DK148807B - Fremgangsmaade til fremstilling af monacolin k - Google Patents
Fremgangsmaade til fremstilling af monacolin k Download PDFInfo
- Publication number
- DK148807B DK148807B DK073180AA DK73180A DK148807B DK 148807 B DK148807 B DK 148807B DK 073180A A DK073180A A DK 073180AA DK 73180 A DK73180 A DK 73180A DK 148807 B DK148807 B DK 148807B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- monascus
- sank
- ferm
- monacolin
- monacoline
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 16
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 4
- 229930185723 monacolin Natural products 0.000 title description 2
- 241000031003 Monascus ruber Species 0.000 claims description 22
- PCZOHLXUXFIOCF-UHFFFAOYSA-N Monacolin X Natural products C12C(OC(=O)C(C)CC)CC(C)C=C2C=CC(C)C1CCC1CC(O)CC(=O)O1 PCZOHLXUXFIOCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 241000228347 Monascus <ascomycete fungus> Species 0.000 claims description 16
- PCZOHLXUXFIOCF-BXMDZJJMSA-N lovastatin Chemical compound C([C@H]1[C@@H](C)C=CC2=C[C@H](C)C[C@@H]([C@H]12)OC(=O)[C@@H](C)CC)C[C@@H]1C[C@@H](O)CC(=O)O1 PCZOHLXUXFIOCF-BXMDZJJMSA-N 0.000 claims description 16
- 239000013078 crystal Substances 0.000 claims description 6
- 241000272525 Anas platyrhynchos Species 0.000 claims description 3
- 241000409281 Monascus paxii Species 0.000 claims description 3
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 45
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 42
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 42
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 42
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 27
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 17
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 14
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 12
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 12
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 12
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 12
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 11
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 11
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 10
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 9
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 8
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 7
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 7
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 6
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 6
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 6
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 238000011160 research Methods 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 4
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 4
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000006877 oatmeal agar Substances 0.000 description 4
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 4
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 3
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 3
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 3
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 3
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 2
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- ZSIAUFGUXNUGDI-UHFFFAOYSA-N hexan-1-ol Chemical compound CCCCCCO ZSIAUFGUXNUGDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 2
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 2
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N tetrachloromethane Chemical compound ClC(Cl)(Cl)Cl VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- CABVTRNMFUVUDM-VRHQGPGLSA-N (3S)-3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA Chemical compound O[C@@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(=O)NCCSC(=O)C[C@@](O)(CC(O)=O)C)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 CABVTRNMFUVUDM-VRHQGPGLSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 235000017060 Arachis glabrata Nutrition 0.000 description 1
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 description 1
- 235000010777 Arachis hypogaea Nutrition 0.000 description 1
- 235000018262 Arachis monticola Nutrition 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- QRLVDLBMBULFAL-UHFFFAOYSA-N Digitonin Natural products CC1CCC2(OC1)OC3C(O)C4C5CCC6CC(OC7OC(CO)C(OC8OC(CO)C(O)C(OC9OCC(O)C(O)C9OC%10OC(CO)C(O)C(OC%11OC(CO)C(O)C(O)C%11O)C%10O)C8O)C(O)C7O)C(O)CC6(C)C5CCC4(C)C3C2C QRLVDLBMBULFAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019733 Fish meal Nutrition 0.000 description 1
- 102000004286 Hydroxymethylglutaryl CoA Reductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000895 Hydroxymethylglutaryl CoA Reductases Proteins 0.000 description 1
- 208000035150 Hypercholesterolemia Diseases 0.000 description 1
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 1
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 1
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 1
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- CQIUKKVOEOPUDV-IYSWYEEDSA-N antimycin Chemical compound OC1=C(C(O)=O)C(=O)C(C)=C2[C@H](C)[C@@H](C)OC=C21 CQIUKKVOEOPUDV-IYSWYEEDSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 238000005266 casting Methods 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004671 cell-free system Anatomy 0.000 description 1
- CQIUKKVOEOPUDV-UHFFFAOYSA-N citrinine Natural products OC1=C(C(O)=O)C(=O)C(C)=C2C(C)C(C)OC=C21 CQIUKKVOEOPUDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940125773 compound 10 Drugs 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 125000004177 diethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- UVYVLBIGDKGWPX-KUAJCENISA-N digitonin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H]([C@]2(CC[C@@H]3[C@@]4(C)C[C@@H](O)[C@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O[C@H]6[C@@H]([C@@H](O[C@H]7[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)CO7)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O6)O[C@H]6[C@@H]([C@@H](O[C@H]7[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O7)O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O6)O)[C@@H](CO)O5)O)C[C@@H]4CC[C@H]3[C@@H]2[C@@H]1O)C)[C@@H]1C)[C@]11CC[C@@H](C)CO1 UVYVLBIGDKGWPX-KUAJCENISA-N 0.000 description 1
- UVYVLBIGDKGWPX-UHFFFAOYSA-N digitonine Natural products CC1C(C2(CCC3C4(C)CC(O)C(OC5C(C(O)C(OC6C(C(OC7C(C(O)C(O)CO7)O)C(O)C(CO)O6)OC6C(C(OC7C(C(O)C(O)C(CO)O7)O)C(O)C(CO)O6)O)C(CO)O5)O)CC4CCC3C2C2O)C)C2OC11CCC(C)CO1 UVYVLBIGDKGWPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 238000000921 elemental analysis Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000004467 fishmeal Substances 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- -1 gay Substances 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010903 husk Substances 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- ZLVXBBHTMQJRSX-VMGNSXQWSA-N jdtic Chemical compound C1([C@]2(C)CCN(C[C@@H]2C)C[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H]2NCC3=CC(O)=CC=C3C2)=CC=CC(O)=C1 ZLVXBBHTMQJRSX-VMGNSXQWSA-N 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000005868 ontogenesis Effects 0.000 description 1
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 1
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 description 1
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A22—BUTCHERING; MEAT TREATMENT; PROCESSING POULTRY OR FISH
- A22C—PROCESSING MEAT, POULTRY, OR FISH
- A22C25/00—Processing fish ; Curing of fish; Stunning of fish by electric current; Investigating fish by optical means
- A22C25/16—Removing fish-bones; Filleting fish
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
- C12P17/06—Oxygen as only ring hetero atoms containing a six-membered hetero ring, e.g. fluorescein
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/06—Antihyperlipidemics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D309/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings
- C07D309/16—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
- C07D309/28—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
- C07D309/30—Oxygen atoms, e.g. delta-lactones
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/911—Microorganisms using fungi
Landscapes
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Obesity (AREA)
- Hematology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Description
Opfindelsen angår en fremgangsmåde til fremstilling af en cholesterolsynteseinhiberende forbindelse kaldet monacolin K med formlen: i 148807 H°yAy° k/O T ό
Fra beskrivelsen til dansk patentansøgning nr. 730/80 må det anses for kendt at fremstille monakolin K ved dyrkning af en stamme af arten Monascus ruber i et passende dyrkningssubstrat.
