SE468482B - Framstaellning av monakolin k - Google Patents

Description

468 482 2 mikroorganismer och beskrives nedan. Återstående mikroorganismer är kända och har tidigare beskrivits. Alla är lätt tillgängliga från IFO eller FERM (The Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology, Ministry of International Trade and Industry, Japan) såsom angavs av tillträdes- numren givna inom parentesema.

De mikrobiologiska egenskaperna hos de nya mikroorganismerna är följande: Monascus ruber SANK 15177 fiFERM 49562 Denna stam isolerades från jord vid Tukimino, Yamoto-city, Kanagawa- prefecture, Japan och deponerades den 27 april 1979 under tillträdesnumret 4956 i angivna Fermentation Research Institute.

Stammen växer väl på potatis-glukos-agar-medium vid 25°C och alstrar ett lösligt färgande material med en gulaktigt-brun till rödaktigt-brun färgi mediet.

Det bildar några cleistothecia på grundskiktet av hyfer.

På havremjölsagarmedium alstrar den ett blekt brunt färgande material och växer väl. Bildning av cleistothecia är god och cleistothecia är sfäriska med diameter på 30-60 um och bildade på korta stjälkar. Dessa stjälkar är nästan färglösa och grenade och av storleken 25-60 x 3,5-5,0 um. Sporsäckama är försvinnande små och sålunda svåra att observera. Askosporema är färglösa och ellipsoida och deras dimensioner är 4,5-6,5 x 4,0-5,0 um, deras ytor är jämna.

Konidiema är grenade basipetalt och är av storleken 7 ,0-10,0 x 6,0-10,0 um.

Deras vävnader är sönderslitna.

Fastän stammen kommer att växa vid 37°C, observeras bästa tillväxten mellan 23 och 30°C.

Monascus Ruber 10671 QFERM 49582 Denna stam isolerades från jord vid Shinagawa-ku, Tokyo, Japan och deponerades den 27 april 1979 i angivna Fermentation Research Institute under tillträdesnumret 4958.

Tillväxten av potatis-glukos-agar- och havremjölsagar-media är liknande den hos stam SANK 15177, med undantag av att det alstrade lösliga färgande materialet är mörkrött. Diametern av cleistothecia är 30-80 um och stjälkarnas dimensioner är 30-70 x 3,0-5,0 um. Sporsäckar observeras inte. Askosporema är färglösa och ellipsoida och deras dimensioner är 4,5-6,5 x 4,0-5,0 um. Konidierna 10 15 20 25 30 3 468 482 är färglösa och pyramidformade eller äggformiga och deras dimensioner är 6,0-10,0 x 6,0-8,5 um.

Monascus ruber SANK 13778 (FERM 49592 Denna stam isolerades från jord vid Inawashiro-cho, Nagata, Yama-gun, Fukushima-prefecture, Japan och deponerades den 27 april 1979 under tillträdes- numret 4959 i angivna Fermentation Research Institute.

Tillväxt på potatis-g1ukos-agar- och havremj ölsagar-media är liknande den fór stam SAN K 15177, med undantag av att det alstrade lösliga färgande materialet har en blekt rödaktigt-brun till rödaktigt-brun färg, Cleistothecia har diametern 35-75 um och stjälkarna är 30-70 x 3,5-5,0 um. Sporsäckar observeras inte. Askosporerna är färglösa och ellipsoida och deras dimensioner är 4,5-6,0 x 4,0-5,0 um; deras ytor är jämna. Konidiernas dimensioner är 7,0- 10,0 x 6,0-10,0 um.

Monascus ruber SANK 18174 (FERM 4957) Denna stam isolerades från jord vid Shiribeshi Shicho, Kokkaido-prefecture, Japan och deponerades den 27 april 1979, i angivna Fermentation Research Institute under tillträdesnumret 4957.

Tillväxt på potatis-glukos-agar- och havremj ölsagar-media är liknande den för stam SANK 15177, med undantag av att det alstrade färgande materialet är blekt skärt. Cleistothecia har diametern 20-70 um och stjälkarnas dimensioner är 20-60 x 3,0-5,0 um. Sporsäckar observeras inte. Askosporerna är färglösa och ellipsoida och deras dimensioner är 5,0-7,0 x 4,0-5,5 um; deras ytor jämna.

