DK165990B - Fremgangsmaade til fremstilling af carboxylsyren af en cholesterolsynteseinhiberende forbindelse kaldet monacolin k eller salte deraf - Google Patents
Fremgangsmaade til fremstilling af carboxylsyren af en cholesterolsynteseinhiberende forbindelse kaldet monacolin k eller salte deraf Download PDFInfo
- Publication number
- DK165990B DK165990B DK047085A DK47085A DK165990B DK 165990 B DK165990 B DK 165990B DK 047085 A DK047085 A DK 047085A DK 47085 A DK47085 A DK 47085A DK 165990 B DK165990 B DK 165990B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- monacoline
- strain
- produced
- monacolin
- monascus
- Prior art date
Links
- 241000228347 Monascus <ascomycete fungus> Species 0.000 title claims description 9
- 238000012258 culturing Methods 0.000 title abstract description 3
- 239000003529 anticholesteremic agent Substances 0.000 title abstract 2
- PCZOHLXUXFIOCF-UHFFFAOYSA-N Monacolin X Natural products C12C(OC(=O)C(C)CC)CC(C)C=C2C=CC(C)C1CCC1CC(O)CC(=O)O1 PCZOHLXUXFIOCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 title description 5
- PCZOHLXUXFIOCF-BXMDZJJMSA-N lovastatin Chemical compound C([C@H]1[C@@H](C)C=CC2=C[C@H](C)C[C@@H]([C@H]12)OC(=O)[C@@H](C)CC)C[C@@H]1C[C@@H](O)CC(=O)O1 PCZOHLXUXFIOCF-BXMDZJJMSA-N 0.000 title description 5
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims abstract description 41
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims abstract description 12
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 21
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 14
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 11
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 6
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 5
- 150000001447 alkali salts Chemical class 0.000 claims description 5
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 claims description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 5
- 239000003513 alkali Substances 0.000 claims description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 4
- 241000031003 Monascus ruber Species 0.000 claims description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 abstract description 2
- 241000955424 Manihot dichotoma Species 0.000 abstract 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 16
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 11
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 9
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 9
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 7
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- AJLFOPYRIVGYMJ-INTXDZFKSA-N mevastatin Chemical compound C([C@H]1[C@@H](C)C=CC2=CCC[C@@H]([C@H]12)OC(=O)[C@@H](C)CC)C[C@@H]1C[C@@H](O)CC(=O)O1 AJLFOPYRIVGYMJ-INTXDZFKSA-N 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 3
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 3
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 3
- -1 3-hydroxy-3-methylglutaryl Chemical group 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010003210 Arteriosclerosis Diseases 0.000 description 2
- OKKJLVBELUTLKV-MZCSYVLQSA-N Deuterated methanol Chemical compound [2H]OC([2H])([2H])[2H] OKKJLVBELUTLKV-MZCSYVLQSA-N 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000228143 Penicillium Species 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N Trichloro(2H)methane Chemical compound [2H]C(Cl)(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N 0.000 description 2
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 2
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 2
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 2
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 2
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 2
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 208000011775 arteriosclerosis disease Diseases 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 2
- 238000005192 partition Methods 0.000 description 2
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 2
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 2
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 2
- CABVTRNMFUVUDM-VRHQGPGLSA-N (3S)-3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA Chemical compound O[C@@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(=O)NCCSC(=O)C[C@@](O)(CC(O)=O)C)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 CABVTRNMFUVUDM-VRHQGPGLSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 235000017060 Arachis glabrata Nutrition 0.000 description 1
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 description 1
- 235000010777 Arachis hypogaea Nutrition 0.000 description 1