5
Det har nu vist sig, at fire hidtil ukendte stammer af arten Monascus ruber og fire udvalgte stammer tilhørende andre arter af slægten Monascus danner monacolin K i væs-10 entlige mængder.
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er i overensstemmelse hermed ejendommelig ved, at man dyrker en eller flere af mikroorganismerne Monascus anka SANK 10171 (IFO 6540), 15 Monascus purpurous 148807 2 SANK 10271 (IFO 4513), Monascus ruber SANK 10671 (FERM 4958), Monascus vltreus SANK 10960 (FERM 4960),
Monascus paxii SANK 11172 (IFO 8201), Monascus ruber SANK 13778 (FERM 4959), Monascus ruber SANK 15177 (FERM 5 4956) eller Monascus ruber SANK 18174 (FERM 4957)·
Monascus ruber SANK 10671, Monascus ruber SANK 13778, 10 Monascus ruber SANK 15177 og Monascus ruber SANK 18174 er som nævnt alle nyligt isolerede mikroorganismer og er beskrevet •nedenfor. De øvrige mikroorganismer er kendte og er tidligere beskrevet. Alle er let tilgængelige fra IFO eller FERM ( The Fermentation Research Institute, Agency of 15 Industrial Science and Technology Ministry of Internatio nal Trade and Industry, Japan) således som angivet ved accessionsnumrene angivet i parentes.
De mikrobiologiske egenskaber af de hidtil ukendte mikro-20 organismer er følgende :
Monascus ruber SANK 15177 (FERM 4956)
Denne stamme isoleredes fra jord ved Tukimino, Yamato-byen, Kanagawa-præf ekturen, Japan og deponeredes den 25 27. april 1979 tinder accessionsnumret 4956 i Fermenta tion Research Institute.
Stammen gror udmærket på kartoffel-glukoseagarsubstrat ved 25°C og frembringer et opløseligt farvet materiale, 30 der har en gulligbrun til rødligbrun farve i substratet.
Den danner kleistothecia på det nedre lag af hyferne.
På havremelsagarsubstrat danner den et svagt brunfarvende materiale og vokser udmærket. Dannelsen af kleistothecia 35 er god, og kleistothecia er sfæriske med en diameter på 30 - 60 mikron og dannes på korte stilke. Disse stilke 148807 3 er næsten farveløse og forgrenede og af en størrelse på 25 - 60 x 3»5 - 5,0 mikron. Asci svinder hurtigt væk, og de er således vanskeligt at observere. Ascoporerne er farveløse og ellipsoide, og deres dimensioner er 4,5 5 -6,5x4,0-5,0 mikron; deres overflade er glat.
Conidia er sammenknyttet midtpuhktflyende og af størrelsen 7,0 - 10,0 x 6,0 - 10,0 mikron. Deres væv er itureven.
10 Skønt stammen vokser ved 37°C, ser man den bedste vækst mellem 23 og 30°C.
Monascus Ruber SANK 10671 (FERM 4958)
Denne stamme isoleredes fra jorden ved Shinagawa-ku, 15 Tokyo, Japan og deponeredes 27. april 1979 i Fermenta tion Research Institute under accessionsnr. 4958.
Væksten på kartoffel-glukose og havremelsagarsubstrat er ligesom væksten af stammen SANK 15177, bortset fra at 20 dens opløselige farve,- der fremkommer, er 'mørkrød. · ·
Diameteren af kleistothecia er 30 - 80 mikron, og stilkenes dimension er 30 - 70 x 3,0 - 5,0 mikron. Der ses ikke asci. Ascosporerne er farveløse og ellipsoide, og deres dimensioner er 4,5 - 6,5 x 4,0 - 5,0 mikron. Coni-25 dia er farveløs og pæreformede eller ovale, og deres dimensioner er 6,0 - 10,0 x 6,0 - 8,5 mikron.
Monascus ruber SAM 13778 (FERM 4959)
Denne stamme isoleredes fra jorden ved Inawashirocho, 30
Nagata, Yama-gun, Fukushima-præfekturen, Japan og anbragtes 27. april 1979 i Fermentation Research Institute under accessionsnr. 4959. 1 Væksten på kartoffel-glukose-agar og havremelsagarsub strat er lig med væksten af SANK 15177, bortset fra at den opløseligt frembragte farve er svag rødligbrun 148807 4 til rødligbrun. Kleistothecia har en diameter på 35 -75 mikron, og stilkenes dimension er 30 - 70 x 3,5 - 5,0 mikron. Der ses ikke asci. Åseosporerne er farveløse og ellipsoide, og deres dimensioner er 4,5 - 6,0 x 5 4,0-5,0 mikron. Deres overflade er glat. Dimensionerne på conidia er 7,0 - 10,0 x 6,0 - 10,0 mikron.
Monascus ruber SAM 18174 (FERM 4957)
Denne stamme isoleredes fra jord ved Shakotancho, Sha-10 kotan-gun, Shiribeshi Shicho, Kokkaido-præfekturen,
Japan og anbragtes 27„ april 1979 i Fermentation Research Institute under accessionsnr. 4957.
Væksten på kartoffel-glukose-agar og havremelsagarsub-15 strat er lig med væksten af SANK 15177, bortset fra at det frembragte farvede, materiale er svagt lyserødt. Kleistothecia har en diameter på 20 - 70 mikron, og stilkenes dimensioner er 20 - 60 x 3,0 - 5,0 mikron.
Der ses ikke asci. Ascosporerne er farveløse og ellip-20 soide, og deres dimensioner er 5,0 - 7,0 x 4,0 - 5,5 mikron; deres overflade er glat. Conidia er midtpunktflyende knyttet sammen, og de er farveløse, og de fleste af dem er pæreformede og med dimensionerne 6,0 - 9,5 x 6,0 - 10,0 mikron.