Konidierna är förenade tillsammans basipetalt och är färglösa och de flesta av dem är pyramidformade och av dimensionerna 6,0-9,5 x 6,0-10,0 um.

Grundat på observationerna avseende deras kännetecken, som rapporterats ovan, identifierades alla dessa mikroorganismer såsom stammar av Monascus ruber van Tieghem.

Mikrobiologiska egenskaper hos Monascus ruber har rapporterats i följande litteratur: Takada, Transactions of the Micological Society of Japan, Q, 125-130 (1969) (Materials for the Fungus Flora of J apàn (7)) och van Tieghem, Bull. Soc.

Botan. France, ål, 227 (1884).

Stammens askosporalstring har rapporterats av Cole et al i the Canadian Journal of Botany, _46, 987 (1968), "Conidium ontogeny in Hyphomycetas. The 10 15 20 25 30 468 482 4 imperfect state of Monascus ruber and its meristem arthrospores".

Monakolin K kan alstras genom att odla den valda mikroorganismen i en odlingslösning under aeroba förhållanden under användning av samma metoder som är välkända för fackmannen vid odling av svamp och andra mikroorganis- mer. Exempelvis kan den valda stammen av Monascus först odlas på ett lämpligt medium och sedan kan de alstrade mikroorganismerna uppsamlas och inympas och odlas på ett annat odlingsmedium för att alstra önskat monakolin K; använt odlingsmedium för mångfaldigandet av mikroorganismen och alstringsmediet, som användes för alstring av monakolin K, kan vara lika eller olika. Vilket odlingsmedium som helst, som är välkänt för fackmannen för odling av svamp, kan användas, förutsatt att det innehåller, såsom är välkänt, de nödvändiga näringsmaterialen, speciellt en assimilerbar kolkälla och en assimilerbar kväve- källa. Exempel på lämpliga källor av assimilerbart kol är glukos, maltos, dextrin, stärkelse, laktos, sackaros och glycerol. Av dessa källor är glukos, glycerol och stärkelse speciellt lämpliga för alstring av monakolin K. Exempel på lämpliga källor av assimilerbart kväve är pepton, köttextrakt, jäst, jästextrakt, sojabön- mjöl, jordnötsmjöl, majsstöpvätska, riskli och oorganiska kvävekällor. Av dessa kvävekällor är pepton speciellt lämpligt. När man alstrar monakolin K kan ett oorganiskt salt och/eller ett metallsalt, om så är nödvändigt, sättas till odlings- mediet. Dessutom kan, om så är nödvändigt, en mindre mängd av en tung metall också tillsättas.

Mikroorganismen odlas lämpligen under aeroba förhållanden under användning av odlingsmetoder välkända för fackmannen, t.ex. fast odling, skakodling eller odling under luftning och omröring. Mikroorganismen kommer att växa över ett vitt temperaturoniråde, tex. från 7 till 40°C, men, speciellt för alstring av monakolin K, ligger den mera lämpliga odlingstemperaturen inom området från 20 till 30°C.

Under odling av mikroorganismenkan alstringen av monakolin K registre- ras genom provtagning av odlingsmediet och mätning av den fysiologiska verkan av monakolin Ki odlingsmediet genom försöken, som beskrives härefter. Odling kan sedan fortsättas, tills en väsentlig ackumulering av monakolin K har uppnåtts i odlingsmediet, vid vilken tid monakolin K sedan kan isoleras och utvinnas från odlingsmediet och mikroorganismens vävnader genom vilken 10 15 20 25 30 5 468 482 lämplig kombination av isolationsmetoder som helst, som valts under hänsyn till dess fysikaliska och kemiska egenskaper. Exempelvis kan vilken som helst eller alla av följande isolationsmetoder användas: extraktion av vätskan från odlings- lösningen med ett hydrofilt lösningsmedel (såsom dietyleter, etylacetat, kloroform eller bensen); extraktion av organismen med ett hydrofilt lösningsmedel (såsom aceton eller en 'alkohol); koncentration, t.ex. genom avdunstning av eventuellt något eller en del av lösningsmediet under reducerat tryck; upplösning i ett mera polärt lösningsmedel (såsom aceton eller en alkohol); borttagande av orenheter med ett mindre polärt lösningsmedel (såsom petroleumeter eller hexan); gelfiltre- ring genom en kolonn av material såsom Sephadex® (ett material tillgängligt från Pharmacia, Co. Limited, U.S.A.); absorptiv kromatografi med aktivt kol eller silikagel; och andra liknande metoder. Genom att använda en lämplig kombina- tion av dessa metoder kan önskat monakolin K isoleras från odlingslösningen såsom en ren substans.