- 235000018262 Arachis monticola Nutrition 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 1
- 102000004286 Hydroxymethylglutaryl CoA Reductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000895 Hydroxymethylglutaryl CoA Reductases Proteins 0.000 description 1
- 208000031226 Hyperlipidaemia Diseases 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 239000006159 Sabouraud's agar Substances 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- YNQLUTRBYVCPMQ-UHFFFAOYSA-N alpha-methyl toluene Natural products CCC1=CC=CC=C1 YNQLUTRBYVCPMQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 229960001231 choline Drugs 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 229940125898 compound 5 Drugs 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000012364 cultivation method Methods 0.000 description 1
- 239000012225 czapek media Substances 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000000921 elemental analysis Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000010903 husk Substances 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N iodine Chemical compound II PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 150000002596 lactones Chemical group 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 231100000636 lethal dose Toxicity 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000465 moulding Methods 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 239000006877 oatmeal agar Substances 0.000 description 1
- 230000005868 ontogenesis Effects 0.000 description 1
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 description 1
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 description 1
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 238000007142 ring opening reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- CZDYPVPMEAXLPK-UHFFFAOYSA-N tetramethylsilane Chemical compound C[Si](C)(C)C CZDYPVPMEAXLPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
i
DK 165990B
Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til fremstilling af carboxylsyren af en hidtil ukendt cholesterol-synteseinhiberende forbindelse kaldet monacolin K med formlen: ΗΟγγΟ v ° k ο'^γ^ 1°
A^AA
eller salte deraf, der er ejendommelig ved, at en stamme af Monascus ruber dyrkes i et dyrkningssubstrat indeholdende 15 assimilerbare carbon- eller nitrogenkilder, at et alkali sæt tes til dyrkningsblandingen til opnåelse af alkalisalte af carboxylsyren af monacolin K, og at man derefter enten isolerer alkalisaltene fra den alkaliske dyrkningsblanding eller ekstra-herer syren med et organisk opløsningsmiddel, fortrinsvis 20 med ethylacetat eller chloroform, ved en sur pH-værdi.
Høje blodcholesterolniveauer er velkendte for at være en af hovedårsagerne til cardiopati, således som hjerteinfakt eller arteriosclerose. Som et resultat heraf er der foretaget ad-25 skillige videnskabelige undersøgelser for at finde fysiologisk acceptable forbindelser, der er i stand til at hæmme choleste-rolbiosyntesen og derved reducere blodcholesterolniveauerne.
En af disse forbindelser er ML-236, der omhandles i engelsk patentskrift nr. 1 453 425 og i dansk patentskrift nr. 136.485. 30 ML-236 fremstilles ved at dyrke en mikroorganisme af slægten
Penicillium.
Det har nu vist sig, at stammer af arten Monascus ruber, specielt Monascus ruber stamme 1005 (FERM 4822), frembringer 35 en med ML-236 nært beslægtet forbindelse, og at det ved be handling med alkali er muligt at fremkalde ringåbning af denne forbindelses lactonring under dannelse af de tilsvarende salte, 2
DK 165990 B
hvorefter carboxylsyren af forbindelsen kan isoleres ved en sur pH-vserdi ved ekstraktion med et passende organisk opløsningsmiddel, såsom ethylacetat eller chloroform.
5 Monascus ruber stamme 1005 (FERM 4822) er en for nylig isoleret mikroorganisme, der udviser følgende mikrobiologiske egenskaber. Den isoleredes fra fodér produceret i Thailand og deponeredes den 16. februar 1979 under accessionsnummeret FERM 4822 i Fermentation Research Institute, Agency <5f Indu-10 strial Science and Technology, Ministry of International Trade and Industry, Japan, og under accessionsnummeret NRRL 12073 i Agricultural Research Service, Northern Regional Research Laboratory, USA.
15 1. VÆKST
Væksten på et kartoffel-glucose-agar substrat ved 25°C er hurtig, og diameteren af kolonierne når 6-6,5 centimeter 10 dage efter tilsåningen. Kolonien er flad og et relativt 20 tyndt basalt lag af hyfer udvikler sig. Udviklingen af luft- hyfers er dårlig; lufthyferne er hvide og de fleste af dem er uldagtige. Kleistotesia dannes på det basale lag af hyferne, og de biver rødligt brune ved modning. Både overfladen og bagsiden af kolonien har brun til rødligt brun farve.