25
Baseret på de ovenfor nævnte egenskaber identificeredes disse mikroorganismer alle som stammer af Monascus ruber van Tieghem. 1 2 3 4 5 6
Mikrobiologiske egenskaber af Monascus ruber er omtalt 2 i følgende litteratur : Takada, Transactions of the 3 . Micological Society of Japan £, 125 - 130 (1969) (Mate 4 rials for the Fungus Flora of Japan (7)) og van Tieghem, 5
Bull. Soc. Botan. France, ^1, 227 (1884).Ascosporefrem- 6 stilling af arten er blevet omtalt af Cole et al i
Canadian Journal of Botany, 46, 987 (1968), "Conidium 148807 5 ontogeny in hyphomycetes. The imperfect . state of Monascus ruber and its meristem arthrospores"..
Monacolin K frembringes ved at dyrke den udvalgte 5 mikroorganisme i en dyrkningsbouillon under aerobe be tingelser, idet man anvender samme metoder, som er velkendte af fagmanden til dyrkning af svampe eller andre mikroorganismer. For eksempel kan den udvalgte stamme af Monascus først dyrkes på et passende substrat, og heref-10 ter kan de frembragte mikroorganismer opsamles og podes i og dyrkes på et andet dyrkningssubstrat for at frembringe det ønskede monacolin K; dyrkningssubstrat anvendt for opformering af mikroorganismerne og dyrkningssubstratet, der anvendes til fremstilling af m.onacolin K, kan være 15 det samme eller et andet substrat.
Et hvilket som * helst, velkendt dyrkningssubstrat til dyrkning af svampe kan anvendes, forudsat at det indeholder, som velkendt, de nødvendige nærings-20 stoffer, specielt en assimilerbar carbonkilde og en assi-milerbar nitrogenkilde. Eksempler på velegnede kilder for assimilerbart carbon er glukose, maltose, dextrin, stivelse lactose, sucrose og glycerol. Af disse kilder foretrækkes specielt glukose, glycerol og stivelse til fremstil-25 ling af monacolin K. Eksempler på velegnede kilder for assimilerbar nitrogen er pepton,kødekstrakt,gay,gærekstrakt, sojabønnemel,jordnøddemel, majsstøbevaske, risskaller og uorganiske nitrogenkilder. Af disse nitrogenkilder foretrækkes specielt pepton. Når man fremstiller monacolin k, 30 kan et uorganisk salt og/eller et metalsalt eventuelt sættes til dyrkningssubstratet. Eventuelt kan yderligere en mindre mængde tungmetal også tilsættes.
Mikroorganismerne dyrkes fortrinsvis under aerobe betin-35 gelser, idet man anvender velkendte dyrkningsmetoder, for eksempel fast kultur, rystekulturer eller kulturer 148807 6 under gennemluftning og omrøring. Mikroorganismerne gror inden for et bredt temperaturområde f.eks. fra 7 til 40° C, men specielt til fremstilling af monacolin K er det mest foretrukne dyrkningstemperatur inden for 5 20 - 30°C.
Under dyrkningen af mikroorganismerne kan produktionen af rønacolin K kontrolleres ved at udtage prøver af dyrkningssubstratet og måle den fysiologiske aktivitet 10 af nonacolin K i dyrkningssubstratet ved de neden for beskrevne metoder. Dyrkningen kan herefter fortsætte, indtil en væsentlig akkumulering af m.onacolin K er opnået i dyrknings substratet, på hvilket tidspunkt ironacolin K herefter kan isoleres og udvindes fra dyrkningssubstratet 15 og mikroorganismecellerne ved en hvilkensomhelst kombi nation af isoleringsmetoder, idet man udvælger den foretrukne med hensyn til fysiske og kemiske egenskaber af forbindelsen. For eksempel kan en eller flere af følgende isoleringsmetoder anvendes : ekstraktion af væsken fra 20 dyrkningsbouillonen med et hydrofilt opløsningsmiddel (som f .eks. diethyler,. ethylacetat, chloroform eller benz en), ekstraktion af organismen med et hydrofilt opløsningsmiddel (såsom acetone eller en alkohol), opkoncentrering f.eks. afdampning af noget eller dele 25 af opløsningen under reduceret tryk; opløsning i et mere polært opløsningsmiddel (såsom acetone eller en alkohol); fjernelse af urenheder med et mindre polært opløsningsmiddel som f.eks. petroleumsæter eller hexanol); gelfiltrering gennem en søjle af et materiale som f.eks.
30 n Sephadex" ( handelsnavn for et materiale, der forhand les af Pharmacia, Co. Limited, U.S.A.); absorptiv kromatografi med aktiv carbon eller silicagel; og andre lignende metoder. Ved at anvende en passende kombination af disse metoder, kan det ønskede monacolin K isoleres 35 fra kulturbouillonen som en ren forbindelse.
148807 7
Det ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede monacolin K er karakteriseret ved følgende egenskaber :; 1. Farve og form : Farveløse nåle.
5
2. Smeltepunkt : 157 - 158°C
3. Elementaranalyse i 10 Fundet : C, 72,67%; H, 9,13%; O, 18,2%.
Beregnet : C, 71,25%; H, 8,97%; O, 19,78%.
4. Molekylvægt : 404 (ved massespektrometri).
15 5. Molekylformel : ^24^36^5* 6. Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) : max. ved 232, 238 og 246 pm.
20 7. Opløselighed ; Let opløselig i methanol, ethanol, acetone, ethylacetat, 'chlorofomn- og carbontetrachlorid.
Opløselig i benzen..
25-
Uopløselig i hexan og petroleumsæter.
3Q 8. Farvereaktion : Lyserød farve ved 50% v/v svovlsyre på et tyndt lags kromatografi på silicagel.
148807 8 9. Tyndtlagskromatografi : R^værdi = 0,45 (silicagel ^25k (Merck & Co., Ltd.) : 0,25 min tyk, flergangs (x3) fremkaldelse med 7 : 3 rum- 5 fangsblanding af methylen- chlorid og ethylacetat og behandling med jod eller 30% _ v/v svovlsyre).
10 Forbindelsen er neutral og uopløselig i neutrale eller sure vandige substrater. Den kan imidlertid omdannes til en sur forbindelse ved behandling med alkali, og denne . sure forbindelse er opløselig i vand. Den sure forbindelse kan ekstraheres med ethylacetat eller chloroform ved 15 sure pH-værdier og vil genomdannes til monacolin K ved afdampning af opløsningsmidlet.
Den fysiologiske virkning af monacolin K kan efterprøves og bestemmes kvantitativt ved følgende in vivo og 20 in vitro forsøg, der kan anvendes til at styre produkt tionen af monacolin · K under forløbet af fremgangsmåden . ifølge opfindelsen.