Monakolin K, som alstrats genom förfarandet enligt föreliggande uppfin- ning, kännetecknas av följande egenskaper: Färglösa nålar. 157-158°C. 1. Färg och form: 2. Smältpunkt: 3. Elementaranalys: C, 72,67%; H, 9,13%; C, 71,25%; H, 8,97%; Molekylvikt: 404 (genom masspektrometri).

Molekylformel: C24H36O5. 6. Ultraviolett absorptionsspektrum (metanol): maxima vid 232, 238 och 246 um. 7. Löslighet: Lätt löslig i metanol, etanol, aceton, etylacetat, kloro- form och koltetraklorid.

O, 18,2% O, 19,78% Funnet: Beräknat: Löslig i bensen.

Olösligi hexan och petroleumeter.

Skär färg med 50% volym/volym svavelsyra på en tunnskiktskromatograf på silikagel. 8. Färgreaktion: 10 15 20 25 30 468 482 6 9. Tunnskiktskromatografi: Rf värde = 0,45 (silikagel F254 (Merck & Co., Ltd) 0,25 mm tjock, multipel (X3) framkallning med en 7:3 volymblandning av metylenklorid och etylacetat och behandlad med jod eller 50% volym/volym svavelsyra).

Föreningen är neutral och är olöslig i neutralt eller surt vattenhaltiga media. Den omvandlas emellertid till en sur substans genom behandling med alkali och denna sura substans är löslig i vatten. Den sura substansen kan extraheras med etylacetat eller kloroform vid sura pH-värden och kommer att återgå till monakolin K vid avdunstning av lösningsmedlet.

Den fysiologiska verkan av monakolin K kan prövas och bestämmas kvantitativt genom följande in vivo och in vitro försök, som kan användas för att registrera alstringen av monakolin K under loppet av förfarandet enligt före- liggande uppfinning.

In vivo försök med kaniner I detta försök mätes förmågan av monakolin K att minska kolesterol- halterna i kaninblod. Använda djur skall vardera väga från 2,5 till 3,0 kg. Vid början av försöken uppsamlas blod från en ven i ett öra av varje kanin och kolesterolhalten i blodserumet mätes med en vanlig metod. En förutbestämd kvantitet av monakolin K eller av en monakolin K-innehållande odlingslösning administreras sedan oralt kontinuerligt under från 1 till 5 dagar och kolesterol- halten i blodserumet mätes vid stadier efter administreringen. Styrkan av monakolin K eller monakolin K-innehållande odlingsmedium kan bestämmas kvantitativt från kolesterolhalterna i blodet, vilka erhålles före och efter admini- streringen av monakolin K.

In vitro försök med råttlever Råenzym från råttlever bringas att reagera med radioaktiv ättiksyra i 60 min vid 37°C. Sålunda biosyntetiserat radioaktivt kolesterol förtvålas och utfälles sedan med digitonin. Radioaktiviteten mätes för att bestämma mängden av alstrat kolesterol. Förfarandet upprepas med undantag av att monakolin K eller en monakolin K-innehållande odlingslösning tillsättes vid början av reaktionen och mängden av biosyntetiserat kolesterol bestämmes igen för att sålunda ge en 'x 10 15 20 25 30 7 468 482 kvantitativ mätning av den hämmande verkan av monakolin K [Bricker et al, The Journal of Biological Chemistry, 247, 4914 (1972)]. Detta försök är speciellt användbart såsom ett snabbt och kvickt sätt att registrera monakolin K-alstring under odlingsförfarandet enligt föreliggande uppfinning.