25 Væksten på Sabouraud's agar substrat ved 25°C er meget hurtig, og koloniernes diameter når 6-6,5 centimeter 10 dage efter udsåningen. Overfladen af kolonien er meget flad, og basale hyfer og lufthyfer udvikler sig bedre end på kartoffel-glucose-30 agar substratet. Kleistotesia er meget sparsomme. Overfladen af kolonierne er rødlig-gullig til rødlig-brun i farve, og bagsiden er rødlig-brun til mørkbrun.
Væksten på havremelsagar ved 25°C er langsom, og koloniernes 35 diameter når 1,5-2 centimeter 10 dage efter tilsåningen.
Kolonien er flad. Udvikling af lufthyfer og dannelsen af kleistotesia er meget dårlig for begges vedkommende. Både overfladen og den modsatte side af kolonien er mørk rød til rødlig- brun i farve.
3
DK 165990 B
Væksten på Czapek's agar substrat ved 25°C er meget langsom, og koloniernes diameter når 1,6 - 1,8 centimeter 10 dage efter tilsåningen.
5 Væksthastighederne på hver af de oven for nævnte substrater ved 37°C er i det væsentlige lig med væksthastighederne ved 25°C.
2. MORFOLOGISKE EGENSKABER
10 Kleistotesia er sfæriske og 30 - 60 mikron i diameter; deres vægge er hvide og membranagtige; deres stilke har skillevægge, og hver består af en hyfe med en diameter på 3,5 - 4,5 mikron og en længde på 15 - 80 mikron. Sporesækken består af 8 sporer, og den er næsten sfærisk og svinder hurtig bort. Ascosporerne 15 er farveløse og ovoide eller elipsoide; de har en størrelse på 4 - 5 x 4 - 7 mikron; og deres overflade er glat. Conidia er farveløse og sfæriske eller pæreformede; deres størrelse er 6-9x6-11 mikron; deres basis er lige afskåret og deres vægge er forholdsvis tykke og glatte. Conidia er knyt-20 tet midtpunktflyende til hinanden som en slags dannelses vævs arthrospore. Conidiophoren er som en vegetativ hyfe og er forgrenet eller uforgrenet; Conidia dannes ved toppen. Mycelierne er farveløse og forgrenede og har skillevægge; de fleste af dem har en diameter på 3 - 5 mikron.
25
Baseret på disse observationer af egenskaberne identificeredes mikroorganismen som en stamme af Monascus ruber van Tieghem.
De mikrobiologiske egenskaber af Monascus ruber er angivet 30 i følgende litteratur: Takada, Transactions of the Micological
Society of Japan, 9^,125 - 130 (1969) [Materials for the Fungus Flora of Japan (7)], og van Tieghem, Bull, Soc.Botan.France, 31, 227 (1884). Ascosporedannelse af arten er omtalt af Cole et al in the Canadian Journal of Botany, £6, 987 (1968), 35 "Conidium Ontogeny in hyphomyceres. The imperfect state of
Monascus ruber and its meristem arthrospores".
4
DK 165990 B
Andre stammer af arten Monascus ruber, der er i stand til at producere monacolin K, kan anvendes ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen.
5 Ved dyrkningen anvendes metoder, som er velkendte af fagmanden til dyrkning af svampe og andre mikroorganismer. F.eks. kan den monacolin K-producerende mikroorganisme først dyrkes på en passende substrat, og herefter kan de frembragte mikroorganismer indsamles og udsås og dyrkes i et andet vækstsubstrat 10 for at frembringe det ønskede monacolin K; dyrkningssubstratet anvendt til opformering af mikroorganismerne og til produktion af monacolin K kan være det samme eller forskelligt.