In vivo forsøg med kaniner 25 I dette forsøg måles monacolin K’s evne til at reduce re cholesterolniveauerne i kaninblod. De anvendte dyr vejede fra 2,5 til 3,0 kg. Ved forsøgets begyndelse opsamledes blod fra en vene i hver kanins øre, og man målte cholesterolniveauet i blods er urnet ved almindeligt an-30 vendte metoder. En forudbestemt mængde monakolin K eller en monacolin K-holdig dyrkningsbouillon administreres herefter oralt kontinuerligt i fra 1 til 5 dage, og cholesterolniveauet i blodserumet måles på forskellige .tidspunktér efter administreringen. Styrken af monacolin 35 K eller monacolin K-holdig dyrkningssubstrat kan be stemmes kvantitativt fra blodcholesterolniveauerne opnået inden og efter administreringen af monacolin K.
9 148807
In vitro forsøg med rottelever Råt enzym fra rottelever omsættes med radioaktivt eddikesyre i 60 minutter ved 37°C. Den radiaktive cholesterol, der er således biosyntetiserat, forsæbes,og herefter 5 udfældes der med digitonin. Radioaktiviteten måles for at bestemme mængden af produceret cholesterol. Fremgangsmåden gentages, bortset fra at monacolin K eller monaco-lin-K-holdig dyrkningsbouillon tilsættes ved begyndelsen af omsætningen, og mængden af biosyntetiseret kolesterol 10 bestemmes atter, hvorved man får et kvantitativ mål for den hæmmende virkning af Monacolin K (Bricker et al,
The Journal of Biological Chemistry, 247. 4914 (1972)).
Dette forsøg er særlig værdifuld som en hurtig og let metode til at kontrollere monacolin K produktionen under 15 den omhandlede dyrkningsproces ifølge opfindelsen.
Monacolin K's evne til at sænke blod- og leverkolesterolniveauerne er undersøgt i forskellige in vivo forsøg. 1 2 3 4 5 6
Reduktion af blod- og leverkolesterolniveauer i rotter 2
De anvendte dyr var rotter af Wistar Imamichi-stammen, 3 der hver havde en legemsvægt på ca 300 g. Forsøgene ud 4 førtes på grupper af rotter, idet hver gruppe bestod af 5 5 dyr. Hvert dyr injiceredes intravenøst med 400 mg/kg 6 "Triton" WR-1339 ( handelsnavn for et materiale, der vides at forøge blodcholesterolniveauet) , medens man samtidig indgav 10 mg/kg atonacolin K enten peroralt eller intraperitonealt. 20 timer efter peroraladministrering-30 en eller 14 timer efter intraperitonealadministreringen aflivedes rotterne ved afblødning, og blodet og leveren omsamledes, og cholesterolniveauerne heraf bestemtes ved almindelige metoder. Man fandt herved, at blodcholesterolniveauet var blevet reduceret ved 22,4%, når det drejede 35 sig om peroral administrering, og med 23,9%, når det drejede sig om intraperitoneal administrering i forhold til kontrolgruppen af dyr, der havde fået "Triton"WR-1339.
U8807 10
Levercholesterolniveauerne var blevet reduceret med 16,7% i dyrene, til hvilke man havde administreret monacolin K peroralt.
5 Reduktion af blodcholesterolniveauerne hos kaniner
De anvendte dyr var kaniner, der havde en kropsvægt mellem 2,7 og 2,9 kg. Hver kanin fik peroralt 1 mg/kg monacolin K to gange dagligt (morgen og aften) kontinu-10 erligt i 5 dage. Inden administreringen og ved 3 eller 5 dage efter administreringen opsamledes blod fra en ørevene,og ch-olesterolniveauerne i blodserumet bestem tes. Herved fandt man,at cfelesterolniveauerne 3 og 5 dage efter administreringen af ironacolin K var hen-15 holdsvis 15 og 29% mindre end niveauet inden monacolin K-administreringen.
Det viste'sig,at monacolin K giver 50% hæmning af chol-sterolbiosyntesen ved en koncentration på 0,002 pg/ml 20 i forsøg, hvor eddikesyre omsættes med enzym fra rotte lever. Man har fundet, at monacolin-K hæmmer HMG-CoA reduktasen, der er det hastighedskontrollerende enzym i chlæsterolbiosyntesen, og at det i konkurrence hæmmer substratet HMG-CoA, og at det har en Ki-værdi på 5,3 x 25 lCT^M. Ki-værdien er hæmningskonstanten og specielt dissociationskonstanten af det enzymhæmmende kompleks.
Værdien fås som produktet af enzymkoncentrationerne og inhibitorerne divideret med koncentrationen af det enzymhæmmende kompleks.
30
Ikke alene har monacolin K en værdifuld hæmmende virkning på jcholesterolbiosyntesen, men det'har også en meget lav toksicitet hvilket gør anvendelsen heraf særdeles attraktiv ved behandling af hyperkolesteraemi.
35 Den akutte toksicitet (LD^q) af monacolin K i mus er 1 g/kg legemsvægt eller mere.
148807 11
Monacolin K kan administreres peroralt eller parenteralt i form af en kapsel, tablet, injicerbar præparat eller i andre velkendte formuleringer, skønt det normalt foretrækkes at administrere det peroralt. Dosis vil variere 5 af patientens alder og legemsvægt og sygdommens tilstand, men sædvanligvis er den daglige dosis hos voksne fra 0,5 til 50 mg, enten i en enkelt dosis eller i 2 eller 3 opdelte doser. Imidlertid kan også højere doser anvendes, dersom det er nødvendigt, i betragtning af forbindelsens 10 lave toksicitet.
Opfindelsen illustreres nærmere i efterfølgende eksempler.
15 Eksempel 1 300 1 af et dyrkningssubstrat med en pH på 7,4 før steriliseringen og indeholdende 1,5 vægt/rumfangpr ocent opløselig stivelse, 1,5 vægt/rumfangprocent glycerin, 2 vægt/rumfangprocent fiskemel og 0,2 vægt/rumfangprocent 20 calciumcarbonat udhældes i en 600 1 forgæringsbeholder og tilsåedes med organismen Monascus ruber SANK 18174 (FERM 4957). Dyrkningen af organismen udførtes i 120 timer ved 27°C med en gennemluftningshastighed på 300 1 per minut, og omrøring med 190 omdrejninger pr. minut.
25 Kulturbouillonen filtreredes i en filterpresse, hvilket gav 290 1 filtrat og 60 kg (vådvægt) af organismen.
Filtratets pH blev justeret til 4,0 ved tilsætning af 6N saltsyre, og derefter estraheredes filtratet med 400 30 1 ethylacetat. Extrakten koncentreredes, tørredes over vandfrit natriumsulfat, hvorefter man inddampede til tørhed, hvilket gav 95 g af et olieagtigt produkt.
