KR830002329B1 - 모나콜린 k의 제조방법 - Google Patents

모나콜린 k의 제조방법 Download PDF

Info

Publication number
KR830002329B1
KR830002329B1 KR1019800001707A KR800001707A KR830002329B1 KR 830002329 B1 KR830002329 B1 KR 830002329B1 KR 1019800001707 A KR1019800001707 A KR 1019800001707A KR 800001707 A KR800001707 A KR 800001707A KR 830002329 B1 KR830002329 B1 KR 830002329B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
monascus
sank
monacoline
volume
ferm
Prior art date
Application number
KR1019800001707A
Other languages
English (en)
Other versions
KR830002875A (ko
Inventor
가즈히꼬 단자와
요시오 쓰지따
마사오 구로다
고오헤이 후루야
세이고 이와도
Original Assignee
상꾜가부시끼가이샤
가와무라요시부미
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority to JP5792779A priority Critical patent/JPS55150898A/ja
Priority to SE8001338A priority patent/SE467975B/sv
Priority to DK73180A priority patent/DK148807C/da
Priority to CH136780A priority patent/CH645891A5/de
Priority to DE3051097A priority patent/DE3051097C2/de
Priority to DE19803006215 priority patent/DE3006215A1/de
Priority to GB8007240A priority patent/GB2049664B/en
Priority to AT0148280A priority patent/AT372975B/de
Priority to BE0/199871A priority patent/BE882325A/fr
Priority to CA348,220A priority patent/CA1129795A/en
Priority to IE577/80A priority patent/IE49749B1/en
Priority to FR8006203A priority patent/FR2456141A1/fr
Priority to ES489751A priority patent/ES489751A0/es
Priority to NL8001697A priority patent/NL8001697A/nl
Priority to AU56678/80A priority patent/AU534647B2/en
Priority to IT67445/80A priority patent/IT1133075B/it
Priority to US06/137,821 priority patent/US4323648A/en
Application filed by 상꾜가부시끼가이샤, 가와무라요시부미 filed Critical 상꾜가부시끼가이샤
Priority to KR1019800001707A priority patent/KR830002329B1/ko
Publication of KR830002875A publication Critical patent/KR830002875A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR830002329B1 publication Critical patent/KR830002329B1/ko
Priority to SE8701483A priority patent/SE468482B/sv

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A22—BUTCHERING; MEAT TREATMENT; PROCESSING POULTRY OR FISH
    • A22C—PROCESSING MEAT, POULTRY, OR FISH
    • A22C25/00—Processing fish ; Curing of fish; Stunning of fish by electric current; Investigating fish by optical means
    • A22C25/16—Removing fish-bones; Filleting fish
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
    • C12P17/06—Oxygen as only ring hetero atoms containing a six-membered hetero ring, e.g. fluorescein
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D309/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings
    • C07D309/16—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
    • C07D309/28—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D309/30—Oxygen atoms, e.g. delta-lactones
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/911—Microorganisms using fungi

Abstract

내용 없음.

