
た微生物を培養し、９−ケト型16員環マクロライド抗生
物質を得る方法について説明する。
本製造法は、上記の菌株を通常の微生物が利用し得る
公知の栄養源を含有する培地で公知の方法で培養する。
例えば炭素源としては、例えばグルコース，グリセリ
ン，澱粉，マルトース，油脂類などが使用できる。窒素
源としては、例えば大豆粉，肉エキス，酵母エキス，ペ
プトン，コーンステイープリカー，綿実粕などの有機物
並びに硫酸アンモニウム，硝酸アンモニウム，塩化アン
モニウム，硝酸ナトリウムなどの無機物を使用できる。
また必要に応じて食塩，塩化カリウム，リン酸塩その他
重金属塩などの無機塩類を添加する他、醗酵中の発泡を
抑制するために例えばシリコン等の消泡剤を適宜添加す
ることができる。
公知の栄養源を含有する培地で公知の方法で培養する。
例えば炭素源としては、例えばグルコース，グリセリ
ン，澱粉，マルトース，油脂類などが使用できる。窒素
源としては、例えば大豆粉，肉エキス，酵母エキス，ペ
プトン，コーンステイープリカー，綿実粕などの有機物
並びに硫酸アンモニウム，硝酸アンモニウム，塩化アン
モニウム，硝酸ナトリウムなどの無機物を使用できる。
また必要に応じて食塩，塩化カリウム，リン酸塩その他
重金属塩などの無機塩類を添加する他、醗酵中の発泡を
抑制するために例えばシリコン等の消泡剤を適宜添加す
ることができる。
培養法は一般に行われている抗生物質の生産の方法と
同じく、好気的深部培養法が適しており、20〜35℃で培
養を行い、生産は２〜６日位が好適である。
同じく、好気的深部培養法が適しており、20〜35℃で培
養を行い、生産は２〜６日位が好適である。
培養後、培養液より９−ケト型16員環マクロライド抗
生物質例えばカルボマイシンB,ニダマイシンなど採取す
るには、微生物の生産する代謝産物を採取するに通常に
用いられている手段を適宜に利用すればよい。例えば、
不純物との溶解度の差を利用する手段、イオン交換樹脂
や各種吸着剤に対する吸着親和性の差を利用する手段、
水と混ざらない溶媒による抽出などの単独或いは組合せ
で利用できる。例えば、培養液をpH4前後にし、これか
ら菌体を分離して濾液を得、この濾液のpHを8.0以上に
してからトルエン等の有機溶媒で抽出する手段等で９−
ケト型16員環マクロライド抗生物質を抽出することがで
きる。
生物質例えばカルボマイシンB,ニダマイシンなど採取す
るには、微生物の生産する代謝産物を採取するに通常に
用いられている手段を適宜に利用すればよい。例えば、
不純物との溶解度の差を利用する手段、イオン交換樹脂
や各種吸着剤に対する吸着親和性の差を利用する手段、
水と混ざらない溶媒による抽出などの単独或いは組合せ
で利用できる。例えば、培養液をpH4前後にし、これか
ら菌体を分離して濾液を得、この濾液のpHを8.0以上に
してからトルエン等の有機溶媒で抽出する手段等で９−
ケト型16員環マクロライド抗生物質を抽出することがで
きる。
この抗生物質を更に精製するためには、シリカゲル，
セファデックス，カーボキシメチルセルロース，アルミ
ナ，活性炭などの吸着剤、ゲル濾過剤を用いたカラムク
ロマトグラフ法等により行うことができる。
セファデックス，カーボキシメチルセルロース，アルミ
ナ，活性炭などの吸着剤、ゲル濾過剤を用いたカラムク
ロマトグラフ法等により行うことができる。
次に本発明の９−ケト型16員環マクロライド抗生物質
を製造する方法の実施例を挙げる。
を製造する方法の実施例を挙げる。
例 １ ストレプトミセスNo.7659株のスラント培養よりP22M
培地に接種し、30℃,48時間振盪培養する。この培養液
0.2mlをCS−３培地（脱脂大豆粉３％，綿実粕３％，コ
ーンスターチ５％，大豆油５％,30ml/500ml容三角フラ
スコ）100本に接種し、30℃,4日間培養した。培養液を
集め、HClでpH3.5に調整し、濾過助剤セライト（和光純
薬）を培養液重量の５％宛加えて吸引濾過を行った。濾
液を6N NaOHにてpH 8.5に調整し、トルエン５を加え
て撹拌抽出を行いトルエン層をとり0.01N HCl水を加え
て撹拌抽出を行った。水層を分取し、pHを6N NaOHにて
8.5に調整し、トルエン２を加え撹拌抽出を行った。
トルエン層をロータリーエバポレーターで濃縮乾固し、
カルボマイシンＢとニダマイシンの混合粉末10gが得ら
れた。
培地に接種し、30℃,48時間振盪培養する。この培養液
0.2mlをCS−３培地（脱脂大豆粉３％，綿実粕３％，コ
ーンスターチ５％，大豆油５％,30ml/500ml容三角フラ
スコ）100本に接種し、30℃,4日間培養した。培養液を
集め、HClでpH3.5に調整し、濾過助剤セライト（和光純
薬）を培養液重量の５％宛加えて吸引濾過を行った。濾
液を6N NaOHにてpH 8.5に調整し、トルエン５を加え
て撹拌抽出を行いトルエン層をとり0.01N HCl水を加え
て撹拌抽出を行った。水層を分取し、pHを6N NaOHにて
8.5に調整し、トルエン２を加え撹拌抽出を行った。
トルエン層をロータリーエバポレーターで濃縮乾固し、
カルボマイシンＢとニダマイシンの混合粉末10gが得ら
れた。
例 ２ 例１で得たカルボマイシンＢとニダマイシンの混合粉
末を少量のベンゼンに溶解し、シリカゲルカラムクロマ
トグラフィー（ワコーゲルＣ−200,3cm×80cmカラム）
を行った。
末を少量のベンゼンに溶解し、シリカゲルカラムクロマ
トグラフィー（ワコーゲルＣ−200,3cm×80cmカラム）
を行った。
展開はベンゼン：アセトン＝4:1で行い、各分画を薄
層クロマトグラフィー（メルクシリカゲルプレート
F254,展開はベンゼン：アセトン＝4:1で分析しクロマト
スキャナー（島津CS−930）によりスポットを検出し
た。Rf＝0.6を示す物質f1（カルボマイシンＢ）とRf＝
0.45を示す物質f2（ニダマイシン）をそれぞれ最も純度
の高い分画を集め濃縮乾固した。カルボマイシンＢの収
量は2.0g、ニダマイシンの収量は0.4gであった。