Organismen'( der havde 2,5 gange så megen aktivitet som filtratet) extraheredes to gange, hver gang med 100 1 35 af en 80 rumfang/rumfangprocent vandig methanol. Methå- nolen afdampedes fra extrakten, og remanensen extrahe- .
12 1A 800 7 re’des to gange, hver gang med 100 1 ethylacetat. De forenede extrakter koncentreredes, tørredes over vandfrit natriumsulfat og inddampedes derefter til tørhed, hvilket gav 128 g af et olieagtigt produkt. Dette sloges sammen 5 med remanensen fra filtratet af dyrkningsbouillonen.
De herved fremkomne 223 g olieagtigt produkt adsorberedes i en søjle, der indeholdt 3 kg silicagel ('Wakogel "C-200), som tidligere havde været behandlet med benzen. Søjlen 10 elueredes først med 10 1 benzol og så med 180 1 af en 4:1 rumfangsblanding methylenchlorid og ethylacetat.. Den aktive fraktion blev fordampet til tørhed, hvorved man fik 30 g af et olieagtigt produkt, der adsorberedes på en søjle, der indeholdt 450 g silicagel (Wakogel C-200), som 15 tidligere havde været behandlet med hexan.
Søjlen elueredes først med 2 1 hexan, herefter med 30 1 af en 9:1 rumfangsblanding af hexan og acetone, og dernæst med 30 1 af en 4:1 rumfangsblanding af hexan og 20 acetone. Den aktive fraktion koncentreredes, og bund faldet frafiltreredes. Filtratet inddampedes til tørhed, hvorved man fik 4 g af et olieagtigt produkt, der adsorberedes på en søjle, der indeholdt 96 g silicagel OWako-gel"C-200), . der forud var behandlet med hexan. Søjlen 25 elueredes først med 500 ml hexan og derefter med 6 1 9:1 rumgangsblanding af hexan og acetone. Den aktive fraktion inddampedes til tørhed, hvorved man fik 521 mg af. et olieagtigt produkt, som blev adsorberet på en søjle indeholdende 30 g silicagel ("Wakogel" C-200), som 30 forud var behandlet med benzen. Søjlen blev først elue- ret med 10 ml benzen og dernæst med 100 ml 95:5 rumgangs-. blanding af benz.en og ethylacetat og endelig med 900 ml af en 4:1 rumfangsblanding af benzen og ethylacetat. Den aktive fraktion koncentreredes., hvorved man fik 92 mg 35 farveløse krystaller, der ved omkrystallisation med vandig acetone gav 54 mg monacolin K i form af farveløse nåle.
13 148607
Eksempel 2-8 300 1 af et dyrkningssubstrat, med en pH på 6,0 inden steriliseringen og indeholdende 2 vægt/rumgangsprocent glukose, 2 vægt/rumgangsprocent pepton ("Kyokuto"-5 fabrikat, der forhandles af Kyokuto Seiyaku KK, Japan) og 0,3 vægt/rumfangsprocent · maj sstøbevæske udhældes i en 600 1 forgæringsbeholder og tilsåedes med en af de i Tabel 1 anførte mikroorganismer. Dyrkningen af mikroorganismerne fortsatte i 96 timer ved 27°C med en 10 gennemluftningshastighed på 300 1 pr. minut og omrøring med 190 omdrejninger pr. minut.
Efter dette tidsrum udtoges 1 ml dyrkningsbouillon, og der extraheredes med ethylacetat indstillet til en pH-15 værdi på 3-4. Ekstrakten optoges i 0,2 ml af reaktionsblandingen beskrevet af M Kuroda, Y. Hazama-Shimada og A. Endo i Biochim. and Biophys. Acta., 486 (1977)» side 254 - 259 ("Inhibition of Sterol Synthesis by Citrinin in a Cell-free System from Rat Liver and Yeast") 20 og A. Endo, M. Kuroda og Y. Tsujita i Journal of Antibio tics, publiceret af Japanese Antibiotics Research Association, 2£ No. 12 (December 1976), side 1346 - 1348, og hæmningsprocenterne af cholesterolbiosyntesen bestemtes. Resultaterne angives i Tabel 1 som aktivitetsenheder 25 hæmning pr. ml dyrkningsbouillon, idet 50% hæmning af cholesterolbiosyntesen er lig med 1 enhed/ml.
148807 14 TABEL 1
Eks« Organisme Hæmningsaktivi- nr. tet, enheder/ml 2 Monascus purpurous SANK 10271 120 3 Monascus ruber SANK 10671 120 4 Monascus vitreus SANK 10960 150 5 Monascus paxii SANK 11172 120 6 Monascus ruber SANK 13778 440 7 Monascus ruber SANK 15177 2,400 8 Monascus ruber SANK 18174 20,000 148807 15
Disse resultater viser, at meget væsentlige mængder af monacolin K produceres af de omhandlede mikroorganismer.
Eksempel 9 ^ Fremgangsmåden beskrevet i eksempel 2-8 gentoges, bortset fra at den anvendte mikroorganisme var Monascus anka SANK 10171, og prøver af dyrkningssubstratet blev fjernet efter 96 timer 168 timer 216 timer og 288 10 timers dyrkning. Hæmningsaktiviteten måltes ved den samme prøve, som anvendtes ved eksemplerne 2-8, og var henholdsvis 110, 100, 30 og 80 enheder/ml.
Eksempel 10-17 15 300 1 af et flydende dyrkningssubstrat med en pH-værdi på 5,5 inden steriliseringen og indeholdende 5 vægt/ rumfangsprocent glukose, 0,5 vægt/rumfangsprocent maj-søbevæske, 2 vægt/rumfangsprocent pepton (Kyokuto) og 0,5 vægt/rumfangsprocent ammoniumchlorid udhædtes i en 20 600 1 dyrkningstank. En af de i Tabel 2 anførte stammer indpodedes i substratet og dyrkedes i 120 timer. Dette gentoges hver for sig for hver af de andre stammer.
Efter hver dyrkning filtreredes substratet gennem en 25 filterpresse, der gav en våd myceliakage i de mængder, der er vist i Tabel 2 og et filtrat. pH-værdien i filtratet indstilledes til 4,0 ved tilsætning af 6N saltsyre, hvorefter man extraherede med 400 1 ætylacetat. Extraktet, der udgjorde ca 400 1, kondenseredes ved ind-30 dampning under reduceret tryk og tørredes over vandfri natriumsulfat. Den kondenserede ekstrakt kondenseredes yderligere, hvorefter man inddampede til tørhed, hvilket gav en olie i en mængde, der er angivet i Tabel 2 som "mængde af ekstrakt fra bouillon".