Description

모나콜린 K의 제조방법
본 발명은 모나스쿠스(Monascus) 속의 특정 미생물을 배양하며 얻어지며, 모나콜린 K로 명명되는 고(高) 콜레스테롤 혈증치료제의 제조방법에 관한 것이다.
Figure kpo00001
하기 일반식으로 표시되는 모나콜린 K는 지방 과혈증 치료작용, 특히 고 콜레스테롤 혈증치료 작용이 있음이 발견되었다.
고 혈증 콜레스테롤 농도는 심근경색이나 패색성 심혈관병등과 같은 심장병의 주 원인의 하나로 인정되어 왔다. 본 발명자들은 콜레스테롤 생합성 저해 작용이 있는 생리 활성물질을 발견해 내기 위하여 상당한 연구를 시도한 결과, 혈증 콜레스테롤 농도를 감소시킬 수가 있음을 발견해 내었다. 이와 같은 화합물은 본 발명의 주제를 이루고 있는 모나콜린 K로서, 모나쿠스 속의 미생물, 특히 모나스쿠스 러버(Monascus rubber) 균주 1005(FERM 4822)를 배양하여 제조할 수가 있다.
본 발명의 목적은 모나스쿠스 속균을 사용하여 모나콜린 K의 제조방법을 제공하는 데에 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 모나스쿠스 속균의 순수한 생물학적 배양액을 제공하는 데에 있다.
따라서, 본 발명은 배지중에서 하나이상의 모나스쿠스 앙카(monascus anka) SANK 10171(IFO 6540), 모나스쿠스 파아푸르스(Monasus purpureus) SANK 10271 (IFO 4513), 모나스쿠스 러버(Monascus rubber) SANK 10671 (FERM 4958), 모나스쿠스 비트류우스(Monascus Vitreus) SANK 10960 (FERM 4960), 모나스쿠스 팍시이(Monascus paxii), SANK 11172 (IFO 8201), 모나스쿠스 러버 SANK 13778(FERM 4959), 모나스쿠스 러버 SANK 15177 (FERM 4956), 또는 모나스쿠스 러버 SANK 18174(FERM 4957) 균주를 배양하여 생성되는 배지 중에서 모나콜린 K를 추출함을 특징으로 하는 모나콜린 K의 제조방법이다.
모나스쿠스 러버 SANK 10671, 모나스쿠스 러버 SANK 13778, 모나스쿠스 러버 SANK 15177 및 모나스쿠수 러버 SANK 18174는 모두 신규한 단리 균주이며, 하기에 상세하게 서술하였다. 상기의 잔여균주는 공지된 미생물이다. 이들 미생물들은 모두 괄호안에 기탁번호를 기술한 바와 같이 IFO 또는 FERM (The Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology, Ministry of International Trade and Industry, Japan; 일본국 통산성 공업기술원 미생물 공업기술 연구소)로 부터 손쉽게 입수할 수가 있다.
이들 신규한 미생물의 균학적 특징은 하기와 같다.
모나스쿠스 러버 SANK 15177 (FERM 4956) ; 본 균은 일본국 가나가와껜 야마또시 쓰끼미노의 토양으로 부터 단리시킨 균주로서 미생물 공업 기술연구소에 기탁 번호 제 4956호로서 1979년 4월 27일에 기탁되었다.
본 균은 25℃의 감자-글루코오스 한천 배지상에서의 생육이 양호하고, 배지중에서 황갈색 내지 적갈색의 가용성 색소를 생산하며, 기저균사층상에는 자낭과가 다수 형성된다.
오우트미일한천 배지상에서는 담갈색의 색소를 생산하며 생육도 양호하고, 자낭과의 형성도 양호하다. 자낭과는 단병(短柄)상에 형성된 구형이고 직경이 30 내지 60㎛이며, 이들 자루(柄)는 거의 무색이고 분기성이며, 25-60×3.5-5.0㎛크기이다. 자낭은 소실성이기 때문에 관찰하기가 어렵다. 자낭 포자는 무색, 난형이고, 표면은 평활하며 4.5-6.5×3.5-5.0㎛이다. 분생자는 구기적(求基的)으로 연쇄하며, 7.0-10.0×6.0-10.0㎛ 크기이다.
본 균은 37℃에서도 생육되나 23 내지 30℃ 정도가 최적의 생육온도이다.
모나스쿠스 러버 SANK 10671 (FERM 4958) ;
본 균은 일본국 동경도 시나가와구 토양으로 부터 분리시킨 균주로서, 미생물 공업기술 연구소에 기탁번호 4958로서 1979년 4월 27일에 기탁되었다.
감자-글루코오스 한천 배지 및 오우트 미일 한천 배지상에서의 생육은 전술한 SANK 15177균주의 경우와 유사하나, 가용성 색소는 암갈색이다. 자낭과의 직경은 30내지 80㎛이고, 자루는 30-70×3.0-5.0㎛이며, 자낭은 관찰되지 않는다. 자낭포자는 무색이고 난형이며 4.5-6.5×4,0-5.0㎛이다. 분생자는 무색이고 서양배 또는 원추형의 모양이며, 6.0-10.0×6.0-8.5㎛이다.
모나스쿠스 러버 SANK 13778 (FERM 4959) ;
본 균은 일본국 후꾸시마껜 야마군 이나와시로쪼 나가따의 토양으로부터 분리시킨 균주로서, 미생물 공업기술 연구소에 1979년 4월 27일 기탁번호 4959로서 기탁되었다.
감자-글루코오스 한천 배지 및 오우트 미일 한천배지 상에서의 생육은 전술한 SANK 15177균주의 경우와 유사한, 가용성 색소는 담적갈색 내지 적갈색이다. 자낭과의 직경은 35 내지 75㎛이고 자루는 30-70×3.5-5.0㎛이며, 자낭은 관찰되지 않는다. 자낭포자는 무색, 난형이고, 표면은 평활하며 4.5-6.0×4.0-5.0㎛이다. 분생자는 7.0-10.0×6.0-10.0㎛이다.
모나스쿠스 러버 SANK 18174 (FERM 4957) ;
본 균은 일본국 혹까이도 시리베시시쪼 사꼬단군 사꼬단쪼의 토양으로 부터 분리시킨 균주로서, 미생물 공업기술 연구소에 1979년 4월 27일 기탁번호 4957로 기탁되었다.
감자-글루코오스 한천 배지 및 오우트 미일 한천 배지상에서의 생육은 전술한 SANK 15177군주의 경우와 유사하나, 가용성 색소는 담도(淡挑) 색이다. 자낭과는 직경이 20내지 70㎛이고 자루는 20-60×3.0-5.0㎛이며, 자낭은 관찰되지 않는다. 자낭포자는 무색이고 타원형이며, 표면은 평활하고, 5.0-7.0×4.0-5.5㎛이다. 분생자는 구기적(求基的)으로 연쇄하며, 대부분이 서양배 모양으로 6.0-9.5×6.0-10.0㎛이다.