Et hvilket som helst dyrkningssubstrat, der kendes af fagmanden 15 til dyrkning af svampe, kan anvendes, forudsat at det, som det er kendt, indeholder de nødvendige næringsstoffer, specielt en kilde for assimilerbart carbon og en kilde for assimilerbart nitrogen. Eksempler på velegnede kilder for assimilerbart carbon er glucose, maltose, dekstrin, stivelse, lactose, sucrose 20 og glycerol. Af disse kilder foretrækkes specielt glucose, glycerol og stivelse til frembringelsen af monacolin K. Eksempler på velegnede kilder for assimilerbart nitrogen er pepton, kødekstrakt>gær, gærekstrakt, sojabønnemel, jordnøddemel, majsstøbevæske, risskaller og uorganisk nitrogen. Af disse 25 nitrogenkilder foretrækkes specielt pepton. Når man producerer monacolin K, kan et uorganisk salt og/eller et metalsalt eventuelt sættes til dyrkningssubstratet. Yderligere kan en mindre mængde tungmetal også tilsættes.
30 Mikroorganismen dyrkes fortrinsvis under aerobe betingelser, idet man anvender dyrkningsmetoder^ der er velkendte af fagmanden som f.eks. faste kulturer, rystekulturer eller kulturer under gennemluftning og omrøring. Mikroorganismerne vokser inden for et bredt temperaturområde, f.eks. fra 7 til 40°C, men 35 specielt for dannelse af monacolin K er den foretrukne dyrk ningstemperatur inden for området 20 til 35°C.
DK 165990B
5
Under dyrkningen af mikroorganismerne kan produktionen af monacolin K kontrolleres ved at udtage prøver af dyrkningssubstratet og måle den fysiologisk aktivitet af monacolin K i dyrkningssubstratet ved forsøg, der er beskrevet nedenfor. 5 Dyrkningen fortsættes, indtil en væsentlig akkumulering af monacolin K er opnået i dyrkningssubstratet, på hvilket tidspunkt monacolin K kan isoleres og udvindes fra dyrknings -bouillonen ved en hvilken som helst kombination af isoleringsmetoder, der udvælges med hensyn til dets fysiske og kemiske 10 egenskaber. F.eks. kan en hvilken som helst eller alle af følgende isoleringsteknikker anvendes: Ekstraktion af væske fra kulturbouillonen med et hydrofilt opløsningsmiddel (f.eks. diethylether, ethylacetat, chloroform eller benzen); ekstraktion af selve organismen med et hydrofilt opløsningsmiddel 15 (f.eks. acetone eller en alkohol); opkoncentrering; opløsning i et mere polært opløsningsmiddel (f.eks. acetone eller en alkohol); fjernelse af urenheder med et mindre polært opløsningsmiddel (f.eks. petroleumsether eller hexan); gelfiltrering gennem en søjle af et materiale bestående af "Sephadex" 20 (handelsnavn for et materiale, der forhandles af Pharmacia
Co., Ltd., USA); absorptiv chromatografi med aktiv carbon eller silicagel osv. Ved at anvende en passende kombination af disse metoder, kan det omhandlede monacolin K isoleres fra dyrkningsbouillonen som en ren forbindelse.
25
Monacolin K har vist sig at have følgende egenskaber: 1. Farve og form: - farveløse krystaller 2. Smeltepunkt: - 157-159°C (under dekomponering) 30 3. Elementaranalyse: C 71,56%; H 8,85%; 019,59%.
4. Molekylvægt: - 404 (ved massespektrometri): 5. Molekylær formel - C24H36°5· 6. Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol): 35 Som vist i fig. 1 er der etmaxdmum. ved 232, 238 og 246 μπι.
6
DK 165990 B
7. Infrarødt absorptionsspektrum (KBr):
Spekteret er som vist i fig. 2.
8. Kernemagnetisk resonansspektrum (60 MHz proton): 5 Spektret fremgår af fig. 3 i deutereret chloroform, idet man anvender tetramethylsilan som indre standard.