Samtidig extraheredes myceliékagen, der havde ca 2 - 3 gange aktiviteten af det tilsvarende filtrat, to gange, 35 148807 16 hver gang med 100 1 af 80 rumfang/rumfang vandig methanol. Ekstrakten kondenseredes og tørredes over vandfrit natri-umsulfat. Den kondenserede ekstrakt kondenseredes yderligere og inddampedes til tørhed, hvilket gav en olie i en 5 mængde, der er vist i Tabel 2 som "mængde af ekstrakt fra myceliekagen".
De fremkomie olier fra henholdsvis filtrat og myceliekagen sloges sammen og adsorberedes herefter på en søjle 10 silicagel (3 kg "Wakogel" C-200, fremstillet med benzen), der herefter elueredes med 10 1 benzen og 180 1 af en 4:1 rumfangsblanding af methylenchlorid og ethylacetat.
Den aktive del fra elueringen kondenseredes og inddampedes til tørhed, hvilket gav en olie i en mængde, der er 15 angivet i Tabel 2 under "Fraktion 1". Denne olie adsorberedes på en søjle indeholdende 340 til 450 g silicagel ("Wakogel" C-200, der forud var behandlet med hexan), og mængden til silicagel svarende til 1 g pr. 65 mg olie. Herefter elueredes denne søjle med 1,5 - 2 1 hexan, der-20 næst med 23 - 30 1 af en 9:1 rumfangsblanding hexan og acetone og til slut med 23 - 30 1 af en 4 : 1 rumfangsblanding af hexan og acetone.
Den aktive fraktion fra denne eluering kondeseredes, og 25 krystallerne, der udfældede, frafiltreredes. Den fremkomne remanens kondenseredes yderligere og inddampedes til tørhed, hvorved man fik en olie i en mængde, der er vist i Tabel 2 under "Fraktion 2". Denne fraktion adsorberedes på en søjle indeholdende 18 - 135 g silicagel ("Wakogel" 30 C-200, der forud var behandlet med hexan), idet mængden af silicagel svarede til 1 g pr. 42 mg olie. Søjlen blev så elueret først med 100 - 750 ml hexan og dernæst med 1,2 -9 1 af en 9 : 1 rumfangsblanding af hexan og acetone. Den aktive fraktion fra denne eluering kondenseredes og ind-35 dampledes til tørhed, hvilket gav en olie i en mængde, der er vist i Tabel 2 under "Fraktion 3"· Denne olie adsorbe- 148807 17 redes på en søjle indeholdende 6 - 45 g silicagel "Wakogel" C-200, der forud var behandlet med benzen), idet mængden af silicagel svarede til 1 g pr. 17 mg olie. Søjlen elueredes herefter med 15 - 100 ml benzen, 5 dern st med 15 - 100 ml af en 95 : 5 rumfangsblanding af benzen og ethylacetat og endelig med 120 - 1,200 ml af en 4 : 1 rumfangsblanding af benzen og ethylacetat.
Den aktive fraktion kondenseredes, hvilket gav de i Tabel 2 angivne mængder af rå krystaller monacolin K.
10 Disse rå krystaller omkrystalliseredes fra vandig acetone, hvilket gav omkrystalliserede krystaller i form af farveløse nåle, hvis mængder er angivet i Tabel 2.
ua807 18
CO
M
0
0 R
Ό 0 0
&0<Η·ϋ-Ρ^ . CM HfACMHCMOCO
R 0 Q) X! hO Ο Ο Ο Η H CM Η H
8 H Øw CMCMCMCMCMCMCMCM
!§ S U ø-p to P 0 0X0 0) XJ (0 >)&0 hot) a 0^-* vO-cfintnOINCnin
R -P XI &0 Η Η H CM CM CM H CM
83 W 0 øv_^ HHHHHHHH
SX ί·Η 0<MH
+3 R 0 X O dø H
MR 0H^ vOtNOOChHinHCn r -p r η ω co oo oo co σ> σ\ σν σ\ 8 ra «η 3w Μχ ο 0 ,□
• I
CM 0 0 Η Η τ5 H ø'-' „ pq&oøboho vo in in H oo tn co cm m fl ο ox . in in in vo m vo m vo eh s a
rH
IN
CM O
O H VO
H tN (T\ CM CD IN -Ϊ
H VO O IN IN IN IN
C-WOHH1NHH
η £ η h m in oo
O 3 W rH rH rH iH
S g “ MCQCQCQCQ
CO R 3
0 R 0 ·Η R in R
øpCDRHØØO) ,¾ R ,Ω -P * ,Ω ,Ω ,Ω 0 R00 ·Η 0000
g 0PJr!>P4RRR
ø 00000000 -P 22222230 cq οοοοοοοο øøøøøøøø øøøøøøøø rrrpjsrrr οοοοοοοο
SSSSSSSSS
ø ·
Xi R OHCMmO-invOIN
W R i HHHHHHHH
Claims (2)
148807 TABEL 2 (fortsat) Eks. Fraktion Monacolin K nr. 1 2 3 Rå krystaller Omkrystalli- 5 (g) (g) (»g) (-S) f£eWStal" 10 22 0,9 102 9,3 0,8 11 23 1,3 113 10,4 1,1 10 12 22 0,75 98 8,9 0,8 13 25 1,1 110 10,7 1,2 15 14 24 2,2 121 12,0 1,6 15 28 1,65 216 14,2 6,3 16 26 1,8 235 24,4 9,8 20 17 29 5,7 765 135,0 81,0
1. Fremgangsmåde til fremstilling af monacolin K ved dyrkning af en stamme af slægten Monascus, kende-30 tegnet ved, at den dyrkede stamme er en eller flere af Monascus anka SANK 10171 (IFO 6540), Monascus purpurous SANK 10271 (IFO 4513), Monascus ruber SANK 10671 (FERM 4958), Monascus vitreus SANK 10960 (FERM 4960), Monascus paxii SANK 11172 (IFO 8201), Monascus 35 ruber SANK 13778 (FERM 4959), Monascus ruber SANK 15177 (FERM 4956) eller Monascus ruber SANK 18174 (FERM 4957).