이상의 관찰 결과로 부터 이들 군주는 모나스쿠스 러버반 티그헴(Van Tiegham) 균주로 동정(同定)되었다.
모나스쿠스 러버에 관한 균학적 특성은 하기의 문헌에 보고 되어 있다 ;
다까다씨의 일본 균류지 자료(7)(일본국 균학회 회보 9권 125내지 130페이지 (1969년)및 Van Tiegham, Bull. Soc. Botan. France, 31, 227 (1844년)과 그의 분생자 세대에 대해서는 Cole씨 외의 "Conidiumontogeny in hyphomycetes. The imper fect state of Monascus rubber and its meristem arthrospores" (카나다 식물학회지 46권 987페이지 (1968년).
모나콜린 K는 전술한 균주를 곰팡이 기타 미생물의 배양법으로서 공지된 배양법에 의해 호기적 조건하의 배양액중에서 생산시킬 수가 있다. 이를테면, 전술한 모나스쿠스 균주를 적당한 배지상에 먼저 배양시킨 다음에, 생산된 균주를 또 다른 배지상에 접종 배양하여 목적하는 모나콜린 K를 생산시킬 수가 있다. 균주의 중심에 사용하는 배지와 모나콜린 K의 생산에 사용하는 배지는 서로 동일하거나 또는 상이할 수도 있다.
곰팡이의 배양 기술에 공지된 배지로서 필수 영양 물질, 특히 동화성 탄소원과 동화성 질소원을 함유하는 배지는 모두 사용할 수가 있다. 바람직한 동화성 탄소원을 예시하면 글루코오스, 말토오스, 덱스트린, 전분, 락토오스, 수크로오스 및 글리세린 등이 있으며, 이들 탄소원 중에서 모나콜린 K의 생산에는 글루코오스, 글리세린 및 전분이 특히 바람직하다. 바람직한 동화성 질소원을 예시하면 펩톤, 육즙, 효모, 효모즙, 대두분, 낙화생분, 옥수수 침지액, 쌀겨 및 무기질소원 등이 있으며, 이들 질소원 중에서도 펩톤이 특히 바람직하다. 또 모나콜린 K를 생산할 때에는 필요에 따라서 무기염 및 (또는) 금속염을 배지에 첨가시킬 수가 있으며, 또 필요에 따라서는 소량의 중금속도 첨가시킬 수가 있다.
본 균주는 당 분야에 공지된 비양법 즉, 고체 배양법, 진동배양법 또는 통기 교반 배양법을 사용하여 호기적 조건하에서 배양하는 것이 바람직하다.
본 균주는 광범위한 온도 범위, 이를테면, 7 내지 40℃ 범위내에서 생육되나, 특히 모나콜린 K의 생산에 있어서의 가장 바람직한 버양 온도 범위는 20 내지 30℃이다.
본 균주를 배양한 동안에 배지를 채취하여 배지 중의 모나콜린 K의 생리활성을 하기에 후술하는 시험에 이해 측정함으로서 모나콜린 K의 생산을 검정할 수가 있다. 모나콜린 K가 배지 중에 실질적으로 축적될 때까지 배양을 계속 행하여 본 발명의 물리적 및 화학적 성질에 대하여 여러가지의 단리 방법을 적당히 병용함으로서 배지로부터 회수할 수가 있다. 즉, 배양 여액으로부터 예를 들면, 디에틸에테르, 초산에틸, 클로로포름 등의 소수성 용제에 의한 추출 조작 ; 균체로부터 예를 들면, 아세톤이나 알코올 등의 친수성용제에 의한 추출 조작 ; 감압하에서 용제의 일부를 증발시키는 농축 조작 ; 아세톤이나 알코올 등의 보다 극성이 강한 용제중에 용해시키는 조작 ; 석유 에테르나 헥산 등의 보다 극성이 약한 용제로 불순물을 제거시키는 조작 ; 세파덱스(미합중국 Pharmacia, Co. Ltd 회사의 상표명)칼럼에 의한 겔 여과 ; 활성탄이나 실리카겔 등을 사용하는 흡착 크로마토그래피 및 기타 유사한 방법 등의 일부 또는 전부를 채택하여 단리시킬 수가 있다. 이들 수단을 정당히 병용하여 배양 육즙으로부터 목적하는 순수한 물질의 모나클린 K를 단리시킬 수가 있다.
본 발명의 방법에 의해 제조되는 모나클린 K는 하기 특성을 갖는다.
1 : 물질의 색과 형상 : 무색 침상 결정
2 : 융 점 : 157-158℃
3. 원소 분석치 :
실측치 : C, 72.67% ; H, 9.13% ; O, 18.2%.
계산치 : C, 71.25% ; H, 8.97% ; O, 19.78%.
4. 분자량 : 404(질량분석).
5. 분자식 : C24H36O5.
6. 자외선 흡수 스펙트럼(메탄올) : 238㎛, 232㎛, 246㎛에서 최대흡수를 갖는다.
7. 용해성 : 메탄올, 에탄올, 아세톤, 초산에틸, 클로로포름 및 4염화탄소에 이용(易溶). 벤젠에 가용. n-헥산, 석유 에테르에 불용.
8. 증색 반응 : 실리카겔 박층 크로마토그래피상에서 50%(용적/용적) 황산으로 핑크색을 나타냄.
9. 박층크로마토그래피 : Rf치=0.45[Merck ＆ Co., Ltd 사제실리카겔 박층판 F254(두께0.25mm)을 사용하여 염화메틸렌-초산에틸(7 : 3 용적비)을 전개용매로 해서 3회의 다중(多重) 전개하고, 요오드 또는 50% (용적/용적) 황산으로 발색을 행한 경우].
본 화합물은 중성이고, 중성 또는 산성 수성 매질 중에 불용이나. 알카리를 첨가하여 산성 물질로 하면 물에 가용이 된다. 이 산성물질을 산의 pH범위에서 초산에틸 또는 클로로포름으로 추출할 수가 있고, 용매를 증발시켜 모나콜린 K로 전환시킬 수가 있다.
모나콜린 K의 생리활성을 하기의 생체 내 및 생체의 시험에 의해 분석 측정하여 이것을 이용함으로서 본 발명의 방법에 따른 모나콜린 K의 생성을 검정할 수가 있다.
토끼에 의한 생체 내 시험
본 시험에서는 모나콜린 K에 대해서 토끼 혈액 중의 콜레스테롤 농도의 감소능을 측정하였다. 시험 동물로서는 토끼의 중량이 모두 2.5 내지 3.0kg인 것을 사용하였다. 시험을 시작하는 데에 있어서 각 토끼의 귀 정맥으로부터 혈액을 채취하여, 혈청 중의 콜레스테롤 농도를 상법에 의해 측정하였다.
소정량의 모나콜린 K 또는 모나콜린 K를 함유하는 배양액을 1 내지 5일 동안 연속 경구 투여하여 투여한 후의 각 시간마다 혈청 중의 콜레스테롤 농도를 측정하였다. 모나콜린 K의 투여 전 후의 혈액 콜레스테롤 농도로부터 모나콜린 K 또는 모나콜린 K를 함유하는 배양액의 역가를 정량적으로 측정할 수가 있었다.