Förmågan hos, monakolin K att sänka kolesterolhalterna i blod och lever har även visats 'genom olika in vivo försök.

Minskning av kolesterolhalter i blod och lever hos råttor Använda djur var råttor av Wistar Imamichi-stammen, vardera med en kroppsvikt av ca 300 g. Försöken utfördes på grupper av råttor, varje grupp bestående av 5 djur. Varje djur injicerades intravenöst med 400 mg/kg Triton WR- 1339® (att material kant att öka bladkaiaataralhaitan), andar dat att man samtidigt administrerar 10 mg/kg monakolin K antingen oralt eller intraperi- tonealt. 20 tim efter oral administrering eller 14 tim efter intraperitoneal administrering dödades râttorna genom förblödning och blodet och levrarna uppsamlades och deras kolesterolhalter bestämdes på sedvanligt sätt. Såsom ett resultat fastställdes det att blodkolesterolhalterna hade minskats med 22,4% vid fallet av oral administrering och 23,9% vid fallet av intraperitoneal administre- ring jämfört med kontrollgruppen av djur till vilka Triton WR-1339® ensamt hade administrerats. Leverkolesterolhalterna hade minskats med 16,7% i djuren, till vilka monakolin K hade administrerats oralt.

Minskning av kolesterolhalter i blod hos kaniner Använda försöksdjur var kaniner med en kroppsvikt från 2,7 till 2,9 kg.

Varje kanin gavs oralt 1 mg/kg monakolin K två gånger om dagen (morgon och kväll) kontinuerligt under 5 dagar. Innan administreringen och 3 och 5 dagar efter administreringen uppsamlades blod från en ven i örat och kolesterolhalterna i blodserumet bestämdes. Såsom ett resultat visade det sig att kolesterolhaltema 3 och 5 dagar efter administreringen av monakolin K var 15% resp. 29% lägre än halten före administreringen av monakolin K.

Det har visat sig, att monakolin K ger 50% hämning av kolesterolbiosyn- tesen vid en koncentration av 0,002 um/ml genom försöket, vari ättiksyra bringas att reagera med enzym från råttlever. Det har visat sig, att monakolin K hämmar HMG-CoA reduktas, som är det hastighetskontrollerande enzymeti kolesterolbio- syntesen, och att det konkurrerande hämmar substratet HMG-CoA och har ett 10 15 20 25 30 468 482 8 Kí-värde av 5,3 x 10'10M. Ki-värdet är hämningskonstanten och är speciellt dissociationskonstanten av enzym-inhibitorkomplexet. Värdet erhålles genom produkten av koncentrationerna av enzym och av inhibitor delat med koncentra- tionen av enzym-inhíbitorkomplexet.

Monakolín K har inte endast en värdefull hämmande verkan på biosyn- tesen av kolesterol utan har även en mycket låg toxicitet, vilket gör dess använd- ning för behandling av hyperkolesterolemi potentiellt mycket attraktiv. Särskilt är den akuta orala toxiciteten (LD5O) av monakolin K hos mus 1 g/kg kroppsvikt eller mer.

Monakolín K kan administreras oralt eller parenteralt i form av en kapsel, tablett, injicerbart preparat eller vilken annan känd beredning som helst, fastän man normalt föredrar att administrera det oralt. Dosen kommer att variera beroende på patientens ålder och kroppsvikt och tillståndets allvar men i allmänhet skall den dagliga dosen för en vuxen vara från 0,5 till 50 mg, antingen såsom en enda dos eller i 2 eller 3 delade doser. Med hänsyn till föreningens låga toxicitet kan emellertid högre doser användas, om så erfordras.

Föreliggande uppfinning belyses vidare genom följande inte begränsande exempel.