層クロマトグラフィー（メルクシリカゲルプレート
F254,展開はベンゼン：アセトン＝4:1で分析しクロマト
スキャナー（島津CS−930）によりスポットを検出し
た。Rf＝0.6を示す物質f1（カルボマイシンＢ）とRf＝
0.45を示す物質f2（ニダマイシン）をそれぞれ最も純度
の高い分画を集め濃縮乾固した。カルボマイシンＢの収
量は2.0g、ニダマイシンの収量は0.4gであった。
Rf＝0.6を示す物質f1とRf＝0.45を示す物質f2の理化
学的性質は次の通りである。
学的性質は次の通りである。
１）紫外部吸収 両物質とも278nmに極大吸収を示した。
f1の紫外部吸収スペクトルを第１図に示す。
２）1H−NMR f1の400MHz 1H−NMRを第２図に示す。
f2の400MHz 1H−NMRを第３図に示す。
３）13C−NMR f1,f2の13C−NMRによる各炭素原子の化学シフト値を
第２表に示す。
第２表に示す。
４）質量分析 ケミカルインパクト法によるf1,f2の質量分析の結果 f1:M+＋１＝826 f2:M+＋１＝784 これらの結果を文献値〔A.Kinumakiら:J.Antibiotic
s,27,117（1974）、S.Omuraら:J.Am.Chem.Soc.,97:14,4
001（1971）、M.Suzuki:J.Antibiotics,24,904（197
1）、F.A.Hochstein and K.Murai:J.Am.Chem.Soc.,76,5
080（1954）〕と比較してf1物質はカルボマイシンＢ、f
2物質はニダマイシンであると同定された。
s,27,117（1974）、S.Omuraら:J.Am.Chem.Soc.,97:14,4
001（1971）、M.Suzuki:J.Antibiotics,24,904（197
1）、F.A.Hochstein and K.Murai:J.Am.Chem.Soc.,76,5
080（1954）〕と比較してf1物質はカルボマイシンＢ、f
2物質はニダマイシンであると同定された。
〔発明の効果〕 本発明は９−ケト型16員環マクロライド抗生物質を高
収量で得る新規微生物並びにこの微生物を用いて９−ケ
ト型16員環マクロライド抗生物質を製造する方法を提供
するもので極めて有用な発明である。
収量で得る新規微生物並びにこの微生物を用いて９−ケ
ト型16員環マクロライド抗生物質を製造する方法を提供
するもので極めて有用な発明である。
第１図は本発明で得られたf1物質の紫外部吸収スペクト
ルである。 第２図は本発明で得られたf1物質の400MHz1H−NMR（CDC
l3）を示す。 第３図は本発明で得られたf2物質の400MHz1H−NMR（CDC
l3）を示す。
ルである。 第２図は本発明で得られたf1物質の400MHz1H−NMR（CDC
l3）を示す。 第３図は本発明で得られたf2物質の400MHz1H−NMR（CDC
l3）を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:465）
Claims (3)
- 【請求項１】９−ケト型16員環マクロライド抗生物質生
産性を有するストレプトミセス（streptomyces）No.765
9（FERM Ｐ−9985）。 - 【請求項２】ストレプトミセス（streptomyces）No.765
9（FERM Ｐ−9985）を栄養培地に培養し、培養物から
採取することを特徴とする式 （式中R1は水素原子又はアセチル基、R2は水素原子又は
炭素数２〜６個を有するアルカノイル基を示す）で表さ
れる９−ケト型16員環マクロライド抗生物質の製法。 - 【請求項３】ストレプトミセス（Streptomyces）No.765
9株（FERM Ｐ−9985）を栄養培地に培養し、培養物か
ら採取することを特徴とする式 （式中R1は水素原子又はアセチル基、R2は水素原子又は
炭素数２〜６個を有するアルカノイル基を示す）で表さ
れる９−ケト型16員環マクロライド抗生物質の製法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12476188A JP2716728B2 (ja) | 1988-05-20 | 1988-05-20 | 新規微生物並びに９−ケト型１６員環マクロライド抗生物質の製法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12476188A JP2716728B2 (ja) | 1988-05-20 | 1988-05-20 | 新規微生物並びに９−ケト型１６員環マクロライド抗生物質の製法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01296979A JPH01296979A (ja) | 1989-11-30 |
| JP2716728B2 true JP2716728B2 (ja) | 1998-02-18 |
Family
ID=14893460
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP12476188A Expired - Lifetime JP2716728B2 (ja) | 1988-05-20 | 1988-05-20 | 新規微生物並びに９−ケト型１６員環マクロライド抗生物質の製法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2716728B2 (ja) |
-
1988
- 1988-05-20 JP JP12476188A patent/JP2716728B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH01296979A (ja) | 1989-11-30 |
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