쥐 간장에 의한 생체의 실험
쥐 간장에서 생성되는 조(祖) 효소를 37℃에서 방사성 초산과 60분간 반응시켜 생합성된 생성물을 검화시키고, 방사성 콜레스테롤을 추출한 다음, 디기토닌으로 석출시켰다. 방사능을 측정하에 콜레스테롤 생성량을 산출하였다. 모나콜린K 또는 모나콜린 K를 함유하는 배양액을 반응 초기에 첨가시키는 것을 제외하고는 상기조작을 반복 행하여 콜레스테롤의 생합성량을 다시 측정함으로서 모나콜린 K의 억지효과를 정량적으로 산출하였다[Bricker씨의, 생화학지 247, 4914(1972)]. 본 시험은 본 발명의 배양방법에 따른 모나콜린 K의 생성을 빠르고 용이하게 검정할 수 있는 유용한 시험이다.
본 발명자들은 혈액 및 간장의 콜레스테롤 함량에 있어서의 모나콜린 K의 감소능을 여러가지의 생체 내 시험을 통하여 증명하였다.
쥐에 있어서의 혈중 및 간장 콜레스테롤 농도 감소시험 ;
시험 동물로서 체중이 약 300g인 위스타르 이마미치(Wistar Inanichi) 계통의 쥐들을 사용하여, 각시험을 일군(群) 5마리의 쥐들이 행하였다. 각 쥐들에 모나콜린 K를 10mg/kg 경구 또는 복강네 투여함과 동시에, Triton WR-1339(상품명, 혈중 콜레스테롤 함량을 상승시키는 작용이 있는 물질)을 400mg/kg정맥내 투여하였다. 경구 투여한 후 24시간 또는 복강내 투여한 후 14시간이 지난 뒤에 방혈 치사시켜 혈액, 간장을 채취하고, 상법에 의해 콜레스테롤 농도를 측정하였다. 그 결과, Triton WR-1339 만을 투여한 대조 동물의 경우에 비하여, 모나콜린 K를 경구 투여한 경우는 경구 투여한 혈중에서 22.4%, 복강내 투여한 혈중에서 23.9%, 간장에서 16.7% 씨 콜레스테롤 이 각각 저하되었다.
토끼에 있어서의 혈중 콜레스테롤 감소 시험 ;
시험 동물로서 체중이 2.7kg 내지 2.9kg인 토끼를 사용하였다. 각 토끼에 모나콜린 K 1mg/kg를 1일(아침과 저녁)에 2회씩 연속 5일 동안 경구 투여하였다. 투여하기 전과 투어한 3일 및 5일이 지난 뒤에 귀정맥으로부터 혈액을 채취하여 혈청중의 콜레스테롤 농도를 측정하였다. 그 결과, 모나콜린 K를 투여하기 전의 콜레스테롤 농도보다, 모나콜린 K를 투여한 3일 및 5일이 지난 뒤의 농도는 각각 15% 및 29%가 감소되었음이 발견되었다.
본 발명자들은 쥐 간장에서 나오는 효소와 초산과를 반응시키는 시험을 통하여, 모나콜린 K는 0.002㎍/ml의 농도에 의해 50%의 콜레스테롤 생합성 억지 효과가 있음을 발견하였다. 본 발명자들은 또 모나콜린 K가 HMG-CoA에 대하여 길항 효소인 HMG-CoA환원 효소를 억제한다는 사실을 발견해 내었다.
Ki 값은 5.3×10-10M이며, 이 Ki값은 억제정수, 보다 상세하게는 효소 억지제 착 화합물의 해리 정수로서, 효소의 농도와 억지제 농도와의 적(積)을 효소-억지제 착 화합물의 농도로서 나눈 값이다.
모나콜린 K는 콜레스테롤의 생합성에 우수한 억제 효과가 있을 뿐만 아니라, 독성도 극히 낮기 때문에 고 콜레스테롤 혈증치료에 아주 역가적으로 사용할 수가 있다. 보다 상세하게는 모나콜린 K의 급성 경구독성(LD50)은 체중 1kg에 대하여 1g 이상이다.
신나콜린 K는 경구적 또는 비 경구적으로 캅셀제, 정제주사제 또는 기타 공지의 제제형으로 하여 투여할 수가 있으나, 통상 경구제가 바람직하다. 용량은 환자의 나이와 체중 및 상태에 따라 다르나, 성인의 경우, 통상 일회량 또는 2 내지 3회 분할하여 0.5 내지 50mg을 투여한다. 그러나, 본 화합물은 독성이 적기 때문에 필요에 따라서는 전술한 상한치보다 더 많이 투여할 수도 있다.
하기에 실시예 들을 열거하여 본 발명을 보다 상세하게 서술하겠으며, 이들 실시예들 만으로 본 발명의 범위가 국한되는 것은 아니다.
[실시예 1]
용성 전분 1.5%(중량/용적), 글리세린 1.5%(중량/용적) 어분 2%(중량/용적) 및 탄산칼슘 0.2%(중량/용적)을 함유하는 배지(멸균 전 pH 7.4) 300l를 600l용 배양탱크에 주입시키고, 모나스쿠스 러버 SANK 18174 (FERM 4957) 균주를 접종하였다. 이 균주의 배양을 통기 속도 300l/분과 교반속도 190r.p.m 하의 27℃ 온도에서 120시간 동안 수행하였다. 배양액을 압축거르게로서 여과하여 여액 290l와 균체 60kg(습윤 중량)을 얻었다.
여액에 6N 염산을 첨가하여 pH를 4.0으로 조정한 다음, 여액을 초산에틸 400l로 추출하였다. 이 추출액을 농축하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조를 행한 다음, 증발 건고하여 유상물질 95g을 얻었다. 균체(여액보다 2.5배의 활성을 가짐)를 80%(용적/용적)의 수성메탄올(100l×2회)로 추출을 행하고, 추출액으로부터 메탄올을 증발시킨 다음, 잔류물을 초산에틸(100l×2회)로 추출을 행하였다. 이들 추출액을 합하고 농축시킨 후에 무수 황산나트륨 상에서 건조를 행한 다음, 증발 건고하여 유상물질 128g을 얻었다. 이것과 앞에서 채취한 배양 여액의 잔류물과를 합친 유상물(223g)을 벤젠으로 전처리한 실리카겔(Wakogel C-200)의 칼럼에 흡착시켰다. 이 칼럼을 벤젠 10l, 염화메틸렌-초산에틸(4:1의 용적 흔액) 180l의 순으로 전개하였다. 활성 획분을 증발건고하여 유상물질 30g은 얻은 다음, 핵산으로 전 처리한 실리카겔(Wakogel C-200)450g의 칼럼에 흡착시켰다.