Exempel 1 300 liter av ett odlingsmedium med ett pH av 7,4 före sterilisering och som innehåller 1,5% vikt/volym löslig stärkelse, 1,5% vikt/volym glycerol, 2% vikt/- volym fiskmjöl och 0,2% vikt/volym kalciumkarbonat sattes till ett 600 liters jäsningskar och ympades med organismen Monascus ruber SAN K 18174 (FERM 4957). Odling av organismen utfördes i 120 tim vid 27°C med en luftningshastig- het av 300 liter per minut och omröring med 190 varv per minut. Odlingslös- ningen filtrerades i en filterpress för att ge 290 liter filtrat och 60 kg (våt vikt) av organismen.

Filtratets pH reglerades till 4,0 genom tillsats av 6N saltsyra och sedan extraherades filtratet med 400 liter etylacetat. Detta extrakt koncentrerades, torkades över vattenfritt natriumsulfat och indunstades sedan till torrhet för att ge 95 g av en oljig produkt. Organismen (med 2,5 gånger så mycket aktivitet som filtratet) extraherades två gånger, var gång med 100 liter av 80% volym/volym v» 'I 10 15 20 25 30 9 468 482 vattenhaltig metanol. Metanolen avdunstades från extraktet och återstoden extraherades två gånger, var gång med 100 liter etylacetat. De kombinerade extrakten koncentrerades, torkades över vattenfritt natríumsulfat och indunsta- des sedan till torrhet för att ge 128 g av en oljig produkt. Denna kombinerades med återstoden från filtratet av odlingslösningen.

Erhållna 223 g av kombinerad oljig produkt adsorberades i en kolonn, som innehöll 3 kg silikagel ("Wakogel C-200"), som tidigare hade behandlats med bensen. Kolonnen eluerades i följd med 10 liter bensen och sedan med 180 liter av en 4:1 volymblandning av metylenklorid och etylacetat. Den aktiva fraktionen indunstades till torrhet för att ge 30 g av en oljig produkt, som sedan adsorbera- des i en kolonn, som innehöll 450 g silikagel ("Wakogel C-200"), som tidigare hade behandlats med hexan.

Kolonnen eluerades i följd med 2 liter hexan, 30 liter av en 9:1 volymbland- ning av hexan och aceton och 30 liter av en 4:1 volymblandning av hexan och aceton. Den aktiva fraktionen koncentrerades och fällningen avfiltrerades.

Filtratet indunstades till torrhet för att ge 4 g av en oljig produkt, som adsorbera- des i en kolonn, som innehöll 96 g silikagel ("Wakogel C-200"), som tidigare hade behandlats med hexan. Kolonnen eluerades i följd med 500 ml hexan och 6 liter av en 9:1 volymblandning av hexan och aceton. Den aktiva fraktionen indunsta- des till torrhet för att ge 521 mg av en oljig produkt, som adsorberades i en kolonn, som innehöll 30 g silikagel ("Wakogel C-200"), som tidigare hade behand- lats med hexan. Kolonnen eluerades i följd med 10 ml bensen, 100 ml av en 95:5 volymblandning av bensen och etylacetat och 900 ml av en 4:1 volymblandning av bensen och etylacetat. Den aktiva fraktionen koncentrerades för att ge 92 mg färglösa kristaller, som, på omkristallisation från vattenhaltig aceton, gav 54 mg monakolin Ki form av färglösa nålar.

Exempel 2-8 300 liter av ett odlingsmedium med ett pH av 6,0 före sterilisering och som innehöll 2% vikt/volym glukos, 2% vikt/volym pepton (Kyokuto sort, tillgänglig från Kyokuto Seiyaku KK, Japan) och 0,3% vikt/volym majsstöpvätska sattes till ett 600 liters jäsningskar och ympades med en av mikroorganismerna, som uppräknas i följande Tabell 1. Odling av mikroorganismen fortsattes i 96 tim vid 10 15 20 25 30 35 468 482 10 27° C med en luftningshastighet av 300 liter/min och omröring med 190 varv/min.

Vid slutet av denna tid borttogs sedan 1 ml av odlingslösningen och extraherades med etylacetat, som reglerats till ett pH-värde av 3-4. Extraktet togs sedan upp i 0,2 ml av reaktionsblandningen, som beskrives av M. Kuroda, Y.