13 9. Kernemagnetisk resonans spektrum ( C)-:
Spektret fremgår af fig. 4 i deutereret methanol.
10 10. Opløselighed:
Opløselig i alkoholer (f.eks. methanol, ethanol og propanol), acetone, chloroform, ethylacetat og benzen. Uopløselig i petroleumsether og hexan.
15 2 5 11. Specifik drejning: [cc]D = 307,6 (c=l, methanol).
12. Tyndtlagschromatografi: Rf = 0,47 [Nr. 5715 "Kieselgel 60F254 silicagel (Merck & Co., Ltd) der fremkaldes med 20 en 4:1 rumfangsblanding af methylenchlorid og acetone, synlig som en ultraviolet bestrålingsabsorberende plet, 50 v/v svovlsyre (en svag rød og rødlig brun farve frembringes ved opvarmning) eller med jod].
25 Forbindelsen er neutral og uopløselig i neutrale eller sure vandige substrater. Den omdiannes til en sur forbindelse ved behandling med en alkali, og herefter kan den opløses i vand. Den sure forbindelse kan ekstraheres med ethylacetat eller chloroform ved en sur pH-værdi, og den vil omdannes til 30 monacolin K ved afdampning af opløsningsmidlet.
Den fysiologiske virkning af monacolin K salte kan undersøges og bestemmes kvantitativt ved følgende forsøg.
35 1. Hæmning af cholesterolbiosyntese
Lige som monacolin K selv kan monacolin K salte specifikt vende aktiviteten af 3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA reductase, der er det hastighedsbestemmende enzym ved biosyntesen af cholesterol. I tabel 1 anføres koncentrationerne (i ng/ml) 7
DK 165990B
af de omhandlede forbindelser, der hæmmer aktiviteten af 3-hydroxy-3-methylglutaryl (HMG)-CoA reductase med 50 pct. (målt ved metoden beskrevet i Analytical Biochemistry, 383 (1969), og koncentrationerne (i ng/ml) af den omhandlede forbindelse, 5 der hæmmer cholesterolbiosynthesen med 50 pct. [målt ved metoden beskrevet i Journal of Biological Chemistry, 247, 4914 (1972)].
De tilsvarende resultater er også angivet for den kendte forbindelse ML-236B (der er en forbindelse, der vides at have 10 samme type aktivitet, og som fremstilles ved at dyrke mikro organismer af slægten Penicillium, der er omhandlet i engelsk patentskrift nr. 1 453 425). Den koncentration af monacolin K selv, der hæmmer cholesterolbiosynthesen med 50 pct., er også angivet. Det vil fremgå, at medens koncentrationen af 15 ML-236B, der er nødvendig for at hæmme cholesterolbiosynthesen med 50 pct., er 10,0 ng/ml, er den tilsvarende koncentration af natriumsaltet af monacolin K cirka 0,14 ng/mg (dvs. cirka halvfjerds gange bedre). Virkningerne af saltene af monacolin K er sammenlignelige med eller bedre end selve mona-20 colin K.
Tabel 1 25 Forbindelse Koncentration (ng/ml) nødvendig for at hamme med 50 pct.
HMG-CoA cholesterol _ reductase_biosyntese natriumsalt 2,0 0,14 3Q calciumsalt 12,0 1,8 monacolin K - 2,0 ML-236B _10,0_10,0 35 2. Reduktion af blodcholesterolniveauerne
De anvendte forsøgsdyr var rotter af Wistar Imamichistammen, der hver havde en legemsvægt på cirka 300 g. Forsøgene udførtes på grupper af rotter, der hver bestod af fem dyr. Hvert dyr
DK 165990B
8 S) injiceredes intravenøst med 400 mg/kg "Triton'** " WR-1339 (handelsnavn for et materiale, der vides at forøge blodcholesterol-niveauet), medens der samtidigt administreredes en af forbindelserne vist i tabel 2 peroralt i den mængde, der er angivet 5 i tabellen. 20 timer efter den perorale administrering af livedes dyrene ved afblødning, og blod og lever undersøgtes, og deres cholesterolniveauer bestemtes ved almindelige metoder. Resultaterne er angivet i tabel 2, der angiver reduktionen i blod- og levercholesterolniveauer sammenlignet med en kon-10 trolgruppe af rotter, der kun havde fået "Triton®' WR-1339 alene.