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5792779 | 1979-05-11 | ||
| JP5792779A JPS55150898A (en) | 1979-05-11 | 1979-05-11 | Preparation of a new physiologically active substance mb-530b |
| KR1019800001707A KR830002329B1 (ko) | 1979-05-11 | 1980-04-29 | 모나콜린 k의 제조방법 |
| KR800001707 | 1980-04-29 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK73180A DK73180A (da) | 1980-11-12 |
| DK148807B true DK148807B (da) | 1985-10-07 |
| DK148807C DK148807C (da) | 1986-04-28 |
Family
ID=26399012
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK73180A DK148807C (da) | 1979-05-11 | 1980-02-20 | Fremgangsmaade til fremstilling af monacolin k |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4323648A (da) |
| JP (1) | JPS55150898A (da) |
| KR (1) | KR830002329B1 (da) |
| AT (1) | AT372975B (da) |
| AU (1) | AU534647B2 (da) |
| BE (1) | BE882325A (da) |
| CA (1) | CA1129795A (da) |
| CH (1) | CH645891A5 (da) |
| DE (2) | DE3051097C2 (da) |
| DK (1) | DK148807C (da) |
| ES (1) | ES8104409A1 (da) |
| FR (1) | FR2456141A1 (da) |
| GB (1) | GB2049664B (da) |
| IE (1) | IE49749B1 (da) |
| IT (1) | IT1133075B (da) |
| NL (1) | NL8001697A (da) |
| SE (2) | SE467975B (da) |
Families Citing this family (33)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5925599B2 (ja) * | 1979-02-20 | 1984-06-19 | 三共株式会社 | 新生理活性物質モナコリンｋおよびその製造法 |
| ES8105781A1 (es) * | 1979-07-27 | 1981-06-16 | Sankyo Co | Un procedimiento para la preparacion de sales y esteres, de monacolina k utiles como agentes antitlipercolesteremicos. |
| US4444784A (en) * | 1980-08-05 | 1984-04-24 | Merck & Co., Inc. | Antihypercholesterolemic compounds |
| US4351844A (en) * | 1980-02-04 | 1982-09-28 | Merck & Co., Inc. | Hypocholesterolemic hydrogenation products and process of preparation |
| JPS56142236A (en) | 1980-04-08 | 1981-11-06 | Sankyo Co Ltd | Ml-236a and mb-530a derivative |
| DK149080C (da) * | 1980-06-06 | 1986-07-28 | Sankyo Co | Fremgangsmaade til fremstilling af derivater af ml-236b-carboxylsyre |
| US4343814A (en) * | 1980-11-17 | 1982-08-10 | Merck & Co., Inc. | Hypocholesterolemic fermentation products |
| JPS5835144A (ja) * | 1981-08-27 | 1983-03-01 | Sankyo Co Ltd | Ｍｂ−５３０ｂ誘導体およびその製造法 |
| JPS5855443A (ja) * | 1981-09-25 | 1983-04-01 | Sankyo Co Ltd | オクタヒドロナフタリン誘導体およびその製造法 |
| US4678806A (en) * | 1986-09-02 | 1987-07-07 | Merck & Co., Inc. | Prodrugs of antihypercholesterolemic compounds |
| US4865977A (en) * | 1987-03-13 | 1989-09-12 | Shell Oil Company | Increasing monascus pigment production |
| DE3801588A1 (de) * | 1988-01-21 | 1989-08-10 | Hoechst Ag | Verfahren zur herstellung von farbstoffen und/oder wirkstoffen in der wasserarmen, sterilen wirbelschicht |
| KR960004032B1 (ko) * | 1992-10-26 | 1996-03-25 | 롯데제과주식회사 | 신균주 모나스커스 앵카 732y3(kccm10014) |
| HU210867B (en) * | 1992-11-04 | 1995-10-30 | Biogal Gyogyszergyar | Method for extraction and purification of mevinolin from culture medium |
| BG61613B1 (bg) * | 1994-06-24 | 1998-01-30 | Анна Куюмджиева | Щам моnаsсus рurрurеus-продуцент на пигмент и биоактивни продукти |
| US6046022A (en) | 1996-09-30 | 2000-04-04 | Peking University | Methods and compositions employing red rice fermentation products |
| US7238348B2 (en) | 1996-09-30 | 2007-07-03 | Beijing Peking University Wbl Corporation Ltd. | Method of treatment of osteoporosis with compositions of red rice fermentation products |
| US6258361B1 (en) | 1996-10-21 | 2001-07-10 | Akio Yoshihara | Agent for recovering hematopoietic function and processed food both containing treated product of peanut seed coats |
| US6391583B1 (en) | 1998-12-18 | 2002-05-21 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Method of producing antihypercholesterolemic agents |
| WO2002085398A1 (en) * | 2001-04-19 | 2002-10-31 | Taipei-Veterans General Hospital | Lithospermic acid-containing composition |
| WO2003020218A2 (en) * | 2001-08-30 | 2003-03-13 | Taipei-Veterans General Hospital | Salvianolic acid b |
| KR100379075B1 (en) * | 2002-03-07 | 2003-04-08 | Jinis Biopharmaceuticals Co | Method for producing low cholesterol animal food product and food product therefrom |
| TWI262949B (en) * | 2002-08-15 | 2006-10-01 | Food Industry Res & Dev Inst | Monascus purpureus mutants and their use in preparing fermentation products having hypotensive activity |
| DE102004062386B4 (de) * | 2003-12-24 | 2010-06-24 | Food Industry Research And Development Institute | Monacolin K-Biosynthese-Gene |
| KR100710500B1 (ko) * | 2005-05-18 | 2007-04-24 | 고려대학교 산학협력단 | 홍국균을 이용한 모나콜린 ｋ 생산방법 |
| US20100119600A1 (en) | 2007-06-01 | 2010-05-13 | Joar Opheim | Substances for reducing occurrence of major cardiac events comprising red yeast rice extract and omega-3 polyunsaturated fatty acid or derivative thereof |
| US20120171311A1 (en) * | 2007-06-01 | 2012-07-05 | Opheim Joar A | Substances for reducing occurrence of major cardiac events comprising epa or derivatives thereof, optionally, dha or derivatives thereof and monacolin k |
| US20120171285A1 (en) * | 2007-06-01 | 2012-07-05 | Opheim Joar A | Substances for reducing occurrence of major cardiac events comprising omega-3 polyunsaturated fatty acid or derivatives thereof and high-monacolin k content red yeast rice extract |