이 칼럼을 헥산 2l, 핵산-아세톤(9:1의 용적 혼액) 30l 및 헥산-아세톤(4:1의 용적 혼액)30l의 순으로 전개하였다. 활성 획분을 농축하여 석출되는 결정을 여거하였다. 여액을 증발 건고하여 유상물질 4g을 헥산으로 전 처리를 행한 실리카겔(Wakogel C-200) 96g의 칼럼에 흡착시켰다. 이 칼럼은 헥산 500ml와 헥산-아세톤(9:1의 용적 혼액) 6l의 순으로 전개하였다. 이 활성 획분을 증발 건고하여 유상물질 521mg을 얻은 다음, 벤젠으로 전 처리한 실리카겔(Wakogel C-200) 30g의 칼럼에 흡착시켰다. 이 칼럼을 벤젠 10ml, 벤젠-초산에틸(95:5의 용적 비율 혼액) 100ml 및 벤젠-초산에틸(4:1의 용적 비율 혼액) 900ml의 순으로 전개하였다. 활성 획분을 농축하여 무색 결정은 얻은 다음, 이것을 수성 아세톤으로 부터 재 결정을 행하여 무색 침상형의 모나콜린 K 54mg을 얻었다.
[실시예 2 내지 8]
글루코오스 2%(중량/용적), 펩톤(교꾸토 상표명, 일본국 교꾸토 제약주식회사제품) 2%(중량/용적)및 옥수수 침지액 0.3%(중량/용적)을 함유하는 배지(멸균전 pH 6.0) 300l를 600l용 배양탱크에 주입시키고, 제 1표에 기재한 균주를 접종하였다. 이 균주의 배양을 통기속도 300l/분과 교반속도 190r.p.m 하의 27℃의 온도에서 96시간 동안 수행하였다. 배양 종료시에 1ml의 배양액을 채취한 다음, 초산에틸로 추출을 행하고, 추출액의 pH를 3 내지 4로 조절하였다. 이 추출액을 M. Kuroda, Y. Hazama-Shimada 및 A. Ende씨의 Biochim. and Biophys. Acta., 486, (1977) 254내지 259페이지의 255페이지("쥐 간장과 효모로부터 무세포계에 있어서의 시트리닌에 의한 스테롤 합성에 대한 억제 시험")과 A. Ende, M. Kuroda 및 Y. Tsujita씨의 항생물질지(일본국 항생물질연구소 발간물) 제29권 12호 (1976년 12월) 1346내지 1348페이지에 서술되어 있는 반응 혼액 0.2ml 중에 용해시키고, 콜레스테롤 생합성의 억제 백분율을 측정하여 배양액 1ml에 대한 억제활성 단위로서 제1표에 그 결과를 기재하였다. 콜레스테롤 생합성의 50% 억재율은 1단위/ml에 상당한다.
[제 1표]
Figure kpo00002
이들 결과로부터 본 발명에 다른 균주에 의해 아주 실질적인 양의 모나콜린 K가 생성됨을 알 수가 있다.
[실시예 9]
균주로서 모나스쿠스 앙카 SANK 10171을 사용하고, 배지의 시료를 96시간, 168시간, 216시간 및 288시간 배양한 후 채취한 것을 제외하고는 실시예 2내지 8에 서술한 조작을 반복 행하여, 실시예 2내지 8에서 사용한 시험에 의해 억제 활성을 측정한 결과, 각각 110, 100, 30 및 80단위/ml이었다.
[실시예 10 내지 17]
글루코오스 5%(중량/용적), 옥수수 침지액 0.5%(중량/용적), 펩톤(Kyokuto) 2%(중량/용적)및 염화암모늄 0.5%(중량/용적)을 함유하는 액상배지(멸균전 pH 5.5) 300l를 600l용 배양탱크에 주입시키고 제2표에 기재한 균주 중의 하나를 배지에 접종시킨 다음 120시간 동안 배양하였다. 이 배양조직을 기타 균주들에 대해서도 각각 별도로 행하였다.
배양을 종료시킨 후에 각 바재를 압축 거르게로 여과하여 제2표에 기재한 양의 습윤 균사 케이크와 여액을 얻었다. 이 여액에 6N 염산을 첨가하여 pH를 4.0으로 조정한 다음, 초산에틸 400l로 추출을 행하였다. 다음에 약 400l의 추출액을 감압하에 증발 농축시키고, 무수 황산나트륨 상에서 건조를 행하였다. 농축한 추출액을 또 농축시킨 다음, 증발 건고하여 제2표에 기재한 양의 유상물질을 "액으로부터의 추출양"으로서 얻었다.
또, 상당하는 여액보다 약 2 내지 3배의 활성을 갖는 균사케이크에 대해서는 80%(용적/용적) 수성 메탄올(100l×2회)로 추출을 행하고, 추출액을 농축한 다음 무수 황산나트륨 상에서 건조를 행하였다. 농축시킨 추출액을 또 농축시킨 다음 증발 건고하여 제2표에 기재한 양의 유상 물질을 "균사 케이크로부터의 추출양"으로서 얻었다.
각각의 여액과 균사 케이크로부터 얻은 유상물질을 합한 다음 실리카겔(벤젠으로 조제한 Wakogel C-200, 3kg)의 칼럼상에 흡착시키고, 벤젠 10l와 염화메틸렌-초산에틸(4:1의 용적 비율)혼액 180l의 순으로 전개하였다. 전개하여 얻어지는 활성 획분을 농축시키고, 증발 건고하여 제2표에 기재한 유상물질을 "획분 1"로서 얻었다. 이 유상물질을 340 내지 450g의 실리카겔(헥산으로 조제한 Wakogel C-200; 65mg의 유상물질에 대하여 1g의 실리카겔을 사용함)의 칼럼상에 흡착시키고, 칼럼을 헥산 1.5 내지 2l, 헥산-아세톤(9:1의 용적 비율) 혼액 23내지 30l 및 헥산-아세톤(4:1의 용적 비율) 혼액 23내지 30l의 순으로 전개를 행하였다.
전개하여 얻어지는 활성 획분을 농축하여 석출되는 결정을 여거하고, 잔류액을 또 농축시킨 다음 증발건고하여 제2표에 기재한양의 유상물질을 "획분2"로서 얻었다. 이 유상물질을 18내지 135g의 실리카겔(헥산으로 조제한 Wakogel C-200; 42mg의 유상물질에 대하여 1g의 실리카겔을 사용함)의 칼럼상에 흡착시키고, 칼럼을 헥산 100내지 750ml와 헥산-아세톤(9:1의 용적비율) 혼액 1.2 내지 9l의 순으로 전개하였다.
전개하여 얻어지는 활성 획분을 농축하고 증발 건고하여 제2표에 기재한 양의 유상물질을 "획분 3"으로서 얻었다. 이 유상물질을 6내지 45g의 실리카겔(벤젠으로 조제한 Wakogel C-200; 17mg의 유상물질에 대하여 1g의 실리카겔을 사용함)의 칼럼상에 흡착시키고, 칼럼을 벤젠 15내지 100ml, 벤젠-초산에틸(95:5의 용적 비율) 15내지 100ml 및 벤젠-초산에틸(4:1의 용적비율) 120내지 1,200ml의 순으로 전개하였다. 활성획분을 농축하여 제2표에 기재한 양의 모나콜린 K의 조결정을 얻고, 이것을 수성 아세톤에서 재결정하여 제2표에 기재한 양의 무색침상 결정을 얻었다.
[제 2표]
Figure kpo00003