Hazama-Shimada och A. Endo i Biochim. and Biophys. Acta., _4_8§ (1977), sid. 254- 259 vid 255 ("Inhibition of Sterol Synthesis by Citrinin in a Cell-free System from Rat Liver and Yeast") och A. Endo. M. Kuroda och Y. Tsujita i The Journal of Antibiotics, publicerad av The Japanese Antibiotics Research Association, gå nr 12 (december 1976), sid. 1346-1348 och procent hämning av kolesterolbiosyntesen bestämdes. Resultaten rapporteras i Tabell 1 såsom aktiva hämningsenheter per ml odlingslösning, varvid 50% hämning av kolesterolbiosyntesen är ekvivalent med 1 enhet/Inl.

TELE Ex. Hämningsverkan nr. Organism enheter/ml 2 Monascus puggurous SANK 10271 120 3 Monascus ruber SANK 10671 120 4 Monascus vitreus SAN K 10960 150 5 Monascus pgi SANK 11172 120 6 Monascus ruber SANK 13778 440 7 Monascus ruber SANK 15177 2400 8 Monascus Lube_r SANK 18174 20000 Dessa resultat visar alstringen av mycket väsentliga kvantiteter av monakolin K genom mikroorganismerna i föreliggande uppfinning. (f) 10 15 20 25 30 H 468 482 Exempel 9 Förfarandet, som beskrives i Exempel 2-8, upprepades med undantag av att använd mikroorganism var Monascus anka SANK 10171 och proven av odlingsmediet borttogs efter 96 tim, 168 tim, 216 tim och 288 timmars odling.

Hämningsaktiviteten, mätt genom samma test som användes i Exempel 2-8, var 110, 100, 30 resp. 80 enheter/ml.

Exempel 10-17 300 liter av ett vätskeformigt odingsmedium med ett pH-värde av 5,5 före sterilisering och som innehöll 5% vikt/volym glukos, 0,5% vikt/volym majsstöp- vätska, 2% vikt/volym pepton (Kyokuto) och 0,5% vikt/volym ammoniumklorid sattes till en 600 liters odlingstank. En av stammarna uppräknade i Tabell 2 ympades sedan i mediet och odlades i 120 tim. Detta upprepades separat för var och en av de andra stammarna.

Efter odling filtrerades varje medium genom en filterpress för att ge en våt myceliekaka i den mängd, som visas i Tabell 2, och ett filtrat. Filtratets pH-värde reglerades till 4,0 genom tillsats av 6N saltsyra, varefier det extraherades med 400 liter etylacetat. Extraktet, som uppmättes till ca 400 liter, koncentrerades sedan genom indunstning under reducerat tryck och torkades över vattenfritt natriumsulfat. Det kondenserade extraktet kondenserades ytterligare och indunstades sedan till torrhet for att ge en olja i en mängd, som visas i Tabell 2, såsom "mängd extrakt från vätska".

Under tiden extraherades två gånger myceliekakan, som hade ca 2-3 gångers verkan av motsvarande filtrat, var gång med 100 liter av 80% volym/- volym vattenhaltig metanol. Extraktet kondenserades och torkades över vatten- fritt natriumsulfat. Det kondenserade extraktet kondenserades ytterligare och indunstades sedan till torrhet for att ge en olja i en mängd, som visas i Tabell 2 såsom "mängd extrakt från myceliekaka".

Oljorna, som härstammar från respektive filtrat och myceliekaka kombine- rades och adsorberades sedan på en kolonn av silikagel (3 kg "Wakogel C-200", framställd med bensen), som eluerades i tur och ordning med 10 liter bensen och 180 liter av en 4:1 volymblandning av metylenklorid och etylacetat. Den aktiva fraktionen från elueringen kondenserades och indunstades till torrhet för att ge 10 15 20 468 482 12 en olja i den mängd, som visas i Tabell 2 under "fraktion 1". Denna olja adsorbe- rades på en kolonn, som innehöll 340 till 540 g silikagel ("Wakogel C-200", tidigare framställd med hexan), varvid mängden silikagel motsvarade 1 g per 65 mg olja. Kolonnen eluerades sedan i tur och ordning med 1,5-2 liter hexan, 23-30 liter av en 9:1 volymblandning av hexan och aceton och 23-30 liter av en 4:1 volymblandning av hexan och aceton.