For at sammenligne er de tilsvarende resultater angivet for selve monacolin K og for ML-236B, men disse forbindelser ad-15 ministreredes i doser, der var væsentligt større end de doser, der anvendtes af de omhandlede forbindelser, for at opnå en lignende reduktion af cholesterolniveauerne.
Tabel 2 20
Reduktion af cholesterol-Eorbindelse Dosis niveauer (%) i mg/kg blod lever natriumsalt 2 27,5 18/9 25 calciumsalt 5 21,4 17,1 monacolin K 10 22,4 16,7 ML-236B 40 24,6 20,9 30
Reduktionen i blod- og levercholesterolmveauet angives med følgende formel: 1 ", ft) x loo A - B 35
DK 165990 B
hvori A = niveau i gruppe behandlet kun med "Tritor®" WR-1339 9 B = niveau i ubehandlet kontrolgruppe 5 C = niveau i forsøgsgruppe 3. Akut toxicitet
De undersøgte forbindelser var natrium- og calciumsaltene 10 af monacolin K. Man fandt, at den 50 pct. lethale dosis (LD^q) af hver af forbindelserne var mindst 2.000 mg/kg ved intraperi-toneal administrering. Forbindelserne har således særdeles lav toxicitet.
15 Resultaterne viser, at de omhandlede forbindelser hæmmer bio- synthesen af cholesterol, og som et resultat heraf sænker cholesterolniveauet i blod. De er således værdifulde lægemidler ved behandling af hvperlipaemi og arteriosclerose.
20 De omhandlede forbindelser administreres peroralt eller paren- teralt i form af kapsler, tabletter, injicerbare præparater eller på andre velkendte måder, skønt det sædvanligvis foretræk kes at administrere dem peroralt. Dosis afhænger af patientens alder og vægt og tilstand, men sædvanligvis foretrækkes en 25 daglig dosis for en voksen på 0,1 - 100 mg, fortrinsvis 0,1 - 100 mg, når der er tale om monacolin K salte.
Opfindelsen illustreres nærmere i følgende eksempel.
30 EKSEMPEL
Monascus ruber 1005 stammen udsåedes på et flydende væskesubstrat, der indeholdt 6 vægt/vol. glucose, 2,5 vægt/vol. pepton,0,5 vægt/vol. majsstøbevæske og 0,5 vægt/vol.pct. am-moniumchlorid. Dyrkningen fortsattes under aerobe betingelser 35 ved en temperatur på 28°C i 10 dage. Det fremkomne filtrat (5 1) fra dyrkningsbouillonen indstilledes til en pH-værdi på 3 ved tilsætning af 6N saltsyre, hvorefter man ekstraherede med et lige stort rumfang ethylacetat. Opløsningsmidlet afdamp-edes under reduceret tryk fra ekstrakten, og den fremkomne
Claims (4)
1. Fremgangsmåde til fremstilling af carboxylsyren af en cho-25 lesterolsynteseinhiberende forbindelse kaldet monacolin K og med formlen: 3° V O ^x o^Y^ \ \ 13 35 6 11 DK 165990 B eller alkalisalte deraf, kendetegnet ved, at en stamme af Monascus ruber dyrkes i et dyrkningssubstrat indeholdende assimilerbare carbon- og nitrogenkilder, at et alkali sættes til dyrkningsblandingen til opnåelse af alkalisalte af 5 carboxylsyren af monacolin K, og at man derefter enten isolerer alkalisaltene fra den alkaliske dyrkningsblanding eller ekstraherer syren med et organisk opløsningsmiddel, fortrinsvis med ethylacetat eller chloroform, ved en sur pH-værdi.