Claims (1)

  1. 모나스쿠스 앙카(Monascus anka) SANK 10171 (IFO (6540), 모나스쿠스 파아푸르스(Monascus purpureus) SANK 10271 (IFO 4513), 모나스쿠스 러버(Monascus rubber) SANK 10671 (FERM 4958), 모나스쿠스 비트류우스(Monascus vitreus) SANK 10960(FERM 4960), 모나스쿠스 팍시이(Monascus paxii) SANK 11172(IFO 8201), 모나스쿠스 러버 SANK 13778 (FERM 4959), 모나스쿠스 러버 SANK 15177(FERM 4956) 또는 모나스쿠스 러버 SANK 18174 (FERM 4957)등의 모나스쿠스 속균중에서 설택되는 하나 이상의 모나스쿠스 균주를 배양하여 배지로 부터 모나콜린 K를 분리시키는 것을 특징으로 하는 모나콜린 K의 제조 방법.
KR1019800001707A 1979-05-11 1980-04-29 모나콜린 k의 제조방법 KR830002329B1 (ko)

Priority Applications (19)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP5792779A JPS55150898A (en) 1979-05-11 1979-05-11 Preparation of a new physiologically active substance mb-530b
DK73180A DK148807C (da) 1979-05-11 1980-02-20 Fremgangsmaade til fremstilling af monacolin k
CH136780A CH645891A5 (de) 1979-05-11 1980-02-20 Verfahren zur herstellung von monacolin k.
DE3051097A DE3051097C2 (ko) 1979-05-11 1980-02-20
DE19803006215 DE3006215A1 (de) 1979-05-11 1980-02-20 Verfahren zur herstellung von monacolin k
SE8001338A SE467975B (sv) 1979-05-11 1980-02-20 Framstaellning av monakolin k
GB8007240A GB2049664B (en) 1979-05-11 1980-03-04 Preparation of monacolin k
BE0/199871A BE882325A (fr) 1979-05-11 1980-03-19 Procede de preparation de la monacoline k.
AT0148280A AT372975B (de) 1979-05-11 1980-03-19 Verfahren zum herstellen von monacolin k
FR8006203A FR2456141A1 (fr) 1979-05-11 1980-03-20 Procede de preparation de la monacoline k
ES489751A ES489751A0 (es) 1979-05-11 1980-03-20 Un procedimiento para la preparacion de monacolina k
IE577/80A IE49749B1 (en) 1979-05-11 1980-03-20 Preparation of monacolin k
CA348,220A CA1129795A (en) 1979-05-11 1980-03-20 Preparation of monacolin k
AU56678/80A AU534647B2 (en) 1979-05-11 1980-03-21 Monacolin k
NL8001697A NL8001697A (nl) 1979-05-11 1980-03-21 Werkwijze voor de bereiding van manocolin k.
IT67445/80A IT1133075B (it) 1979-05-11 1980-03-21 Procedimento per la preparazione della monacolina k
US06/137,821 US4323648A (en) 1979-05-11 1980-04-04 Preparation of Monacolin K
KR1019800001707A KR830002329B1 (ko) 1979-05-11 1980-04-29 모나콜린 k의 제조방법
SE8701483A SE468482B (sv) 1979-05-11 1987-04-09 Framstaellning av monakolin k