Den aktiva fraktionen från denna eluering kondenserades och kristallerna, som utfälldes, avfiltrerades. Erhållen återstod kondenserades ytterligare och indunstades sedan till torrhet for att ge en olja i den mängd, som visas i Tabell 2 under "fraktion 2". Denna fraktion adsorberades på en kolonn, som innehöll 18- 135 g silikagel ("Wakogel C-200", tidigare framställd med hexan), varvid mängden silikagel motsvarade 1 g per 42 mg olja. Kolonnen eluerades sedan i tur och ordning med 100-750 ml hexan och 1,2-9 liter av en 9:1 volymblandning av hexan och aceton. Den aktiva fraktionen från denna eluering kondenserades och indunstades till torrhet för att ge en olja i den mängd, som visas i Tabell 2 under "fraktion 3". Denna olja adsorberades på en kolonn, som innehöll 6-45 g silikagel ("Wakogel C-200", tidigare framställd med bensen) varvid mängden silikagel motsvarade 1 g per 17 mg olja. Kolonnen eluerades sedan i tur och ordning med 15-100 ml bensen, 15-100 ml av en 9525 volymblandning av bensen och etylacetat och 120-1200 ml av en 4:1 volymblandning av bensen och etylacetat. Den aktiva fraktionen kondenserades fór att ge råa kristaller av monakolin Ki den mängd, som visas i Tabell 2. Dessa råa kristaller omkristalliserades från vattenhaltig aceton för att ge omkristalliserade kristaller i form av färglösa nålar i mängden, som visas i Tabell 2. fi' 10 15 20 25 30 468 482 13 Tabell 2 i Ex. Stam Mängd Mängd Mängd Mängd 4 nr av my- av extrakt av extrakt av kombi- celíe- från från myce- nerat kaka vätska liekaka extrakt (kg) (g) (g) (g) 10 Monascus anka SANK 10171 56 86 116 202 11 Monascus guggurous SANK 10271 55 87 114 201 12 Monascus ruber SANK 10671 55 88 115 203 13 Monascus vitreus SANK 10960 61 89 123 212 14 Monascus gaxíi SANK 11172 58 91 120 211 15 Monascus ruber SANK 13778 63 95 127 222 16 Monascus ruber SANK 15177 58 91 119 210 17 Monascus ruber SANK 18174 62 93 125 218 10 15 468 482 14 Tabell 2 (forts) Fraktion Monakolin K Ex. nr 1 2 3 Råa Omkrístallise- . kristaller rade kristaller (g) (g) (mg) (mg) (mg) 10 22 0,9 102 9,3 0,8 11 23 1,3 113 10,4 1,1 12 22 0,75 98 8,9 0,8 13 25 1,1 110 10,7 1,2 _ 14 24 2,2 121 12,0 1,6 15 28 1,65 216 14,2 6,3 16 26 1,8 235 24,4 9,8 17 29 5,7 765 135,0 81,0 w:-

Claims (3)

10 15 4 6 8 4 8 2 PATENTKRAV

1. Förfarande för framställning av monakolin K med formeln genom att odla en stam av släktet Monascus, kännetecknat därav, att den odlade stammen är en eller flera av Monascus ruber SANK 10671 (FERM 4958), Monascus ruber SANK 13778 (FERM 4959), eller Monascus ruber SAN K 15177 (FERM 4956) eller att odlingen utföres vid en temperatur från 7 till 40°C och att monakolin K därefter isoleras, såsom genom extraktion, koncentration, upplösning, gelfiltrering, absorptiv kromatografi eller en kombination därav.

2. Förfarande enligt krav 1, kännetecknat därav, att odlingen utföres vid en temperatur från 20 till 30°C.

3. Förfarande enligt krav 1, kännetecknat därav, att stammen är Monascus ruber SANK 15177 och odlingen utföres vid en temperatur från 23 till 30°C.