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at stammen er Monascus ruber stamme 1005 (FERM 4822, NRRL 12073).
3. Fremgangsmåde ifølge krav 1 eller 2, kendetegnet 15 ved, at dyrkningen udføres ved en temperatur fra 7 til 40eC.
4. Fremgangsmåde ifølge krav 3, kendetegnet ved, at temperaturen er fra 20 til 35°C. 20 25 30 35
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP54017856A JPS5925599B2 (ja) | 1979-02-20 | 1979-02-20 | 新生理活性物質モナコリンｋおよびその製造法 |
| JP1785679 | 1979-02-20 | ||
| DK73080 | 1980-02-20 | ||
| DK73080A DK149095C (da) | 1979-02-20 | 1980-02-20 | Fremgangsmaade til fremstilling af en cholesterolsynteseinhiberende forbindelse kaldet monacolin k |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK47085A DK47085A (da) | 1985-02-01 |
| DK47085D0 DK47085D0 (da) | 1985-02-01 |
| DK165990B true DK165990B (da) | 1993-02-22 |
| DK165990C DK165990C (da) | 1993-07-26 |
Family
ID=26064540
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK47085A DK165990C (da) | 1979-02-20 | 1985-02-01 | Fremgangsmaade til fremstilling af carboxylsyren af en cholesterolsynteseinhiberende forbindelse kaldet monacolin k eller salte deraf |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| DK (1) | DK165990C (da) |
-
1985
- 1985-02-01 DK DK47085A patent/DK165990C/da active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK47085A (da) | 1985-02-01 |
| DK47085D0 (da) | 1985-02-01 |
| DK165990C (da) | 1993-07-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK149095B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af en cholesterolsynteseinhiberende forbindelse kaldet monacolin k | |
| US4323648A (en) | Preparation of Monacolin K | |
| US3983140A (en) | Physiologically active substances | |
| US4049495A (en) | Physiologically active substances and fermentative process for producing the same | |
| NZ194445A (en) | Monacolin k salts and esters | |
| DK151273B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af cholesterolbiosynteseinhibitoren mb- 530a. | |
| Hatori et al. | FR901512, a Novel HMG-CoA Reductase Inhibitor Produced by an Agonomycetous Fungus No. 14919 I. Taxonomy of the Producing Organism, Fermentation, Isolation and Physico-chemical Properties | |
| JP2768829B2 (ja) | 抗生物質 | |
| DK165990B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af carboxylsyren af en cholesterolsynteseinhiberende forbindelse kaldet monacolin k eller salte deraf | |
| JP4380913B2 (ja) | 新規ｆｔ−０５５４物質及びその製造法 | |
| US5441987A (en) | Antifungal agent | |
| JPS5840475B2 (ja) | 新生理活性物質ｍｌ−２３６ａおよびその製造法 | |
| JPWO1999024439A1 (ja) | 新規ｆｔ−０５５４物質及びその製造法 | |
| EP0629184A1 (en) | TETRALIN DERIVATIVES AS HMG-CoA REDUCTASE INHIBITORS | |
| GB2265147A (en) | Antibiotic eicosenoic acids | |
| JP2928626B2 (ja) | 血小板活性化因子拮抗物質フォマクチンｂ | |
| JPS6113798B2 (da) | ||
| CA2071655A1 (en) | Sporormiella intermedia and processes therefrom | |
| WO2004033703A1 (ja) | 新規マクロファージ泡沫化阻害物質ｆｋａ−２５およびその製造法 | |
| JPS6324518B2 (da) | ||
| JPH04368378A (ja) | フサリウム種からの新規代謝産物アジスタチン類、その製造方法およびその使用 | |
| JPH0149351B2 (da) | ||
| JPS6210998B2 (da) | ||
| JPS58109480A (ja) | 新生理活性物質ジヒドロモナコリンｌ及びその製造法 | |
| JPH0479639B2 (da) |