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP5792779A JPS55150898A (en) 1979-05-11 1979-05-11 Preparation of a new physiologically active substance mb-530b
KR1019800001707A KR830002329B1 (ko) 1979-05-11 1980-04-29 모나콜린 k의 제조방법

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR830002875A KR830002875A (ko) 1983-05-31
KR830002329B1 true KR830002329B1 (ko) 1983-10-22

Family

ID=26399012

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1019800001707A KR830002329B1 (ko) 1979-05-11 1980-04-29 모나콜린 k의 제조방법

Country Status (17)

Country Link
US (1) US4323648A (ko)
JP (1) JPS55150898A (ko)
KR (1) KR830002329B1 (ko)
AT (1) AT372975B (ko)
AU (1) AU534647B2 (ko)
BE (1) BE882325A (ko)
CA (1) CA1129795A (ko)
CH (1) CH645891A5 (ko)
DE (2) DE3006215A1 (ko)
DK (1) DK148807C (ko)
ES (1) ES489751A0 (ko)
FR (1) FR2456141A1 (ko)
GB (1) GB2049664B (ko)
IE (1) IE49749B1 (ko)
IT (1) IT1133075B (ko)
NL (1) NL8001697A (ko)
SE (2) SE467975B (ko)

Families Citing this family (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5925599B2 (ja) * 1979-02-20 1984-06-19 三共株式会社 新生理活性物質モナコリンｋおよびその製造法
ES8105781A1 (es) * 1979-07-27 1981-06-16 Sankyo Co Un procedimiento para la preparacion de sales y esteres, de monacolina k utiles como agentes antitlipercolesteremicos.
US4444784A (en) * 1980-08-05 1984-04-24 Merck & Co., Inc. Antihypercholesterolemic compounds
US4351844A (en) * 1980-02-04 1982-09-28 Merck & Co., Inc. Hypocholesterolemic hydrogenation products and process of preparation
JPS56142236A (en) 1980-04-08 1981-11-06 Sankyo Co Ltd Ml-236a and mb-530a derivative
MX7065E (es) * 1980-06-06 1987-04-10 Sankyo Co Un procedimiento microbiologico para preparar derivados de ml-236b
US4343814A (en) * 1980-11-17 1982-08-10 Merck & Co., Inc. Hypocholesterolemic fermentation products
JPS5835144A (ja) * 1981-08-27 1983-03-01 Sankyo Co Ltd Ｍｂ−５３０ｂ誘導体およびその製造法
JPS5855443A (ja) * 1981-09-25 1983-04-01 Sankyo Co Ltd オクタヒドロナフタリン誘導体およびその製造法
US4678806A (en) * 1986-09-02 1987-07-07 Merck & Co., Inc. Prodrugs of antihypercholesterolemic compounds
US4865977A (en) * 1987-03-13 1989-09-12 Shell Oil Company Increasing monascus pigment production
DE3801588A1 (de) * 1988-01-21 1989-08-10 Hoechst Ag Verfahren zur herstellung von farbstoffen und/oder wirkstoffen in der wasserarmen, sterilen wirbelschicht
KR960004032B1 (ko) * 1992-10-26 1996-03-25 롯데제과주식회사 신균주 모나스커스 앵카 732y3(kccm10014)
HU210867B (en) * 1992-11-04 1995-10-30 Biogal Gyogyszergyar Method for extraction and purification of mevinolin from culture medium
BG61613B1 (bg) * 1994-06-24 1998-01-30 Анна Куюмджиева Щам моnаsсus рurрurеus-продуцент на пигмент и биоактивни продукти
US7238348B2 (en) 1996-09-30 2007-07-03 Beijing Peking University Wbl Corporation Ltd. Method of treatment of osteoporosis with compositions of red rice fermentation products
US6046022A (en) * 1996-09-30 2000-04-04 Peking University Methods and compositions employing red rice fermentation products
US6258361B1 (en) 1996-10-21 2001-07-10 Akio Yoshihara Agent for recovering hematopoietic function and processed food both containing treated product of peanut seed coats
US6391583B1 (en) 1998-12-18 2002-05-21 Wisconsin Alumni Research Foundation Method of producing antihypercholesterolemic agents
US20020197274A1 (en) * 2001-04-19 2002-12-26 Ming-Shi Shiao Lithospermic acid-containing composition
WO2003020218A2 (en) * 2001-08-30 2003-03-13 Taipei-Veterans General Hospital Salvianolic acid b
KR100379075B1 (en) * 2002-03-07 2003-04-08 Jinis Biopharmaceuticals Co Method for producing low cholesterol animal food product and food product therefrom
TWI262949B (en) * 2002-08-15 2006-10-01 Food Industry Res & Dev Inst Monascus purpureus mutants and their use in preparing fermentation products having hypotensive activity
DE102004062386B4 (de) * 2003-12-24 2010-06-24 Food Industry Research And Development Institute Monacolin K-Biosynthese-Gene
KR100710500B1 (ko) * 2005-05-18 2007-04-24 고려대학교 산학협력단 홍국균을 이용한 모나콜린 ｋ 생산방법
US20120171285A1 (en) * 2007-06-01 2012-07-05 Opheim Joar A Substances for reducing occurrence of major cardiac events comprising omega-3 polyunsaturated fatty acid or derivatives thereof and high-monacolin k content red yeast rice extract
US20120172425A1 (en) * 2007-06-01 2012-07-05 Opheim Joar A Red yeast rice extract high in monacolin k content
US20100119600A1 (en) 2007-06-01 2010-05-13 Joar Opheim Substances for reducing occurrence of major cardiac events comprising red yeast rice extract and omega-3 polyunsaturated fatty acid or derivative thereof
US20120171311A1 (en) * 2007-06-01 2012-07-05 Opheim Joar A Substances for reducing occurrence of major cardiac events comprising epa or derivatives thereof, optionally, dha or derivatives thereof and monacolin k
CN101317660B (zh) * 2008-06-23 2012-10-24 谢键泓 一种提高红曲洛伐他汀在水中溶解度的方法及应用
CN102625705B (zh) * 2009-04-08 2015-05-06 南洋理工学院 包含他汀类药物的植物提取物及其制备技术和用途
CN116083252B (zh) * 2023-04-12 2023-06-27 北京一品堂医药科技有限公司 一种高产降脂天然莫拉可林k的红曲米发酵制备方法
CN116925926B (zh) * 2023-07-14 2024-02-02 中国农业大学 富硒红色红曲霉发酵生产洛伐他汀的方法