| US20120172425A1 (en) * | 2007-06-01 | 2012-07-05 | Opheim Joar A | Red yeast rice extract high in monacolin k content |
| CN101317660B (zh) * | 2008-06-23 | 2012-10-24 | 谢键泓 | 一种提高红曲洛伐他汀在水中溶解度的方法及应用 |
| EP2416793B1 (en) | 2009-04-08 | 2021-10-20 | Nanyang Polytechnic | A plant extract comprising statins and preparation techniques and uses thereof |
| CN116083252B (zh) * | 2023-04-12 | 2023-06-27 | 北京一品堂医药科技有限公司 | 一种高产降脂天然莫拉可林k的红曲米发酵制备方法 |
| CN116925926B (zh) * | 2023-07-14 | 2024-02-02 | 中国农业大学 | 富硒红色红曲霉发酵生产洛伐他汀的方法 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5612114B2 (da) * | 1974-06-07 | 1981-03-18 | ||
| JPS5925599B2 (ja) * | 1979-02-20 | 1984-06-19 | 三共株式会社 | 新生理活性物質モナコリンｋおよびその製造法 |
| IL60219A (en) * | 1979-06-15 | 1985-05-31 | Merck & Co Inc | Hypocholesteremic fermentation products of the hmg-coa reductase inhibitor type,their preparation and pharmaceutical compositions containing them |
-
1979
- 1979-05-11 JP JP5792779A patent/JPS55150898A/ja active Pending
-
1980
- 1980-02-20 DK DK73180A patent/DK148807C/da not_active IP Right Cessation
- 1980-02-20 CH CH136780A patent/CH645891A5/de not_active IP Right Cessation
- 1980-02-20 DE DE3051097A patent/DE3051097C2/de not_active Expired - Lifetime
- 1980-02-20 SE SE8001338A patent/SE467975B/sv not_active IP Right Cessation
- 1980-02-20 DE DE19803006215 patent/DE3006215A1/de active Granted
- 1980-03-04 GB GB8007240A patent/GB2049664B/en not_active Expired
- 1980-03-19 AT AT0148280A patent/AT372975B/de not_active IP Right Cessation
- 1980-03-19 BE BE0/199871A patent/BE882325A/fr not_active IP Right Cessation
- 1980-03-20 ES ES80489751A patent/ES8104409A1/es not_active Expired
- 1980-03-20 IE IE577/80A patent/IE49749B1/en not_active IP Right Cessation
- 1980-03-20 FR FR8006203A patent/FR2456141A1/fr active Granted
- 1980-03-20 CA CA348,220A patent/CA1129795A/en not_active Expired
- 1980-03-21 AU AU56678/80A patent/AU534647B2/en not_active Expired
- 1980-03-21 NL NL8001697A patent/NL8001697A/nl not_active Application Discontinuation
- 1980-03-21 IT IT67445/80A patent/IT1133075B/it active
- 1980-04-04 US US06/137,821 patent/US4323648A/en not_active Expired - Lifetime
- 1980-04-29 KR KR1019800001707A patent/KR830002329B1/ko not_active Expired
-
1987
- 1987-04-09 SE SE8701483A patent/SE468482B/sv not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| SE8701483L (sv) | 1987-04-09 |
| AU534647B2 (en) | 1984-02-09 |
| FR2456141B1 (da) | 1983-11-18 |
| NL8001697A (nl) | 1980-11-13 |
| AT372975B (de) | 1983-12-12 |
| US4323648A (en) | 1982-04-06 |
| GB2049664B (en) | 1983-01-12 |
| DE3006215C2 (da) | 1989-01-05 |
| CA1129795A (en) | 1982-08-17 |
| IE49749B1 (en) | 1985-12-11 |
| ES489751A0 (es) | 1981-04-16 |
| ATA148280A (de) | 1983-04-15 |
| SE468482B (sv) | 1993-01-25 |
| KR830002875A (ko) | 1983-05-31 |
| DE3006215A1 (de) | 1980-11-27 |
| DE3051097C2 (da) | 1990-02-08 |
| JPS55150898A (en) | 1980-11-25 |
| CH645891A5 (de) | 1984-10-31 |
| GB2049664A (en) | 1980-12-31 |
| FR2456141A1 (fr) | 1980-12-05 |
| DK73180A (da) | 1980-11-12 |
| SE8001338L (sv) | 1980-11-12 |
| IE800577L (en) | 1980-11-11 |
| BE882325A (fr) | 1980-09-19 |
| AU5667880A (en) | 1980-11-13 |
| KR830002329B1 (ko) | 1983-10-22 |
| DK148807C (da) | 1986-04-28 |
| IT8067445A0 (it) | 1980-03-21 |
| SE467975B (sv) | 1992-10-12 |
| SE8701483D0 (sv) | 1987-04-09 |
| ES8104409A1 (es) | 1981-04-16 |
| IT1133075B (it) | 1986-07-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK148807B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af monacolin k | |
| CA1129794A (en) | Antihypercholesteraemic agent, monacolin k, and its preparation | |
| US3983140A (en) | Physiologically active substances | |
| US4049495A (en) | Physiologically active substances and fermentative process for producing the same | |
| FI67231C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av en hypokolesteremisk foerening | |
| NO156210B (no) | Fremgangsmaate til fremstilling av monacolin k derivater. | |
| DK154704B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af et sesquiterpenderivat eller salte deraf | |
| JPS5822120B2 (ja) | ３−０−（β−Ｄ−グルクロノピラノシル）−ソ−ヤサポゲノ−ルＢ | |
| NL8204904A (nl) | Dihydro- en tetrahydromonacolin l, metaalzouten en alkylesters daarvan, alsmede werkwijze voor het bereiden ervan. | |
| JP3026864B2 (ja) | 新規セスキテルペン誘導体 | |
| JPH05170769A (ja) | 新規ｑ−１１２７０化合物又はその製造法 | |
| JPS5840475B2 (ja) | 新生理活性物質ｍｌ−２３６ａおよびその製造法 | |
| DK165990B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af carboxylsyren af en cholesterolsynteseinhiberende forbindelse kaldet monacolin k eller salte deraf | |
| EP2473169B1 (en) | Processes for isolation and purification of enfumafungin | |
| JPS6320215B2 (da) | ||
| JPS6113798B2 (da) | ||
| JPH04321698A (ja) | 生理活性物質ｍ６１２４及びその製造方法 | |
| JPH0532656A (ja) | デカリン系化合物 | |
| JPS6324518B2 (da) | ||
| WO1995018142A1 (en) | Wf15604 substances | |
| JPS5889187A (ja) | Ｎｏ１４−ａ物質およびその製造法 | |
| KR20010025876A (ko) | 페니실리움 속(Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｓｐ.)Ｆ70614(ＫＣＴＣ 8918Ｐ)와 α-글루코시다제 저해제 | |
| JPS58209986A (ja) | 抗生物質ホスホノクロリンおよびその製造法 | |
| JPS6210998B2 (da) | ||
| JPH0717905A (ja) | Ｑ−６９１６化合物 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PUP | Patent expired |