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5612114B2 (ko) * 1974-06-07 1981-03-18
JPS5925599B2 (ja) * 1979-02-20 1984-06-19 三共株式会社 新生理活性物質モナコリンｋおよびその製造法
IL60219A (en) * 1979-06-15 1985-05-31 Merck & Co Inc Hypocholesteremic fermentation products of the hmg-coa reductase inhibitor type,their preparation and pharmaceutical compositions containing them

Also Published As

Publication number Publication date
IT1133075B (it) 1986-07-09
DE3006215A1 (de) 1980-11-27
IE800577L (en) 1980-11-11
SE468482B (sv) 1993-01-25
IT8067445A0 (it) 1980-03-21
IE49749B1 (en) 1985-12-11
FR2456141B1 (ko) 1983-11-18
DE3051097C2 (ko) 1990-02-08
FR2456141A1 (fr) 1980-12-05
ES8104409A1 (es) 1981-04-16
CH645891A5 (de) 1984-10-31
DK148807B (da) 1985-10-07
BE882325A (fr) 1980-09-19
AT372975B (de) 1983-12-12
NL8001697A (nl) 1980-11-13
SE8701483D0 (sv) 1987-04-09
AU534647B2 (en) 1984-02-09
DE3006215C2 (ko) 1989-01-05
CA1129795A (en) 1982-08-17
SE8701483L (sv) 1987-04-09
KR830002875A (ko) 1983-05-31
ATA148280A (de) 1983-04-15
AU5667880A (en) 1980-11-13
US4323648A (en) 1982-04-06
ES489751A0 (es) 1981-04-16
GB2049664B (en) 1983-01-12
DK148807C (da) 1986-04-28
GB2049664A (en) 1980-12-31
DK73180A (da) 1980-11-12
SE467975B (sv) 1992-10-12
SE8001338L (sv) 1980-11-12
JPS55150898A (en) 1980-11-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR830002329B1 (ko) 모나콜린 k의 제조방법
US3983140A (en) Physiologically active substances
FI67231C (fi) Foerfarande foer framstaellning av en hypokolesteremisk foerening
CA1129794A (en) Antihypercholesteraemic agent, monacolin k, and its preparation
US4358602A (en) Ebelactones and production thereof
SE445828B (sv) Salter och estrar av monakolin k till anvendning sasom antihyperkolesterolemiska medel
KR100230961B1 (ko) 신규한 아미노올리고당 유도체 및 그의 제조방법
JPH0368570A (ja) 抗真菌薬
US4780311A (en) Antihypercholesterolemic tri-yne carbonates
JP3026864B2 (ja) 新規セスキテルペン誘導体
CA2145204A1 (en) Antibiotic agents
JPH04368388A (ja) ダイネマイシンｃ抗腫瘍抗生物質
EP0629184A1 (en) TETRALIN DERIVATIVES AS HMG-CoA REDUCTASE INHIBITORS
JPS6113798B2 (ko)
JP2815166B2 (ja) 新規抗生物質ｍｋ１６８８物質ならびにその製造法
JPH07278041A (ja) 抗腫瘍性物質ｂｅ−２４８１１及びその製造法
JP2928626B2 (ja) 血小板活性化因子拮抗物質フォマクチンｂ
JP2716728B2 (ja) 新規微生物並びに９−ケト型１６員環マクロライド抗生物質の製法
JPH04243894A (ja) 新規ｑ−６４０２化合物およびその製造法
JPH0680607A (ja) マルブラニシン
JPH0517484A (ja) 抗腫瘍性物質ｂｅ−２２１７９
JP2001055386A (ja) 抗生物質ツベラクトマイシンｂ、ｄおよびｅとその製造法
JPH0479639B2 (ko)
JPH08165286A (ja) 抗生物質テトロマイシンａおよびｂとその製造法
JPH0359911B2 (ko)